Αφηρημένο

Εγκέφαλος-ειδικά αγγειογένεσης αναστολέα 1 (BAI1) -associated πρωτεΐνη 2-όπως 1 (BAIAP2L1) , επίσης γνωστή ως υπόστρωμα της κινάσης τυροσίνης υποδοχέα ινσουλίνης (IRTKS), εμπλέκεται στην προεξοχή μεμβράνη πλάσματος και το σχηματισμό ακτίνης κατά τη διάρκεια της κυτταρικής μορφογένεση και τη μετανάστευση. BAIAP2L1 είναι πρόσφατα αναφερθεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού EGFR-ΕΚΚ σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα. Σε αυτή τη μελέτη, αναφέρουμε την πρώτη ολοκληρωμένη μελέτη της BAIAP2L1 ρύθμιση προς τα πάνω στον ανθρώπινο καρκίνο των ωοθηκών. Προς τα πάνω ρύθμιση BAIAP2L1 σε όγκους των ωοθηκών για πρώτη φορά διαπιστώθηκε κατά τη διάρκεια της διαλογής RNA και επιβεβαιώθηκε με ανοσοϊστοχημικές μελέτες σχετικά με καρκίνους των ωοθηκών και άλλων τύπων καρκίνου. Σημαντική προς τα πάνω ρύθμιση BAIAP2L1 στον καρκίνο των ωοθηκών ελέγχθηκε με την ανάλυση πολλαπλές ανεξάρτητες ομάδες που διατίθενται στο κοινό σύνολα δεδομένων. Επιπλέον, η έκφραση της πρωτεΐνης BAIAP2L1 σε μεταστατικές αλλοιώσεις ήταν υψηλότερες από τις αντίστοιχες πρωτογενείς όγκους. Λειτουργικές δοκιμασίες στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών αποκάλυψε ότι BAIAP2L1 εμπλέκεται στην προαγωγή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και την αποφυγή της απόπτωσης. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν ότι όχι μόνο BAIAP2L1 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης για τον καρκίνο των ωοθηκών του ανθρώπου, αλλά και αποκαλύπτουν το ρόλο της στην βιολογία καρκίνου. Περαιτέρω αποσαφήνιση του ρόλου της BAIAP2L1 στο πλαίσιο του υποδοχέα ινσουλίνης οδούς των καρκινικών κυττάρων σηματοδότησης είναι δικαιολογημένη για την ανάπτυξη θεραπευτικών του καρκίνου με τη στόχευση του μεταβολισμού ειδική για τον καρκίνο

Παράθεση:. Chao Α, Tsai CL, Jung SM, Chuang WC , Kao C, Hsu A, et al. (2015) BAI1-Associated Protein 2-Like 1 (BAIAP2L1) είναι μια πιθανή βιοδεικτών στον καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 10 (7): e0133081. doi: 10.1371 /journal.pone.0133081

Επιμέλεια: David Wai Chan, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 27 Μαρτίου, 2015? Αποδεκτές: 22 του Ιούνη, 2015? Δημοσιεύθηκε: 29 Ιουλ 2015

Copyright: © 2015 Chao et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. το έργο αυτό χρηματοδοτήθηκε με την Chang Gung Ιατρικό Ίδρυμα: CMRPG3E0391 (Chao Α), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 και CRRPG3D0031 (Wang Θ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς αυτού του χειρογράφου έχουν τα ακόλουθα ανταγωνιστικά συμφέροντα: Yi-Chao Lee είναι ένα από τους εφευρέτες της ευρεσιτεχνίας ΗΠΑ αριθ: 7192709B2, με ημερομηνία 20, Μαρτίου του 2007, πληρεξούσιο της Digigenomics Co, Ltd Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών. είναι η κύρια αιτία θανάτου στις γυναικολογικές κακοήθειες [1]. Είναι, μαζί με περιτοναϊκή καρκίνωμα και σάλπιγγα καρκίνωμα σωλήνα, η ένατη πιο κοινή θανάτου στις γυναίκες στην Ταϊβάν [2]. Η συνολική επιβίωση του καρκίνου των ωοθηκών παραμένει φτωχή παρά τις βελτιώσεις στην αγωγή του καρκίνου των ωοθηκών [3,4]. Το τυπικό καθυστερημένη διάγνωση του καρκίνου των ωοθηκών, όταν η νόσος έχει ήδη εξαπλωθεί πέρα ​​από τη λεκάνη κατά το χρόνο της κλινικής εικόνας, είναι μέρος της αιτίας για την κακή έκβαση της [5]. Ανοσολογική ανίχνευση του αντιγόνου του καρκίνου του ορού CA125 [6] έχει ενσωματωθεί στο συνήθη πρακτική για τη διάγνωση των ωοθηκών μαζών [7]. CA125 είναι επίσης χρήσιμη για την παρακολούθηση της απόκρισης και τη διευκόλυνση της επιτήρησης για ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών [8]. Ωστόσο, το επίπεδο του CA125, με ευαισθησία 80%, δεν είναι αυξημένη σε όλους τους όγκους των ωοθηκών, και η ειδικότητα μπορεί να επηρεαστεί από άλλες κακοήθειες, οι φυσιολογικές συνθήκες, και την ενδομητρίωση [9]. Ως εκ τούτου, η αναγνώριση των πρόσθετων δεικτών χρειάζεται επειγόντως να συμπληρώσει CA125 για την έγκαιρη ανίχνευση, αξιολόγηση της θεραπείας, και την αξιολόγηση πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών.

