Αφηρημένο

Ιστορικό

Είμαστε στο παρελθόν απέδειξαν ότι η πυρηνική και κυτταροπλασματική συσσώρευση της ενδοκυτταρικής περιοχής (EP-ICD) των επιθηλιακών μορίου προσκόλλησης κυττάρων (EpCAM) συνοδεύεται από μια αμοιβαία μείωση του εξωκυττάριου της τομέα (EpEx), εμφανίζεται σε επιθετικών καρκίνων του θυρεοειδούς. Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να προσδιορίσει αν παρόμοια συσσώρευση Ep-ICD είναι μια κοινή εκδήλωση σε άλλες επιθηλιακών καρκίνων.

Μεθοδολογία και Αποτελέσματα

Δέκα επιθηλιακών καρκίνων ανοσοϊστοχημικά αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Ep-ICD και τον τομέα EpEx -ειδικά αντισώματα. Η υποκυτταρική εντόπιση του EpEx και ΕΡ-ICD στο ανθρώπινο αδενοκαρκίνωμα του κόλου κυτταρική γραμμή CX-1 παρατηρήθηκε με χρήση ανοσοφθορισμού. έκφραση Πυρηνική και κυτταροπλασματική Ερ-ICD ήταν αυξημένη σε καρκίνους του μαστού (31 από 38 ιστών, 82%), του προστάτη (40 από 49 ιστών, 82%), της κεφαλής και του λαιμού (37, 57 ιστών, 65%) και του οισοφάγου ( 17 από 46 ιστών, 37%) σε σύγκριση με το αντίστοιχο φυσιολογικούς ιστούς τους που έδειξε εντοπισμό μεμβράνης της πρωτεΐνης. Σημαντικά, Ερ-ICD δεν ανιχνεύθηκε στους πυρήνες των επιθηλιακών κυττάρων στους περισσότερους φυσιολογικούς ιστούς. Υψηλή πυρηνική και κυτταροπλασματική συσσώρευση Ep-ICD συνέβη και στις άλλες έξι επιθηλιακά τύπους καρκίνου που αναλύθηκαν – του πνεύμονα, του παχέος εντέρου, του ήπατος, της ουροδόχου κύστης, του παγκρέατος και των ωοθηκών. Μια ταυτόχρονη μείωση στην μεμβράνη έκφραση EpEx παρατηρήθηκε σε ένα υποσύνολο όλων των τύπων καρκίνου. Λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη ανάλυση καμπύλης αποκάλυψε πυρηνικό Ep-ICD καρκίνοι διακρίνονται μαστού με 82% ευαισθησία και 100% ειδικότητα και του προστάτη με 82% ευαισθησία και 78% ειδικότητα. Παρόμοια ευρήματα παρατηρήθηκαν για κυτταροπλασματική συσσώρευση της ΕΡ-ICD σε αυτούς τους καρκίνους. Παρέχουμε κλινικές ενδείξεις αυξημένης πυρηνικών και κυτταροπλασματικών συσσώρευση Ep-ICD και μείωση μεμβρανώδη EpEx σε αυτούς τους καρκίνους.

Συμπεράσματα

Αυξημένη πυρηνικών και κυτταροπλασματικών Ep-ICD παρατηρήθηκε σε όλες τις επιθηλιακών καρκίνων που αναλύθηκαν και τους διακρίνονται από κανονικούς ιστούς με υψηλή ευαισθησία, ειδικότητα, και AUC. Ανάπτυξη ενός ισχυρού δοκιμασία υψηλής απόδοσης για Ep-ICD θα διευκολύνει τον προσδιορισμό των διαγνωστικών, προγνωστικών και θεραπευτική αξία του σε επιθηλιακά καρκίνους

Παράθεση:. Ralhan R, Ο HC-Η, λοιπόν AK-C, Tripathi SC , Kumar M, Χασάν MR, et al. (2010) Η πυρηνική και κυτταροπλασματική συσσώρευση του Ep-ICD συχνά εντοπίζεται σε ανθρώπινα επιθηλιακά καρκίνους. PLoS ONE 5 (11): e14130. doi: 10.1371 /journal.pone.0014130

Επιμέλεια: Marc Vooijs, Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Μάαστριχτ, Ολλανδία

