Αφηρημένο

Ιστορικό

αντιγόνο PCA3 (καρκίνος του προστάτη 3

) γονίδιο είναι ένα από τα πιο καρκίνο του προστάτη ειδικά γονίδια επί του παρόντος. Κατά συνέπεια, το ειδικό προστατικό έκφραση και η απότομη αυξητική ρύθμιση του

PCA3 mRNA

σε καρκίνο προστάτη υποδεικνύουν μία μοναδική μεταγραφική ρύθμιση, η οποία πιθανώς μπορεί να αποδοθεί σε πολυμορφισμό υποκινητή. Στη μελέτη μας, αξιολογήσαμε εάν υπάρχει πολυμορφισμός στο

PCA3 περιοχή του υποκινητή

και επίσης να αξιολογεί τη συσχέτιση του πολυμορφισμού με καρκίνο του προστάτη.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Σχεδιάσαμε ένα ειδικό σετ εκκινητών για διαλογή τον υποκινητή του

PCA3

γονίδιο με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) -με βάση την κλωνοποίηση και αλληλούχιση με το DNA από δείγματα περιφερικού αίματος του καρκίνου του προστάτη (PCA) περιπτώσεις (n = 186) και υγιής περιπτώσεις ελέγχου (n = 135). κίνδυνοι γονότυπο-ειδικό εκτιμήθηκαν ως λόγοι πιθανοτήτων (OR) με συνδεδεμένες διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (ΠΙ) με δοκιμή Chi-square. Πιθανή απόκλιση των συχνοτήτων γονοτύπου από τους ελέγχους και τις περιπτώσεις προστάτη αναμένεται κάτω από την ισορροπία Hardy-Weinberg εκτιμήθηκε από το chi-square test. Σύντομη διαδοχική επανάληψη πολυμορφισμός του

ΤΑΑΑ

βρέθηκε στην περιοχή του υποκινητή του

PCA3

γονίδιο, εντοπίστηκαν πέντε πολυμορφισμών και οκτώ γονότυπους. Οι οκτώ γονότυποι χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες: ≤10

ΤΑΑΑ

, 11

ΤΑΑΑ

, ≥12

ΤΑΑΑ

. Η ομάδα 11

ΤΑΑΑ

και ≥12

ΤΑΑΑ

σχετίστηκαν με υψηλότερο σχετικό κίνδυνο για καρκίνο του προστάτη από την ομάδα ≤10

ΤΑΑΑ

(OR = 1,76, 95% CI = 1,07 -2,89 [για την ομάδα 11TAAA]? OR = 5,28, 95% CI = 1,76 – 15,89 [για την ομάδα ≥12

ΤΑΑΑ

])

Συμπεράσματα /Σημασία

Η. παρουσία του (

ΤΑΑΑ

) n σύντομο διαδοχική επανάληψη πολυμορφισμών στο

περιοχή του υποκινητή του PCA3

μπορεί να είναι ένας παράγοντας κινδύνου για καρκίνο του προστάτη στην κινεζική πληθυσμό

Παράθεση:. Zhou W, Chen Ζ, Χου W, Shen Μ, Ζανγκ Χ, Li C, et al. (2011) Ένωση Short Tandem Repeat πολυμορφισμός στο Διοργανωτή του

Καρκίνος του προστάτη αντιγόνου 3

Gene με τον κίνδυνο καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 6 (5): e20378. doi: 10.1371 /journal.pone.0020378

Επιμέλεια: Jean-Marc A. Lobaccaro, Clermont Πανεπιστήμιο, Γαλλία

Ελήφθη: 1η Φεβρουαρίου 2011? Αποδεκτές: 28η Απριλίου 2011? Δημοσιεύθηκε: May 31, 2011

