Αφηρημένο

Ιστορικό

Το ένα πέμπτο των ασθενών με φαινομενικά «ιάσιμη» πορογενές αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PDA) βιώνουν μια πρώιμη υποτροπή και το θάνατο, λαμβάνουν κανένα προσδιορίσιμο όφελος από μια μεγάλη επιχείρηση. Ορισμένοι ασθενείς με προχωρημένους όγκους στάδιο θεωρείται «ανεγχείρητο» από τα συμβατικά κριτήρια στάσης (π.χ. μετάσταση στο ήπαρ), ακόμα προχωρήσει σιγά-σιγά. Οι αποτελεσματικές βιοδείκτες που διαστρωμάτωση PDA με βάση την βιολογική συμπεριφορά που απαιτείται. Για να βοηθήσει τους ερευνητές να ταξινομήσετε μέσω του λαβυρίνθου των δεδομένων βιοδεικτών, μια επιτομή της ~2500 δημοσιεύθηκε υποψηφίων βιοδεικτών σε PDA συντάχθηκε (PLoS Med, 2009. 6 (4), σελ. E1000046).

Μέθοδοι και Ευρήματα

Με βάση αυτή τη συλλογή, κατασκευάσαμε ένα

επιβίωση των μικροσυστοιχιών ιστού

(ονομάζεται s-ΤΜΑ) αποτελούνται από βραχυπρόθεσμα (ειδική για τον καρκίνο θανάτου & lt? 12 μηνών, n = 58) και η μακροχρόνια επιζώντες (& gt? 30 μηνών, n = 79), οι οποίοι υποβλήθηκαν σε εκτομή για PDA (σύνολο, n = 137). Οι λειτουργίες s-ΤΜΑ ως ένα βιολογικό φίλτρο για τον εντοπισμό των καλόπιστων προγνωστικοί δείκτες που σχετίζονται με ακραίες ομάδα επιβίωση (τουλάχιστον 18 μήνες ξεχωριστές ομάδες επιβίωσης). Βασίζεται σε μια αυστηρή διαδικασία επιλογής, 13 υποτιθέμενο βιοδείκτες PDA εντοπίστηκαν από το αποθετήριο δημόσια βιοδεικτών. Οι υποψήφιοι εξετάστηκαν κατά της s-TMA με ανοσοϊστοχημεία να εντοπίσει τα καλύτερα δείκτες της βιολογίας των όγκων. Σε ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο, MUC1 (λόγος πιθανοτήτων, OR = 28.95, 3+ εναντίον αρνητική έκφραση, p = 0,004) και MSLN (OR = 12,47, 3+ εναντίον αρνητική έκφραση, p = 0,01) ήταν άκρως προγνωστική της πρόωρης καρκινογόνες συγκεκριμένες θάνατο. Συγκριτικά, παθολογικές παράγοντες (μέγεθος, μεταστάσεις στους λεμφαδένες, το καθεστώς περιθωρίου εκτομή, και βαθμού) είχε ΕΑΠ κάτω των τριών, και καμία δεν ήταν στατιστικά σημαντική. καμπύλες ROC χρησιμοποιήθηκαν για να συγκρίνουν τις τέσσερις παθολογικές προγνωστικά χαρακτηριστικά (περιοχή ROC = 0,70) σε τρία μονοπαραγοντική μοριακών προγνωστικών (MUC1, MSLN, MUC2) της ομάδας επιβίωσης (περιοχή ROC = 0.80, p = 0.07).

Συμπεράσματα

MUC1 και MSLN ήταν ανώτερη από παθολογικά χαρακτηριστικά και άλλες υποθετικές βιοδεικτών ως πρόβλεψη ομάδα επιβίωσης. Μοριακή αναλύσεις σύγκριση καρκίνους από βραχυχρόνια και μακροχρόνια επιζώντες είναι μια αποτελεσματική στρατηγική για τον έλεγχο βιοδεικτών και να ιεραρχηθούν τα γονίδια του καρκίνου του υποψηφίου για διαγνωστικές και θεραπευτικές μελέτες

Παράθεση:. Winter JM, Tang LH, Klimstra DS, Brennan MF, Brody JR, Rocha FG, et al. (2012) A Novel Επιβίωση-Based ιστών μικροσυστοιχιών του καρκίνο του παγκρέατος Επικυρώνει MUC1 και Mesothelin ως βιοδείκτες. PLoS ONE 7 (7): e40157. doi: 10.1371 /journal.pone.0040157

Επιμέλεια: Frederic Andre, Πανεπιστήμιο Aix-Marseille, Γαλλία

Ελήφθη: 14 Μαρ 2012? Δεκτές: 1, Ιουνίου 2012? Δημοσιεύθηκε: 6 του Ιουλ 2012

Copyright: © 2012 Winter et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Ταμείων για η μελέτη προήλθαν από U01 CA152653, PI Allen. Επιπλέον, τα κεφάλαια που παρέχονται από τον Marshall και Therese Ίδρυμα Sonenshine. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ενώ πόρου αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (PDA) είναι τυπικά επιθετικό σε σύγκριση με τις περισσότερες άλλες μορφές καρκίνου, η ασθένεια αποτελείται από ένα εύρος βιολογικών φαινοτύπων. Περίπου το 20% των ασθενών που υποβάλλονται σε εκτομή θα ζουν τουλάχιστον 5 χρόνια, και ένα παρόμοιο ποσοστό των ασθενών θα επαναληφθεί στις αρχές μετά την εκτομή και να πεθάνουν από τη νόσο μέσα σε ένα χρόνο [1] – [4]. Στο επίπεδο του γονιδιώματος, κάθε PDA αποκτά έναν μοναδικό αστερισμό σωματικών μεταλλάξεων [5]. Μοριακή ποικιλομορφία στα επίπεδα του RNA και πρωτεϊνών είναι ακόμη πιο περίπλοκη. Παρά την ποικιλομορφία γονοτυπική και φαινοτυπική στο PDA, δεν υπάρχουν αξιόπιστα ή κλινικά σημαντική προγνωστική βιολογικών δεικτών που διαστρωμάτωση της νόσου με βάση την προβλεπόμενη έκβαση.

