Αφηρημένο

Καρκίνος στομάχου (GC) παραμένει μια σημαντική αιτία νοσηρότητας και θνησιμότητας σε όλο τον κόσμο και υπάρχει επομένως σαφής ανάγκη να ψάξετε πιο ευαίσθητα στις αρχές διαγνωστικών βιοδεικτών. Πραγματοποιήσαμε μια συστηματική ανασκόπηση των οκτώ δημοσιεύονται προφίλ μελέτες miRNA που συνέκριναν ιστούς GC με παρακείμενες noncancerous ιστούς. Ένα σύστημα κατάταξης miRNA χρησιμοποιήθηκε που πήρε τη συχνότητα των συγκρίσεων, την κατεύθυνση της διαφορικής έκφρασης και το συνολικό μέγεθος του δείγματος υπόψη. Έχουμε εντοπίσει πέντε miRNAs που αναφέρθηκαν πιο σταθερά να ρυθμίζεται προς τα πάνω (miR-21, miR-106b, miR-17, miR-18a και miR-20a) και δύο miRNAs που ρυθμίζεται προς τα κάτω (miR-378 και miR-638). Έξι από αυτά περαιτέρω επικυρωθεί σε 32 ζεύγη σύνολα GC και γειτονικών δειγμάτων noncancerous ιστού χρησιμοποιώντας PCR πραγματικού χρόνου. MiR-21, miR-106b, miR-17, miR-18a και miR-20a επιβεβαιώθηκαν να είναι upregulatedin ιστούς GC, ενώ η έκφραση του miR-378 μειώθηκε. Επιπλέον, βρήκαμε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του miR-21, miR-106b, miR-17, miR-18a και miR-20a και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά του GC. Αυτά τα miRNAs μπορούν να χρησιμοποιηθούν για διαγνωστικούς ή /και προγνωστικούς βιοδείκτες για GC και συνεπώς δικαιολογούν την περαιτέρω έρευνα

Παράθεση:. Wang J-L, Χου Υ, Κονγκ Χ, Wang Ζ-Η, Chen Η-Υ, Xu J, et al. (2013) Υποψήφιος microRNA Biomarkers σε ανθρώπινα καρκινικά γαστρική: Μια συστηματική ανασκόπηση και επικύρωση Μελέτη. PLoS ONE 8 (9): e73683. doi: 10.1371 /journal.pone.0073683

Συντάκτης: William CS. Cho, Queen Elizabeth Hospital, το Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: May 16, 2013? Αποδεκτές: 19, Ιουλίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 9 Σεπτεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών του Key Πρόγραμμα (Νο 30830055), το Υπουργείο Δημόσιας Υγείας, Κίνα (Νο 200802094), το Υπουργείο Παιδείας (Αρ 20090073110077) για να Fang JY, και το Ίδρυμα γιατρός Καινοτομίας της Σαγκάης Jiao Tong-Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου (Αρ BXJ201219) με τον Wang JL. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Παρά την πρόσφατη μείωση στη συχνότητα εμφάνισης γαστρικού καρκίνου (GC) [1], παραμένει ένα μείζον αίτιο νοσηρότητας και θνησιμότητας παγκοσμίως, ιδίως στην Ανατολική Ασία. Συνολικά ένα εκατομμύριο νέα κρούσματα της GC συνέβη το 2008, με 738.000 θανάτους [2]. Αυτό αντιπροσωπεύει το 8% των συνολικών περιπτώσεων καρκίνου και το 10% του συνόλου των θανάτων. Αν και η ενδοσκόπηση μπορεί να ανιχνεύσει τα πρώτα στάδια της GC, οι περισσότερες περιπτώσεις εξακολουθούν να διαγνωσθεί σε προχωρημένο στάδιο, η οποία οδηγεί σε κακή πρόγνωση [3]. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για τις περιπτώσεις GC με το στάδιο κυμαίνεται II από 30% έως 50%, αλλά μειώνεται σε μεταξύ 10% και 25% για τους ασθενείς με σταδίου III ασθένεια [4]. Αν και οι ενδοσκοπικές τεχνικές αναπτύσσονται με ταχείς ρυθμούς, η αξία τους για την έγκαιρη ανίχνευση του GC είναι περιορισμένη λόγω της έλλειψης ευαισθησίας, το υψηλό κόστος και την ταλαιπωρία. Νέες διαγνωστικές και προγνωστικές βιοδεικτών για GC ως εκ τούτου, απαιτούνται επειγόντως.

