Αφηρημένο

σχηματισμό μετάσταση είναι ο κύριος λόγος για την εξαιρετικά φτωχή πρόγνωση σε μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (SCLC) ασθενείς. Τα μοριακά εταίροι αλληλεπίδραση ρυθμίζει σχηματισμού μετάστασης σε SCLC είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστος, ωστόσο, από άλλες οντότητες του όγκου είναι γνωστό ότι τα καρκινικά κύτταρα χρησιμοποιούν τα μόρια προσκόλλησης του καταρράκτη προσκόλλησης λευκοκυττάρων να προσκολληθούν στο ενδοθήλιο στη θέση του μέλλοντος μετάστασης. Χρησιμοποιώντας την ανθρώπινη ΟΗ-1 γραμμή SCLC ως μοντέλο, βρήκαμε ότι αυτά τα κύτταρα εξέφρασαν θέσεις δέσμευσης Ε- και Ρ-σελεκτίνης, η οποία θα μπορούσε να είναι εν μέρει αποδοθεί στο μοτίβο σύνδεσης υδατάνθρακα σιαλυλ Lewis A. Επιπλέον σελεκτίνης, η ραχοκοκαλιά πρωτείνης που είναι γνωστό ότι μεταφέρουν αυτά glycotopes σε άλλες κυτταρικές σειρές συμπεριλαμβανομένης της PSGL-1, CD44 και CEA θα μπορούσε να ανιχνευθεί σε

in vitro

και

in vivo

καλλιεργούνται κύτταρα OH1 SCLC. Με έμβια μικροσκοπία mesenterial αγγείων ποντικού θα μπορούσαμε να συλλάβει κύτταρα SCLC ενώ τροχαίο μαζί τοιχώματα των αγγείων που αποδεικνύουν ότι SCLC κύτταρα που μιμούνται λευκοκυττάρων τροχαίο συμπεριφορά από την άποψη της αλληλεπίδρασης συνδετήρα σελεκτίνης και σελεκτίνη in vivo δείχνουν ότι ο μηχανισμός αυτός θα μπορούσε πράγματι να είναι σημαντικό για SCLC κύτταρα στους σπόρους προς σπορά απομακρυσμένες μεταστάσεις . Κατά συνέπεια, ο σχηματισμός της αυθόρμητης απομακρυσμένων μεταστάσεων μειώθηκε κατά 50% όταν τα κύτταρα ΟΗ-1 ξενο-μεταμόσχευσις σε Ε- /Ρ-σελεκτίνης-ανεπαρκή ποντίκια σε σύγκριση με ποντικούς άγριου τύπου (ρ = 0,0181). Ωστόσο, όπως ο σχηματισμός μετάστασης δεν ήταν εντελώς καταργήθηκε το σελεκτίνης ανεπαρκή ποντίκια, καταλήξαμε στο συμπέρασμα ότι αυτή η αλληλουχία πρόσφυσης είναι περιττή και ότι άλλα μόρια αυτού του καταρράκτη μεσολαβούν σχηματισμό μεταστάσεων, καθώς και. Χρησιμοποιώντας πολλά από αυτά τα μόρια προσκόλλησης ως συνεργάτες αλληλεπίδρασης πιθανώς να SCLC κυττάρων τόσο πολύ μεταστατικό

Παράθεση:. Heidemann F, Schildt Α, Schmid Κ, Bruns OT, Riecken Κ, Jung C, et al. (2014) Σελεκτίνες Προκαλούν μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα Συστημικού μετάσταση. PLoS ONE 9 (4): e92327. doi: 10.1371 /journal.pone.0092327

Επιμέλεια: Ανδρέας-Κλαύδιος Hoffmann, της Δυτικής Γερμανίας Κέντρο Καρκίνου, Γερμανία

Ελήφθη: 22 του Νοεμβρίου του 2013? Αποδεκτές: 21 Φεβρουαρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 3 Απριλίου, 2014

Copyright: © 2014 Heidemann et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Bundesministerium für Bildung und Forschung (γάτος, χορηγεί αριθμό 01EZ0824? https://www.bmbf.de/) και Landesexzellenzinitiative Αμβούργο (Νανοτεχνολογίας στην Ιατρική – ΟΝΟΜΑ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (SCLC) αντιπροσωπεύει σήμερα το 13% όλων των τύπων καρκίνου του πνεύμονα και είναι η πιο επιθετική όλων των φορέων του πνεύμονα όγκου [1]. Λόγω της ταχείας όγκου του χρόνου και στις αρχές αιματογόνος εξάπλωση διπλασιασμό, το 5-ετή επιβίωση παραμένει κάτω από το 5% με διάμεση επιβίωση της μόλις λίγους μήνες [2], [3]. SCLC τυπικά μεθίσταται στον εγκέφαλο, το ήπαρ, μυελό των οστών ή τα επινεφρίδια. Επειδή ο σχηματισμός μεταστάσεων είναι γενικά η κύρια αιτία για το θάνατο του καρκίνου και με βάση το γεγονός ότι η θεραπευτική πρόοδος στην SCLC δεν αύξησε εντυπωσιακά τη μακροπρόθεσμη επιβίωση των ασθενών, μια πιο λεπτομερή επισκόπηση στο μεταστατικό καταρράκτη SCLC απαιτείται επειγόντως.

Μετάσταση – ως το σήμα κατατεθέν του καρκίνου – είναι μια διαδικασία πολλών σταδίων αρχίζοντας με την ανεξέλεγκτη ανάπτυξη ενός πρωτογενούς κυττάρου όγκου που υπερνικά την βασική μεμβράνη και στέλνει αγγειογενετική σήματα έτσι ώστε νέα αιμοφόρα αγγεία αναπτύσσονται στην κυτταρική μάζα πρωτογενούς όγκου [4], [5]. Ένα υποσύνολο των κυττάρων του όγκου αποκολλάται από τον πρωτογενή όγκο και εισέρχεται στην κυκλοφορία. Τα κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων πρέπει να ξεφύγουν από το ρεύμα του αίματος να εισβάλουν στο συνδετικό ιστό ενός μακρινού οργάνου. Ως εκ τούτου κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων αλληλεπιδρούν με την κανονική ενδοθήλιο στη θέση του οργάνου στόχου σε ένα λευκοκυττάρων παρόμοιο τρόπο. Αφού έχουν transmigrated το ενδοθήλιο και έχουν εγκατασταθεί στο στρώμα συνδετικού ιστού, τα καρκινικά κύτταρα πρέπει να διαιρέσει πάλι, ώστε να σχηματίσει ένα κλινικά ανιχνεύσιμης μετάσταση [6], [7].