εκθέσεις Παθολογίας περιλαμβάνει βασικές πληροφορίες σχετικά με το στάδιο και το βαθμό του όγκου, και επί του παρόντος παρέχουν η καλύτερη διαθέσιμη προγνωστικές πληροφορίες. Συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά παραμένουν η προγνωστική χρυσό πρότυπο (κατάσταση π.χ. λεμφαδένων και ιστολογικά βαθμού). Ωστόσο, σε πολλές μεγάλες μελέτες, προσαρμοσμένη αναλογίες κινδύνου για την παθολογική χαρακτηριστικά είναι κάτω από δύο [6] – [8]. Ομοίως, σε μια επικυρωμένη παγκρέατος νομογράφημα του καρκίνου, δυσμενείς παθολογικά χαρακτηριστικά συνεισφέρουν λιγότερο από το 10% με τις προβλέψεις της επιβίωσης 3 ετών [9]. Ορός CA19-9 είναι εξίσου περιορισμένη ως προγνωστικός δείκτης [10] – [12]. Προγνωστικές πληροφορίες με τέτοια ελάχιστη τιμή πρόβλεψης δεν μπορεί αξιόπιστα να ενημερώνουν τις αποφάσεις της θεραπείας. Επιπλέον, ένα πλήρες σύνολο των παθολογικών δεδομένων είναι διαθέσιμη μόνο για τους ασθενείς με εκτομή των καρκίνων, που περιλαμβάνουν μια μειοψηφία των ασθενών με PDA.

Η βελτιωμένη προγνωστική πληροφορία αποτελεί προτεραιότητα της έρευνας για τον καρκίνο. Κατ ‘αρχάς, ακριβή πρόγνωση ενημερώνει συζητήσεις μεταξύ ογκολόγων και των ασθενών σχετικά με τη φυσική ιστορία του καρκίνου του παγκρέατος. Δεύτερον, οι πληροφορίες που μπορεί να καθοδηγήσει θεραπευτικές αποφάσεις που έχουν επιπτώσεις τόσο στην ποιότητα της ζωής και του καρκίνου που σχετίζονται με τα αποτελέσματα. Οι πιο βιολογικώς επιθετικές PDAs (όπως αυτές που επαναλαμβάνονται σύντομα μετά την εκτομή) αντιμετωπίζονται καλύτερα αρχικά με συστηματική θεραπεία, σε αντίθεση με μείζονα χειρουργική επέμβαση. Παγκρέατος χειρουργική επέμβαση καθυστερεί συστηματική θεραπεία με τουλάχιστον 2 μήνες και εκθέτει τον ασθενή σε σημαντικό κίνδυνο λειτουργική με μικρή αναμενόμενο όφελος. Από την άλλη πλευρά, οι ασθενείς με βραδείας καρκίνους με oligometastatic ασθένεια μπορεί να ωφεληθούν από μια επιθετική χειρουργική προσέγγιση, όπως έχει γίνει πρότυπο περίθαλψης σε επιλεγμένους ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου [13]. Τρίτον, προγνωστικούς βιοδείκτες παρέχουν μηχανιστικές γνώσεις σχετικά με την ανάπτυξη του καρκίνου. Τέταρτον, χρησιμεύουν ως μοριακοί στόχοι για νέες θεραπευτικές στρατηγικές, όπως το εμβόλιο [14], το αντίσωμα [15], και γονιδιακές θεραπείες υποστηρικτής γνώμονα [16].

Υψηλή μελέτες επιπτώσεων με βάση τις εκατοντάδες των δειγμάτων ασθενών έχουν βελτιωθεί προγνωστικές ικανότητες σε πολλαπλούς τύπους καρκίνου (π.χ. των πνευμόνων, του προστάτη, του παχέος εντέρου, του μαστού και του) [17] – [20]. Μελέτες παρόμοιου μεγέθους και του πεδίου έχουν αποδειχθεί δύσκολο για τον καρκίνο του παγκρέατος, λόγω λιγότερο διαθέσιμο ιστών για τη μελέτη και λιγότερο βιολογική ετερογένεια μεταξύ των όγκων. Ίσως η πιο κατατοπιστική προγνωστική μελέτη μέχρι σήμερα σε PDA εντοπιστεί ένα πάνελ από 6 προγνωστικοί δείκτες με βάση τις διαφορές έκφρασης γονιδίου μεταξύ εντοπισμένου PDA και δείγματα αυτοψίας (n = 30) [21]. Η λογική πίσω από το σχεδιασμό της μελέτης ήταν ότι οι δύο ομάδες μελέτης εκπροσωπούνται διαφορετικές άκρες των άκρων PDA. Στην πραγματικότητα, οι ομάδες ήταν στην πραγματικότητα διακρίνεται από το στάδιο της νόσου (δηλ νωρίς vs αργά), σε αντίθεση με βιολογική συμπεριφορά (δηλ επιθετική vs βραδείας εξέλιξης). Η τοπική ομάδα είχε πραγματικά μια μέση επιβίωση της μόλις 9 μηνών, το οποίο θεωρείται ένα σύντομο χρονικό διάστημα επιβίωσης μετά εκτομή [6].

Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε ανοσοϊστοχημεία για να ανακρίνουν ένα διχοτομημένο σύνολο εκτομή PDAs ( n = 137) που αποτελείται αποκλειστικά από επιθετικό (επιβίωση & lt ειδική για τον καρκίνο? (επιβίωση & gt ειδική για τον καρκίνο 12 μήνες) και σχετικά λιγότερο επιθετική? 30 μήνες) καρκίνους, για την αληθινή πρόβλεψης της επιβίωσης. Μια ομάδα 13 υποσχόμενη βιοδεικτών PDA επιλέχθηκε από κυριολεκτικά χιλιάδες των δημοσιευμένων PDA υποψήφιων βιοσημειωτών χρησιμοποιώντας μια αυστηρή στρατηγική επιλογής (περιγράφεται λεπτομερώς παρακάτω), από μία δημόσια συλλογή του PDA βιοδείκτες (Σχήμα 1) [22]. Χρησιμοποιώντας αυτή την προσέγγιση, έχουμε μειωμένες 11 υποθετικών βιοδείκτες PDA ως προγνωστικοί δείκτες. Ωστόσο, δύο πρωτεΐνες, mesothelin (MSLN) και βλεννίνη 1, κυτταρική επιφάνεια συνδέονται (MUC1), ήταν ισχυρή πρόβλεψης της ομάδας επιβίωσης και ξεπέρασε τα συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά ως προγνωστικοί παράγοντες. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε την χρησιμότητα μιας μεγάλης κλίμακας, υψηλής απόδοσης ανοσοϊστοχημεία (IHC) με βάση προσδιορισμού των PDAs σε ακραίες επιβίωσης για τον εντοπισμό bona fide βιοδείκτες των επιθετικών βιολογία του καρκίνου.