Τα microRNAs (miRNA) είναι μόρια RNA μικρή μη κωδικοποιητική των 19-25 nt. Ρυθμίζουν την έκφραση του γονιδίου στο μετα-μεταφραστικό επίπεδο με την καθοδήγηση της RNA επαγόμενη σύμπλεγμα σίγησης να θέσεις στόχους miRNA στην 3 ‘αμετάφραστη περιοχή του mRNA, οδηγώντας σε υποβάθμιση του mRNA ή της αναστολής της μετάφρασης [5]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι πολυάριθμα miRNAs έχουν παρεκκλίνοντα εκφράζονται σε πολλά είδη καρκίνων, και προφίλ έκφρασης miRNA έχει δείξει ορισμένα miRNAs να σχετίζεται με την ανάπτυξη όγκου, την πρόοδο και την απόκριση στη θεραπεία. Επομένως, είναι καλοί υποψήφιοι για χρήση ως διαγνωστικά, προγνωστικά και προγνωστικά βιοδεικτών [6].

Αρκετές μελέτες έχουν διεξαχθεί για να ψάξετε βιοδείκτες με τον προσδιορισμό της διαφορικής έκφρασης των miRNAs μεταξύ των δειγμάτων ιστού GC και τα αντίστοιχα γαστρικό μη-όγκου ιστός από τον ίδιο ασθενή [7] – [14]. Οι μελέτες αυτές οδήγησαν στην ταυτοποίηση εκατοντάδων διαφορικά εκφρασμένων miRNAs. Ωστόσο, πολλές από αυτές είναι πιθανό να είναι ψευδώς θετικά, και μόνο ένα μικρό κλάσμα θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως διαγνωστικός ή προγνωστικός βιοδείκτες. Μια λογική προσέγγιση για να διακρίνουμε σημαντικές miRNAs από ένα μεγάλο αριθμό των καταλόγων υποψηφίων miRNA είναι να ψάξει για τη διασταύρωση των miRNAs εντοπιστεί σε πολλές ανεξάρτητες μελέτες [15]. Αν και αυτή η μέθοδος έχει γίνει αύξηση δημοφιλής [15], [16], [17], δεν υπάρχει δημοσιευμένη μελέτη έχει προσδιορίσει τις διασταυρώσεις των miRNAs GC που σχετίζονται βασίζεται σε ένα μεγάλο αριθμό έκφρασης προφίλ μελέτες miRNA.

Διενεργήσαμε αυτή η συστηματική αναθεώρηση για να εντοπίσει τις πιο σημαντικές διαφορικά εκφρασμένων miRNAs που έχουν αναφερθεί με συνέπεια σε μια σειρά μελετών προφίλ ανεξάρτητη έκφραση των miRNAs σε ασθενείς GC. Επιπλέον, περαιτέρω επικυρωθεί κάποια από τα miRNAs που ήταν πιο απότομη ανωφέρεια ή μειωτικά χρησιμοποιώντας PCR πραγματικού χρόνου σε 32 ζεύγη GC και συμφωνημένα γειτονικών δειγμάτων μη καρκινικό ιστό.

Υλικά και Μέθοδοι

ηθική Δήλωση

Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Σαγκάης Jiaotong University School of Medicine, και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς κατά την έναρξη της μελέτης.

στρατηγική Αναζήτηση

Πιθανές μελέτες που δημοσιεύθηκαν στα αγγλικά συλλέχθηκαν από Medline χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες λέξεις-κλειδιά: «miRNA ‘OR’ microRNA ‘OR’ miR», «γαστρικό ‘OR’ το στομάχι», «προφίλ» Ή «μικροσυστοιχία». Καταλόγους των αναφορών των άρθρων ανασκόπησης και πρωτότυπα άρθρα αναζητήθηκαν με το χέρι για πρόσθετες εκδόσεις.

