Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι ασθενείς με καρκίνο που φέρουν μεταλλάξεις στο γονίδιο της αφυδρογονάσης της διυδροπυριμιδίνης (

DPYD

) έχουν υψηλό κίνδυνο να εμφανίσουν σοβαρή φάρμακο ανεπιθύμητες ενέργειες μετά από χημειοθεραπεία με φθοροπυριμιδίνη φάρμακα όπως 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) ή καπεσιταβίνη. Η ανίχνευση προεπεξεργασία αυτού του απομείωση της πυριμιδίνης καταβολισμού θα μπορούσε να αποφευχθεί σοβαρή, δυνητικά θανατηφόρες παρενέργειες. Όπως είναι γνωστό επιβλαβείς μεταλλάξεις εξηγήσει μόνον ένα περιορισμένο ποσοστό των εκδηλώσεων ναρκωτικά αρνητική, εμείς συστηματικά αναζήτηση για πρόσθετα

DPYD

παραλλαγές που συνδέονται με αυξημένη τοξικότητα των φαρμάκων.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Πραγματοποιήσαμε μια συνολική προσέγγιση γονίδιο που καλύπτουν ολόκληρη την κωδικοποιητική περιοχή και συγκρίθηκαν

DPYD

συχνότητες γονοτύπου μεταξύ των ασθενών με καρκίνο με καλή (n = 89) και με φτωχή (n = 39) ανοχή ενός χημειοθεραπευτικού σχήματος βασισμένη σε φθοριοπυριμιδίνη. Εφαρμόζοντας την ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης και συρόμενο παράθυρο πλησιάζει εντοπίσαμε την ισχυρότερη συσχέτιση με το βαθμό fluoropyrimidine σχετίζονται III και IV τοξικότητα για την μη-συνώνυμη πολυμορφισμός c.496A & gt? G (p.Met166Val). Στη συνέχεια επιβεβαίωσε την αρχική μας αποτελέσματα χρησιμοποιώντας ένα ανεξάρτητο δείγμα 53 ατόμων που πάσχουν από τα ναρκωτικά δυσμενείς επιπτώσεις. Η συνδυασμένη αναλογία πιθανοτήτων υπολογίζεται για 92 περιπτώσεις τοξικότητας ήταν 4,42 [95% CI 2.12 – 9.23]?

p (τάση)

& lt? 0.001?

p (διορθωμένη)

= 0.001? το αναλογούν κίνδυνος ήταν 56,9%. Συγκρίνοντας όγκου τύπου ταιριάζουν σύνολα των δειγμάτων, συσχέτιση των c.496A & gt?. G με τοξικότητα ήταν ιδιαίτερα παρούσα σε ασθενείς με γαστροοισοφαγική και τον καρκίνο του μαστού, αλλά δεν έφθασαν σημασίας σε ασθενείς με ορθοκολικό κακοήθειες

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν αδιάσειστα στοιχεία ότι, τουλάχιστον σε διαφορετικούς τύπους όγκων, μια κοινή

DPYD

πολυμορφισμός συμβάλλει σε μεγάλο βαθμό στην εμφάνιση fluoropyrimidine που σχετίζονται με το φάρμακο ανεπιθύμητες ενέργειες. Φορείς αυτής της παραλλαγής θα μπορούσαν να επωφεληθούν από την αναπροσαρμογή ατομική δόση του φθοριοπυριμιδίνη φάρμακο ή εναλλακτική θεραπεία

Παράθεση:. Gross Ε, Busse Β, Riemenschneider Μ, Neubauer S, Seck Κ, Klein H-G, et al. (2008) Ισχυρή Ένωση ενός κοινού διϋδροπυριμιδινικής δεϋδρογενάσης πολυμορφισμό του γονιδίου με Φθοριοπυριμιδίνη που σχετίζονται με την τοξικότητα σε ασθενείς με καρκίνο. PLoS ONE 3 (12): E4003. doi: 10.1371 /journal.pone.0004003

Επιμέλεια: Jörg Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Γερμανία

Ελήφθη: 2 του Ιουνίου του 2008? Αποδεκτές: 16 Νοέμβρη του 2008? Δημοσιεύθηκε: 23 Δεκέμβρη του 2008

Copyright: © 2008 Gross et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τη Kommission für klinische Forschung (KKF) der Universität München Technischen (Νο 18-02), από την Deutsche Krebshilfe eV (DKH Νο 107.352) και από το Εθνικό Δίκτυο Γονιδιώματος γερμανική Ερευνών (NGFN) (Αρ 01GS0465). Οι οργανισμοί χρηματοδότησης είχαν κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

