Αφηρημένο

Σας παρέχουμε νέα λειτουργικά δεδομένα που μετα-μεταγραφική σίγηση του γονιδίου

RPL 19

χρήση RNAi όχι μόνο καταργεί ο κακοήθη φαινότυπο του PC-3M καρκινικά κύτταρα του προστάτη αλλά είναι επιλεκτική σε σχέση με τη μεταγραφή και τη μετάφραση των άλλων γονιδίων. Μείωση

RPL 19

μεταγραφή διαμορφώνει ένα υποσύνολο των γονιδίων, αποδεικνύεται από την ανάλυση του γονιδίου συστοιχία έκφρασης και κηλίδωση Western, αλλά δεν θέτει σε κίνδυνο τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ή απόπτωση

in-vitro

. Ωστόσο, η αύξηση ξενομοσχευμένου όγκων που περιέχει το νοκ-κάτω

RPL 19 in-vivo

μειώνεται σημαντικά. Ανάλυση των διαμορφωμένων γονιδίων αποκαλύπτει επαγωγή του μη κακοήθη φαινότυπο κυρίως να εμπλέξει διατάραξη των δικτύων των παραγόντων μεταγραφής και κυτταρικών γονιδίων πρόσφυση. Τα δεδομένα παρέχουν ενδείξεις ότι η εξω-ριβοσωμικές ρυθμιστικές λειτουργίες του

RPL 19

, πέρα ​​από την πρωτεϊνική σύνθεση, είναι κρίσιμη ρυθμιστές του κυτταρικού φαινοτύπου. Στόχευση βασικά μέλη της επηρεάζονται δίκτυα προσδιορίζονται από την ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης αυξάνει την πιθανότητα της θεραπευτικά σταθεροποίηση μιας καλοήθους φαινότυπο που δημιουργείται από τη διαμόρφωση της έκφρασης ενός ατόμου γονιδίου και στη συνέχεια περιορίζει έναν κακοήθη φαινότυπο αφήνοντας μη-κακοήθεις ιστούς ανεπηρέαστη.

Παράθεση : Bee Α, Μπρούερ D, Beesley C, Dodson Α, Forootan S, Dickinson T, et al. (2011) siRNA Νοκ ντάουν της Ριβοσωματιακής πρωτεΐνης του γονιδίου

RPL 19

καταργεί το Επιθετικό Φαινότυπος του ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 6 (7): e22672. doi: 10.1371 /journal.pone.0022672

Επιμέλεια: Steven R. Ellis, του Πανεπιστημίου του Louisville, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 Ιαν 2011? Αποδεκτές: 4 του Ιούλη 2011? Δημοσιεύθηκε: 22 του Ιουλίου του 2011

Copyright: © 2011 Bee et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε από το North West Καρκίνο Ταμείο Έρευνας (UK), Cancer Research-UK, το Εθνικό Ινστιτούτο Έρευνας για τον Καρκίνο (MRC-UK), ένα πρόγραμμα Specialized της ερευνητικής αριστείας (SPORE) επιχορήγηση από το Εθνικό Ινστιτούτο των ΗΠΑ Καρκίνου (ΗΠΑ), το Grand φιλανθρωπία των Freemasons, Rosetrees Trust, Ο Bob Champion εμπιστοσύνης καρκίνου, η αίτηση αναιρέσεως Orchid και David Koch Ιδρύματος. Χρηματοδοτικοί οργανισμοί δεν είχε καμία συμμετοχή στο σχεδιασμό και τη διεξαγωγή της μελέτης, όσον αφορά τη διαχείριση συλλογή, ανάλυση και ερμηνεία των δεδομένων, ή στο πλαίσιο της προετοιμασίας, εξέτασης και έγκρισης του χαρτιού

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

Ριβοσωματιακής πρωτεΐνες

(ΚΔΕ) περιλαμβάνουν ένα σύνθετο υπερ-οικογένεια των πρωτεϊνών [1] εξαιρετικά διατηρημένη όλη εξέλιξη, που δείχνει λειτουργική σημασία τους για τους ζωντανούς οργανισμούς [2]. Αυτός ο ισχυρισμός υποστηρίζεται από τον αριθμό των ψευδογονιδίων RP και οι επαναλήψεις γονίδιο μαζί με μοιρασμένες περιοχές ταυτότητας μεταξύ ομόλογων πρωτεϊνών σε προκαρυωτικά και ευκαρυωτικά [3]. Ευκαρυωτικά ριβοσώματα περιέχουν περίπου 80 ρετροϊών, μαζί με τέσσερις ριβοσωματικών RNA (rRNA) και απαιτούν περίπου 150 μη-ριβοσωματικών παράγοντες για να γίνει οργανωμένη στα συστατικά μικρά τους (40S) και μεγάλες (60S) υπομονάδες [4]. Αρχικά θεωρείται ότι εμπλέκεται μόνο στην πρωτεϊνοσύνθεση, ορισμένες ρετροϊών αναγνωρίζονται ως πλειοτροπική και να προκαλεί μία ποικιλία εξω-ριβοσωμικής ρυθμιστικές λειτουργίες [5], [6]. Τέτοια ΚΔΕ, περιλαμβάνουν L5 [7], L11 [8], L13 [9] και S7 [10]. Σε zebrafish (

Danio rerio

) ένα ισχυρό ρόλο για ρετροϊών όπως όγκο-καταστολείς έχει αποδειχθεί σύμφωνα με την οποία η μετάλλαξη ή καταστολή σε οποιοδήποτε από διάφορα γονίδια RP εξασθενίζει τον έλεγχο του ρ53, προωθώντας έτσι κακοήθειας [11], [12]. Πρόσφατα, η έννοια της «ribosomopathy» έχει καθιερωθεί σύμφωνα με την οποία η μετάλλαξη ενός συγκεκριμένου RP είναι παθογόνος για μια συγκεκριμένη ασθένεια [13]. Περίπου το 25% των περιπτώσεων του Diamond-Blackfan αναιμία προκαλούνται από μετάλλαξη του ριβοσωμικού γονιδίου της πρωτεΐνης

RPS19

ενώ σε ένα άλλο 20%, οι μεταλλάξεις συμβαίνουν σε άλλες ριβοσωματικές γονίδια πρωτεϊνών [14]. Επί του παρόντος, μερικά 77 ατομικές

RPS19

μεταλλάξεις έχουν περιγραφεί [15]. Επιπλέον, απλοανεπάρκεια για ριβοσωμικές πρωτεΐνες έχει αποδειχθεί, σε μερικές περιπτώσεις, να είναι μια υποκείμενη αιτία για Diamond Blackfan αναιμία [16].

