Αφηρημένο

μεταβολισμό των καρκινικών κυττάρων να ανταποκρίνονται στις θεραπεία στέρησης ανδρογόνων (ADT) μπορεί να εμπλέκονται στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του προστάτη καρκίνος και η τελική αποτυχία της θεραπείας με τη στέρηση ανδρογόνου. Για τη διερεύνηση των επιδράσεων ρύθμιση των μεταβολικών διεργασιών σε ανδρογόνα ανεξάρτητη ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη, ένα καθιερωμένο μοντέλο κύτταρο LNCaP-s που μοιάζει με το κλινικό σενάριο του ευνουχισμού ανθεκτικών καρκίνου του προστάτη (CRPC), χρησιμοποιήθηκε σε αυτήν την τρέχουσα μελέτη. Αυτή η κυτταρική γραμμή καλλιεργήθηκε από LNCaP γονικά κύτταρα ανδρογόνο ευαίσθητα, σε μια κατάσταση ανδρογόνου μειωμένη, που μοιάζει με την κλινική θεραπεία στέρησης ανδρογόνων. Για να αξιολογηθούν οι επιπτώσεις της smsDX στην εισβολής των καρκινικών κυττάρων του προστάτη που χρησιμοποιείται επούλωση των πληγών δοκιμασία και δοκιμασία εισβολής Matrigel ™. Αξιολογήσαμε διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών του γονικών κυττάρων LNCaP και LNCaP-s κύτταρα μετά από ADT μέσω δύο διαστάσεων ηλεκτροφόρηση πηκτής (2-DE), ακολουθούμενη από MALDI-TOF φασματομετρικής ανάλυσης μάζας. Η σκεπαστή περιοχή στην πληγή και ο αριθμός των κυττάρων που εισβάλλουν μέσω ενός θαλάμου Matrigel ήταν σημαντικά μικρότερος για τα κύτταρα που κατεργάζονται με smsDX ό, τι ήταν για τα κύτταρα ελέγχου σε αγωγή με φορέα. 56 πρωτεΐνες βρέθηκαν εκφράζονται διαφορικά στα κύτταρα LNCaP-s σε σύγκριση με κύτταρα LNCaP, πλειοψηφία τους ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω μετά την επεξεργασία ADT. 104 πρωτεΐνες των κυττάρων LNCaP και 86 σε LNCaP-s κύτταρα, χωριστά, βρέθηκαν εκφράζονται διαφορικά μετά από θεραπεία με smsDX, Όταν ερευνήσαμε αυτές τις λειτουργίες πρωτεΐνης μέσα στην ιστοσελίδα UniProtKB /Swiss-Prot, με έκπληξη, οι περισσότερες από τις πρωτεΐνες βρέθηκαν να εμπλέκονται στον κυτταρικό μεταβολισμό και μιτοχονδριακή ρύθμιση λειτουργίας. ως πιθανές μεταστατικό LNCaP-s ανεξάρτητος από ανδρογόνο καρκινικών κυττάρων, τον μεταβολισμό και μιτοχονδριακή λειτουργίες της θα μπορούσε να τροποποιηθεί με ένα νέο παράγωγο σωματοστατίνης smsDX, τα ρυθμιστικά αποτελέσματα επί του μεταβολισμού smsDX σε LNCaP-s παρέχουν περισσότερες θεραπευτικές πληροφορίες με τη θεραπεία των CRPC.

Παράθεση: Yan L, Xing Z, Guo Z, Fang Z, Jiao W, Guo Χ, et al. (2013) Η σωματοστατίνη Παράγωγα (smsDX) Στόχοι του κυτταρικού μεταβολισμού σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη μετά από στέρησης ανδρογόνων Therapy. PLoS ONE 8 (2): e55790. doi: 10.1371 /journal.pone.0055790

Συντάκτης: Μινγκ Tat Λινγκ, Queensland University of Technology, Αυστραλία

Ελήφθη: 12, Σεπτέμβρη, 2012? Αποδεκτές: 31 Δεκέμβρη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 7η Φεβρουαρίου, 2013

Copyright: © 2013 Yan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Χορηγός Grant : Το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81172435) και του Ιδρύματος Επιστήμης Φυσικής Shandong (Νο ZR2010HM026). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο συχνή κακοήθεια στους άνδρες, και η κύρια αιτία θνησιμότητας από καρκίνο σχετίζονται στις ΗΠΑ και την Ευρώπη άνδρες [1]. Η εξέλιξη του όγκου στο στάδιο CRPC είναι μια σύνθετη διαδικασία που μπορεί να αφορούν τόσο την επιλογή των κλώνων και προσαρμοστικοί μηχανισμοί σε ετερογενείς όγκοι αποτελούνται από κύτταρα που αντιδρούν διαφορετικά σε θεραπεία αποστέρησης ανδρογόνων (ADT). Πάντως, οι μηχανισμοί με τους οποίους οι όγκοι αποκτούν ανδρογόνο ανεξαρτησία παραμένουν ασαφείς και πρέπει να επιλυθούν πριν μπορέσει να αναπτυχθεί αποτελεσματικές στρατηγικές θεραπείας.

