Αφηρημένο

Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι η έκφραση του φλοτιλλίνη 2 (Flot-2), μια πρωτεΐνη που απομονώθηκε από τους τομείς μικροσπηλαίων /λιπιδίων σχεδία, αυξήθηκε σημαντικά το καρκίνωμα του ρινοφάρυγγα (NPC) σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Η μεταγωγή σήματος μέσω υποδοχέων του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) και Flot-2 παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου, αλλά ο ακριβής ρόλος τους στον καρκίνο του πνεύμονα δεν έχει διερευνηθεί. Σε αυτή τη μελέτη, ερευνήσαμε την συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης Flot-2 και EGFR, οι οποίες αυξάνουν σημαντικά σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) ασθενείς (n = 352) σε σύγκριση με τους ιστούς του μη καρκινικά. Επιπλέον, οι ασθενείς με προχωρημένα στάδια της NSCLC είχαν υψηλότερα θετική έκφραση του Flot-2 και EGFR σχέση με τους ασθενείς με πρώιμα στάδια. NSCLC ασθενείς με αυξημένη έκφραση του Flot-2 και EGFR είχαν σημαντικά λιγότερη συνολικά ποσοστά επιβίωσης από ασθενείς με λιγότερο έκφραση του Flot-2 και EGFR. Λαμβανόμενα μαζί, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι η αυξημένη έκφραση του Flot-2 και EGFR σε ασθενείς με NSCLC είναι αντιστρόφως ανάλογη προς την πρόγνωση της νόσου και ότι η αυξημένη έκφραση του Flot-2 συσχετίζεται με αυξημένο EGFR μπορεί να χρησιμεύσει ως βιοδείκτη για την πρόβλεψη φτωχή πρόγνωση ασθένειας.

Παράθεση: Wen Q, W Wang, Chu S, Luo J, Chen L, Xie G, et al. (2015) Flot-2 έκφρασης συσχετίζεται με τα επίπεδα EGFR και κακή πρόγνωση σε χειρουργικά μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 10 (7): e0132190. doi: 10.1371 /journal.pone.0132190

Επιμέλεια: Yves St-Pierre, INRS, Καναδάς

Ελήφθη: 2 Απρίλη, 2015? Αποδεκτές: 10 Ιούνη του 2015? Δημοσιεύθηκε: 10 Ιουλίου 2015

Copyright: © 2015 Wen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση: το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Φυσικών Επιστημών Ιδρύματα της Κίνας (No: 81.272.566? 81472773).. (https://isis.nsfc.gov.cn/)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι μία από τις κύριες αιτίες της θνησιμότητας του καρκίνου που σχετίζονται με όλο τον κόσμο. Υπάρχουν περίπου 80% -85% των περιπτώσεων καρκίνου του πνεύμονα διαγιγνώσκονται με μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) σε πολλά μέρη του κόσμου, μεταξύ των οποίων πλακώδες καρκίνωμα (SCC) και το αδενοκαρκίνωμα (ADC) είναι οι δύο κύριες ιστολογικές υποτύπους [1 ]. Ως εκ τούτου, οι νέες ανακαλύψεις βιοδεικτών για τον προσδιορισμό των κινδύνων εμφάνισης, εξέλιξης και μετάστασης σε NSCLC θα πρέπει να έχουν υψηλή κλινική σημασία. Η πρωτεΐνη φλοτιλλίνη /Reggie περιέχει surperfamily δύο μέλη, φλοτιλλίνη-1 /Ρέτζι-2 (1 Flot) και φλοτιλλίνη-2 /Ρέτζι-1 (Flot-2), και οι δύο είναι εξαιρετικά διατηρημένες και οι δύο πρωτεΐνες Flot-1 και Flot-2 εκφράζονται παντού μαζί με σχεδίες μεμβράνη [2,3]. Επιπλέον, Flotillins έχουν προταθεί ότι εμπλέκεται σε σηματοδότηση υποδοχέα μεμβράνης, μονοπάτια που σχετίζονται με την κυτταρική ανάπτυξη και κακοήθη μετασχηματισμό, φαγοκυττάρωση και ενδοκυττάρωση, προσκόλληση μήτρας κυττάρου, ρύθμιση του ακτίνης του κυτταροσκελετού και του σχηματισμού filopodia [4,5] σηματοδότησης. Έκφραση των Flot-2 είναι αλληλένδετα και Flot-1 έκφρασης είναι σοβαρά μειωμένη κατά την προς τα κάτω ρύθμιση των Flot-2 [6]. Αυξημένη έκφραση του Flotillins έχει ανιχνευθεί σε διάφορους τύπους καρκίνου στον άνθρωπο και συνδέεται με κακή επιβίωση. Υπερ-έκφραση του Flot-2 συνδέεται με την ανθρώπινη εξέλιξη μελανώματος και λεμφαδένα μετάσταση [7,8]. Υψηλότερη έκφραση του Flot-2 επίσης να ανιχνευθεί σε μεταστατικά κύτταρα NPC [9]. Σταθερά, αυξημένη έκφραση Flot-2 επίσης αναφέρθηκε σε ασθενείς NPC με μετάσταση στους λεμφαδένες σε σύγκριση με ασθενείς χωρίς μετάσταση λεμφαδένα [10]. Επίσης, η αυξημένη έκφραση του Flot-2 σχετίζονται με την κακή έκβαση σε ασθενείς με διάφορους συμπαγείς όγκους, όπως ο καρκίνος του μαστού, ο καρκίνος του στομάχου και του καρκινώματος του τραχήλου, και Flot-2 θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός βιοδείκτη για αυτούς τους όγκους εξέλιξης [11-13 ].