Σήμερα, οι μηχανισμοί που αφορούν μεταλλάξεις σε γονίδια RP με τον καρκίνο παραμένουν άγνωστοι [17]. Για την εγγύς περιοχή μακρύ βραχίονα του χρωμοσώματος 17 όπου έχουν περιγραφεί ο

RPL 19

γονίδιο βρίσκεται (17q), μείζον καρκίνο συγκεκριμένες αλλαγές. Αυτές περιλαμβάνουν ενισχύσεις και να αντιγράψετε τον αριθμό αλλαγών, ιδιαίτερα εκείνων της περιοχής που περιλαμβάνουν ογκογονίδιο

ΕΚΒΒ2

, σχηματισμό isochromosome 17q, επαναλήψεις, διαγραφές, μεταλλάξεις και άλλες γονιδιωματική αναδιατάξεις. Προηγουμένως [18], εντοπίσαμε ενισχυμένη έκφραση του

RPL 19

mRNA σε κυτταρικές σειρές προστάτη και ιστούς για να συσχετίζονται με μια επιθετική κακοήθη φαινότυπο. Δεδομένου ότι αυξημένα

RPL 19

mRNA εμφανίστηκε ως ένα από ένα σχετικά μικρό αριθμό αλληλουχιών υπερ-εκφράζεται σε καρκίνο του προστάτη, υποθέσαμε ότι η επίδρασή της ήταν πιθανό να είναι επιλεκτική και όχι μέρος μιας παγκόσμιας μη-ειδική ανύψωση στην έκφραση γονιδίων . Ριβοσωμική πρωτεΐνη L19e (RPL 19) ανήκει στην L19E υπερ-οικογένειας των πρωτεϊνών και, σε ευκαρυωτικά, είναι ένα συστατικό της υπομονάδας του ριβοσώματος 60S μεγάλο. Το γονίδιο εκφράζεται σε μεγάλο μέρος της εξέλιξης, ιδιαίτερα σε ευκαρυωτικά και αρχαϊκά, αλλά απουσιάζει από τα βακτήρια [19], [20] αν και υπάρχει ομολογία μεταξύ των αλληλουχιών σε L19 αρουραίου και

E.coli

ριβοσωμικές πρωτεΐνες L18, L30 και S2 [21] Παραδόξως, για μια τέτοια φαινομενικά σημαντικό γονίδιο,

RPL 19

έχει λάβει μέχρι στιγμής ελάχιστη προσοχή. Στους ανθρώπους,

RPL 19

χάρτες στο χρωμόσωμα 17 σε 17q11.2-Q12 όπου κωδικοποιεί 9 δυναμικό παραλλαγές ματίσματος. Σε μια σειρά ανθρώπινων βιοψίες καρκίνου του μαστού,

RPL 19

έχει αναφερθεί ότι εκφράζονται και συν-ενισχύεται μαζί με το

ΕΚΒΒ2

και γονίδια

ΡΝΜΤ

,

PSMB3

και

NR1D1

[22]. Αυτό το συγκρότημα περιοχή που περιέχει πολλαπλά γονίδια έχει προταθεί ως μια πιθανή αμπλικονίου [23], [24] για την παράταση για ορισμένες ~547 kb από

RPL 19

μέσω

STRAD3

και

ΕΚΒΒ2

να

GRB7

στην περιοχή 17q11.2-q12. Επί του παρόντος, δεν υπάρχουν στοιχεία έχουν τεκμηριώσει αυτήν την κερδοσκοπία. Στον καρκίνο του προστάτη, η ενίσχυση του erbB2 είναι σπάνια, που αναφέρθηκαν σε μόνο 0,04% [25] σε 2% [26] των περιπτώσεων, και ως εκ τούτου δεν έναν κοινό μηχανισμό RPL 19 υπερ-έκφραση. Από την αρχική μας αναγνώριση των RPL 19 στον καρκίνο του προστάτη [18], η έκφρασή της έχει δειχθεί να καθορίσει κακή πρόγνωση καρκίνου του παχέος εντέρου [27] και ως νέου αντιγόνου όγκου σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα [28].

Παγκόσμια αλλαγές στη γονίδια διαμορφωμένο σε ανθρώπινο καρκίνο του προστάτη έχουν προηγουμένως σκιαγραφείται χρησιμοποιώντας ανάλυση της σειράς έκφρασης DNA [29] που έχουν εντοπιστεί αλλαγές στη γονιδιακή έκφραση ακόλουθη επιλεκτική αυξητική ρύθμιση των μεμονωμένων γονιδίων στόχων [30], [31] ή μετά γονίδιο-knockdown χρησιμοποιώντας αντινόημα [32 ] ή RNAi [33] τεχνολογία με επακόλουθη μετατροπή του κακοήθους φαινοτύπου. Τα διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων και των συναφών δικτύων τους έχουν αξιολογηθεί ως βιοδείκτες για το διαχωρισμό διαφορετικών φαινοτύπων του καρκίνου του προστάτη, σύμφωνα με τη συμπεριφορά και την ανταπόκριση στη θεραπεία [34]. Ωστόσο, η μεταβολή του επιπέδου της γονιδιακής έκφρασης δεν το κάνει,

ipso facto

, επιβεβαιώνουν πρωταρχικό ρόλο στη κακοήθη διαδικασία. Genomic αστάθεια είναι το σήμα κατατεθέν του κακοήθους μετασχηματισμού [35] και τα αποτελέσματα της κέρδος ή ζημία από ένα μόνο γονίδιο είναι πιθανό να μεταδοθεί σε όλο το γονιδίωμα, με συνέπεια η έκφραση άλλων γονιδίων γίνεται δευτερευόντως διαμορφωμένου [36]. Τέτοιες αλλαγές, είτε μπορεί να έχει άμεση και ενεργό ενδιαφέρον στο προκύπτον κυτταρικό φαινότυπο ή αλλοιωμένη έκφραση τους είναι παθητική και χωρίς συνέπειες. Για να εκτιμηθεί η λειτουργική συνάφεια ενός συγκεκριμένου γονιδίου, η καταστολή της μεταγραφής του επιτρέπει την ανάλυση των άμεσων επιπτώσεων της στην έκφραση του γονιδιώματος-ευρεία. Προηγουμένως, έχουμε επιμολυσμένα κακοήθη επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη PC-3M με ένα 436 bp μήκους αντινοηματικό ολιγονουκλεοτίδιο να knock-down έκφραση του

FABP5

που βελτιώνεται το κακοήθη φαινότυπο όγκου τόσο

in-vitro και

in-vivo

[37]. εδώ, έχουμε απασχολούνται τον περισσότερο χειρουργική τεχνική της παρεμβολής RNA (RNAi) με δυνητικά μεγαλύτερη ειδικότητα και αποτελεσματικότητα, ανάλογα με το συγκεκριμένο γονίδιο στο στόχαστρο [38].

