Αφηρημένο

Η μελέτη της μας διερεύνησε τη σχέση μεταξύ του

MYC

αλλαγές και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά γαστρικών καρκίνων. Αξιολογήσαμε την επίδραση της

MYC

έκφραση mRNA και πρωτεΐνης ανοσοαντιδραστικότητα του, καθώς και μεταβολή αριθμού αντιγράφων, το DNA προαγωγέα μεθυλίωση, και σημειακές μεταλλάξεις, σε 125 γαστρικό αδενοκαρκίνωμα και 67 paried μη-νεοπλαστικούς ιστούς. Παρατηρήσαμε ότι το 77% των όγκων που παρουσιάζονται MYC ανοσολογική αντίδραση η οποία ήταν σημαντικά σχετίζεται με αυξημένη έκφραση του mRNA (

σ

& lt? 0,05). Αυτές οι παρατηρήσεις σχετίζονται με βαθύτερη επέκταση του όγκου και η παρουσία της μετάστασης (

ρ

& lt? 0,05). έκφραση της πρωτεΐνης MYC επίσης πιο συχνά παρατηρούνται στο εντερικό τύπου από ό, τι σε όγκους διάχυτη τύπου (

σ

& lt? 0.001). Επιπλέον,

MYC

mRNA και η έκφραση της πρωτεΐνης συσχετίστηκε σημαντικά με τον αριθμό αντιγράφων του (

σ

& lt? 0,05). Το κέρδος του

MYC

αντίγραφα συνδέθηκε με όψιμης έναρξης, εντερική τύπου, προχωρημένο στάδιο του όγκου, και παρουσία μακρινή μετάσταση (

σ

& lt? 0,05). Μια μεθυλιωμένος

MYC

υποστηρικτής ανιχνεύθηκε στο 86,4% των δειγμάτων όγκου.

MYC

υπομεθυλίωση συνδέθηκε με διάχυτη τύπου, προχωρημένο στάδιο του όγκου, βαθύτερη επέκταση του όγκου, και η παρουσία της μετάστασης λεμφαδένα (

σ

& lt? 0,05). Επιπλέον, δεκαοχτώ δείγματα όγκων που παρουσιάζονται τουλάχιστον μία γνωστή μετάλλαξη. Η παρουσία του

MYC

μεταλλάξεων που σχετίζονται με διάχυτη τύπου όγκου (

σ

& lt? 0.001). Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το

MYC

απορρύθμιση συνδέθηκε κυρίως με την κακή προγνωστικά χαρακτηριστικά και ενίσχυσε επίσης την παρουσία των διαφορετικών οδών που εμπλέκονται στην εντερική τύπου και διάχυτου τύπου γαστρικών καρκινογένεση. Έτσι, τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι

myc

μπορεί να είναι ένας χρήσιμος δείκτης για την κλινική διαστρωμάτωση και την πρόγνωση

Παράθεση:. De Souza CRT, Leal MF, Calcagno DQ, Κόστα Sozinho EK, Borges BDN, Μαυροβούνιο RC, et al. (2013)

MYC

απορρύθμιση σε γαστρικός καρκίνος και κλινικοπαθολογικών συνέπειές της. PLoS ONE 8 (5): e64420. doi: 10.1371 /journal.pone.0064420

Επιμέλεια: Masaru Katoh, Εθνικό Κέντρο Καρκίνου, Ιαπωνία

Ελήφθη: 30 Γενάρη 2013? Αποδεκτές: 12 του Απριλίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 22 Μαΐου 2013

Copyright: © 2013 de Souza et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς είναι ευγνώμονες για Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Τεχνολογικό (CNPq? CRTdS, AKCRdS, SEBdS, RRB και MdACS) και Fundação de Amparo à Pesquisa κάνει Estado de São Paulo (FAPESP? DQC και MFL) που υποστηρίζουν αυτή τη μελέτη ως επιχορηγήσεις και υποτροφίες. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στομάχου είναι ο τέταρτος πιο συχνός τύπος καρκίνου και παραμένει η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με όλο τον κόσμο [1]. Ο καρκίνος αυτός συνήθως διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο και η ενιαία θεραπευτική αγωγή διαθέσιμη απαιτεί χειρουργική εκτομή [2]. Έτσι, γαστρικό καρκίνο είναι ένα σοβαρό πρόβλημα δημόσιας υγείας στον κόσμο. Μία βελτιωμένη κατανόηση της βιολογίας του παρόντος νεόπλασμα είναι κρίσιμη και μπορεί να είναι χρήσιμη για την καθοδήγηση της διαχείρισης των ασθενών, καθώς και για την ανάπτυξη νέων θεραπευτικών επιλογών.

MYC

είναι ένα από τα πιο μελετημένα ογκογονίδια που προέρχονται από τη σχέση της με έναν μεγάλο αριθμό ασθενειών [3]. MYC παίζει ένα ρόλο σε διάφορες θεμελιώδεις λειτουργίες της βιολογίας του κυττάρου, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης της κυτταρικής ανάπτυξης και του πολλαπλασιασμού, του μεταβολισμού, της διαφοροποίησης, της απόπτωσης, και της αγγειογένεσης (για επισκόπηση βλέπε [4], [5]). Ως εκ τούτου, MYC είναι ένας ολοκληρωτής των εξωκυτταρικών και ενδοκυτταρικών σημάτων, και ο κυτταρικός φαινότυπος της εξαρτάται από την τοποθεσία του ιστού [6], [7]. Δεν αποτελεί έκπληξη, η απορρύθμιση των λειτουργιών MYC συμβάλλει στην φαινότυπο όγκου.