Ελήφθη: 20 Ιουν, 2010? Αποδεκτές: 24 Οκτ 2010? Δημοσιεύθηκε: 30 Νοεμβρίου, 2010

Copyright: © 2010 Ralhan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε οικονομικά από το Ίδρυμα Όρους Σινά του Τορόντο, Da Vinci Gala Έρανος, ο Άλεξ και η Simona Shnaider πρόεδρος στον καρκίνο του θυρεοειδούς, Mount Sinai Τμήμα Νοσοκομείου Ιατρικής Ταμείου Έρευνας, ο Άλεξ και η Simona Shnaider Εργαστηρίου Μοριακής Ογκολογίας και Temmy Latner Ίδρυμα Dynacare Οικογένεια. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μόριο προσκόλλησης επιθηλιακών κυττάρων (EpCAM) είναι ένα 40 kDa διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που εξυπηρετεί σημαντικούς ρόλους στην κυτταρική προσκόλληση, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη διαφοροποίηση, τη μετανάστευση, τη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και εμπλέκεται στον καρκίνο και βλαστικών κυττάρων σηματοδότησης [1]. EpCAM είναι μία από τις πιο ευρέως διερευνηθεί πρωτεϊνών σε ανθρώπινους καρκίνους, συχνά υπερεκφράζεται σε ανθρώπινες κακοήθειες, εντοπισμένη επί της μεμβράνης των κυττάρων του όγκου του πλάσματος και αν και σε χαμηλότερα επίπεδα στην κανονική επιθήλια [2], [3], [4], [5 ], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17]. Όλες αυτές οι μελέτες χρησιμοποίησαν αντισώματα που κατευθύνονται έναντι της εξωκυτταρικής περιοχής του EpCAM (EpEx) [13]. Αυτές οι πολυάριθμες αναφορές στην κυτταρική επιφάνεια έκφραση του EpCAM σε ανθρώπινους καρκίνους έχουν δείξει ότι θα μπορούσε να είναι ένας ιδανικός υποψήφιος για εφαρμογή σαν ένα επιθηλιακό δείκτης καρκίνου και θεραπευτικός στόχος [18], [19], [20], [21]. Παραδόξως, οι περισσότερες κλινικές δοκιμές που χρησιμοποιούν μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού συγκεκριμένα, edrecolomab σε καρκίνο του παχέος εντέρου, ή του εξανθρωπισμένου αντισώματος, adecatumumab, στον καρκίνο του μαστού έχουν δείξει περιορισμένη αποτελεσματικότητα [14], [22]. Η κατανόηση αυτών των περιορισμών θέτει μια πρόκληση για τους ογκολόγους και έχει μεγάλη σημασία για τη μελλοντική ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών στρατηγικών αντι-EpCAM. Σε αυτό το πλαίσιο, Gires και Baeuerle [23] συζήτησε την ανάγκη να μετρήσει τα επίπεδα έκφρασης EpCAM στα κύτταρα του όγκου και των επιπτώσεών τους στην έκβαση μιας κλινικής δοκιμής. Ωστόσο, καμία από τις προηγούμενες μελέτες έχουν αναλύσει EpCAM έκφραση σε ιστούς όγκων, προοπτικά ή αναδρομικά. Είτε ο πρόσφατα αναφερθεί ρυθμίζεται πρωτεόλυση intramembrane (RIP) μεσολάβηση απώλεια EpCAM από την επιφάνεια των κυττάρων του όγκου μπορεί να είναι ένας από τους λόγους για την περιορισμένη αποτελεσματικότητα του EpCAM θεραπείες που βασίζονται καρκίνος παραμένει να καθοριστεί [24]. Η διάσπαση του εξωτομέα EpCAM, EpEx, από τον παράγοντα νέκρωσης όγκου πρωτεάσης α μετατρεπτικού ενζύμου (TACE) και αποβολή του έχει δειχθεί ότι απελευθερώνει ενδοκυτταρική περιοχή του (EP-ICD) η οποία στη συνέχεια μετατοπίζεται στον πυρήνα με αποτέλεσμα την ενεργοποίηση του ογκογόνο σηματοδότηση [ ,,,0],24]. Η ένωση του Ep-ICD με FHL2 και Wnt συστατικά μονοπατιού β-κατενίνης και Λεφ-1 διαμορφώνει ένα πυρηνικό συγκρότημα που συνδέει το DNA σε Λεφ-1 συναίνεση sites και επάγει τη μεταγραφή γονιδίων, με αποτέλεσμα την αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων [24]. Η κλινική σημασία της ΕΡ-ICD σε ανθρώπινους καρκίνους πρέπει να προσδιοριστεί ενόψει των πολλαπλών ρόλων των EpCAM ως ογκογόνο μετατροπέας σήματος, μόριο κυτταρικής προσκόλλησης και καρκινικού δείκτη βλαστικών κυττάρων [24], [25], [26], [27 ].

Πυρηνικός εντοπισμός της ΕΡ-ICD αναφέρθηκε για πρώτη φορά σε μία μελέτη 26 περιπτώσεις ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου, αλλά όχι σε φυσιολογικό κολονικό επιθήλιο [24]. Στη συνέχεια, έχουμε αναφερθεί πυρηνικών και κυτταροπλασματική συσσώρευση της ΕΡ-ICD σε διάφορους υποτύπους των καρκίνων του θυρεοειδούς που σχετίζεται με αμοιβαία μείωση μεμβρανώδη EpEx, και παρατηρείται επίσης μία συσχέτιση της συσσώρευσης πυρηνικών Ep-ICD με την επιθετικότητα του όγκου και την κακή πρόγνωση της νόσου [28] . Η μεγάλη ετερογένεια σε στερεά έρευνα όγκους εντάλματα για να διαπιστωθεί αν η έκφραση πυρηνικών και κυτταροπλασματικών Ep-ICD μπορεί επίσης να εμφανιστεί σε άλλες ανθρώπινων καρκίνων. Στην παρούσα μελέτη, η υποκυτταρική συσσώρευση διαμερισματική της ΕΡ-ICD έχει αντιμετωπιστεί σε μια ευρεία ποικιλία των επιθηλιακών καρκίνων, δηλαδή, του μαστού, του προστάτη, κεφαλής και λαιμού, του οισοφάγου, των ωοθηκών, του παγκρέατος, του παχέος εντέρου και του ορθού, του πνεύμονα, της ουροδόχου κύστης, του ήπατος καρκινώματα με ανοσοϊστοχημεία (IHC) (με τη χρήση ενός ειδικού αντισώματος που κατευθύνεται εναντίον της περιοχής Ερ-ICD του EpCAM). Πυρηνικών και κυτταροπλασματικών Ep-ICD έχει επίσης ποσοτικά ανιχνευθεί σε CX-1 καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα χρησιμοποιώντας ανοσοφθορισμού. Με την εξαίρεση της προηγούμενης έκθεσης στον καρκίνο του παχέος εντέρου και τη μελέτη μας στον καρκίνο του θυρεοειδούς [24], [28], η καινοτομία αυτής της έκθεσης είναι η απόδειξη της ευρείας εμφάνισης αυξημένων πυρηνικών και κυτταροπλασματικών συσσώρευση Ep-ICD σε συνδυασμό με τη μεταβλητή έκφραση μεμβράνης EpEx σε ένα ευρύ φάσμα των επιθηλιακών καρκίνων.

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Αυτή η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Η μελέτη εγκρίθηκε από Mount Sinai Hospital Διοικητικό Συμβούλιο Έρευνας Ηθικής, Τορόντο, Καναδά. Τα αρχειοθετημένα μπλοκ ιστού παραφίνης μιας μελέτης καρκίνου κεφαλής και τραχήλου που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ανθρωπίνων Δεοντολογίας του All India Ινστιτούτο Ιατρικών Επιστημών, Νέο Δελχί, Ινδία, με προηγούμενη συγκατάθεση των ασθενών, χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη.