ADT χρησιμοποιείται συνήθως στη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου του προστάτη. Αλλά η θεραπεία στέρησης ανδρογόνων δεν είναι θεραπευτική [2], έτσι ώστε η θανατηφόρος CRPC είναι αναπόφευκτη. Τα σημάδια του αγγειακού εκφυλισμού, υποξία, μεταβολικό στρες και στον ιστό του όγκου του προστάτη επιδεινώνεται μετά από χειρουργική ή ιατρικό ευνουχισμό [3]. Μετά από ένα σύντομο χρονικό διάστημα διαγραφής, η πλειοψηφία του καρκίνου του προστάτη γίνεται ανεξάρτητος από ανδρογόνο. CRPC κύτταρα μετά από ADT είναι σε θέση να επιβιώσει το χαμηλό οξυγόνο και θρεπτικά συστατικά περιβάλλον και να αναδυθεί με ένα διαφορετικό φαινότυπο. Στέρηση ανδρογόνου είναι γνωστό ότι προκαλεί νευροενδοκρινικών (ΝΕ) διαφοροποίηση σε κύτταρα LNCaP, και περιλαμβάνει κατά τη μετάβαση προς ανεξαρτησία από ανδρογόνα [4], [5]. Οι ΝΕ όγκοι έχουν αποδειχθεί για να υπερεκφράζουν υποδοχείς σωματοστατίνης (SSTRs) [6]. Η έκφραση SSTR1-5 θα μπορούσε να ρυθμιστεί με τη σωματοστατίνη και πιθανή παράγωγο smsDX της μέσω της ρύθμισης των μιτοχονδρίων των LNCaP που τελικά θα μπορούσε να προκαλέσει μιτοχονδριακής απόπτωση που διαμεσολαβείται [7]. ανάλογα σωματοστατίνης δεσμεύονται σε SSTRs και πιστεύεται ότι έχουν διπλή αντικαρκινική δράση, τόσο άμεσα (αντι-πολλαπλασιαστική) και έμμεσα (αναστολή διαφόρων πεπτιδικών ορμονών που εκκρίνονται από τα κύτταρα του όγκου) [8], [9]. ανάλογο σωματοστατίνης, λανρεοτίδη έχει αποδειχθεί να έχει σημαντική αντινεοπλασματική δράση σε διάφορους όγκους, συμπεριλαμβανομένων των CRPC [10]. Όμως, η ρύθμιση των αναλογικών σωματοστατίνης για τον καρκίνο του προστάτη κυτταρικό μεταβολισμό, δεν έχει σαφώς απευθύνεται.

Εμείς υποστηρίζουν ότι η αναστολή του υποδοχέα ανδρογόνων (AR), η έκφραση είναι από μόνη της αρκετή για να προκαλέσει κυτταρικό θάνατο στο AR-θετικά κύτταρα. Αλλά όταν αυτά τα AR-θετικά κύτταρα σταδιακά έχασε την έκφραση AR ή σε χαμηλότερη έκφραση AR σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη, αυτές οι CRPC κύτταρα θα μπορούσε να πάρει τον ενεργειακό εφοδιασμό μέσω της μιτοχονδριακής δραστηριότητες. Σύμφωνα με τα ευρήματα της ομάδας Sotgia F [11], τα επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα θα μπορούσε να διαρκέσει έως πλούσια σε ενέργεια μεταβολιτών από γειτονικές ινοβλάστες στρωματικά τα οποία παρέχουν την απαραίτητη ενέργεια πλούσια σε μικροπεριβάλλον για τη διευκόλυνση της ανάπτυξης των όγκων και την αγγειογένεση. Αυτά τα κύτταρα στερούνται απογυμνώνεται από ανδρογόνο μπορούσε να χρησιμοποιήσει αυτούς τους μεταβολίτες στο μιτοχονδριακό κύκλο τρικαρβοξυλικού οξέος (TCA), με αποτέλεσμα ένα υψηλότερο πολλαπλασιαστική ικανότητα. Για CRPC κύτταρα αναδυόμενες μετά ADT, up-ρυθμίζουν τα ένζυμα που μετατρέπουν επινεφριδίων ανδρογόνων σε τεστοστερόνη και DHT (ιδίως AKR1C3) περαιτέρω ενίσχυση εντός του όγκου της σύνθεσης των ανδρογόνων και επανενεργοποίηση AR μεταγραφική δραστηριότητα [12], AR επανενεργοποίηση αυξάνεται εντός του όγκου της σύνθεσης της τεστοστερόνης και DHT από ασθενών ανδρογόνων που παράγονται από το ενδεχομένως

de novo

από χοληστερόλη στο στρώμα υποδοχής και εξωκυττάριο μεταβολίτες.