MYC

απορρύθμιση λόγω γονιδιακής ενίσχυσης [8], [9], η χρωμοσωμική μετατόπιση ή εισαγωγή [10], [11] , οι μεταλλάξεις [12], και επιγενετικές τροποποιήσεις [13], [14], έχει αναφερθεί σε διάφορα είδη καρκίνων, ιδιαίτερα σε καρκίνο του στομάχου. MYC έκφρασης είναι συχνά αυξημένα ή απορυθμισμένη σε ανθρώπινα νεοπλάσματα [4], και φαίνεται να είναι στο σταυροδρόμι πολλών σημαντικών οδών και των διαδικασιών που εμπλέκονται στην καρκινογένεση [15], είναι ένα σημαντικό γεγονός στη γαστρική καρκινογένεση [9]. Προηγουμένως, η ομάδα μας έδειξε ότι

MYC

έκφρασης του mRNA και τον αριθμό αντιτύπου αυξάνεται κατά τη διάρκεια των διαδοχικών σταδίων της εντερικής τύπου γαστρική καρκινογένεση σε ένα πρωτεύον μοντέλο πλην του ανθρώπου [16], γεγονός που υποδηλώνει ότι

MYC

μπορεί να συμμετέχουν σε γαστρικό έναρξη και την εξέλιξη του όγκου.

Η κατανόηση του

MYC

βιολογία είναι υψίστης σημασίας για τη διαλεύκανση του ρόλου της στην παθογένεια του καρκίνου του στομάχου. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχει καμία μελέτη που συσχετίζει

MYC

μετάλλαξη, ενίσχυση, πρωτεΐνης /επίπεδα mRNA, και μεθυλίωση σε αυτήν την νεοπλασία. Εδώ, θα αξιολογηθεί η σχέση μεταξύ

MYC

αλλαγές και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά σε καρκίνο του στομάχου. Επιπλέον,

MYC

έκφραση mRNA και πρωτεΐνης ανοσοαντιδραστικότητα, καθώς και αρκετές μοριακών μηχανισμών που σχετίζονται με την προηγουμένως απορρύθμιση της ως μεταβολή αριθμού αντιγράφων (CNV), η μετάλλαξη, και μεθυλίωση του DNA, αναλύθηκαν στο ίδιο σετ του γαστρικού καρκίνου δείγματα.

Υλικά και Μέθοδοι

ηθική Δήλωση

Όλα τα δείγματα που προέρχονται με τη γραπτή συγκατάθεση και έγκριση από το Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο (Belém, Para, Βραζιλία) ηθικά συμβούλια επανεξέταση ( αριθμό πρωτοκόλλου:. 142004)

Κλινικά δείγματα

125 γαστρικό αδενοκαρκίνωμα και 67 αντίστοιχα μη-νεοπλασματικές γαστρικών ιστών (δείγματα ελέγχου) ελήφθησαν χειρουργικά από τους ασθενείς του João de Barros Barreto Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο στην παράγραφο κατάσταση, Βραζιλία. Όλα τα υποκείμενα δεν εκτέθηκαν είτε σε χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν την επέμβαση. Γαστρικό όγκοι ταξινομούνται σύμφωνα με την Lauren [17] και οι όγκοι οργανώθηκαν με τη χρήση τυποποιημένων κριτηρίων από ΤΝΜ σταδιοποίηση [18]. Τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά παρουσιάζονται στον πίνακα 1 και 2.

Η

ανατμηθέντες δειγμάτων όγκου και ελέγχου γρήγορα καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο μέχρι τον καθαρισμό νουκλεϊκών οξέων. Ένα άλλο μέρος των ίδιων ιστών ήταν σταθεροποιημένο με φορμαλίνη και εμβαπτισμένες σε παραφίνη. Για τη φθορίζουσα

in situ

υβριδισμός (FISH) δοκιμασία, το υπόλοιπο δείγμα όγκου αναλύονται όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19].

MYC ανοσολογική

αναλύει Ανοσοϊστοχημική για MYC πρωτεΐνης ήταν πραγματοποιήθηκαν σε 125, τομές όγκων εγκλεισμένους σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη. Η ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με Calcagno

et al.

[10]. τομές ιστών όγκου (3 ή 4 mm σε πάχος) αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν σε διαβαθμισμένη σειρά αιθανόλης. Μετά ανάκτηση επιτόπιου θερμότητα επαγόμενη, οι τομές ιστών επωάστηκαν με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι πρωτογενούς MYC (1:50 αραίωση? Sc-40, Santa Cruz Biotechnology, USA και Zymed®, USA). Μια καθολική κιτ δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση (LSAB System, DakoCytomation, USA) χρησιμοποιήθηκε για το σύστημα ανίχνευσης. Χρησιμοποιήσαμε 3,30-διαμινο-βενζιδίνη /H

2O

2 (DakoCytomation, Δανία) ως χρωμογόνο και αιματοξυλίνη ως επίχρωση. Κάθε πυρηνική χρώση με ή χωρίς κυτταροπλασματική χρώση θεωρήθηκε ότι είναι ένα θετικό αποτέλεσμα, ανεξάρτητα από την ένταση. Μια περίπτωση MYC-θετικά ορίστηκε ως μία που έχει περισσότερα καρκινικά κύτταρα κατά 10% ή θετικό για αυτήν την πρωτεΐνη.

νουκλεϊκών οξέων εκχύλιση

Το γονιδιωματικό DNA (gDNA) εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας το QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Germany) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ολικό RNA εξήχθη με Tri-reagent® (Life Technologies, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. DNA και RNA συγκέντρωση και η ποιότητα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας το NanoDrop φασματοφωτόμετρο (Kisker, Germany). ακεραιότητα του RNA προσδιορίστηκε με ηλεκτροφόρηση πηκτής (πήγματα 1% αγαρόζης). Όλα τα δείγματα φυλάχθηκαν στους -80 ° C μέχρι τη χρήση.

MYC

έκφραση mRNA

Για την ποσοτικοποίηση των επιπέδων mRNA του

MYC

, ολικό RNA απομονώθηκε από 49 ζεύγη φυσιολογικών και καρκινικών ιστών χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ (Life Technologies, USA). Το RNA μεταγράφηκε αντίστροφα με τη χρήση της υψηλής χωρητικότητας κιτ cDNA Archive σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Life Technologies, USA). Συμπληρωματικά DNA στη συνέχεια ενισχύθηκε με PCR πραγματικού χρόνου με τη χρήση των ιχνηλατών TaqMan αγοράζονται ως προσδιορισμοί-on-demand Προϊόντα για γονιδιακή έκφραση (Life Technologies, USA) σε 7500 Fast Real Time PCR (Life Technologies, USA).