προηγούμενα δεδομένα μας [18] έδειξαν ότι η έκφραση του

RPL 19

μπορεί να είναι λειτουργικά σημαντικό για την προώθηση του προστάτη κακοήθεια. Έχουμε πλέον δοκιμαστεί αυτή η υπόθεση με την επιλεκτική μείωση του

RPL 19

έκφρασης χρησιμοποιώντας RNAi. Τα προκύπτοντα κύτταρα PC-3M επιδεικνύουν καταργηθεί κακοήθη φαινότυπο και

in-vitro

και

in-vivo

όταν υποβάλλονται σε φαινοτυπική αξιολόγηση και ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης. Τα δεδομένα υποστηρίζουν την πιθανότητα μιας λειτουργικό ρόλο για

RPL 19

, ενεργώντας εντός ενός φάσματος αλλοιωμένης έκφρασης γονιδίου, στη διατήρηση της κακοήθους φαινοτύπου των ανθρωπίνων καρκινικών κυττάρων του προστάτη. Η επιβεβαίωση ενός τέτοιου σεναρίου θα επιτρέψει την επιλεκτική θεραπευτική στόχευση των RPL 19, είτε ανοσολογικά [28] ή με τη χρήση μικρών μορίων, να διαμορφώνουν διακριτά υποσύνολα των κυτταρικών πρωτεϊνών που είναι βασικοί υποστηρικτές του κακοήθους φαινοτύπου.

Αποτελέσματα

siRNA knockdown του RPL 19 σε γονικά κύτταρα PC-3M

παροδική επιμόλυνση.

qPCR ανάλυσης των γονικών κυττάρων PC-3M χρησιμοποιώντας τους εκκινητές που ορίζονται στον πίνακα 1 έδειξε ισχυρή

RPL 19

έκφραση mRNA, επιβεβαιώθηκε με ανάλυση αλληλουχίας νουκλεοτιδίων.

η

Στη συνέχεια, παροδική επιμόλυνση των siRNA αλληλουχίες για

RPL 19

εξονίου 1 (Πίνακας 2) απεκάλυψε Target # 1 για να είναι η πιο αποτελεσματική αλληλουχία για RNA σίγηση, μειώνοντας την έκφρασή του σε μόνο 7% του αρχικού επιπέδου (Εικόνα 1Α). Ενώ οι άλλες αλληλουχίες ήταν αποτελεσματικά, μόνο ο συνδυασμός και των τριών ταυτόχρονα ήταν καλύτερη από το στόχο # 1, και μόνο. Στη συνέχεια, Target # 1 χρησιμοποιήθηκε για όλα τα επόμενα πειράματα.

A. qPCR ανάλυση των

RPL 19

επίπεδα έκφρασης μετά από παροδική αποσιώπηση των διαφόρων στόχων στο PC-3M

γονικών κυττάρων. Στόχος # 1 (T1) ήταν το πιο αποτελεσματικό με μόνο 7% υπολειπόμενη στάθμη ανιχνεύεται. Η μείωση αυτή μπορεί να ξεπεραστεί μόνο με την ταυτόχρονη συνδυασμό Τ1 + Τ2 + Τ3. Β qPCR ανάλυση των

RPL 19

επίπεδα έκφρασης μετά από σταθερή αποσιώπηση των 1 Στόχος #. Αυτά τα δεδομένα που συγκεντρώθηκαν από τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν. Οι μετρήσεις είναι σε σχέση με την έκφραση της RPL 19 σε si-PC-3M

κύτταρα αγωνίζομαι. Τα συγκριτικά επίπεδα στα καλοήθη κύτταρα ΡΝΤ2 επίσης δείξει. Γ Μορφολογικά εμφανίσεις του (i) PC-3M

γονικά κύτταρα και διάφορα των αποικιών (II-IV) παρακάτω σταθερές knockdown του

RPL 19

. Μερικές αποικίες (ii) ήταν ελάχιστα προσκολλημένα με την πλειονότητα των κυττάρων που αναπτύσσονται σε εναιώρημα. Άλλα (iii) περιείχε κυρίως πολυπύρηνα μορφές. Τα κύτταρα αποτελούνται πλειοψηφία (iv) οι οποίες ήταν μικρότερες από ό, τι το πατρικό. Οι Κλώνος ST-3 κύτταρα που χρησιμοποιούνται σε όλα τα επόμενα πειράματα που εμφανίζονται σε αυτό πάνελ. (Μεγέθυνση χ 200)

Η

Σταθερή επιμόλυνση.

Τα επίπεδα του

RPL 19

mRNA μετρήθηκαν σε ΡΝΤ2, PC-3M

γονική, PC -3M

αγωνίζομαι και δί

RPL19-

PC-3M

στόχος # 1 παροδικά κύτταρα επιμόλυνσης (Εικόνα 1Β). Σύμφωνα με την προηγούμενη μελέτη [33], η έκφραση σε PC-3M

κύτταρα σκαρφάλωμα ορίστηκε σε ενότητα και σχετική εκφράσεις στις άλλες κυτταρικές σειρές συγκρίθηκαν ως πτυσσόμενο διαφορές.

RPL 19

έκφραση σε PC-3M ήταν 4,9 φορές μεγαλύτερη από εκείνη των κυττάρων ΡΝΤ2 και συνεπής με προηγούμενες μελέτες μας επιβεβαιώθηκε με ανάλυση Northern blot [18]. Στο Si-

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-3 κύτταρα επιμόλυνσης, η έκφραση του

RPL 19

μειώθηκε σε μόνο 1,3 φορές μεγαλύτερη από ό, τι τα κύτταρα ΡΝΤ2. PC-3M

κύτταρα αγωνίζομαι αποκάλυψε μια μείωση 2,3 φορές το

RPL 19

σε σύγκριση με το PC-3M

γονική, παρόλο που η τιμή αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Μόνο κύτταρο κλωνοποίησης [33] που ακολουθείται από qPCR και κηλίδωση Western επιβεβαίωσε δί

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-3 εκφράζονται τα χαμηλότερα επίπεδα του

RPL 19

mRNA και πρωτεΐνης. Αυτό κλώνος κυττάρων στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκε για λεπτομερή ανάλυση φαινοτυπική.