Ένταξη Κριτήρια της Λογοτεχνίας

Για μια μελέτη που πρέπει να περιλαμβάνονται σε αυτή την συστηματική ανασκόπηση, διάφορα κριτήρια πρέπει να πληρούνται : 1) μελέτες έπρεπε να είναι miRNA προφίλ μελέτες σε ασθενείς GC? 2) μελέτες έπρεπε να χρησιμοποιήσει ιστούς GC και τα αντίστοιχα γειτονικά μη καρκινικούς ιστούς τους για σύγκριση? 3) Οι μέθοδοι έπρεπε να περιλαμβάνουν τεχνικές μικροσυστοιχιών miRNA. Επιπλέον, συμπεριλήφθηκαν μόνο δημοσιεύσεις πλήρους κειμένου στα αγγλικά. δεν περιελήφθησαν Τα προφίλ μελέτες που χρησιμοποίησαν GC κυτταρικές γραμμές ή δείγματα ορού από ασθενείς GC, εκείνα τα οποία συγκρίθηκαν βιοψίες GC από όγκους με διαφορετικά στάδια της νόσου, και εκείνα που χρησιμοποιούνται διαφορετικές τεχνολογίες miRNA. άρθρα ανασκόπησης, δεν περιλαμβάνονταν επίσης σε αυτή την συστηματική επανεξέταση.

Εξαγωγή δεδομένων και λίστες των miRNA

διαφορικά εκφράζονται miRNAs εντοπίστηκαν από κάθε περιλαμβάνεται μελέτη των χαρακτηριστικών. Σχετικές πληροφορίες προσδιορίστηκε (δηλαδή, χρωμοσωμική θέση, προ-miRNA μήκους, ώριμη ακολουθία miRNA και πιθανοί στόχοι του miRNAs), και πληροφορίες που λείπουν εντοπίστηκε από τη βάση δεδομένων miRBase (www. Mirbase.org/) και Pubmed.

Κατάταξη

Κάθε περιλαμβάνεται μελέτη των χαρακτηριστικών [7] – [14] παρέχεται μια λίστα με τα διαφορικά εκφρασμένων miRNAs (Πίνακας S1). Griffith και Chan επινόησε μια μέθοδο για να κατατάξουν το δυναμικό μοριακοί βιοδείκτες για τις ομάδες σύγκρισης [16], [17], το οποίο έχει χρησιμοποιηθεί για miRNA προφίλ μελέτες. Για παράδειγμα, Ma et al. [15] προσδιόρισε τις διασταυρώσεις του παχέος miRNAs σχετίζονται με τον καρκίνο βασίζεται σε ένα μεγάλο αριθμό μελετών προφίλ miRNA. Έτσι, τα κριτήρια για την βιβλιογραφία περιλαμβάνονται σε αυτήν την τρέχουσα συστηματική ανασκόπηση βασίστηκαν σε εκείνες στις εκθέσεις τους [15]. MiRNAs κατατάχθηκαν στις κριτηρίων με την ακόλουθη σειρά σπουδαιότητας: (i) το miRNA αναφέρθηκε συνέπεια ως διαφορικά εκφρασμένων σε μια συνεπή κατεύθυνση της αλλαγής? (Ii) η συχνότητα του miRNA αναφέρθηκε στις μελέτες μικροσυστοιχίας? (Iii) το συνολικό μέγεθος του δείγματος για κάθε συνεπή αναφερθεί miRNAs.