Η

μέθοδοι

ασθενείς

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας ιδρύματος Memorial Sloan-Kettering, (MSKCC). Οι ασθενείς συμπεριλήφθηκαν εφόσον έχουν υποστεί μια παγκρέατος εκτομή για επεμβατικές σωληνωτό τύπου (συμβατικά) πορογενές αδενοκαρκίνωμα (PDA) μετά το έτος 2000, και είτε πέθαναν από τη νόσο μέσα σε 1 χρόνο από εκτομή (σύντομη επιβίωση) ή επέζησε τουλάχιστον 30 μήνες (μακρά επιβίωση) . Τα ειδικά όρια επιβίωσης επιλέχθηκαν για δύο λόγους: πρώτον, για να δώσει τις ομάδες που ήταν επαρκώς τροφοδοτημένο για την ανάλυση, αλλά είχαν συγκρίσιμα μεγέθη δείγματος σε κάθε άλλο? δευτερόλεπτα, έτσι ώστε ότι το χρονικό διάστημα μεταξύ των δύο ομάδων επιβίωσης (τουλάχιστον 1,5 έτη στην παρούσα μελέτη) τόνισε τη βιολογία του όγκου συναρτήσει του καθοριστικούς παράγοντες που σχετίζονται με τη θεραπεία της επιβίωσης. Για παράδειγμα, επικουρική θεραπεία παρέχει όφελος στην επιβίωση περίπου 3 μήνες για PDA [23], και ως εκ τούτου δεν πρέπει να υπαγορεύει ομάδες επιβίωσης, όπως ορίζεται εδώ, εκτός από σπάνιες περιπτώσεις. Ομοίως, τα ποσοστά ανάκτησης από τη χειρουργική επέμβαση είναι μεταβλητή, αλλά οι ασθενείς που επιβιώνουν του παγκρέατος εκτομή γενικά επιστρέψουν στην προεγχειρητική βασική γραμμή τους, ή να υποφέρουν από συμπτώματα σχετιζόμενα με τη νόσο [24]. Τα αρχεία του κάθε ασθενή στην ομάδα βραχυπρόθεσμη επιβίωση ήταν σχολαστικά επανεξετάζονται, και μόνο οι ασθενείς που απεβίωσαν από καρκίνο του παγκρέατος (και όχι επιπλοκές από την επέμβαση) συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη. Οι ασθενείς με διηθητικό καρκίνο που προκύπτουν από ενδοπορικού θηλώδες νεόπλασμα βλεννώδες καρκίνωμα κολλοειδούς, καρκίνωμα κυψελιδικών, και άλλες λιγότερο κοινές παραλλαγές του αδενοκαρκινώματος αποκλείστηκαν.

Η

κλινικοπαθολογική Πληροφορίες

κλινικοπαθολογική πληροφορίες που προέρχονται από το θεσμικό βάση δεδομένων παγκρεατικού όγκου και από τα ηλεκτρονικά αρχεία των ασθενών. Σχετικές κλινικές μεταβλητές που περιλαμβάνονται μετεγχειρητική χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία, και την επιβίωση των ασθενών. Παθολογικών δεδομένων που περιλαμβάνονται κατάστασης των λεμφαδένων (θετικά έναντι αρνητικών), η διαφοροποίηση του όγκου (φτωχοί εναντίον μέτρια /καλά), το μέγεθος (≥3 cm εναντίον & lt? 3 cm), και το καθεστώς περιθωρίου εκτομή (θετικά έναντι αρνητικών). Μικροσκοπική νόσου κατά τη παγκρέατος λαιμό, χοληδόχου πόρου, δωδεκαδάκτυλο, και uncinate περιθώρια κατηγοριοποιήθηκαν ως θετικά.

Η

Παρασκευή ιστών

Η ΤΜΑ κατασκευάστηκε από τους πυρήνες ιστό που λαμβάνεται από φορμόλη στερεωμένου, ενσωματωμένα σε παραφίνη τμήματα ιστού σε 151 δείγματα ασθενών. Σε όλες τις περιπτώσεις, τα δείγματα ιστού ελήφθησαν από εκτομή πρωτογενούς πόρου αδενοκαρκινώματα του παγκρέατος. Ο τεχνικός τοποθετήθηκαν τα δείγματα από την TMA με τυφλό τρόπο εξασφαλίζοντας ότι IHC ερμηνεία από τους ερευνητές της μελέτης ήταν αμερόληπτη. Το ΤΜΑ κατασκευάστηκε ως εξής: λαμβάνεται ένα αντιπροσωπευτικό μπλοκ όγκου και μία αντίστοιχη H & amp? Ε βάφονται slide εξετάστηκε κάτω από ένα μικροσκόπιο για εστίες υψηλής νεοπλασματικών κυτταροβρίθεια. πυρήνες τριπλούν ελήφθησαν από τα μπλοκ δείκτη και μεταφέρθηκε σε ένα παρθένο μπλοκ για επεξεργασία TMA με ένα αυτοματοποιημένο μηχάνημα συστοιχία ιστού (ATA-27, Beecher Instruments, Silver Spring, MD). τμήματα TMA στη συνέχεια κόπηκαν από το μπλοκ στο πλαίσιο της προετοιμασίας για τα πειράματα ανοσοϊστοχημείας.

Οι τιμές κατά μήκος της αναγράφεται διαγώνια γραμμή (

γραμμή της μη-διάκρισης

) αντανακλούν μια τυχαία εικασία, με τα σημεία πάνω από τη γραμμή που είναι καλύτερα από ό, τι τυχαία. C-δείκτη ή περιοχή Harrel του κάτω από την καμπύλη (AUC) για κάθε οικόπεδο παρέχεται. Ρ τιμές αναφέρονται σε συγκρίσεις μεταξύ της δεδομένης καμπύλης ROC, σε σύγκριση με παθολογικά χαρακτηριστικά μόνο. ​​