BAIAP2L1 /IRTKS (Gene ID 55971) βρίσκεται στο χρωμόσωμα 7q21.3 -q22.1. BAIAP2L1 κωδικοποιεί μία πρωτεΐνη 511 αμινοξέων με μοριακό βάρος περίπου 57 kD [10,11]. BAIAP2L1, μαζί με BAIAP2 (IRSp53), BAIAP2L2 (FLJ22582), ανήκουν στην οικογένεια IRSp53, και όλοι τους μοιράζονται το IMD (IRSp53 και Αγνοουμένων-στον τομέα μετάσταση) και την περιοχή SH3 [12]. Το domain IMD ανήκει στην ευρύτερη οικογένεια της περιοχής Bin-Amphipsin-Rev167 (BAR) [12], και ο τομέας BAR σχηματίζει ένα σχήμα ημισελήνου dimmer που μπορεί να δεσμεύσει πολύ κυρτό, αρνητικά φορτισμένη μεμβράνη [13]. Επιπλέον, η IMD έχει ακτίνη ικανότητα νήμα πρόσδεσης [12]. Ο τομέας SH3 είναι γνωστή για πολλαπλές αλληλεπιδράσεις πρωτεΐνης-πρωτεΐνης [14]. Ως εκ τούτου, τα μέλη της οικογένειας IRSp53 θεωρηθεί ως πρωτεΐνες ικρίωμα ή προσαρμογείς που βοηθούν την συναρμολόγηση των συμπλοκών πρωτεΐνης στο νήμα ακτίνης ή στη μεμβράνη με ένα συγκεκριμένο καμπυλότητα.

BAIAP2L1 μπορούν να διαμορφώσουν συστάδες μικρής δεσμίδων ακτίνης κατά τη διάρκεια μετακίνηση των κυττάρων [15]. Σε εντεροαιμορραγικό

Escherichia coli

, πολλές από τις εκθέσεις σχετικά με BAIAP2L1 αφορούν την ομοιότητά του με BAIAP2 σε προεξοχές μεμβράνη ακτίνης-πλούσια, που ονομάζεται βάθρα [16,17,18,19]. Σε κύτταρα θηλαστικών, BAIAP2L1 έχει επίσης συνδεθεί με τη μετανάστευση Src-dependent cell [14,19,20] και MDM2-p53 μεσολαβεί ουβικουϊτινίωση [21]. Στην ογκογένεση, BAIAP2L1 έχει αναφερθεί ότι προάγουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων μέσω της ενεργοποίησης του μονοπατιού EGFR-ΕΚΚ στο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [22]. Ογκογόνο υποδοχέα FGF γονιδίου 3 (FGFR3) -BAIAP2L1 σύντηξης, σε καρκίνους της ουροδόχου κύστης [23], καθώς και καρκίνους του πνεύμονα [24], και η αναγνώρισή του μπορεί να βοηθήσει στην επιλογή των ασθενών για τη θεραπεία FGFR-στόχο. Μέχρι σήμερα, ο ρόλος της BAIAP2L1 στον καρκίνο των ωοθηκών δεν έχει οριστεί.

Αναφέρουμε εδώ την πρώτη ολοκληρωμένη μελέτη της BAIAP2L1 αυξητική ρύθμιση σε καρκίνους των ωοθηκών. Προς τα πάνω ρύθμιση BAIAP2L1 σε όγκους των ωοθηκών για πρώτη φορά αποκαλύφθηκε στις Clontech Καρκίνο Profiling Array και επιβεβαιώθηκε με ανοσοϊστοχημικές μελέτες. Δημόσια σύνολα δεδομένων περιοχή χρησιμοποιήθηκαν για την επικύρωση ότι η έκφραση του BAIAP2L1 είναι σημαντικά υψηλότερη σε καρκίνο των ωοθηκών από φυσιολογικούς ιστούς και άλλους τύπους καρκίνου. Λειτουργικές δοκιμασίες στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών δείχνουν ότι BAIAP2L1 εμπλέκεται στην προαγωγή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και την αποφυγή της απόπτωσης. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η ρύθμιση προς τα πάνω του BAIAP2L1 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ένα δυνητικό βιοδείκτη σε καρκίνο των ωοθηκών.

Υλικά και Μέθοδοι

ανάλυση μικροσυστοιχιών για διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων

μικροσυστοιχίες ολιγονουκλεοτίδιο που περιέχει 18861 ανιχνευτές (Compugen Inc., Τελ Αβίβ, Ισραήλ) χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων μεταξύ του RNA ανθρώπινης φυσιολογικής ωοθήκης (αριθμός καταλόγου CR0856, Clontech, CA, USA) και του όγκου των ανθρωπίνων ωοθηκών (αριθμός καταλόγου 64011-1, Clontech, Palo Alto, CA). Διαδικασίες επισήμανσης CyDye και σάρωση ήταν παρόμοια με αυτή που είχαν αναφερθεί στο παρελθόν [25]. Μεταξύ διαφορικά εκφραζόμενα γονίδια μεταξύ της κανονικής ωοθήκη και των ωοθηκών των όγκων, που επιλέγεται BAIAP2L1 ήταν να αξιολογηθούν περαιτέρω. μεμβράνες Καρκίνος Profiling Array II (κατάλογος # 7847-1, Clontech, Palo Alto, CA) υβριδοποιήθηκαν με το ραδιοσημασμένο ανιχνευτή cDNA για BAIAP2L1. Η συστοιχία περιλαμβάνει 154 δείγματα από διαφορετικούς τύπους καρκίνου του μαστού, των ωοθηκών, του ορθού, του στομάχου, του πνεύμονα, των νεφρών, της ουροδόχου κύστης, του αιδοίου, του προστάτη, της μήτρας, του τραχήλου, του θυρεοειδούς αδένα, των όρχεων, του δέρματος, το λεπτό έντερο, πάγκρεας, τραχεία, και το ήπαρ ( S1 σχήμα).