Επικύρωση των miRNAs Χρησιμοποιώντας Real Time PCR

Για να επικυρώσετε τα προφίλ αποτελέσματα, 32 φρέσκα ιστούς GC και σε συνδυασμό γαστρικό μη όγκου τους ιστοί ελήφθησαν από το Νοσοκομείο Renji, συνδεδεμένες με τη Σαγκάη Πανεπιστήμιο Jiaotong της Ιατρικής Σχολής. Ολικό RNA εξήχθη από 32 ζεύγη ταιριαστών δειγμάτων ανθρώπινης GC (συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου και των παρακείμενων ιστών noncancerous) χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen). Η συγκέντρωση RNA και η καθαρότητα μετρήθηκε χρησιμοποιώντας Nanodrop ND-2000, και η μέθοδος μέτρησης υπεριώδους απορρόφησης εφαρμόσθηκε για την ανίχνευση της καθαρότητας του RNA, μόνο εκείνοι A260 /A280 βρίσκεται ανάμεσα 1,80-2,00, και Α260 /A230 & gt? 1,7, χρησιμοποιήθηκαν για το τελικό πείραμα, διαφορετικά το RNA πρέπει να εξαχθεί εκ νέου. Η αντίστροφη μεταγραφή από 3 μg RNA έγινε usingAll-in-OneTM First-Strand cDNA Synthesis Kit (Genecopoeia, Guangzhou, Κίνα), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Εν συντομία, το έτοιμο διάλυμα της αντίδρασης μεταγραφής αντίστροφης RNA επωάστηκε στους 37 ° C για 60 λεπτά και τερματίστηκαν στους 85 ° C για 5 λεπτά, και στη συνέχεια αποθηκεύεται στους -20 ° C για περαιτέρω ανάλυση. Ποσοτική PCR (qPCR) εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας ένα ΑΒΙ Prism 7900HT Σύστημα Ανίχνευσης Αλληλουχίας (Applied Biosystems, USA) με SYBR Προμίγμα Εχ Taq II (Takara). Οι εκκινητές (miR-21-5p, miR-106b-5P, miR-17-5p, miR-18a-5P, miR-20a-5P και miR-378-5p), συμπεριλαμβανομένων U6 ελήφθησαν από Genecopoeia (Guangzhou, Κίνα) . Ποσοτικοποίηση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το 2 -ΔΔCT μέθοδο και παρουσιάζεται ως ομαλοποιηθεί μοτίβο.

Στατιστική Ανάλυση

Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας SAS 9.2 λογισμικό (SAS Institute Inc. USA). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD. t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση τιμών μεταξύ δύο ανεξάρτητες ομάδες.

Αποτελέσματα

Λογοτεχνία Επιλογή και μελετήσει τα χαρακτηριστικά

Ένα σύνολο από 104 μελέτες αναζήτηση σε PubMed με τη χρησιμοποίηση αναζήτησης στρατηγικής, 73 εκ των οποίων είχαν αποκλειστεί μετά τη διαλογή τους τίτλους και περιλήψεις. 23 μελέτες αποκλείστηκαν μετά την ανάγνωση του πλήρους κειμένου. Μόνο οκτώ μελέτες είχαν τελικά συμπεριληφθεί σε αυτήν την συστηματική ανασκόπηση. Η λεπτομερής επιλογή μελέτη φαίνεται στο Σχήμα 1. Οι λεπτομερείς χαρακτηριστικά της κάθε μελέτης δίνονται στον Πίνακα 1.

Η

διαφορικά εκφρασμένων miRNAs

Ένα σύνολο 223 διαφορικά εκφρασμένων miRNAs αναφέρθηκαν στις οκτώ μελέτες μικροσυστοιχιών (διαφορικά εκφράζεται miRNAs σε κάθε μελέτη λεπτομερώς στον πίνακα S1)? 124 ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε GC, και 99 ρυθμίζεται προς τα κάτω. Μεταξύ των 223 διαφορικά εκφρασμένων miRNAs, 48 ​​αναφέρθηκαν σε τουλάχιστον δύο μελέτες? 39 (81,3%) είχαν μια σταθερή κατεύθυνση και εννέα (18,7%) είχαν ασυνεπής κατεύθυνση αλλοιωμένη έκφραση. Μεταξύ των πρώην 39, 20 ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω σε GC, και 19 ρυθμίζεται προς τα κάτω. Τρία από αυτά τα miRNAs αναφέρθηκαν σε πέντε μελέτες μικροσυστοιχιών (miR-21, miR-106b και miR-378), τέσσερις αναφέρθηκαν σε τέσσερις μελέτες (miR-17, miR-18a, miR-20a και miR-638), και επτά αναφέρθηκαν σε τρεις μελέτες (miR-19a, miR-20b, miR-25, miR-30D, miR-923, miR-375 και miR-148a). Οι χρωμοσωμικές θέσεις τους, προ-miRNA μήκη, ώριμες ακολουθίες και οι πιθανοί στόχοι που παρατίθενται στους Πίνακες 2-4.