Χαρακτηριστικά ανάπτυξης των si-RPL19cells

in-vitro

Η

Οι κλώνοι των επιμολυσμένων δί

RPL 19

κύτταρα -PC-3Μ καλλιεργούνται υπό τυποποιημένες συνθήκες παρουσίασαν διαφορές στην μορφολογία (Σχήμα 1 C). Σε σύγκριση με το PC-3M

γονικών κυττάρων, Si-

RPL 19

κύτταρα -PC-3M ήταν γενικά λιγότερο προσκολλημένα στο υπόστρωμα. Ωστόσο, αυτά τα κύτταρα διατηρούνται ικανότητα να πολλαπλασιάζονται και θα μπορούσε να είναι επιτυχώς υπο-καλλιεργούνται, αν και ένα μεγάλο ποσοστό των κυττάρων που παρέμειναν σε εναιώρημα. Άλλες δί

RPL 19

κύτταρα -PC-3M παρουσίασε αύξηση σε πολυπύρηνα μορφές, γεγονός που υποδηλώνει μειωμένη ολοκλήρωση της μίτωσης. δοκιμασίες πολλαπλασιασμού (Εικόνα 2Α) αποκάλυψε ότι κατά τη διάρκεια της λογαριθμικής φάσης ανάπτυξης, ο ρυθμός διαίρεσης των κυττάρων από το δί

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-3 κύτταρα επιμόλυνσης δεν επηρεάστηκε σημαντικά (

σ

≥0.05) σε σύγκριση με το PC-3M

γονική και si-PC-3M

αγωνίζομαι. Η ικανότητα του Si-

RPL19-

PC-3M

κλώνο κυττάρων ST-3 για να εισβάλουν μία εξωκυτταρική κολλαγονούχου μήτρας (ECM) συγκρίθηκε με εκείνη του ΡΝΤ2, PC-3M

γονικών και PC -3M

αγωνίζομαι κυτταρικές σειρές (Σχήμα 2Β). Ο αριθμός των κυττάρων που εισέβαλαν μέσα από την ECM ήταν: (ΡΝΤ2) 0.6 ± 0.6, (PC-3M

γονική) 279 ± 33.7 και (PC-3M

αγωνίζομαι) 317 ± 28,3 (

p

& lt? 0.001). Το δί

RPL 19

κύτταρα -PC-3M παρουσίασε μια συγκριτικά μικρή επεμβατική δυναμικό σε μόλις 60 ± 10,7 διαμετακινήθηκαν κύτταρα (

σ

& lt? 0.001). Έτσι, φίμωση

RPL 19

μείωσε την επεμβατική δυναμικό των κυττάρων PC-3M περίπου 5-φορές. Η ενδογενής (βασική) επίπεδα απόπτωσης εντός της PC-3M

γονική και PC-3M

κύτταρα αγωνίζομαι (Πίνακας 3 και Σχήμα 2C) ήταν παρόμοια με εκείνα που λαμβάνονται κατά τη διάρκεια συγκρίσιμες μελέτες του

PRKCZ

γονίδιο [33]. Τα βασικά επίπεδα της απόπτωσης στις τέσσερις κυτταρικές σειρές δεν ήταν στατιστικά διαφορετική (

σ

& gt? 0,05). Αν και ευαισθησίες της PC-3M

γονικής και δί

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-3 κύτταρα να καμπτοθεκίνη δεν μεταβλήθηκαν, αυτός ο παράγοντας αυξημένη απόπτωση στα ΡΝΤ2 και PC-3M

κύτταρα αγωνίζομαι (

σ

& lt? 0.0001)

Α.. Σχετική ανάπτυξη των κυτταρικών σειρών σε μονοστρωματική καλλιέργεια αποκαλύπτοντας καμία στατιστικά σημαντική διαφορά στο ρυθμό πολλαπλασιασμού μεταξύ των νοκ ντάουν κύτταρα (δί

RPL 19

-PC-3M

κλώνος ST-3) και ότι το PC-3M

γονικών κυττάρων. B. Εισβολή δοκιμασία

in-vitro

συγκρίνοντας τις ίδιες πληθυσμούς κυττάρων, όπως αυτές που φαίνονται στο (Α) και αποκαλύπτοντας μια πτώση 83% στην επεμβατική ικανότητας του

RPL 19

knockdown κυττάρων σε σχέση με PC -3M

αγωνίζομαι κύτταρα. επίπεδα Γ Ανάπαυσης των αποπτωτικών δεικτών δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε καλοήθη (ΡΝΤ2), γονική (PC-3M) ή νοκ ντάουν κύτταρα. Μετά την πρόκληση με την καμπτοθεκίνη, καμία αλλαγή εντοπίστηκε στο PC-3M

γονική ή δί

RPL 19

-PC-3M

κλώνο κυττάρων ST-3. Ενώ μία αύξηση στην απόπτωση βρέθηκε στα καλοήθη κύτταρα και στους σκαρφάλωμα-επιμολυσμένα κύτταρα, αυτά δεν ήταν σημαντικές. Δ ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων

in-vivo από

εκτιμώμενο όγκο αποκάλυψαν μια εξαιρετικά σημαντική (

ρ

& lt? 0.005) καταστολή της ανάπτυξης με δύο από τους σταθερούς κλώνους μορφομετατροπέας, σε σύγκριση με το PC -3M

γονική και PC-3M

αγωνίζομαι κύτταρα. Η ανάπτυξη των κυττάρων ΡΝΤ2 δεν συμπεριλαμβάνεται δεδομένου ότι έχουμε ήδη δείξει [33], η ανάπτυξη των όγκων να είναι σπάνια, ιδιαίτερα πάνω από το χρονικό διάστημα των πειραμάτων αυτών. Ε Ανάλυση των βαρών όγκου

in-vivo

επιβεβαίωσε κλώνους ST-1 και ST-3 για να δημιουργήσει σημαντικά όγκους (

σ

& lt? 0.005) μικρότερο από το PC-3M

γονική ή το si-PC-3M

κύτταρα αγωνίζομαι. ΣΤ Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των όγκων που αναπτύσσονται ως ξενομοσχεύματα

in-vivo

υποστηρίζονται τα επίπεδα mRNA δεδομένα (Εικόνα 1Β) ότι ενώ η αρχική PC-3M

γονική (i) και si-PC-3M

σκαρφάλωμα (ii) κύτταρα εξέφρασαν πρωτεΐνη RPL 19 σε υψηλό επίπεδο. Το δί

RPL 19

-PC-3M

κλώνος ST-3 κύτταρα (iii) εξέφρασε RPL 19 ετερογενή και μόνο σε πολύ χαμηλά επίπεδα. (Μεγέθυνση χ 350)