Ο EGFR είναι ένα μέλος της οικογένειας κινάσης τυροσίνης υποδοχέα που εμπλέκονται στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της διαφοροποίησης που είναι άμεσα αντιπαραβάλλονται με το επίπεδο μεταγραφής πιΚΝΑ EGFR σε ασθενείς με NSCLC [14]. EGFR και συνδέονται σηματοδοτικό μονοπάτι της έχουν αναδειχθεί ως ο κορυφαίος στόχος για τη θεραπεία NSCLC [15,16]. Αλληλεπίδραση έχει βρεθεί μεταξύ Flotillins και EGFR σε καρκινικά κύτταρα και Flot-2 γίνεται Tyr- φωσφορυλιωθεί από κινάση Src βασίζεται στην ενεργοποίηση του EGFR [4]. Επιπλέον, EGF διέγερση οδηγεί σε πρόσληψη Flotillins από την μεμβράνη πλάσματος μέσα αργά ενδοσώματα [4]. Αυτό προκαλεί όχι μόνο την ομαδοποίηση και την ενεργοποίηση του EGFR στην πλασματική μεμβράνη, αλλά λειτουργεί επίσης και ως πρωτεΐνη σκαλωσιά ΜΑΡ κινάση που ρυθμίζει σηματοδότηση της ΜΑΡ κινάσης κατά τη διάρκεια της μετέπειτα στάδια της οδού της [17]. Η έκφραση της πρωτεΐνης Flot-2 πάνω ρυθμισμένα στην πλειονότητα των δειγμάτων NSCLC σε σύγκριση με το φυσιολογικό ιστό [18,19]. Ωστόσο, η διπλή έκφραση Flot-2 και EGFR και η σχέση της με την ανάπτυξη και την πρόοδο ή κλινικοπαθολογική /προγνωστική επίπτωση στην μεγάλη συλλογή δειγμάτων NSCLC δεν έχει αναφερθεί. Σε αυτή τη μελέτη, ανιχνεύσαμε πρωτεΐνες Flot-2 και EGFR με ανοσοϊστοχημεία (IHC) σε 352 περιπτώσεις NSCLC και 59 περιπτώσεις μη-καρκινικούς ιστούς έλεγχο των πνευμόνων, και διερευνήθηκαν οι συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης των Flot-2 και πρωτεϊνών EGFR και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά και προγνωστικές επιπτώσεις στον NSCLC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

τα δείγματα ελήφθησαν με ενημερωμένη συγκατάθεση και όλα τα πρωτόκολλα έχουν εγκριθεί από το δεύτερο Xiangya Νοσοκομείο της Κεντρικής Νοτίου Πανεπιστημίου Δεοντολογίας Review Board (Επιτροπή Επιστημονικής και Δεοντολογίας, αρ. S02 /2000). Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς, και η γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από τον πλησιέστερο συγγενή, επιστάτες, φύλακες ή για λογαριασμό των ανηλίκων /συμμετεχόντων παιδιών που συμμετέχουν στη μελέτη σας.

