Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι αμοιβαίες αλληλεπιδράσεις μεταξύ επιθηλίου και στρώματος παίζουν ζωτικό ρόλο για την ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. Ενισχυμένη εκκρίσεις κυτοκινών και αυξητικών παραγόντων από τον καρκίνο που σχετίζεται ινοβλάστες σε όγκους του προστάτη δημιουργούν ένα ευνοϊκό μικροπεριβάλλον για καρκινικά κύτταρα να αναπτυχθούν και να κάνουν μετάσταση. προηγούμενη εργασία μας έδειξε ότι ο υποδοχέας προγεστερόνης (PR) εκφράστηκε ειδικώς σε ινοβλάστες στρωματικά προστάτη και λεία μυϊκά κύτταρα. Ωστόσο, τα επίπεδα έκφρασης των δημοσίων σχέσεων και των επιπτώσεών της σε μικροπεριβάλλον του όγκου σε όγκους του προστάτη είναι ελάχιστα κατανοητή.

Μέθοδοι

Οι αναλύσεις Ανοσοϊστοχημεία εφαρμόζονται σε βιοψίες ανθρώπινο ιστό του προστάτη. Οι προσδιορισμοί κυτταρική μετανάστευση, εισβολή και πολλαπλασιασμός πραγματοποιείται με τη χρήση ανθρώπινων κυττάρων του προστάτη. Real-time PCR και ELISA εφαρμόζονται για να μετρηθεί η έκφραση του γονιδίου σε μοριακό επίπεδο.

Αποτελέσματα

δοκιμασίες ανοσοϊστοχημείας έδειξαν ότι τα επίπεδα της πρωτεΐνης PR μειώθηκαν σε καρκίνο που σχετίζεται στρώμα σε σύγκριση με συζευγμένες κανονικό στρώμα προστάτη. Χρησιμοποιώντας

in vitro

μοντέλα στρωματικών κυττάρων του προστάτη, δείξαμε ότι ρυθμισμένα μέσα συλλέγονται από PR θετικά στρωματικά κύτταρα παρεμπόδισε τη μετανάστευση των κυττάρων καρκίνου του προστάτη και εισβολή, αλλά είχε ελάσσονα κατασταλτική επιπτώσεις επί του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων. PR κατέστειλε την έκκριση των παράγωγων στρωματικά παράγοντα-1 (SDF-1) και interlukin-6 (IL-6) με στρωματικά κύτταρα ανεξάρτητους να PR συνδετήρες. Αποκλείει την έκφραση PR με siRNA ή συμπλήρωση του εξωγενούς SDF-1 ή IL-6 σε ρυθμισμένα μέσα από PR θετικά στρωματικά κύτταρα εξουδετερωθούν τα ανασταλτικά αποτελέσματα του PR με τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων και εισβολή.

Συμπεράσματα

μειωμένη έκφραση του PR του καρκίνου που σχετίζονται στρώμα μπορεί να συμβάλλει στην αυξημένη SDF-1 και IL-6 επίπεδα σε όγκους του προστάτη και να ενισχύσει την εξέλιξη του όγκου του προστάτη

Παράθεση:. Yu Y, Lee JS, Xie Ν, Li Ε , Hurtado-Coll Α, Fazli L, et al. (2014) του προστάτη στρωματικά κύτταρα εκφράζουν τον υποδοχέα προγεστερόνης για τον έλεγχο της κινητικότητας των καρκινικών κυττάρων. PLoS ONE 9 (3): e92714. doi: 10.1371 /journal.pone.0092714

Επιμέλεια: Allen Gao, UC Davis Περιεκτική Κέντρο Καρκίνου, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 1 Δεκέμβρη 2013? Αποδεκτές: 24 Φλεβάρη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 24 Μάρτη 2014

Copyright: © 2014 Yu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίζεται από την καναδική Ινστιτούτα Υγείας Έρευνας λειτουργίας Grant (MOP- 97934), Ανερχόμενο αστέρι Ανάθεση και Discovery Grant από καρκίνο του προστάτη Καναδά να XSD και τον καρκίνο του προστάτη PNW SPORE πιλοτικά επιχορήγησης σε XSD και MG. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

όγκων του προστάτη έχουν πολλαπλούς κυτταρικούς πληθυσμούς. Τα καρκινικά κύτταρα περιβάλλονται από μη επιθηλιακό κυτταρικό περιβάλλον που αποτελείται από ινοβλάστες, κύτταρα λείων μυών και μυοϊνοβλάστες. Συσσωρευμένες αποδείξεις δείχνουν ότι οι αμοιβαίες αλληλεπιδράσεις επιθήλιο-στρώμα είναι κρίσιμης σημασίας για την ανάπτυξη του όγκου, την ανάπτυξη και μετάσταση [1], [2]. Για παράδειγμα, η καλοήθης προστατική επιθηλιακή κυτταρική γραμμή ΒΡΗ-1 είναι συνήθως μη καρκινογενής σε γυμνούς ποντικούς. Ωστόσο, όταν συνδυάζεται με ινοβλάστες που σχετίζεται με καρκίνωμα (CAFS) και εμβολιασμένο σε νεφρική κάψα, ΒΡΗ-1 κύτταρα σχημάτισαν όγκους [3]. Αυτά τα ευρήματα καταδεικνύουν ότι τα στρωματικά κύτταρα παίζουν σημαντικό ρόλο σε κακοήθη μετασχηματισμό. Μέσω εκκρίνουν κυτοκίνες και αυξητικούς παράγοντες, CAFS παρέχουν επίσης ένα υποστηρικτικό μικροπεριβάλλον για να διευκολύνει την ανάπτυξη του όγκου, εισβολή και μετάσταση [4], [5]. Ωστόσο, παρά τις κρίσιμους ρόλους του στρώματος στον καρκίνο του προστάτη (PCA), η θεραπευτική στρατηγική στόχευση στρώμα του προστάτη είναι πολύ κάτω εκτίμησα. Αυτό αντανακλά περιορισμένη γνώση μας την stroma-επιθήλιο αλληλεπιδράσεις σε κυτταρικό και μοριακό επίπεδο.