Η

Ογκογονικότητα και RPL 19 πρωτεϊνική έκφραση

in-vivo

Η

Σε όλες τις ομάδες των ζώων, οι όγκοι έγινε εμφανής την ημέρα 2 παρακάτω εμβολιασμό (Πίνακας 4). Ωστόσο, πιο εμφανίστηκε νωρίτερα στο PC-3M

γονική (3/8) και PC-3M

αγωνίζομαι (4/8) ομάδες. Στις δύο επιμόλυνσης κλώνος ομάδες, οι όγκοι πήρε περισσότερο χρόνο για να εμφανιστούν (2/8 όγκους σε ζώα που φέρουν το δί

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-3 κύτταρα και 1/8 όγκους σε ζώα που μεταφέρουν το δί

RPL19-

PC-3M

κλώνος # 2 κύτταρα). Αρχικά, όλοι οι όγκοι ήταν παρόμοιες σε μέγεθος. Μετά από 7 ημέρες η PC-3M

γονική και PC-3M

ομάδες αγωνίζομαι αναπτύξει μεγαλύτερους όγκους από δύο επιμόλυνσης ομάδες (Σχήμα 2D). Κατά την αυτοψία, 15 ημέρες μετά τον εμβολιασμό, μια σημαντική διαφορά (

σ

& lt? 0.001) ήταν εμφανής στα μέσα βάρη του ελέγχου και

RPL19-

νοκ ντάουν όγκους (Σχήμα 2Ε). PC-3M

γονική παρουσίασαν ένα ευρύ φάσμα σε βάρος του όγκου, ένα ζώο που παράγει έναν όγκο των 810 mg σε 15 ημέρες, το μέγιστο επιτρεπόμενο από την Άδεια Έργου. Αντίθετα, ένα άλλο ζώο ανέπτυξε έναν όγκο μόνο 10 mg. Ένα παρόμοιο φαινόμενο συνέβη εντός της PC-3M ομάδα

αγωνίζομαι με όγκους που κυμαίνονται 10-140 mg. Τα τελικά βάρη των PC-3M

γονική όγκοι δεν ήταν σημαντικά διαφορετικές από αυτές του PC-3M

ομάδα αγωνίζομαι (Mann-Whitney U Test,

σ

& gt? 0,05). Έτσι, η καταστολή si-RNA

RPL 19

επηρεάζεται το μέγεθος των όγκων που παράγονται

in-vivo

(

ρ

& lt? 0,05), αλλά όχι σε λανθάνουσα κατάσταση τους. Δεν μικρομεταστάσεων εντοπίστηκαν κατά την αυτοψία ή σε ιστοπαθολογική εξέταση των αποκοπεί ιστών.

Η

Η ανοσοϊστοχημεία των μοσχευμάτων όγκων ανιχνεύθηκε ισχυρή έκφραση της πρωτεΐνης RPL 19, τόσο το PC-3M

γονική και si-PC- 3M

κύτταρα αγωνίζομαι (Σχήμα 2F). Νοκ ντάουν κυτταρικές σειρές δί

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-3 και δί

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-1 παρουσίασαν συγκριτικά λίγη χρώση, αναφέροντας συνεχιζόμενη καταστολή του

RPL 19

γονίδιο στην πλειονότητα των καρκινικών κυττάρων. Ανίχνευση μικρές ποσότητες πρωτεΐνης RPL 19 σε μερικά καρκινικά κύτταρα θεωρείται ότι αντιπροσωπεύει κλωνική μεταβολή που προκύπτει από τη συνεχή έκφραση χαμηλού επιπέδου του γονιδίου, παρά ολική αναστολή του, όπως προσδιορίζονται από qPCR των κυττάρων

in-vitro

και τα αποτελέσματα των μελετών Western blotting. Ενώ η έκφραση του mRNA και της αντίστοιχης πρωτεΐνης σε προστάτη επιθήλιο δεν είναι πάντα σύμφωνη [39], προφανείς διαφορές μεταξύ

in-vitro

και

in-vivo

μελέτες μπορεί να οφείλεται στην

σε -vivo

αποτελέσματα ενός περιβάλλουσα μήτρα στρωματικά επηρεάζουν την προσκόλληση των κυττάρων του όγκου ή σε άλλα επιρροές συμπεριλαμβανομένων των αυξητικών παραγόντων διαμόρφωσης επιμέρους γονιδιακής έκφρασης χαμηλού επιπέδου [40] – [42].

συγκριτικό γονίδιο προφίλ έκφρασης του Si- RPL 19-PC-3M

κλώνο κυττάρων ST-3

προφίλ έκφρασης του γονιδιώματος σε επίπεδο που λαμβάνεται από ολιγονουκλεοτιδίων DNA μικροσυστοιχίες (μη τροποποιημένο Agilent Ανθρώπινου Γονιδιώματος 44K) χρησιμοποιήθηκαν για τον εντοπισμό γονιδίων που διαμορφώνονται μετά από

RPL 19

ρίχνω κάτω. Σύγκριση των γονιδίων που εκφράζονται από το PC-3M

γονική και PC-3M

αγωνίζομαι κυτταρικές γραμμές δεν αποκάλυψε στατιστικά σημαντικές διαφορές (

σ

≥0.05), υποδεικνύοντας ότι η τεχνική επιμόλυνσης δεν ήταν υπεύθυνος για τις αισθητές εκτός στόχου επιπτώσεις που θα προκατάληψη τα πειραματικά δεδομένα. Ένα σύνολο 916 αλληλουχιών DNA, που εκπροσωπεί 768 γονίδια, ταυτοποιήθηκαν ως διαφορικά εκφρασμένων (

