Αφηρημένο

Λυσοφωσφατιδικό οξύ (ΕΡΑ) είναι ένα βιοδραστικών λιπιδίων που ενισχύει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών, τη μετανάστευση και την εισβολή

στο vitro

και διεγείρει την περιτοναϊκή μετάσταση

in vivo

. LPA παράγεται μέσω της δράσης του αυτοταξίνης ή φωσφολιπάσες, και την υποβάθμιση αρχίζει με την αφαίρεση φωσφορικών λιπιδίων φωσφοϋδρολάση (LPP) -εξαρτώμενη του φωσφορικού. Ενώ οι επιδράσεις του LPA επί εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών είναι σαφείς, οι επιπτώσεις του μεταβολισμού Ι_ΡΑ μέσα στο μικροπεριβάλλον του όγκου σε περιτοναϊκή μετάσταση δεν έχουν αναφερθεί. Εξετάσαμε τη συμβολή της δραστηριότητας των λιπιδίων φωσφατάση για τον καρκίνο των ωοθηκών περιτοναϊκή μετάσταση χρησιμοποιώντας ποντίκια με ανεπαρκή έκφραση LPP1. Ομόζυγη διαγραφή του LPP1 (LPP1 KO) οδηγεί σε αυξημένα επίπεδα και μειώθηκε ο κύκλος εργασιών της LPA

in vivo

. Μέσα σε 2 εβδομάδες από την ενδοπεριτοναϊκή ένεση του καρκίνου των ωοθηκών κύτταρα συγγενή ποντικό, παρατηρήσαμε αυξημένη σπορά του όγκου στα ποντίκια LPP1 ΚΟ σε σύγκριση με τον άγριο τύπο. Ωστόσο, η ανάπτυξη του όγκου σταθεροποιήθηκαν στα ποντίκια LPP1 KO κατά 3 εβδομάδες, ενώ οι όγκοι συνέχισαν να αυξάνονται σε ποντίκια άγριου τύπου. Η μειωμένη φορτίο του όγκου συνοδεύθηκε από αυξημένη απόπτωση και καμία αλλαγή στον πολλαπλασιασμό ή την αγγειογένεση. Η ανάπτυξη του όγκου αποκαταστάθηκε και απόπτωση αντιστραφεί με εξωγενή χορήγηση LPA. Μαζί, αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι τα αυξημένα επίπεδα του LPA per se σε ποντικούς LPP1 ΚΟ δεν αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου. Αντίθετα, τα δεδομένα υποστηρίζουν την άποψη ότι είτε αυξημένη συγκέντρωση ΙΡΑ ή αλλοιωθεί ο μεταβολισμός LPA επηρεάζει άλλες συνεισφορές που προάγουν την ανάπτυξη του μικροπεριβάλλον του όγκου

Παράθεση:. Nakayama J, Raines ΤΑ, Lynch ΚΚ, Slack-Davis JK (2015 ) Μειωμένη περιτοναϊκή ωοθηκών ανάπτυξη του καρκίνου σε ποντίκια που στερούνται έκφρασης των λιπιδίων φωσφορικών φωσφοϋδρολάσης 1. PLoS ONE 10 (3): e0120071. doi: 10.1371 /journal.pone.0120071

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Τάνια Β Kalin, Ιατρικό Κέντρο Νοσοκομείο Σινσινάτι των παιδιών, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 8 του Σεπ 2014? Αποδεκτές: τρίτης Φεβρουαρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 13 Μαρτίου 2015

Copyright: © 2015 Nakayama et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας /National Cancer Institute επιχορήγηση CA142783 υποστηρίζεται JKS-D και KRL, ο οποίος υποστηρίχθηκε επίσης από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας γενικές Ιατρικές Επιστήμες χορηγήσει GM067958-09. TAR υποστηρίχθηκε από ένα συμπλήρωμα ποικιλομορφία CA142783. JN υποστηρίχθηκε από το Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια Γυναικολογικής Ογκολογίας Προγράμματος Υποτροφιών. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικά συμφέροντα υπάρχουν

Εισαγωγή

Lysophsphatidic οξύ (LPA) είναι ένα βιοενεργό λιπίδιο που ρυθμίζει πολλές κυτταρικές λειτουργίες κρίσιμες για την ογκογένεση και τη μετάσταση που συμπεριλαμβάνουν τον πολλαπλασιασμό, την επιβίωση, την κυτταροσκελετική αναδιοργάνωση, η μετανάστευση, εισβολή και την παραγωγή κυτοκίνης [1-5]. Η σημασία του LPA να εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών ιδρύθηκε όταν αναγνωρίστηκε ως αυξητικός παράγοντας σε κακοήθη ασκίτη [6]. LPA διεγείρει την κυτταρική δραστηριότητα μέσω τουλάχιστον τρία (LPA1, LPA2, και LPA3) και ίσως και 6 συζευγμένων υποδοχέων (LPA4-6) G-πρωτεΐνη. LPA1 εκφράζεται σε φυσιολογικά επιφάνεια των ωοθηκών επιθήλιο? η έκφραση του LPA2 και LPA3 προκαλείται στα καρκινικά κύτταρα [2]. Κατά την δέσμευση του υποδοχέα του, το ΙΡΑ διεγείρει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών μέσω της ενεργοποίησης Gα12 [4]. Και οι τρεις υποδοχείς ρυθμίζουν τη μετανάστευση των ωοθηκών των καρκινικών κυττάρων και εισβολή άμεσα με την ενεργοποίηση προμεταναστευτικές Rac και μονοπάτια Rho-εξαρτώμενη σηματοδότηση [1,7]. Επιπλέον, LPA προωθεί την ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών και μετάσταση έμμεσα με διέγερση της παραγωγής πρωτεασών (ΜΜΡ και πλασμινογόνου ουροκινάσης ενεργοποιητή) [8,9] και κυτοκίνες (IL-6 και IL-8), οι οποίες παίζουν ένα ρόλο στην εισβολή του καρκίνου των ωοθηκών και μετάσταση [10]. LPA σύνδεση προς LPA2 ή LPA3 αυξάνει την παραγωγή της IL-6, IL-8, και VEGF. Πράγματι, knockdown του LPA2 ή LPA3 μειώνει παραγωγή IL-6, και η υπερ-έκφραση τους οδηγεί σε αυξημένα επίπεδα στον ορό του IL-6 και VEGF, αύξηση του βάρους του όγκου και συντομεύεται χρόνους επιβίωσης σε ένα μοντέλο ποντικού για καρκίνο των ωοθηκών περιτοναϊκή μετάσταση? διαμόρφωση του LPA1 δεν είχαν σημαντική επίδραση σε αυτή τη μελέτη [11].