μικροσυστοιχίες ιστών (TMA ) και κλινικά δεδομένα

ασθενών με NSCLC υποβλήθηκαν σε χειρουργική θεραπεία στο Τμήμα Θωρακικής χειρουργικής στο δεύτερο Xiangya Νοσοκομείο της Κεντρικής Νοτίου Πανεπιστημίου (Changsha, Κίνα) από το 2003 έως το 2013. Όλα τα δείγματα όγκου και μη-καρκινικές πνεύμονα ιστοί ελήφθησαν από το Τμήμα Παθολογίας, το δεύτερο Xiangya Νοσοκομείο της Κεντρικής Νοτίου Πανεπιστημίου. Αυτοί οι ασθενείς είχαν υποβληθεί σε ρουτίνα στάσης και οριστική χειρουργική εκτομή του πνεύμονα και του μεσοθωρακίου συστηματική ανατομή των λεμφαδένων. Όλοι οι ασθενείς είχαν μια επιβεβαιωμένη ιστολογική διάγνωση NSCLC, σύμφωνα με την ΠΟΥ ιστολογική ταξινόμηση του καρκίνου του πνεύμονα. Η ταξινόμηση στάσης της τρέχουσας ανάλυση διεξήχθη με βάση τα κριτήρια της 7η έκδοση του συστήματος σταδιοποίησης AJCC /UICC ΤΝΜ του καρκίνου του πνεύμονα (2009). Κανένας ασθενής δεν είχε προηγουμένως υποβληθεί σε θεραπεία με χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία κατά τη στιγμή της αρχικής λειτουργίας. Πλήρη κλινικό ιστορικό και τα δεδομένα παρακολούθησης ήταν διαθέσιμα για όλους τους ασθενείς. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από αυτούς τους ασθενείς, και η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας Αναθεώρηση του Δευτέρου Xiangya Νοσοκομείο της Κεντρικής Νοτίου Πανεπιστημίου.

Η ανοσοϊστοχημεία και βαθμολογίες

Η χρώση IHC για τα δείγματα για η TMAs διεξήχθη χρησιμοποιώντας έτοιμα προς χρήση Οραματιστείτε TM

+ μεθόδους διπλής σύνδεσης System-HRP (Dako? Carpintrria, CA). Η προϋπόθεση χρώση για κάθε αντίσωμα ρυθμίστηκε σύμφωνα με εργαστηριακή εμπειρία μας. Εν συντομία, το κάθε τμήμα ΤΜΑ αποπαραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν και ανάκτηση αντιγόνου υψηλής θερμοκρασίας επετεύχθη με θέρμανση των δειγμάτων σε 0.01 Μ ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού σε οικιακό φούρνο μικροκυμάτων σε πλήρη ισχύ (750 Watt) επί 30 λεπτά, στη συνέχεια τα δείγματα βυθίστηκαν σε μεθανόλη που περιέχει 0.3% Η

2O

2 για την αδρανοποίηση ενδογενών υπεροξειδάσης σε 37 ° C για 30 λεπτά. Για την εξάλειψη μη ειδική χρώση, τα πλακίδια επωάστηκαν με τα κατάλληλα προάνοσο ορό επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά την επώαση με αραίωση 1: πρωτογενούς αντισώματος προς Flot-2 πρωτεΐνη (Rabbit πολυκλωνικό αντίσωμα, Catalog # S0051, Epitomics, Inc.) 1000 και με αραίωση 1: 200 του πρωτογενούς αντισώματος (Novocastra NCL-EGFR-384 κλώνο , Leica Biosystems Newcastle, Newcastle Upon Tyne, UK) σε 4 ° C όλη τη νύκτα, τα πλακίδια ξεπλύθηκαν με ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο διάλυμα (PBS) και επωάζονται με ένα σημασμένο με πολυμερές HRP προστέθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και επωάστηκε 30 λεπτά. χρωματική αντίδραση εμφανίσθηκε με τη χρήση 3, τετραχλωριούχο 3′-διαμινοβενζιδίνη (DAB) διάλυμα χρωμογόνου. Όλα τα πλακίδια με αιματοξυλίνη. Θετικές πλάκες ελέγχου συμπεριελήφθησαν σε κάθε πείραμα εκτός από τα εσωτερικά θετικούς μάρτυρες. Η ειδικότητα του αντισώματος προσδιορίστηκε με συμφωνημένα ισότυπο αντίσωμα IgG σαν αρνητικό δείγμα αναφοράς.