5-φθοριοουρακίλη (5-FU) και από του στόματος διαθέσιμη 5-FU προφάρμακα παραμείνει ραχοκοκαλιά της χημειοθεραπείας για τοπικά προχωρημένη και μεταστατική γαστροοισοφαγική, του παχέος εντέρου, και του καρκίνου του μαστού [1] – [5], αλλά μπορεί να οδηγήσει σε τοξικές επιδράσεις. είναι σοβαρές και απρόβλεπτες φάρμακο ανεπιθύμητες ενέργειες οφείλεται κυρίως στην ανεπάρκεια του ενζύμου δεϋδρογενάση διυδροπυριμιδίνης (DPD). Λόγω της λειτουργίας του ως αρχική και περιοριστικό της ταχύτητας ένζυμο στον καταβολισμό των πυριμιδινών, DPD απενεργοποιεί περισσότερο από το 80% της χορηγηθείσας συνήθεις δόσεις της 5-FU [6] – [8]. Η απομείωση αυτής της οδού αποικοδόμησης πυριμιδίνης οδηγεί σε τοξικές συσσώρευση του φαρμάκου και, πιθανότατα, αφορά επίσης ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με 5-FU-προφάρμακα σαν capecitabine [9]. Υπολογίζοντας μια συχνότητα της τάξης του 3-5% των ασθενών που φέρουν τουλάχιστον μια μερική έλλειψη DPD, η pretherapeutical ανίχνευση αυτού μεταβολική δυσλειτουργία θα μπορούσε να αποτρέψει σοβαρές και ανεπιθύμητες παρενέργειες λόγω φθοριοπυριμιδίνη φάρμακα.

Μετά το χαρακτηρισμό του εξαιρετικά πολυμορφικό τα ανθρώπινα διϋδροπυριμιδινο αφυδρογονάση γονίδιο (

DPYD

, MIM # 274270) [10], η ταχεία γενετικός έλεγχος έχει γίνει εφικτή και πολλές εκτροπές σειρά έχουν βρεθεί σε διάφορες πληθυσμιακές ομάδες [11] – [16]. Ειδικά

DPYD

παραλλαγές ως αποτέλεσμα μια κολοβωμένη πρωτεΐνη με σαφείς επιβλαβή επίδραση στο ένζυμο, συμπεριλαμβανομένης της εξόνιο-14-παρακάμπτοντας IVS14 μετάλλαξη + 1g & gt? Α που έχει θεωρηθεί ως η πιο διαδεδομένη μετάλλαξη σε ασθενείς με ανεπάρκεια DPD [17] . Ωστόσο, μια τέτοια περικοπή μεταλλάξεις έχουν εμφανιστεί για να εξηγήσουν μόνο έναν περιορισμένο αριθμό από σοβαρές παρενέργειες που αποδίδονται σε έλλειψη DPD. [18] – [20]. Επιπλέον, μόνο λίγοι νοηματικές μεταλλάξεις που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν άμεσα τη δομή της πρωτεΐνης, η δέσμευση συμπαράγοντα ή μεταφοράς ηλεκτρονίων του ενζύμου DPD (π.χ. c.703C & gt? Τ? C.2846A & gt? Τ) [21] – [23]. Μέχρι τώρα, ο αντίκτυπος των (κοινών) μη συνώνυμες πολυμορφισμών σχετικά με την τοξικότητα fluoropyrimidine που προκαλείται παραμένει σε μεγάλο βαθμό ασαφής και συστηματικές μελέτες συσχέτισης είναι, επομένως, υποχρεωτικές

Σε αυτό το πλαίσιο, η διακύμανση ακολουθία c.496A & gt?. G (p .Met166Val) έχει ταξινομηθεί είτε ως μετάλλαξη η οποία σχετίζεται με ανεπάρκεια DPD [24], [25] ή ως μία παραλλαγή που συνοδεύεται με φυσιολογική δραστηριότητα DPD σε κύτταρα του περιφερικού αίματος [26]. Εδώ παρουσιάζουμε τα στοιχεία που παρουσιάζουν υψηλό επιπολασμό του αλληλόμορφου κινδύνου c.496G σε ασθενείς με καρκίνο με αυξημένο τοξικές αντιδράσεις σε σύγκριση με τους ασθενείς με καλή ανοχή σε χημειοθεραπεία που περιείχε φθοριοπυριμιδίνη.

Μέθοδοι

Στόχοι

Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήθηκε διεξοδικά τον κίνδυνο αρκετές γενετικές παραλλαγές που καλύπτουν όλο το

DPYD

γονίδιο για σύνδεση με ενισχυμένη τοξικότητα κατά τη διάρκεια τυπική χημειοθεραπεία βασισμένη σε φθοριοπυριμιδίνη.

συμμετέχοντες

αρχικό δείγμα ασθενών μας (n = 128) αποτελούνταν από τους Καυκάσιους που είχαν διαγνωστεί για καρκίνο του μαστού, γαστροοισοφαγική και του παχέος εντέρου μεταξύ 2003 – 2006 (Πίνακας 1) και οι οποίοι έλαβαν θεραπεία με θεραπευτικά σχήματα θεραπεία 5-FU με βάση ( Πίνακας S1, πληροφορίες υποστήριξης) στο Klinikum rechts der Isar, Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου? η Klinikum Hamburg-Eppendorf και σε άλλα ιδρύματα στη Γερμανία.

Η

Για την αντιγραφή των αποτελεσμάτων μας, συμπεριλάβαμε μια πρόσθετη ομάδα των 53 ασθενών με καρκίνο οι οποίοι είχαν ανεξαρτήτως γονότυπου (

DPYD

εξώνια 2, 6, 13 και 14), από το Κέντρο Γενετικής και Εργαστηριακής Ιατρικής, Μόναχο-Martinsried, τη Γερμανία, την περίοδο 2005-2007 λόγω της οξείας ενέργειες του φαρμάκου δυσμενείς (Πίνακας 1, ομάδα 2? και τον πίνακα S1). Μεταξύ αυτών των θεμάτων, 14 είχαν λάβει θεραπείες που περιέχουν την από του στόματος διαθέσιμη 5-FU προφαρμάκου καπεσιταβίνη (Xeloda, Hoffmann LaRoche Pharma, Ελβετία, [27]).