Είναι γνωστό ότι ο καρκίνος σχετίζεται στρώμα ενισχύει την έκκριση πολλών κυτοκινών, οι οποίες είναι σημαντικά συστατικά του μικροπεριβάλλον του όγκου [6]. Στρωματικών κυττάρων που προέρχονται παράγοντα-1 (SDF-1) εκκρίνεται από στρωματικών ινοβλαστών του και δρα με σύνδεση προς τον υποδοχέα της, CXCR4, επί της μεμβράνης των επιθηλιακών κυττάρων για την ενεργοποίηση πολλαπλές οδούς σήματος [7] – [10]. Η SDF-1 /άξονα CXCR4 έχει αποδειχθεί ότι διευκολύνει καρκινικών κυττάρων εισβολή, αγγειογένεση όγκου [11], [12], διεγείρουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [13], [14] και προστατεύουν τα κύτταρα από χημειοθεραπευτικό φάρμακο προκαλούμενη απόπτωση [15] – [ ,,,0],17]. Τα επίπεδα SDF-1 mRNA αυξήθηκε σε ιστούς του καρκίνου σε σύγκριση με τις γειτονικές καλοήθεις ιστούς [18] και είναι τα υψηλότερα στην μεταστατικό προστάτη [19]. Επιπλέον, η έκφραση CXCR4 είναι επίσης αυξημένη σε ιστούς προστάτη [19], περαιτέρω ενίσχυση των δράσεων του SDF-1. Ιντερλευκίνη 6 (IL-6) είναι επίσης μια σημαντική κυτοκίνη που μπορεί να διεγείρει τις Janus κινάσες /Signal Transducer και Activator Μεταγραφή 3 μονοπατιού σε καρκινικά κύτταρα [20]. Τόσο SDF-1 και IL-6 μπορεί να ενεργοποιήσει τον υποδοχέα ανδρογόνων (AR) σε χαμηλά επίπεδα των ανδρογόνων στα κύτταρα του προστάτη και συμβάλλουν στην εξέλιξη του όγκου προς το ανθεκτικό στάδιο ευνουχισμό [21] – [23]. IL-6 έχει αναφερθεί για να ενισχύσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του προστάτη και προστατεύουν τα κύτταρα από την απόπτωση σε ξενομοσχεύματα όγκου [24], [25]. IL-6 Αυξημένα επίπεδα στον ορό ήταν επίσης αποδειχθεί ότι είναι ένας φτωχός δείκτης πρόγνωση [26], [27].

στρωματικά κύτταρα του προστάτη εκφράζουν επίσης διάφορες στεροειδείς υποδοχείς, συμπεριλαμβανομένου του ανδρογόνων και οιστρογόνων υποδοχέων. Αυτοί οι υποδοχείς έχουν αναφερθεί ότι είναι σημαντικές για τα στρωματικά κύτταρα να κατευθύνει την ανάπτυξη του προστάτη μέσω της ρύθμισης της έκφρασης των κυτοκινών /χημειοκινών [28] – [30]. Πρόσφατα αναφέρθηκε ότι και οι δύο υποδοχέα προγεστερόνης (PR) ισομορφές, PRA και PRB, εκφράστηκαν ειδικά στο στρώμα του προστάτη και ρυθμίζει αρνητικά τον πολλαπλασιασμό των στρωματικών κυττάρων [31]. Σε αυτή τη μελέτη, επεκτείναμε τις προσπάθειές μας για τη μέτρηση των επιπέδων της πρωτεΐνης PR σε προστάτη και ρύθμιση PR του SDF-1 και IL-6 έκφραση σε στρωματικά κύτταρα του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ανθρώπινο προστάτη ιστοί και ανοσοϊστοχημεία

Είκοσι επτά ολόκληρα τμήματα βουνό των βιοψιών ανθρώπινου προστάτη ιστού ελήφθησαν από ριζικές προστατεκτομές. Λεπτομερείς πληροφορίες για το κάθε δείγμα ιστού που παρατίθενται στον Πίνακα 1. Όλοι οι ασθενείς υπέγραψαν μια ενημερωμένη συγκατάθεση σε ένα πρωτόκολλο που αναθεωρήθηκε και εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο UBC Clinical Research Δεοντολογίας (Πιστοποιητικό #: H09-01628). Ανοσοϊστοχημεία δοκιμασίες (IHC) διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας Ventana Discovery ΧΤ Autostainer (Ventana Medical Systems) με αντισώματα έναντι PR (Abcam) και PRB (Cell Signaling), όπως αναφέρθηκε [31]. Ψηφιακές εικόνες των διαφανειών ιστού σαρώθηκαν από ένα σύστημα BLISS σαρωτή (Bacus Lab Inc). Εντός των περιφερειακές ζώνες, 5 πεδία στρωματικά (& gt? 1000 πυρήνες) επιλέχθηκαν από παθολόγο (L.F.) πλησίον καλοήθη επιθηλιακά κύτταρα και 5 άλλες στρωματικά πεδία ήταν από γειτονικά τα καρκινικά επιθηλιακά κύτταρα. Πέντε άλλα στρωματικά τομείς ήταν από τις μεταβατικές ζώνες. Οι παθολογικές βαθμολογίες επιτεύχθηκαν από το λογισμικό Digital Hub εικόνας (Leica Biosystem) για τον υπολογισμό του ποσοστού των χρωματισμένων πυρήνων και την ένταση χρώσης. Τα σχετικά επίπεδα των δημοσίων σχέσεων και PRB υπολογίστηκαν ως ο δείκτης-βαθμολογία = Σpi (i + 1), όπου i = η ένταση της χρώσης, και π = το ποσοστό των χρωματισμένων κυττάρων. HSCOREs χρησιμοποιήθηκαν για να συγκριθούν τα επίπεδα PR και PRB μεταξύ της κανονικής και του καρκίνου στρώμα και μεταξύ των περιφερειακών ζωνών και μεταβατικές ζώνες.

Η

Προστάτη στρωματικά Κυτταρικές Γραμμές

Ανθρώπινο προστάτη στρωματική κυτταρική γραμμή (WPMY-1 ) και κυτταρικές γραμμές προστάτη LNCaP και PC-3 αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA). LNCaP κύτταρα που προέρχονται C4-2B αγοράστηκαν από Urocore (Oklahoma City, OK, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). LNCaP, C4-2B και PC-3 κύτταρα εκφράζουν μη ανιχνεύσιμα επίπεδα mRNA και PR πρωτεΐνης. Ανθρώπινου καρκίνου που σχετίζονται ινοβλάστες (hCAFs) παρασχέθηκαν ευγενώς από τον Dr. Simon Hayward (Πανεπιστήμιο Vanderbilt). Είχαν προέρχονται από ανθρώπινα πρωτογενή καλλιεργημένα καρκίνο που σχετίζεται ινοβλάστες [2]. Ανθρώπινα στρωματικά κύτταρα πρωτοβάθμια προστάτη, HPS-19ι, ήταν γενναιόδωρα από τον Dr. David Rowley (Baylor College of Medicine) [4]. Εξωγενείς PRA και ΖΗΤΗΜΑ εισήχθησαν σε WPMY-1, hCAF και HPS-19ι από φακοϊό όπως περιγράφεται [31]. τα επίπεδα έκφρασης πρωτεϊνών, καθώς και κυτταρικό εντοπισμό της PRA και PRB επιβεβαιώθηκαν (Σχήμα S1). Όλα τα πειράματα χρησιμοποιώντας hCAFs ήταν εντός 8-10 κυττάρων περάσματα και τα κύτταρα HPS-19ι ήταν μέσα σε 5-6 περάσματα μετά έλαβε από τους παρόχους.