Η

Επιλογή Biomarkers

Ένα δημοσιευθεί επιτομή του υποθετικού του παγκρέατος βιοδείκτες του καρκίνου βασίζεται σε μια ολοκληρωμένη βιβλιογραφική έρευνα απαριθμεί 2.516 υπερεκφράζεται γονίδια (~ 10% του γονιδιώματος) με καρκίνο του παγκρέατος [22]. Λόγω του μεγάλου αριθμού των υποψηφίων βιοδεικτών, σχεδιάσαμε μια στρατηγική για να επιλέξετε ένα πάνελ αντισωμάτων για χρήση κατά την s-ΤΜΑ (Σχήμα 1). Εμείς σύγκριση του καταλόγου των δυνατοτήτων κάτω σε 386 υποψήφια γονίδια προηγουμένως μελετηθεί χρησιμοποιώντας IHC. Ο κατάλογος των IHC βιοδεικτών σε PDA ήταν τότε διασταυρώνονται σε με τη θεσμική μας κατάλογο παθολογία των 380 βελτιστοποιημένη αντισωμάτων. πυρήνα παθολογία μας περιείχε 65 βελτιστοποιημένη αντισώματα εναντίον υποθετικό βιοδείκτες PDA. Λόγω του πεπερασμένου αριθμού των μη χρωματισμένων ιστολογικές τομές που διατίθενται από μια ΤΜΑ για τη μελέτη (-50 στην παρούσα πόρο), θα βελτιωθεί περαιτέρω η διαδικασία επιλογής από στρωματοποίηση βιοδείκτες ανάλογα με τον αριθμό των ανεξάρτητα δημοσιευμένες μελέτες IHC παρατίθενται στο κεντρικό αποθετήριο βιοδεικτών. Χρησιμοποιώντας αυτή τη στρατηγική, 13 βιοδείκτες PDA ταυτοποιήθηκαν ως αντικείμενο τέσσερα ή περισσότερα κριτές μελέτες IHC-based, και επιπλέον έχουν ήδη βελτιστοποιηθεί πυρήνα παθολογία μας (BCL2, CASP3, CCND1, EGFR, erbB2, MSLN, MUC1, MUC4, Ρ53, Smad4, MUC5AC, BIRC5 και ITGB4). Το πρώτο 10 επιλέχθηκαν για δοκιμή στην παρούσα μελέτη. Επιπλέον, τρεις αντισώματα συμπεριλήφθηκαν ως αντιπροσωπευτικά δείγματα από τις υπόλοιπες επιλογές των θεωρούμενων βιοδεικτών PDA: CEACAM6 (2 προηγούμενες δημοσιεύσεις IHC-based), MYC (2 δημοσιεύσεις), και MUC2 (1 δημοσίευση). MUC2 ήταν πιστεύεται ότι είναι ιδιαίτερα ενδιαφέρουσα λόγω της σύνδεσής του με βραδείας όγκους του παγκρέατος, σε άμεση αντίθεση με MUC1, το οποίο έχει συνδεθεί με πιο επιθετικές υποτύπους παγκρεατικού όγκου [25], [26].

ανοσοϊστοχημική ανάλυση

Ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν από μία τυποποιημένη διαδικασία στρεπταβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης. Επισημασμένα τμήματα TMA υποβλήθηκαν σε θερμότητα που προκαλείται από την ανάκτηση επιτόπου με το αυτοματοποιημένο σύστημα Ventana Discovery ΧΤ (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ). Πρωτογενή αντισώματα και οι αραιώσεις τους περιλαμβάνονται: BCL2 (1:100, ϋΑΚΟ, Carpenteria, CA), CASP3 (1:300), CCND1 (1:25, Lab Vision, Fremont, CA), CEACAM6 (1:05, Biogenex, Σαν Ramon, CA), EGFR (1:100, Zymed, Carlsbad, CA), erbB2 (1:400, Signet, Princeton, NJ), MSLN (1:100, Vector Labs, Burlingame, CA), MUC1 (1:100 , Vector Labs, Burlingame, CA) [27], MUC2 (1:100 Vector Labs, Burlingame, CA) [27], MUC4 (1:3000, κλώνος 8G7, ένα δώρο από το Πανεπιστήμιο της Νεμπράσκα) [28], MYC ( 1:2000, Epitomics, Burlingame, CA), Ρ53 (1:500, ϋΑΚΟ, Carpenteria, CA), και Smad4 (1:800, Santa Cruz Bio, Santa Cruz, CA). Το Kit Ventana DABMap χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση αντισωμάτων.

Η ανοσοϊστοχημική κριτική έγινε από έναν ειδικό του παγκρέατος παθολόγο (L.H.T.) και καταγράφονται από μια διαφορετική ερευνητή της μελέτης (J.M.W). Smad4, MUC2 και BCL2 βαθμολογήθηκαν ως αρνητική ή θετική με IHC με βάση τις προηγούμενες στρατηγικές βαθμολόγησης [29]. Για όλα τα άλλα αντισώματα, μια κλίμακα 4 σημείων (από 0 έως 3+) εφαρμόστηκε με βάση το ποσοστό των σημασμένων καρκινικών κυττάρων στον πυρήνα ιστού: 0 (& lt? 10% σημασμένα κύτταρα), 1+ (11-25%) , 2 + (26% -75%), 3+ (& gt? 75%). Ένας μέσος όρος καταγράφηκε για κάθε τριπλούν σετ. Συνολικά 14 δείγματα είχαν ανεπαρκή νεοπλασματικής κυτταρικότητα για ανάλυση IHC και αποκλείστηκαν, δίδοντας 137 δείγματα με επαρκή ιστού για όλα τα δοκιμασμένα αντισώματα.

Στατιστική Ανάλυση

Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση Intercooled Stata 8.2. Κατηγορικές μεταβλητές ελέγχθηκαν με την ακριβή δοκιμή του Fisher, η συνεχείς μεταβλητές με τη δοκιμή αθροίσματος Wilcoxon rank, και πρότυπο λογιστικής παλινδρόμησης διεξήχθη για δοκιμή πολλαπλών παραλλαγών. Συνεχείς μεταβλητές εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ rank sum. Μια σύγκριση των πολυμεταβλητών μοντέλων παλινδρόμησης διεξήχθη για να προσδιορίσει την καλύτερη προγνωστική μοντέλο χρησιμοποιώντας λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη ανάλυση και C-δείκτης των συνδεδεμένων Harrel της (που αναφέρεται επίσης ως περιοχή κάτω από την καμπύλη ή περιοχή ROC). Στην παρούσα ανάλυση, τα μέτρα C-δείκτη πόσο καλά ένα συγκεκριμένο μοντέλο πολλών μεταβλητών των προγνωστικών διακρίσεις μεταξύ των ομάδων βραχυπρόθεσμες και μακροπρόθεσμη επιβίωση. Οι τιμές κυμαίνονται μεταξύ 0 και 1. Η τιμή των 0,5 υποδεικνύει καμία προβλεπτική ικανότητα (τυχαία πρόβλεψη) και εμφανίζεται ως μια διαγώνια γραμμή σε ένα γράφημα ROC, ενώ τιμές πάνω από 0,5 δείχνουν καλή προβλεψιμότητα, και εμφανίζονται ως καμπυλόγραμμη οικόπεδα πάνω από τη διαγώνιο. Όταν δύο καμπύλες ROC δεν τέμνονται, το ένα με υψηλότερη C-δείκτης κυριαρχεί έναντι του άλλου. Όλα τα στατιστικά στοιχεία δίπλευρη με την αξία AP & lt?. 0.05 δείχνει στατιστική σημαντικότητα