LPA παράγεται από μία ποικιλία κυττάρων εντός του μικροπεριβάλλον του όγκου συμπεριλαμβανομένων των αιμοπεταλίων, μεσοθηλιακών κυττάρων, λιποκύτταρα, τα ενδοθηλιακά κύτταρα και τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [12,13 ], και με την απουσία του καρκίνου, οι συγκεντρώσεις είναι στενά διατηρείται κάτω 1 μΜ. Τα επίπεδα του LPA σημαντικά αυξημένα στο πλάσμα και ασκίτη (έως 50 μΜ) των γυναικών με καρκίνο των ωοθηκών [14], και την αύξηση του πλάσματος LPA έχει προταθεί ως βιοδείκτης για τον καρκίνο των ωοθηκών [15]. Μέλη της φωσφολιπάσης Α

1 (PLA

1) και PLA

2 οικογένειες αφαιρέσετε μια αλυσίδα λιπαρών οξέων από φωσφατιδικό οξύ για να σχηματίσει LPA. Αυτοταξίνης (ATX), ένα εξωκυτταρικό λυσοφωφολιπάσης D παράγει επίσης LPA μετά την αφαίρεση της χολίνης από λυσοφωσφατιδυλοχολίνη. PLA

2 και αυτοταξίνη είναι αυξημένα σε ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών [16,17], και υπάρχει μια θετική βρόχος ανάδρασης μεταξύ αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) και την παραγωγή ΑΤΧ από τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [18].

LPA καταβολισμό κινείται από λιπίδια phosphohydrolases φωσφορικό (LPPs), οι τύποι 1, 2 και 3, οι οποίες αφαιρούν το φωσφορικό να δημιουργήσει μονοακυλγλυκερόλης (MAG). MAG διασπάται περαιτέρω με μονοακυλογλυκερόλη λιπάση για την απελευθέρωση του αλυσίδα λιπαρού οξέος από γλυκερίνη. έκφραση LPP1 και LPP3 μειώνεται σε ανθρώπινους καρκίνους των ωοθηκών σε σχέση με το φυσιολογικό ιστό ωοθήκης [19], ενώ αναγκάζεται υπερ-έκφραση είτε LPP1 ή LPP3 μειώνει ογκογένεσης των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών σε μοντέλα ποντικού πιθανώς από μειωμένα επίπεδα ΙΡΑ [19,20].

Εκτός από τη ρύθμιση των ωοθηκών πολλαπλασιασμού καρκινικών κυττάρων, την επιβίωση, τη μετανάστευση και εισβολή

in vitro

, η ικανότητα του ΙΡΑ για την προώθηση των ωοθηκών εισβολή καρκίνου και ανάπτυξη έχει αποδειχθεί σε μοντέλα ποντικών της περιτοναϊκής μετάστασης? καθημερινή ένεση ή εμφύτευση των αντλιών που παράγουν υψηλές συγκεντρώσεις ΙΡΑ αύξηση του βάρους του όγκου σε ανοσοκαταστολή και συγγενικά μοντέλα ποντικών [21,22]. Ωστόσο, τα αποτελέσματα του μεταβολισμού Ι_ΡΑ μέσα στο μικροπεριβάλλον του όγκου σε περιτοναϊκή μετάσταση δεν έχουν αναφερθεί. Επιδιώξαμε να διαπιστωθεί αν απομειωθεί LPA φωσφατάση (ειδικά LPP1) δραστηριότητα επηρεάζεται τον καρκίνο των ωοθηκών περιτοναϊκή μετάσταση. Αντί στοχεύουν δραστηριότητα LPP1 στα κύτταρα όγκου, εξετάσαμε την επίδραση της απώλειας LPP1 στο μικροπεριβάλλον του όγκου χρησιμοποιώντας ποντίκια που στερούνται LPP1 έκφραση μετά την εισαγωγή ενός εξονίου-παγίδα (LPP1 KO) [23] και τα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών συνγονιδιακό ποντικό [24] . Lipid δραστικότητα φωσφατάσης σε LPP1 ΚΟ ποντικούς είναι σημαντικά μειωμένη (35-95%) σε πολλαπλούς ιστούς, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που βρίσκονται μέσα στην περιτοναϊκή κοιλότητα. Επιπλέον, το πλάσμα LPA μεταβολίζεται 4 φορές πιο αργά από ό, τι τα ποντίκια άγριου τύπου, ενώ οι συγκεντρώσεις της Ι_ΡΑ στο πλάσμα είναι σημαντικά αυξημένα στους ποντικούς ΚΟ LPP1 [23]. Εδώ, αναφέρουμε ότι περιτοναϊκή ανάπτυξη καρκίνου των ωοθηκών σε LPP1 ΚΟ ποντίκια ανυψώθηκε ήδη δύο εβδομάδες μετά την έναρξη της σε σχέση με τους ελέγχους άγριου τύπου? Ωστόσο, ενώ το φορτίο του όγκου συνέχισε να αυξάνεται σε ποντικούς άγριου τύπου, σταθεροποιήθηκαν μετά από 3 εβδομάδες σε ποντικούς που στερούνται LPP1 έκφρασης. Η μειωμένη φορτίο του όγκου συνοδεύθηκε από αυξημένη απόπτωση και καμία αλλαγή στον πολλαπλασιασμό ή την αγγειογένεση. Δεδομένα από μία δοκιμασία αγγειογένεσης βύσμα matrigel δεν αποκαλύψει ελαττώματα σε ποντίκια LPP1 ΚΟ. Επιπλέον, η εξωγενής χορήγηση του LPA διεγείρεται ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών σε ίση έκταση σε άγριου τύπου και ποντίκια LPP1 ΚΟ. Μαζί, αυτές οι παρατηρήσεις υποστηρίζουν την ιδέα ότι LPP1 ΚΟ είτε στερούνται έναν κρίσιμο παράγοντα προαγωγής της ανάπτυξης ή την παραγωγή ενός αναστολέα της ανάπτυξης του καρκίνου των ωοθηκών, οι οποίες μπορούν να ξεπεραστούν με την αύξηση LPA εξής εξωγενή χορήγηση.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταροκαλλιέργεια και διαμόλυνση