Η

Η

Επικύρωση των επιλεγμένων miRNAs σε GC ασθενείς

Για να επικυρώσετε την έκφραση των έξι πιο σταθερά αναφερθεί miRNAs (miR-21, miR-106b, miR-17, miR-18a, miR-20a και miR-378), η έκφραση αυτών των miRNAs σε βιοψίες GC και δίπλα noncancerous ιστοί συγκρίθηκαν σε 32 περιπτώσεις GC χρησιμοποιώντας PCR πραγματικού χρόνου. Οι πρώτες τιμές Ct των έξι miRNAs φαίνονται στον Πίνακα αποτελεσμάτων S2.The έδειξαν ότι το miR-378 ήταν προς τα κάτω σε ιστούς GC, ενώ οι άλλες πέντε miRNAs (miR-21, miR-106b, miR-17, miR-18a και miR -20a) έχουν προς τα πάνω ρυθμισμένη σε GC (Σχήμα 2). Τα αποτελέσματά μας συμφωνούν με εκείνα των αρχικών μελετών προφίλ. Επιπλέον, διερευνήσαμε τη σχέση μεταξύ της έκφρασης αυτών των miRNAs με τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά του GC. Βρήκαμε ότι η έκφραση του miR-21 ήταν σημαντικά υψηλότερο στις περιπτώσεις των περιπτώσεων GC με τα μεγαλύτερα μεγέθη όγκου (≥8 cm), η κακή διαφοροποίηση και μετάσταση με εμπλοκή λεμφαδένων και αργότερα στάδιο της νόσου. MiR-106β, miR-17 και των επιπέδων του miR-18a ήταν σημαντικά υψηλότερη σε πτωχά διαφοροποιημένο GC, περιπτώσεις με τη συμμετοχή λεμφαδένων, ή νόσο προχωρημένο στάδιο, ενώ τα επίπεδα του miR-20a ήταν σημαντικά υψηλότερα σε περιπτώσεις GC με συμμετοχή των λεμφαδένων. Ωστόσο, καμία σχέση δεν βρέθηκε μεταξύ της έκφρασης του miR-378 και τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του GC. Τα αποτελέσματα αυτά αναλύονται στον Πίνακα 5.

Χρησιμοποιώντας U6 ως μάρτυρας κανονικοποίηση, η έκφραση του miR-21, miR-106b, miR-17, miR-18a και miR-20a ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς GC, ενώ η έκφραση του miR-378 ήταν σημαντικά χαμηλότερη.