το κύριο πρόβλημα που προκύπτει από καρκίνο του προστάτη είναι η τάση του να κάνουν μετάσταση. Τοπική εισβολή είναι μία από τις θεμελιώδεις αρχές του βήματα στη μετάσταση, καθώς χωρίς αυτό δεν μπορεί να συμβεί εξάπλωση του όγκου. Η πολλών σταδίων διαδικασία της εισβολής και της μετάστασης έχει σχηματοποιηθεί ως μια ακολουθία διακριτών σταδίων, συχνά αποκαλείται καταρράκτη εισβολή-μετάσταση [13], [14]. Κατά τη διάρκεια αυτής καταρράκτη η μεταβολική επαναπρογραμματισμό να υποστηρίξει τη σύνθεση των νέων πρωτεϊνών, λιπιδίων και νουκλεϊκών οξέων είναι κρίσιμη για την κυτταρική ανάπτυξη και διαίρεση [15]. Θεωρούμε ότι οι κυτταρικές μεταβολικές αλλαγές θα συνοδεύσει την πρόοδο του καρκίνου του προστάτη σε θανατηφόρο CRPC κατάσταση. Η μελέτη μας θα επικεντρωθεί στις ανασταλτικές επιδράσεις smsDX στην εισβολής του καρκίνου του προστάτη και τη ρύθμιση των σχετικών κυτταρικού μεταβολισμού μετά την αναστολή της δράσης της AR, που προκαλείται από ανδρογόνων εξάντληση. Χρησιμοποιώντας κύτταρα LNCaP και LNCaP-s για να εξετάσει τις πρωτεΐνες που περιλαμβάνουν στις λειτουργίες μεταβολισμό των κυττάρων και την ενέργεια στον καρκίνο του προστάτη και για τον προσδιορισμό των ρυθμιστικών επιδράσεων που προκαλούνται από παράγωγο σωματοστατίνης smsDX, δείξαμε ADT ρυθμίζει προς τα κάτω τις περισσότερες των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών, πιθανώς ως αποτέλεσμα την ενεργοποίηση μιτοχονδριακών μεσολάβηση αποπτωτική παθολογική οδό. Τα αποτελέσματα smsDX στο ER οδηγεί σε υπερέκφραση του GRP78, μαζί με άλλες δύο πρωτεΐνες ER PDIA1 και PDIA3. smsDX ασκεί τις δράσεις της μέσω dysregulating των μεταβολικών ενζύμων σε πολλαπλά επίπεδα, η οποία περιλαμβάνει στη διαδικασία της κυτταρικής CRPC διεισδυτικότητα και την επιβίωση. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα αυτά υποδηλώνουν ότι η ADT ρυθμίζει μιτοχονδριακή μεσολάβηση και ER στρες σηματοδότηση σε κύτταρα LNCaP και οδηγεί σε επαναπρογραμματισμό μεταβολισμού σε CRPC κύτταρα, smsDX ρυθμιστικά αποτελέσματα επί των CRPC κύτταρα παρέχει χρήσιμες πληροφορίες για την θεραπεία των CRPC.

Υλικά και Μέθοδοι

κυτταρική καλλιέργεια και Αντιδραστήρια

LNCaP ανθρώπινου προστάτη καρκινική κυτταρική γραμμή (American Type Culture Collection, Rockville, MD, USA) σαν ρουτίνα διατηρήθηκαν στο κανονικό μέσο (ερυθρό της φαινόλης-θετικά RPMI 1640 συμπληρωμένο με 5% FBS, 1% γλουταμίνη, και 0,5% γενταμυκίνη) όπως περιγράφηκε προηγουμένως στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2. Το μέσο αλλάχθηκε δύο φορές την εβδομάδα και τα κύτταρα τρυψινοποιήθηκαν και υποκαλλιεργείται μία φορά την εβδομάδα. Για τα πειράματα, χρησιμοποιήθηκαν ανδρογόνων ευαίσθητα κύτταρα LNCaP με αριθμούς πέρασμα 28-33. Για τη δημιουργία ενός ανεξάρτητου από ανδρογόνο καρκίνου του προστάτη κυτταρική γραμμή, καλλιεργήσαμε μια κυτταρική γραμμή LNCaP-s από μια γονική κυτταρική γραμμή καρκίνου του προστάτη LNCaP σε κατάσταση στέρηση ανδρογόνου. Μετά 8-12 περάσματα, τα κύτταρα LNCaP-s υποβλήθηκαν σε θεραπεία με smsDX. Η σωματοστατίνη ήταν από Ferring, Κίελο, Γερμανία. Η κυτταρική καλλιέργεια υπέστη κατεργασία με smsDX (από τον καθηγητή Sten Nilsson Lab) ή με σωματοστατίνη για τρεις ημέρες, 1 ηΜ ανά ημέρα, όπως περιγράφεται από τους Liu Ζ [7]. Αντι-ανθρώπινο AR, CgA και NSE, αντι-TOM40 αντίσωμα (sc11414), β-ακτίνη (κουνελιού αντι-ακτίνης αντίσωμα R-22) αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotecnology. ΤΟΤΡ (# 5128), STMN1 (# 3352) και VDAC2 (# 9412) αντισώματα αγοράστηκαν από Cell Signaling εμπορικά. CBX3 (HPA004902) και GRP78 (G9043) αντισώματα αγοράστηκαν από την Sigma εμπορικώς.