Επιπλέον, ένα προηγουμένως αναλυθεί κοόρτη 157 υγιών ατόμων χωρίς ένα υπόβαθρο του καρκίνου [28] διευρύνθηκε σημαντικά μέχρι 607 εθελοντές και ο γονότυπος των παραλλαγών c.496A & gt? G (rs2297595) και IVS10-15t & gt? γ.

Ηθική

γραπτή συγκατάθεση είχε έχουν ληφθεί από όλες τις συμμετέχουσες θέματα και η μελέτη είχε εγκριθεί από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας.

αξιολόγηση της τοξικότητας

οι παρενέργειες που συνήθως σχετίζονται με τη θεραπεία με 5-FU, όπως ουδετεροπενία, θρομβοπενία, βλεννογονίτιδα, διάρροια, ναυτία και έμετο, νευροτοξικότητα, καρδιακή τοξικότητα, αλωπεκία και το χέρι-πόδι-σύνδρομο τεκμηριώθηκαν εντός των πρώτων 3 κύκλων της θεραπείας. Η αξιολόγηση της τοξικότητας βασίστηκε στα κριτήρια του National Cancer Institute Common Toxicity κατευθυντήριες γραμμές για την υποβολή εκθέσεων Ανεπιθύμητη Ενέργεια (NCI-CTC ΑΕ, έκδοση 3.0) και έγινε χωρίς τη γνώση των αποτελεσμάτων του γονότυπου. Αριθ διακριτές πρωτόκολλο θεραπείας φάνηκε να είναι ιδιαίτερα συνδέεται με υψηλότερη ανεπιθύμητο τοξικότητα.

ενίσχυση PCR και ανάλυση μεταλλάξεων

DNA παρασκευάστηκε από τα κατεψυγμένα δείγματα EDTA-αίμα χρησιμοποιώντας τυποποιημένες τεχνικές. Ολόκληρη η περιοχή κωδικοποίησης του

DPYD

γονίδιο ενισχύθηκε με 23 ζεύγη εκκινητών που αντιστοιχούν σε 23 εξώνια και τα εξονίου-ιντρονίου-όρια [28]. Η ανίχνευση του

DPYD

παραλλαγές αλληλουχίας διεξήχθη με μετουσίωση ανάλυση HPLC και προσδιορισμού αλληλουχίας όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29].

Στατιστικές μέθοδοι

Τα ζεύγη μέτρων ανισορροπία σύνδεσης, D ‘ και r

2, υπολογίστηκαν με τη χρήση του πακέτου λογισμικού Haploview [30].

σύνδεσης μεταξύ κράτους στοργή (5-FU ανοχή) του δείγματος και γονότυπους του ασθενούς ελέγχθηκε με ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης συμπεριλαμβανομένων ηλικία κατά την επεξεργασία και το σεξ ως συμπαράγοντες. Διαφορετικά μοντέλα ένωση μόνο σήμανσης εξετάστηκαν: καμία συγκεκριμένο μοντέλο κληρονομικότητας (θεωρεί όλα τα γονοτυπική εφέ), το υπολειπόμενο μοντέλο, το οποίο έρχεται σε αντίθεση μία ομοζυγώτες έναντι των άλλων συγκεντρωμένων γονότυπους (και τα δύο αλληλόμορφα ως υποτελή αλληλόμορφα εξετάστηκαν) και ένα μοντέλο τάση, η οποία προϋποθέτει ένα αλληλόμορφο δόσης αποτέλεσμα. Διορθώσεις για πολλαπλές συγκρίσεις σε κάθε μοντέλο θεωρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα παγκόσμιο τεστ μετάθεση (1000 μεταθέσεις). Επιπλέον, μια προσέγγιση συρόμενο παράθυρο δύο-δείκτη έγινε για να περιορίσετε το σήμα σύνδεσης.

ακριβές τεστ του Fisher εφαρμόστηκε για την εκτίμηση των διαφορών στην κατανομή των πολυμορφισμών σε σχέση με την τοξικότητα σε όγκο τύπου ζεύγη των ασθενών δείγματα

το ποσοστό του κινδύνου παρενεργειών στον 496A & gt? G φορείς που θα μπορούσαν να αποδοθούν στο G-αλληλόμορφο (που αναλογούν κινδύνου στο «εκτεθειμένη») υπολογίστηκε από τον ακόλουθο τύπο:. που αναλογεί% του κινδύνου (AR%) = (Ι

e-I

υ) /I

e × 100, όπου το «i

e» είναι η συχνότητα των παρενεργειών στη συνδυασμένη ομάδα ομόζυγα και ετερόζυγα φορείς του G-αλληλόμορφο και «I

u ‘είναι η συχνότητα των παρενεργειών στην ομάδα με το μεγαλύτερο γονότυπο (ΑΑ).