ανοσοϊστοχημική χρώση τομών TMA βαθμολογήθηκαν ανεξάρτητα από QW και SF τυφλωμένο στα κλινικοπαθολογοανατομικών δεδομένα, στα 200 × μεγέθυνση μικροσκοπία φωτός. Η αξιολόγηση βασίστηκε στην ένταση χρώσης και την έκταση της χρώσης. Χρώση ένταση για Flot-2 και EGFR βαθμολογήθηκε ως 0 (αρνητική), 1 (ασθενής), 2 (μέτρια) και 3 (ισχυρή). Χρώση έκταση βαθμολογήθηκε ως 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%), και 4 (76-100%), ανάλογα με το ποσοστό των θετικών -stained κύτταρα. Το άθροισμα της έντασης χρώσης και η χρώση έκταση σκορ κυμαίνεται από 0 έως 7, και αποκοπής επίπεδα για Flot-2 και EGFR επιλέχθηκαν με βάση ένα μέτρο της ετερογένειας χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank σε σχέση με τη συνολική επιβίωση ( OS). Ένα βέλτιστο επίπεδο αποκοπής προσδιορίστηκε ως εξής: α σκορ δείκτης χρώση 0-2 χρησιμοποιήθηκε για να καθορίσει όγκων με αρνητική έκφραση και 3-7 υποδεικνύεται θετική έκφραση αυτών των δύο πρωτεϊνών. Συμφωνία μεταξύ των δύο αξιολογητών ήταν 95%, και όλες οι αποκλίσεις βαθμολόγησης επιλύθηκαν μέσω της συζήτησης μεταξύ των δύο αξιολογητών.

Η στατιστική ανάλυση

Το τεστ chi-square και συντελεστή βαθμό συσχέτισης του Spearman που χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογήσει τη σχέση μεταξύ της έκφρασης Flot-2 και EGFR σε τομές ιστών που συλλέγονται από ασθενείς με NSCLC. Η ανάλυση Kaplan-Meier διεξήχθη για τη συνολική καμπύλες επιβίωσης και η στατιστική σημαντικότητα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου Cox χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση των ανεξάρτητων πρωτεϊνών προγνωστικός παράγοντας Flot-2 και EGFR. Δύο όψεων στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε και τα στοιχεία που θεωρήθηκαν ότι είναι στατιστικά σημαντική όταν

P

& lt?. 0.05

Αποτελέσματα

Flot-2 και EGFR πρωτεϊνών αυξήθηκε σημαντικά στο ιστούς των πνευμόνων SCC και ADC

Για να διερευνήσει τη συσχέτιση μεταξύ Flot-2 και EGFR σηματοδότησης σε κακοήθεις ιστούς, προσδιορίσαμε για πρώτη φορά την έκφραση και την κυτταρική εντόπιση του Flot-2 και EGFR σε πνεύμονα SCC, ADC και τη μη καρκινικούς ιστούς έλεγχο των πνευμόνων από την IHC. Ισχυρή θετική έκφραση πρωτεΐνης Flot-2 (Σχ 1Α και 1Β) ταυτοποιήθηκε στις κυτταρικές μεμβράνες των πνευμόνων SCC και ιστών ADC και δεν Flot-2 που εκφράζουν κύτταρα ανιχνεύθηκαν σε μη καρκινικό ιστό ελέγχου πνεύμονα (Εικ 1C). Τομές ιστού χρησιμοποιώντας το αντίστοιχο αντίσωμα ισότυπου IgG ως αρνητικός έλεγχος έδειξε επίσης καμία θετική χρώση Flot-2 στα κύτταρα του πνεύμονα ADC (Σχήμα 1 D). Ισχυρή θετική έκφραση του EGFR πρωτεΐνη (Σχήμα 2Α και 2Β) ταυτοποιήθηκε σε μεμβράνες και κυτταρόπλασμα του SCC πνεύμονα και κύτταρα ADC και καμία χρώση βρέθηκε στο μη καρκινικό ιστό ελέγχου πνεύμονα (Εικ 2C). Αρνητικός μάρτυρας είχε δείξει καμία χρώση EGFR στα κύτταρα των πνευμόνων SCC (Σχήμα 2D). Στη συνέχεια, θα απαριθμήσουμε την έκφραση της Flot-2 και EGFR σε πνεύμονα SCC, ADC και μη καρκινικούς ιστούς των πνευμόνων ελέγχου. Έκφραση και των δύο Flot-2 και EGFR ήταν σημαντικά υψηλότερα σε ιστούς που συλλέχθηκαν από ασθενείς με πνευμονική SCC και ADC σε σύγκριση με τα μη-καρκινικούς ιστούς ελέγχου των πνευμόνων (

P

& lt? 0.001) (Σχήμα 3)

.