Αποτελέσματα

Συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά

Υπήρχαν 79 (58%) ασθενείς στην μακροπρόθεσμη όρος ομάδα επιζώντων και 58 (42%) σε βραχυπρόθεσμα ομάδα επιζώντων. Συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά (λεμφαδένες κατάσταση του κόμβου, ιστολογική βαθμό, το μέγεθος, και το καθεστώς του περιθωρίου εκτομή) και οι μεταβλητές του ασθενούς (ηλικία, φύλο, μετεγχειρητική διάρκεια της παραμονής, και επικουρική θεραπεία) αναλύθηκαν ως προγνωστικοί παράγοντες της ομάδας επιβίωσης (Πίνακας 1). Κανένας από τους παράγοντες που σχετίζονται με τον ασθενή συσχετίζονται με την επιβίωση. Από τις παθολογικές μεταβλητές, θετικός λεμφαδένες κατάσταση κόμβου (p = 0.02), η κακή διαφοροποίηση (p = 0,003), και ένα μέγεθος όγκου μεγαλύτερο από 3 cm (p = 0.02) σχετίστηκαν με πρώιμο καρκίνο ειδική θανάτου στην αδιόρθωτη μονοπαραγοντική ανάλυση.

Η προγνωστική ακρίβεια των τριών διαφορετικών μοντέλων, όπως εκτιμάται από την C-δείκτη Harrell του, συγκρίθηκε, γράφημα και πίνακα (Σχήμα 4). Το μοντέλο που περιλάμβανε τις τρεις βιοδείκτες (MUC1, MSLN και MUC2) ήταν ανώτερη από το μοντέλο των οποίων τέσσερις συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά (λεμφαδένες κατάσταση του κόμβου, ιστολογική βαθμό, το μέγεθος του όγκου, και το καθεστώς του περιθωρίου εκτομή), αν και η διαφορά μόλις έχασε τη στατιστική σημαντικότητα ( p = 0.07). Η συνδυασμένη μοντέλο με βιοδείκτες και παθολογικά χαρακτηριστικά την καλύτερη απόδοση (p = 0,0001).

Biomarkers

πρότυπα έκφρασης από τις 13 υποψήφιες προγνωστικοί δείκτες (δείτε τις μεθόδους και το σχήμα 1 για λεπτομέρειες σχετικά με την επιλογή των βιοδεικτών στρατηγική) στις δύο ομάδες επιβίωση δοκιμάστηκαν και συγκρίθηκαν. Τα μονοπαραγοντική αποτελέσματα παρέχονται στον Πίνακα 2. Από 13 υποψήφια γονίδια, μόνο MUC1, MSLN, και MUC2 είχαν στατιστικώς διαφορετικά πρότυπα έκφρασης μεταξύ των ομάδων. Μια τάση προς τη σημασία παρατηρήθηκε με την απώλεια Smad4 (p = 0,09). Εκπρόσωπος διαφάνειες επισημαίνονται με MUC1, MSLN, και MUC2 φαίνεται στο Σχήμα 2.

MUC1

Μια ισχυρή συσχέτιση παρατηρήθηκε μεταξύ αυξημένη έκφραση της πρωτεΐνης MUC1 και μικρή επιβίωση (p & lt? 0,0001). Στη συνολική κοόρτη, το 15% των ασθενών είχαν βαθμολογία IHC από 0, 23% είχαν 1+, το 33% είχε 2+, και το 30% είχε 3+. Τα ποσοστά των ασθενών που ήταν σε σύντομο χρονικό ομάδα επιζώντων σε κάθε ξεχωριστή βαθμολογία IHC αυξήθηκε με έναν γραμμικό τρόπο (κλίση της γραμμικής παλινδρόμησης = 0.21, ρ = 0.002). Συγκεκριμένα, 5% ήταν σε σύντομο χρονικό ομάδα επιβίωση με βαθμολογία IHC από 0, 29% με 1+, 49% με 2+, και 68% με 3+ (Σχήμα 3Α). Η αρνητική προγνωστική αξία ήταν υψηλή (95%), καθώς 19 από τους 20 ασθενείς με απουσία έκφρασης MUC1 σε αυτή την ομάδα επέζησαν περισσότερο από 30 μήνες.

MSLN

Σε σύγκριση με την έκφραση MUC1, η μοτίβο έκφρασης MSLN στη συνολική ομάδα ήταν ελαφρώς σταθμισμένη προς χαμηλότερες βαθμολογίες IHC: 63% των ασθενών είχαν 2+ ή 3+ επισήμανση MUC1 ενώ το 48% είχε συγκρίσιμη επισήμανση MSLN (p = 0.02). Ωστόσο, όπως και MUC1, υπήρχε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης MSLN και νωρίς ειδική θνησιμότητα λόγω καρκίνου (ρ & lt? 0,0001). Και πάλι, παρατηρήθηκε μία γραμμική σχέση ανάμεσα στη βαθμολογία IHC και το ποσοστό των ασθενών στη φτωχή ομάδα επιβίωση (κλίση της γραμμικής παλινδρόμησης = 0.20, p = 0.02). Στις διάφορες κατηγορίες βαθμολογίας IHC, το ποσοστό των ασθενών που ήταν σε σύντομο ομάδα επιβίωση ήταν ως εξής: 20% των ασθενών με βαθμολογία IHC από 0, 35% με 1+, 49% με 2+, και 81% με 3+ (Σχήμα 3Β).

MUC2

έκφραση MUC2 συσχετίστηκε με μακρά επιβίωση σε αντίθεση με MUC 1 και MSLN (p = 0.03). MUC2 έκφραση ήταν ασυνήθιστο συνολικά (15%) στο PDA. Βραχυπρόθεσμες επιζώντες εκφράζεται MUC2 σε μόλις 7% των περιπτώσεων. Μακροχρόνια επιζώντες εκφράζεται MUC2 σε μεγαλύτερο ποσοστό, αν και η έκφραση ήταν ακόμη ασυνήθιστο (22% των περιπτώσεων).