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Το συνολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας Trizaol (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Δύο μικρογραμμάρια ολικού RNA υποβλήθηκε σε μία τυχαίας εκκίνησης ανάστροφη μεταγραφή χρησιμοποιώντας SuperScritpt 2 ανάστροφης μεταγραφάσης (Invitrogen). Real-time PCR διεξήχθη εις τριπλούν, χρησιμοποιώντας Applied Biosystem 7900 ΗΤ με 5 ng του cDNA, 1 μΜ από κάθε ζεύγος εκκινητών και κύριο μείγμα SYBR Green PCR (Roche). Οι αστάρι αλληλουχίες παρατίθενται στον Πίνακα S1. Σχετικά επίπεδα mRNA κανονικοποιήθηκαν προς GAPDH. SiRNA που στοχεύει PR αγοράστηκε από την Thermo Fisher (Cat Ν J-003433-08-0005).

Η συλλογή των ρυθμισμένων μέσων

Το ενενήντα τοις εκατό συρρέουσες hCAFs, WPMY-1 και HPS-19ι στρωματικά κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με ρυθμιστικό διάλυμα PBS και αναπληρώνονται με μέσο ελεύθερο ορού DMEM με την παρουσία του οχήματος, Ρ4 ή PR ανταγωνιστή RU486 για 48 ώρες. Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης των ρυθμισμένων μέσων (CM) μετρήθηκαν με bicinchoninic Acid δοκιμασίας (Thermo Scientific). Η ίδια ποσότητα CM από PR θετικά και αρνητικά κύτταρα χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία των κυττάρων του προστάτη για δοκιμασίες κυτταρική μετανάστευση, εισβολή και πολλαπλασιασμό.

ELISA Δοκιμασία

SDF-1 και IL-6 συγκεντρώσεις σε CM μετρήθηκαν με εμπορικό κιτ ELISA ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (R &? συστήματα D, Cat #: DSA00 και D6050).

επούλωση Δοκιμασία

PC-3 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε μέσο που περιέχει 5% ξυλάνθρακα απογυμνωμένο ορό σε πλάκες 6 φρεατίων μέχρι 100% συρροή. Ένα ρύγχος πιπέτας 20 μl χρησιμοποιήθηκε για να το μηδέν για να δημιουργήσει μια πληγή στο μονοστοιβάδα συρροής στο κέντρο των πιάτων. Πωλείται κύτταρα απομακρύνθηκαν με πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα PBS δύο φορές. Τα κύτταρα αναπληρώνονται με 300 μα CM από hCAFs ή 1400 μα CM από κύτταρα WPMY-1. κυτταρικής μετανάστευσης στη συνέχεια συλλαμβάνεται από έναν ανεστραμμένο μικροσκόπιο (Axiovert 200 Μ, Γερμανία) σε 0 h και 24 h χρονικές στιγμές μετά τυλίγεται το μηδέν. Τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

Κυττάρων Η μετανάστευση Δοκιμασία

PC-3 κύτταρα (2.5 × 10

4 /φρεάτιο) ή C4-2B κύτταρα (5.0 × 10

4 /φρεάτιο) εναιωρήθηκαν σε μέσο DMEM ελεύθερο ορού και εμβολιάζονται σε θάλαμο ελέγχου BD χωρίς Matrigel (BD Biosciences). Πεντακόσια μικρογραμμάρια CM από κύτταρα WPMY-1 προστέθηκαν στον κάτω θάλαμο. Μετά από επώαση σε 37 ° C με 5% CO2 για 18 ώρες, μη-μεταναστευτικά κύτταρα στον άνω θάλαμο ήπια απομακρύνθηκαν με μπατονέτες. Τα κύτταρα που έφθασε στο κάτω θάλαμο σταθεροποιήθηκαν, χρωματίστηκαν με μέσο στερέωσης περιέχει DAPI (Vector Laboratories, USA) και φωτογραφήθηκαν κάτω από ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο (Axiovert 200 Μ, Germany). Οι αριθμοί των κυττάρων μετρήθηκαν από το λογισμικό Image J. ποσοστό μετανάστευσης κυττάρων βαθμονομηθεί με τον αριθμό των κυττάρων που επωάζονται με CM από γονικά κύτταρα WPMY-1 ως μία. Τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

κυτταρική διείσδυση Δοκιμασία

PC-3 κύτταρα (2.5 × 10

4 /φρεάτιο) ή C4-2B κύτταρα (1.0 × 10

5 /φρεάτιο) εναιωρήθηκαν σε μέσο ϋΜΕΜ χωρίς ορό και σπείρονται σε BD Matrigel θάλαμο εισβολή (BD Biosciences). Εκατό μικρογραμμάρια CM από hCAFs, 500 ug του CM από κύτταρα WPMY-1 ή 375 ug του CM από κύτταρα HPS-19ι προστέθηκαν στον κάτω θάλαμο. Μετά από επώαση σε 37 ° C με 5% CO2 για 18 ώρες, μη εισβάλλοντα κύτταρα στον άνω θάλαμο ήπια απομακρύνθηκαν με μπατονέτες. Κύτταρα που εισέβαλαν μέσω της Matirgel και έφτασε στον κάτω θάλαμο σταθεροποιήθηκαν, χρωματίστηκαν με μέσο στερέωσης περιέχει DAPI (Vector Laboratories, USA) και φωτογραφήθηκαν με ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο (Axiovert 200 Μ, Germany). Εισβολή οι αριθμοί των κυττάρων μετρήθηκαν από το λογισμικό Image J. ποσοστό κυττάρων εισβολή υπολογίστηκε από τον αριθμό των κυττάρων που εισβάλλουν μέσω Matrigel διαιρεθεί ο αριθμός των κυττάρων που μεταναστεύουν μέσω μη επικαλυμμένα ενθέτου μεμβράνης. Τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