σ

≤0.05, εφαρμόζονται Benjamini και Hochberg διόρθωση πολλαπλές δοκιμές). Από αυτούς, 404 ενισχύθηκαν και 364 κάτω-ρυθμίζονται. Μέσα σε αυτό το σύνολο δεδομένων, 184 διαφορετικά γονίδια είχαν διαμορφωθεί τουλάχιστον τέσσερις φορές, 62 είναι up-ρυθμίζονται και 122 κάτω-ρυθμίζονται. Οι κορυφαίοι 50 διαφορικά εκφρασμένα γονίδια σε αυτές τις δύο κατηγορίες συνοψίζονται στον Βάθρα Πληροφορίες S1 και S2 και γραφικά (Σχήμα 3). δεδομένα έκφρασης που προέρχονται από τις συστοιχίες επικυρώθηκαν από qPCR παροχή ανεξάρτητης ποσοτικά στοιχεία για το μέγεθος και την κατεύθυνση της αλλαγής των μεμονωμένων γονιδίων. Η παρατήρηση ότι μόνο 768 γονίδια διαμορφωμένου εξής

RPL 19

knockdown, με τα επίπεδα του mRNA για ένα ευρύ φάσμα των πρωτεϊνών είτε να διατηρηθούν ή ανυψωμένη, υποδηλώνει ότι ριβοσωμική πρωτεΐνη RPL 19 διαφορικά εμπλέκονται στη σύνθεση πρωτεϊνών και όχι επηρεάζουν όλα τα κυψελοειδή πρωτεϊνική σύνθεση σε ένα μη ειδικό τρόπο.

η θερμότητα χάρτη των κορυφαίων 50 γονίδια ρυθμισμένα προς τα πάνω και τα γονίδια Top50 κάτω-ρυθμίζονται ακόλουθη έκφραση-προφίλ του mRNA που εκφράζεται από δί

RPL 19

-PC- 3M

κλώνος ST-3 κύτταρα σε σύγκριση με το PC-3M

γονικών κυττάρων χρησιμοποιώντας το PC-3M

αγωνίζομαι κύτταρα ως κοινό παρονομαστή. Ιεραρχική ομαδοποίηση παρουσιάζεται. Το πράσινο υποδεικνύει τα γονίδια υπερ-εκφράζονται σε ένα δείγμα σε σύγκριση με ανακατώσει-επιμολυσμένα κύτταρα. Κόκκινο δείχνει γονίδια ρυθμισμένα προς τα κάτω στο δείγμα σε σύγκριση με ανακατώσει-επιμολυσμένα κύτταρα. Που αντιστοιχεί αριθμητικά δεδομένα παρουσιάζονται σε Βάθρα Πληροφορίες S1 & amp? S2

Η

ανάλυση Λειτουργική εμπλουτισμό εντοπισμό κάποια οντολογία 20 Gene (GO) βιολογική άποψη διαδικασίας και τρεις όρους μοριακής λειτουργίας (Υποστήριξη Πληροφορίες Πίνακας S3) να σχετίζεται σημαντικά (

σ

& lt.? 0,001) με το νοκ ντάουν (

σ

& lt? 0.001). Επιπλέον, 13 μονοπάτια KEGG είχαν σημαντικά υπερ-εκπροσώπηση των γονιδίων που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ

RPL19-

PC-3M

κλώνος ST-3 και PC-3M

αγωνίζομαι (Υποστήριξη Πληροφορίες Πίνακας S4). ανάλυση μονοπάτι εφευρετικότητα χρησιμοποιήθηκε για τον εντοπισμό σημαντικών βιολογικών δικτύων και μονοπάτια στα οποία τα γονίδια που εκφράζονται διαφορικά ως συνέπεια της

PRKC-ζ

νοκ ντάουν ενεπλάκησαν. Η κορυφή πέντε κατετάγη αλληλοσυνδεόμενα μονοπάτια (Υποστήριξη Πληροφορίες Πίνακας S5) και των τριών γονιδίων οντολογίας (GO) όρους μοριακής λειτουργίας (Υποστήριξη Πληροφορίες Πίνακας S6) είναι ιδιαίτερα σημαντική (

σ

≤10

-27) σε σχέση με σε γονίδια που εκφράζονται διαφορικά μετά

RPL 19

νοκ ντάουν.

ριβοσωμικά γονίδια πρωτεϊνών.

Η υπόθεση ότι siRNA που προκαλείται από κάτω ρύθμιση των

RPL 19

θα μπορούσε να αντισταθμιστεί με διαμόρφωση άλλων ριβοσωμικές πρωτεΐνες αντιμετωπίστηκε με εκτίμηση της σχετικής έκφρασης των μιτοχονδριακών αλληλουχιών μεγάλο γονίδιο ριβοσωμικής πρωτεΐνης (n = 71) και οι κυτταροπλασματικές αλληλουχίες μεγάλο γονίδιο ριβοσωμικής πρωτεΐνης (n = 136) για να ανακαλύψει αν τα πάνω ρύθμιση ενός γονιδίου ήδη ρητή ή είχε συμβεί neoexpression ενός προηγουμένως σιωπηλή ριβοσωμικού γονιδίου της πρωτεΐνης. Από αυτές τις τελευταίες κοόρτη, 44 γονίδια που κωδικοποιούνται γνωστών ρετροϊών, 7 ήταν RP-σαν και 5 ήταν ψευδογονίδια RP. Ο αριθμός των ακολουθιών που αντιπροσωπεύουν κάθε γονίδιο κυμαινόταν από ένα (19 γονίδια) σε 14 (

RPL21

). RPL 19 αναγνωρίστηκε από μια απλή αλληλουχία. Σύμφωνα με SCOP (Διαρθρωτικά Ταξινόμηση των πρωτεϊνών, τελευταία έκδοση 9

ου Νοέμβριο του 2010, https://scop.mrc-lmb.cam.ac.uk/scop) RPL 19 είναι μέλος της πρωτεΐνης υπερ της μετάφρασης πρωτεϊνών που περιέχουν το SH3-σαν δομική περιοχή βαρέλι κατά την κλάση που περιλαμβάνει όλες τις πρωτεΐνες βήτα. Η οικογένεια περιέχει επίσης πρωτεΐνες ριβοσωμικές RPL14e, RPL21e και RPL24p και το Ο-τερματικό πεδίο της RPL2 (https://supfam.org/SUPERFAMILY/cgi-bin/scop.cgi?sunid=50104). Εναλλακτικά, η πρωτεΐνη RPL 19 θα μπορούσαν να αντικατασταθούν από RPL29 ή RPL39e, όντας δομικά παρόμοια μέλη της α-έλικας ομάδα σφαιρικά ρετροϊών με εκτεταμένη ουρές μπορούν να δεσμεύσουν mRNA [43]. Παρά το γεγονός ότι οι διακυμάνσεις σημειώθηκαν στα επίπεδα έκφρασης των αλληλουχιών γονιδίων μεμονωμένων RPL εξής