ασθενείς και δείγματα ιστών

Για την ανάλυση IHC, αρχειοθετούνται μπλοκ ιστού της κεφαλής και του τραχήλου από πλακώδες επιθήλιο καρκινώματα (HNSCCs) και φυσιολογικούς ιστούς, καθώς και του οισοφάγου ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (ESCCs) ανακτήθηκαν από την τράπεζα όγκων, επανεξετάζονται από το παθολόγος και χρησιμοποιούνται για την κοπή τομές ιστών για ανοσοχρώση με την ΕΡ-ICD και EpEx αντισώματα όπως περιγράφεται παρακάτω. Τα κλινικά και παθολογικά στοιχεία που καταγράφονται περιλαμβάνονται στάδιο κλινικών όγκου, περιοχή των βλαβών, ιστοπαθολογικές διαφοροποίηση, την ηλικία και το φύλο σε ένα προ-σχεδιασμένο performa όπως περιγράφεται από εμάς στο παρελθόν [29]. Tissue-μικροσυστοιχίες (ΤΜΑ) του καρκίνου του μαστού και παρακείμενο ιστό φυσιολογικού μαστού (ΒΜΕ-371), ο καρκίνος του προστάτη και παρακείμενο ιστό κανονικό προστάτη (ΒΜΕ-303), ο καρκίνος του πνεύμονα (ΙΜΤ-305), του παχέος εντέρου και του καρκίνου του ορθού (ΒΜΕ-306) , κοινή επιθηλιακών καρκίνων που αποτελείται από συκώτι, ουροδόχου κύστης, των ωοθηκών, του παγκρέατος, του μαστού και του προστάτη (ΒΜΕ-327) προμηθεύτηκε από Imgenex Corp (Σαν Ντιέγκο, CA). Είκοσι ένα μπλοκ ιστού της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη (ΚΥΠ) ανακτήθηκαν από την τράπεζα ιστών στο Mount Sinai Hospital, επανεξετάζονται από τον παθολόγο και χρησιμοποιείται για την κοπή τμήματα ιστού για ανοσοχρώση με Ep-ICD και EpEx αντισώματα.

Αντισώματα και Κυτταρική Γραμμή

Αντι-ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα κουνελιού Ep-ICD λήφθηκε από Epitomics Inc. (Burlingame, CA). Αντι-ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού EpEx (MOC-31) ελήφθη από Abd Serotec (Raleigh, NC). Το αντίσωμα α-Ερ-ICD 1144 αναγνωρίζει την κυτταροπλασματική περιοχή του ανθρώπινου EpCAM και έχει χρησιμοποιηθεί σε πρόσφατη μελέτη μας στο EP-ICD στον καρκίνο του θυρεοειδούς. [28] MOC-31 αναγνωρίζει την εξωκυτταρική περιοχή του EpCAM. Και τα δύο αντισώματα έχουν χρησιμοποιηθεί σε πρόσφατη μελέτη μας στον καρκίνο του θυρεοειδούς [28].

Το ανθρώπινο παχύ έντερο κυτταρική γραμμή αδενοκαρκινώματος CX-1 καλλιεργήθηκε σε RPMI-1640 μέσο που περιέχει 100 μg /mL στρεπτομυκίνη και 100 U /mL πενικιλλίνη , 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) και 1% μη απαραίτητα αμινοξέα. Το προφίλ STR της κυτταρικής γραμμής βρέθηκε να είναι σύμφωνα με το γνωστό προφίλ του CX-1 στις βάσεις δεδομένων της Συλλογής γερμανικής Μικροοργανισμών και Κυτταρικών Καλλιεργειών (DSMZ, Braunschweig, Germany).

κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά του ασθενείς

Πενήντα επτά ασθενείς HNSCC, που κυμαίνονται ηλικίας από 29 έως 75 ετών είχαν εγγραφεί στη μελέτη αυτή. διαγνώσεις τους βασίστηκαν σε κλινική εξέταση και ιστοπαθολογική ανάλυση των δειγμάτων ιστού. Οι όγκοι ιστολογικά βαθμολογήθηκαν ως καλά διαφοροποιημένο καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (WDSCC), μετρίως διαφοροποιημένο καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (MDSCC) ή κακώς διαφοροποιημένο καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (PDSCC). Είκοσι ιστούς που λαμβάνονται από ένα μακρινό τόπο της HNSCCs (με ιστολογικά επιβεβαιωμένο φυσιολογικό επιθήλιο που αναφέρεται εδώ ως το κεφάλι και το λαιμό φυσιολογικούς ιστούς) αξιολογήθηκαν επίσης για Ep-ICD και της έκφρασης EpEx.

Σαράντα έξι ασθενείς ESCC εντάχθηκαν στην αυτή η μελέτη. διαγνώσεις τους βασίστηκαν σε κλινική εξέταση και ιστοπαθολογική ανάλυση των δειγμάτων ιστού. Οι όγκοι ιστολογικά βαθμολογήθηκαν ως καλά, μέτρια ή κακή διαφοροποιούνται ΤΣΡ. Είκοσι ιστοί που λαμβάνονται από ένα μακρινό σημείο της ESCCs (με ιστολογικά επιβεβαιωμένο φυσιολογικό επιθήλιο αναφέρεται εδώ ως οισοφαγική φυσιολογικούς ιστούς) αξιολογήθηκαν επίσης για έκφραση πρωτεΐνης Ep-ICD. Ομοίως, σαράντα ιστοί που λαμβάνονται από ένα μακρινό σημείο της ESCCs (με ιστολογικά επιβεβαιωμένο φυσιολογικό επιθήλιο αναφέρεται εδώ ως οισοφαγική φυσιολογικούς ιστούς) αξιολογήθηκαν για έκφραση EpEx.

TMAs του καρκίνου του μαστού και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό του μαστού, ο καρκίνος του προστάτη και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό του προστάτη, του καρκίνου του πνεύμονα, του παχέος εντέρου και του καρκίνου του ορθού, κοινή επιθηλιακών καρκίνων που αποτελείται από συκώτι, ουροδόχου κύστης, των ωοθηκών, του παγκρέατος, του μαστού και του προστάτη εξετάστηκαν. Για Ep-ICD, ο αριθμός των ιστών που αναλύθηκαν ήταν 38 καρκίνους του μαστού και 25 αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί, 49 καρκίνοι του προστάτη και 9 αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί και 21 καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη, 57 HNSCCs και 20 αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί, 46 ESCCs και 20 αντιστοιχούν φυσιολογικούς ιστούς, 59 το καθένα από πνεύμονα και του κόλου, 10 η κάθε μία από της ουροδόχου κύστης, των ωοθηκών και του παγκρέατος, και 9 καρκίνων του ήπατος. Για EpEx, ο αριθμός των ιστών που ήταν διαθέσιμα για ανοσοϊστοχημική ανάλυση περιελάμβανε 40 καρκίνους του μαστού και 29 αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί, 49 καρκίνοι του προστάτη και 9 αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί και 21 καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη, 39 HNSCCs και 20 αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί, 47 ESCCs και 40 αντιστοιχούν φυσιολογικούς ιστούς, 59 περιπτώσεις κάθε μία από πνεύμονα και του κόλου, και 10 περιπτώσεις κάθε μία από της ουροδόχου κύστης, των ωοθηκών, και καρκίνων του ήπατος.