χρωματίνης Ανοσοκαταβύθιση

χρωματίνης προσδιορισμοί ανοσοκαθίζησης πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [32], [33] με ακόλουθες τροποποιήσεις. Φορμαλδεΰδη διασυνδεδεμένη χρωματίνη ανοσοκαταβυθίστηκε με ακετυλιωμένο αντίσωμα ιστόνης 3 (Abcam). Εκλούεται DNA θραύσματα χρησιμοποιήθηκαν ως τα πρότυπα για την εκτέλεση πραγματικού χρόνου PCR στο PRISM 7900 σύστημα HT ΑΒΙ (Applied Biosystems) χρησιμοποιώντας το FastStart καθολική SYBR Green κύριο (Roche). Εμπλουτισμοί άνοσο τεμάχια DNA καθορίζεται από την τιμή του κύκλου κατωφλίου (Ct). Τα δεδομένα υπολογίστηκαν ως ποσοστό της εισόδου. τσιπ δεδομένα προήλθαν από τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα με δείγματα εις τριπλούν. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± s.e.m. Εκκινητές για SDF-1 προωθητής είναι 5 ‘: tggctctcccctctaagc και 3’: ggctgacggagagtgaaagt. Εκκινητές για προαγωγού GAPDH είναι 5 ‘: agtgcctaggctccagatca και 3’:. Ctcttcccacaaatgctggt

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέσοι ± SEM που υπολογίστηκαν από τρία ή περισσότερα ανεξάρτητα πειράματα. Στατιστική σημασίες υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας μονόδρομη ANOVA και αντιστοιχισμένο έλεγχος τ χρησιμοποιώντας GraphPad Prism (έκδοση 4) με το επίπεδο σημαντικότητας καθορίστηκε σε Ρ & lt? 0,05 ως *, Ρ & lt? 0,01 ως ** και Ρ & lt? 0.001 ως *** .

Αποτελέσματα

PR τα επίπεδα της πρωτεΐνης μειώθηκαν στον προστάτη όγκοι

Έχουμε συγκεντρώσει 27 ολόκληρα τμήματα βουνό των βιοψίες ιστού ανθρώπινου προστάτη από ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με ριζική προστατεκτομή (Πίνακας 1) . Οι ασθενείς είναι 46-88 χρόνια σε ηλικία, με Gleason σκορ 6-9 και τα στάδια του όγκου που κυμαίνονται από T2A να T3B. Χρησιμοποιώντας δοκιμασίες IHC, τόσο η συνολική PR και ισομορφές PRB ανιχνεύθηκαν στους πυρήνες ενός τμήματος του στρωματικά κύτταρα προστάτη (Σχήμα 1Α-Β). Ωστόσο, Η-βαθμολογία του PR (σε συνδυασμό υπολογισμό της έντασης και εκατοστημόριο των θετικών πυρήνων) ήταν 41% χαμηλότερη (P = 0,001) στον καρκίνο που σχετίζεται στρώμα σε σύγκριση με ζεύγη κανονικό στρώμα στον προστάτη περιφερειακές ζώνες (Σχ.1 Γ). Επιπλέον, Η-βαθμολογία της PRB στον καρκίνο που σχετίζεται στρώμα ήταν περίπου 44% χαμηλότερη από ότι στην κανονική στρώμα (P = 0,004) (εικόνα 1δ). Επί του παρόντος, δεν υπάρχει ειδικό αντίσωμα για την ανίχνευση PRA ισομορφή. Λαμβάνοντας υπόψη το γεγονός ότι τόσο η συνολική PR και PRB μείωση σε παρόμοιες βαθμούς, είναι πιθανό ότι τα επίπεδα έκφρασης PRA ακολουθούν την ίδια τάση με ΖΗΤΗΜΑ. Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές είτε PR ή PRB-βαθμολογία μεταξύ καλοήθους περιφερειακές ζώνες και ζώνες μετάβασης (Σχ.1 Γ-Δ). Δεν υπήρχαν στατιστικά σημαντικές διαφορές των συνολικών επιπέδων PR ή πρωτεΐνη PRB σε συνδυασμό με Gleason σκοράρει και συγκεντρώσεις του PSA στον ορό μεταξύ αυτών των 27 ασθενών. Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα PR μειώθηκαν κατά του καρκίνου που σχετίζονται στρώμα.

Ολόκληρα τμήματα προσάρτησης της ανθρώπινης βιοψίες προστάτη (n = 27) είχαν ανοσοχρώση με το αντίσωμα PR (Abcam) ή αντισώματος PRB (Cell Signaling). Αντιπροσωπευτικά εικόνες IHC του PR (Α) και PRB (Β) από καλοήθεις περιφερειακές ζώνες, καρκίνο περιφερειακές ζώνες και τις μεταβατικές ζώνες φαίνονται. IHC χρώση του PR (C) και PRB (Δ) τα επίπεδα πρωτεΐνης σε ζεύγη καλοήθεις

vs

καρκίνο περιφερειακές ζώνες και σε συνδυασμό καλοήθεις περιφερειακές

vs

ζώνες μετάβασης από 27 ολόκληρα τμήματα προσάρτησης της ανθρώπινης βιοψίες του προστάτη βαθμολογήθηκαν από την Digital Image Hub (Leica Biosystem). ευρετήρια-βαθμολογία χαράσσονται ως ± SE. Μονόδρομη t-test ANOVA και σε συνδυασμό μαθητή να υπολογίσει το επίπεδο σημαντικότητας.

Η

στρωματικά PR αναστέλλει τη μετανάστευση των κυττάρων του προστάτη και την εισβολή

Για να μελετήσουμε τις λειτουργίες PR σε κυτταρικό επίπεδο, έχουμε εφαρμόσει διάφορα μοντέλα ανθρώπινου προστάτη στρωματικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων hCAFs, WPMY-1 και HPS-19ι. Αυτά τα κύτταρα εκφράζουν χαμηλά επίπεδα του mRNA PR αλλά μη ανιχνεύσιμα επίπεδα της πρωτεΐνης PR. Εισαγάγαμε εξωγενείς PRA ή PRB ισομορφή σε αυτά τα κύτταρα από λεντοϊού προσέγγιση, όπως αναφέρθηκε [31], η οποία μας επέτρεψε να μελετήσουμε τη λειτουργία του κάθε ισομορφή PR. Αν και τα κύτταρα WPMY-1 προέρχονται από πρωτογενή καλλιεργημένα στρωματικά κύτταρα από καλοήθη προστατική υπερπλασία ιστούς, αυτά τα κύτταρα αθανατοποιημένα με SV40 μεγάλο αντιγόνο-T. Έχουν παρόμοια ογκογόνο ικανότητα ως hCAFs, όταν ανασυνδυάζεται με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη-1 κύτταρα και εμβολιάζονται σύμφωνα με το ποντίκι νεφρική κάψα (αδημοσίευτα δεδομένα).