κύτταρα ID8 είχαν γενναιόδωρα από τον Dr. Κ Roby (Πανεπιστήμιο του Κάνσας) [24] και καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 4% ορό εμβρύου μόσχου, 100 μονάδες /mL πενικιλίνη , 100 μg /mL στρεπτομυκίνη, 5 μg /ml ινσουλίνη, 5 μg /mL τρανσφερρίνη, και 5 ng /mL σεληνίτη νατρίου. Είχαν περάστηκαν δύο φορές μέσω C57BL /6 ποντικούς για να αυξηθεί όγκου λάβει και να μειώσει την κινητική της ανάπτυξης. Το προκύπτον κυτταρική γραμμή, ID8ip2, μετήχθη με φακοϊό εκφράζουν λουσιφεράση (GeneCopoeia, Rockville, MD), και εκφράζουν σταθερά πληθυσμούς (ID8ip2Luc) ελήφθησαν ακόλουθη πουρομυκίνης (/mL 2 μg) επιλογής για 2 εβδομάδες.

Ποντίκι καρκίνο των ωοθηκών μετάσταση

Όλα τα πειράματα σε ζώα περιτοναϊκή έγιναν μετά από έγκριση από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Θεσμικών των ζώων στο Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια. Έξι έως 8 εβδομάδων σε ηλικία θηλυκών άγριου τύπου (C57BL /6) ή LPP1 υποπλασμένα (LPP1 KO) ποντίκια ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά (ΙΡ) με 10

6 κύτταρα ID8ip2Luc σε 200 μL PBS. Τα πειράματα διεξήχθησαν με τις ομάδες των 3-5 ποντικών ανά γονότυπο ή /και θεραπεία? ο συνολικός αριθμός των ποντικών που αναλύθηκαν (n) ενδείκνυται στη λεζάντα σχήματος. Τα ποντίκια παρατηρήθηκαν 2-3 φορές την εβδομάδα από το προσωπικό των εργαστηρίων και παρακολουθούνται για σημάδια δυσφορίας (δηλαδή, οι αλλαγές στην εμφάνιση, την αναπνοή, τη δραστηριότητα, κ.λπ.) και ζυγίζεται? ποντίκια δείχνει σημάδια δυσφορίας ή να χάσει περισσότερο από το 15% του σωματικού βάρους υποβλήθηκαν σε ευθανασία και εξετάστηκαν για όγκο. LPA (18: 1, Sigma-Aldrich) αιωρήθηκε σε λευκωματίνη ορού 0,5% λιπαρό οξύ χωρίς βοοειδών σε φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα (PBS) σε συγκέντρωση 100 μmol /L, και 200 ​​μL χορηγήθηκαν ΙΡ άπαξ ημερησίως ξεκινώντας 1 ημέρα μετά την έναρξη του όγκου και συνεχίστηκε για 6 εβδομάδες. Η καθημερινή χορήγηση του οχήματος χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Tumor φορτίο παρακολουθήθηκε εβδομαδιαία με μέτρηση εκπομπής φωτός εξής IP λουσιφερίνη χορήγηση ως ένδειξη της δραστικότητας λουσιφεράσης χρησιμοποιώντας ένα σύστημα απεικόνισης IVIS (Molecular Imaging Core, Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια). Συνολική ροή (φωτόνια /sec) προσδιορίσθηκε για το σύνολο της κοιλιακής κοιλότητας. Κατά την πειραματική τερματισμού, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία και το φορτίο του όγκου αξιολογήθηκε με βάση τη νεκροψία μετρώντας τον αριθμό των οζιδίων του όγκου, και ζύγιση του επίπλουν (πρωτογενή θέση της εμφύτευσης του όγκου) και τυχόν πρόσθετες οζίδια όγκου. Φορμαλίνη σταθερό, εγκλεισμένοι σε παραφίνη ιστοί τεμαχίστηκαν και Η &?. Ε χρώση (Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια Research Ιστολογία πυρήνα) να αξιολογήσει μικροσκοπική φορτίο όγκου, την έκταση της περιτοναϊκής εισβολής, και μιτωτικό δείκτη

Ανοσοϊστοχημεία

Ένα τμήμα του όγκου που περιέχει επίπλουν ανά ποντικό υποβλήθηκε σε ανοσοϊστοχημεία για Κί67 (1:. 500, μονοκλωνικά κουνέλι, Epitomics, Cat # 4203 – 1), διασπασμένη κασπάση 3 (1: 500, κουνελιού πολυκλωνικό, Cell Signaling, Cat. # 9661), CD31 (ενδοθηλιακών κυττάρων? 1:.. 4, πολυκλωνικά κουνελιού, Abcam, Cat # ab28365), ή VCAM-1 (1: 800, κουνελιού πολυκλωνικό, Abcam, Cat # ab134047) (Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια Biorepository Tissue Research Ευκολία). Εν συντομία, οι τομές βρασμένα σε χαμηλό ρΗ (Ki67, CD31) ή υψηλό ρΗ (διασπασμένη κασπάση 3, VCAM-1) EnVision FLEX Target Ανάκτηση Solution (Dako) και βάφτηκαν με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις του κάθε αντισώματος. σύμπλοκο αντιγόνου-αντισώματος ανιχνεύθηκε με τη χρήση Envision διπλής σύνδεσης (Dako) και ακολούθησε επώαση με 3,3′-διαμινοβενζιδίνη τετραϋδροχλωρική (DAB +) χρωμογόνο (Dako) και με αιματοξυλίνη. Κί67, και διασπάται χρώση κασπάσης 3 ποσοτικοποιήθηκε αθροίζοντας τον αριθμό των θετικά και αρνητικά κύτταρα όγκου χρωματίζονται σε 5 υψηλής ισχύος (400Χ μεγέθυνση) πεδία ανά τμήμα (ένα τμήμα ανά ποντικό) για τον υπολογισμό των τοις εκατό θετικά κύτταρα. Η έκταση του σχηματισμού αιμοφόρων προσδιορίστηκε με μέτρηση του αριθμού των CD31 χρωματίστηκαν σκαφών και ομαλοποίηση αυτό με τη συνολική έκταση του όγκου (που περιγράφεται και υπολογίζεται χρησιμοποιώντας ImageJ) ανά 200X πεδίου (5 πεδία ανά τμήμα, με 1 τμήμα ανά ποντικό). Το ποσοστό των mesothelial κυττάρων που εκφράζουν μεμβρανώδη VCAM-1 καταγράφεται ως θετικός σε & gt?. 50%