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης Ep-ICD στα επιθηλιακά καρκίνους

Serial παραφινώδη ενσωματωμένα τμήματα (5 μm πάχος) του HNSCCs, ESCCs και φυσιολογικούς ιστούς τους χρησιμοποιήθηκαν για Ερ-ICD και EpEx ανοσοχρώση όπως έχουμε περιγράψει πρόσφατα [28]. Τα πλακίδια ΤΜΑ και τα επιμέρους τμήματα ιστού από-παραφινοποιήθηκαν με ψήσιμο στους 62 ° C για 1 ώρα σε κάθετο προσανατολισμό και επανυδατώθηκαν σε ξυλόλη και διαβαθμισμένη σειρά αλκοόλ. Στη συνέχεια, οι συνθήκες ανάκτησης αντιγόνου βελτιστοποιήθηκαν και διεξήχθη σε 0,01 Μ κιτρικού ρυθμιστικού διαλύματος, ρΗ 6,0 επί 3 λεπτά στους 115 ° C, με τη χρήση ενός φούρνου TTmega (Milestone Inc. Shelton, CT). Η ενδογενής δράση υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με επώαση τμημάτων σε μεθανόλη που περιέχει 0,3% υπεροξείδιο του υδρογόνου για 20 λεπτά. Μετά τον αποκλεισμό της συνδέσεως με φυσιολογικό άλογο ή ορό κατσίκας μη ειδικές, οι τομές επωάστηκαν με α- Ep-ICD μονοκλωνικό αντίσωμα κουνελιού 1144 (αραίωση 1:200) για 30 λεπτά και αντι-κουνελιού δευτερογενές αντίσωμα βιοτινυλιωμένο κατσίκας για 30 λεπτά ή επωάστηκαν με MOC-31 (αραίωση 1:200) για 30 λεπτά με την αντίστοιχη βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα (αλόγου αντι-ποντικού ή κατσίκας αντι-κουνελιού) (Vector Laboratories, Burlington, Οντάριο, Καναδάς) για 30 λεπτά. Οι τομές τελικά επωάζονται με το αντιδραστήριο Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories) και diaminobenzedine χρησιμοποιήθηκε ως χρωμογόνο.

Αξιολόγηση των ανοσοϊστοχημική χρώση

Οι εικόνες TMA αποκτήθηκαν με τον ολοκληρωτή System Visiopharm (Visiopharm , Horsholm, Δανία). ανοσοθετικού χρώση Ep-ICD και EpEx αξιολογήθηκε σε πέντε τομείς των κεκτημένων εικόνες των τομών ιστού και του μέσου όρου αυτών των πέντε βαθμολογίες υπολογίστηκε. Οι τομές βαθμολογήθηκαν ως θετικά εάν επιθηλιακά κύτταρα έδειξαν ανοσοθετικότητα στην πλασματική μεμβράνη, κυτταρόπλασμα, και /ή τον πυρήνα, όταν παρατηρείται από δύο αξιολογητές που δεν γνώριζαν την κλινική ιστοπαθολογία και διάγνωση. Αυτά τα τμήματα βαθμολογήθηκαν με βάση το ποσοστό θετικότητας ως ακολούθως: 0, & lt? 10% κύτταρα? 1, 10-30% κύτταρα? 2, 30-50% των κυττάρων? 3, 50-70% των κυττάρων? και 4, & gt? 70% των κυττάρων έδειξε ανοσοαντιδραστικότητα όπως περιγράφεται προηγουμένως [28]. Οι τομές επίσης δέχεται ημι-ποσοτικά με βάση την ένταση ως ακολούθως: 0, κανένας? 1, ήπια? 2, μέτρια? και 3, έντονη. Τέλος, ένα συνολικό σκορ (που κυμαίνονται από 0 έως 7) ελήφθη με την προσθήκη των βαθμολογιών του ποσοστού θετικότητας και της έντασης για κάθε καρκίνο και φυσιολογικό τμήμα ιστού. Οι ανοσοϊστοχημικές δεδομένα υποβλήθηκαν σε στατιστική ανάλυση όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29].

Η στατιστική ανάλυση

Τα στοιχεία IHC υποβλήθηκαν σε στατιστική ανάλυση χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS 17.0 (SPSS, Chicago, IL) και Graphpad Prism 5 (GraphPad Software, La Jolla, CA). διαγράμματα διασποράς χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί η κατανομή της συνολικής βαθμολογίας για την μεμβράνη, την πυρηνική και κυτταροπλασματική έκφραση Ep-ICD σε φυσιολογικές και καρκινικούς ιστούς. χαρακτηριστικό λειτουργίας (ROC) καμπύλη Receiver αναλύσεις διεξήχθησαν για τον υπολογισμό της ευαισθησίας, ειδικότητας και περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) τιμές σε κάθε τύπο καρκίνου για πυρηνικά και κυτταροπλασματικά Ep-ICD. Με βάση την βέλτιστη ευαισθησία και ειδικότητα, μια καλή βαθμολογία αποκοπής αξίας IHC της ≥4 ορίστηκε ως ανοσοθετικού ομοιόμορφα για όλους τους τύπους καρκίνου που αναλύθηκαν για στατιστικούς εξέταση.

Ανάλυση

ανοσοφθορισμού του Ep-ICD και EpEx εντοπισμό σε CX -1 κόλου κυτταρική σειρά καρκίνου

CX-1 κόλον καρκινικά κύτταρα αναπτύχθηκαν σε γυάλινες πλάκες μέχρι 60% συρροή και κατόπιν επωάστηκαν είτε με α-Ερ-ICD μονοκλωνικό αντίσωμα κουνελιού 1144 (1:100 αραίωση) ή ποντίκι μονοκλωνικό αντίσωμα MOC-31 (1:100). Για Ep-ICD, το δευτερεύον αντίσωμα που χρησιμοποιήθηκε ήταν ένα τετραμεθυλ ροδαμίνη ισοθειοκυανική (TRITC) -σημασμένου αντίσωμα κατσίκας αντι-κουνελιού (Sigma-Aldrich, 1:200 αραίωση). Για EpEx, το δευτερεύον αντίσωμα που χρησιμοποιήθηκε ήταν ένα ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) -σημασμένου αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, 1:200 αραίωση). Διαφάνειες παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας όρθια μικροσκόπιο φθορισμού Ολύμπου (BX61) και οι εικόνες αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Volocity (PerkinElmer, Waltham, ΜΑ).