Copyright: © 2011 Zhou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (αρ. 30872421), και Wenzhou Δημοτική Επιστήμης και Τεχνολογίας του Προεδρείου (Y20090292). Η διεύθυνση URL του Ιδρύματος Φυσικών Επιστημών της Κίνας: https://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default124.htm. Η διεύθυνση URL του Wenzhou Δημοτική Επιστήμης και Τεχνολογίας του Προεδρείου: https://www.wzkj.gov.cn/. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο συχνά διαγιγνώσκεται κακοήθεια και η δεύτερη κύρια αιτία των θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με τη Δυτική πληθυσμού αρσενικό [1], και η συχνότητα της εξακολουθεί να αυξάνεται. PCa μπορεί να θεραπευτεί με ρίζα χειρουργική επέμβαση ή ακτινοθεραπεία αν η ασθένεια είναι εντοπισμένη εντός του προστάτη [2] – [5]. Ωστόσο, όταν αυτό το καρκίνωμα έχει εξαπλωθεί τοπικά ή μακρινή, καμία θεραπευτική αγωγή μπορεί να προσφερθεί, και αυτοί οι ασθενείς θα υποφέρουν από κακή πρόγνωση [6], [7]. Ως εκ τούτου, υπάρχει επείγουσα ανάγκη για έγκαιρη διάγνωση της νόσου να αυξηθεί ο ρυθμός σκλήρυνσης για την PCA.

Αν και ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) μέτρηση του ορού θεωρείται ως το καλύτερο δείκτη όγκου συμβατικά ορού διαθέσιμα, δεν υπάρχει δεν είναι αρκετή εξειδίκευση και ευαισθησία για το PSA στην ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη νωρίς. Για παράδειγμα, η PSA είναι συχνά αυξημένη σε καλοήθη προστατική υπερπλασία και προστατίτιδα. Περαιτέρω, το καρκίνο του προστάτη Πρόληψη δοκιμή έδειξε ότι ακόμα και σε ασθενείς με επίπεδα PSA & lt? 4 ng /ml, & gt? 15% είχαν βιοψία ανιχνεύσιμο καρκίνο του προστάτη [8]. Πιο καρκίνο του προστάτη ειδικές και ευαίσθητες βιοδείκτες χρειάζονται επειγόντως. Πρόσφατα, Bussemakers

et al

. ανέφεραν ένα νέο προστάτη-ειδικό γονίδιο, ο καρκίνος του προστάτη αντιγόνο 3 γονίδιο, που ονομάζεται επίσης

DD3

(κωδικός απεικόνιση απόκλιση 3) το οποίο βρέθηκε να είναι 10-100 φορές υπερεκφράζεται σε 53 από 56 ανθρώπινων δειγμάτων καρκίνου του προστάτη σε μια ανάλυση κηλίδος Northern ενώ δεν εκφράστηκε σε παρακείμενες μη-κακοήθη προστατική ιστούς [9]. Περαιτέρω, η αντίστροφη μεταγραφή-ΡΟΚ ανάλυση χρησιμοποιώντας

PCA3

-ειδικές εκκινητές έδειξε ότι

PCA3

μεταγραφήματα δεν βρέθηκαν σε ένα ευρύ φάσμα των φυσιολογικών ανθρώπινων ιστών και άλλων ανθρωπίνων κακοήθεις όγκους,

PCA3

θεωρείται ως μία από τις πλέον του καρκίνου του προστάτη-ειδικών γονιδίων που περιγράφεται μέχρι τώρα.

η τρέχουσα αντίληψη είναι ότι η

PCA3

γονίδιο περιέχει μια υψηλή πυκνότητα stop-κωδικονίων και εκφράζει μία μη -κωδικοποιητικού αγγελιοφόρο RNA στα επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη, λειτουργεί ως πολυαδενυλιωμένο μετάγραφο RNA, αλλά όχι κυτταροπλασματική πρωτεΐνη προκύπτει από την μεταγραφή του. Η έκφραση του προστάτη-ειδική και η απότομη αυξητική ρύθμιση του

PCA3 mRNA

σε καρκίνο προστάτη υποδεικνύουν μία μοναδική μεταγραφική ρύθμιση. Ως αποτέλεσμα, ο

PCA3

γονίδιο υποκινητή προσέλκυσε την προσοχή μας.

Σχεδιάσαμε ένα ειδικό εκκινητή ρυθμιστεί στην οθόνη τον υποκινητή του

PCA3

γονιδίου με PCR -με βάση κλωνοποίηση και αλληλούχιση με το DNA από δείγματα περιφερικού αίματος από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη και υγιή άτομα ελέγχου. Εμείς surprisedly διαπίστωσε ότι υπήρχαν πολυμορφισμοί μικρή διαδοχική επανάληψη (STR) στην περιοχή του υποκινητή του

PCA3

γονίδιο και το

ΤΑΑΑ

πολυμορφισμοί STR είναι σημαντική διαφορά μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του προστάτη και υγιή άτομα ελέγχου.