GAPDH

γονιδίου επιλέχθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος για την είσοδο του RNA και την αντίστροφη αποτελεσματικότητα μεταγραφής. Όλα αντίστροφης μεταγραφής πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR (RT-qPCR) διεξήχθησαν εις τριπλούν τόσο για γονίδιο στόχος (

MYC

: Hs00153408_m1) και του εσωτερικού ελέγχου (

GAPDH

: NM_002046.3).

Σχετική ποσοτικοποίηση (RQ) της έκφρασης του γονιδίου υπολογίστηκε σύμφωνα με Livak και Schmittgen [20]. Το αντίστοιχο δείγμα ελέγχου ορίστηκε ως βαθμονομητή από κάθε όγκο.

MYC

αντιγράψετε αριθμό

FISH και qPCR χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση

MYC

αριθμού αντιγράφων σε ένα υποσύνολο των 49 όγκων, το ίδιο που χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη της έκφρασης. FISH έγινε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του Pinkel

et al.

[21] με τις τροποποιήσεις που εισήγαγε Calcagno

et al.

[22]. Τα κύτταρα υβριδοποιήθηκαν με

Φάσμα Orange

Probe (LSI Vysis /Abbott, Inc, IL) για το

MYC

γονιδίου περιοχής (8q24.12-q24.13) και οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη αντιξεθωριάσματος. Ο φθορισμός ανιχνεύτηκε χρησιμοποιώντας ένα Olympus BX41 μικροσκόπιο φθορισμού (Olympus, Japan) με φίλτρα διέγερσης για 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (260 nm) και ροδαμίνη (570 εκατ). Για κάθε περίπτωση, 200 μεσόφαση πυρήνες αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ανάλυσης εικόνας ASI (Applied Spectral Imaging, Ισραήλ). σήματα θετικό

MYC

γονίδιο εμφανίστηκε ως κόκκινες κηλίδες σε πυρήνες και βαθμολογήθηκαν με βάση τα κριτήρια της Hopman

et al.

[23]. Για την αποφυγή παρερμηνείας λόγω τεχνικού λάθους, η κανονική πυρήνες λεμφοκυττάρων και φυσιολογικό γαστρικό ιστό χρησιμοποιήθηκαν ως ένας έλεγχος. Τα αποτελέσματα FISH παρουσιάστηκαν ως το ποσοστό των

MYC

ενίσχυση από ένα κύτταρο, στο οποίο υπολογίζεται το ποσοστό των κυττάρων που δείχνουν 3 ή περισσότερα σήματα για το

MYC

ανιχνευτή με κύτταρο.

qPCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας ποσοτικές αναλύσεις TaqMan CNV (Life Technologies, USA) για το

MYC

γονίδιο (Hs01764918_cn) και για τον εσωτερικό έλεγχο

RNase P

(# 4403326). Multiplex αντιδράσεις qPCR διεξήχθησαν εις τετραπλούν με gDNA ανάλογα με τις συνθήκες πρωτόκολλο και το ποδήλατο του κατασκευαστή στο 7500 Fast Real-Time PCR (Life Technologies, USA). Ο σχετικός αριθμός αντιγράφων υπολογίσθηκε για κάθε δείγμα με τη χρήση της αντιγραφής Caller Software V1.0 (Life Technologies, USA). Εμπορική ανθρώπινη gDNAs (G1521 και G1471? Promega, USA) χρησιμοποιήθηκαν για τη βαθμονόμηση

MYC

μεθυλίωση

Το μοτίβο μεθυλίωσης και η συχνότητα του

MYC

υποκινητή αξιολογήθηκαν σε 125 όγκους και 67 αντίστοιχα δείγματα ελέγχου από μεθυλ-ειδική PCR (MSP) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. gDNA (2 μg) από όλα τα δείγματα τροποποιήθηκε με κατεργασία όξινου θειώδους, μετατροπή μη μεθυλιωμένες κυτοσίνες σε ουρακίλες και αφήνοντας μεθυλιωμένα cytosins αμετάβλητη [25]. Ειδικοί εκκινητές για το

MYC

υποστηρικτής ήταν οι εξής: F5′-TAGAATTGGATTGGGGTAAA-3 ‘και R5′-CCAACCAAAAATCAACATGAAT-3 »για τις μη μεθυλιωμένες αντιδράσεις (αναμενόμενο μέγεθος του προϊόντος των 291 bp)? F5’-TAGAATTGGATCGGGGTAAA-3 ‘και R5′-CGACCGAAAATCAACGCGAAT-3’ για τις μεθυλιωμένα αντιδράσεις (αναμενόμενο μέγεθος του προϊόντος 290 bp), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26].

PCR αντιδράσεις διεξήχθησαν με 0,1 μmol /ί dNTPs, 2 μmol /L MgCl

2, 0,5 μmol εκκινητών, 1,25 U Taq DNA πολυμεράσης, και 100 ng διθειώδους-τροποποιημένου DNA. Μετά την αρχική μετουσίωση για 5 λεπτά στους 94 ° C, 40 κύκλους στους 9 4 ° C για 45 s, 52,4 ° C για 45 s, και 72 ° C για 30 s διεξήχθησαν, ακολουθούμενη από μία τελική επέκταση επί 5 λεπτά στους 72 ΝΤΟ. Τα προϊόντα PCR φορτώνονται απευθείας σε πήγματα αγαρόζης 3% και ηλεκτροφορήθηκε. Η γέλη χρωματίστηκε με SYBR® Safe DNA Gel Stain (Life τεχνολογίες της, USA) και έγινε ορατό άμεσα κάτω από φωτισμό UV. Ως ένας θετικός έλεγχος όλων των αντιδράσεων MSP, ένα δείγμα gDNA ήταν εντελώς μεθυλιωμένη χρησιμοποιώντας CpG μεθυλάση (SSSI, New England Biolabs, USA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. . Επιπλέον, οι εκκινητές για άγριου τύπου χρησιμοποιήθηκαν για την παρακολούθηση της πλήρους μετατροπής του DNA που ελήφθη εις την αντίδραση όξινου θειώδους