επούλωσης τραυμάτων

δοκιμασία

Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν μέχρι συρροής σε πλάκες ιστοκαλλιέργειας 6-φρεατίων και μια πληγή έγινε με απόξεση στη μέση της κυτταρικής μονοστιβάδας με ένα ρύγχος πιπέτας Ρ200. Μετά επιπλέοντα κύτταρα απομακρύνθηκαν με εκτεταμένη πλύση με παγωμένο αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό φρέσκο ​​πλήρες μέσο που περιέχει 10 ηΜ smsDX ή της αντίστοιχης ποσότητας PBS προστέθηκε. Μετανάστευση και την κίνηση των κυττάρων σε όλη την περιοχή του τραύματος εξετάστηκαν μετά από 24 ώρες.

Matrigel Δοκιμασία Invasion

δοκιμασία εισβολή πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Matrigel επικαλυμμένα Transwell ενθέτων (BD ™) με 8 μm πόρους σε 24 φρεατίων πλάκες, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, ένα εναιώρημα από 1 × 10

6 κύτταρα σε 100 μΐ μέσου άνευ ορού προστέθηκε στο ένθετο και 500 μΐ RPMI 1640 που περιέχει 20% FBS συμπληρωμένο με 1-10 ηΜ smsDX ή της αντίστοιχης ποσότητας φυσιολογικού ορού ήταν προστίθενται στο κάτω μέρος του φρεατίου. Μετά οι πλάκες επωάστηκαν για 48 ώρες στους 37 ° C τα ένθετα μονιμοποιήθηκαν σε μεθανόλη, τα φίλτρα χρωματίστηκαν με 0.1% κρυσταλλικό ιώδες και ο αριθμός των κυττάρων που εισέβαλαν μέσω επιστρωμένο με Matrigel ένθετα Transwell μετρήθηκαν σε μεγέθυνση 40 φορές. Ο αριθμός των κυττάρων μετρήθηκε σε ανεξάρτητα πειράματα εις τριπλούν σε τουλάχιστον 10 πεδία ανά φρεάτιο. Οι δοκιμασίες επαναλήφθηκαν 3 φορές.

Western ανάλυση κηλίδος

Σε κύτταρα LNCaP εξαρτώμενων από ανδρογόνα μετά τη θεραπεία ADT, καλλιεργήσαμε μια σταθερή LNCaP-s κυτταρική γραμμή. Τα ανδρογόνα ανεξάρτητο βιοδείκτες καρκίνου του προστάτη κυττάρων και πρωτεϊνών που επηρεάζονται από smsDX ελέγχθηκαν. Κηλίδωση Western Διεξήχθη να επικυρώσει αρκετές επιλεγμένες διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών προσδιορίζονται από 2-DE MS βάση. Πρωτογενή αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν στις ακόλουθες αραιώσεις: κατσίκα αντι-ανθρώπινο AR, CgA και NSE, 1:1000? β-ακτίνη, 1:1500? αντι-TOM40 αντισώματος, 1:800. ΤΟΤΡ, 1:1000? STMN1, 1:1000? VDAC2, 1:1000? CBX3, 1:1000? GRP78, 1:1000. Στυπώματα Western διεξήχθησαν όπως περιγράφεται [16]. Εν συντομία, τα κύτταρα λύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα που περιείχε 50 mM Tris-HCl (ρΗ 7.5), 250 mM NaCl, 0,1% ΝΡ-40 και 5 mM EGTA, 50 mM νάτριο γρίπης oride, 60 mM β-φωσφορική γλυκερίνη, 0,5 mM νάτριο-βαναδικό, 0,1 mM PMSF, 10 μg /ml απρωτινίνη και 10 μg /ml λευπεπτίνη. Δείγματα πρωτεΐνης (35 μg) υποβλήθηκαν σε 10% SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν ηλεκτροφορητικά σε μεμβράνες PVDF (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Οι μεμβράνες επωάστηκαν πρώτα με 5% άπαχο γάλα σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris (TBS). Μετά από πλύση τρεις φορές σε 0,1% Tween 20-TBS (TBST), οι μεμβράνες επωάστηκαν με διαφορετικές πρωτογενή αντισώματα χωριστά στους 4 ° C όλη τη νύκτα, ακολουθούμενο με την αντίστοιχη δευτερογενή αντισώματα ξεχωριστά (1:2000) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου και το πρωτεΐνες αντίσωμα δεσμεύεται ανιχνεύθηκαν από το σύστημα ECL (Amersham Biosciences, Little Chalfont Buckinghamshire, Ηνωμένο Βασίλειο).

Η προετοιμασία των δειγμάτων και την εξόρυξη συγκέντρωση πρωτεΐνης και

Η κυτταρική εκχύλιση από LNCaP και LNCaP-s κύτταρα και η προετοιμασία του συνολικού κυτταρικού λύματος διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως από τους [17]. Ο προσδιορισμός πρωτεΐνης έγινε χρησιμοποιώντας Pierce αντιδραστήριο δοκιμασίας πρωτεΐνης BCA (Rockford, IL, USA).