Matrigel βύσμα αγγειογένεση δοκιμασία

αυξητικού παράγοντα-μειωμένες matrigel (BD Biosciences) αναμίχθηκε με ID8ip2Luc κυττάρων συσκευασμένων μέσα (1: 1) ή με 1 μg /ml FGF, 20 μg /ml VEGF [25] και ενέθηκαν υποδορίως σε 10 άγριου τύπου ή 8 ποντίκια LPP1 ΚΟ. Κάθε ποντίκι έλαβε 1 τάπα matrigel με ρυθμισμένα μέσα και ένα με FGF /VEGF. Μετά από 10 ημέρες, οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία, και ανακτήθηκαν βύσματα Matrigel, σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη, ενσωματωμένο, τεμαχίστηκαν, και χρωματίστηκαν για CD31 για να σηματοδοτήσει σκαφών. μετρήθηκε ο συνολικός αριθμός των CD31 θετικών αγγείων σε πέντε τομείς μεγέθυνση 200Χ ανά βύσμα. Βύσματα δεν ανακτήθηκαν από όλους τους ποντικούς? ο αριθμός των τάπες για κάθε γονότυπο και αγγειογενετική ερέθισμα αναφέρεται στο μύθο σχήμα.

Στατιστική Ανάλυση

Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση GraphPad Prism 6 λογισμικού. δεδομένα φωταύγεια αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας 2-way ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) που ακολουθείται από τεστ πολλαπλών συγκρίσεων του Tukey. Η μονόδρομη ANOVA που ακολουθείται από τεστ πολλαπλών συγκρίσεων του Tukey για να αναλυθεί βάρη επίπλουν και χρώση του ιστού από ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με Ι_ΡΑ ή όχημα. Η συχνότητα εμφάνισης όγκων από εισβολή ή χρώση VCAM-1 αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher. Τα υπόλοιπα δεδομένα αναλύθηκαν με μη ζευγαρωμένο t-test ή τη δοκιμή Mann-Wilcoxan-Whitney ανάλογα με το αν τα δεδομένα ήταν παραμετρικά.

Αποτελέσματα

Αυξημένη σπορά του όγκου του περιτοναίου σε LPP1 ΚΟ

Αν και η συμβολή του ΙΡΑ στην ανάπτυξη καρκίνου των ωοθηκών και της εξέλιξης έχει μελετηθεί εκτενώς [1,2,4,7-11], τα αποτελέσματα του μεταβολισμού LPA στην εξέλιξη του καρκίνου είναι ελάχιστα κατανοητή. Ερευνήσαμε την επίδραση της μείωσης του κύκλου εργασιών LPA επί μεταστατικής περιτοναϊκή ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών και της εξέλιξης χρησιμοποιώντας ποντίκια που στερούνται τη φωσφατάση λιπιδίων, LPP1 (LPP1 KO) και ένα συνγονιδιακό ποντικό καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών γραμμή, ID8ip2Luc.

In vivo

απεικόνιση ποντικούς μετά ενδοπεριτοναϊκή ένεση (ΙΡ) των κυττάρων ID8ip2Luc αποκάλυψε αυξημένη φωταύγεια σε ποντικούς LPP1 ΚΟ σε σύγκριση με τον άγριο τύπο μέσα σε 2 εβδομάδες (Εικ. 1Α). Φυσική εξέταση της περιτοναϊκής κοιλότητας κατά τη νεκροψία 2 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου έδειξε καμία ένδειξη οζιδίων όγκου (τα δεδομένα δεν φαίνονται) και καμία διαφορά στο βάρος του επίπλουν (πρωτογενή θέση μετάστασης όγκου) μεταξύ των γονότυπων (S1 Εικ.) Ή από μη ποντικών που φέρουν όγκο (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Εντούτοις, η αξιολόγηση του Η &? Ε χρώση τμημάτων του επίπλουν αποκάλυψε την παρουσία των μικροσκοπικών οζιδίων όγκου (S1 Σχ.), Σύμφωνα με προηγούμενες παρατηρήσεις [26]. Σημαντικά, σημαντικά πιο μικροσκοπική οζίδια παρατηρήθηκαν σε Αδένες από ποντικούς LPP1 ΚΟ σε σύγκριση με άγριου τύπου (σχ. 1Β). Επιπλέον, LPP1 KO ποντίκια ήταν πιο πιθανό να φιλοξενούν επεμβατικές βλαβών (Σχ. 1C, S1 Σχ.), Που συνέπεσε με μεσοθηλιακών VCAM-1 έκφρασης (Εικ. 1 D, S1 Σχ.), Το οποίο προωθεί την εισβολή του όγκου του mesothelium [26]. Μαζί, αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι η απώλεια του LPP1 στο μικροπεριβάλλον του όγκου διευκολύνει την σπορά του όγκου και μεσοθήλια εισβολή της περιτοναϊκής κοιλότητας.