Αποτελέσματα

Ένα σύνολο από 321 άτομα, συμπεριλαμβανομένων 186 ασθενών με προστάτη και 135 υγιή άτομα ως ομάδα ελέγχου από το πρώτο συνδεδεμένες νοσοκομείο του Wenzhou Medical College, αναλύθηκαν για πολυμορφισμούς στο υποστηρικτής του

PCA3

γονίδιο. δείγματα DNA από το αίμα από μεμονωμένους ασθενείς κάθε επέδειξε μία μονή ζώνη μετά από ενίσχυση PCR. Η δοκιμασία της κλωνοποίησης και προσδιορισμού αλληλουχίας αποκάλυψε μια STR στην περιοχή προαγωγέα του

PCA3

γονίδιο. Στη συνέχεια, η αλληλουχία της περιοχής του υποκινητή των

PCA3

γονίδιο αρχικά σε διαλογή για πολυμορφισμούς με κλωνοποίηση και αλληλούχιση δοκιμασία σε 186 ασθενείς με προστάτη (μέση ηλικία κατά τη διάγνωση: 72,33 χρόνια? SD: 9,30) και 135 μάρτυρες (μέση ηλικία κατά τη διάγνωση: 71,19 χρόνια? SD: 7,39, Πίνακας 1). Η ηλικία κατά τη διάγνωση δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των ασθενών και των μαρτύρων (t = 1,20? P = 0,23)

Η

Στην παρούσα μελέτη, εντοπίστηκαν πέντε πολυμορφισμοί:. 4, 5, 6, 7, 8 (ο αριθμός αντιπροσωπεύει τις φορές επανάληψης του

ΤΑΑΑ

στον υποκινητή του

PCA3

γονίδιο, Σχήμα 1), και οκτώ γονότυπους ιδρύθηκαν. Το 4/5, 4/6, 5/5, 5/6, 5/7, 5/8, 6/6, 6/7 γονότυπους παρατηρήθηκαν στο 0,5%, 0,5%, 52,7%, 34,4%, 3,3% , 1,6%, 5,4% και 1,6% των ασθενών προστάτη, αντίστοιχα. Ενώ μόνο το 5/5, 5/6, 6 /6genotypes παρατηρήθηκαν σε 71,1%, 25,8%, 3,1% των ατόμων της ομάδας ελέγχου, αντίστοιχα. Δεν υπήρξε καμία ένδειξη ότι οι συχνότητες γονοτύπου παρέκκλινε από αυτές που αναμένονται υπό την ισορροπία Hardy-Weinberg για τους ασθενείς (χ

2 = 1.44, df = 3, P = 0,70) και την ομάδα ελέγχου (χ

2 = 0.14, df = 1, P = 0,71).

Α. (

ΤΑΑΑ

)

4 αλληλόμορφα? Β (

ΤΑΑΑ

)

5 αλληλόμορφα? Γ (

ΤΑΑΑ

)

6 αλληλόμορφα? Δ (

ΤΑΑΑ

)

7 αλληλόμορφα? Ε (

ΤΑΑΑ

)

8 αλληλόμορφα.

Η

Υποθέσαμε ότι ένα

ΤΑΑΑ

ήταν μια μονάδα του θέση μεταγραφής του

PCA3

γονίδιο, και

ΤΑΑΑ

επαναλαμβάνει up-ρύθμιση

PCA3

μεταγραφή, τότε οι αριθμοί ίδια επανάληψη του

ΤΑΑΑ

μπορεί να σχετίζεται με τον ίδιο ρυθμό μεταγραφής και την πιο

ΤΑΑΑ

επαναλαμβάνεται, τόσο πιο

PCA3

γονιδιακής έκφρασης. Έτσι, με βάση το συνολικό αριθμό των

ΤΑΑΑ

επαναλαμβάνει τα αλληλόμορφα, οκτώ γονότυποι χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες: ≤10

ΤΑΑΑ

, 11

ΤΑΑΑ

, ≥12

ΤΑΑΑ

(π.χ. το σύνολο

ΤΑΑΑ

επαναλάβετε αριθμός των γονότυπου (

ΤΑΑΑ

) n /(

ΤΑΑΑ

) m είναι x [x = n + m], και ανήκει στο «x»

ΤΑΑΑ

ομάδα).