IEF και SDS-PAGE

Τα δείγματα αραιώθηκαν σε ένα συνολικό όγκο 250 μΐ, 0,2% Pharmalyte , 8 Μ ουρία, 0.3% DTT, 2 Μ CHAPS και ένα ίχνος βρωμοφαινόλης μπλε (Sigma). Το ποσό των 100 μg πρωτεΐνης φορτώθηκαν σε κάθε λωρίδα μέσω ενυδάτωσης με χρήση μη-γραμμικής pH 3-10 Έτοιμο Γάζας IPG, ταινίες (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Εστιάζοντας διεξήχθη για ένα σύνολο 45.500 Vh σε ένα PROTEAN IEF κύτταρο (Bio-Rad). Προκατασκευασμένα πηκτώματα (12,5% ομοιογενής Tris-HCL Κριτήριο) SDS-PAGE (Bio-Rad) έτρεξαν χρησιμοποιώντας μία συσκευή κυτταρικής γέλη Κριτήριο δωδεκα (Bio-Rad). Ένα σύνολο από 4 πήγματα έτρεξαν ανά ομάδα δειγμάτων. Το ρυθμιστικό τρέξιμο ηλεκτρόδιο ήταν 25 mM Tris, 192 mM γλυκίνη, 0,1% β /ο SDS. Τα πηκτώματα έτρεξαν στα 250 V για περίπου 1 ώρα μέχρις ότου το κυανούν βρωμοφαινόλης δείκτης είχε φθάσει τον πυθμένα της γέλης σε μία θερμοκρασία περίπου 15 ° C. Οι πρωτεΐνες έγιναν ορατές με χρώση αργύρου όπως περιγράφεται από τον [18].

σάρωσης Gel και ανάλυση εικόνας

2-DE γέλες σαρώθηκαν στα 100 μm ανάλυση (12-bits /pixel) χρησιμοποιώντας ένα GS -710 πυκνόμετρο λέιζερ (Bio-Rad). Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση PDQuest ™ λογισμικού Έκδοση 7 (Bio-Rad). Μετά την αυτόματη ανίχνευση όλων των κηλίδων πρωτεΐνης, ζελέ εικόνες προσεκτικά επεξεργασία. Οι επιμέρους πρωτεΐνες ποσότητες εκφράστηκαν ως ppm του συνολικού ολοκληρωμένου OD. Όλα τα 2-DE χάρτες συμφωνημένα και ανεξάρτητη αξιολόγηση. Η μεθοδολογική επαναληψιμότητα της ανάλυσης 2-DE προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση ομάδα συσχέτισης. Εν συντομία, η συνολική οπτική πυκνότητα συσχετίζεται άμεσα με την ολική συγκέντρωση πρωτεΐνης. Μικρές διαφορές στη φόρτωση τζελ, συνθήκες λειτουργίας, και χρώση αργύρου μπορεί να επηρεάσει δείγμα συγκρίσεις και επηρεάζουν την επαναληψιμότητα γέλης 2-D. Τέσσερις πηκτώματα έτρεξαν από κάθε ομάδα θεραπείας και οι συγκρίσεις της έντασης της αντιστοιχισμένης κηλίδων μεταξύ 2-DE πηκτές πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την ανάλυση συντελεστή συσχέτισης. Ένας συντελεστής συσχέτισης μετρήθηκε μεταξύ δύο γελών με βάση τις οπτικές πυκνότητες των ίδιων κηλίδων στις δύο πηκτές που συγκρίνονται. Ένας συντελεστής συσχέτισης του 1 θα σημαίνει ότι τα δύο δείγματα που συγκρίνονται είναι πανομοιότυπα. Σε μια ομάδα που αποτελείται από 4 δείγματα, ένα μέγιστο έξι ζεύγος σοφό συγκρίσεις είναι δυνατόν. Ο μέσος συντελεστής συσχέτισης μεταξύ των δειγμάτων smsDX ήταν 0,85 (n = 6 ζεύγη τζελ, εύρος 0.80-0.92).