Τα λευκοκύτταρα χρησιμοποιούν έναν καταρράκτη κυτταρικής προσκόλλησης μόρια για να συνδέσετε και να μεταναστεύσουν ενδοθηλιακά κύτταρα, προκειμένου να καταθέσει στο στρώμα συνδετικού ιστού στο σημείο της φλεγμονής. Αυτή η αλληλουχία πρόσφυσης αποτελείται από μια σειρά αλληλένδετων βημάτων ξεκινώντας με πρόσδεση, ακολουθούμενη από έλαση, προσκόλληση, ενδοαυλική ανίχνευσης και έχει τελειώσει με παρακυτταρικής ή διακυτταρική μετανάστευση του ενδοθηλιακού κυττάρου [8]. Η αρχική κύλιση λευκοκυττάρων στην επιφάνεια του αυλού των ενδοθηλιακών κυττάρων μεσολαβείται από την ενδοθηλιακή πλευρά με μια τάξη πρωτεϊνών σύνδεσης υδατάνθρακα που ονομάζεται Ε- και Ρ- σελεκτινών. Αυτές οι δύο σελεκτίνες συνδέονται προς συνδετήρες υδατάνθρακα τους επί των λευκοκυττάρων σε ένα Ca

2 + – εξαρτώμενο τρόπο. Ο καθοριστικός παράγοντας υδατανθράκων αποτελείται από σιαλυλο Lewis

X ή σιαλυλ Lewis

τετρασακχαρίτες A [9]. Γνωστά σελεκτίνης μεταφέρουν ραχοκοκαλιά πρωτεΐνης είναι PSGL-1, ESL-1 και CD44 [10]. Εκτός από λευκοκύτταρα [11], κυκλοφορούντα κύτταρα του όγκου έχουν δειχθεί ότι εκφράζουν τις γνωστές συνδετήρες σελεκτίνης [6], [7], [12]. Για παράδειγμα, οι πρωτεΐνες σκελετοί PCLP-1 και CEA (CEACAM5) επί του παχέος εντέρου και του προστάτη καρκινικά κύτταρα μπορούν να είναι γλυκοσυλιωμένα με δομές υδατανθράκων που δεσμεύονται με Ε-σελεκτίνη [13], [14], [15].

Η υπόθεση ότι η μετάσταση σχηματισμός διαμεσολαβείται από σελεκτίνες υποστηρίζεται από αρκετές αυθόρμητες μοντέλα μετάστασης των ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων ξενο-μεταμόσχευσις σε ποντικούς με ανοσοανεπάρκεια. ΗΤ29 κύτταρα καρκινώματος κόλου [16], καθώς και κύτταρα καρκινώματος μαστού DU4475 [17] που μεταμοσχεύονται σε Ε- /P- σελεκτίνης ανεπαρκή ποντίκια έδειξαν μια σημαντικά μειωμένη αριθμός των αυθόρμητων μεταστάσεων στον πνεύμονα σε σύγκριση με σελεκτίνη που εκφράζουν άγριου τύπου ποντικούς. Θα μπορούσε επίσης να αποδειχθεί ότι περιτοναϊκή μετάσταση του αδενοκαρκινώματος παγκρεατικού μειώθηκε σε Ε- /P- ανεπαρκή ποντίκια σελεκτίνης [18].

Πρόσφατα έρευνες της κυτταρικής γραμμής ΟΗ-1 που αντιπροσωπεύει την κλασική SCLC φαινότυπο [19] αποκάλυψε μια σταθερή προσκόλληση των κυττάρων ΟΗ-1 σε μια πρωτεΐνη σύντηξης Ε-σελεκτίνη κάτω από φυσιολογικές συνθήκες ροής. OH-1 κύτταρα εμφανίζονται θέσεις σύνδεσης σελεκτίνης, καθώς και χ σιαλυλ Lewis και PSGL-1 [20]. Ως εκ τούτου, η έρευνα μας επικεντρώθηκε στην επίδραση της σελεκτίνες στην ανάπτυξη των μεταστάσεων σε SCLC και το δυναμικό τους συνδετήρες σελεκτίνης επί SCLC κυττάρων.

Υλικά και Μέθοδοι

Η γραμμή κυττάρων

Η ανθρώπινο μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα καρκίνο κυτταρική σειρά ΟΗ-1 ελήφθη από υπεζωκοτική συλλογή και παραχωρήθηκε ευγενικά από τον Uwe Zangemeister-Wittke (Πανεπιστήμιο της Βέρνης, Τμήμα Φαρμακολογίας).

OH-1 κύτταρα καλλιεργήθηκαν

in vitro

χρησιμοποιώντας RPMI 1640 (Gibco /Life Technologies, Paisley, Σκωτία) συμπληρώνεται με 10% θερμικά αδρανοποιημένο εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS, Gibco), 2 mM Ε-γλουταμίνη (Gibco), 100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη (Gibco) υπό κανονικές συνθήκες καλλιέργειας κυττάρων (37 ° C, 100% σχετική υγρασία, 5% CO

2).

λεντοϊών μεταγωγή

Για βιοφωταύγεια απεικόνισης και έμβια μικροσκοπία ΟΗ -1-LUC κύτταρα /mCherry εκφράζουν τη λουσιφεράση από το

Photinus pyralis

και η φθορίζουσα πρωτεΐνη mCherry παρήχθησαν. Για το σκοπό αυτό, το cDNA Luc2 (Addgene πλασμίδιο # 24337) κλωνοποιήθηκε στην 3

ης γενιάς HIV1 φορέα που προέρχεται SIN Lego-IC2-Puro

+ [21]. Εκτός mCherry ως γονίδιο δείκτη, αυτό λεντοϊού φορέας εκφράζει πουρομυκίνη Ν-ακετυλο-τρανσφεράσης, που προσδίδει αντίσταση σε πουρομυκίνη. Λεντοϊών σωματίδια παρήχθησαν όπως περιγράφεται [22]. Εν συντομία, τα κύτταρα 293Τ συν-επιμολύνθηκαν με το πλασμίδιο φορέα LEGO-IC2-Puro

+ – Luc2 και τα πλασμίδια συσκευασίας pHCMV-VSV-G, pMDLg /pRRE και pRSV-Rev με καταβύθιση φωσφορικού ασβεστίου. Τα υπερκείμενα που περιέχουν λεντοϊού σωματίδια συλλέχθηκαν 24 ώρες μετά την επιμόλυνση. Λειτουργική τίτλοι μετρήθηκαν με ανάλυση FACS 3 ημέρες μετά την μεταγωγή των κυττάρων 293Τ. Για λεντοϊού μεταγωγή κυττάρων OH-1 1 × 10

5 κύτταρα /ml απλώθηκαν σε πλάκες 24 φρεατίων. Τα επόμενα υπερκείμενα ημερών που περιέχουν ιικά σωματίδια και 8 μg /ml Polybrene (Sigma) προστέθηκαν για 24 ώρες. Για την επιλογή των μετατραπέντων OH-1 κύτταρα, κανονικό μέσο καλλιέργειας συμπληρώθηκε με 2,5 μg /ml πουρομυκίνη.