Αποτελέσματα

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης Ep-ICD σε ανθρώπινα επιθηλιακά καρκίνους

Οι γνωστές κλινικές παραμέτρους, ιστοπαθολογική εξέταση, και ΕΡ-ICD IHC βαθμολογίες για κάθε τύπο καρκίνου που παρέχονται στους συμπληρωματικούς πίνακες S1, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S8, S9, S10. Μεταξύ των τύπων καρκίνου που συγκρίθηκαν με φυσιολογικούς ιστούς (Πίνακας 1), καρκίνοι του μαστού εμφάνισαν 82% πυρηνική θετικότητα Ep-ICD (31 από 38 ιστών) και 84% κυτταροπλασματική θετικότητα Ep-ICD (32 από 38 ιστών). Με βάση μια cut-off βαθμολογία IHC 4, κανένας από τους 25 κανονικούς ιστούς του μαστού αναλύθηκαν θεωρήθηκαν θετικά για την πυρηνική Ep-ICD? 56% (14 από 25 ιστών) δεν έδειξαν ανιχνεύσιμη πυρηνική χρώση σε κύτταρα λοβιακό μαστού ή κύτταρα των πόρων, ενώ οι υπόλοιπες 11 περιπτώσεις έδειξαν χαμηλή IHC βαθμολογίες. καρκίνους του προστάτη παρουσίασαν 82% πυρηνική θετικότητα (40 από 49 ιστών) και 82% κυτταροπλασματική θετικότητα (40 από 49 ιστούς). Πυρηνική Ep-ICD ήταν θετική σε 2 από 9 φυσιολογικούς ιστούς του προστάτη, και κυτταροπλασματική θετικότητα παρατηρήθηκε σε 1 από 9 ιστών. Μεταξύ των 21 ιστούς ΒΡΗ αναλύθηκαν, κυτταροπλασματική θετικότητα παρατηρήθηκε σε 1 από 21 ιστών? κανένας από τους ιστούς ήταν πυρηνική Ep-ICD θετικά με βάση την βαθμολογία αποκοπής 4. Σε HNSCCs, Ep-ICD πυρηνική θετικότητα ήταν 65% (37 από 57 ιστών) και κυτταροπλασματική θετικότητα ήταν 74% (42 από 57 ιστούς). ESCC πυρηνική θετικότητα ήταν 37% (17 από 46 ιστών) και κυτταροπλασματική θετικότητα ήταν 70% (32 από 37 ιστούς). Πυρηνική και κυτταροπλασματική Ερ-ICD παρατηρήθηκε κάθε να είναι θετική σε μόνο 1 από 20 φυσιολογικούς ιστούς σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου. Για ESCC, η πυρηνική θετικότητα παρατηρήθηκε σε 2 από τους 20 φυσιολογικούς ιστούς και κυτταροπλασματική θετικότητα παρατηρήθηκε σε 6 από 20 φυσιολογικούς ιστούς. Όλα τα υπόλοιπα επιθηλιακά καρκίνων εμφανίζονται πυρηνικά και κυτταροπλασματική συσσώρευση της ΕΡ-ICD (Πίνακας 1). Αξίζει να σημειωθεί ότι, αν και η χρήση ενός αποκοπής του ≥4 να προσδιοριστεί η θετικότητα οδήγησε σε μείωση των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών θετικότητα σε καρκίνους του παγκρέατος, από την εξέταση της βαθμολόγησης αποκάλυψε ότι αποκοπής του 3,5 θα έχουν εντοπίσει 7 από 10 περιπτώσεις συσσώρευσης πυρηνικών Ep-ICD και 5 από 10 περιπτώσεις κυτταροπλασματική συσσώρευση Ep-ICD (βλέπε συμπληρωματικό πίνακα S8).

Η

Οι αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες που φαίνεται στο Σχήμα 1 επιδεικνύουν Ep-ICD ανοσοχρώση σε φυσιολογικές και καρκινικούς ιστούς. Το πάνελ Α δείχνει κυρίαρχη εντοπισμό μεμβράνης της ΕΡ-ICD και καμία πυρηνική χρώση στο φυσιολογικό ιστό του μαστού (Ι), ενώ ο ιστός του καρκίνου δείχνει συσσώρευση πυρηνικά και κυτταροπλασματικά Ep-ICD (II). Πίνακας Β (Ια) απεικονίζει χαμηλό επίπεδο μεμβράνης Ep-ICD στα επιθηλιακά κύτταρα και τα βασικά κύτταρα παρουσιάζουν ελαφρά πυρηνική χρώση στο φυσιολογικό ιστό του προστάτη και σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (Ib). Ο ιστός καρκίνου του προστάτη παρουσιάζει έντονη κυτταροπλασματική και αυξημένη πυρηνική χρώση (ομάδα Β, II). Στα ενδοθηλιακά κύτταρα, παρατηρήθηκε σταθερά ισχυρή χρώση Ep-ICD. Στα λιποκύτταρα, χρώση κυμαίνονταν από απουσιάζουν σε ήπιο σε ορισμένα κύτταρα. Τα λεμφοκύτταρα βάφονται έντονα σε ιστούς όγκων, ενώ κανένας παρατηρήθηκε σε φυσιολογικούς ιστούς. Ομαλή χρώση μυς ήταν απούσα ή ανεπαρκής σε όλες τις περιπτώσεις. Καμία ανιχνεύσιμη χρώση Ep-ICD παρατηρήθηκε στο φυσιολογικό οισοφαγικό ιστό (πλαίσιο C, I), ενώ ο ESCC έδειξε έντονο πυρηνικά και κυτταροπλασματικά ανοσοχρώση (πλαίσιο C, II). Το κεφάλι και το λαιμό φυσιολογικό βλεννογόνο έδειξαν εξασθενημένο μεμβράνη Ep-ICD (πάνελ D, I), ενώ παρατηρήθηκε έντονη πυρηνική και κυτταροπλασματική ανοσοχρώση σε HNSCC (πάνελ D, II).