RPL 19

knockdown, αυτές δεν ήταν σημαντικές, συμπεριλαμβανομένης της ριβοσωμικής πρωτεΐνης γονιδίου

RPL23A

επίσης βρίσκεται στο χρωμόσωμα 17q11.2. Μόνο έκφραση του μιτοχονδριακού

MRPL42

ήταν σημαντικά κάτω-ρυθμίζονται (

σ

& lt? 0,05). Αριθ ενισχυμένη έκφραση οποιουδήποτε γονιδίου RP ανιχνεύθηκε. Έτσι, η αναστολή του

RPL 19

με απώλεια πρωτεΐνης RPL 19 δεν αντισταθμίζεται από ένα διαφορετικό γονίδιο RP. Αντίθετα, οι επιπτώσεις της μείωσης

RPL 19

θα μπορούσε να διαμεσολαβείται από την κωδικοποίηση ανεξάρτητη λειτουργία του γονιδίου ή mRNA που ψευδογονίδιο της [44].

γονίδια γλυκοζυλοτρανσφεράσης.

Μετασχηματισμός επιθηλιακά κύτταρα από καλοήθη σε κακοήθη φαινότυπο συχνά συνοδεύεται από δομικές αλλαγές στους τομείς της κυτταρικής ολιγοσακχαριτών γλυκοπρωτεϊνών και γλυκολιπιδίων [45]. Ιδιαίτερα, η έκφραση της σιαλυλιωμένη και

β-1,6

διακλαδισμένα Ν-συνδεδεμένοι ολιγοσακχαρίτες που απαιτούνται για τον καρκίνο των κυττάρων εισβολή και τη μετάσταση [46]. Το ένζυμο-κλειδί σε αυτή τη διαδικασία είναι η μαννοζυλο (

α-1,6

-) – γλυκοπρωτεΐνη

β-1,6

-Ν-ακετυλο-γλυκοζαμινυλοτρανσφεράση κωδικοποιείται από το γονίδιο

MGAT5

και ρυθμίζεται από τη σηματοδότηση μονοπατιού RAS-RAF-ΜΑΡΚ. Μαζί με

PTEN

,

MGAT5

ρυθμίζει τη δυναμική της μεμβράνης του PI3K /Akt σηματοδότηση για να προωθήσει την επεμβατική κακοήθη φαινότυπο [47]. Σε περίπτωση που κακοήθεια μειώνεται ακόλουθο χειρισμό του κυτταρικού φαινοτύπου, οι αλλαγές στις δομές ολιγοσακχαριτών κυτταρικής επιφάνειας αξιωματική να συμβεί. Τέτοιες αλλαγές, που προκαλούνται από γλυκοζυλοτρανσφεράσες μπορεί να αποδεικνύεται με αλλαγμένη έκφραση των αντίστοιχων γονιδίων. Από τα 768 γονίδια διαφορικά εκφρασμένα, μόνο δύο γονίδια γλυκοζυλοτρανσφεράσης επηρεάστηκαν σημαντικά μετά

RPL 19

νοκ ντάουν (Υποστήριξη Πληροφορίες Πίνακας S7). Σε αντίθεση με το φάσμα των γλυκοζυλοτρανσφερασών διαμορφωμένο παρακάτω si-RNA νοκ ντάουν του

PRKC-ζ

στο PC-3M κύτταρα [33], καμία αλλαγή ήταν εμφανής σε silayl- ή φουκοσυλ-τρανσφεράσης γονίδια. Ωστόσο, η μείωση κατά 4 φορές ταυτοποιήθηκε στο επίπεδο του

MGAT4A

(

ρ

& lt? 0,05) που κωδικοποιεί το ένζυμο μαννοζυλο (

α-1,3 -) –

γλυκοπρωτεΐνη

β-1,4-

Ν-ακετυλογλυκοζαμινυλοτρανσφεράση και εμπλέκεται στη διαμεσολάβηση γλυκοζυλίωση των πρωτεϊνών που κωδικοποιούνται από το

SLC43A3

(πρωτεογλυκάνη 2), SLC14A1 (ουρία μεταφορέα) και

SLC8A1

(νάτριο /εναλλάκτη ασβέστιο), ελέγχοντας έτσι την έκφραση της κυτταρικής επιφάνειας τους. Πράγματι, οι τρεις τελευταίοι γονίδια διαμορφώνονται μετά από

RPL 19

νοκ ντάουν. Αντιστρόφως, η αύξηση της 2~3-πλάσια ταυτοποιήθηκε στο επίπεδο του

GALNACT-2

(

ρ

& lt? 0,05) που κωδικοποιεί το ένζυμο θειική χονδροϊτίνη Ν-ακετυλγαλακτοζαμινυλτρανσφεράση 2 και μεταφορές Ν- ακετυλογαλακτοζαμίνη (GalNAc-) από UDP-ΟαΙΝΑο [48] για να χονδροϊτίνη, θειική χονδροϊτίνη, κατά προτίμηση με σύμπλοκο oligosacfocharides περιέχουν

β1 → 4

δεσμούς [49], όπως αυτά που δημιουργούνται από

MGAT4A

.

ion κανάλια και συνδέονται γονίδια

Ο κακοήθη φαινότυπο του προστάτη επιθηλιακών κυττάρων μπορεί να ρυθμίζεται με διαφορική έκφραση των διαύλων ιόντων [50] -. [52]. Μελέτες από αυτό το εργαστήριο [52] και αλλού [53] έχουν δημιουργήσει μια λειτουργική σχέση μεταξύ δυναμικού διαύλων ιόντων και την επεμβατική φαινότυπο των κυττάρων καρκίνου του προστάτη [50]. Ανάκριση των συστοιχιών έκφρασης αποκάλυψε πολλά κανάλια ιόντων και κάποιες σχετικές γονίδια να διαμορφώνεται μετά από

RPL 19

νοκ ντάουν (Υποστήριξη Πληροφορίες Πίνακας S3). διαύλων καλίου έδειξε μια μικτή απάντηση. Η τάση πύλη K

+ κανάλι άλφα και βήτα υπομονάδες (

KCNQ2

και

KCNAB2

) ήταν κάτω-ρυθμίζονται 3,5-πλάσια και 2,25 φορές αντίστοιχα (

p

& lt? 0,05 και για τα δύο). Η προς τα μέσα-ανορθωτή K

+ κανάλια (

KCNJ6

και

KCNJ12

) παρουσίασαν μικτή απάντηση, είναι up-ρύθμιση 5.5-φορές και κάτω-ρυθμίζονται 2,5 φορές, αντίστοιχα (

σ

& lt? 0,01 και για τα δύο). Δύο τασεοελεγχόμενων Na

+ γονίδια κανάλι (

SCN3A

και

SCN9A

) ήταν και οι δύο up-ρύθμιση, 9 φορές (

σ

& lt? 0.005) και 2,3 φορές (

σ

& lt? 0.05), αντίστοιχα. Τέλος, δύο τασεοελεγχόμενων Cl

– κανάλια /Cl

– H

+ αντιμεταφοράς μεταφορείς (

CLCN4

και

CLCN5

) ήταν και οι δύο up-ρύθμιση, 2.1 και 1,8-φορές, αντίστοιχα (

σ

& lt? 0,05 και για τα δύο).