Κυτταρομετρία Ροής

Για να αξιολογηθεί θέσεις πρόσδεσης και την πρωτεΐνη ραχοκοκαλιά τους κύτταρα επί του κυττάρου επιφάνεια του ΟΗ-1 κύτταρα, καλλιεργημένα κύτταρα OH-1-LUC /mCherry αποσπάστηκαν με Διαχωρισμού Κυττάρου Buffer (Gibco, Carlsbad, ΗΠΑ) και βάφτηκαν για σιαλυλ Lewis Α (Abcam, αραίωση 1:1000), CEA (Cell σηματοδότηση, αραίωση ίδιοι 1:200 sites), CD44 (Abd Serotec, αραίωση 1:1000), PSGL-1 (Santa Cruz, αραίωση 1:200), Ε- και Ρ-σελεκτίνης δέσμευσης χρησιμοποιώντας Ε- και πρωτεΐνες σύντηξης Ρ-σελεκτίνης (R &? D Systems, αραίωση για το E-σελεκτίνη 1:1000, για Ρ-σελεκτίνη 1:100), EpCAM (Dako, αραίωση 1:59), Muc18 (GeneTex, 1:1800) και ΝΟΑΜ (R &? D Systems, αραίωση 1: 1000). Οι αντίστοιχοι έλεγχοι ισοτύπου (IgG 1 για PSGL-1, EpCAM, Muc18, CEA, Ε- και Ρ-σελεκτίνης? IgG2a για CD44 και ΝΟΑΜ? IgM για σιαλυλο Lewis Α) επωάστηκαν παράλληλα. Η έκφραση του αντισώματος προσδιορίστηκε με τη ροή του FACS Calibur κυτταρομετρητή (Becton Dickinson, Χαϊδελβέργη, Γερμανία) και αναλύθηκε με Win MDI 2.9 του λογισμικού.

In vivo

καλλιεργούνται ΟΗ 1-κύτταρα από ένα πρωτεύον OH- 1-Luc /mCherry όγκου ερευνήθηκαν με ανάλυση FACS. Τα κύτταρα διπλά επισημασμένου για αντι-CEA και έναν άνθρωπο Ε- ή Ρ-σελεκτίνης πρωτεΐνη σύντηξης.

έμβια συνεστιακή μικροσκοπία

για έμβια μικροσκοπία, έντερο αποκόπηκε σε κεταμίνη /ξυλαζίνη (230 mg /kg και 20 mg /kg σωματικού βάρους) αναισθητοποιούνται ποντίκια PfP /rag2 και mesenterial φλέβες οπτικοποιήθηκαν με ένα συνεστιακό μικροσκόπιο εξοπλισμένο με ένα συντονιζόμενο σαρωτή (Nikon A1R). Για την επαγωγή της έκφρασης του Ε- και Ρ-σελεκτίνες στην κορυφαία επιφάνεια των ενδοθηλιακών κυττάρων, τα ποντίκια έλαβαν ί.ρ. ένεση του ΤΝΡ-α ποντικού τρεις ώρες πριν από την έρευνα. κύτταρα OH-1-LUC /mCherry εγχύθηκαν μέσω καθετήρα καρωτιδικής φλέβας, και 30 συνεστιακή εικόνων ανά δευτερόλεπτο καταγράφηκαν. Ταυτόχρονα, mesenterial φλέβες παρατηρήθηκαν και mCherry-επισημασμένο ΟΗ-1 κύτταρα ορατά με φωτισμό φθορισμού και καταγράφεται για 15 λεπτά με σχέδιο fluo λάδι x40 /1.3 ΝΑ αντικειμενικό φακό και με το μήκος κύματος διέγερσης λέιζερ 561 nm και το φίλτρο εκπομπής 595 nm για mCherry, και με το μήκος κύματος διέγερσης των 638 nm και το φίλτρο εκπομπής 640 nm για τον τρόπο ανάκλασης. Αργότερα, το αποκτήσει δεδομένα αναλύθηκαν. Λευκοκύτταρα ταυτοποιήθηκαν ως μη φθορίζοντα αντικείμενα έλασης, τα κύτταρα OH-1-LUC /mCherry όπως κόκκινα φθορίζοντα κύτταρα. Κάθε τροχαίο περίπτωση OH-1-LUC κύτταρα /mCherry κατά τη διάρκεια της εγγραφής προσδιορίστηκε. Επιπλέον, το κυλιόμενο ταχύτητα των λευκοκυττάρων και των κυττάρων του όγκου υπολογίστηκε (NIS-Elements). Οι εγγραφές που επισυνάπτεται ως συμπληρωματική βίντεο.

ξενομεταμόσχευση OH-1 και OH-1-LUC /mCherry κύτταρα σε ποντικούς με ανοσοανεπάρκεια

Όλα τα ζώα διατηρήθηκαν σε ένα παθογόνο περιβάλλον χωρίς με κορυφαία φίλτρο κλουβιά , τροφοδοτείται με αποστειρωμένο νερό και τροφή κατά βούληση και συνεχώς παρατηρούνται και σταθμίζονται. Όλοι οι χειρισμοί πραγματοποιήθηκαν υπό άσηπτες συνθήκες. Για τον εμβολιασμό, ΟΗ-1 ή OH-1-LUC /mCherry κύτταρα θρυψίνωση και τα βιώσιμα κύτταρα (5 × 10

6) αιωρήθηκαν σε 1 ml μέσου κυτταρικής καλλιέργειας άνευ FCS. Κάθε ποντικός ανοσοανεπάρκεια (στελέχη: PfP /rag2, Ε /Ρ-σελεκτίνης με ανεπάρκεια PfP /rag2, SCID) έλαβε υποπολλαπλάσιο 200 μΙ αυτού του εναιωρήματος εγχύθηκαν υποδορίως μεταξύ των ωμοπλατών ενώ ναρκώνονται με CO

2 /O

2 – αναισθησία. Κατά την έναρξη των ποντικών του πειράματος ήταν ηλικίας μεταξύ 15 και 27 εβδομάδων και το βάρος κυμάνθηκε μεταξύ 17,4 g και 32,4 g.