Chi-square test έδειξε στατιστικά σημαντική διαφορά σημασία στην κατασκευή του προστάτη και των ελέγχων μεταξύ των τριών ομάδων (χ

2 = 13,27 , df = 2, p = 0,01), παρατηρήθηκε μία σημαντική συσχέτιση μεταξύ των συγκεντρωμένων γονότυπους και τον κίνδυνο του προστάτη. Το 11

ΤΑΑΑ

φορέα σχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του προστάτη από το άτομο που έχει ≤10

ΤΑΑΑ

(OR = 1,76? 95% CI = 1,07 – 2,89), και η ≥12

ΤΑΑΑ

φορέα συσχετίστηκε επίσης με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του προστάτη από το άτομο που έχει ≤10

ΤΑΑΑ

(OR = 5,28? 95% CI = 1,76 – 15,89, Πίνακας 2).

αλληλόμορφων (

ΤΑΑΑ

)

8 ήταν συγκριτικά σπάνιο αλληλόμορφο, κατά συνέπεια, η οποία οδήγησαν τα δείγματα σε 13

ΤΑΑΑ

ομάδα ήταν σπάνια, μελέτη σε μεγαλύτερους πληθυσμούς μπορεί ή δεν μπορεί να αποκαλύψει σημαντικές συσχετίσεις με προστάτη. Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι η πρόσθετη εργασία απαιτείται για να προσδιοριστεί η λειτουργική σημασία της περιοχής αυτής και την επίδραση της μεταβλητότητας σε μήκος και τον αριθμό των

ΤΑΑΑ

επαναλάβει στο μέλλον μελέτες με μεγαλύτερες ομάδες ασθενών.

Υπάρχει ήταν καμία συσχέτιση μεταξύ PCA3 υποστηρικτής πολυμορφισμούς STR και το σκορ Gleason σε ασθενείς με καρκίνωμα του προστάτη (r = 0,07, P = 0,342, Πίνακας 3).

Η

Συζήτηση

Serial ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης έχει φαίνεται ότι

PCA3

έκφραση είναι σημαντικά και ιδιαίτερα πάνω ρυθμισμένα στην πλειονότητα των προστατικών αδενοκαρκινωμάτων. Ως εκ τούτου, η μελέτη των γενετικών αλλοιώσεων σε

PCA3

γονίδιο μπορεί να είναι χρήσιμη στην διαλεύκανση της παθογένειας του καρκίνου του προστάτη.

Gerald W. Verhaegh et al. προηγούμενη μελέτη έχει δείξει ότι δεν είναι γνωστό μοτίβο εμπνευστής, όχι

ΤΑΤΑ-κουτί

, δεν

CAAT-box

, και δεν GC-πλούσιες περιοχές βρέθηκαν σε συναινετικές θέσεις εντός του

PCA3

υποκινητή. Ως εκ τούτου, τα νέα και τα στοιχεία δρώντα ιστο-ειδικούς και trans-δρώντες παράγοντες μεταγραφής μπορεί να καθορίσει τη συγκεκριμένη και χαρακτηριστική έκφραση του

PCA3

γονίδιο. Στη μελέτη τους, ένα αποτύπωμα βρέθηκε περαιτέρω προς τα ανάντη σε θέση -173 με -201 στο

PCA3

υποκινητή. Η μετάλλαξη αυτού του Α + Τ-πλούσια περιοχή, οδήγησε σε μειωμένο ρυθμό μεταγραφής, προτείνοντας ένα θετικό ρόλο για αυτό το στοιχείο

PCA3

μεταγραφής [10]. Στην παρούσα μελέτη, surprisedly διαπίστωσε ότι η Α + Τ-πλούσια περιοχή εντός του