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των κλινικών καρκινικών ιστών

φορμόλη-σταθερό ιστών σε παραφίνη-ενσωματωμένες (FFPE) του όγκου του καρκίνου των ωοθηκών ελήφθησαν από Chang Gung Memorial Hospital. Κλινικών πληροφοριών των ασθενών ήταν αρχειοθετούνται στη βάση δεδομένων της Γυναικολογικής Cancer Research Center, το Memorial Hospital Chang Gung, Ταϊβάν. Η μελέτη εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Chang Gung Memorial Hospital (IRB No.95-1328B). Γραπτή συγκατάθεση από τον δότη ή τον πλησιέστερο συγγενή λήφθηκε για τη χρήση αυτού του δείγματος της έρευνας. Εμπορικά διαθέσιμες συστοιχίες ιστών περιλαμβάνονται: FDA805-1and 805 – 2 (S1 Πίνακες) (ΗΠΑ Biomax Inc, Rockville, MD, USA.), BC 111109, 111110 π.Χ., και OV8011-2-BX (S2 Πίνακες) (ΗΠΑ Biomax Inc. , Rockville, MD, USA).

διαφάνειες FFPE ιστούς (καρκίνο των ωοθηκών και κανονική ωοθήκη, κάθε 4-mm πάχος) αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε μειούμενες συγκεντρώσεις αιθανόλης. Οι τομές ανοσοχρώση με ένα αντίσωμα αντι-BAIAP2L1 σε αραίωση 1: 1000 με τη χρήση του Bond-Max αυτοματοποιημένη βαφεύς ανοσοϊστοχημική (Leica, Γερμανία). Η συνολική ανοσοϊστοχημική σκορ (histoscore) σε αυτή τη μελέτη ήταν το ποσοστό των θετικών κυττάρων πολλαπλασιάζεται με ένταση χρώσης του (0 = αρνητική, 1 = ασθενής, 2 = μέτρια, 3 = ισχυρή), και κυμαίνεται από 0 έως 300, (100% πολλαπλασιαζόμενο επί 3) [26,27].

Culture και τη θεραπεία των κυτταρικών σειρών

ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών γραμμών ωοθηκών (TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774), κύτταρα ινοβλαστών πνεύμονος (HFL1), και κανονική αορτής λείων μυϊκών κυττάρων (T /G ΗΑ-VSMC) ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). TOV112D, TOV-21G, SKOV3, MDAH2774, και HFL1 καλλιεργήθηκαν σε DMEM /F12 με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό και κατάλληλες ποσότητες πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη στους 37 ° C με 5% CO2. T /G κύτταρα HA-VSMC καλλιεργήθηκαν σε DMEM /F12 με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 0.05% mg /ml ασκορβικό οξύ, 0.01 mg /ml ινσουλίνη, 0.01 mg /ml τρανσφερίνη, 10 ng /ml σεληνικό νάτριο, και 0.03 mg /ml συμπλήρωμα ανάπτυξης ενδοθηλιακών κυττάρων. Για την ανάλυση απόπτωσης, κύτταρα επιμολυσμένα με BAIAP2L1 siRNA ήταν είτε ακτινοβολημένα με υν (100 J /M

2) ή κατεργασία με 10 μΜ cisplatin (Fresenius Kabi, NC, USA) για 24 ώρες πριν την ανάλυση.

Η επιμόλυνση του μικρό παρεμβαλλόμενο (SI) RNA

MDAH2774 και SKOV3 (8000 και 4000 κύτταρα, αντίστοιχα, σε πλάκες 96-φρεατίων) μορφομετατράπηκαν με 1 pmole μικρό παρεμβαλλόμενο-BAIAP2L1 (CCCGAATTCACAAAGGGTAAATAAT, Invitrogen, Carlsbad, CA) σε Lipofectamine RNAimax (Invitrogen, Carlsbad, CA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Μετά από 48 ώρες επιμόλυνσης, η καταστολή των στοχευμένων γονιδίων επιβεβαιώθηκε με κηλίδα western αναλύσεις.

εκχύλιση RNA και σε πραγματικό χρόνο Q-PCR

Το συνολικό RNA απομονώθηκε με το αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA). Για RT-QPCR, πρώτος κλώνος cDNA συντέθηκε με μία εκκινητή ολιγο-Τ χρησιμοποιώντας εκθέτη III πρώτα κιτ σύνθεσης κλώνου (Invitrogen, Carlsbad, CA). Το επίπεδο έκφρασης του BAIAP2L1 (πρόσθιος εκκινητής: CACCCGACTACTTGGAATGCT, αντίστροφο έναυσμα: CGTTGGCATCGTTAGGAGC) ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας SYBR Green δοκιμασίας (Applied Biosystems). αφυδρογονάση (GAPDH) έκφραση αφυδρογονάση 3-φωσφορικής (εμπρόσθιος εναρκτήρας: 5′-GGTATCGTGGAAGGACTCATGAC-3 ‘, αντίστροφος εκκινητής: 5′-ATGCCAGTGAGCTTCCCGT-3’) χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Οι thermocycles ήταν ως ακολούθως: αρχική μετουσίωση στους 95 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 45 κύκλους των 95 ° C για 15 s και 60 ° C για 1 λεπτό. Οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν με τον PRISM 7900 μέσου ΗΤ ΑΒΙ (Applied Biosystems). Υπολογισμοί έγιναν με τη μέση του κύκλου τιμή κατωφλίου (Ct) για κάθε διπλούν μετρήσεις.