Τα δείγματα στρωματοποιημένη ως: 1) υπο-μεθυλιωμένα δείγματα όταν το προϊόν θετική ενίσχυση ανιχνεύθηκε μόνο στην PCR με ειδικούς εκκινητές για μη μεθυλιωμένες ακολουθίες? 2) υπερμεθυλίωση δειγμάτων όταν θετική ενίσχυση ανιχνεύθηκε μόνο στην PCR με ειδικούς εκκινητές για μεθυλιωμένο αλληλουχίες? 3) μερική μετουσιωμένο δείγματα όταν θετική ενίσχυση ανιχνεύθηκε στο PCR με τα δύο σύνολα μορίων θεμελίωσης μορίων.

MYC

Γονοτυπικές

Τα τρία εξώνια του

MYC

επιλέχθηκαν γονίδιο για ανάλυση μετάλλαξης σε όλα τα 125 δείγματα γαστρικού καρκίνου. Οι ακόλουθοι εκκινητές σχεδιάστηκαν για την ενίσχυση PCR και αλληλούχιση: εξόνιο 1 F5′-TTTATAATGCGAGGGTCTGGA-3 ‘και R5′-GCATTCGACTCATCTCAGCA-3′ (αναμενόμενο μέγεθος του προϊόντος 654 bp)? εξόνιο 2 F5’-CTGCCTCCCGCTTTGTGT-3 ‘και R5′-TTTGATGAAGGTCTCGTCGT-3′ (αναμενόμενο μέγεθος του προϊόντος των 423 bp), F5’-TGGGAGGAGACATGGTGAA-3 ‘και R5′-TGCCAATGAAAATGGGAAAG-3′ (αναμενόμενο μέγεθος του προϊόντος των 507 bp)? εξόνιο 3 F5’-TGTCCAGAGACCTTTCTAACGTAT-3 ‘και 5′-CCGTAGCTGTTCAAGTTTGTG-3′ (αναμενόμενο μέγεθος του προϊόντος του 663 bp), 5’-TGTCCGTCCAAGCAGAGG-3 ‘και 5′-TGATGAAAACAAACAGGGATG-3’ (αναμενόμενο μέγεθος του προϊόντος του 639 bp).

Οι αντιδράσεις PCR πραγματοποιήθηκαν με 0,1 μmol /L dNTPs, 2 μmol /L MgCl

2, 0,5 μmol /L εκκινητών, 1 U πολυμεράσης Taq και 100 ng του DNA. Οι συνθήκες PCR ήταν 95 ° C για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από 35 κύκλους του 1 λεπτού μετουσιώσεως στους 95 ° C, 1 λεπτό της θερμοκρασίας ανόπτησης (από 59 έως 61 ° C), και 1 λεπτό από επέκταση στους 72 ° C. Τα αμπλικόνια διαχωρίστηκαν σε ένα πήκτωμα αγαρόζης 2% που βάφτηκε με SYBR® Safe DNA Gel Stain (Life τεχνολογίες της, USA) και απευθείας ορατές κάτω από φωτισμό UV.

Αμπλικόνια αλληλουχήθηκαν χρησιμοποιώντας την μέθοδο Sanger [27]. Απευθείας αλληλούχιση διεξήχθη χρησιμοποιώντας το κιτ Cycle Sequencing Big Dye® Terminatorv3.1 (Life Technologies, USA) και αναλύθηκαν σε έναν ΑΒΙ PRISM® 3130 Genetic Analyzer (Life Technologies, USA) χρησιμοποιώντας ποπ 7 πολυμερούς. Η αναζήτηση μετάλλαξη in silico διεξήχθη χρησιμοποιώντας την χρωματισμών Pro 1.5 (Technelysium Pty Ltd, Αυστραλία). Η αλληλουχία αναφοράς ήταν Gene ID: 4609 (NCBI). Παραλλαγές με λιγότερο από 1% συχνότητα έλασσον αλληλόμορφο έχουν αναφερθεί. Παθογένεια της νοηματικές μεταλλάξεις εκτιμήθηκε με in silico ανάλυση χρησιμοποιώντας PolyPhen (https://genetics.bwh.harvard.edu/pph/) και SIFT (https://sift.jcvi.org).

Η στατιστική ανάλυση

MYC

μεθυλίωση, λόγος πιθανοτήτων ανοσολογική μετάλλαξη, ή τα προϊόντα της »(OR) για clinicophatological χαρακτηριστικά εκτιμήθηκε από λογιστικής παλινδρόμησης. Η ηλικία κατά την γαστρική δειγματοληψία ιστού ορίστηκε ως συμμεταβλητή στο μοντέλο παλινδρόμησης.

Η κανονικότητα της κατανομής των ποσοτικών μεταβλητών ελέγχθηκε με τη δοκιμασία του Shapiro-Wilk του. Τα δεδομένα που δεν είχαν κανονική κατανομή μετατράπηκαν (μετασχηματισμός z-score) σε μια κανονική κατανομή για ανάλυση. Ανάλυση του

MYC

έκφρασης του mRNA και τον αριθμό αντιτύπου έγιναν από το Γενικό Γραμμικό Μοντέλο (GLM), με προσαρμογή για την ηλικία, η οποία παρέχει το μέγεθος της επίδρασης και παρατηρούμενη ισχύς (ΕΠ) της κάθε ανάλυσης. Το μέγεθος της επίδρασης για GLM αναλύσεις βασίστηκε σε Eta Squared (η

2), στο οποίο 0.15 και κάτω προσδιορίστηκε ως ένα μικρό μέγεθος του αποτελέσματος, 0,16 – 0,40 ως μεσαίου μεγέθους επίδραση, και πάνω από 0.40 ως ένα μεγάλο μέγεθος της επίδρασης.

Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του mRNA και τον αριθμό αντιγράφων αναλύθηκε με τη δοκιμασία Pearson, κατά την οποία μία τιμή του συντελεστή συσχέτισης της (r) παρακάτω 0,30 προσδιορίστηκε ως ασθενής συσχετισμός, 0,30 – 0,70 ως μέσο συσχέτισης, και πάνω από 0,70 ως ισχυρή συσχέτιση.

σε όλες τις αναλύσεις, το διάστημα εμπιστοσύνης ήταν 95% και

σ

τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

Αποτελέσματα

MYC

ενίσχυση είναι γνωστό ότι σχετίζεται με υψηλή περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη έκφρασης /mRNA σε γαστρικό καρκινογένεση [28], ωστόσο, για το καλύτερο της γνώσης μας, λίγες μελέτες έχουν διεξαχθεί για να περιγράψει το ρόλο της μεθυλίωσης και

MYC

μεταλλάξεις σε αυτή τη διαδικασία. Για την επίτευξη αυτού του στόχου, αναλύσαμε 125 περιπτώσεις κατά τις οποίες το 68% ήταν άνδρες και το 32% ήταν γυναίκες. Η μέση ηλικία του συνόλου του δείγματος μας ήταν 62 έτη (εύρος 26-89 έτη). Μια ελαφρώς υψηλότερη συχνότητα της εντερικής τύπου (56,8%) και μη-Η καρδιακή (58,4%) παρατηρήθηκαν όγκοι (Πίνακας 1 και 2).

πυρηνικής πρωτεΐνης MYC βρέθηκε θετικό σε 76,8% (96/125) των γαστρικών όγκων (Σχήμα 1). έκφραση της πρωτεΐνης MYC παρατηρήθηκε συχνότερα στο εντερικό τύπου από τους όγκους διάχυτη τύπου (

σ

& lt? 0.001, OR = 7.856, 95% CI = 2,803 έως 22,013) (Πίνακας 1). MYC ανοσοχρώση συσχετίστηκε επίσης με όψιμη έναρξη (p = 0.026, OR = 3.276? CI 95% = 1,152 – 9,315), βαθύτερη επέκταση του όγκου (

σ

= 0.045, OR = 2.975, 95% CI = 1.027 -8.623), και η παρουσία απομακρυσμένων μεταστάσεων (

σ

& lt? 0.001, OR = 17.682, 95% CI = 3,914 έως 79,882) (Πίνακας 1). Περαιτέρω, MYC ανοσοαντιδραστικότητα που σχετίζεται με αυξημένη έκφραση του mRNA (

σ

= 0,003, η

2 = 0,178, ΕΠ = 0.870) και

MYC

αριθμό αντιγράφων από FISH (

p

= 0,009, η

2 = 0.139, ΕΠ = 0,759) και με qPCR (

σ

= 0,003, η

2 = 0,177, ΕΠ = 0,869) (Πίνακας 1).

Α) εντερικού τύπου καρκίνο του στομάχου χωρίς MYC ανοσολογική αντίδραση (400 ×)? Β) εντερική τύπου γαστρικό καρκίνο παρουσιάζουν ανοσολογική MYC (400 ×)? Γ) διάχυτου τύπου γαστρικό καρκίνο χωρίς MYC ανοσολογική αντίδραση (400 ×)? Δ) διάχυτου τύπου γαστρικό καρκίνο παρουσιάζουν MYC ανοσολογική αντίδραση (400 ×).

Η

Το επίπεδο έκφρασης του

MYC

mRNA ήταν υψηλότερη σε όλα τα δείγματα όγκων από ζεύγη ελέγχους τους (RQ = 3,39 ± 0,14? εύρος 1,57 – 5,18). Η αυξημένη

MYC

mRNA έκφραση σχετίστηκε με βαθύτερη επέκταση του όγκου (

σ

= 0.006, η

2 = 0.152, ΕΠ = 0,801), την παρουσία της μετάστασης λεμφαδένα (

p = 0,023

, η

2 = 0,107, ΕΠ = 0.632), και μακρινή μετάσταση (

σ

& lt? 0.001, η

2 = 0,788, ΕΠ = 1) (Πίνακας 2 ). Επιπλέον, το επίπεδο του mRNA ήταν άμεσα συσχετισμένη με το

MYC

αριθμό αντιγράφων (

σ

& lt? 0,01? R = 0,716).

Αύξηση του

MYC

αντίτυπα βρέθηκε σε όλα τα γαστρικά δείγματα αδενοκαρκινώματος από δοκιμασίες FISH και qPCR. Από τα ψάρια, το μέσο ποσοστό των κυττάρων που παρουσιάζουν

MYC

ενίσχυση ήταν 72,1% (εύρος από 50 έως 83,5% των κυττάρων με ενίσχυση) (Σχήμα 2 Α και Β). Η μέση τιμή

MYC

αντίγραφα από qPCR ήταν 4,5 (εύρος 3 έως 9 αντίγραφα) (Σχήμα 2 C).

Α) ενδιάμεσης πυρήνες που παρουσιάζουν

MYC

ενίσχυση (κόκκινο) στην εντερική τύπου γαστρικό καρκίνο? Β) μεσόφαση πυρήνες που παρουσιάζουν

MYC

ενίσχυσης (κόκκινο) στην διάχυτου τύπου γαστρικό καρκίνο? Γ)

MYC

αντιγράψετε διανομής αριθμό από qPCR στην εντερική τύπου και διάχυτη τύπου όγκων.

Η

FISH και αναλύσεις qPCR έδειξαν ότι η αυξημένη

MYC

αντιγράψετε αριθμός ήταν που συνδέονται με όψιμης έναρξης (

σ

& lt? 0.001? η

2 = 0,257, ΕΠ = 0,976?

σ

= 0,025? η

2 = 0,103, OP = 0,662 , αντίστοιχα), ο καρκίνος του εντέρου τύπου (

σ

= 0.037? η

2 = 0.091, ΕΠ = 0,557?