Οι αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες απεικονίζουν Ep-ICD ανοσοχρώση σε φυσιολογικούς και καρκινικούς ιστούς. Το πάνελ Α δείχνει κυρίαρχη εντοπισμό μεμβράνης της ΕΡ-ICD και καμία πυρηνική χρώση στο φυσιολογικό ιστό του μαστού (Ι), ενώ ο ιστός του καρκίνου δείχνει συσσώρευση πυρηνικά και κυτταροπλασματικά Ep-ICD (II). Πάνελ Β δείχνει χαμηλό επίπεδο μεμβράνης Ep-ICD στα επιθηλιακά κύτταρα και τα βασικά κύτταρα δείχνουν κάποια πυρηνική χρώση στον ιστό κανονικό προστάτη (Ια) και σε καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (B, Ib), ενώ ο ιστός καρκίνος εμφανίζει έντονη κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώσης (II). Πίνακας Γ δείχνει καμία ανιχνεύσιμη χρώση Ep-ICD στο φυσιολογικό οισοφαγικό ιστό (Ι), ενώ το ESCC δείχνει έντονη πυρηνικά και κυτταροπλασματικά ανοσοχρώση (II). Πάνελ Α απεικονίζει κεφάλι και το λαιμό φυσιολογικού βλεννογόνου που δείχνει εξασθενημένο μεμβράνη Ep-ICD (Ι), ενώ το HNSCC δείχνει έντονη πυρηνικά και κυτταροπλασματικά ανοσοχρώση (II). Πρωτότυπη μεγέθυνση × 400.

Η

Αυξημένη πυρηνικά και κυτταροπλασματικά ανοσοαντιδραστικότητα και μειωμένη ή παρατηρήθηκε απουσία χρώσης μεμβράνης του Ep-ICD σε καρκίνους της ουροδόχου κύστης (Σχήμα 2, πίνακας Α), του πνεύμονα (Β), ήπατος (C), ωοθήκη (D), κόλον (Ε), και παγκρέατος (F). Αξίζει να σημειωθεί ότι, μεμβράνη χρώση Ep-ICD παρατηρήθηκε σε ορισμένες περιπτώσεις κάθε επιθηλιακού καρκίνου που αναλύθηκαν. Αντιπροσωπευτικά μικροφωτογραφίες του καρκίνου του προστάτη και του παχέος εντέρου που απεικονίζει ετερογενή χρώση Ep-ICD φαίνεται στο Σχήμα 3 Α, Β Ορισμένες περιοχές του τμήματος ιστού έδειξε κυρίαρχο μεμβράνη και αδύναμη κυτταροπλασματική αλλά όχι πυρηνικό εντοπισμό του Ep-ICD (Σχήμα 3Α, Β – αριστερά τετράγωνο), ενώ οι άλλες περιοχές του ίδιου τμήματος ιστού έδειξε πυρηνική και κυτταροπλασματική συσσώρευση Ep-ICD με απουσία μεμβρανώδη έκφρασης Ep-ICD (Σχήμα 3Α, Β – δεξιά τετράγωνο). Τα αρνητικό και θετικό μικροφωτογραφίες έλεγχος φαίνεται στο Σχήμα 4.

Αυξημένη πυρηνικά και κυτταροπλασματικά ανοσοαντιδραστικότητα και μειωμένη ή απουσία χρώσης μεμβράνης του Ep-ICD παρατηρήθηκε σε καρκίνους της ουροδόχου κύστης (Πίνακας Α), του πνεύμονα (Πίνακας Β ), ήπαρ (Πίνακας C), ωοθήκη (πάνελ D), του παχέος εντέρου (πάνελ Ε), και παγκρέατος (Πίνακας F). Αρχική μεγέθυνση × 400.

Η

Η μεμβράνη, κυτταροπλασματική και πυρηνική έκφραση Ep-ICD στον καρκίνο του προστάτη (Α) και καρκίνου του παχέος εντέρου (Β). Ορισμένες περιοχές του τμήματος ιστού δείχνουν κυρίαρχη μεμβράνη και αδύναμη κυτταροπλασματική αλλά όχι πυρηνικό εντοπισμό του Ep-ICD (Α, Β – αριστερό τετράγωνο), ενώ οι άλλες περιοχές του ίδιου ιστού ενότητα δείχνουν πυρηνική και κυτταροπλασματική συσσώρευση Ep-ICD με απουσία μεμβρανώδη έκφραση Ep-ICD (Α, Β – δεξιά τετράγωνο). Αρχική μεγέθυνση × 400.

Η

Τα αρνητικά και θετικά μικροφωτογραφίες έλεγχος δείξει. Ερ-ICD αρνητικούς ελέγχους για HNSCC (Α), ο καρκίνος του προστάτη (Β), καρκίνου του παχέος εντέρου (C), ο καρκίνος του μαστού (D), ESCC (Ε), και η κανονική του οισοφάγου (F)? πάνελ G και Η είναι θετικοί έλεγχοι για χρώση Ep-ICD. Αρχική μεγέθυνση × 400.

Η

Scatter Plot Ανάλυση

Τα διαγράμματα διασποράς στο σχήμα 5Α και 5Β δείχνουν την κατανομή των βαθμολογιών ανοσοχρώση πυρηνικών και κυτταροπλασματικών Ep-ICD σε όλα τα επιθηλιακά τύπους καρκίνου που αναλύθηκαν . Πυρηνική Ep-ICD παρατηρήθηκε σε 39 από τους 57 ιστούς HNSCC και σε 18 από τους 46 ιστούς ESCC. Τριάντα επτά από αυτούς τους 39 ιστούς HNSCC εξετάζονται και 17 από τους 18 ιστούς ESCC έδειξε βαθμολογία IHC ≥4. Κυτταροπλασματική χρώση Ep-ICD ανιχνεύθηκε σε 42 από τις 57 ιστούς (74%) HNSCC εξετάστηκαν και 32 των ιστών 46 (70%) ESCC. Ο καρκίνος του μαστού, ο καρκίνος του προστάτη, και θετικά-χρώση HNSCCs και ESCCs όλες έδειξαν αξιοσημείωτη ανυψώσεις των δύο πυρηνικών και κυτταροπλασματικά Ερ-ICD σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς και του προστάτη καλοήθους υπερπλασίας ιστούς που αναλύθηκαν. Πνεύμονα, κόλον, ήπατος, ουροδόχου κύστης, των ωοθηκών, του παγκρέατος και τύπων καρκίνου κάθε αποδειχθεί εξέχουσα έκφραση της πυρηνικής και κυτταροπλασματικής Ep-ICD. Τα διαγράμματα διασποράς στο σχήμα 5C δείχνουν την κατανομή της μεμβράνης Ep-ICD βαθμολογίες σε όλα τα επιθηλιακά τύπους καρκίνου που αναλύθηκαν.