Αποτελέσματα

Χαρακτηριστικά της αρχικής κοόρτης ασθενών

με βάση τις κοινές κατευθυντήριες γραμμές κριτήρια τοξικότητας (NCI-CTC ΑΕ, έκδοση 3.0), λάβαμε συνολικά 39 ασθενείς με καρκίνο που παρουσιάζουν βαθμού III και IV τοξικότητας μετά από θεραπεία με 5-FU περιέχει (πολυ) χημειοθεραπεία ( Πίνακας S2, πληροφορίες υποστήριξης). Τριάντα επτά από αυτά τα άτομα έδειξαν ανάκαμψη από τις ανεπιθύμητες ενέργειες που ανέκυψαν μετά την πλήρη εξάλειψη της 5-FU ή αντίστοιχες μειώσεις της δόσης. Δύο ασθενείς είχαν θανατηφόρα έκβαση: Ένα 62 χρόνια-old ασθενών (Πίνακας S2, ασθενής # 26) με καρκίνο του ορθού αναπτυχθεί σοβαρή ουδετεροπενία, βλεννογονίτιδα και διάρροια μετά τη χορήγηση 5-FU και πέθανε στο επακόλουθο μιας σύνδρομο τοξικού σοκ. Ένα άλλο 76 χρόνια-old man (ασθενής # 17) με τοπικά προχωρημένο αδενοκαρκίνωμα του esophagogastric διασταύρωση έχασαν τη ζωή τους κατά τη διάρκεια της πρώτης /εφαρμογή 5-FU με οξαλιπλατίνη. Είχε αναφερθεί σοβαρή στηθάγχη και υπέστη μια καρδιακή ανακοπή. Άμεση ανάνηψη παρέμεινε ανεπιτυχής. Αν και αυτοψία δεν αποκάλυψε δομικές βλάβες των στεφανιαίων αρτηριών ή μυς της καρδιάς, ο θάνατός του αποδόθηκε σε 5-FU που προκαλείται από καρδιακή τοξικότητα, πιθανώς λόγω σπασμό των στεφανιαίων. Στην πλειοψηφία των ασθενών που προσλαμβάνονται μας (n = 89), όμως, 5-FU χημειοθεραπεία με βάση ήταν καλά ανεκτή ή προκαλείται μόνο ήπια τοξικότητα (NCI-CTC AE ταξινόμησης I-II).

Σύλλογος διακριτών πολυμορφισμών με αυξημένη 5-FU-τοξικότητα που προκαλείται από

Σάρωση ολόκληρο το πλαίσιο ανάγνωσης του

DPYD

γονίδιο στην παραπάνω περιγραφείσα κοόρτη ασθενών, εντοπίσαμε 18 διαφορετικές ανταλλαγές μονού νουκλεοτιδίου και μία νέα μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου, c .1109delTA (p.Ile370LysfsX4), κατανεμημένα σε όλη την

DPYD

γονίδιο (Πίνακας 2). Η (LD) δομή ανισορροπία σύνδεσης με βάση 18 SNPs παρουσιάζει σημαντικές χαμηλή D ‘και r

2 τιμές με μόνο δύο γενετικές περιοχές που δείχνει μέτρια LD (Εικ. 1). Αυτό το Δ ‘και Ε

2 μοτίβο μπορεί να υποδεικνύει ένα μεγάλο ανασυνδυασμού πλούσιο σε διάστημα DNA που περιλαμβάνει την πλήρη

DPYD

γονίδιο, όπως προτείνεται πριν [31], [32].

ζεύγη μέτρα LD (r

2) υπολογίζεται με το πακέτο λογισμικού Haploview [ref. 30] φαίνονται. Η ισχυρότερη περιοχή LD τονίζεται.

Η

Ανάλυση του

DPYD

γονότυπους αποκάλυψαν ενδείξεις ενός ισχυρού αλληλόμορφο-δοσο-εξαρτώμενη συσχέτιση με την εμφάνιση τοξικότητας για δύο μέτρια συσχέτιση παραλλαγές, IVS10-15t & gt? c και c.496A & gt? G (r

2 = 0,68?

p (τάση)

& lt? 0.001), ακόμα και μετά την προσαρμογή για πολλαπλές δοκιμές (IVS10-15t & gt? c:

p (διορθωμένη)

= 0.009, ποσοστό πιθανοτήτων (OR) = 3,88 [95% διάστημα εμπιστοσύνης 1,71 έως 8,78]? c.496A & gt? G:

p (διορθωμένη)

= 0,002? Ή = 4.58 [1,95 – 10,75]? Πίνακας 2). Όσον αφορά την προσέγγιση των δύο δείκτη συρόμενο παράθυρο τα ισχυρότερα σήματα ένωση παρατηρήθηκαν για αυτούς τους συνδυασμούς απλότυπος που περιλαμβάνονται στο δείκτη c.496A & gt? G (π.χ. συνδυασμός δείκτη c.496A & gt? G και IVS5 + 18 g & gt? Α: απλότυπος G /G? Συχνότητας σε ασθενείς με και χωρίς τοξικότητα? 0.256 έναντι 0.088?

σ

= 0,0003). Αυτό υποδηλώνει ότι το σήμα μόνο ένωση δείκτη οφείλεται κυρίως στη λειτουργική SNP c.496A & gt? G προκαλώντας μια υποκατάσταση μη συνώνυμων αμινοξέων (p.Met166Val) σε μια εξαιρετικά διατηρημένη θέση και εντός διατηρημένη τρισδιάστατο περιβάλλον [25], [33].