PCA3

υποκινητή περιείχε μια άκρως πολυμορφική περιοχή, μια STR πολυμορφισμός του (

ΤΑΑΑ

) n. Οι STRs επαναλαμβανόμενες αλληλουχίες DNA που περιέχουν 2 έως 6 μονάδες ζευγών βάσεων και διαδεδομένες σε όλη του ανθρώπινου γονιδιώματος και πολυμορφικών στη φύση. STRs είναι σημαντική γενετικούς δείκτες για τις μελέτες χαρτογράφησης, η διάγνωση της νόσου και την εγκληματολογική μελέτες. Με την εξέταση την ακολουθία περιοχής Α + Τ-πλούσια υποκινητή, εντοπίσαμε οκτώ STR πολυμορφισμών και βρήκε τη σύνδεση μεταξύ αυτών των πολυμορφισμών και τον κίνδυνο του προστάτη στην κινεζική πληθυσμό.

Τα αποτελέσματά μας πρότεινε ότι η επίπτωση του προστάτη ήταν στενά συνδεδεμένη με οι αριθμοί επανάληψη ΤΑΑΑ στον προαγωγό του PCA3, περισσότερο ΤΑΑΑ επαναλήψεις σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του προστάτη. Στην κινεζική πληθυσμό, τα άτομα που μεταφέρουν συνολικό 11 αριθμούς επανάληψη του

ΤΑΑΑ

σε αλληλόμορφα (ομάδα 11

ΤΑΑΑ

) είχαν 1,76 υψηλότερο κίνδυνο προστάτη (95% CI = 1,07 – 2,89) από εκείνες μεταφέρουν συνολική ≤10 αριθμούς επανάληψη του

ΤΑΑΑ

σε αλληλόμορφα (ομάδα ≤10

ΤΑΑΑ

). Η ομάδα ≥12

ΤΑΑΑ

συσχετίστηκε επίσης με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του προστάτη από την ομάδα ≤10

ΤΑΑΑ

(Πίνακας 2).

Η διαφορά της ευαισθησίας μπορεί να σχετίζεται με η διαφορά αλληλομόρφων συχνότητες

PCA3

STR πολυμορφισμών ανάμεσα στους ασθενείς του προστάτη και των ελέγχων. Είναι γνωστό ότι η έκφραση του

PCA3

είναι πολύ υψηλή στους ασθενείς PCa από ότι σε υγιή άτομα. Λόγω του

PCA3

υποστηρικτής δεν έχει

ΤΑΤΑ-κουτί

, υποθέσαμε ότι η μεταγραφή θα ξεκινήσει από άλλες θέσεις. Αντί

ΤΑΤΑ-κουτί

, η (

ΤΑΑΑ

) n πολυμορφική περιοχή μπορεί να είναι μία από τις μεταγραφικές θέσεις έναρξης. Ως εκ τούτου, η αύξηση των (

ΤΑΑΑ

) n επαναλήψεις στον υποκινητή του

PCA3

θα αυξήσει τα sites μεταγραφική έναρξη

PCA3

και up-ρύθμιση της έκφρασης του

PCA3

mRNA σε ασθενείς ΣΕΣΣ. Αυτό ήταν σε συμφωνία με τις προηγούμενες δημοσιευμένα δεδομένα μας [11], [12] και τα αποτελέσματα των Κλέτσκα, J. et al. [9], [13] – [15]. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο πολυμορφισμός του

ΤΑΑΑ

STR στον υποκινητή του

PCA3

ίσως είναι ένας δείκτης γενετικό κίνδυνο για την PCA στην πορεία κινεζική population.Of, αυτό το νόημα συμπεράσματα των καιρών reapet του

ΤΑΑΑ

μπορεί να διαμορφώνει

PCA3

έκφρασης εξακολουθούν να χρειάζονται την επιβεβαίωση της έρευνας συσχέτισης από διαφορετικούς τύπους γενετικό πολυμορφισμό και το

PCA3

mRNA έκφραση σε ατομικές ή υποψήφιους έρευνα συσχέτισης.