Η πολυπαραγοντική ανάλυση

Μια πολυπαραγοντική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης πραγματοποιήθηκε η οποία περιελάμβανε σημαντικές μονοπαραγοντική προγνωστικών βιοδεικτών επιβίωσης (MUC1, MSLN, και MUC2), καθώς και τα τέσσερα συχνά αναφερόμενες παθολογικά χαρακτηριστικά (Πίνακας 3). MUC1 και MSLN ήταν πολύ σημαντική στο προσαρμοσμένο μοντέλο, ενώ MUC2 δεν ήταν. Σε σύγκριση με απούσα την έκφραση, οι πιθανότητες αναλογίες που σχετίζονται με στοιχειώδη έκφραση MSLN ήταν 1,7 (βαθμολογία IHC = 1+), 2,6 (βαθμολογία IHC = 2+) και 12,5 (βαθμολογία IHC = 3+). Για MUC1, οι αναλογίες πιθανότητες ήταν 10,1 (βαθμολογία IHC = 1+), 11.9 (βαθμολογία IHC = 2+) και 29,0 (βαθμολογία IHC = 3+). Τα σύνθετα ρ-τιμές για τις MSLN και MUC1 ήταν ρ = 0,01 και ρ = 0,004, αντίστοιχα. Κανένα από τα συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά ήταν στατιστικά σημαντικές στο μοντέλο πολλών μεταβλητών. Για να ελέγξετε αν οι υψηλές προγνωστικές αξίες της MUC1 και MSLN ήταν απλώς ένα κατασκεύασμα ενός πολυεπίπεδη σύγκρισης (IHC βαθμολογία από το 0 έως 3+), το πολυπαραγοντικό μοντέλο επαναλήφθηκε μετά την κατηγοριοποίηση μεταστάσεις στους λεμφαδένες σε μια παρόμοια κλιμακωτή μόδας (αρνητικό, 1 ή ≥2 μεταστάσεις στους λεμφαδένες). Προσαρμοσμένη αναλογίες αποδόσεις για τις σχετικές βιοδείκτες παρέμειναν αμετάβλητες? πολλαπλές μεταστάσεις στους λεμφαδένες προβλέψει κακή επιβίωση με μια αναλογία πιθανοτήτων μόλις 3,9 (p = 0.02).

Συζήτηση

Πρώιμη υποτροπή του καρκίνου και τη θνησιμότητα μετά παγκρέατος εκτομή (εντός ενός έτους) παραμένει απογοητευτικό εμπειρία για την κλινικούς γιατρούς. Σε αυτές τις περιπτώσεις, οι ασθενείς με φαινομενικά «χειρουργικά εξαιρέσιμων» ασθένεια έχει σημαντικές εκτομές με «θεραπευτική πρόθεση,» αλλά δεν λαμβάνουν καμία προσδιορίσιμο όφελος, ενίοτε εις βάρος της σημαντικής νοσηρότητας ή ακόμη και θνησιμότητα. θεσμικές δεδομένα μας δείχνουν το σενάριο αυτό εμφανίζεται στο ένα πέμπτο των ασθενών που υποβάλλονται σε παγκρεατική εκτομή για PDA [30]. Από την άλλη πλευρά, ορισμένοι ασθενείς με μεταστατική νόσο έχουν σχετικά αργό ρυθμό ανάπτυξης καρκίνων, και θα μπορούσαν να ωφεληθούν από metastasectomy ή μείωση κυτταρολογική. Αυτό το σενάριο είναι εξαιρετικά ασυνήθιστο με PDA, αλλά δεν υπάρχει προηγούμενο για την επιθετική χειρουργική προσέγγιση σε επιλεγμένους ασθενείς με προχωρημένο, αλλά νωχελικός ασθένεια [31]. Δυστυχώς, η παρούσα προσέγγιση σε ασθενείς με PDA αποτυγχάνει να ενσωματώσει βιολογική παράγοντες. Προς το παρόν, τα συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά παρέχουν τις καλύτερες προγνωστικές πληροφορίες, ακόμη δεν είναι επαρκώς αξιόπιστα για να επηρεάσουν τις αποφάσεις της θεραπείας, όπως η παρούσα μελέτη δείχνει.

Οι μελέτες που αποσκοπούν στον εντοπισμό αξιόπιστων δεικτών πρόγνωσης αντιμετωπίσει δύο ιδιαίτερες προκλήσεις. Κατ ‘αρχάς, εξωγενείς παράγοντες που καθορίζουν την επιβίωση οποίες είναι ανεξάρτητες από τις αναλύσεις μοριακό προφίλ συγχυτικός παράγοντας βιοδείκτη ενός όγκου του. Σκεφτείτε ένα σενάριο στο οποίο η διαφορά στη συνολική επιβίωση μεταξύ δύο ασθενείς μετά παγκρέατος εκτομή είναι μόνο 3 μήνες. Η διαφορά επιβίωση μπορεί να σχετίζεται με την κατάσταση του ασθενούς την απόδοση, κοινωνικών παραγόντων, ιατρικές συνοδά νοσήματα, απόκριση σε χημειοθεραπεία, η τοξικότητα της θεραπείας, χειρουργικών επιπλοκών, ή έναν αριθμό άλλων δυνατοτήτων. Κάθε ένας από αυτούς τους παράγοντες μπορούν ελάχιστα να συμβάλουν στην επιβίωση των ασθενών, και θα απαιτήσει μια μελέτη με πολύ μεγάλη στατιστική ισχύ για να χαρακτηρίσει πλήρως κάθε μία. Επιπλέον, αυτοί οι παράγοντες επιβίωσης δεν είναι συνήθως συνδέονται με τα πρότυπα έκφρασης βιοδεικτών (απάντηση χημειοθεραπεία και η τοξικότητα μπορεί να αποτελούν εξαιρέσεις). Η παρούσα μελέτη ελαχιστοποιεί το θόρυβο από εναλλακτικές και λιγότερο σημαντικούς παράγοντες επιβίωσης, αποκλείοντας τους ασθενείς με ενδιάμεση επιβίωση (12-30 μήνες). Εκτός από σπάνιες περιπτώσεις, η βιολογία του όγκου θα πρέπει να αναμένεται να είναι ο κύριος οδηγός των ομάδων επιβίωσης που ορίζεται από ένα χρονικό κενό αυτού του μεγέθους (τουλάχιστον 1,5 χρόνια διαχωρίζει τις βραχυπρόθεσμες και μακροπρόθεσμες ομάδες επιζώντων).