η ισχυρή θετική χρώση των πρωτεϊνών Flot-2 βρέθηκε στις κυτταρικές μεμβράνες των πνευμόνων SCC και τα κύτταρα των πνευμόνων ADC (Σχήμα 1Α και 1Β, 20 ×, IHC, χρώση DAB). Αρνητική χρώση Flot-2 έδειξε μη καρκινικά πνευμονικό ιστό (Σχήμα 1Γ, 20 ×, IHC, χρώση DAB). Αρνητικός έλεγχος δεν έδειξε χρώση Flot-2 στα κύτταρα των πνευμόνων ADC (Σχήμα 1D, 20 ×, IHC, χρώση DAB).

Η

Η ισχυρή θετική χρώση των πρωτεϊνών EGFR βρέθηκε στις μεμβράνες των κυττάρων και το κυτταρόπλασμα των πνευμόνων SCC και πνευμονικά κύτταρα ADC (Σχ 2Α και 2Β, 20 ×, IHC, χρώση DAB). Αρνητική χρώση του EGFR ήταν έδειξαν σε μη καρκινικά πνευμονικό ιστό (Σχήμα 2C, 20 ×, IHC, χρώση DAB). Αρνητικός έλεγχος δεν έδειξε χρώση EGFR στα κύτταρα των πνευμόνων SCC (Σχήμα 2D, 20 ×, IHC, DAB χρώση).

Η

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων που αξιολογήθηκαν στατιστικά με chi- square test.

η

για να διερευνηθεί η κλινική έκβαση λόγω της υπερ-έκφραση της Flot-2 και EGFR σε καρκινικούς ιστούς, είμαστε δίπλα διερευνηθεί κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του NSCLC όπως η ηλικία, το φύλο, κλινικά στάδια, λεμφαδένων μετάσταση (LNM) κατάσταση, και παθολογική διαφοροποίηση στην μονοπαραγοντική τεστ chi-square. Ημερομηνία που αναγράφεται στους πίνακες 1 και 2 δείχνουν ότι υπάρχει ισχυρή θετική συσχέτιση μεταξύ υψηλή έκφραση του Flot-2 και τα κλινικά στάδια του NSCLC. Είναι σημαντικό, οι ασθενείς με προχωρημένο κλινικά στάδια είχαν σημαντικά υψηλότερη έκφραση του Flot-2 από τους ασθενείς με πρώιμα στάδια (

P

= 0,003). Παρόμοια τάση παρατηρήθηκε στην περίπτωση της έκφρασης EGFR (

P

= 0,03). Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ της έκφρασης των Flot-2 /EGFR και άλλα κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά όπως η ηλικία, το φύλο, την κατάσταση LNM και παθολογική διαφοροποίηση των ασθενών με NSCLC.

Η

Η ζεύγη συσχέτιση μεταξύ της έκφραση Flot-2 και EGFR πρωτεϊνών σε 352 περιπτώσεις NSCLC

Είμαστε δίπλα ανέλυσε τη ζεύγη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των Flot-2 και EGFR σε ασθενείς με NSCLC (n = 352). Οι ασθενείς (n = 115) με συν-έκφραση του Flot-2 και EGFR πρωτεΐνες, 119 ασθενείς με κοινή αρνητική χρώση των δύο πρωτεϊνών και 118 ασθενείς με θετική έκφραση είτε Flot-2 ή EGFR. Η αυξημένη έκφραση του Flot-2 ήταν σημαντικά σχετίζεται με την αυξημένη έκφραση του EGFR (r = 0,332,

P

& lt? 0.001 Spearman rank test συσχέτισης). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι Flot-2 και EGFR θα μπορούσε να διαδραματίσει έναν σημαντικό ρόλο στην προώθηση της ανάπτυξης και της εξέλιξης του NSCLC.

Επίδραση της έκφρασης πρωτεϊνών Flot-2 και EGFR στην πρόγνωση των ασθενών με NSCLC

Στην μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης των πνευμόνων SCC και ασθενείς ADC, ανάλυση Kaplan-Meier καμπύλη επιβίωσης με δοκιμασία log-rank σημασίας εκτελέστηκε. Τα οικόπεδα επιβίωσης Kaplan-Meier (Σχήμα 4Α, 4Β και 4C) για ασθενείς πνευμόνων SCC με διαφορική έκφραση Flot-2 (Σχ 4Α), EGFR (Εικόνα 4Β), και συνδυασμένη έκφραση είτε των δύο αυτών πρωτεϊνών (σχήμα 4Γ) ήσαν παρουσιάζονται. Παρουσιάστηκαν Τα οικόπεδα επιβίωσης Kaplan-Meier για ασθενείς πνευμόνων ADC με διαφορική έκφραση Flot-2 (Σχ 4D), EGFR (Εικόνα 4Ε) και συνδυασμένη έκφραση είτε των δύο αυτών πρωτεϊνών (Σχήμα 4F). Τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης για SCC και ADC ασθενείς πνευμόνων με αρνητική έκφραση της πρωτεΐνης Flot-2 ήταν σημαντικά υψηλότερες από αυτές με θετική έκφραση Flot-2 (

P

= 0.043, Σχ 4Α?