Western ανάλυση κηλίδος

Τα κύτταρα λύθηκαν σε παγωμένο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης ραδιοανοσοκατακρήμνισης δοκιμασίας [1% Triton Χ- 100, 1% ΝΡ-40, 0.1% SDS, 0.5% DOC, 20 mM Tris-υδροξυμεθυλο-αμινομεθάνιο (Tris-HCl, ρΗ 7,4), 150 mM NaCl, αναστολείς πρωτεάσης (Sigma, St. Louis, ΜΟ, USA), και αναστολείς φωσφατάσης (Sigma, St Louis, ΜΟ, USA)] επί 30 λεπτά. Μετά από ηλεκτροφορητικό διαχωρισμό επί 13% πηκτών πολυακρυλαμιδίου-δωδεκυλοθειικού νατρίου, οι πρωτεΐνες επί πηκτωμάτων μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Σουηδία). Τα δείγματα πρωτεΐνης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας αντι-BAIAP2L1 (Abnova, Taipei, Ταϊβάν), αντι-διασπασμένη κασπάση 3 (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA), αντι-PARP (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA) και αντι- ακτίνης (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ως πρωτογενή αντισώματα και δευτερογενή αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση αντίστοιχη χρένο (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Σημασμένες πρωτεΐνες στη συνέχεια ανιχνεύθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια (ECL, Millipore, και Bradford, ΜΑ, USA). Για κάθε δείγμα, οι εντάσεις ζώνης ομαλοποιήθηκαν σε β-ακτίνη.

Κυτταρική βιωσιμότητα

δοκιμασία

Μετά την knockdown έκφρασης ενδογενούς BAIAP2L1 με siRNA για 48 ώρες, η δραστικότητα πολλαπλασιασμού των κυττάρων μετρήθηκε με 3- (4 , 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5 μέθοδος διφαινυλοτετραζολίου (ΜΤΤ) (Sigma, M5655-1G). MDAH2774 και SKOV3 κύτταρα απλώθηκαν σε 8000 και 4000 κύτταρα /φρεάτιο, αντιστοίχως, σε πλάκες 96 φρεατίων. Δουλεύοντας συγκέντρωση του διαλύματος ΜΤΤ ήταν 1 mg /ml. Η οπτική πυκνότητα μετρήθηκε χρησιμοποιώντας Victor2 σάρωσης πολλαπλών φρεατίων φασματοφωτόμετρο με την απορρόφηση στα 570 nm. Για την ανίχνευση BrdU, οι BAIAP2L1 knockdown καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών επωάστηκαν με BrdU για 6 ώρες. δραστικότητα σύνθεση DNA προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ ELISA BrdU (Roche Applied Science) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26].

Ανίχνευση γονιδίου σύντηξης μεταξύ FGFR και BAIAP2L1

Το συνολικό RNA εκχυλίστηκε από 8 προσφάτως καταψυχθεί καρκίνου των ωοθηκών ιστούς με τα πρωτόκολλα που έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [28]. Ανίχνευση γονίδιο σύντηξης FGFR3-BAIAP2L1 διεξήχθη με KAPA2G κιτ ταχείας PCR (Kapabiosystem, Wilmington, ΜΑ) στις ακόλουθες συνθήκες: 95 ° C για 3 λεπτά, ακολουθούμενη από 35 κύκλους των 95 ° C για 30 sec, 53 ° C για 30 sec και 72 ° C για 30 δευτερόλεπτα, και κατέληξε σε 72 ° C για 10 λεπτά. Οι εκκινητές PCR είχαν προηγουμένως αναφερθεί [24]. Το RNA των κυττάρων SW780 καρκίνου της ουροδόχου κύστης χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος για την ανίχνευση του γονιδίου σύντηξης FGFR3-BAIAP2L1 [23].

Η ανάλυση των δεδομένων των μικροσυστοιχιών σε δημοσίως διαθέσιμες βάσεις δεδομένων

Δεδομένα με τον αριθμό σειράς GSE14407 [29], GSE2109 και GSE36133 [30] ανακτήθηκαν από την έκφραση γονιδίων Omnibus (GEO, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/geo/). ανάλυση της έκφρασης εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας Affymetrix έκφρασης Console (Affymetrix, Santa Clara, CA).