Εντοπίσαμε 20 άλλα μελέτες στη βιβλιογραφία που αναλύονται πρωτεϊνικών βιοδεικτών χρησιμοποιώντας TMAs του PDA (Πίνακας 4). Σε αντίθεση με την παρούσα μελέτη, οι μελέτες αυτές TMA-based συμπεριλάμβανε όλους τους ασθενείς σε όλο το φάσμα επιβίωση, η οποία μπορεί να ερμηνευθεί ως ένα χαρακτηριστικό θετική μελέτη. Καμία από αυτές τις μελέτες εντοπίσει βιοδείκτες με κλινική σημασία στο PDA. Προτείνουμε μια TMA επιβίωσης μπορεί να είναι καταλληλότερο για έρευνες ανακάλυψης βιοδεικτών στο PDA, διότι τονίζει τη βιολογία του όγκου. Το μέγεθος του δείγματος στην παρούσα μελέτη συγκρίνεται ευνοϊκά με άλλες μελέτες ΤΜΑ (άνω τεταρτημόριο). Το πιο σημαντικό, η μελέτη αυτή πιθανόν περιλαμβάνει το μεγαλύτερο αριθμό των ασθενών στα άκρα επιβίωσης.

Η δεύτερη πρόκληση για τις έρευνες βιοδείκτη του PDA με IHC είναι να επινοήσει μια ορθολογική στρατηγική για την επιλογή των καλύτερων μοριακών υποψήφιοι για τη μελέτη. Υπάρχουν περίπου 30.000 ανθρώπινες πρωτεΐνες, και το 10% έχουν αναφερθεί ως υπερεκφράζεται σε [22] PDA. Οι αναλύσεις IHC περιορίζεται από την ποσότητα του διαθέσιμου ιστού (ένα αντίσωμα ανά τμήμα TMA, και περίπου 30-50 τμήματα ανά μπλοκ TMA), και ως εκ τούτου μια ορθολογική διαδικασία επιλογής των βιοδεικτών υποψήφιος καλείται να επιλέξει τα πιο πρακτικά και ελπιδοφόρα βιοδεικτών για τη μελέτη. Συνήθως, οι ερευνητές σχεδιάζουν πειραματικές πάνελ βιοδείκτη είτε σύμφωνα με τα ερευνητικά ενδιαφέροντα, μια ενδιαφέρουσα χαρτί, ή ένα ενοποιητικό θέμα, όπως ένα κοινό μοριακό μονοπάτι. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 4 απεικονίζει, προηγούμενες μελέτες TMA στο PDA δοκιμάσει ένα μικρό αριθμό αντισωμάτων (διάμεση τιμή των 2 βιοδεικτών ανά μελέτη? Εύρος, 1 έως 18). Μόνο δύο μελέτες εξέτασαν περισσότερους από 4 αντισώματα.

Επιλογή των βιοδεικτών στην παρούσα μελέτη βασίστηκε στην πρόσφατα δημοσιευμένη κεντρικό χώρο αποθήκευσης βιοδείκτη για PDA [22]. Η κατασκευή αυτού του συνόλου δεδομένων ήταν μια μαζική προσπάθεια που απαιτείται 7.000 ωρών πρόσωπο (που ανέρχονται σε εργασία σχεδόν ένα άτομο ανά έτος). Οι συγγραφείς προσδιορίζονται κάθε μελέτη στη βιβλιογραφία που συνδέεται με ένα γονίδιο ή πρωτεΐνη στο PDA, και στη συνέχεια πίνακα το γονίδιο δείκτη (ή πρωτεΐνη), τις κύριες δοκιμασίες που εμπλέκονται στη μελέτη, και η σχετική αναφορά. Πρωταρχικός στόχος των συγγραφέων ήταν να «αναπτύξει μια επιτομή των πιθανών βιοδεικτών που θα μπορούσε να επικυρωθεί συστηματικά από τον παγκρεατικό καρκίνο κοινότητα» [22]. Κάνοντας πρόκληση τους για δράση, αναλύσαμε αυτό το μεγάλο σύνολο δεδομένων χρησιμοποιώντας έναν αλγόριθμο (που αναλύεται στο Σχήμα 1) [22] που τοποθετούνται αυξημένη σημασία ή το βάρος για τον αριθμό των προηγούμενων εκθέσεων που συνδέουν ένα συγκεκριμένο βιοδείκτη για PDA. Συνολικά, 13 βιοδεικτών ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας αυτή τη στρατηγική επιλογή και αντίστοιχα αντισώματα ελέγχθηκαν έναντι των s-ΤΜΑ.

Ανάλυση

IHC αποκάλυψε ότι 10 από τους υποψηφίους Το φάσμα13C ήταν μη-πληροφοριακές ως προγνωστικοί δείκτες σε αυτή τη μελέτη κοόρτη. Αυτές οι αρνητικές παρατηρήσεις παρέχουν πειστικές αποδείξεις (με την εξαίρεση της Smad4 που έχασε τη στατιστική σημαντικότητα, p = 0,09) ότι αυτή η ομάδα των θεωρούμενων παγκρέατος βιοδείκτες του καρκίνου είναι κλινικά άνευ σημασίας για την πρόγνωση. Στην μονοπαραγοντική ανάλυση, MUC1 και της έκφρασης MSLN συνδέθηκαν με την επιθετική βιολογία του καρκίνου (δηλαδή μικρή ομάδα επιβίωσης) και την έκφραση MUC2 συνδέθηκε με ευνοϊκό βιολογία (δηλαδή μακρύ ομάδα επιβίωσης). Μόνο MUC1 και MSLN ήταν ισχυρή προγνωστικούς παράγοντες στο πολυπαραγοντικό μοντέλο, την προσαρμογή για τα συμβατικά παθολογικά χαρακτηριστικά (Πίνακας 3). Διάχυτη MUC1 και της έκφρασης MSLN ήταν άκρως προγνωστική της μικρής επιβίωσης (οι αναλογίες πιθανότητες ήταν 12.47 και 28.95, αντίστοιχα). Είναι ενδιαφέρον ότι, οι τέσσερις τυποποιημένες δοκιμές παθολογία είχε αναλογίες πιθανοτήτων κάτω από το 3, και κανένας δεν πέτυχε στατιστική σημαντικότητα στο πολυπαραγοντικό μοντέλο. Μία ανάλυση ROC πραγματοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η προγνωστική ακρίβεια των τριών διαφορετικών πολυπαραγοντικά μοντέλα στη διάκριση βραχυπρόθεσμα και μακροπρόθεσμα ομάδες επιβίωσης (βιοδείκτες μόνο? Παθολογικά χαρακτηριστικά μόνο? Και ένας συνδυασμός των βιολογικών δεικτών και παθολογικά χαρακτηριστικά). Μια τάση προς την ανώτερη προγνωστική ακρίβεια παρατηρήθηκε με τον πίνακα του μοριακών δεικτών (MUC1, MSLN, και MUC2) πάνω από τα συμβατικά χαρακτηριστικά παθολογικές (AUC = 0.81 vs. 0.70, ρ = 0.07). Αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι βιοδείκτες μπορεί στην πραγματικότητα να παρέχουν πιο προγνωστική εικόνα από το πρότυπο προγνωστικά στοιχεία που περιλαμβάνονται στις εκθέσεις παθολογίας.