Άλλα γονίδια και τα αντίστοιχα δίκτυα

Κανένα από τα γονίδια ελέγχου κυτταρικού κύκλου, συμπεριλαμβανομένης της. 31 εμείς προηγουμένως έδειξε να συνδέεται με υψηλή πιθανότητα της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη [54] είχαν διαμορφωμένου στην έκφρασή τους ακόλουθους knockdown ή

RPL 19

. Παρομοίως, κανένα από τα γονίδια που αναγνωρίζονται για να μεσολαβήσει απόπτωση ήταν διαμορφωμένο στα επιμολυσμένα. Από τις 19 σειρές που καλύπτουν την οικογένεια κασπάσης των γονιδίων της απόπτωσης,

CASP1

ήταν κάτω-ρυθμίζονται ~ 7 φορές (

σ

& lt? 0.005) μετά από

RPL 19

νοκ ντάουν. Η έκφραση των άλλων μελών της οικογένειας δεν μεταβλήθηκε. Προς στήριξη των δεδομένων πίνακα, κηλίδωση Western επιβεβαίωσε ότι διασπασμένου κασπάσες -3 και -9 δεν ήταν εκφρασμένη είτε σε PC-3M

γονική ή η δί

RPL19-

PC-3M

κλωνοποιήσουν ST-3 κύτταρα επιμόλυνσης. Τα ευρήματα αυτά υποστηρίζουν την άποψη ότι αλλάζοντας την έκφραση του

RPL 19

δεν επηρεάζει ούτε την κυτταρικού κύκλου ή τα αποπτωτικά μονοπάτια. Αντιστρόφως, οι μεγάλες οδοί επηρεάζονται εξής

RPL 19

knockdown περιλαμβάνουν δίκτυα γονιδίων που ρυθμίζουν την ομοιόσταση και την αλληλεπίδραση μεταξύ των κακοηθών κυττάρων και του περιβάλλοντός τους (Σχήμα 4). Ως παράδειγμα, η έκφραση του γονιδίου ρυθμιστικής

AGR2

εντοπίσαμε να είναι αυξημένα σε καρκίνους του προστάτη της επιθετικής φαινότυπο [55] ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω ~ 11-φορές (

ρ

& lt? 0,02) μετά από

RPL 19

νοκ ντάουν. Το προϊόν αυτού του γονιδίου προσδένεται στον υποδοχέα ErbB3 και ρυθμίζεται από τις forkhead μετεγγραφικών ρυθμιστών δέσμευσης DNA Foxa1 και Foxa2. Κηλίδωση Western επιβεβαίωσε κατάργηση αυτής της πρωτεΐνης στα κύτταρα knockdown (Σχήμα 5), που υποστηρίζουν τα δεδομένα array (Βάθρα Πληροφορίες S1 & amp? S2). Σε αντίθεση, HOXB13 που κωδικοποιεί ένα παράγοντα μεταγραφής που ανήκουν στην οικογένεια γονιδίου ομοιοακολουθίας που έδειξε να είναι ένας ιστο-ειδική βιοδείκτη καλοήθων και κακοήθων επιθήλιο προστάτη [56] ανυψώθηκε ~ 3-φορές (

ρ

& lt? 0.001 ) μετά από

RPL 19

νοκ ντάουν.

Η ανάλυση των γονιδίων που διαμορφώνονται μετά από

RPL 19

νοκ ντάουν προσδιόρισε πέντε αλληλένδετα μονοπάτια κυρίως επηρεάζονται (Υποστήριξη Πληροφορίες Πίνακας S5). Τέσσερις από αυτές περιλαμβάνουν γονίδια που κωδικοποιούν ένζυμα ΜΜΡ (Α)? το σύμπλοκο ICAM1-ιντεγκρίνης (Β)? Το συγκρότημα NFκB (C) και ρύθμιση PI3K (D). Η ανάλυση αυτή επιβεβαιώνεται διάφορα γονίδια που ρυθμίζονται από τα κάτω-ρυθμιζόμενη έκφραση

RPL 19

να διασυνδεθούν, τονίζοντας τις πολυάριθμες πορείες για cross-talk μεταξύ φαινομενικά διακριτές βιολογικές διαδικασίες.

Η

Σε αυτές τις μελέτες, έγινε σύγκριση με δί

PRKC-ζ

-PC-3M

t1-6 [33] και δί

FABP5

-PC-3M

κλώνος 3 [62] RNAi-νοκ ντάουν κύτταρα για να επιβεβαιώσετε ότι οι αλλαγές στα επίπεδα της πρωτεΐνης ήταν ειδικά για

RPL 19

νοκ ντάουν και όχι μέρος ενός γενικού απάντηση στην αναστολή του γονιδίου χρησιμοποιώντας si-RNA. Μετά από χρώση με πρωτεύοντα αντισώματα, οι μεμβράνες εκ νέου χρώση για β-ακτίνη. Η ένταση αυτής της ζώνης χρησιμοποιήθηκε για να ομαλοποιήσει ατομικά επίπεδα πρωτεΐνης. Α RPL 19: Μετά από

RPL 19

νοκ ντάουν, τα επίπεδα μειώνονται σε περίπου 5% των ατόμων στην PC-3M

γονικών κυττάρων ενώ τα επίπεδα διατηρήθηκαν σε δί

PRKC-ζ-

PC -3M

t1-6 και δί

FABP5

της -PC-3M

κλώνος 3 κύτταρα. Β S11A4: Επίπεδα διατηρήθηκαν σε όλες τις κυτταρικές γραμμές, είναι ανεπηρέαστη από

RPL 19

νοκ ντάουν.