Δεδομένα ανάλυσης

Τα αποτελέσματα των

in vitro

Οι μελέτες που προέρχονται από τουλάχιστον τρεις ανεξάρτητες πειράματα και αναλύθηκαν με δύο-tailed t-tests. Οι διαφορές στα histoscores μεταξύ δύο ομάδες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Student Τ. Δύο ουρά P-τιμές & lt? 0.05 θεωρήθηκαν σημαντικές. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με το στατιστικό λογισμικό SPSS, έκδοση 17.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

ωοθηκών καρκίνων εκφράζουν υψηλότερα επίπεδα BAIAP2L1 από τους άλλους καρκίνους

Τα 10 όγκους των ωοθηκών δείγματα μελετήθηκαν αποτελείται από 6 κακοήθεις καρκίνους, 2 οριακά ορώδες κυσταδένωμα (συντονίζει #E και Ν), και 2 λειομύωμα (συντεταγμένες #F και J) (Εικ 1Α). Άλλες γυναικολογικές καρκίνου και φυσιολογικούς ιστούς του τραχήλου της μήτρας και προέλευση προσδιορίστηκαν επίσης. Σε όλους τους τρεις τύπους ιστού, τα επίπεδα έκφρασης BAIAP2L1 σε ιστούς όγκων ήταν σημαντικά υψηλότερες από φυσιολογικούς ιστούς. Παρομοίως, η έκφραση του mRNA του BAIAP2L1 σε καρκινικές κυτταρικές σειρές των ωοθηκών ήταν υψηλότερη από την κανονική κυτταρικές σειρές (Σχήμα 1Β). Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα της έκφρασης του RNA, την έκφραση BAIAP2L1 πρωτεΐνης είναι υψηλότερη σε καρκίνο των ωοθηκών σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς, όπως φαίνεται στο FDA805-1and 805 έως 2 συστοιχίες ιστού (Σχήμα 2).

(Α) της συστοιχίας Cancer προφίλ II (BD Clontech) του cDNA που προέρχεται από τους φυσιολογικούς ιστούς (Ν) και ιστούς όγκου (Τ) της ωοθήκης, της μήτρας, και του τραχήλου. Η ποσοτικοποίηση του mRNA του όγκου και των φυσιολογικών ιστών από διαφορετικές τοποθεσίες εμφανίζονται στη δεξιά πλευρά. έκφραση BAIAP2L1 σε όγκους ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε φυσιολογικούς ιστούς (** Ρ & lt? 0,01). (Β) έκφραση BAIAP2L1 RNA σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών ήταν υψηλότερες από τις κανονικές κυτταρικές γραμμές. Ωοθηκών γραμμές καρκίνου περιλαμβάνονται ορώδες τύπου (SKOV3), ενδομητριοειδές τύπου (TOV112D, MDAH2774), καθώς και σαφείς κυτταρικό τύπο (TOV21G). HFL1 είναι η ανθρώπινη φυσιολογική πνεύμονα ινοβλαστών και Τ /G HA-νδΜΟ είναι η ανθρώπινη φυσιολογική αορτή λεία μυϊκά κύτταρα.

Συντομογραφίες

: Τ, όγκου? Ν, φυσιολογικό.

Η

Τα αποτελέσματα προέρχονται από εμπορικά διαθέσιμα συστοιχίες ιστών FDA805-1and 805-2, το οποίο περιέχει κανονικά όργανα και αντίστοιχων όγκων (S2 Πίνακες). Αριθμός στην παρένθεση υποδηλώνει τον αριθμό των περιπτώσεων στις συστοιχίες των ιστών. Η συνολική ανοσοϊστοχημική σκορ (histoscore) ήταν το ποσοστό των θετικών κυττάρων πολλαπλασιάζεται με ένταση χρώσης του (0 = αρνητική, 1 = ασθενής, 2 = μέτρια, 3 = ισχυρή), και κυμαίνεται από 0 έως 300, (100% πολλαπλασιασμένη επί 3).

Η

μετάσταση των ιστών του καρκίνου των ωοθηκών εκφράζουν υψηλότερα BAIAP2L1 από πρωτοπαθή καρκίνο

αναλύθηκαν τα επίπεδα πρωτεΐνης του BAIAP2L1 σε 193 ωοθηκών καρκινικούς ιστούς, που περιέχουν ορώδες, ενδομητριοειδές, σαφείς κυττάρων, και βλεννώδες τύπους κυττάρων ( Σχήμα 3). Τα επίπεδα έκφρασης του BAIAP2L1 δεν διέφεραν μεταξύ των διαφόρων τύπων κυττάρων του καρκίνου των ωοθηκών, το στάδιο και το βαθμό της κάθε ιστολογικής υποτύπου, αλλά κάθε τύπος καρκίνου των ωοθηκών που εκφράζεται σημαντικά υψηλότερο από το κανονικό BAIAP2L1 ωοθηκών ιστούς (Σχήμα 3). Η έκφραση του BAIAP2L1 αναλύθηκε περαιτέρω σε 14 ζευγαρωμένα δείγματα πρωτογενών καρκίνων των ωοθηκών και αντίστοιχες θέσεις μεταστατικού τους (S3 Πίνακες). Οι μεταστατικές θέσεις περιλαμβάνουν επίπλουν (n = 7), λεμφαδένα (n = 3), parametrium (n = 1), λεπτό έντερο (n = 1), τυφλό έντερο (n = 1), και του εγκεφάλου (η = 1). Δώδεκα από τα 14 ζεύγη είχαν υψηλότερες εκφράσεις BAIAP2L1 στις μεταστατικές θέσεις από ό, τι σε πρωτογενείς όγκους (ρ & lt? 0,05). (Εικόνα 4)

Ανοσοϊστοχημικές μελέτες πραγματοποιήθηκαν σε ιστούς καρκίνου των ωοθηκών (n = 193) και φυσιολογικούς ελέγχους (n = 20). Άνω πίνακας δείχνει την ανοσοϊστοχημική ένταση χρώσης (0 = αρνητική, 1 = ασθενής, 2 = μέτρια, 3 = ισχυρή). Η συνολική ανοσοϊστοχημική βαθμολογία (histoscore) ήταν το ποσοστό των θετικών κυττάρων πολλαπλασιάζεται με ένταση χρώσης της, και κυμάνθηκε 0-300 (100% πολλαπλασιαζόμενο επί 3).