P

= 0,007, σχ 4D), καθώς επίσης και τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης για ασθενείς πνευμόνων ADC με αρνητική έκφραση του EGFR ήταν καλύτερα από αυτά με θετική έκφραση EGFR (

P

= 0,033, σχ 4Ε). Επιπλέον, αυτές οι πνεύμονες SCC και ADC ασθενείς με θετική έκφραση είτε πρωτεϊνών Flot-2 και EGFR είχαν χαμηλότερο συνολικά ποσοστά επιβίωσης από ό, τι οι ασθενείς με όλα αρνητική χρώση των δύο πρωτεϊνών παραπάνω (

P

= 0.02, Σχήμα 4C ?

P

= 0,005, σχήμα 4F). Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του EGFR και συνολικά ποσοστά επιβίωσης παρατηρήθηκαν σε ασθενείς πνεύμονα SCC (

P

& gt? 0,05)

Η ανάλυση Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκε για να σχεδιάσετε τις συνολικές καμπύλες επιβίωσης. 159 περιπτώσεις πνεύμονα SCC και 193 περιπτώσεις ασθενών πνεύμονα ADC με διαφορική έκφραση Flot-2, EGFR, και συνδυασμένη έκφραση οποιασδήποτε από αυτές τις δύο πρωτεΐνες, οι οποίες στατιστική σημασία εκτιμήθηκε με δοκιμασία log-rank. ασθενείς (Α) Lung SCC με θετική έκφραση πρωτεΐνης Flot-2 έδειξε χειρότερη συνολικά ποσοστά επιβίωσης σε σύγκριση με τους ασθενείς με αρνητικό Flot-2 (Ρ = 0,043, δύο όψεων). (Β) Θετική έκφραση του EGFR είχαν καμία σημαντική συσχέτιση με τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης των ασθενών με πνευμονική SCC (P & gt? 0,05, δύο όψεων). καμπύλες (C) Kaplan-Meier έδειξε ασθενών SCC πνευμόνων με θετική έκφραση είτε του Flot-2 και πρωτεϊνών EGFR είχαν χειρότερη συνολικά ποσοστά επιβίωσης από ό, τι αυτοί με όλα αρνητική χρώση των δύο πρωτεϊνών παραπάνω (P = 0,02, δύο όψεων). ασθενείς ADC (D) του πνεύμονα με θετική έκφραση του Flot-2 είχαν χειρότερη συνολικά ποσοστά επιβίωσης από ότι με αρνητικό (Ρ = 0,007, δύο όψεων, αντιστοίχως). ασθενείς (Ε) Lung ADC με θετική έκφραση του EGFR είχαν χειρότερη συνολικά ποσοστά επιβίωσης από ότι με αρνητικό (Ρ = 0,033, δύο όψεων, αντιστοίχως). ασθενείς ADC (F) των πνευμόνων με θετική έκφραση είτε του Flot-2 και πρωτεϊνών EGFR έδειξε χειρότερη συνολικά ποσοστά επιβίωσης σε σύγκριση με όλες τις αρνητικές χρώση των δύο πρωτεϊνών παραπάνω (P = 0,005, δύο όψεων).

Η

εκτός μονοπαραγοντική ανάλυση, πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου Cox πραγματοποιήθηκε επίσης να διερευνηθεί περαιτέρω κατά πόσο οι εκφράσεις του Flot-2 και πρωτεΐνες EGFR είναι οι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για NSCLC, και τα αποτελέσματα αυτά αποκαλύφθηκαν στον πίνακα 3. κατά την πολυπαραγοντική ανάλυση της έκφραση πρωτεϊνών Flot-2 και EGFR σε 159 περιπτώσεις πνεύμονα SCC και 193 περιπτώσεις πνεύμονα ADC, η οποία περιελάμβανε κλινικά στάδια, λέμφο κατάσταση κόμβος μετάσταση, ιστολογικό τύπο, τη στρατηγική της θεραπείας, την ηλικία και το φύλο, έχουμε βρει ότι η θετική έκφραση της πρωτεΐνης Flot-2 μπορεί να χρησιμεύσει ως ανεξάρτητη κακό προγνωστικό παράγοντα για την πνεύμονα ADC (

P

= 0,035), καθώς και κλινικά στάδια (

P

= 0,02). Για πνεύμονα SCC, την κατάσταση LNM και ιστολογική βαθμούς αναγνωρίζονται ως ανεξάρτητες φτωχοί προγνωστικοί παράγοντες (

P

= 0,034,

P

= 0,019, αντίστοιχα). Και πάλι, καμία κλινική επίδραση με βάση την ηλικία, το φύλο, τη στρατηγική της θεραπείας και της έκφρασης του EGFR ανιχνεύθηκε σε πνεύμονες SCC και ADC.