ID8ip2Luc ωοθηκών καρκινικά κύτταρα εγχύθηκαν ΙΡ σε C57BL /6 (WT) ή LPP1 ΚΟ ποντικούς. (Α) Ποντίκια (WT = 10? LPP1 KO n = 12) απεικονίστηκαν εβδομαδιαία μετά την έναρξη του όγκου για την παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ολική ροή (φωτόνια /δευτερόλεπτο) ± std ERR και αναλύθηκαν με 2-way ANOVA που ακολουθείται από τεστ πολλαπλών συγκρίσεων του Tukey. (Β) Ο συνολικός αριθμός των μικροσκοπικών οζιδίων όγκου μετρήθηκε σε ένα άτομο, που επιλέγονται τυχαία, Η &? Ε χρώση τμήμα του επίπλουν ανά ποντικό ελήφθη 2 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου (WT = 7? LPP1 KO n = 8). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± std err? ρ = 0,0069 προσδιορίζεται με t-test του Student. (Γ) Το ποσοστό του άγριου τύπου ή LPP1 ΚΟ (από το (Β)) ποντίκια με επεμβατικές (συμπαγείς ράβδοι) ή μη-επεμβατική (δεν περιλαμβάνει καμία όγκου? Στήλες με στιγμές) όγκων 2 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου. Αριθμός ποντικών ανά αποτέλεσμα υποδεικνύεται. Σημασία καθορίζεται με την ακριβή δοκιμή του Fisher. (D) Το ποσοστό άγριου τύπου ή LPP1 ΚΟ (από το (Β)) ποντικών με (θετική, συμπαγείς ράβδοι) ή χωρίς (αρνητικός, στήλες με στιγμές) μεσοθηλιακών VCAM-1 χρώση με IHC 2 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου. Αριθμός ποντικών ανά αποτέλεσμα υποδεικνύεται. Σημασία καθορίζεται με την ακριβή δοκιμή του Fisher.

Η

Μειωμένη ανάπτυξη του όγκου και την αυξημένη απόπτωση σε LPP1 ΚΟ

Αν και το μικροπεριβάλλον του LPP1 ΚΟ ευνοεί την εμφύτευση του όγκου στην περιτοναϊκή κοιλότητα, τα ποντίκια άγριου τύπου έδειξε ισοδύναμο φορτίο του όγκου που υποδεικνύεται από φωταύγειας εντός 3 εβδομάδων από την έναρξη (Εικ. 1Α). Πιο εντυπωσιακά, η έντονη αύξηση του όγκου ακολούθησε σε ποντικούς άγριου τύπου, όπως φαίνεται από την αυξημένη φωταύγεια την πάροδο του χρόνου, ενώ οι όγκοι σταθεροποιήθηκαν στους ποντικούς ΚΟ LPP1 στις 3 εβδομάδες (Εικ. 2Α και 2Β). Επιπλέον, τα ποντίκια άγριου τύπου είχαν αυξημένους αριθμούς των μακροσκοπικών οζιδίων όγκου σπουδάζει την περιτοναϊκή κοιλότητα και την αύξηση του όγκου του όγκου προσδιορίζεται με ζύγιση του επίπλουν και των συναφών όγκων (Σχ. 2C και 2D). Για να προσδιοριστεί εάν η έλλειψη της ανάπτυξης του όγκου στα ποντίκια LPP1 ΚΟ οφειλόταν σε μικρότερο πολλαπλασιασμό ή αυξημένη απόπτωση, οι όγκοι υπέστησαν χρώση για την πολλαπλασιαστική δείκτη Κί67 ή διασπασμένη κασπάση 3, ως δείκτης της απόπτωσης. Οι όγκοι που προέρχονται από άγριου τύπου και LPP1 ΚΟ ποντικοί είχαν ισοδύναμα επίπεδα πολλαπλασιασμού (Σχ. 3Α). Ωστόσο, οι όγκοι από LPP1 ΚΟ ποντικοί είχαν 3 φορές περισσότερα κύτταρα που χρωματίζονται θετικά για διασπασμένης κασπάσης 3 σε σύγκριση με άγριου τύπου (σχ. 3Β) υποδεικνύοντας μια σημαντική αύξηση στην απόπτωση. Επομένως, ενώ η απώλεια του LPP1 στο μικροπεριβάλλον του όγκου διευκολύνει την σπορά του όγκου, είναι ανεπαρκής για να διατηρήσει την ανάπτυξη του όγκου με τον χρόνο λόγω, τουλάχιστον εν μέρει σε αύξηση της απόπτωσης.

Μετά την ένεση ΙΡ των κυττάρων ID8ip2Luc, ποντικοί απεικονίστηκαν εβδομαδιαία για την παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου κινητικά. (Α) Εκπρόσωπος εικόνες φωταύγεια του άγριου τύπου και LPP1 ΚΟ ποντίκια με όγκους που λαμβάνονται σε διαστήματα 2 εβδομάδων. (Β) Ποσοτικοποίηση του συνολικού ροής (φωτόνια /δευτερόλεπτο) προσδιορίσθηκε σε εβδομαδιαία βάση για άγριου τύπου (n = 10) και LPP1 ΚΟ (n = 12) ποντικών. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± std err? p & lt? 0.001 προσδιορίζεται από 2-way ANOVA που ακολουθείται από τεστ πολλαπλών συγκρίσεων του Tukey. (C) Τα στοιχεία αντιπροσωπεύουν τον αριθμό των μακροσκοπικών οζιδίων όγκου ανά ποντικό προσδιορίζεται 8 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου. Ποντίκια με πάρα πολλά οζίδια να μετρήσει είχαν ανατεθεί μια τιμή των 200. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση τιμή με 25

ου και 75

ου εκατοστημόρια? p = 0.02 προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας την δοκιμή Wilcoxan-Mann-Whitney. (Δ) Ο όγκος του όγκου προσδιορίστηκε με ζύγιση της επίπλουν (πρωτογενή θέση του σχηματισμού όγκου) και όλα συνδέονται οζίδια όγκου 8 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου? Κάθε σημείο δείχνει ένα άτομο το ποντίκι. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση με 25

ου και 75

ου εκατοστημόρια? ρ = 0,0031 προσδιορίζεται με t-test του Student.

Η

Οι όγκοι συλλέχθηκαν 8 εβδομάδες μετά την έναρξη κόπηκαν και χρωματίστηκαν για Ki67 (Α) ή διασπασμένη κασπάση 3 (Β). Η χρώση ποσοτικοποιήθηκε με απαρίθμηση του αριθμού των θετικών και αρνητικών κυττάρων από 5 υψηλής ισχύος πεδία (400χ μεγέθυνση) του όγκου ανά ποντικό, 5 ποντικοί ανά ομάδα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως επί τοις εκατό θετικά. Box και μουστάκια οικόπεδα δείχνουν ελάχιστο, 25

ο εκατοστημόριο, διάμεσο, 75

ο εκατοστημόριο και μέγιστες τιμές. * P & lt? 0.001, έλεγχος τ.