φασματομετρία μάζας ανάλυση

Οι πρωτεΐνες προσδιορίστηκαν με ένα όργανο vMALDI-LTQ (Thermo Electron , San Jose, CA, USA). Το σημείο-picking, αποχρωματισμού, την πέψη, την εξόρυξη, την προετοιμασία του δείγματος και κηλίδες στο MALDI πλάκες στόχο διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ένα σταθμό εργασίας spothandling (ETTAN Spothandling εργασίας, GE Healthcare) και ένα πρότυπο πρωτόκολλο που παρέχονται από την GE Healthcare. Η πλάκα που περιέχει τα συνδυασμένα εκχυλίσματα εξατμίστηκε μέχρι ξηρού. Κάθε δείγμα παρασκευάστηκε με συνιστούν τα αποξηραμένα πεπτίδια σε 2,5 μΐ διαλύματος μήτρας (2,5 mg /ml του α-κυανο-4-υδροξυ-κινναμωμικού οξέος (Sigma) σε 50% ακετονιτρίλιο που περιείχε 0.05% TFA). 2.0 μΐ δείγμα κηλιδώθηκε πάνω σε μία επιφάνεια ολίσθησης στόχο καθαρή MALDI και αφήνεται να στεγνώσει. Τα δείγματα αναλύθηκαν με vMALDI-LTQ (Thermo Electron, San Jose, CA, USA). Η ανάλυση έγινε χρησιμοποιώντας λογισμικό Xcalibur 1.4 σε λειτουργία εξαρτώμενη από τα δεδομένα. Μια σάρωση έρευνα (MS) ακολουθήθηκε από σαρώσεις MS /MS στα 5 πιο άφθονα ιόντα. Αυτή η σειρά των 6 γεγονότα σάρωσης επαναλήφθηκε έξι φορές για κάθε σημείο του δείγματος. Δυναμική Αποκλεισμός ™ εξασφαλίζεται ότι συνολικά 30 διαφορετικά πεπτίδια επιλέχθηκαν και κατακερματισμένη για κάθε δείγμα. Τα φάσματα MS συλλέχθηκαν στο Da εύρος μάζας 900-2000, ενώ η μάζα εύρος για την MS /MS φάσματα ήταν επιλέγεται αυτόματα από το σύστημα με βάση την τιμή Q 0,25. Το πρότυπο ενέργεια σύγκρουσης των 38 είχε οριστεί για όλη την ανάλυση. Η προθεσμία των 5 λεπτών /επιλέχθηκε το δείγμα, εάν ή όχι το 30 MS /MS φάσματα θα μπορούσε να αποκτηθεί. αναζητήσεις βάση δεδομένων έγιναν χρησιμοποιώντας τόσο η μασκότ και αλγόριθμος αναζήτησης Sequest ενάντια στην ανθρώπινη συνεδρία της βάσης δεδομένων πρωτεΐνης IPI (έκδοση 2.38). Οι δύο έρευνες συγκρίθηκαν στο στο σπίτι ανέπτυξε λογισμικό αδιάκριτη MS /MS. Ένα ελάχιστο των δύο πεπτιδίων και το σκορ Μια μασκότ του 45 ήταν απαραίτητα για μια πρωτεΐνη να γίνει αποδεκτή, όπως προσδιορίζονται.

Αποτελέσματα

Ίδρυση ανεξάρτητου από ανδρογόνο κυτταρική γραμμή, LNCaP-s και ανίχνευση AR , η ΑΧΕ όσο και NSE έκφρασης σε LNCaP-s κύτταρα

για να αντιμετωπιστεί η φυσική εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη από ανδρογόνων ευαίσθητα στην ανδρογόνα ανεξάρτητο κράτος, ένα μοντέλο των κυττάρων του καρκίνου του προστάτη είναι πολύ σημαντικό για

in vitro

μελέτη . Έτσι καλλιεργήσαμε μια κυτταρική γραμμή LNCaP-s από μια γονική κυτταρική γραμμή καρκίνου του προστάτη LNCaP σε κατάσταση στέρηση ανδρογόνου. Τα κύτταρα ΝΕ χαρακτηρίζονται από νευρωνικό φαινότυπο που παράγουν και εκκρίνουν μια σειρά νευροπεπτιδίων που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό όγκου, μετασχηματισμό και μετάσταση [19]. Τα μορφολογικά χαρακτηριστικά έδειξε μια νευρωνική μορφολογία με συμπαγώς στρογγυλεμένες κυτταρικά σώματα, έχοντας επεκταθεί και πρόστιμο διακλαδισμένης διεργασίες. Έτσι ανδρογόνο ευαίσθητων κυττάρων LNCaP αποκτήσει NE-σαν φαινότυπο (Σχήμα 1) LNCaP-s σε κατάσταση ανδρογόνο μείωση. Οι NE-όπως τα κύτταρα, τα χαρακτηριστικά αξιολογήθηκαν από τον έλεγχο των δεικτών του NED, χρωμογρανίνης Α (CGA) και νευρώνα ενολάση (NSE). Μετά την καλλιέργεια στην κατάσταση των ανδρογόνων-μειωμένη, τα κύτταρα LNCaP έδειξε ένα μειωμένο επίπεδο έκφρασης του AR, αυξημένο επίπεδο NSE έκφρασης, αλλά CgA χωρίς σημαντική έκφραση. Σχήμα 1 έδειξε διαφορετικές εκφράσεις του AR, η ΑΧΕ όσο και NSE στα κύτταρα LNCaP-s.

Γονική LNCaP κύτταρα έχουν μια epitheial μορφολογία και τα κύτταρα LNCaP-s έδειξε νευρωνική μορφολογία. AR, η ΑΧΕ όσο και NSE εκφράσεις σε LNCaP και τα κύτταρα LNCaP-ες εξετάζονται με RT-PCR και Western Blotting.