Αυτή η μελέτη επικυρώνει MUC1 και MSLN ως βιοδείκτες της επιθετικής του παγκρέατος βιολογία του καρκίνου. Οι συνέπειες αυτών των ευρημάτων πρέπει να ερμηνεύονται στο πλαίσιο του σχεδιασμού της μελέτης, και ο ρόλος αυτών των πρωτεϊνών ως προγνωστικοί δείκτες στην κλινική αντιμετώπιση του PDA παραμένει αβέβαιη. Ενώ κάθε ογκοπρωτεΐνη αποτέλεσε το επίκεντρο των πάνω από 200 μελέτες σε PDA, δεν υπάρχουν μελέτες μεγάλης κλίμακας δείγματα όγκων που τους έχουν εξεταστεί διεξοδικά ως προγνωστικούς βιοδείκτες χρησιμοποιώντας ένα συγκρίσιμο βαθμολογούνται σύστημα βαθμολόγησης IHC. Ορισμένες προηγούμενες μελέτες έχουν παρατηρηθεί διαφορές επιβίωσης που συνδέονται με την υψηλή και χαμηλή έκφραση όγκους (MUC1 ή MSLN), αλλά περιορίζονται από μικρά μεγέθη δειγμάτων, την απουσία κλιμακωτή συστήματα βαθμολόγησης IHC και αδιόρθωτη στατιστικά στοιχεία [32] – [34].

Ορισμένοι βιοδείκτες που περιλαμβάνονται στη μελέτη είχαν μοτίβα έκφρασης που διέφερε από τις προηγούμενες εκθέσεις. Για παράδειγμα, η έκφραση MSLN (1+ ή μεγαλύτερη) παρατηρήθηκε στο 71% των ασθενών με PDA στην παρούσα μελέτη (σε σύγκριση με 85-100% σε προγενέστερες μελέτες [32], [35]) και η έκφραση MUC4 (1+ ή μεγαλύτερη) παρατηρήθηκε στο 55% (σε σύγκριση με το 90% σε προγενέστερες μελέτες [36], [37]). Διαφορές μεταξύ αυτής της μελέτης και των προηγούμενων μπορεί να σχετίζεται με τη δειγματοληψία μεταβλητότητα μεγέθους (προηγούμενες μελέτες ήταν μικρότερα) και την επιλογή των ασθενών (η παρούσα μελέτη είναι εμπλουτισμένο με ασθενείς στα άκρα επιβίωσης). Είμαστε στη διαδικασία της επικύρωσης των αποτελεσμάτων της παρούσας μελέτης σε ένα μεγάλο σύνολο δεδομένων που περιλαμβάνει τους ασθενείς σε όλο το φάσμα της επιβίωσης. Επιπλέον, οι διαφορές σε ανοσοϊστοχημικές βαθμολόγησης είναι σημαντικές. Για παράδειγμα, προηγούμενες μελέτες του MSLN και MUC4 ορίζεται θετική σήμανση ως αντιδραστικότητα εστιακό αντισώματος σε περισσότερο από 1% των καρκινικών κυττάρων [35], [36], ενώ η παρούσα μελέτη που απαιτείται τουλάχιστον το 10% των κυττάρων για ένα σκορ IHC του 1+ .

Οι επιπτώσεις αυτής της έρευνας εκτείνονται πέραν βελτιωμένη προγνωστική εκτίμηση των δειγμάτων όγκου, και επομένως η χρησιμότητα της στρατηγικής s-TMA δεν είναι εντελώς εξαρτάται από τις μελέτες επικύρωσης με μεγάλο αριθμό των μη επιλεγμένων ασθενών. Πρώτον, βιοδεικτών ανακάλυψη βασίζεται σε ακραίες επιβίωσης είναι χρήσιμη για προτεραιότητα καρκινικά γονίδια για διαγνωστικούς και θεραπευτικούς έρευνα. Από τα πιο βιολογικά επιθετικά καρκινικά κύτταρα είναι συνήθως ανθεκτικοί σε συμβατικά μέσα, στέκεται στο λόγο ότι οι προσεγγίσεις νέα θεραπεία που στοχεύουν ειδικά επιθετική υπο-κλώνοι είναι ιδιαίτερα ελκυστικά και απαιτούν περαιτέρω έρευνα. Προς στήριξη αυτής της έννοιας, το NCI έχει εντοπίσει MUC1 και MSLN από τα πιο ελπιδοφόρα στόχους για την ανάπτυξη εμβόλιο κατά του καρκίνου, με την πρώην πρωτεΐνη που αναφέρονται στις τρεις πρώτες [38]. Ένα ραδιοεπισημασμένο μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι MUC1 αξιολογήθηκε επίσης πρόσφατα σε μια φάσης Ι /ΙΙ μελέτη, με μια προγραμματισμένη δοκιμή φάσης ΙΙΙ για να ακολουθήσει [39], [40]. Επιπλέον, κατευθυνόμενο από υποκινητή γονιδιακή θεραπεία του καρκίνου η οποία εκμεταλλεύεται υπερδραστήρια υποκινητές MUC1 και MSLN σε διάφορους τύπους καρκίνου έχει μελετηθεί εκτενώς σε προ-κλινικά μοντέλα καρκίνου με χρήση ιικών φορέων [41] – [43]. Αυτή τη στιγμή ακολουθεί μια προσέγγιση γονιδιακής θεραπείας υποκινητή καθοδηγείται κατά PDA χρησιμοποιώντας ένα μη-ιικό, βιοδιασπώμενα φορέα πολυμερούς να παραδώσει τοξικά νανοσωματίδια [16].

Επιπλέον, τόσο MUC1 και MSLN είναι παρόντες στην κυτταρική επιφάνεια με εκκρίνεται ισομορφών. Έτσι, προγνωστικοί δείκτες όπως αυτές είναι δυνητικά ανιχνεύσιμες σε ορούς ή εκκρίνεται υγρά.