Η μαγνητική τομογραφία (MRI) και βιοφωταύγεια απεικόνισης (BLI) των πρωτογενών όγκων και μεταστάσεων αυθόρμητη

Για την ανίχνευση των αυθόρμητων απομακρυσμένων μεταστάσεων

in vivo

, κύτταρα OH-1-LUC /mCherry εγχύθηκαν υποδορίως εντός δΟΙϋ ποντικών (η = 3). Λευκό γούνα του SCID ποντικών με ένα υπόβαθρο Balb /c διευκόλυνε την ανίχνευση του σήματος φωταύγειας που απορρέουν από λουσιφεράσης-θετικά κύτταρα OH-1-LUC /mCherry. MRI και BLI διεξήχθησαν 18 ημέρες μετά την εμφύτευση των κυττάρων του όγκου. Για MR απεικόνιση ενός 7-Tesla Bruker Clinscan MRI ζώων σαρωτή (Bruker BioSpin MRI GmbH, Ettlingen, Γερμανία) καθώς και δύο διαστάσεων turbo-ηχούς σπιν ακολουθία (ΜΣΕ) (αξονικό προσανατολισμό των εικόνων MR) χρησιμοποιήθηκαν, ενώ ρυθμίζει τη ποντικού θερμοκρασία του σώματος με ένα σύστημα θέρμανσης θερμοστοιχείο. Για την απεικόνιση βιοφωταύγειας, λουσιφερίνη (Sigma-Aldrich) εγχύθηκε ενδοπεριτοναϊκά (150 mg λουσιφερίνη /kg σωματικού βάρους) και εκπομπή φωτονίων μετρήθηκε με IVIS 200 σύστημα (Xenogen, CA, USA). Στις 54

ης ημέρας μετά OH-1-LUC /ένεση κύτταρο mCherry, ο πρωτογενής όγκος είχε χειρουργικά και στη συνέχεια σε επεξεργασία για ιστολογία. Την ημέρα μετρήθηκαν 117 σήματα φωταύγειας

in vivo

δεύτερη φορά. Λίγο αργότερα οι ποντικοί τελικά αναισθητοποιήθηκαν με κεταμίνη /ξυλαζίνη (400 mg /kg και 35 mg /kg σωματικού βάρους) και του πρωτογενούς όγκου και των οργάνων (πνεύμονας, καρδιά, το πόδι) απομακρύνθηκαν για

ex vivo

απεικόνισης φωταύγειας και στη συνέχεια σε επεξεργασία για ιστολογία. Για όλες τις διαδικασίες που αναφέρθηκαν εκτός θυσιάζει, ποντίκια όπου αναισθητοποιούνται με εισπνεόμενη ισοφλουράνη (1,5-2%).

μεταστάσεις του OH-1-LUC /mCherry και ΟΗ-1 κύτταρα σε σελεκτίνης με ανεπάρκεια και άγριου τύπου ποντίκια

ποντίκια με ανοσοανεπάρκεια PfP /rag2 και ελλιπής Ε /Ρ-σελεκτίνης ποντίκια PfP /rag2 χρησιμοποιήθηκαν [17]. Για την μετάσταση του ΟΗ-1 κύτταρα 3 PfP /rag2 και ελλιπής 5 Ε /Ρ-σελεκτίνης PfP /ποντίκια rag2 (παλαιό 27 έως 32 εβδομάδες) χρησιμοποιήθηκαν. Τα ποντίκια θυσιάστηκαν όταν απέτυχε το σύστημα βαθμολογίας υγείας UKCCCR ή όγκοι άρχισαν να έλκω. Οι πρωτογενείς όγκοι και οι πνεύμονες αποκόπηκαν και μονιμοποιήθηκαν σε 4% φορμαλίνη για περαιτέρω διερεύνηση.

Για την μετάσταση του ΟΗ-1-LUC κύτταρα /mCherry 20 PfP /rag2 και 20 Ε /Ρ-σελεκτίνης με ανεπάρκεια PfP /rag2 χρησιμοποιήθηκαν ποντικοί (ηλικίας 15 σε 27 εβδομάδες). Μεταξύ ημέρες 32 και 41 μετά την ένεση των κυττάρων OH-1-LUC /mCherry, ο πρωτογενής όγκος είχε χειρουργικά και στη συνέχεια σε επεξεργασία για ιστολογία. Τα ζώα έζησαν μέχρι να αποτύχει το σύστημα βαθμολογίας υγείας UKCCCR και τελικά αναισθητοποιήθηκαν με κεταμίνη /ξυλαζίνη (400 mg /kg και 35 mg /kg σωματικού βάρους) και λουσιφερίνης ήταν ε.π. εφαρμοσμένος. Πνεύμονα, το πόδι και η καρδιά αφαιρέθηκαν για

ex vivo

φωταύγεια απεικόνισης και στη συνέχεια υποβάλλονται σε επεξεργασία για ανοσοϊστοχημεία

Ιστολογίας

Για αιματοξυλίνη /ηωσίνη (Η & amp? Ε). Χρώση και ανοσοϊστοχημεία, σταθεροποιημένα με φορμαλίνη ιστοί εγκλείστηκαν σε παραφίνη κηρού σύμφωνα με πρότυπες εργαστηριακές διαδικασίες. Πέντε μm πάχους τομές κόπηκαν χρησιμοποιώντας ένα έλκηθρο μικροτόμου (Techno Med. GmbH, Bielefeld). Κάθε 10η τομή του κάθε πνεύμονα φυλάχτηκε για Η &? Ε χρώση και επιπροσθέτως δύο σειρές των 20 ακόλουθα τμήματα έξω από το μέσον κάθε πνεύμονα διατηρήθηκαν για ανοσοϊστοχημεία. χρώση H /E διεξήχθη σύμφωνα με τις τυποποιημένες εργαστηριακές πρωτόκολλο. Δέκα H /E τομές έξω από το κέντρο του κάθε πνεύμονα εξετάσθηκαν μέσω μικροσκοπίου φωτός στα 400 χ μεγέθυνση, ενώ τα πλακίδια τυφλωθεί για την εξέταση. Η ποσοτική εκτίμηση των πνευμονικών μεταστάσεων πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [23].