σ

= 0,009? η

2 = 0.139, Ε.Π. = 0,762, αντίστοιχα), και η παρουσία απομακρυσμένων μεταστάσεων (

σ

= 0.001? η

2 = 0.221, ΕΠ = 0.942?

σ

& lt? 0.001? η

2 = 0.356, OP = 0,999, αντίστοιχα). Επιπλέον,

MYC

ενίσχυση από FISH συσχετίστηκε με προχωρημένα στάδια όγκου (

σ

= 0.037? Η

2 = 0.091, ΕΠ = 0,558), όμως, μόνο δύο από νωρίς όγκοι ήταν αναλύονται σε αυτό το υποσύνολο των δειγμάτων (Πίνακας 2).

Όλα γαστρικό καρκίνο δείγματα παρουσιάζονται θετική ενίσχυση με ένα μη μεθυλιωμένο σετ εκκινητή. Είναι ενδιαφέρον ότι, το 86,4% των δειγμάτων καρκίνου του ήσαν υπο-μεθυλιωμένα. Από την άλλη πλευρά, η παρουσία μη-μεθυλιωμένων αλληλουχιών στο

MYC

υποκινητή παρατηρήθηκε στο 28,4% των δειγμάτων ελέγχου (μερική μεθυλιωμένη δείγματα), γεγονός που υποδηλώνει την απώλεια της μεθυλίωσης σε αυτά τα δείγματα (Σχήμα 3). ειδικότητα και MSP αποτελέσματα των εκκινητών επιβεβαιώθηκαν χρησιμοποιώντας την προσέγγιση θειώδους αλληλουχίας PCR (BSP) [29] με τον οποίο επιλέγονται τυχαία πέντε μεθυλιωμένος δείγματα? πέντε υπερμεθυλιωμένων δειγμάτων και πέντε μερική μεθυλιωμένα δείγματα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

MYC

υπομεθυλίωση παρατηρήθηκε συχνότερα στη διάχυτη τύπου σε σύγκριση με την εντερική τύπου γαστρικό καρκίνο (

σ

= 0,007? OR = 8.554? 95% CI = 01,798 με 40,695, χρησιμοποιώντας διάχυτη τύπου ως ομάδα αναφοράς). Επιπλέον,

MYC

υπομεθυλίωση συνδέθηκε με προχωρημένα στάδια όγκου (

σ

= 0.033? OR = 6.602? 95% CI = 1,162 – 37,501), βαθύτερη επέκταση του όγκου (

p

= 0.022? OR = 4.752? 95% CI = 1,257 – 17,965), και η παρουσία της μετάστασης λεμφαδένα (

σ

= 0,032? OR = 5,12? 95% CI = 1,149 έως 22,814) (Πίνακας 1).

Δείγμα 1 παρουσιάζονται μερική μεθυλίωση. Δείγματα 2, 3 και 4 παρουσίασε μια υπο-μεθυλιωμένα υποκινητή. Γ-: κενό? C +: θετικός μάρτυρας, gDNA δείγμα πλήρως μετουσιωμένο? U: μη μεθυλιωμένη? M: μεθυλιωμένο: ΜΒ: δείκτης μοριακού βάρους? bp:. ζεύγη βάσης

Η

Όσον αφορά την αλληλούχιση του γονιδίου, δεν νέα μετάλλαξη ανιχνεύθηκε στο γαστρικών όγκων. Δείγματα Δεκατρείς (10,4%) του όγκου παρουσιάστηκε τουλάχιστον μία γνωστή μετάλλαξη, με παραλλαγές με λιγότερο από 1% ελάσσονα συχνότητα αλληλίου. Συνολικά, 18 μεταλλάξεις ταυτοποιήθηκαν, με 4 δείγματα εμφανίζουν συνυπάρχουσες μεταλλάξεις. Στο εξόνιο 1, πέντε με GG και τέσσερα με CG σε rs117856857? ένα με GG στο rs73707292? και τέσσερις με CT σε rs4645949. Στο εξόνιο 2, σχετικά με νοηματικές μεταλλάξεις, δύο όγκων έτρεφε μια μετάλλαξη στο κωδικόνιο 47 ως αποτέλεσμα τη μεταβολή από τυροσίνη σε ιστιδίνη (rs114570780? SIFT πρόβλεψη = επιβλαβή? Πρόβλεψη PolyPhen = πιθανώς επιζήμια), και δύο στο κωδικόνιο 72 αποτέλεσμα μια αλλαγή από προλίνη σε σερίνη (rs28933407? SIFT πρόβλεψη = ανεκτή? πρόβλεψη PolyPhen = πιθανώς να καταστραφεί). Όλα όγκου με μια μετάλλαξη στο εξόνιο 2 παρουσιάζεται μία ή δύο γνωστή μετάλλαξη στο εξόνιο 1. Το εξόνιο 2 μεταλλάξεις ανιχνεύθηκαν μόνο σε όγκους διάχυτου τύπου σε προχωρημένο στάδιο. Δεν μετάλλαξη εντοπίστηκε στο εξόνιο 3. Η παρουσία των γνωστών

MYC

μεταλλάξεων που σχετίζονται με όγκους διάχυτη τύπου (

σ

= 0.004, OR = 21.717, 95% CI = 2,678 έως 176,111? χρησιμοποιώντας διάχυτη τύπου ως ομάδα αναφοράς) και την παρουσία των μακρινών μεταστάσεων (

σ

= 0.032, OR = 4.492, 95% CI = 1,141 – 17,679).

Συζήτηση

Η πρωτεΐνη MYC έχει επίδραση επί περίπου 15% των γονιδίων στο ανθρώπινο γονιδίωμα [30]. Έτσι, MYC απορρύθμιση μπορεί να οδηγήσει σε μεταβολές σε διάφορες βιολογικές οδούς που εμπλέκονται στην έναρξη και την εξέλιξη του καρκίνου του [5]. Ωστόσο, μέχρι σήμερα, η σχέση μεταξύ του

MYC

αλλαγές και κλινικοπαθολογικών παραμέτρων δεν έχει πλήρως κατανοητή. δείγματα μας παρουσίασε μια αναλογία αρσενικών-θηλυκών των 2:01 και η πλειοψηφία των ασθενών ήταν ηλικίας άνω των πενήντα πέντε. Επιπλέον, η εντερική τύπου καρκίνο του στομάχου ήταν πιο συχνή από ό, τι η διάχυτη τύπου και όγκοι ήταν πιο συχνές σε μη καρδιακή. Αυτά τα επιδημιολογικά δεδομένα είναι σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες [28], [31] – [33].