Επούλωση

Για να προσδιοριστεί η επίδραση του PR σε στρωματικά κύτταρα για τη μετανάστευση των κυττάρων του προστάτη, πραγματοποιήσαμε τραυμάτων δοκιμασίες. CM συλλέγονται από PR-θετικός και PR-αρνητικά hCAFs και τα κύτταρα WPMY-1 παρουσία του οχήματος ή 10 ηΜ Ρ4 χρησιμοποιήθηκαν για επώαση με το PC-3 κύτταρα. ανιχνεύσεις πληγών επούλωσης έδειξε ότι CM από PR θετικά κύτταρα είχε σαν αποτέλεσμα μειώθηκε σημαντικά μετανάστευση κυττάρων (Σχήμα 2Α-Β). θεραπεία P4 προς στρωματικά κύτταρα δεν είχε καμία επίδραση στο ρυθμό μετανάστευσης των PC-3 κύτταρα. Σχήμα 2Α-Β έδειξε αντιπροσωπευτικών εικόνων από μία από τρία ανεξάρτητα πειράματα. Είχαμε επίσης πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς μετανάστευσης κυττάρων για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η ανεξάρτητη από συνδέτη δράση του PR για τον έλεγχο της μετανάστευσης των καρκινικών κυττάρων. PR θετικά κύτταρα WPMY-1 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με αυξανόμενες δόσεις Ρ4 και CM τους συλλέχθηκαν και επωάστηκαν με PC-3 κύτταρα σε προσδιορισμούς μετανάστευσης κυττάρων (Fig.2C). Παρατηρήσαμε ότι Ρ4 δεν είχε καμία επίδραση στο PC-3 ρυθμός μετανάστευσης των κυττάρων, ούτε έκανε PR ανταγωνιστή RU486 (Σχ.2ϋ). Αυτά τα αποτελέσματα ήταν επαναλήψιμα όταν αντικαταστήσαμε PC-3 κύτταρα με τα μεταστατικά LNCaP κύτταρα προερχόμενα C4-2B οστού (Σχ.2Ε-F).

Ρυθμισμένα μέσα (CM) συλλέχθηκαν από τη γονική hCAFs, WPMY-1 ή κυτταρικές σειρές που προέρχονται τους εκφράζουν mock, PRA ή PRB παρουσία οχήματος ή 10 ηΜ Ρ4. PC-3 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων και επωάζονται με CM από hCAFs (Α) ή από κύτταρα για 24 ώρες σε δοκιμασίες επούλωσης πληγών WPMY-1 (Β). Εκπρόσωπος εικόνες μετά από 24 ώρες θεραπείας CM συνελήφθησαν από ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο. προερχόμενες κυτταρικές γραμμές που εκφράζουν mock WPMY-1 και, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0, 10 ηΜ και 100 ηΜ P4 για 24 ώρες (C και Ε) ή με όχημα, 10 ηΜ Ρ4 και /ή 10 μΜ του RU486 για 24 ώρες (D και F). CM στη συνέχεια συλλέχθηκαν και επωάστηκαν με PC-3 κύτταρα (C-D) και C4-2B (Ε-Ρ) σε προσδιορισμούς μετανάστευσης κυττάρων, όπως περιγράφεται στο τμήμα Υλικά και Μέθοδοι. Μονόδρομη ANOVA και t-test σε συνδυασμό μαθητή τον υπολογισμό της στατιστικής σημαντικότητας ορίστηκε στο P & lt? 0,05 ως * και η P & lt?. 0.001 ως ***

Η

Για να προσδιοριστεί η επίδραση του PR σε στρωματικά κύτταρα σε προστάτη κυττάρων εισβολής, εφαρμόσαμε δοκιμασίες εισβολή Matrigel. CM συλλέχθηκαν από PR-θετικός και PR-αρνητικά κύτταρα WPMY-1 θεραπεία με έκδοχο, 10 ηΜ ή 100 ηΜ Ρ4 (Σχήμα 3Α). Παρατηρήσαμε ότι CM συλλέγονται από PR θετικά κύτταρα WPMY-1 είχε σαν αποτέλεσμα 50-75% μείωσης της PC-3 εισβολή κυττάρων. Αυτή η λειτουργία PR δεν αλλοιώνεται από τη Ρ4 ή με RU486 (Σχήμα 3Α-Β). Επιπλέον, παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν επίσης όταν C4-2B κύτταρο χρησιμοποιήθηκαν σε δοκιμασίες εισβολή Matrigel (Σχήμα 3C-D). Επιπλέον, επανέλαβε επίσης τα πειράματα με CM συλλέγονται από δύο άλλα στρωματικά κύτταρα του προστάτη, hCAFs και HPS-19ι. Δείξαμε ότι CM από PR θετικά hCAFs ή κύτταρα HPS-19ι οδήγησε σε ~20-30% μείωσης της PC-3 εισβολή κυττάρων, τα οποία λειτουργούν PR ήταν επίσης ανεξάρτητη να Ρ4 (Σχήμα 3Ε-F). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι PR κατείχε λειτουργία κατασταλτική στη μετανάστευση των κυττάρων του προστάτη και εισβολή σε ένα συνδέτη-ανεξάρτητο τρόπο.