Ανοσοϊστοχημεία

Οι τομές παραφίνης αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν και θεραπεία για ανάκτηση αντιγόνου. Τα αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν ως εξής αντι-ΕρΟΑΜ (κλώνος MOC31, DakoCytomation, Carpinteria, USA), αντι-CD44 (MCA2726T, Abd Serotec, Düsseldorf, Γερμανία), αντι-ΟΕΑ (# 2383, Cell σηματοδότηση, Beverly, ΜΑ, USA) και αντι PGP9.5 (Dako, Αμβούργο, Γερμανία). Για χρώση αντισώματος αντι-ΕρΟΑΜ, οι τομές επωάστηκαν με Τύπος XXIV Πρωτεϊνάση (Sigma, Aldrich, Steinheim, Γερμανία). Για αντι-CD44 αντίσωμα και χρώση αντισώματος αντι-ΟΕΑ είχαν μικροκύματα σε 10 mM κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6.0). Heat-προκαλούμενη ανάκτηση επιτόπιου για χρώση αντίσωμα αντι-PGP9.5 εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας Dako Target Ανάκτηση Sol. S3307. Μετά από πλύση με TBS, μη-εξειδικευμένη σύνδεση παρεμποδίστηκε από 30 λεπτά επώασης είτε με 10% φυσιολογικό ορό κουνελιού (Dako, X0902, Hamburg, Germany) για αντι-CD44, αντι-ΟΕΑ και αντι-ΕρΟΑΜ (Dako, Αμβούργο, Γερμανία) ή 10% ορό των χοίρων για αντι-PGP9.5 (Dako, Αμβούργο, Γερμανία), αντίστοιχα. Οι τομές επωάστηκαν για 60 λεπτά σε ίσες συγκεντρώσεις των πρωτογενών αντισωμάτων και αντίστοιχους ελέγχους ισοτύπου οποία χρησίμευσε ως αρνητικοί έλεγχοι: CD44 (1:25 αραίωση) και έλεγχος ισοτύπου IgG του

2b, CEA (αραίωση 1:100) και ισότυπου έλεγχος IgG

1 ποντικού, EpCAM (1:35) και έλεγχος ισοτύπου IgG1 ποντικού καθώς PGP9.5 (1:200) και IgG κουνελιού ισότυπο αναφοράς της, αντίστοιχα. Όλα τα αντισώματα αραιώθηκαν σε Dako Antibody Diluent (S2022, S3022). Μετά εντατική πλύση σε TBS, οι τομές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ένα αντίσωμα αντι-ποντικού βιοτινυλιωμένο κουνελιού για CD44, CEA και EpCAM ή χοίρων αντίσωμα αντι-κουνελιού για PGP9.5 σε μια αραίωση 1:200 για 30 λεπτά, αντίστοιχα, που ακολουθείται από επώαση με σύμπλοκο φωσφορικού αβιδίνης-αλκαλικής (ABC Kit, Vectastain, Vector, Burlingame, CA) για 30 λεπτά. Μετά από περαιτέρω πλύσεις, η δράση της αλκαλικής φωσφατάσης έγινε ορατή χρησιμοποιώντας ναφθόλη-AS-bisphosphat ως υπόστρωμα και η Νέα φουξίνη ως χρωμογόνο. Οι τομές βάφτηκαν αντίθετα με und hemalum Mayer είναι τοποθετημένη με Aquatex (Merck KGaA, Darmstadt, Germany). Τομές φωτογραφήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φωτογραφία εξοπλισμένο με μια ψηφιακή φωτογραφική μηχανή (Αχίορίαπ 2 με MRC5 ψηφιακή φωτογραφική μηχανή, Zeiss Göttingen, Γερμανία).

ιστών πολλαπλών συστοιχιών clincal δείγματα

ιστών πολλαπλών συστοιχιών (TMA) του SCLC πρωτογενών όγκων δόθηκαν από Katharina Schmid, Κλινική Ινστιτούτο Παθολογίας, Ιατρική Σχολή Πανεπιστημίου της Βιέννης, στην Αυστρία. Ένα σύνολο 70 μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη, εγκλεισμένους σε παραφίνη ιστούς καρκίνου του πνεύμονα από ασθενείς που είχαν υποβληθεί σε χειρουργική επέμβαση συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Περιπτώσεις που είχαν επιλεγεί μεταξύ των ετών 1986 και 2005 περιλαμβάνονται 43 άνδρες και 27 γυναίκες ασθενείς. Ο μέσος όρος ηλικίας της κοόρτης ασθενών ήταν 63 ± 10,7 (εύρος 35-92 έτη). Περιπτώσεις ταξινομήθηκαν σύμφωνα με την ταξινόμηση του ΠΟΥ καρκίνο του πνεύμονα το 2004. Τα χαρακτηριστικά του πληθυσμού υπό μελέτη συνοψίζονται στον πίνακα 1.

Η

Η ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση της TMA

Τα επίπεδα έκφρασης CEA και CD44 αξιολογήθηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο (Zeiss, Αχίορίαπ 2, Göttingen, Γερμανία) από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές (ΜΗ και των ΗΠΑ) τύφλωσε με τα κλινικά δεδομένα. Αν υπάρχει συναίνεση επιτεύχθηκε σε πρώτο βαθμό, υποθέσεις συζητήθηκαν μέχρι να επιτευχθεί συμφωνία παρατηρητές ». Χρώση επίπεδα ταξινομήθηκαν σύμφωνα με την ένταση χρώσης (αρνητικά, μέτρια και ισχυρή χρώση). Δείγματα θεωρήθηκαν θετικά αν & gt?. 50% των καρκινικών κυττάρων ήταν μέτρια ή έντονα χρωματισμένο

Η στατιστική ανάλυση

καμπύλες

Η επιβίωση κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και σε σύγκριση με το log-rank δοκιμή. Ένα δύο-ουρά P & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού GraphPad Prism (Graphpad Software, Inc., CA, USA).

Ηθική Δήλωση

Η μεθοδολογία για τη διεξαγωγή των πειραμάτων σε ζώα ήταν σύμφωνη με τις κατευθυντήριες γραμμές UKCCCR για η καλή διαβίωση των ζώων στην έρευνα για τον καρκίνο. Το πείραμα που εποπτεύονται από το θεσμικό αξιωματικός καλή μεταχείριση των ζώων και έχει εγκριθεί από την τοπική αρχή αδειοδότησης (Behörde für Soziales, Familie, Gesundheit und Verbraucherschutz?. Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, Αμβούργο, Γερμανία, έργο δεν 92/09).