η μελέτη μας έχει μια σειρά από σημαντικούς περιορισμούς, η σημαντικότερη των οποίων είναι μικρού μεγέθους του δείγματος της, είναι τόσο πρόσθετες μεγαλύτερες μελέτες που απαιτούνται για την παροχή περαιτέρω διορατικότητα σε αυτά τα προκαταρκτικά συμπεράσματα. Είναι επίσης σημαντικό να σημειωθεί ότι πρόκειται για μια προοπτική μελέτη που πραγματοποιήθηκε σε περιφερειακό πανεπιστημιακό νοσοκομείο πάνω από πέντε χρόνια και περιπτώσεις ασθενών προστάτη δεν είναι πολύ συχνές. Δεδομένου ότι ο κινεζικός πληθυσμός γενικά είναι γενετικά πιο ομοιογενής από ό, τι άλλες εθνοτικές πληθυσμούς, προβλέπουμε παρόμοια ευρήματα σε μεγαλύτερα μεγέθη δειγμάτων σε ολόκληρη την Κίνα, αλλά η εφαρμογή των ευρημάτων μας σε άλλες πληθυσμιακές ομάδες θα χρειαστεί περαιτέρω έρευνα σε διάφορους πληθυσμούς ασθενών πριν μπορούν να επεκταθούν σε γενικές γραμμές αυτά τα δεδομένα σε άλλες εθνότητες.

Εν κατακλείδι, η μελέτη μας δείχνει μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ

PCA3

υποστηρικτής STR γενετικών πολυμορφισμών και PCA σε κινεζικά πληθυσμούς. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η

STRs PCA3

υποστηρικτής είναι γενετικός παράγοντας ευαισθησίας για προστάτη και οι STRs θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα ρόλο στην ανάπτυξη αυτού του καρκίνου, αυτό θα δώσει ενδείξεις για μια πιλοτική μελέτη της καρκινογένεσης και την ανάπτυξη του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

ηθική δήλωση

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του πρώτου συνδεδεμένες νοσοκομείο του Wenzhou Medical College, Κίνα, και ήταν σύμφωνα με τη δήλωση του Ελσίνκι . Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε έναν από τους συμμετέχοντες κατά τη στιγμή της εγγραφής.

Σχεδιασμός μελέτης και ασθενείς

Για τη μελέτη αυτή, 186 ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στο Τμήμα Χειρουργικής το πρώτο συνδεδεμένες νοσοκομείο του Wenzhou Ιατρικό Κολέγιο μεταξύ Αυγούστου 2004 και Σεπτεμβρίου 2009 επιλεγεί εκ των υστέρων. ασθενείς προστάτη WRE επιβεβαιώνεται από την ιστοπαθολογική αξιολόγηση, κάθε όγκου βαθμολογήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα βαθμολόγησης Gleason από δύο γιατρούς παθολογία. Επιπλέον, 135 υγιή άτομα ελέγχου συμπεριελήφθησαν να προσδιοριστεί η κατανομή των πολυμορφισμών σε ένα φυσιολογικό πληθυσμό. Οι έλεγχοι επιλέχθηκαν από τους άνδρες καλούνται να συστηματικό έλεγχο της υγείας, σύμφωνα με την πρόταση της εθνικής ασφάλιση υγείας, πραγματοποιούνται στις ίδιες γεωγραφικές περιοχές από τα νοσοκομεία όπου συλλέχθηκαν οι περιπτώσεις. Αυτά ελέγχθηκαν με δακτυλική εξέταση (DRE), τιμή PSA τους έπρεπε να είναι μικρότερο από 4 ng /ml, και θα μπορούσαν να παρουσιάζουν κανένα σημάδι προστάτη. Δυστυχώς, δεν γνωρίζουμε ότι ένας άνθρωπος με μια φυσιολογική DRE και ένα φυσιολογικό PSA δεν θα αναπτυχθεί προστάτη στο μέλλον. Στατιστικά, οι παρατηρήσεις αυτές ωθούν τη μελέτη κατά την εύρεση μια σημαντική διαφορά μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχων, δεδομένου ότι ορισμένοι έλεγχοι θα πρέπει καρκίνωμα του προστάτη διαγιγνώσκεται στο μέλλον. Ενώ αρσενικά δείγματα ήταν αντιπροσωπευτικά του γενικού κλινικό πληθυσμό, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε λαθραία ιστορίες της ασθένειας του προστάτη μεταξύ της ομάδας ελέγχου. Ωστόσο, όπως ιστορίες δεν πρέπει να είναι πιο συχνές από ό, τι σε μια τυχαία, μη-ουρολογικές πληθυσμού κλινική.