WPMY-1 και κυτταρικές σειρές που προέρχονται της εκφράζουν mock, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0, 10 ηΜ και 100 ηΜ P4 για 24 ώρες (Α και C) ή με όχημα, 10 ηΜ Ρ4 και /ή 10 μΜ του RU486 επί 24 ώρες (Β και D). CM στη συνέχεια συλλέχθηκαν και επωάστηκαν με τα κύτταρα σε προσδιορισμούς κυτταρικής εισβολής PC-3 (Α-Β) και C4-2B (C-D). hCAFs (Ε), HPS-19ι (F) κύτταρα και κυτταρικές σειρές που προέρχονται τους εκφράζουν mock, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0, 10 ηΜ και 100 ηΜ P4 για 24 ώρες. CM στη συνέχεια συλλέχθηκαν και επωάστηκαν με PC-3 κύτταρα σε δοκιμασίες κύτταρο εισβολή. ποσοστό κυττάρων εισβολή υπολογίστηκε ως περιγράφεται στο Υλικό και Μέθοδος τμήμα. Μονόδρομη ANOVA και t-test σε συνδυασμό μαθητή υπολογισμό στατιστικής σημαντικότητας ορίστηκε στο P & lt? 0,05 ως * και η P & lt? 0.001 ως ***

Η

Για να μελετήσει το ρόλο των στρωματικών PR για την ανάπτυξη των κυττάρων του προστάτη

in vitro

, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς κυτταρικού πολλαπλασιασμού (Σχήμα S2). LNCaP κύτταρα εκφράζουν ένα μεταλλαγμένο AR που μπορεί να διεγερθεί από Ρ4. Θεραπεία LNCaP κύτταρα απευθείας με P4 σε μέσο καλλιέργειας είχε ως αποτέλεσμα 3 φορές επαγωγή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων. CM που συλλέγονται από PR θετική hCAFs απουσία Ρ4 είχαν στατιστικά σημαντική, αλλά πολύ ήπιες ανασταλτικά αποτελέσματα επί της ανάπτυξης κυττάρου LNCaP. Ομοίως, η ήπια κατασταλτικά αποτελέσματα παρατηρήθηκαν επίσης όταν χρησιμοποιούν ΜΑΟ συλλέγεται από PR θετικά κύτταρα WPMY-1 παρουσία του Ρ4.

PR καταστέλλει έκφραση SDF-1 και IL-6 σε στρωματικά κύτταρα προστάτη

από το επίπεδο της πρωτεΐνης PR είναι μειωμένη σε καρκίνο που σχετίζεται στρώμα και CM από PR θετικά στρωματικά κύτταρα αναστέλλουν την εισβολή του προστάτη των κυττάρων και τη μετανάστευση

in vitro

, υποθέτουμε ότι οι δημόσιες σχέσεις μπορούν να λειτουργούν για να καταστείλει εκκριτική παράγοντες που συντίθεται από τα στρωματικά κύτταρα και ρυθμίζουν προστάτη επιθήλιο σε ένα παρακρινή τρόπο. Για να ελέγξει την υπόθεση αυτή, μπορούμε επισκέφθηκε εκ νέου τα δεδομένα μικροσυστοιχιών γονιδίων προφίλ PR γονιδίων που ρυθμίζονται σε στρωματικά κύτταρα του προστάτη [31]. Με στρωματοποιητικό όλες τις κυτοκίνες και αυξητικούς παράγοντες, εντοπίσαμε SDF-1 και IL-6 ως η κορυφαία γονίδια των οποίων τα επίπεδα mRNA ανεστάλησαν από PR. Για την επιβεβαίωση αυτών των ευρημάτων, εκτελέσαμε PCR πραγματικού χρόνου και έδειξε ότι PRA ανέστειλε το 70%, ενώ PRB ανέστειλε το 80% του επιπέδου SDF-1 mRNA σε hCAFs (Εικ. 4Α-Β). Η δράση αυτή PR ήταν συνδέτη ανεξάρτητη, καθώς ούτε P4 ούτε RU486 είχε καμία επίπτωση στην καταστολή PR στο SDF-1 mRNA επίπεδα. Σημαντικά, κατέστειλε SDF-1 mRNA επίπεδα από το PR οδήγησε σε μειωμένη έκκριση SDF-1 από στρωματικά κύτταρα προστάτη όταν μετρήθηκαν με ELISA (4Γ). Επιπλέον, παρατηρήθηκε PR ανασταλτική δράση επί SDF-1 έκφραση όχι μόνο σε hCAFs, αλλά και σε WPMY-1 (Fig.4D-Ε) και τα κύτταρα HPS-19ι (Fig.4F). Παρατηρήσαμε επίσης παρόμοια ανασταλτικά αποτελέσματα του PR για IL-6 mRNA και τα επίπεδα της πρωτεΐνης με ένα τρόπο ανεξάρτητο συνδέτη (Εικ.5). Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι PR δεν παρουσιάζει ένα γενικό κατασταλτικό αποτέλεσμα σε όλες τις κυτοκίνες ή αυξητικούς παράγοντες. Διάφοροι παράγοντες ανάπτυξης συμπεριλαμβανομένου bFGF, HGF, VEGF και KGF είναι είτε πάνω ρυθμισμένα ή μη μεταβάλλεται από PR και /ή θεραπεία Ρ4 (Σχήμα S3).

hCAFs και κυτταρικές σειρές που προέρχονται τους εκφράζουν mock, PRA ή PRB ήταν αγωγή με όχημα, 1 (Α) ή όχημα, 10 ηΜ Ρ4 και /ή 10 μΜ του RU486 (Β) για 24 ώρες. PCR πραγματικού χρόνου μετρήθηκαν τα επίπεδα mRNA του SDF-1 σε σχέση με GAPDH. (Γ) hCAFs και κυτταρικές σειρές που προέρχονται τους εκφράζουν mock, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή 10 ηΜ P4 για 24 ώρες. CM συλλέχθηκαν και χρησιμοποιήθηκαν για τη μέτρηση των επιπέδων SDF-1 πρωτεΐνης με ELISA. προερχόμενες κυτταρικές γραμμές που εκφράζουν mock WPMY-1 και, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα, 1 ηΜ, 10 ηΜ και 100 ηΜ του Ρ4 (D) ή όχημα, 10 ηΜ Ρ4 και /ή 10 μΜ του RU486 (Ε) για 24 ώρες. PCR πραγματικού χρόνου μετρήθηκαν τα επίπεδα mRNA του SDF-1 σε σχέση με GAPDH. κύτταρα (F) HPS-19ι και κύτταρα προερχόμενα από τους εκφράζουν ψευδο, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή 10 ηΜ P4 για 24 ώρες. PCR πραγματικού χρόνου μετρήθηκαν τα επίπεδα mRNA του SDF-1 σε σχέση με GAPDH. Μονόδρομη ANOVA και ακολούθησε έλεγχος τ υπολογίζουν τη σημασία που σε P & lt? 0.01 * και η P & lt?. 0.001 ως ***