Αποτελέσματα

Πρόσφυση μόριο έκφραση του ΟΗ-1 SCLC κύτταρα αναπτύσσονται

in vitro

η

Αρχικά διερευνήσαμε την παρουσία θέσεων πρόσδεσης Ε- και Ρ-σελεκτίνης, οι οποίες ήταν τόσο παρούσα στην ΟΗ-1 κύτταρα αναπτύχθηκαν

in vitro

(Εικ. 1). Για να αναλυθεί περαιτέρω η φύση αυτών των θέσεων σύνδεσης, ερευνήσαμε για την παρουσία Ε- και δεσμευτή Ρ-σελεκτίνης σιαλυλ Lewis Α, η οποία ήταν επίσης παρούσα. Στη συνέχεια αναλύσαμε για την πρωτεΐνη ραχοκοκαλιά των γνωστών σιαλυλ Lewis Α και σιαλυλ Lewis Χ φορείς δηλαδή CEA, PSGL-1 και CD44, τα οποία ήταν επίσης παρόντες. Επιπλέον, εξετάσαμε OH-1 για περαιτέρω μορίων κυτταρικής επιφάνειας που είναι γνωστό ότι εμπλέκονται σε μετάσταση σε άλλες οντότητες καρκίνο από SCLC. EpCAM, Muc18 καθώς και η νευρωνική μόριο προσκόλλησης θα μπορούσε επίσης να ανιχνευθεί NCAM σε υψηλό επίπεδο έκφρασης.

ΟΗ-1 κύτταρα, ως μια κυτταρική γραμμή του νευροεξωδερμικής προέλευσης, είναι θετικά για NCAM και EpCAM, η οποία θα μπορούσε να είναι ανιχνεύονται με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής και μπορεί έτσι να χρησιμεύσει ως δείκτης για αυτά τα κύτταρα όταν αναπτύσσονται σε ποντικούς. Κύτταρα εμφανίζουν πρόσδεση σε Ε- και πρωτεΐνη σύντηξης Ρ-σελεκτίνης. Η σιαλυλ μοτίβο γλυκοζυλίωσης Lewis Α, ένας σύντροφος συνδέσεως που αναγνωρίζονται από τις σελεκτίνες, θα μπορούσε να ανιχνευθεί με το αντίσωμα CA19-9. Η κυτταρική γραμμή OH-1 εμφανίζει πολλές γνωστές πρωτεΐνες οι οποίες είναι γνωστό ότι είναι πρωτεΐνη ραχοκοκαλιά για σύνδεση υπολειμμάτων υδατανθράκων όπως PSGL-1, MUC18, CD44 και CEA σελεκτίνης. Οι έλεγχοι ισοτόπου εμφανίζονται ως διακεκομμένες γραμμές.

Η

Ε και δέσμευση των SCLC κυττάρων Ρ-σελεκτίνη αυξηθεί

in vivo

Η

Με τη χρήση της ανάλυσης FACS (Σχ. 2) ερευνήσαμε αν

in vivo

καλλιεργούνται OH-1 κύτταρα των πρωτογενών ξενομοσχευμένων όγκων έχουν διατηρήσει την ικανότητα να δεσμεύονται σε πρωτεΐνες σελεκτίνες σύντηξης. Κύτταρα που συλλέχθηκαν από πρωτογενή OH-1-LUC /mCherry όγκοι διπλά σημειωμένα με αντι-ΟΕΑ και έναν άνθρωπο Ε- ή Ρ-σελεκτίνης Χίμαιρα. Σχεδόν όλα τα κύτταρα (78%) ήταν θετικές για αντι-ΟΕΑ χρώση και δεσμευτική Ε-σελεκτίνη (Εικ. 2). Διπλή χρώση αντι-ΟΕΑ και την ανθρώπινη χίμαιρα Ρ-σελεκτίνης απεκάλυψε ότι το 36% των κυττάρων ήταν τόσο θετικοί για σύνδεση Ρ-σελεκτίνης και CEA (Σχ. 2C).

Απομονωμένα OH-1-LUC κύτταρα /mCherry πρωτογενών όγκων βάφτηκαν παράλληλα έναντι CEA και Ε- ή δεσμευτική και FACS αναλύθηκαν Ρ-σελεκτίνη. (Α) κύτταρα ΟΗ-1-LUC /mCherry έδειξε καμία δέσμευση σε ισοτόπου και FC-Χίμαιρα ελέγχους. (Β) Σχεδόν όλα τα κύτταρα ήταν CEA και Ε-σελεκτίνης θετικά, αντιθέτως (Γ) τα δύο τρίτα των κυττάρων ήταν δεσμευτικές αρνητικά Ρ-σελεκτίνης. Οι έλεγχοι ισοτόπου εμφανίζονται ως διακεκομμένες γραμμές.

Η

In vivo

συμπεριφορά των κυκλοφορούντων SCLC κυττάρων

κύτταρα OH-1-LUC /mCherry τροχαίο TNF-α θεραπεία τοιχώματα του δοχείου, όπως τα λευκοκύτταρα ταυτοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας γρήγορα έμβια μικροσκοπία συνεστιακή (σχήμα 3Α και Ταινία S1). Όπως βρήκαμε επίσης κύλισης λευκοκυττάρων, μετρήθηκαν το κυλιόμενο ταχύτητα και των δύο τύπων κυττάρων. Λευκοκύτταρα έδειξε μία μέση τροχαίο ταχύτητα περίπου 50 μm /sec και ΟΗ-1-LUC /κύτταρα mCherry 350 μm /sec (Σχ. 3Β). Έτσι, η μέση ταχύτητα κύλισης των κυττάρων OH-1-LUC /mCherry ήταν περίπου επτά φορές πιο γρήγορα από ότι των λευκοκυττάρων, υποδεικνύοντας ότι τα κύτταρα SCLC μιμούνται λευκοκύτταρα συμπεριφορά κύλισης, ωστόσο, σε μικρότερο προσκολλάται αποδοτικότητα.

Rolling συμπεριφορά των ένεση φθορίζοντα κύτταρα OH-1-LUC /mCherry (mCherry, κόκκινο) σε μεσεντέρια φλέβες (λειτουργία αντανάκλαση, γκρι) έγιναν ορατά σε πραγματικό χρόνο με μεγάλη ταχύτητα συνεστιακή έμβια απεικόνισης. (Α) Το κυλιόμενο συμπεριφορά ενός ΟΗ-1-LUC /mCherry κυττάρων παρατηρήθηκαν πάνω από 27 δευτερόλεπτα. (Β) Η μέση ταχύτητα του κυλιόμενου εγχέονται κύτταρα OH-1-LUC /mCherry και ενδογενών λευκοκυττάρων σε μεσεντερικά φλέβες προσδιορίστηκαν με υψηλής ταχύτητας ενδοζωικής απεικόνισης (Nikon A1R συνεστιακό μικροσκόπιο). μπαρ κλίμακα:. 500 μm για το (F) και (Η), 50 μm για το (G)