οικόπεδα διασποράς που δείχνει την κατανομή της συνολικής βαθμολογίες ανοσοχρώση καθορίζεται από IHC τομών ιστού των καρκίνων του μαστού (n = 38), προστάτη (n = 49), του πνεύμονα (n = 59), ωοθήκη (n = 10), του παχέος εντέρου (n = 59), της κύστης (n = 10), HNSCCs ήπαρ (η = 9), θετικά-χρώση (n = 39) και ESCCs (n = 19), και η κανονική του μαστού (n = 25), προστάτη (η = 9) και ΒΡΗ (n = 21), η κανονική οισοφάγου (n = 20), και της κεφαλής και του λαιμού (n = 20) ιστούς. Ο κάθετος άξονας δίνει τη συνολική βαθμολογία IHC όπως περιγράφεται στις Μεθόδους. Ένα αποκοπής ≥4 χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η θετικότητα. Ν, φυσιολογικό? Ca, καρκίνος. A. Η αυξημένη πυρηνική συσσώρευση της ΕΡ-ICD παρατηρήθηκε στις περισσότερες των επιθηλιακών καρκίνων που αναλύθηκαν. B. Η αυξημένη κυτταροπλασματική συσσώρευση της ΕΡ-ICD παρατηρήθηκε σε όλες σχεδόν τις επιθηλιακούς καρκίνους που αναλύθηκαν. Γ μεμβράνης εντοπισμό του Ep-ICD ποικίλο στα διάφορα καρκίνο και φυσιολογικό τύπους ιστών που εξετάστηκαν.

Η

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης EpEx σε ανθρώπινα επιθηλιακά καρκίνους

Παρόμοια ανάλυση IHC της έκφρασης EpEx σε Αυτά τα ανθρώπινα επιθηλιακά καρκίνοι Διεξήχθη επίσης χρησιμοποιώντας MOC31, ένα ειδικό αντίσωμα έναντι της εξωκυτταρικής περιοχής του EpCAM (EpEx) σε όλες τις δέκα επιθηλιακών καρκίνων (σχήμα 6 και 7). Αντιπροσωπευτικά μικροφωτογραφίες στο Σχήμα 6, πάνελ Ι δείχνουν χαμηλό επίπεδο μεμβράνης έκφρασης EpEx σε φυσιολογικό μαστό (Α) και του προστάτη (B, Ια), καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (Β, Ιβ), και η κανονική του οισοφάγου (C) και της κεφαλής και του λαιμού (D) σε ιστούς . Οι αντίστοιχες καρκίνος ιστοί που απεικονίζει αυξημένο επίπεδο EpEx στη μεμβράνη που φαίνεται στο Σχήμα 6, πάνελ II (Α- μαστού? Β-προστάτη? C- οισοφάγου? και το κεφάλι και το λαιμό D-). Αντίθετα, πολλοί από τους καρκινικούς ιστούς του κάθε τύπου του καρκίνου έδειξε απουσία μεμβράνης EpEx? Οι αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες φαίνονται στον πίνακα III (Α-Δ). Σχήμα 7, πάνελ Ι δείχνει έντονο μεμβράνη EpEx σε καρκίνο του παχέος εντέρου (Α), το ήπαρ (Β), της ουροδόχου κύστης (C), του πνεύμονα (D), ωοθήκη (Ε) και του παγκρέατος (F) του καρκίνου. Το Σχήμα 7 πάνελ II (Α-Ρ) δείχνει μειωμένη ή απουσία μεμβράνης EpEx σε ένα υποσύνολο του καθενός από αυτά επιθηλιακών καρκίνων. Οι θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες φαίνεται στο Σχήμα Συμπληρωματική S1.

Οι μικροφωτογραφίες απεικονίζουν MOC31 βάφονται μεμβράνη EpEx στα επιθηλιακά καρκίνους. Ο πίνακας Ι παρουσιάζει χαμηλό επίπεδο έκφρασης μεμβράνης EpEx σε φυσιολογικό μαστό (Α) και του προστάτη (B, Ια), καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (Β, Ιβ), και η κανονική του οισοφάγου (C) και κεφαλής και λαιμού (D) ιστούς. Οι αντίστοιχες καρκινικούς ιστούς που απεικονίζει αυξημένο επίπεδο EpEx στη μεμβράνη που φαίνεται στον πίνακα II (Α-Δ). Σε αντίθεση πολλά από τους ιστούς του καρκίνου του κάθε τύπου του καρκίνου έδειξε απουσία μεμβράνης EpEx (πίνακας III, A-D). Αρχική μεγέθυνση × 400.

Η έκφραση

Μεμβράνη EpEx παρατηρήθηκε σε όλες τις επιθηλιακών καρκίνων. Πίνακας Ι παρουσιάζει έντονη μεμβράνη EpEx σε καρκίνο του παχέος εντέρου (Α), το ήπαρ (Β), της ουροδόχου κύστης (C), του πνεύμονα (D), των ωοθηκών (Ε) και του παγκρέατος (F) του καρκίνου. Τα πάνελ II Α-Ρ δείχνουν μειωμένη ή απουσία μεμβράνης EpEx σε ένα υποσύνολο του καθενός από αυτά επιθηλιακών καρκίνων. Αρχική μεγέθυνση × 400.

Η

Ανάλυση του Ep-ICD και EpEx ανοσοφθορισμό σε CX-1 καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή

Σε CX-1, ενός επιθετικού καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή, EpEx και Ερ-ICD και οι δύο ανιχνεύθηκαν στη μεμβράνη πλάσματος (Σχήμα 8). έκφραση Έντονη μεμβράνη παρατηρήθηκε σε κυττάρου-κυττάρου διασταυρώσεις με τόσο EpEx και πεδίου ειδικών αντισωμάτων Ep-ICD (σχήμα 8 – A, D, F, και G). Επιπλέον, η συσσώρευση της ΕΡ-ICD παρατηρήθηκε στο κυτταρόπλασμα και πυρήνες των καρκινικών κυττάρων, αλλά καμία συσσώρευση EpEx βρέθηκε στους πυρήνες (Σχήμα 8 – C, E, G). Η ποσοτική ανίχνευση σήματος φθορισμού της EpEx και Ep-ICD υποστηρίζει με σαφήνεια αυτές τις παρατηρήσεις (Σχήμα 8Η).