Η

hCAFs και τα παράγωγα τους κύτταρα που εκφράζουν παρωδία, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε θεραπεία με όχημα, 1 (Α) ή όχημα, 10 ηΜ Ρ4 και /ή 10 μΜ του RU486 (Β) για 24 ώρες. PCR πραγματικού χρόνου μετρήθηκαν τα επίπεδα του mRNA της IL-6 σε σχέση με GAPDH. (Γ) hCAFs και κύτταρα προερχόμενα από τους εκφράζουν ψευδο, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή 10 ηΜ P4 για 24 ώρες. CM συλλέχθηκαν και χρησιμοποιείται για τη μέτρηση των επιπέδων της IL-6 πρωτεΐνη με ELISA. WPMY-1 κύτταρα και κύτταρα προερχόμενα από τους εκφράζουν ψευδο, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα, 1 ηΜ, 10 ηΜ και 100 ηΜ του Ρ4 (D) ή όχημα, 10 ηΜ Ρ4 ή /και 10 υΜ του RU486 (Ε) για 24 ώρες. PCR πραγματικού χρόνου μετρήθηκαν τα επίπεδα του mRNA της IL-6 σε σχέση με GAPDH. κύτταρα (F) HPS-19ι και κύτταρα προερχόμενα από τους εκφράζουν ψευδο, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή 10 ηΜ P4 για 24 ώρες. PCR πραγματικού χρόνου μετρήθηκαν τα επίπεδα του mRNA της IL-6 σε σχέση με GAPDH. Μονόδρομη ANOVA και το Student t-test υπολογίζεται η σημασία που με την P & lt? 0.01 * και η P & lt?. 0.001 ως ***

Η

Για να επιβεβαιώσετε PR μεσολάβηση άμεση αναστολή στο SDF-1 και IL- 6 γονιδιακή έκφραση, εμείς παροδικά επιμολυσμένα στρωματικά κύτταρα προστάτη με siRNA έναντι PR (Fig.6A-Β). Οξεία PR knockdown αντιστραφεί δραματικά τα ανασταλτικά αποτελέσματα της PR και στα δύο επίπεδα SDF-1 και IL-6 mRNA. Επιπλέον, PR εξασκείται ανασταλτικά αποτελέσματα της απευθείας στους SDF-1 και IL-6 μεταγραφή γονιδίου και δεν απαιτούν άλλους πρωτεϊνική σύνθεση, ως PR παρέμεινε κατασταλτική ακόμη και παρουσία θεραπείας κυκλοεξιμίδιο (Fig.6C-D). Πραγματοποιήσαμε επίσης ανάλυση της χρωματίνης ανοσοκατακρήμνισης για να δείξει ότι τα επίπεδα ακετυλίωση των ιστονών στην περιοχή του υποκινητή SDF-1 μειώνεται δραματικά σε PR θετικά στρωματικά κύτταρα. Αυτές οι μεταβολές ήταν σε αντίθεση με την κατάσταση ακετυλίωσης ιστόνης στον υποκινητή GAPDH (Fig.6E). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν ότι PR παίζει άμεσο ρόλο στην καταστολή δραστηριότητες υποκινητή του SDF-1 και IL-6 γονιδίων και αναστέλλει την γονιδιακή μεταγραφή τους.

Κύτταρα που εκφράζουν ψευδο

1 WPMY-, PRA ή PRB επιμολύνθηκαν παροδικά με ελέγχου siRNA ή siRNA εναντίον PR. SDF-1 (Α) και IL-6 (Β) επίπεδα του mRNA σε σχέση με GAPDH μετρήθηκαν με πραγματικού χρόνου PCR. hCAFs εκφράζουν mock, PRA ή PRB ισομορφή υπέστησαν αγωγή είτε με τον έλεγχο ή 20 μg /ml κυκλοεξιμιδίου επί 16 ώρες. PCR δοκιμασίες σε πραγματικό χρόνο μετρώνται τα επίπεδα mRNA του SDF-1 (C) και IL-6 (D) σε σχέση με GAPDH. (Ε) WPMY-1 κύτταρα και κύτταρα προερχόμενα από τους εκφράζουν ψευδο, PRA ή PRB υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή 10 ηΜ P4 για 24 ώρες. Χρωματίνης προσδιορισμοί ανοσοκαθίζησης πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ακετυλ-ιστόνης 3 αντίσωμα. Εκλούεται θραύσματα DNA υποβλήθηκαν σε μέτρηση της εμπλουτισμό του ακετυλο-ιστόνης 3 επίπεδα σε SDF-1 και προαγωγό GAPDH περιοχές. Μονόδρομη ANOVA και το Student t-test υπολογίζεται η σημασία που με την P & lt? 0.01 * και η P & lt? 0.001 ως ***

Η

Για να αποδείξει ότι PR μεσολάβηση καταστολή του SDF-1. και IL-6 έκφραση είναι ο κύριος μηχανισμός που μειώνει εισβολή PCa κύτταρο και την ικανότητα μετανάστευση, έχουμε παροδικά χτυπηθεί κάτω έκφραση PR και παρατηρούνται τα ποσοστά μετανάστευσης και εισβολή του PC-3 (Σχήμα 7Α-C) και C4-2B (Σχ. 7Β-D) κύτταρα ανακτήθηκαν. Επιπλέον, όταν ανασυνδυασμένη SDF-1 ή IL-6 πεπτίδιο προστέθηκαν σε CM, παρατηρήσαμε ότι η εξωγενής SDF-1 ή IL-6, καταργούνται PR κατασταλτικά αποτελέσματα σε PC-3 εισβολή κυττάρων (Fig.7E). Μαζί αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν ότι PR μεσολάβηση καταστολής στην κινητικότητα των κυττάρων του προστάτη είναι κυρίως μέσω αναστολής της γονιδιακής έκφρασης SDF-1 και IL-6.