Η

SCLC μεταστατικές θέσεις σε ποντικούς με ανοσοανεπάρκεια

Για να διερευνηθεί η αυθόρμητη ιστοσελίδα μετάσταση του SCLC κύτταρα κύτταρα OH-1-LUC /mCherry εγχύθηκαν υποδορίως σε ποντικούς SCID ως ξενομόσχευμα. Προκειμένου να μη επεμβατικά επαληθεύει OH-1-LUC /mCherry πρωτογενούς

in vivo

ανάπτυξης του όγκου, MR και απεικόνιση βιοφωταύγειας διεξήχθησαν. Την ημέρα 18 μετά OH-1-LUC /mCherry εμβολιασμό η ύπαρξη της OH-1-LUC /mCherry πρωτοπαθούς όγκου, η οποία εμφανίστηκε ως υπερ εντατική αλλοίωσης σε αξονικές εικόνες MR Τ2, καταδείχθηκε στη θέση εμβολιασμού που βρίσκεται μεταξύ της ωμοπλάτης (Σχ. 4Α). Οι αντίστοιχες εικόνες βιοφωτισμός εμφανίζονται σήματα φωταύγειας που προέρχονται από τους όγκους OH-1-LUC /mCherry (Εικ. 4Β). Καθώς ο πρωταρχικός ανάπτυξη του όγκου ήταν πολύ γρήγορος για να εντοπίσει τις μικρές μεταστάσεις σε ένα μη επεμβατικό τρόπο, ο πρωτογενής όγκος εκτομήθηκε την ημέρα 54 μετά OH-1 εμβολιασμό και 63 ημέρες αργότερα οι ποντικοί νέας έρευνας για

in vivo

φωτοβολία. σήματα φωταύγεια μπορούσε να ανιχνευθεί στην περιοχή του ρύγχους, άνω μέρος του θώρακα και αριστερό πίσω πόδι (Εικ. 4C). Για να επικυρώσετε την παρουσία μεταστάσεων οι ιστοί στους χώρους αυτούς αποκόπηκαν μετά θυσιάζει των ζώων και η βιοφωταύγεια ήταν νέα έρευνα

ex vivo

. Εντατική σήματα θα μπορούσαν να επαληθευτούν στους πνεύμονες (Εικ. 4D) και άρθρωση του γόνατος (Εικ. 4Ε), ενώ η καρδιά δεν έδειξε κανένα σήμα (Εικ. 4D). Για να βεβαιωθείτε ότι βιοφωταυγείς περιοχές ήταν όντως μεταστάσεις, ιστολογική εξέταση πραγματοποιήθηκε. Vital καρκινικά κύτταρα στον όγκο OH-1-LUC /mCherry βρίσκονταν γύρω από μια κεντρική νέκρωση (Εικ. 4στ). Lung και οστικές μεταστάσεις θα μπορούσε να επιβεβαιωθεί γειτονικά στους υγιείς ιστούς.

κύτταρα OH-1-LUC /mCherry υποδορίως εμφυτευμένων (Α) και αναπτύχθηκαν ως πρωτογενής όγκος (α) για 18 ημέρες στο χώρο μεταξύ των ωμοπλατών (β) με μια εμφάνιση έντασης υπερ σε ένα δισδιάστατο turbo spin-echo (TSE) αλληλουχία (MR εικόνες σε αξονικό προσανατολισμό) και ένα σήμα θετικής βιοφωταύγειας (β) του αντίστοιχου OH-1-LUC /mCherry όγκου όπως σε πίνακας Α πρωτογενούς όγκου αφαιρέθηκε χειρουργικά 51 ημέρες μετά την ένεση των κυττάρων OH-1-LUC /mCherry. (F) αντίστοιχα τμήματα παραφίνης των εκτομή του όγκου αποκάλυψε ζωντανά κύτταρα όγκου (ε) γύρω από μια κεντρική νέκρωση (στ). (Γ) σήματα φωταύγειας μεταστατικά κύτταρα OH-1-LUC /mCherry in vivo ήταν ανιχνεύσιμα στους τομείς της ρύγχος, άπω μηριαίο οστό και το στήθος 117 ημέρες μετά την ένεση. Τα όργανα αφαιρέθηκαν και βιοφωταυγή σήματα επιβεβαιώθηκαν ex vivo. (Δ) Οι πνεύμονες έδειξε αρκετές κηλίδες φωταύγειας (γ), ενώ η καρδιά (δ) δεν έδειξε κανένα σημάδι φωταύγειας. (G) Η &? Ε χρώση αντίστοιχα τμήματα του πνεύμονα έδειξε μια μικρή μεταστατική κατάθεση περιβάλλεται από φυσιολογικό ιστό πνεύμονα (g). (Ε) Η φωταύγεια από την κνήμη στην άρθρωση του γόνατος θα μπορούσε να ανιχνευθεί και (Η) Η &? Ε χρώση ενός αντίστοιχου τμήματος οστού παραφίνης έδειξε μετάσταση OH-1-LUC κύτταρα /mCherry (i) δίπλα σε υγιείς μυελού των οστών (h). Ράβδοι κλίμακας: 500 μm για το (F) και (Η), 50 μm για το (G)

Η

Ο ρόλος της Ε- και Ρ-σελεκτίνης για μετάσταση

in vivo

από τα κύτταρα της θετικής SCLC κυτταρική σειρά CEA κύτταρα OH-1-LUC /mCherry μεταστάσεις με επιτυχία σε ποντίκια με ανοσοανεπάρκεια μελετήσαμε το ρόλο του Ε- /Ρ-σελεκτίνες για αυτή τη διαδικασία

in vivo

.

κύτταρα OH-1-LUC /mCherry εγχύθηκαν υποδορίως σε άγριου τύπου (wt) και Ε- /Ρ-σελεκτίνης με ανεπάρκεια knockout (επιλογή) ποντικούς. Τα προκύπτοντα όγκοι αποκόπηκαν μετά 31-41 ημέρες και το βάρος τους προσδιορίστηκε (Σχ. 5Α). Εμείς δεν θα μπορούσε να ανιχνεύσει οποιαδήποτε στατιστικώς σημαντική διαφορά μεταξύ των όγκων που αναπτύσσονται σε βάρος και επιλέξτε ποντίκια, δείχνοντας ότι η κατάσταση σελεκτίνης της ανοσοανεπάρκεια ποντικούς δεν επηρεάζουν άμεσα τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου. Όγκου εκτομή ποντίκια έζησαν μέχρι να φτάσει τα κριτήρια τερματισμού. Kaplan Meier καμπύλη επιβίωσης αποκάλυψε μια σημαντικά μειωμένη μέση επιβίωση των κ.β. (n = 20) ποντίκια σε σύγκριση με επιλεγμένα (n = 20) ποντίκια (test log-rank, p & lt? 0,0001) (σχήμα 5Β και Πίνακας 2).. Πνεύμονες και τα πόδια αφαιρέθηκαν και αναλύθηκαν ξεχωριστά για την ένταση βιοφωταύγεια. Θα μπορούσαμε να δείχνουν μια σημαντική διαφορά μεταξύ των οργάνων από κ.β. (n = 12) και επιλέξτε ποντικών (n = 18) με μειωμένο σήμα βιοφωταύγεια εντός των πνευμόνων (Εικ. 5C) και τα πόδια (Εικ. 5D) από τις σελεκτίνης-ανεπαρκή ποντίκια σε σύγκριση με wT, υποδεικνύοντας ένα σημαντικά μειωμένο μεταστατικό φορτίο στην ανεπαρκή ποντίκια σελεκτίνη (Mann-Whitney test, p = 0,0003).