Η

Συζήτηση

Αύξηση απόδειξη ανέφερε ότι Flotillins εμπλέκονται σε EGFR μονοπάτι σηματοδότησης. Ενεργοποιείται EGFR θα μπορούσε να αλλάξει το μέγεθος της Flotillins ολιγομερών [20]. Επιπλέον, οι πρωτεΐνες Flotillins και EGFR συγκατακρημνίστηκαν, και Flotillins θα μπορούσε να ρυθμίσει E-cadherin μεσολάβηση του σχηματισμού επαφής των κυττάρων, επηρεάζοντας την εμπορία EGFR [17,21]. Στη παρούσα μελέτη μας, έχουμε αναφέρει ότι οι εκφράσεις του Flot-2 και EGFR αυξήθηκαν σημαντικά σε πνεύμονα SCC και ADC σε σύγκριση με τα μη-καρκινικούς ιστούς ελέγχου των πνευμόνων. Η αυξημένη έκφραση του Flot-2 ήταν σημαντικά σχετίζεται με την αυξημένη έκφραση του EGFR σε NSCLC όταν ο συντελεστής Spearman που εκτελέσθηκε. Επιπλέον, οι ασθενείς με NSCLC με προηγμένα κλινικά στάδια είχαν σημαντικά υψηλότερη θετική ποσοστό της έκφρασης Flot-2 από εκείνα με τα προηγούμενα στάδια. Πάνω απ ‘όλα, τα αποτελέσματά μας δεν είναι συνεπείς μόνο με προηγουμένως δημοσιευμένα δεδομένα [18,19], αλλά και να φέρει τους ανθρώπους νέο οπτικό πεδίο. Πρώτον, η υπερ-έκφραση και των δύο Flot-2 και EGFR βρέθηκαν σε NSCLC? Δεύτερον, θετική σχέση μεταξύ της έκφρασης του Flot-2 και EGFR σε NSCLC απολύτως υπήρχαν? Επιτέλους, Flot-2 και EGFR μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην προώθηση της ανάπτυξης και της εξέλιξης του NSCLC. Παρ ‘όλα αυτά, μόνο αυτά τα στοιχεία δεν είναι αρκετά για να σχεδιάσετε μια ισχυρή συμπέρασμα? ως εκ τούτου, θα χρειαστεί περαιτέρω έρευνα για να αποδειχθεί σαφώς το συγκεκριμένο μηχανισμό Flot-2 και EGFR σε NSCLC, και αυτό είναι που είμαστε έτοιμοι να σπουδάσουν στο εγγύς μέλλον.