στο μελέτησε ομάδα ασθενών, τα αναλογούντα κίνδυνο να υποφέρουν από σοβαρές ναρκωτικά δυσμενείς επιπτώσεις λόγω της 496G-αλληλόμορφο ήταν 56,9%. Περαιτέρω κλινικές υποστήριξη της σημασίας αυτού του πολυμορφισμού σε σχέση με την αυξημένη τοξικότητα μπορεί να έρθει από τα δείγματα των ασθενών: μία περίπτωση καρδιακού θανάτου αφορούσε ένα ετερόζυγο G-αλληλόμορφο φορέα (ασθενής # 17, Πίνακας S2) και όλα τα ομόζυγη φορείς του G-αλληλόμορφο (ασθενείς # 16, 23, 31) έπεσε στην υποομάδα των ασθενών με αυξημένη τοξικότητα. Η σημαντική χαμηλότερη συχνότητα του c.496G-αλληλόμορφο σε ασθενείς με καλή ανοχή του 5-FU (0.082) ήταν ταυτόσημη με την ομάδα ελέγχου βάσει πληθυσμού (0.081) που αποτελείται από 607 υγιή άτομα (Πίνακας 2).

Επαναξιολόγηση των στοιχείων σύνδεσης με μια πρόσθετη ασθενή ομάδα

Για να επιβεβαιωθούν τα ευρήματά μας θα περιελάμβανε μια δεύτερη ομάδα 53 ασθενών που έχουν συλλεχθεί και αναλυθεί ανεξάρτητα (ομάδα 2, Πίνακας 2). Όλοι οι ασθενείς είχαν αντιδράσει με σοβαρή φάρμακο ανεπιθύμητες ενέργειες μετά τη θεραπεία με ένα 5-FU, καπεσιταβίνη ή με βάση το σχήμα χημειοθεραπείας. Η c.496A & gt? Σολ ελάσσονα συχνότητα αλληλόμορφου αυτού δεύτερη ομάδα (0.23) δεν έδειξε καμία σημαντική διαφορά σε σύγκριση με την αρχική ομάδα τοξικότητα (0,26). Στο πλαίσιο αυτό, είναι ενδιαφέρον ότι τρεις c.496G φορείς αλληλόμορφου αντιμετώπισε σοβαρή τοξικότητα (κυρίως διάρροια και το χέρι-πόδι-σύνδρομο) μετά την εφαρμογή της από του στόματος διαθέσιμη καπεσιταβίνη προφάρμακο 5-FU, η οποία είχε ως αποτέλεσμα τη διακοπή της χημειοθεραπείας σε δύο άτομα. Αυτές οι παρατηρήσεις μπορεί να τονίσει τον κίνδυνο για δυσανεξία φαρμάκου λόγω της συμμετοχής DPD στα χημειοθεραπευτικά σχήματα χρησιμοποιώντας καπεσιταβίνη [9]

Ανάλυση της συνδυασμένης δείγματος ασθενή με τοξικότητα. (Αρχική και τη δεύτερη ομάδα? N = 92) έδωσε μια σημαντική δόση εξαρτώμενη από το καταστατικό για τη

DPYD

δείκτη c.496A & gt? G (

p (τάση)

& lt? 0.001?

p (διορθωμένη)

= 0.001? OR = 4,42 [ ,,,0],02.12 – 09.23] Επιπλέον, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση με παρενέργειες fluoropyrimidine σχετίζονται παρατηρήθηκε για το άλλο

DPYD

πολυμορφισμούς, το φύλο και την ηλικία κατά την επεξεργασία

η συχνότητα των c.496A & gt?.. G σε όγκο τύπου συμφωνημένα σύνολα δειγμάτων

από διακριτή πολυμορφισμούς DPYD μπορούσε να συσχετιστεί με ένα συγκεκριμένο τύπο όγκου, έχουμε επιπρόσθετα επαναξιολογείται δεδομένα σύνδεσης μας σε όγκους τύπου συμφωνημένα σύνολα των ασθενών (Πίνακας 3). Η γαστροοισοφαγική και ασθενείς με καρκίνο του μαστού αντικατοπτρίζονται τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε περιπτώσεις τοξικότητας και ο έλεγχος του συνόλου του πληθυσμού των ασθενών καμία συσχέτιση της c.496A & gt?. G ή IVS10-15t & gt? c με αυξημένη τοξικότητα επιτεύχθηκε για τις περιπτώσεις ορθοκολικού καρκινώματος, αν και μια τάση για υψηλότερη επικράτηση της αυτές οι παραλλαγές συνδέθηκε με παρενέργειες μετά από θεραπεία φθοροπυριμιδίνη /πλατίνας (π.χ. c.496A & gt? G συχνότητα στην τοξικότητα σε σχέση με την ομάδα ελέγχου: 0,29 έναντι 0,17?