Η

smsDX ανέστειλε την εισβολής του προστάτη καρκινικών κυττάρων

Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι η σωματοστατίνη και αναλογικής αποτελέσματά της επί του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων του προστάτη [20]. Αλλά οι σωματοστατίνης επιδράσεις στην ικανότητα εισβολής δεν είχε διερευνηθεί. Για να αξιολογηθούν οι επιπτώσεις της smsDX στην διεισδυτικότητα καρκινικών κυττάρων προστάτη που χρησιμοποιήσαμε επούλωσης πληγών δοκιμασία και δοκιμασία εισβολής Matrigel ™, την καλυμμένη επιφάνεια του τραύματος και ο αριθμός των κυττάρων που εισβάλλουν μέσω ενός θαλάμου Matrigel ήταν σημαντικά μικρότερος για τα κύτταρα που κατεργάζονται με smsDX από ό, τι ήταν για τα κύτταρα ελέγχου σε αγωγή με φορέα σε LNCaP και LNCaP-s κυττάρων (Σχήμα 2 και 3). Η αναστολή της smsDX δείχνει μία δοσο-εξαρτώμενο τρόπο με τον εισβάλλουν ικανότητα του αριθμού των κυττάρων και στις δύο LNCaP και κυττάρων LNCaP-s. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι smsDX μείωσε την διεισδυτικότητα των καρκινικών κυττάρων του προστάτη.

αντιπροσωπευτικές μικροφωτογραφίες επιδεικνύουν κλεισίματος τραύματος στα κύτταρα LNCaP (Α) και τα κύτταρα LNCaP-S (Β). Μονοστιβάδες LNCaP /LNCaP-s κύτταρα διασπάστηκαν με στείρο ρύγχος πιπέτας για να δημιουργήσετε uniformand αγωγή με PBS ή 1-10 nM smsDX για 24 ώρες.

Η

δεδομένα εισβολή Matrigel όταν LNCap /LNCaP-s κύτταρα ανώτερο φρεάτιο επωάστηκαν σε μέσο ελεύθερο ορού και κάτω καλά γέμισε με μέσο ελεύθερο ορού και 1-10 ηΜ smsDX ή PBS. Μετά από 24 ώρες, ο αριθμός των κυττάρων που εισέβαλαν μέσω Matrigel μετρήθηκε σε τουλάχιστον 10 πεδία ανά φρεάτιο. Αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες αποκαλύπτουν LNCaP (Α) και LNCaP-s (Β) κύτταρα που εισέβαλαν μέσω Matrigel. Μειώνεται από × 100.

Η

ηλεκτροφόρηση γέλης 2D ανάλυση

Το σχήμα 4 δείχνει αντιπροσωπευτικό τζελ 2D ελέγχου και τα δείγματα smsDX σε LNCaP και τα κύτταρα LNCaP-s. Τρεις επαναλήψεις έτρεξαν για κάθε ομάδα, τον έλεγχο και την smsDX. Οι επιδράσεις smsDX επί ​​LNCaP και κυττάρων LNCaP-s συγκρίθηκαν ξεχωριστά με την ομάδα ελέγχου χρησιμοποιώντας ένα τεστ Mann-Whitney.

ολόκληρου κυττάρου λύμα υποβλήθηκε σε 2-DE χρησιμοποιώντας IPG λωρίδες ρΗ 3-10 στην πρώτη και 12,5% SDS γέλη πολυακρυλαμιδίου στη δεύτερη διάσταση. Α, τα γονικά κύτταρα LNCaP, Β, παράγωγο κύτταρα LNCaP-s. C, LNCaP + smsDX, D, LNCaP-s + smsDX.

Η

Οι πρωτεΐνες που εκφράζονται διαφορικά μεταξύ LNCaP και κυττάρων LNCaP-s

Ένα σύνολο από 222 σημεία με επιτυχία εντοπίστηκαν χρησιμοποιώντας 2DE- με βάση MS. Στην πρώτη ανάλυση, smsDX-επεξεργασμένα κύτταρα LNCaP συγκρίθηκαν με ομάδα ελέγχου LNCaP χρησιμοποιώντας ένα τεστ Mann-Whitney. 56 πρωτεΐνες βρέθηκαν να εκφράζονται διαφορικά σε LNCaP και LNCaP-S (Πίνακας S1). Στη δεύτερη ανάλυση, 104 και 86 πρωτεΐνες, ξεχωριστά, βρέθηκαν εκφράζονται διαφορικά στα κύτταρα LNCaP και κυττάρων LNCaP-s μετά από αγωγή smsDX (Πίνακας S2A και Πίνακας S2B). Η έκφραση ειδικών ισομορφών των μεταβολικών ενζύμων έχει έδειξε ότι είναι κρίσιμη για την προσαρμογή των κυττάρων του όγκου σε αλλαγές στη διαθεσιμότητα των θρεπτικών συστατικών, ιδιαίτερα για γλυκολυτικά ένζυμα [21]. Έτσι ισομορφές των πρωτεϊνών επίσης αναφέρονται σε αυτόν τον πίνακα. Η ίδια πρωτεΐνη που βρίσκεται μερικές φορές σε πολλαπλά σημεία κλεισίματος σε πηκτώματα 2DE, είναι δυνατή λόγω της μετα-μεταφραστική τροποποίηση της πρωτεΐνης μετά στρες.

Πενήντα έξι πρωτεΐνες βρέθηκαν κάτω-εκφράζονται (πάνω από 1,2 φορές αλλαγή) σε LNCaP κύτταρα-s σε σύγκριση με τα μητρικά κύτταρα LNCaP, όπως αναφέρονται στον πίνακα S1.