η

Συζήτηση

μελέτες μικροσυστοιχιών miRNA παρέχουν ποσότητες πληροφοριών, αλλά ένα κοινό μειονέκτημα είναι η έλλειψη συνοχής μεταξύ των διαφορετικών μελετών . Σύμφωνα με τις εκθέσεις του Griffith et al. και Chan et al. [16], [17], μια λογική λύση σε αυτό το πρόβλημα θα ήταν να καθοριστεί η συνοχή μεταξύ των διαφόρων μελετών που χρησιμοποιούνται διαφορετικές πλατφόρμες μικροσυστοιχιών. Αρκετές συστηματικές ανασκοπήσεις [15] – [17] έχουν χρησιμοποιήσει αυτή τη μέθοδο για τον προσδιορισμό διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων ή miRNAs σε διάφορες νοσηρές καταστάσεις. Εφαρμόζοντας μια παρόμοια μέθοδο, παρατηρήσαμε ότι συνολικά 48 διαφορικά εκφρασμένων miRNAs αναφέρθηκαν σε τουλάχιστον δύο ανεξάρτητες μελέτες μεταξύ των οκτώ GC miRNA μελέτες προφίλ [7] – [14]. Μεταξύ αυτών, 39 miRNAs έχουν αναφερθεί να μεταβληθεί σε μια συνεπή κατεύθυνση, ενώ τα ευρήματα για εννέα ήταν ασυνεπής. Μεταξύ των 39 miRNAs που είχαν σταθερές αλλαγές, 20 miRNAs ήταν ρυθμισμένη προς τα πάνω με συνέπεια σε GC σε σύγκριση με μη καρκινικό γαστρικό ιστό, και 19 ρυθμίστηκαν προς τα κάτω σταθερά στο GC. Έχουμε εντοπίσει τα πέντε miRNAs που απορυθμίζεται πιο σταθερά (miR-21, miR-106a, miR-17, miR-18a και miR-20a) και δύο πιο σταθερά μειωτικά (miR-378 και miR-638) σε τουλάχιστον τέσσερα προφίλ σπουδές. Στη συνέχεια, θα επικυρωθούν αυτά τα ευρήματα, χρησιμοποιώντας σε πραγματικό χρόνο PCR, η οποία ενισχύεται περαιτέρω τα ευρήματα αυτής της συστηματικής επανεξέτασης. Έχουμε καθορίζεται επίσης ότι η έκφραση αυτών των miRNAs συσχετίζονται με τις κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του GC, που πρότεινε ότι αυτά τα miRNAs μπορεί να είναι χρήσιμα ως βιοδείκτες για GC.

Ένα από τα πιο σταθερά αναφερθεί απορυθμίζεται miRNA σε συστηματική ανασκόπηση μας ήταν miR -21, η οποία έχει αλλοιωμένη έκφραση και ογκογόνο δράση σε διαφορετικούς ανθρώπινους καρκίνους. Cui et al. [18] έδειξαν ότι η έκφραση του miR-21 ήταν σημαντικά υψηλότερο σε ιστό GC σε σχέση με παρακείμενο φυσιολογικό ιστό. Η έκφραση του miR-21 έχει επίσης βρεθεί να είναι υψηλότερη σε ασθενείς με GC με λεμφαδένα μετάσταση από εκείνους που δεν, και επίσης συσχετίστηκε σημαντικά με τον ιστολογικό τύπο του όγκου και το στάδιο pTNM [19], το οποίο επικυρώνεται από τη μελέτη μας. Επιπλέον, υψηλότερα επίπεδα έκφρασης του miR-21 προβλέπεται κακή επιβίωση σε ασθενείς με GC [19]. Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι miR-21 μπορεί να προάγει τον πολλαπλασιασμό του όγκου και εισβολή σε GC με την καταστολή της έκφρασης του ΡΤΕΝ ή PDCD4 [20], [21]. Επιπλέον, προηγούμενες μελέτες έχουν επίσης αποκαλύψει ογκογόνο δραστικότητα του miR-21 σε καρκίνο του παχέος εντέρου [22], του καρκίνου του μαστού [23] και καρκίνο του οισοφάγου [24].

MiR-106b αναφέρθηκε επίσης με συνέπεια ως προς τα πάνω ρυθμισμένη σε miRNA ιστός GC με αυτό και προηγούμενες μελέτες [14], [25]. Η υψηλή έκφραση του miR-106b έχει προηγουμένως συνδέονται με λεμφαδένα μετάσταση [25], [26], και αυτό επικυρώθηκε στη μελέτη μας. Kim et al. [27] διαπίστωσε ότι το miR-106b μπορεί να ασκήσει ογκογόνο δράση της με την καταστολή της έκφρασης p21 σε GC. MiR-106b θα μπορούσε να προκαλέσει επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) και ενός όγκου έναρξη φαινοτύπου των κυττάρων στον καρκίνο του μαστού στοχεύοντας Smad7 και Six1 και την ενεργοποίηση του ΤΟΡ-β σηματοδότηση [28]. Μπορεί επίσης να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε ανθρώπινο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα με προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης του APC [29].