σ

= 0,378)

Η

Χαμηλή συχνότητα σαφείς επιβλαβείς μεταλλάξεις στον πληθυσμό μας ασθενή

Τα καλά περιγράφεται εξόνιο-14-παρακάμπτοντας IVS14 μετάλλαξη + 1g & gt.? μια η οποία σχετίζεται με ανεπάρκεια DPD συνέβη μόνο σε πέντε από όλες τις 92 περιπτώσεις με τοξικές παρενέργειες. Αυτή η μετάλλαξη ματίσματος-site δεν παρατηρήθηκε σε ασθενείς με καλή ανοχή σε θεραπεία με φθοριοπυριμιδίνη. Μια άλλη ακόμη undescribed περικοπή μετάλλαξη (c.1109delTA) ανακαλύφθηκε σε έναν ασθενή ο οποίος υπέστη μοιραία τοξικότητα κατά την 1

ος κύκλος της 5-FU μονοθεραπεία (ασθενής # 26, Πίνακας S2). Η προηγουμένως άγνωστη μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου στο εξώνιο 10 οδηγεί σε ένα κωδικόνιο τερματισμού στη θέση 374. Τέλος, η παρερμηνεύσιμη μετάλλαξη 2846 A & gt? T (p.Asp949Val), η οποία υποτίθεται ότι παρεμβαίνουν στον σχηματισμό σιδήρου-θείου-διασποράς και ως εκ τούτου, με το ηλεκτρόνιο μεταφορά κατά τη διάρκεια της καταλυτικής αντίδρασης του ενζύμου DPD [21], βρέθηκε μόνο σε ένα άτομο με σοβαρή enterotoxicity του βαθμού IV (ασθενής # 29, Πίνακας S2).

Συζήτηση

παραλλαγές Ακολουθία στο η

DPYD

γονίδιο έχει δειχθεί ότι επηρεάζει την κατανομή της κοινής αντικαρκινικού φαρμάκου 5-FU και να προκαλέσουν σοβαρές φάρμακο δυσμενείς επιδράσεις κατά τη διάρκεια της συστημικής 5-FU-εφαρμογή σε ασθενείς με καρκίνο. Επιπλέον, η ακεραιότητα της οδού αποικοδόμησης 5-FU εμφανίζεται να είναι παρόμοιας σημασίας όσον αφορά την εφαρμογή του νεοεισαχθείσα φθοροπυριμιδίνη φάρμακα τα οποία ενδοκυτταρικά μετατρέπονται σε 5-FU [9], [34], [35]. Έτσι, οι παρατηρήσεις αυτές δικαιολογούν τη συστηματική ανίχνευση των ασθενών DPD ανεπάρκεια πριν από την φθοριοπυριμιδίνη χορήγηση. Ωστόσο, ένα πρακτικό και αξιόπιστο τεστ προεπεξεργασίας για

DYPD

παραλλαγές ή μεταλλάξεις δεν ήταν διαθέσιμα μέχρι τώρα λόγω της υψηλής γενετικής ποικιλομορφίας του

DPYD

περιοχή κωδικοποίησης και της σπάνιας εμφάνισης σαφείς επιβλαβείς μεταλλάξεις , τουλάχιστον σε Καυκάσιους πληθυσμούς [18], [19]. Για το λόγο αυτό, διάφορες λειτουργικές μέθοδοι έχουν σχεδιαστεί για την ταχεία πρόβλεψη ενός (μερικού) ανεπάρκεια DPD όπως το

δοκιμή 2- 13C-ουρακίλη αναπνοή [36] ή τον προσδιορισμό της πλασματικής ουρακίλη /διϋδροουρακιλο αναλογίες [34], [37 ], [38] έχουν εισαχθεί στο μεσοδιάστημα. Mercier και συνεργάτες ανέφεραν πρόσφατα, ότι οι μελλοντικοί αξιολόγηση της λειτουργικής κατάστασης DPD ακολουθείται από αντίστοιχη 5-FU δόση προσαρμογή οδήγησε σε μια 2 φορές μείωση στην εμφάνιση σοβαρών τοξικότητα [39]. Παρ ‘όλα αυτά, αυτές οι μέθοδοι δεν έχουν βρει ευρεία εφαρμογή τους στην κλινική ρουτίνα μέχρι σήμερα [40], αν μη τι άλλο επειδή αυτού του είδους οι αναλύσεις απαιτούν ειδικό εξοπλισμό. Επιπλέον, η έλλειψη συσχέτισης μεταξύ των μετρήσεων δραστηριότητα DPD και τοξικότητα του 5-FU υποτέθηκε [41]. Σαφώς, οι μεθοδολογίες βασίζονται σε γενετικό έλεγχο για κλινικά σχετική SNPs θα προσφέρει ο απλούστερος τρόπος για να εντοπίσει τους ασθενείς διατρέχουν τον υψηλότερο κίνδυνο των γεγονότων δυνητικά απειλητική για τη ζωή φάρμακα δυσμενείς.