Η

Η αγγειογένεση δεν μεταβάλλεται σε LPP1 ΚΟ

Η αυξημένη απόπτωση στα ποντίκια LPP1 ΚΟ θα μπορούσε να προκύψει ως αποτέλεσμα της έλλειψης θρεπτικών συστατικών που παρέχονται στον όγκο λόγω ελαττωματικών αγγειογένεση, η απουσία ενός παράγοντα προ-επιβίωσης ή η παρουσία ενός επαγωγέα του κυτταρικού θανάτου. Πράγματι, τα ποντίκια που στερούνται έκφρασης LPP3 είναι εμβρυϊκά θανατηφόρα εξαιτίας ενός ελαττώματος στην αγγειογένεση [27]. Για να προσδιορίσετε αν η αγγειογένεση ήταν ελαττωματικό σε ποντίκια LPP1 ΚΟ, οι όγκοι υπέστησαν χρώση για το CD31 ενδοθηλιακά δείκτη. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Α, όγκοι από άγριου τύπου και LPP1 ΚΟ ποντίκια είχαν παρόμοια επίπεδα της χρώσης CD31. Για πιο αντικειμενικά να αξιολογήσει κατά πόσον υπήρχε μια εγγενής μεταβολή στην αγγειογένεση, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία βύσμα matrigel. Εν συντομία, matrigel ενσωματωμένο με ρυθμισμένα μέσα κυττάρου όγκου ή FGF και VEGF εμφυτεύθηκε στα πλευρά του άγριου τύπου ή ποντίκια LPP1 ΚΟ να διεγείρει την αγγειογένεση (S2 Εικ.). Καρκινικών κυττάρων ρυθμισμένα μέσα διεγείρονται ισοδύναμο αριθμό των σκαφών σε άγριου τύπου και LPP1 ΚΟ ποντίκια (Σχ. 3Β). FGF /VEGF διεγείρεται σχηματισμός σκάφος σε μεγαλύτερο βαθμό στα ποντίκια LPP1 ΚΟ σε σύγκριση με άγριου τύπου (σχ. 3C). Μαζί, αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι η αυξημένη απόπτωση και τα συνοδευτικά μείωση στο φορτίο όγκου στα ποντίκια LPP1 ΚΟ δεν οφειλόταν σε ελάττωμα στην αγγειογένεση.

(Α) Οι όγκοι από ποντικούς 8 εβδομάδες μετά την έναρξη κόπηκαν και χρωματίστηκαν για CD31, και ο συνολικός αριθμός των CD31 θετικών αγγείων ανά περιοχή του όγκου από 5 υψηλής ισχύος πεδίων (HPF? μεγέθυνση 200Χ) ανά ποντικό για άγριου τύπου (WT, η = 5) και LPP1 ΚΟ (η = 5) ποντικούς σχεδιάζεται. Ο συνολικός αριθμός των CD31 θετικών αγγείων παρατηρείται σε 5 HPF βυσμάτων Matrigel που περιέχει ρυθμισμένο μέσο από κύτταρα ID8ip2Luc (Β) ή FGF /VEGF (C) χαράσσεται (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι). Τα στοιχεία που παρουσιάζονται με το κιβώτιο και μουστάκια οικόπεδα όπως περιγράφεται για την Εικ. 3. * ρ = 0,0083, t-test του Student.

Η

Η εξωγενής χορήγηση αυξητικού παράγοντα υπερνικά καταστολή όγκου σε LPP1 ΚΟ

Μειωμένη ανάπτυξη του όγκου σε απουσία ελαττωμάτων στην αγγειογένεση είναι ενδεικτική της έλλειψης ενός περιβάλλοντος προαγωγής ανάπτυξης στα ποντίκια LPP1 ΚΟ. Ένα τέτοιο περιβάλλον θα μπορούσε να περιλαμβάνει ένα πλήθος συστατικών συμπεριλαμβανομένης της έλλειψης μιας (προ-επιβίωσης) παράγοντας προώθησης της ανάπτυξης, με την παρουσία ενός αναστολέα της ανάπτυξης (επαγωγέας του κυτταρικού θανάτου), η αδυναμία να προσλάβει βοηθητικά κύτταρα αναγκαία για την προώθηση της ανάπτυξης, ακατάλληλη αλληλεπιδράσεις κυττάρου-κυττάρου εντός του όγκου ή οποιονδήποτε συνδυασμό αυτών ή πρόσθετες επιδράσεις. Υποθέσαμε ότι η εξωγενής χορήγηση υψηλών συγκεντρώσεων ενός αυξητικού παράγοντα θα υπερισχύουν των αρνητικών συνεπειών στο περιβάλλον αναστολής της αναπτύξεως. LPA είναι μια καθιερωμένη διεγέρτης της ανάπτυξης των ωοθηκών των καρκινικών κυττάρων [2,4]. Η καθημερινή χορήγηση του ΙΡΑ έχει αναφερθεί ότι διεγείρει την ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών σε ποντικούς με ανοσοκαταστολή [21] και όγκους στο μοντέλο ποντικού ID8 ωοθηκών [22]. Ως εκ τούτου, ελέγξαμε την ικανότητα του Ι_ΡΑ να διεγείρει την ανάπτυξη του όγκου σε ID8ip2Luc LPP1 ΚΟ σε σύγκριση με τους ποντικούς άγριου τύπου. Η καθημερινή χορήγηση του LPA αυξήθηκε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς άγριου τύπου ξεκινώντας 4 εβδομάδες μετά την έναρξη και κορυφώθηκε με 3 φορές περισσότερη φωτεινότητα σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου χωρίς εξωγενή LPA (Εικ. 5Α), σε συμφωνία με προηγούμενες παρατηρήσεις [22]. LPA διεγείρεται επίσης την ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς LPP1 ΚΟ στην ίδια έκταση που παρατηρείται σε ποντικούς άγριου τύπου σε επεξεργασία με ΙΡΑ (Εικ. 5Α). Σε αμφότερες τις περιπτώσεις, το ΙΡΑ αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου (Σχ. 5Β). Εντυπωσιακά, LPA μείωσε τον αριθμό των κυττάρων που χρωματίζονται θετικά για διασπασμένης κασπάσης 3 στο επίπεδο που βρίσκεται σε όγκους από ποντικούς άγριου τύπου, με ή χωρίς LPA (Εικ. 5C). Τα στοιχεία δείχνουν ότι η παράδοση των αυξημένων συγκεντρώσεων του ΙΡΑ αναστρέφει το αρνητικό περιβάλλον ανάπτυξης που βρέθηκαν σε ποντίκια LPP1 ΚΟ.