Παρά το γεγονός ότι ο όγκος-κόμβο-μετάσταση (ΤΝΜ ) σύστημα σταδιοποίησης είναι ο καλύτερος προγνωστικός δείκτης για λειτουργική NSCLC [22], βιοδείκτες δεν παίζουν μόνο συντριπτικά σημαντικό ρόλο στην ίδρυση μια ακριβή διάγνωση, αλλά και παρέχοντας προγνωστικά στοιχεία για NSCLC [23]. Ως εκ τούτου, οι νέες ανακαλύψεις βιοδεικτών για τον προσδιορισμό των κινδύνων εμφάνισης, εξέλιξης και προσεγγίσεις για θεραπευτική αγωγή NSCLC είναι εξαιρετικής σημασίας για την ανάπτυξη θεραπευτικών στρατηγικών για τη βελτίωση των αποτελεσμάτων και την επιβίωση των ασθενών με NSCLC. Flot-2, όπως ενός γονιδίου στόχου του ρ63 και ρ73, μέλος της οικογένειας παράγοντα μεταγραφής ρ53 [24], έχει προταθεί ως προγνωστικός δείκτης που συνδέεται με κακή πρόγνωση σε πολλούς ανθρώπινους όγκους, όπως ο καρκίνος του μαστού, γαστρικό καρκίνο, τραχηλικό καρκίνωμα και ούτω καθεξής [11-13]. Ωστόσο, η σημασία του Flot-2 σε καρκίνο του πνεύμονα ήταν ακόμη σπάνια αναφερθεί. Προηγούμενη βιβλιογραφία έδειξε ότι μόνο δύο έρευνες σχετικά με Flot-2 που έχουν διεξαχθεί σε NSCLC μέχρι σήμερα. Αλλά έχουν είτε καμία παρατήρηση σχετικά με τη σχέση μεταξύ υπερ-έκφραση της Flot-2 και του κλινικού αποτελέσματος, καθώς και η κακή επιβίωση ή καμία περιγραφή σχετικά με την έρευνα σχετικά με το πρότυπο έκφρασης του EGFR σχετίζονται με Flot-2 σε πνεύμονες SCC και των πνευμόνων ADC, αντίστοιχα [ ,,,0],18,19]. Στην παρούσα μελέτη μας, δείξαμε ότι και οι δύο πνεύμονες SCC και ADC ασθενείς με αυξημένη έκφραση του Flot-2 είχαν χειρότερη συνολικά ποσοστά επιβίωσης σε σύγκριση με τους ασθενείς με αρνητικό Flot-2. Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση απέδειξε ότι η αυξημένη έκφραση του Flot-2 ήταν ο ανεξάρτητος παράγοντας για την κακή πρόγνωση σε ασθενείς με πνευμονική ADC ανεξάρτητα από κλινικά στάδια, ιστολογικός τύπος, κατάσταση LNM, ιστολογική βαθμούς, την ηλικία και το φύλο. Τα αποτελέσματά μας δεν είναι μόνο σύμφωνα με ή παρόμοια με τα προηγούμενα δημοσιευμένα στοιχεία, αλλά και υποδηλώνουν ότι η υψηλή έκφραση του Flot-2 θα μπορούσαν να συμμετάσχουν στην προώθηση της επιβίωσης των κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό και να συνδεθούν με την κακή πρόγνωση των ασθενών με πνευμονική ADC. Ως εκ τούτου, η αυξημένη έκφραση του Flot-2 θα μπορούσε να θεωρηθεί ως νέο βιοδείκτη για την πρόβλεψη κακή πρόγνωση για τους ασθενείς ADC πνεύμονα.

Όσον αφορά EGFR, πολλές προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η έκφραση υψηλών επιπέδων του EGFR είναι που συνδέονται με την πρόοδο, μετάσταση και φτωχή πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο, αλλά η δύναμη πρόβλεψη αυτού του ενιαίου υποδοχέα έκβαση των ασθενών είναι αμφιλεγόμενη. Οι εκθέσεις σχετικά με συν-έκφραση του EGFR και άλλων πρωτεϊνών σε NSCLC έχουν θετική συνεργιστική επίδραση στην έκβαση των ασθενών [25,26]. Στην παρούσα μελέτη μας, θετική έκφραση του EGFR είχαν σημαντικά συσχέτιση με τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης για τους ασθενείς του πνεύμονα ADC. Επιπλέον, πνεύμονα SCC και οι ασθενείς ADC με θετική έκφραση είτε του Flot-2 και πρωτεΐνες EGFR είχαν χαμηλότερο συνολικά ποσοστά επιβίωσης από τους ασθενείς με όλα αρνητική χρώση αυτών των δύο πρωτεϊνών. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματα μας υποδεικνύουν μια σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ Flot-2 και EGFR ενδοκυτταρικό μονοπάτι στην εξέλιξη του NSCLC και υψηλή έκφραση πρωτεϊνών Flot-2 και EGFR θα μπορούσε να έχει θετικό συνεργιστικό αποτέλεσμα επί έκβαση των ασθενών.

Εν κατακλείδι , ευρήματα μας έδειξαν μια θετική συσχέτιση μεταξύ Flot-2 και τα επίπεδα EGFR σε ιστούς NSCLC. επίπεδο έκφρασης της πρωτεΐνης Flot-2 έχει συσχετιστεί με κακή πρόγνωση τόσο στον πνεύμονα SCC και ADC ασθενείς που υποδηλώνει ότι Flot-2, που συνδέεται με αυξημένη EGFR μπορεί να χρησιμεύσει ως βιοδείκτη για την ένδειξη κακής πρόγνωσης και πιθανό θεραπευτικό στόχο για NSCLC.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τον Δρ Μοχάμεντ Sohrab Hossain και Runzhao Li MD για τη βοήθειά τους με την αγγλική γλώσσα επεξεργασίας του χειρογράφου.