Όσον αφορά την ανάπτυξη ενός γενετικού τεστ, μπορούμε έγινε συστηματική ανάλυση της κωδικεύουσας περιοχής του γονιδίου

DPYD

και σύγκριση της συχνότητας εμφάνισης της που βρίσκονται συνήθως SNPs μεταξύ των ασθενών με καρκίνο με καλό και με κακή ανοχή μιας χημειοθεραπείας βασισμένη σε φθοριοπυριμιδίνη. Παρατηρήσαμε μια σημαντική αλληλόμορφο-δοσοεξαρτώμενη σύνδεση του μη συνώνυμες εκτροπή αλληλουχία c.496A & gt? G (p.Met166Val) με το φαινότυπο της ενισχυμένης τοξικότητας βαθμού III /IV. Η ανταλλαγή μεθειονίνη-βαλίνη που προκύπτουν από την c.496A & gt? G μετάβαση έχει ήδη εμπλακεί σε μια επιβλαβή επίδραση σε ασθενείς με ανεπάρκεια DPD [24], [25], αλλά αντικρουόμενα αποτελέσματα έχουν αναφερθεί για την επιρροή της στη δραστικότητα του ενζύμου [26]. Ενώ η δραστηριότητα DPD μετράται σε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος μπορεί να είναι άσχετη με την τοξικότητα της 5-FU, σύμφωνα με μια μελέτη από Di Paolo et al. [41], η υψηλή διατήρηση της θέσης μετάλλαξης κατά τη διάρκεια της εξέλιξης μιλά σθεναρά υπέρ μιας βιολογική σημασία αυτής της αλλαγής αμινοξέος [33]. Πιο εντυπωσιακά, φορείς του c.496A & gt? G γονότυπο αποτελούσαν περισσότερο από το 43% των ατόμων με σοβαρή φάρμακο ανεπιθύμητες ενέργειες στη μελέτη μας. Σε αντίθεση με αυτό το υψηλό επιπολασμό, την κλασική εξόνιο-14-παρακάμπτοντας IVS14 μετάλλαξη + 1g & gt? Α (

DPYD * 2A

) εμφανίστηκαν μόνο σε πέντε ασθενείς (5,4%) των συνολικών 92 περιπτώσεις τοξικότητας. Επιπλέον, ένα άλλο ακόμη undescribed περικοπή μετάλλαξη, c.1109delTA (p.Ile370LysfsX4), και ένα υποθετικό δηλητηριώδη παρερμηνεύσιμη μετάλλαξη (c.2846A & gt? Τ) ανιχνεύθηκαν κάθε φορά κατά τη μελέτη πληθυσμού ασθενών. Έτσι, σε σύγκριση με άλλες πρόσφατες δημοσιεύσεις που αναφέρονται είτε περιθωριακές πρόβλεψης δυναμικό [19], [20] ή τη μείωση των σοβαρών αρνητικών επιπτώσεων της έως και 27% από τους υποψήφιους του γονότυπου για τις μεταλλάξεις IVS14 + 1g & gt? Ένα ή /και c.2846A & gt? T [40], [15], η ανίχνευση μιας πιο συχνές πολυμορφισμός σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο για fluoropyrimidine δυσανεξία θα βοηθήσουν στην αναγνώριση ασθενών πολύ περισσότερο κίνδυνο. Αυτά τα άτομα θα μπορούσαν να επωφεληθούν από την προσεκτική ατομική δόση προσαρμογή του 5-FU ή προφάρμακα 5-FU

Μια πιθανή προκατάληψη της μελέτης μας θα μπορούσαν να έχουν εισαχθεί από την ένωση c.496A & gt?. G με ένα συγκεκριμένο τύπο όγκου. Σε αυτό το πλαίσιο, δεν υπάρχει καμία διαφορά με τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε ολόκληρο τον πληθυσμό ασθενών ήταν προφανές για τους καρκίνους του μαστού ή γαστροοισοφαγική. Επιπλέον, η συχνότητα εμφάνισης της c.496A & gt? G στις αντίστοιχες περιπτώσεις ελέγχου χωρίς ενισχυμένη τοξικότητα δεν υπερέβαινε τη συχνότητα που μετράται σε 607 υγιή άτομα μιλώντας κατά μία σχέση της c.496A & gt? G με την ανάπτυξη αυτών των καρκίνων. Σε αντίθεση με αυτά τα αποτελέσματα, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση του c.496A & gt? G με τοξικότητα θα μπορούσε να καθοριστεί για ασθενείς με καρκίνο του παχέος ακόμη επειδή η εκτροπή αλληλουχία εμφανίζεται αυξημένη συχνότητα εμφάνισης (σε σύγκριση με υγιείς εθελοντές) σε τοξικότητα, καθώς και σε περιπτώσεις ελέγχου. Ωστόσο, λόγω του μάλλον μικρό αριθμό περιπτώσεων ελέγχου (n = 15), τα οποία ήταν διαθέσιμα για αυτόν τον τύπο του καρκίνου, η ποσότητα του 496G-αλληλόμορφου φορείς στην ομάδα ελέγχου θα μπορούσε να έχει υπερεκτιμηθεί και χρειάζεται περαιτέρω αξιολόγηση με υψηλότερους αριθμούς υπόθεση.