ID8ip2Luc ωοθηκών καρκινικά κύτταρα εγχέονται IP σε άγριου τύπου (WT, n = 19) ή LPP1 ΚΟ (n = 20) ποντίκια. Τα ποντίκια έλαβαν ημερήσιες ενέσεις LPA (n = 6 WT, η = 7 LPP1 KO) ή φορέα (η = 13 και για τις δύο γονότυποι) ξεκινώντας την ημέρα μετά την ένεση του όγκου. (Α) Ποντικοί απεικονίστηκαν εβδομαδιαία μετά την έναρξη του όγκου για την παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση συνολική ροή (φωτόνια /δευτερόλεπτο) ± std err? * P & lt? 0,001, 2-way ANOVA που ακολουθείται από τεστ πολλαπλών συγκρίσεων του Tukey. Οι όγκοι συλλέχθηκαν 6 εβδομάδες μετά την έναρξη, τεμαχίστηκαν και χρωματίστηκαν για Ki67 (Β) ή διασπασμένη κασπάση 3 (C). Ποσοτικοποίηση των Κί67 και διασπασμένη κασπάση 3 επιτεύχθηκε με προσδιορισμό του ποσοστού των θετικά χρωσμένων κυττάρων σε 5 υψηλής ισχύος πεδία (400χ μεγέθυνση) ανά ποντικό, 5 ποντικοί ανά ομάδα. Τα στοιχεία που παρουσιάζονται με το κιβώτιο και μουστάκια οικόπεδα όπως περιγράφεται για την Εικ. 3. ** p & lt? 0.0001, 2-way ANOVA που ακολουθείται από τεστ πολλαπλών συγκρίσεων του Tukey.

Η

Συζήτηση

LPA είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής της ανάπτυξης των ωοθηκών καρκίνο και μετάσταση. Εκτός από τα αυξημένα επίπεδα που βρίσκονται σε ασκίτη, η οποία συνοδεύεται από αυξημένη δραστηριότητα ATX, οι ίδιοι οι όγκοι έχουν de ηονο έκφραση των υποδοχέων LPA (LPA2 και LPA3) [2], και μειωμένη έκφραση LPP1 και LPP3 [19,20]. Εδώ, εξετάσαμε την συμβολή του μεταβολισμού LPA σε μη καρκινικά κύτταρα εντός μικροπεριβάλλον του όγκου σχετικά με τη δημιουργία και την ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών εντός της περιτοναϊκής κοιλότητας. Απώλεια της έκφρασης LPP1 εντός μικροπεριβάλλον του όγκου οδήγησε σε αύξηση της σποράς του όγκου μετά την έγχυση ΙΡ των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών? Ωστόσο, η επακόλουθη ανάπτυξη παρεμποδίστηκε, η οποία συνοδεύτηκε από αυξημένη απόπτωση και δεν ελαττώματα στον πολλαπλασιασμό καρκινικών κυττάρων, αγγειογένεση ή μακροφάγων και την πρόσληψη των λεμφοκυττάρων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι η απώλεια του LPP1 δημιουργεί ένα περιβάλλον ανεπαρκής για να υποστηρίξει την ανάπτυξη του όγκου, ίσως λόγω της έλλειψης των παραγόντων προ-επιβίωσης ή παρουσία αναστολέων ανάπτυξης. Οι

ποντίκια LPP1 ΚΟ χαρακτηρίζεται ως έχουσα αυξημένα επίπεδα πλάσματος και LPA μειωμένο κύκλο εργασιών LPA [23]. LPA διεγείρει πολλές πτυχές του καρκίνου των ωοθηκών κυτταρικής βιολογίας συμπεριλαμβανομένων πολλαπλασιασμό, την επιβίωση, τη μετανάστευση και εισβολή [2,4]. Πράγματι, παρατηρήσαμε μια αύξηση στην mesothelial εισβολή και όγκου σπορά λίγο μετά την έναρξη του όγκου σε ποντίκια LPP1 ΚΟ. LPA έχει αναφερθεί ότι διεγείρει μεσοθηλιακών εισβολή σε μοντέλα καλλιέργειας κυττάρων [13] και

in vivo

[22], αν και ένας μηχανισμός δεν έχει οριστεί. Προηγουμένως, δείξαμε ένα ρόλο για VCAM-1 εκφράζεται επί της mesothelium στη ρύθμιση της εισβολής καρκίνου των ωοθηκών in vitro και in vivo [26]. Είναι ενδιαφέρον, LPP1 ΚΟ ποντικοί είχαν μια υψηλότερη συχνότητα των μεσοθηλιακών έκφρασης VCAM-1 που προσφέρει τη δυνατότητα ότι το ΙΡΑ ενδέχεται να ρυθμίζουν την έκφραση VCAM-1 για την προώθηση της μεσοθηλιακών εισβολή. Πρόσθετες μελέτες είναι απαραίτητες για να διαπιστωθεί αν αυτή είναι η περίπτωση.