Η

Το ανώτερο πάνελ παρουσιάζει την έκφραση BAIAP2L1 σε ένα αντιπροσωπευτικό ζευγάρι του πρωτογενούς καρκίνου των ωοθηκών και μεταστατικών site της.

η

Πολλαπλές, ανεξάρτητα σύνολα δεδομένων επικύρωση up-ρύθμιση του BAIAP2L1 στον καρκίνο των ωοθηκών

Τα δεδομένα σε δεδομένα GSE14407 που [29] έδειξε ότι έκφραση BAIAP2L1 mRNA ήταν σημαντικά υψηλότερη σε επιθηλιακά κύτταρα καρκίνου των ωοθηκών (CEPI, 11.8 ± 0.28 παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± τυπικό σφάλμα) σε σχέση με την κανονική επιφάνεια επιθήλια των ωοθηκών (ΟΣΕ, 10.8 ± 0.22) (ρ = 0.004) (Σχήμα 5Α). Στο επίπεδο έκφρασης ιστού, GSE36133 σύνολο δεδομένων έδειξε ότι BAIAP2L1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε 182 πρωτογενείς σαλπίγγων των ωοθηκών και σάλπιγγα (10.4 ± 0.09) σε σύγκριση με 1.680 πρωτογενείς καρκίνους ως επί το πλείστον από το στήθος, του παχέος εντέρου, του ορθού, του ενδομητρίου, του πνεύμονα, και νεφρό (9.8 ± 0,04) (ρ = 4,5 χ 10

-7) (Σχήμα 5Β). που δεδομένα GSE2109 [30] απεκάλυψε περαιτέρω ότι BAIAP2L1 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε 49 κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών (9,4 ± 0,17) από ό, τι κυτταρικές σειρές 972 του καρκίνου που προέρχεται από άλλους ιστούς (8.6 ± 0.07) (ρ = 0.004) (Σχήμα 5C).

(Α) Τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της BAIAP2L1 στα επιθηλιακά κύτταρα του καρκίνου των ωοθηκών (CEPI) που απομονώνονται from12 ορώδες αδενοκαρκίνωμα των ωοθηκών και της επιφάνειας του επιθηλίου των ωοθηκών (ΟΣΕ) από 12 φυσιολογικό ανθρώπινο ωοθήκες. Τα δεδομένα που ανακτώνται από GSE14407. (Β) Τα επίπεδα έκφρασης του BAIAP2L1 σε ιστούς του καρκίνου των ωοθηκών (Ον, n = 182) και του καρκίνου από τις άλλες κύριες θέσεις (n = 1.680). Τα δεδομένα που ανακτώνται από GSE36133. (Γ) Τα επίπεδα έκφρασης του BAIAP2L1 σε κυτταρικές σειρές του καρκίνου των ωοθηκών (Ον, n = 49) και άλλες προελεύσεις (n = 972). Τα δεδομένα που ανακτώνται από GSE2109.

Η

Απουσία της γονιδιακής σύντηξης μεταξύ FGFR και BAIAP2L1 στον καρκίνο των ωοθηκών

Κανένα από 8 δοκιμαστεί καρκίνου των ωοθηκών RNA περιείχε την μεταγραφή του γονιδίου της σύντηξης μεταξύ FGFR και BAIAP2L1, ενώ το RNA των κυττάρων SW780 καρκίνου της ουροδόχου κύστης που εκφράζεται μεταγραφές του γονιδίου σύντηξης (S2 Εικ).

BAIAP2L1 προάγει όχι μόνο τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αλλά επίσης εμποδίζει την απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών

από BAIAP2L1 έχει αποδειχθεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) [22], ελέγξαμε επίσης το ρόλο της BAIAP2L1 στο κελί ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών. Εξόντωση BAIAP2L1 με (Σχήμα 6Α) τεχνολογία siRNA αναστέλλει την ανάπτυξη των κυττάρων σε πολλαπλές κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών, που φαίνεται στα αποτελέσματα των δοκιμασιών Ενσωμάτωσης BrdU (Σχήμα 6Β) και οι δοκιμασίες ΜΤΤ (Εικ 6C).

BAIAP2L1 σε δύο καρκίνου των ωοθηκών κυτταρικές γραμμές (MDAH2774 και SKOV3) έχουν knockdowned με si-RNA (Α) και αναλύθηκαν με (Β) δοκιμασία BrdU incorportation και (C) ΜΤΤ δοκιμασία. (D) BAIAP2L1 knockdown σε κύτταρα SKOV3 αυξημένη διάσπαση της κασπάσης 3 και PARP, τα οποία ήταν δείκτες της απόπτωσης. Τα κύτταρα ακτινοβολήθηκαν με υν (100 J /M

2) ή κατεργασία με 10 μΜ cisplatin για 24 ώρες για να επάγει απόπτωση. Για να απεικονίσει με σαφήνεια τις διαφορικές εντάσεις των διασπαστεί μπάντες PARP, δύο φορές την έκθεση χρησιμοποιήθηκαν κατά τη διάρκεια της χημειοφωταύγειας: μακρύ (60 sec) και μικρής διάρκειας (10 sec). Το επίπεδο της ακτίνης χρησιμοποιήθηκε για να ομαλοποιήσει την ποσότητα της πρωτεΐνης εισόδου. (Ε) Ποσοτικές αναλύσεις της διασπασμένης κασπάσης 3 και PARP. Τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται είναι η μέση τιμή ± τυπικό σφάλμα από τρία ανεξάρτητα πειράματα. Οι αστερίσκοι υποδηλώνουν στατιστική σημαντικότητα (ρ & lt? 0,05).