χρωμοσωμικές μετατοπίσεις στο

MYC

τόπο είναι πολύ επικο σε αιμοποιητικά καρκίνους. Ωστόσο, σε στερεά ανθρώπινους όγκους όπως ο καρκίνος του στομάχου, του

MYC

μεταβολές οφείλονται συνήθως σε γονιδιακή ενίσχυση [34]. Επιπλέον,

MYC

αναγνωρίζεται να είναι η πιο συχνά ενισχυμένο γονίδιο που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη σε όλους τους τύπους καρκίνου [35]. Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε τρία ή περισσότερα

MYC

αντίγραφα του γονιδίου σε όλους τους γαστρικών όγκων που μελετήθηκαν, επιβεβαιώνοντας με προηγούμενες μελέτες στην πρωτοβάθμια γαστρικών όγκων των ατόμων από τον πληθυσμό μας [10], [28], [36] – [39], καθώς και από την Ανατολική Ασία και την Ευρώπη [40] – [42]. Επίσης,

MYC

ενίσχυση παρατηρήθηκε στο πλάσμα [43] και σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου εγκατεστημένος στην ομάδα μας [44] – [47]. Επιπλέον, η ομάδα μας είχε παρατηρήσει ότι κλωνική υψηλή ενίσχυση του

MYC

είναι λιγότερο συχνή σε διάχυτη τύπου από ό, τι στο εντερικό τύπο πρωτογενούς καρκίνο του στομάχου [10], [22], [28], και αυτό ενισχύεται από αυτή η μελέτη.

MYC υπερέκφραση περιγράφεται ως κυμαίνεται από 15,6% έως 100% σε πρωτογενείς γαστρικών καρκίνων [9].

In vitro

μελέτες με νοκ-κάτω την έκφραση MYC σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου κατέδειξε τον κρίσιμο ρόλο της έκφρασης MYC στο γαστρικό ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων, την επιβίωση και τη διατήρηση των παραμέτρων των κυττάρων του όγκου που μπορεί να συμβάλει στην κακοήθους δυναμικού [48 ]. Επιπλέον, Mehndiratta

et al.

, [49] παρουσίασαν σημαντική μείωση (40%) σε MYC έκφραση τόσο του mRNA και της πρωτεΐνης και κατάντη στόχους του με τη χρήση siRNA.

Στην παρούσα μελέτη, 76,8% των γαστρικών όγκων έδειξε MYC ανοσολογική αντίδραση και όλους τους όγκους, εντερική και διάχυτη τύπου, παρουσιάζεται αυξημένη έκφραση του mRNA σε σύγκριση με αντιστοιχισμένο τους ελέγχους τους. Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι MYC ανοσοαντιδραστικότητα και η αυξημένη έκφραση του mRNA συνδέθηκαν με βαθύτερη επέκταση του όγκου και η παρουσία της μετάστασης. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι MYC έχει ένα ρόλο στην εισβολή όγκου, μετάσταση, και ως εκ τούτου επιθετικότητα, που πιστοποιεί μια προηγούμενη μελέτη [37]. Αν και μερικές αναλύσεις που παρουσιάζονται ένα μικρό μέγεθος του αποτελέσματος, τα ευρήματα αυτά είναι επίσης σε συμφωνία με μια προηγούμενη μελέτη της ομάδας μας σε μη ανθρώπινα πρωτεύοντα, στην οποία κατέδειξε μια συνεχή αύξηση του

MYC

έκφρασης του mRNA και αντιγράψτε τον αριθμό κατά τη διάρκεια της διαδοχικά στάδια των εντερικών τύπου γαστρική καρκινογένεση σε Ν-μεθυλ-νιτροζουρία (MNU) κατεργασμένους μη ανθρώπινα πρωτεύοντα [16]. Από την άλλη πλευρά, οποιαδήποτε σύνδεση μεταξύ MYC και ιστολογική βαθμό, τη θέση του όγκου, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες, ή παθολογική στάδιο εντοπίστηκε σε γαστρικό μελέτη του καρκίνου αναπτυχθεί σε ένα κινεζικό πληθυσμό [50], ενισχύοντας ότι η εθνικότητα του προσβεβλημένου πληθυσμού μπορεί να οδηγήσει σε βιολογικά και κλινικά γαστρικό υποσύνολα του καρκίνου [51].

Παρά το γεγονός ότι, η γονιδιακή ενίσχυση δεν συνδέεται απαραίτητα ή απαιτούνται για την υπερέκφραση της, η μελέτη μας δείχνει ότι MYC ανοσολογική αντίδραση,

MYC

επίπεδα mRNA, και τον αριθμό αντιτύπου είχαν άμεση συσχέτιση.

η μεθυλίωση του DNA είναι ένας ισχυρός μηχανισμός της μεταγραφικής καταστολής. Η σωστή γονιδιωματική μεθυλίωση-μοτίβα γίνονται μεταβάλει ριζικά στα καρκινικά κύτταρα: και τα δύο κέρδη (υπερμεθυλίωσης) και ζημίες (υπομεθυλίωση) μεθυλιωμένου sites έχουν παρατηρηθεί [52], [53]. Υπομεθυλίωση σε ειδικούς προαγωγούς μπορεί να ενεργοποιήσει την ανώμαλη έκφραση των ογκογονιδίων και απώλεια αποτύπωσης σε ορισμένα τόπους [44]. Μέχρι στιγμής, λίγες μελέτες συζήτησαν τη σχέση μεταξύ του προτύπου μεθυλίωσης του

MYC

και την επίδρασή της στην έκφραση των γονιδίων και για την καρκινογόνο διαδικασίες.