WPMY-1 κύτταρα που εκφράζουν ψευδο, PRA ή PRB επιμολύνθηκαν παροδικά με siRNA ελέγχου ή siRNA εναντίον PR για 24 ώρες. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με ρυθμιστικό διάλυμα PBS και αναπληρώνονται με μέσο χωρίς ορό ϋΜΕΜ για 48 ώρες. CM συλλέχθηκαν και επωάστηκαν με τα κύτταρα για δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης (Α και Β) και προσδιορισμούς εισβολής Matrigel (C και D) όπως περιγράφεται στο κεφάλαιο Υλικό και Μέθοδος PC-3 (Α και C) ή C4-2B (Β και D). (Ε) CM συλλέχθηκαν από hCAFs παρουσία οχήματος ή 10 ηΜ Ρ4 και στη συνέχεια αναμιγνύεται με φορέα, 10 ng /ml SDF-1 ή 10 ng /ml IL-6 και επωάστηκαν με PC-3 κύτταρα σε Matrigel εισβολής δοκιμασίες. Μονόδρομη ANOVA και t-test σε συνδυασμό μαθητή να υπολογίσει το επίπεδο σημαντικότητας ορίστηκε στο P & lt? 0,05 ως * και η P & lt? 0.001 ως ***

Η

Συζήτηση

Οι μελέτες μας αποδεικνύουν. ότι τα επίπεδα της πρωτεΐνης PR μειώθηκε σε καρκίνο που σχετίζεται στρώμα και ότι PR εξασκεί ανασταλτική επιπτώσεις στην κινητικότητα των κυττάρων του προστάτη μέσω της ρύθμισης της έκφρασης των δύο σημαντικών κυτοκινών, SDF-1 και IL-6. Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι η μειωμένη έκφραση PR σε καρκίνο που σχετίζεται στρώμα μεταβάλλει την ισορροπία του προστάτη μικροπεριβάλλον, το οποίο μπορεί να συμβάλει στην εισβολή του προστάτη κυττάρων και τη μετάσταση.

Η παρατήρηση ότι μειωμένη έκφραση PR στον καρκίνο σχετίζεται στρώμα είναι παρόμοιο με αυτό που αναφέρθηκε με άλλους υποδοχείς στεροειδών, όπως AR και ER-β [34] – [36], γεγονός που υποδηλώνει μια γενική αρχή ότι μπορεί να απαιτείται απώλεια υποδοχέων στεροειδών για το στρώμα του προστάτη που πρέπει να επανενεργοποιηθεί και να οικοδομήσουμε ένα υποστηρικτικό μικροπεριβάλλον για την PCA. Σε ευνοούν αυτή η υπόθεση, τα στρωματικά AR δείχθηκε να καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του προστάτη και εισβολή [37]. ER-β αγωνιστή ενισχυμένη απόπτωση των στρωματικών προστάτη και επιθηλιακά κύτταρα σε ποντίκια knock-out αρωματάσης [38]. Αν και PR και AR μοιράζονται μεγάλη ομολογία στην πρόσδεση του DNA περιοχές τους, οι μελέτες γονίδιο μικροσυστοιχιών έδειξαν διαφορετικά προφίλ γονίδιο ρυθμίζεται από αυτούς τους δύο υποδοχείς [31], [39]. Επιπλέον, PR εκφράζεται ως δύο κύριες ισομορφές με δεσμευτικές περιοχές ταυτόσημες DNA. Ωστόσο, ρυθμίζουν διαφορετικές μεταγραφικό. Μια εξήγηση μπορεί να είναι ότι PR εξασκεί μεταγραφική δράση της μέσω πρωτεϊνικών αλληλεπιδράσεων με άλλους μεταγραφικούς παράγοντες [40], [41].

Ο μηχανισμός με τον οποίο τα επίπεδα έκφρασης PR μειώθηκαν σε κύτταρα PCA είναι άγνωστη. Τόσο η ένταση της χρώσης PR και το εκατοστημόριο του PR θετικών πυρήνων είναι χαμηλότερα σε ιστούς του προστάτη. Δεδομένου ότι δεν είναι όλα τα στρωματικά κύτταρα του προστάτη εκφράζουν PR, είναι ασαφές εάν η PR αρνητικού πληθυσμού στρωματικών κυττάρων καθίσταται κυρίαρχη, ή αν PR θετικά κύτταρα χάνουν την έκφραση του κατά τη διάρκεια της προόδου του όγκου. προηγούμενη εργασία μας έδειξε ότι το PR κύτταρα θετικά στρωματικά πολλαπλασιαστεί πολύ πιο αργή από ό, τι PR αρνητικά κύτταρα [31]. Ωστόσο, θα μπορούσε επίσης να είναι δυνατό ότι τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να ασκήσει επιδράσεις παρακρινή να ενεργοποιήσετε ξανά στρωματικά κύτταρα του προστάτη από καταστολή της έκφρασης PR τους. Αυτές οι δυνατότητες δεν είναι αποκλειστικά η μία στην άλλη και μπορούν να συνυπάρχουν κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του καρκίνου.

IHC μας αναλύσεις εφαρμόστηκαν σε ολόκληρα τμήματα βουνό των βιοψιών του προστάτη, παρά μικροσυστοιχίες ιστού (TMA), για τη μέτρηση των δεικτών πρωτεΐνη του στρώματος. Η ετερογένεια του στρώματος του προστάτη απαιτεί πολλές περιοχές ανά διαφάνεια ασθενή που πρόκειται να αναλυθεί από παθολόγο. Αυτό είναι ένα κρίσιμο πρότυπο που δεν μπορεί να ικανοποιηθεί αν χρησιμοποιείτε TMA. Λόγω του μικρού μεγέθους των τεμαχίων των ιστών για TMAs, είναι τεχνικά δύσκολο να συλλάβει εκπρόσωπο ζεύγη καλοήθη και καρκίνου συνδέονται στρώμα και την πραγματοποίηση αναλύσεων παθολογική σύγκρισης.

Ligand-ανεξάρτητες ενέργειες των δημοσίων σχέσεων για την μεταγραφή του γονιδίου έχουν αναφερθεί σε αρκετές μελέτες [42], [43]. Τόσο liganded και unliganded PR μπορεί να βρίσκεται στο πυρήνα του κυττάρου, αλλά σε διαφορετικές υπο-πυρηνικά διαμερίσματα [44], [45]. Μεταμεταφραστικές τροποποιήσεις όπως φωσφορυλίωση ή τροποποίησή της με SUMO συμβάλλουν επίσης στην ενεργοποίηση PR απουσία προγεστερόνης [46]. Είναι ενδιαφέρον, έχει αναφερθεί πρόσφατα ότι AR ρυθμίζει c-myc έκφραση συνδέτη ανεξάρτητα, η οποία συμβάλλει στην ευνουχισμό ανθεκτικά εξέλιξη της προστάτη [47]. Αυτά τα ευρήματα μαζί υποδεικνύουν ότι μπορεί να υπάρχει ένα ευρύτερο φάσμα των γονιδίων, των οποίων η έκφραση ρυθμίζεται από υποδοχείς στεροειδών ανεξάρτητους προς συνδετήρες.