Η

οδούς απόπτωσης, προ-κασπάσης 3 ενεργοποιείται και διασπάται σε 17-kDa και 12-kDa θραύσματα, και στη συνέχεια, πρωτεολυτικό ένζυμο χωνεύει κατάντη πρωτεΐνες, όπως πολυ (ADP-ριβόζη) πολυμεράσης (PARP) [31]. Χωρίς προσβολές DNA (UV ή σισπλατίνη), νοκ ντάουν της BAIAP2L1 και μόνο ελαφρώς αυξημένη διασπαστεί επίπεδα PARP (Σχήμα 6D και 6Ε). Μετά UV ακτινοβολία ή θεραπεία σισπλατίνη για 24 ώρες, knockdown του BAIAP2L1 αυξημένο επίπεδο πρωτεΐνης διασπασμένης κασπάσης 3 και PARP διασπάται. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι BAIAP2L1 μπορεί να προστατεύσει τα κύτταρα από την απόπτωση.

Συζήτηση

έκφραση BAIAP2L1 έχει αποδειχθεί ότι αυξάνει σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [22]. Σε αυτή τη μελέτη, ενοποιητική βάση δεδομένων αναλύσεις BAIAP2L1 σε GSE14407 και GSE36133 καρκινικούς ιστούς, καθώς και κυτταρικές γραμμές GSE2109 επικύρωση των αποτελεσμάτων ανοσοϊστοχημική μας υψηλής έκφρασης BAIAP2L1 σε καρκίνους των ωοθηκών. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν, για πρώτη φορά, ότι BAIAP2L1 υπερεκφράζεται σε ανθρώπινους καρκίνους των ωοθηκών, αντιπροσωπεύοντας αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και αντοχή σε απόπτωση του καρκίνου των ωοθηκών.

Τα ευρήματά μας που BAIAP2L1 histoscores των μεταστατικών περιοχές είναι υψηλότερες από πρωτογενή ωοθηκική καρκίνους υποδεικνύουν ότι BAIAP2L1 μπορεί να συνεισφέρει στην εισβολή και μετάσταση όγκου. Τα αποτελέσματα αυτά είναι σε συμφωνία με τα ευρήματα που εμπλέκεται BAIAP2L1 στην παραμόρφωση της μεμβράνης πλάσματος και ακτίνης αναδιαμόρφωση του κυτταροσκελετού, οι οποίες είναι σημαντικές για τη μετανάστευση των κυττάρων [20]. Αν και -BAIAP2L1 γονίδιο σύντηξης υποδοχέα ογκογόνες FGF 3 (FGFR3) έχει ταυτοποιηθεί σε καρκίνους της ουροδόχου κύστης καρκίνους [23] και του πνεύμονα [24], δεν μπορέσαμε να ανιχνεύσει την μεταγραφή των γονιδίων σύντηξης BAIAP2L1 σε αυτή τη μελέτη ενός περιορισμένου αριθμού δειγμάτων. Η παρουσία της σύντηξης γονιδίου FGFR-BAIAP2L1 έχει δειχθεί να μεταφράσει ένα μεγαλύτερο πρωτεΐνη σε άλλους καρκίνους [24], αλλά προσδιορίσαμε BAIP2L1 μόνο ως μία μοναδική ζώνη των 57 kD σε ανάλυση κηλίδος western των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών, αποκλείοντας την παρουσία FGFR -BAIAP2L1 σύντηξη γονιδίων.

BAIAP2L1 έχει επίσης δειχθεί στην εξέλιξη της νόσου της ρευματοειδούς αρθρίτιδας, όπου η έκφραση BAIAP2L1 σε αρθρικά κύτταρα ινοβλαστών ομοιάζουν με συσχετίστηκε θετικά με C-αντιδρώσα πρωτεΐνη (CRP), ένα κοινό κλινικό δείκτη για φλεγμονή [32]. Τα επίπεδα CRP έχουν δειχθεί να προβλέψει την επιβίωση σε ασθενείς με νεφροκυτταρικό καρκίνωμα, καρκίνους της ουροδόχου κύστης και του καρκίνου του προστάτη, και η ενσωμάτωση της CRP σε προγνωστικά μοντέλα για αυτές τις καρκίνους βελτιώνει προγνωστική ακρίβεια των υποδειγμάτων [33]. Τα ευρήματα αυτά συλλογικά υποστηρίζουν ότι BAIAP2L1 εμπλέκεται στη φλεγμονή και την καρκινογένεση σε γενικές γραμμές [34].