από την άλλη πλευρά, τα διαφορετικά αποτελέσματα που λαμβάνονται με ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο θα μπορούσε να εξηγήσει τη διαφορά μεταξύ των ευρημάτων μας και των Schwab et al. [20] σχετικά με ένα σημαντικό ρόλο των c.496A & gt? G σε σοβαρές φάρμακο ανεπιθύμητες ενέργειες. Η πρόσφατη μελέτη από Schwab et al. η οποία πρότεινε έναν περιορισμένο ρόλο των γενετικών παραγόντων για σοβαρή τοξικότητα 5-FU βασίζεται κυρίως σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Ένας άλλος λόγος για τις διαφορετικές παρατηρήσεις μπορεί να συνδέεται με το είδος της θεραπείας των ασθενών, καθώς Schwab et al. έχουν περιορισμένη κλινική δοκιμή τους σε μονοθεραπεία με 5-FU. Ενώ μόνο το 19% των καρκίνων γαστροοισοφαγικής έλαβαν θεραπεία με 5-FU +/- φολινικού οξέος στη μελέτη μας, το 45% των ασθενών με καρκίνο παχέος έλαβαν τέτοια θεραπεία. Κατά συνέπεια, λιγότερο έντονη συσχέτιση με την παραλλαγή 496A & gt? G βρέθηκε – αν και σε χαμηλούς αριθμούς περίπτωση – για 5-FU μόνη της ή με chemoradiation αποδίδοντας 496G-αλληλόμορφο συχνότητες 0,14 (n = 11) έναντι 0.105 (n = 19) σε ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς σοβαρά συμβάντα τα ναρκωτικά δυσμενείς. Ωστόσο, μια υψηλή επικράτηση του c.496A & gt? Γονότυπο G επιβεβαιώθηκε σε ασθενείς μας με σοβαρή τοξικότητα σχετικά με το 5-FU /πλατίνα ή αγωγές που περιέχουν ανθρακυκλίνη (συχνότητα 496G-αλληλόμορφα σε ασθενείς με και χωρίς σοβαρή τοξικότητα: 0.25 (n = 30) έναντι 0.08 (n = 51) για 5-FU φαρμακευτικές θεραπείες /φολινικό οξύ /πλατίνα? 0,43 (n = 7) έναντι 0.05 (n = 10) για FEC θεραπεία). Τα στοιχεία αυτά μπορεί να υποδηλώνουν ότι η επίδραση της c.496A & gt? G είναι πιο εμφανής με την παρουσία πρόσθετων, τα ναρκωτικά

Καθώς η δράση της σχετικά υψηλής DPD έχει αναφερθεί για c.496A & gt?. G φορείς από τον Johnson et al. [26] δεν μπορούμε να αποκλείσουμε ότι η σοβαρή c.496A & gt? G-συνδέονται φαινότυπος οφείλεται στο σωρευτικό αποτέλεσμα που προκαλείται από τοξικά fluoropyrimidine καταβολισμού [42] και την κυτταροτοξικότητα των άλλων συστατικών του πολυχημειοθεραπεία [43]. Παρ ‘όλα αυτά, τα δεδομένα μας που λαμβάνονται σε ένα υψηλό αριθμό περιπτώσεων τοξικότητας (n = 92), συγκρίσιμη με τη μελέτη της Schwab et al., Δείχνουν μια σαφή, κλινικά σημαντική συσχέτιση που έφθασε μεγάλη σημασία στην γαστροοισοφαγική και του μαστού.

Όσον αφορά τις πολυπλοκότητες φαρμακογονιδιωματική [44], η αξιολόγηση των διαφορετικών σχημάτων θεραπείας και τύπους όγκων μπορεί να οδηγήσει σε καλύτερη κατανόηση του ρόλου των γενετικών παραγόντων στην φθοριοπυριμιδίνη σχετίζεται με τα ναρκωτικά δυσμενείς εκδηλώσεις. Γονίδιο τσιπ αναλύσεις για την ανίχνευση των σχετικών

DPYD

των παραλλαγών, όπως προηγουμένως εισήγαγε Zhang et al. [45] θα μπορούσε τότε να είναι η καλύτερη επιλογή σε μια μελλοντική κλινικό περιβάλλον.

Περιορισμοί

Αν και αυτή η αρχική μελέτη βασίζεται σε ένα σχετικά μεγάλο αριθμό ασθενών με σοβαρή τοξικότητα, αριθμοί περίπτωση είναι ακόμη περιορισμένη. Ανάλυση των άλλες περιπτώσεις με τοξικές παρενέργειες απαιτείται πλέον εντελώς λαμβάνοντας επίσης υπόψη τον συγκεκριμένο τύπο του πρωτοκόλλου του όγκου και της θεραπείας.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Θεραπεία πρωτόκολλα σε σχέση με τον τύπο του καρκίνου

doi: 10.1371 /journal.pone.0004003.s001

(0,04 MB DOC)

Πίνακας S2.

Ασθενείς με βαθμού ΙΙΙ-IV τοξικότητας, αναλύεται πλήρως στο γονίδιο DPYD

doi: 10.1371 /journal.pone.0004003.s002

(0,10 MB DOC)

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες στον Δρ Μ Stauch (Praxis für Hämatologie und Onkologie, Kronach), Δρ Μ deWit (Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf, Αμβούργο), Δρ Schäfer (Klinikum Neuperlach, Μόναχο) και ο Δρ Montemurro (Universitätsklinik Greifswald) για την παροχή μας δείγματα αίματος των ασθενών με φαρμακο-δυσμενείς επιπτώσεις. Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε όλους τους ασθενείς που συμμετείχαν σε αυτή τη μελέτη. Εκτιμούμε ιδιαίτερα την τεχνική βοήθεια του V. Kellnberger, Μ Voggenreiter και Κ Papsdorf.