MiR-17 έχει γνωρίσει ογκογόνο δραστικότητα σε ανθρώπους, και βρέθηκε να ρυθμίζεται προς τα πάνω σε 77.2% των δειγμάτων ιστού του GC σε σύγκριση με το γειτονικό φυσιολογικό γαστρικό ιστό. Προωθεί την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου και αναστέλλει την απόπτωση σε GC με ρ21 στόχευση και p53INP1 (πρωτεΐνη όγκου ρ53 προκαλούμενη πυρηνική πρωτεΐνη 1) [30]. Τα κυκλοφορούντα επίπεδα του miR-17 είναι αυξημένα σε ασθενείς GC, και η συγκέντρωση του miR-17 συνδέεται σημαντικά με το στάδιο ΤΝΜ και την ποιότητα του GC [31]. Ωστόσο, η μελέτη μας διαπίστωσε ότι η έκφραση του miR-17a ήταν υψηλότερη στις περιπτώσεις του GC χωρίς λεμφαδένα μετάσταση από εκείνους με εμπλοκή λεμφαδένων, η οποία μπορεί να ήταν μια συνέπεια του μικρού μεγέθους του δείγματος στη μελέτη μας. Η υψηλή έκφραση του miR-17 συσχετίστηκε σημαντικά με τα αποτελέσματα κακή επιβίωση [31]. Προηγούμενες μελέτες έχουν επίσης βρεθεί ότι το miR-17 έχει ογκογόνο δράση σε καρκίνο του παχέος εντέρου [32], ο καρκίνος του μαστού [33] και τον καρκίνο του παγκρέατος [34].

MiR-18α βρέθηκε να υπερεκφράζεται σε τέσσερις μελέτες σε αυτό το συστηματική ανασκόπηση, και είναι γνωστό ότι έχει ογκογόνο δραστικότητα σε ανθρώπους. Wu et al. [35] έδειξε ότι η έκφραση του miR-18a ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε ιστό GC σύγκριση με το κανονικό γαστρικό ιστό, και θα μπορούσε να στοχεύσει απευθείας PIAS3 (αναστολέας πρωτείνης ενεργοποιημένων μετατροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3) και συσχετίστηκε θετικά με τα επίπεδα του Σουρβιβίνης, Bcl-XL και c-myc. Επιπλέον, η ρύθμιση προς τα άνω του miR-18a έχει αναφερθεί σε ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα [36], του καρκίνου του παγκρέατος [37], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [38] και του καρκίνου του μαστού [39].

Mir-20α είναι μια άλλη miRNA με ογκογόνο δραστηριότητα, και βρέθηκε να ρυθμίζεται προς τα πάνω σε τέσσερις μελέτες σε αυτή την βιβλιογραφία. Έχει αποδειχθεί ότι το επίπεδο κυκλοφορίας του miR-20a είναι σημαντικά αυξημένο σε ασθενείς GC σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες, και αυτό συνδέεται σημαντικά με το στάδιο και το βαθμό του όγκου [31], [40]. Η μελέτη μας διαπίστωσε επίσης ότι το miR-20a ήταν σημαντικά αυξημένα στους ιστούς GC και ήταν σημαντικά σχετίζεται με μετάσταση στους λεμφαδένες. Επιπλέον, η ρύθμιση προς τα άνω του miR-20a έχει προηγουμένως βρεθεί σε καρκίνο του τραχήλου, τον καρκίνο του προστάτη και του καρκίνου των ωοθηκών, και αυτό θα μπορούσε να προωθήσει miRNA τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ή εισβολή αυτών των καρκίνων [41] – [43].