DNA εξόρυξη

Πέντε χιλιοστόλιτρα φλεβικού αίματος συλλέχθηκαν σε EDTA ως πηγή των λευκοκυττάρων του περιφερικού αίματος . Γονιδιωματικό DNA εκχυλίστηκε και καθαρίστηκε σύμφωνα με καθιερωμένα πρωτόκολλα χρησιμοποιώντας το QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany).

αλληλουχίας και ανάλυση των πολυμορφισμών

DNA εκχυλίστηκε από 500 μΙ αρχειοθετηθεί ολικού αίματος με τη χρήση του QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany). Η

PCA3

προαγωγός ενισχύθηκε με PCR, με βάση την αλληλουχία του

PCA3

γονίδιο που παρουσιάζονται στην GenBank αριθμός πρόσβασης AL359314.14 και AF279290.1 ​​με Taq πολυμεράση (Qiagen, Hilden, Γερμανία ) με τους ακόλουθους εκκινητές: 5′-GAT GGG AAC TCA CAT TTG G-3 ‘(προς τα εμπρός) και 5′-CTG ATG CCA GCT TCT CG – 3’ (αντίστροφο). PCRs διεξήχθησαν σε 50 μL μείγματος αντίδρασης που περιέχει 1 μλ εκχυλίζεται DNA? 5 μL 10ΧPCR Buffer (100 mmol /L Tris-HCL (ρΗ 9.2))? 3 μL MgCl2 (25 mmol /L)? 5 μL dNTP (2 mmol /L)? 2 μί προς τα εμπρός και αντίστροφου εκκινητή (5 μmol /L), αντίστοιχα? 0.4 μλ Taq πολυμεράσης? και 31,6 μL αποσταγμένο νερό. Οι συνθήκες PCR είχαν ως εξής: 95 ° C για 4 λεπτά και στη συνέχεια 40 κύκλους των 95 ° C για 1 λεπτό, 60 ° C για 30 δευτερόλεπτα, 72 ° C για 1 λεπτό, και που ακολουθείται από επέκταση στους 72 ° C για 10 λεπτά. Όλα τα προϊόντα της PCR υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης 1,5%. Ενισχυμένα θραύσματα καθαρίστηκαν με QIAquick Spin PCR Καθαρισμός Kit (Qiagen, Hilden, Γερμανία), στη συνέχεια εστάλησαν στην Invitrogen Corporation στη Σαγκάη για την κλωνοποίηση και προσδιορισμό αλληλουχίας χωρίς πληροφορίες σχετικά με τα δείγματα και τη γνώση της μελέτης.

Στατιστικές ανάλυση

Χρησιμοποιήσαμε το στατιστικό Πακέτο Κοινωνικών Επιστημών για τα Windows (έκδοση 13.0? SPSS Inc, Chicago, IL, USA) για στατιστική ανάλυση. Οι τιμές για την ηλικία αναφέρονται ως μέσος όρος ± SD. Η στατιστική ανάλυση της ηλικίας διεξήχθη από το μη συζευγμένο t-τεστ. Μια chi-square test εφαρμόστηκε για την ανάλυση πολλαπλής πίνακα. κίνδυνοι γονότυπο-ειδικό εκτιμήθηκαν ως λόγοι πιθανοτήτων (OR) με συνδεδεμένες διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (ΠΙ) με chi-square test πιθανή απόκλιση των συχνοτήτων γονοτύπου από προστάτη και των ελέγχων που αναμένονται υπό ισορροπία Hardy-Weinberg εκτιμήθηκε από το chi-square test . δοκιμές συσχετισμού κατάταξη Spearman χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί κατά πόσον υπάρχει σχέση μεταξύ PCA3 υποστηρικτής STR πολυμορφισμό και το σκορ Gleason στη ΣΕΣΣ. δηλώσεις Σημασία αναφέρονται σε τιμές Ρ του 2-tailed δοκιμών που ήταν λιγότερο από 0,05.