Ενώ LPP1 KO ποντίκια έχουν αυξημένη σπορά του όγκου με την παρουσία αυξημένων επιπέδων και μείωση του κύκλου εργασιών του ΙΡΑ, μετέπειτα ανάπτυξη του όγκου καχεκτική και συνοδεύεται από αυξημένη απόπτωση, μια αποτέλεσμα που έρχεται σε αντίθεση με καθιερωμένη υπέρ της ανάπτυξης, τα αποτελέσματα προ-επιβίωση της ΕΡΑ. Οι μηχανισμοί με τους οποίους η απώλεια του LPP1 στο μικροπεριβάλλον του όγκου σταματά την ανάπτυξη του όγκου είναι ασαφείς. Μια πιθανότητα είναι ότι αυξημένα LPA, ως αποτέλεσμα της ανεπάρκειας LPP1 επηρεάζει άλλα κυτταρικά συστατικά του μικροπεριβάλλον του όγκου να επηρεάζει αρνητικά την ανάπτυξη του όγκου. Το μικροπεριβάλλον του όγκου περιέχει ένα πολύπλοκο μίγμα κυτοκίνες, αυξητικούς παράγοντες και πολλαπλούς τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των ενδοθηλιακών κυττάρων και του ανοσοποιητικού που λειτουργούν μαζί για την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου [28]. Ενώ η αυξημένη απόπτωση σε όγκους από ποντικούς LPP1 ΚΟ θα μπορούσε να οφείλεται στην έλλειψη παροχή θρεπτικών συστατικών στον όγκο, παρατηρήσαμε καμία ατέλεια στην αγγειογένεση. LPA έχει αναφερθεί ότι διεγείρει τη μετανάστευση και την επιβίωση των μακροφάγων [29-31], να διευκολύνει μετανάστευση των λεμφοκυττάρων [29,32] και αναστέλλει την κυτταροτοξική δραστικότητα των κυττάρων Τ και ΝΚ κυττάρων [33,34], τα οποία θα αναμένεται να την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου. Βρήκαμε καμία διαφορά στους αριθμούς των μακροφάγων ή λεμφοκυττάρων (Β, Τ και ΝΚ) σε όγκους από άγριου τύπου και LPP1 ΚΟ ποντικούς (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ωστόσο, είναι πιθανό ότι οι όγκοι από ποντικούς LPP1 ΚΟ έχουν διαφορετικά υποσύνολα ανοσοκυττάρων (δηλαδή, η έλλειψη των προ-καρκινικών ή υπερεκπροσώπηση των αντι-όγκου) και /ή αλλαγμένη ρύθμιση της δράσης τους.

Οι συνέπειες απώλειας LPP1 στην αύξηση του όγκου θα μπορούσε να οφείλεται σε μεταβολές στο μεταβολισμό άλλων φωσφογλυκερίδια. Εκτός από LPA, LPP1 δρα σε άλλα φωσφογλυκερίδια συμπεριλαμβανομένων φωσφατιδικό οξύ και 1-φωσφορικής σφιγγοσίνης (S1P) [35], η οποία σε υψηλές συγκεντρώσεις προκαλεί θάνατο των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών [36]. Ωστόσο, παρατηρήθηκαν διαφορές στη συγκέντρωση στο πλάσμα S1P μεταξύ άγριου τύπου και LPP1 ΚΟ ποντικούς (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η συγκέντρωση των άλλων φωσφογλυκερίδια δεν έχει μετρηθεί. Είναι σημαντικό να λάβουμε υπόψη ότι ο κύκλος εργασιών του ΙΡΑ ή /και άλλα φωσφογλυκερίδια μπορεί να είναι εξίσου σημαντική με την απόλυτη συγκέντρωση τους.

Μαζί, τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ δείχνουν ότι η απώλεια των LPP1 δημιουργεί ένα περιβάλλον ανεπαρκή για να υποστηρίξουν την ανάπτυξη του όγκου . Εξωγενής παροχή υψηλότερων συγκεντρώσεων του ΙΡΑ ήταν σε θέση να ξεπεράσει την ανασταλτική περιβάλλοντος για την τόνωση της ανάπτυξης των όγκων και μειώνει την απόπτωση αποδεικνύουν ότι το ΙΡΑ διεγείρει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων ανεξάρτητα από τις πιθανές αρνητικές επιπτώσεις που δημιουργούνται από την απώλεια της έκφρασης LPP1. Περαιτέρω έρευνα των μηχανισμών (συμπεριλαμβανομένων των δυνητικών κυτταρικούς στόχους) αρμόδια για μειωμένη ανάπτυξη του όγκου σε απουσία LPP1 θα παρέχει πρόσθετες σημαντικές πληροφορίες σχετικά με τις επιδράσεις του φωσφογλυκερίδια και του μεταβολισμού τους στο μικροπεριβάλλον του όγκου καθώς και οι συνιστώσες εντός του μικροπεριβάλλοντος που θα μπορούσε να είναι σημαντική σε προώθηση της εξέλιξης του καρκίνου των ωοθηκών.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. Χαρακτηρισμός των όγκων και VCAM-1 έκφρασης σε LPP1 ΚΟ και τα ποντίκια άγριου τύπου 2 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου.

(Α) Αδένες απομακρύνθηκαν και ζυγίστηκαν 2 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου από άγριου τύπου και ποντίκια LPP1 ΚΟ. Κάθε σημείο δείχνει ένα μεμονωμένο άτομο, και τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± std σφάλουν. (Β) Η &? Ε τομές του επίπλουν αξιολογήθηκαν για μικροσκοπική όγκων και την έκταση της εισβολής. Τα βέλη δείχνουν την mesothelium? αιχμές βελών δείχνουν όγκου. Μη επεμβατική όγκοι χαρακτηρίζονται ως έχοντα μια ομαλή διεπαφή μεταξύ του όγκου και του υποκείμενου ιστού. Επιθετικοί όγκοι βαθμολογήθηκαν ως εκείνοι spidering μέσω και αναλαμβάνοντας τον υποκείμενο ιστό, σε αυτή την περίπτωση, επίπλουν λίπος. (Γ) Αδένες από άγριου τύπου (επάνω πάνελ) και LPP1 ΚΟ (κάτω πάνελ) ελήφθησαν ποντίκια 2 εβδομάδες μετά την έναρξη του όγκου και χρωματίστηκαν για έκφραση VCAM-1 χρησιμοποιώντας IHC (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι). Αντιπροσωπευτικές εικόνες απεικονίζουν την mesothelium (βέλη) και θετική χρώση VCAM-1 (αιχμές βελών) στους ποντικούς ΚΟ LPP1 με την έλλειψη του VCAM-1 αντιδραστικότητα στο mesothelium του άγριου τύπου ποντικών

doi:. 10.1371 /journal.pone.0120071 .s001

(ΔΕΘ)

S2 Εικ. . Αντιπροσωπευτικές εικόνες της δοκιμασίας βύσματος Matrigel

Αντιπροσωπευτικές εικόνες των CD31 θετικών αγγείων (υποδεικνύεται από τα βέλη) σε βύσματα Matrigel που περιέχει ρυθμισμένο μέσο από κύτταρα ID8ip2Luc (Α) ή FGF /VEGF (Β) εμφανίζονται

doi:. 10.1371 /journal.pone.0120071.s002

(ΔΕΘ)