MYC

υπομεθυλίωση είχε προηγουμένως που συνδέονται με την ογκογόνο εξέλιξη και επαγωγή μετάσταση σε ένα μοντέλο αρουραίου του καρκίνου του ήπατος [54] και σε ανθρώπινα δείγματα ορθοκολικού καρκίνου [55]. Επιπλέον,

MYC

υπομεθυλίωση συσχετίστηκε επίσης με

MYC

έκφρασης σε γαστρικών όγκων [26], [56] – [58] και κυτταρικές σειρές [48]. Ωστόσο, ήμασταν σε θέση να τηρήσει μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ

MYC

υπομεθυλίωσης και η έκφρασή της σε δείγματα μας. Μεταξύ άλλων παραγόντων, αυτή η έλλειψη του συνεταιρίζεσθαι μπορεί να οφείλεται στην παρουσία του

MYC

ενίσχυση σε όλους τους όγκους με μεθυλιωμένος υποκινητές (86,4% των δειγμάτων) και ως εκ τούτου, συγκαλύπτοντας την πιθανή επίδραση αυτής της επιγενετικής τροποποίησης στο

MYC

μεταγραφική ρύθμιση.

Suzuki

et al.

[59] στο παρελθόν έδειξαν ότι ένα υψηλό επίπεδο της υπομεθυλίωσης ήταν ένας δείκτης της κακής πρόγνωσης τόσο του στομάχου και του παχέος εντέρου, και επιγενετικές αλλοιώσεις ήταν ηλικίας εξαρτώνται, που συνέβησαν πριν από γενετικές αλλοιώσεις. Στην παρούσα μελέτη, ορισμένα στοιχεία ελέγχου που παρουσιάζονται ήδη μη μεθυλιωμένες ακολουθίες στο

MYC

υποκινητή. Επιπλέον, αποδείξαμε ότι

MYC

υπομεθυλίωση συσχετίστηκε με μια πιο επιθετική φαινότυπο (επιθετικότητα του όγκου, παρουσία μετάστασης λεμφαδένων, και ιστολογικών τύπων καρκίνου). Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι

MYC

απομεθυλίωση μπορεί να συσσωρεύονται κατά τη διάρκεια της προόδου του όγκου και αυτό θα μπορούσε να είναι ένα κοινό συμβάν στο γαστρικό carinogenesis [60], [61], δεδομένου ότι αυτός ο μηχανισμός έχει παρατηρηθεί για άλλα γονίδια σε αρκετούς τύπους όγκων [ ,,,0],62], [63]. Όπως έχει ήδη προταθεί για το DNA υπερμεθυλίωση [64], η υπομεθυλίωση προαγωγός μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μια νέα γενιά των βιοδεικτών και κατέχει διαγνωστικές και προγνωστικές υπόσχεση για τους κλινικούς γιατρούς.

Για το καλύτερο της γνώσης μας,

MYC

εξώνια του γονιδίου δεν έχουν ποτέ εντελώς αλληλουχία σε ανθρώπινη γαστρικών όγκων. Εδώ, η αλληλουχία των τριών εξώνια του

MYC

: εξόνιο 1 είναι ένα μη-κωδικοποίησης πρωτεΐνης, τα εξώνια 2 και 3 είναι που κωδικοποιεί την πρωτεΐνη [για επισκόπηση βλέπε (Pelengaris & amp? Khan, 2003)]. Δεν βρήκαμε καμία νέα μετάλλαξη, όμως, παρατηρήσαμε ότι το 4 όγκους παρουσιάζονται εσφαλμένου νοήματος μεταλλάξεις (rs114570780 και rs28933407) στο εξώνιο 2. Αυτές οι μεταλλάξεις ήταν σε μια εξελικτική διατηρημένη αλληλουχία του

MYC

: τον τομέα διενεργοποίησης [4] , [65]. Επιπλέον, και οι δύο προσδιορίζονται μεταλλάξεις θεωρήθηκαν ως πιθανώς επιζήμια σύμφωνα με το λογισμικό PolyPhen. Η αλλαγή της προλίνης σε σερίνη στο κωδικόνιο 72 ήταν επίσης προηγουμένως αναφερθεί ως παθογόνο παραλλαγή στη βάση δεδομένων NCBI dbSNP (https://omim.org/). Έτσι, και οι δύο μεταλλάξεις στο εξόνιο 2 μπορούν να επηρεάσουν MYC δραστηριότητα σε γαστρικών όγκων. Επιπλέον, η παρουσία του

MYC

μεταλλάξεων που συνδέονται με μακρινή μετάσταση. Ωστόσο, απαιτούνται περαιτέρω έρευνες για να αποσαφηνιστεί εάν

MYC

μεταλλάξεις έχουν ένα ρόλο στη μεταστατική διαδικασία.

Σύμφωνα με την ταξινόμηση Lauren, αδενοκαρκίνωμα στομάχου ταξινομείται κυρίως σε εντερικά και διάχυτη τύπων [17]. Εντερική τύπου γαστρικό καρκίνο εξελίσσεται μέσω ενός αριθμού διαδοχικών σταδίων, αρχίζοντας με ατροφική γαστρίτιδα ακολουθούμενη από εντερική μετάπλαση, intraepitelial νεοπλασία, και καρκίνωμα [66]. Από την άλλη πλευρά, η διάχυτη τύπου γενικά δεν εξελίσσονται από προκαρκινικές αλλοιώσεις [67], [68]. Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε ότι η εντερική τύπου παρουσιάζονται συχνότερα ανοσολογική MYC, καθώς και ένα μεγαλύτερο αριθμό

MYC

αντίγραφα από τους όγκους διάχυτη τύπου, το οποίο επιβεβαιώνει με προηγούμενες μελέτες της ομάδας μας [10] , [22], [28], [38]. Επιπλέον,

MYC

υπομεθυλίωσης και σημειακές μεταλλάξεις παρατηρήθηκαν πιο συχνά σε διάχυτη τύπου σε σύγκριση με τους όγκους του εντέρου τύπου.