κύτταρα OH-1-LUC /mCherry υποδόρια ένεση στο Ε- /Ρ-σελεκτίνης διπλό knockout ποντικών (επιλέξτε) ή ποντίκια σκουπίδια άγριου τύπου (wt) και όγκοι που προκύπτουν καλλιεργούνται για 31-41 ημέρες. Όγκοι αποκόπηκαν και σταθμίζονται. (Α) αριθ στατιστικά σημαντική διαφορά όσον αφορά το βάρος του όγκου θα μπορούσε να προσδιοριστεί (Students t test, p = 0,5025). Όγκου εκτομή ποντίκια έζησαν μέχρι να φτάσει κριτήρια τελικό σημείο. (Β) καμπύλη επιβίωσης Kaplan Meier παρουσιάζει σημαντικά μειωμένη μέση επιβίωση των κ.β. (n = 20) ποντίκια σε σύγκριση με επιλεγμένα (n = 20) ποντίκια (test log-rank, p & lt? 0,0001). Τα όργανα αφαιρέθηκαν και μια σημαντική διαφορά συγκρίνοντας wt (n = 12) και επιλέξτε ποντίκια (η = 18) προσδιορίστηκαν σε όρους βιοφωταύγειας των απομακρύνθηκε πνεύμονες (C) και τα πόδια (D) (δοκιμή Mann-Whitney, ρ = 0,0003 ). Σε μια παράλληλη προσέγγιση κύτταρα OH-1 εγχύθηκαν υποδορίως σε επιλεγμένες (n = 5) ή κβ (η = 3) ποντικών και οι όγκοι αναπτύχθηκαν για 36-65 ημέρες. Τα όργανα αφαιρέθηκαν και το βάρος του όγκου προσδιορίστηκε. Δεν υπήρξε στατιστικά σημαντική διαφορά στο βάρος των πρωτογενών όγκων OH-1 μεταξύ των στελεχών ποντικού (Ε) (φοιτητές t test, ρ = 0.6489). Προσδιορίστηκαν Οι αριθμοί των αυθόρμητων μεταστάσεων πνεύμονα σε επιλεγμένες και wt ποντίκια. Σημειώστε ότι ο αριθμός των μεταστάσεων ήταν στατιστικά σημαντικά μειωμένη κατά 50% σε επιλεγμένα ποντίκια σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου (F) (φοιτητές t test, p = 0,0181).

Η

Για να εξαιρέσετε το επιρροή λεντοικής μεταγωγής επί του ρυθμού μετάσταση αναλύσαμε την γονική κυτταρική σειρά ΟΗ-1 σε μια παράλληλη προσέγγιση. OH-1 κύτταρα εγχύθηκαν υποδορίως σε επιλεγμένες (n = 5) ή κβ (η = 3) ποντικών και οι όγκοι αναπτύχθηκαν για 36-65 ημέρες. Πνεύμονες και πρωτογενείς όγκοι αφαιρέθηκαν και το βάρος του όγκου προσδιορίστηκε. Το μέσο βάρος των όγκων (Σχ. 5Ε) ήταν 1,53 g (n = 3) σε άγριου-τύπου και 1,72 g (n = 5) σε ποντικούς σελεκτίνη διπλό ανεπάρκεια. Δεν υπήρξε στατιστικά σημαντική διαφορά στο βάρος των πρωτογενών όγκων OH-1 μεταξύ των στελεχών του ποντικού (Students t test, ρ = 0.6489). Επιπλέον, όλοι οι ποντικοί ανέπτυξαν αυθόρμητη μικρομεταστάσεις στον πνεύμονα. Ωστόσο, ο αριθμός των μεταστάσεων στους πνεύμονες διέφερε σημαντικά μεταξύ άγριου τύπου και το Ε /Ρ-σελεκτίνης-ανεπαρκές στέλεχος ποντικού. Ο αριθμός των μεταστάσεων κυμάνθηκε σε ποντικούς άγριου τύπου κυμαίνεται μεταξύ 47.560 και 72.165 (μέσος όρος: 61,076), και Ε /Ρ-σελεκτίνης διπλό-ανεπαρκή ποντίκια μεταστάσεις κυμαινόταν μεταξύ 16.790 και 53.317 (μέσος όρος: 28,446) (Εικ. 5F). Σημειώστε ότι η απουσία του Ε- και Ρ- σελεκτινών μείωσε τον αριθμό των αυθόρμητα αναπτύχθηκε πνευμονικών μεταστάσεων κατά 50% (Students t test, ρ = 0.0181).

Ανοσοϊστοχημική ανίχνευση του συνδετήρα σελεκτίνης πρωτεΐνη ραχοκοκαλιά SCLC κυττάρων

in vivo

η

Για να διερευνηθεί ότι εκφράστηκαν συνδετήρες σελεκτίνης και περαιτέρω μόρια κυτταρικής επιφάνειας

in vivo

σε πρωτογενείς όγκους και μεταστάσεις έχουμε αναλύσει την έκφρασή τους με ανοσοϊστοχημεία (Εικ. 6). Η καθιερωμένη CEA συνδετήρα σελεκτίνης μπορεί να ανιχνευθεί σε πρωτογενείς όγκους και ακόμη και παρατηρείται με αυξημένη έκφραση σε πνεύμονα και οστικές μεταστάσεις. CD44 και EpCAM, είναι γνωστό ότι είναι παρούσα σε μία ποικιλία φορέων όγκου, εκφράστηκαν επίσης σε όγκου και του πνεύμονα μεταστάσεις σε υψηλό βαθμό. Επιπλέον, η πρωτεΐνη PGP SCLC δείκτη 9,5, επίσης γνωστή ως UCH-L1, έγινε εκφράζεται σε αφθονία σε κύτταρα του πρωτογενούς όγκου, των πνευμόνων και οστικές μεταστάσεις.

Primary OH-1 όγκου, καθώς και αυθόρμητη OH-1