Δευτεροβάθμια αντισώματα είναι FITC-αντι-ποντικιού (πράσινο) και TRITC-αντι-κουνελιού (κόκκινο). Α) EpEx? Β) Ep-ICD? Γ) DAPI? Δ) EpEx και DAPI (Α & amp? C συγχωνεύονται)? Ε) Ep-ICD και DAPI (Β & amp? C συγχωνεύονται)? ΣΤ) EpEx και Ep-ICD (Α & amp? Β συγχωνεύονται)? G) EpEx, Ep-ICD και DAPI (Α, Β, Γ συγχωνεύονται)? Ι) Μέτρηση της πυκνότητας των τριών χρωμάτων σε όλη τη γραμμή στα κύτταρα σε H.

Η

καμπύλες ROC καμπύλη Ανάλυση

ROC δημιουργήθηκαν για την πυρηνική και κυτταροπλασματική Ep-ICD σε HNSCC, ESCC, οι καρκίνοι του προστάτη, και του μαστού (Σχήμα 9) και τα αποτελέσματά τους συνοψίζονται στον πίνακα 2. Με βάση αυτή την ανάλυση, μία αποκοπή ≥4 χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της πυρηνικής και κυτταροπλασματικής θετικότητα. Η ανάλυση αποκάλυψε ότι η συσσώρευση των πυρηνικών Ep-ICD διακρίνεται καρκίνους του προστάτη και του καρκίνου του μαστού από τους φυσιολογικούς ιστούς με 82% ευαισθησία και με ειδικότητα 100% για καρκίνο του μαστού και 78% για προστάτη. Σε HNSCCs, πυρηνική Ep-ICD ήταν σε θέση να διακρίνουν τους καρκίνους από φυσιολογικούς ιστούς με 65% ευαισθησία και 95% ειδικότητα, ενώ σε ESCCs, πυρηνική Ep-ICD έδειξε 37% ευαισθησία και 90% ειδικότητα. Οι τιμές AUC βρέθηκαν να είναι 0.905 για τον καρκίνο του μαστού, 0.867 για τον καρκίνο του προστάτη, 0.822 για HNSCC, και 0.630 για ESCC. Η κυτταροπλασματική έκφραση Ep-ICD στον καρκίνο του μαστού και του προστάτη είχε ευαισθησία 82% και 84% αντίστοιχα, με ειδικότητα 100% για καρκίνο του μαστού και 89% για προστάτη. Σε HNSCC, κυτταροπλασματική έκφραση Ep-ICD είχε ευαισθησία 74% και ειδικότητα 95%, ενώ οι κυτταροπλασματικές Ep-ICD είχε ευαισθησία και ειδικότητα 70% κάθε σε ESCCs. Οι τιμές AUC για την κυτταροπλασματική Ep-ICD ήταν 0,928 στον καρκίνο του μαστού, 0.880 με καρκίνο του προστάτη, 0.864 στην HNSCC, και 0.758 σε ESCC.

ROC καμπύλες που περιγράφουν τη σχέση μεταξύ ευαισθησίες και 1-ιδιαιτερότητες των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών Ep -ICD έκφραση σε αυτά τα επιθηλιακούς καρκίνους. Ο κάθετος άξονας κάθε καμπύλη δείχνει την ευαισθησία και ο οριζόντιος άξονας υποδεικνύει την 1-ειδικότητα. Τα ευαισθησία, ειδικότητα, και οι τιμές AUC για τους καρκίνους συνοψίζονται στον Πίνακα 2.

Η

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη αναδεικνύει τη συχνή εμφάνιση των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών συσσώρευση Ep -ICD σε δέκα επιθηλιακά τύπους καρκίνου. Η κανονική επιθήλια του στήθους, του προστάτη και του οισοφάγου ιστούς που αναλύθηκαν έδειξαν διακριτή μεμβράνη Ep-ICD εντοπισμού. Είναι σημαντικό ότι, η μείωση ή απουσία μεμβρανώδη Ep-ICD παρατηρήθηκε σε καρκίνους του μαστού, του προστάτη, κεφαλής και λαιμού και του οισοφάγου, παραλληλίζεται με αξιοσημείωτη συσσώρευση Ep-ICD στον πυρήνα και στο κυτταρόπλασμα των αντίστοιχων κυττάρων του όγκου. Ωστόσο, ένα υποσύνολο των όγκων από κάθε ένα από αυτούς τους δέκα τύπων καρκίνου έδειξε υψηλή έκφραση μεμβράνη Ep-ICD που συσχετίζεται με την υψηλή έκφραση EpEx στη μεμβράνη ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας έναν εξωτερικό τομέα Ep-CAM (EpEx) ειδικό αντίσωμα (MOC31), γεγονός που υποδηλώνει αυξημένη έκφραση του η πλήρους μήκους πρωτεΐνη όπως ανιχνεύεται από το ΕΡ-ICD και ειδικά αντισώματα EpEx. Αξίζει να σημειωθεί ότι, ανοσοϊστοχημική ανάλυση των επιθηλιακών καρκίνων χρησιμοποιώντας MOC31 έδειξαν αυξημένη έκφραση μεμβράνη EpEx σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς σε μερικούς όγκους, ενώ οι άλλοι έδειξαν μειωμένη ή απουσία μεμβράνης EpEx, υποστηρίζοντας τις παρατηρήσεις μας με ειδικά αντισώματα τομέα Ep-ICD. Αξίζει να επισημανθεί ότι οι καρκίνοι που δείχνουν μειωμένη ή απουσία της μεμβράνης EpEx ή Ep-ICD είχαν σημαντικά αυξημένη Ep-ICD στο κυτταρόπλασμα και πυρήνες αυτών των καρκινικών κυττάρων. Αξιοσημείωτα, EpEx δεν ανιχνεύθηκε σε κανένα από τα πυρήνες των κυττάρων του όγκου σε καμία από τις καρκίνων που αναλύθηκαν. Στο σύνολό τους, αυτές οι παρατηρήσεις ευνοούν την αυξημένη έκφραση και αυξημένη αποβολή EpEx από κύτταρα όγκου σε ένα υποσύνολο όλων των επιθηλιακών όγκων που μελετήθηκαν.