Οι πιο πειστικές λειτουργίες του BAIAP2L1 στα θηλαστικά έχουν πρόσφατα αποκαλύφθηκε από την ομάδα Χαν χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση νοκ-άουτ του ποντικιού [35]. BAIAP2L1 λειτουργεί ως έναν προσαρμογέα υποδοχέα ινσουλίνης (IR) που ενεργοποιεί το (υπόστρωμα υποδοχέα ινσουλίνης 1/2) IR-IRS1 /2 -Akt οδό σηματοδότησης μέσω διέγερσης φωσφορυλίωσης τυροσίνης του IR. BAIAP2L1-ανεπαρκή ποντίκια εμφανίζεται αντίσταση στην ινσουλίνη και μη κανονική ομοιόσταση της γλυκόζης [35]. Επιπλέον, η ηπατική έκφραση του BAIAP2L1 μειώθηκε σε ποντίκια και ανθρώπους με διαβήτη τύπου 2, υποδηλώνοντας τη σύνδεση μεταξύ BAIAP2L1 κατιούσα ρύθμιση και την ανάπτυξη του διαβήτη. Είναι ενδιαφέρον ότι η ηπατική μείωση BAIAP2L1 σε διαβητικούς ασθενείς φάνηκε να έχει ένα αρσενικό-θηλυκό διαφορά, η οποία υποτίθεται ότι προκαλείται από ανεπαρκή μεγέθη δείγματος [35] οι συγγραφείς. Υπό το πρίσμα της μελέτης σύνδεσης γονιδίωμα-ευρεία όπου BAIAP2L1 σχετίζεται σε μεγάλο βαθμό με τα κυκλοφορούντα επίπεδα της ορμόνης-δεσμευτική σφαιρίνη φύλων [36], ένα φύλο εξαρτάται ρύθμιση των λειτουργιών BAIAP2L1 παραμένει άξιο μελέτη.

Εκτός από ακτίνης σχετικές λειτουργίες του BAIAP2L1, οι οποίες διευκρινιστεί κυρίως από βακτηριακή μελέτες [16,17,18,19], η ανακάλυψη των BAIAP2L1 στα μονοπάτια IR-IRS-ΑΚΤ μπορεί να ρίξει φως στο ρόλο της στο μεταβολισμό ειδική για τον καρκίνο. Για την παροχή δομικά στοιχεία για την ανάπτυξη του όγκου, τα καρκινικά κύτταρα αυξάνουν τη σύνθεση λιπαρών οξέων και του μεταβολισμού γλουταμίνης, εις βάρος της χρησιμοποίησης αναποτελεσματικών αερόβια γλυκόλυση [37]. Οι συγκεντρώσεις της γλυκόζης σε στερεούς όγκους είναι γενικά χαμηλότερα από τους φυσιολογικούς ιστούς [38], έτσι τα καρκινικά κύτταρα συχνά ποθούν γλυκόζη και γλουταμίνη [39]. Μελλοντικές μελέτες μπορεί να αποδειχθεί ότι BAIAP2L1 εμπλέκεται σε όλο και πιο είσοδο της γλυκόζης στα κύτταρα του καρκίνου, ίσως και με την αύξηση της αποτελεσματικότητας των Glut μεταφορέων. Επιπλέον, αρκετές καθοδικούς τελεστές του IR περιλαμβάνουν (i) ΜΑΡΚ που είναι γνωστό ότι προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [22] και (ii) ΡΙ-3Κ που αυξάνει τη σύνθεση των πρωτεϊνών και των λιπαρών οξέων και την πρόληψη του καρκίνου κύτταρα από την απόπτωση [40].

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δεν υποδεικνύουν ότι μόνο BAIAP2L1 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης για τον καρκίνο των ωοθηκών του ανθρώπου, αλλά και αποκαλύπτουν το ρόλο της στην βιολογία καρκίνου. Κλινικές μελέτες με μεγάλο αριθμό δειγμάτων και ποσοτικών δοκιμασιών θα είναι αναγκαία για την επικύρωση της χρησιμότητας των BAIAP2L1 στην κλινική πράξη. Περαιτέρω αποσαφήνιση του ρόλου του BAIAP2L1 στα πλαίσια των IR-IRS-τελεστές καθοδικά μονοπάτια των καρκινικών κυττάρων δικαιολογείται για την ανάπτυξη θεραπευτικών καρκίνο στόχευσης μεταβολισμό του καρκίνου ειδικά.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Σχ. Τα προφίλ mRNA της BAIAP2L1 σε ιστούς και κυτταρικές σειρές

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s001

(DOCX)

S2 Εικ. Απουσία της γονιδιακής σύντηξης μεταξύ FGFR3 και BAIAP2L1

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s002

(DOCX)

Πίνακες S1. συστοιχίες FDA ιστού (805-1 και 2) και histoscores της BAIAP2L1

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s003

(DOC)

πίνακες S2. συστοιχίες ιστών (BC 111109, 111110 π.Χ., και OV8011-2-BX) και histoscores της BAIAP2L1

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s004

(DOCX)

S3 πίνακες. Κλινικές πληροφορίες της 14 περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών και histoscores των BAIAP2L1 στην πρωτοβάθμια καρκίνο και μετάσταση sites

doi:. 10.1371 /journal.pone.0133081.s005

(DOCX)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω τον όγκο Τράπεζα, Chang Gung Memorial Hospital και Jung-Erh Yang για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια της. Ευχαριστούμε τον Δρ Su-Fang Lin Εθνικής Υγείας Ερευνητικά Ινστιτούτα (Miaoli, Ταϊβάν) για την παροχή συνολικού RNA των κυττάρων SW780 και ο Δρ Shihtien Τ Wang (Τμήμα Παιδιατρικής Νεφρολογίας, Νοσοκομείο Παίδων, Πανεπιστήμιο του Ιλινόις Ιατρική Σχολή στο Σικάγο) για Αγγλικά μοντάζ. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Chang Gung Ιατρικό Ίδρυμα:. CMRPG3E0391 (Chao Α), CMRPG3C1621-2 (Tsai CL), CMRPG3C0281-3, CMRPG3C0941-2 και CRRPG3D0031 (Wang TH)