Η μειωτικά πιο σταθερά miRNA σε αυτή την συστηματική ανασκόπηση ήταν miR-378, το οποίο βρέθηκε να ρυθμίζεται προς τα κάτω σε πέντε μελέτες. MiR-378 έχει δειχθεί ότι έχουν αντι-ογκογόνο δραστικότητα σε ανθρώπους [44]. Η εξωγενής έκφραση του miR-378 καταστέλλει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων GC καταστέλλοντας CDK6 και VEGF σηματοδότησης [44]. Στη μελέτη μας, αν και βρήκαμε ότι η έκφραση του miR-378 ήταν προς τα κάτω σε ιστούς GC, καμία σχέση δεν βρέθηκε μεταξύ της έκφρασης του miR-378 και τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά του GC. Αυτό μπορεί να οφείλεται στο μικρό μέγεθος του δείγματος της μελέτης αυτής. Είναι, επίσης, αναφερθεί ότι miR-378 είναι σημαντικά προς τα κάτω σε καρκίνο του παχέος εντέρου, και μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο καταστολέα όγκου σε αυτού του καρκίνου [45]. Ωστόσο, άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι miR-378 μπορεί να έχει ογκογόνο δραστικότητα σε άλλους τύπους καρκίνου [46] – [49]. Ως εκ τούτου, ο ακριβής ρόλος του miR-378 στην καρκινογένεση πρέπει να διευκρινιστεί περαιτέρω.

Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ότι ορισμένες από τις υποψήφιες miRNAs που προσδιορίζονται στη μελέτη μας ήταν slso αναγνωριστεί ως βιοδείκτες ορού σε διάφορους καρκίνους. Για παράδειγμα, ορός miR-21 ήταν σημαντικά αυξημένα σε ορό από περιεγχειρητική αδενωμάτων και ορθοκολικό καρκίνο (CRC), και ήταν ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτη για CRC [50], [51]? Πλάσμα miR-106β, μαζί με miR-20a και miR-221 έχουν τη δυνατότητα ως νέων βιολογικών δεικτών για την έγκαιρη ανίχνευση του καρκίνου του στομάχου [40]? Κυκλοφορία του miR-17 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως νέα μη επιθετικά βιοδείκτη για ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα [52], γαστρικού καρκίνου [53] και CRC [54]? Ορός miR-18a μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως νέο βιοδείκτη στον καρκίνο του μαστού [55], ορθοκολικό καρκίνο [56], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [57], και τον καρκίνο του παγκρέατος [58]? Κυκλοφορούν miR-378 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βιοδείκτη σε νεφροκυτταρικό καρκίνωμα [59] και γαστρικού καρκίνου [60]. Αυτές οι μελέτες επιβεβαίωσαν περαιτέρω τη σημασία των αταξινόμητους miRNAs, και μπορεί να επεκτείνει το πεδίο εφαρμογής αυτών των miRNAs.

Εν κατακλείδι, η συστηματική μας ανασκόπηση προσδιόρισε πέντε απορυθμίζεται miRNAs (miR-21, miR-106b, miR-17, miR-18a και miR-20a) και ένα μειωτικά miRNA (miR-378) που είναι εν δυνάμει νέων βιολογικών δεικτών για GC. Αυτά τα miRNAs έχει αποδειχθεί ότι έχουν διαγνωστική ή /και προγνωστικός δυνατότητες για αυτόν τον καρκίνο και απαιτούν περαιτέρω έρευνα. Περαιτέρω μελέτες που επικεντρώνονται σε αυτά τα miRNAs θα βοηθήσει να καθορίσει ένα πάνελ των διαγνωστικών και προγνωστικών βιοδεικτών GC με τα κατάλληλα επίπεδα ευαισθησίας και ειδικότητας.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

διαφορικά εκφράζονται miRNAs που προσδιορίζονται σε κάθε περιλαμβάνεται μελέτη

doi:. 10.1371 /journal.pone.0073683.s001

(XLS)

Πίνακας S2.

Πρώτες Ct αξία των επιλεγμένων miRNAs

doi:. 10.1371 /journal.pone.0073683.s002

(XLS)

Πίνακα S3.

PRISMA Λίστα ελέγχου

doi:. 10.1371 /journal.pone.0073683.s003

(DOC)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε κυρία Wei-Φενγκ Qu για την εξαιρετική εκδοτική της εργασίας.