οι πρωτεΐνες τόσο σε LNCaP και τα κύτταρα LNCaP-s επηρεάζονται από smsDX επώαση με μια πτυχή της αλλαγής ≥1.2 εισήχθησαν στο τραπέζι S2A και πίνακα S2B .

ταξινόμηση λειτουργίες των πρωτεϊνών στην επίδραση της smsDX για τον καρκίνο του προστάτη (LNCaP-s) κυττάρων μετά από θεραπεία ADT

Οι διαφορετικές λειτουργίες των πρωτεϊνών με κωδικό ένταξης αναφέρονται στην ιστοσελίδα, http: //www.uniprot.org/uniprot/. Οι πρωτεΐνες εντοπίστηκαν ταξινομήθηκαν επί τη βάσει των γνωστών βιοχημικών λειτουργιών τους, συμπεριλαμβανομένων του μεταβολισμού, μεταγωγή, τη συντήρηση της δομής των κυττάρων, μεταγραφική ρύθμιση και ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου σηματοδότησης. Οι περισσότεροι από στέρηση ανδρογόνου τόνισε πρωτεΐνες ρυθμίζεται προς τα κάτω μετά την επεξεργασία ADT. Όταν ερευνήσαμε αυτές τις λειτουργίες πρωτεΐνης μέσα στην ιστοσελίδα UniProtKB /Swiss-Prot, με έκπληξη, οι περισσότερες από τις πρωτεΐνες που επηρεάζονται από ADT θεραπεία βρέθηκαν να συμμετέχουν στο μεταβολισμό των κυττάρων και μιτοχονδριακή ρύθμιση λειτουργίας. Με βάση τις υποθετικές λειτουργίες στη βάση δεδομένων μονοπάτι KEGG (https://www.genome.jp/kegg/pathway.html), Πίνακας S3 (A, B, C) προήλθαν από τραπέζι S2A και τραπέζι S2B να αναδείξει τις ομοιότητες /διαφορές στην επίδραση του smsDX μεταξύ LNCaP και LNCaP-s κυτταρικές σειρές. Πίνακας S3A παρατίθενται σαράντα οκτώ κοινών πρωτεϊνών μεταξύ LNCaP και LNCaP-s κύτταρα μετά από έκθεση σε smsDX. Πίνακας S3b, S3C αναφέρονται τα επηρεάζονται διαφορετικά πρωτεΐνες σε LNCaP και LNCaP-s κύτταρα, ξεχωριστά.

στέρησης ανδρογόνων θα μπορούσαν να επηρεάσουν μιτοχονδριακή έκφραση της πρωτεΐνης, για παράδειγμα, HSPD1, ΕΖΕΣ επί, GLUD1, PMPCB και et al. Αυτές οι πρωτεΐνες βρέθηκαν ανήκουν σε μιτοχονδριακών πρωτεϊνών που περιλαμβάνουν στο μεταβολισμό της γλυκόζης, η παραγωγή αντιδραστικών μορφών οξυγόνου (ROS) και εγγενείς αποπτωτική λειτουργία των μιτοχονδρίων μεσολάβηση. Οι πρωτεΐνες με σημαντικούς ρόλους στην μεταβολική διαδικασία κυττάρων, συμπεριλαμβανομένης της ενέργειας (APRT, ATP5B, CKB, Tubb), λιπίδιο (ACAT2, ACADM, PRDX6), γλυκόζη (ΕΝΟ1, ΤΡΙ1) και αμινοξέων και βιοσύνθεση πρωτεϊνών (PHGDH, EIF5A, EIF1AY) , βρέθηκαν κάτω-ρυθμιζόμενη σε κύτταρα LNCaP-s. Επίσης, εντοπίστηκαν ορισμένες μεταβολικά ένζυμα που εμπλέκονται στο TCA. επεξεργασία ADT οδηγεί σε μείωση της πρωτεΐνης έκφραση αρκετών συνοδούς ER, συμπεριλαμβανομένων GRP78, ERP29, PDIA1 και πρωτεΐνες PDIA3.

Εκκαθάριση των πρωτεϊνών επηρεάζεται από smsDX και ADT θεραπείας στον καρκίνο του προστάτη κυττάρων με κηλίδωση Western

πρωτεϊνών σε κύτταρα LNCaP-s αφορούν σε διαφορετικές οδούς σηματοδότησης ταυτοποιήθηκαν σε αυτή την τρέχουσα μελέτη, οι πρωτεΐνες αυτές θα μπορούσαν να ρυθμίζονται από smsDX σε διαφορετικές αλλαγή φορές που περιλαμβάνεται στον πίνακα S2. Επικύρωση των πρωτεϊνών επηρεάζεται από smsDX και ADT θεραπείας στον καρκίνο του προστάτη κύτταρα διεξήχθησαν με κηλίδωση Western. Αρκετές μιτοχονδριακών πρωτεϊνών, πρωτεΐνες ER και πρωτεΐνες που περιλαμβάνουν μεταβολισμό επελέγησαν για την ανίχνευση για την επικύρωση με ανοσοκηλίδωση. Σχήμα 5 έδειξε ότι ΤΟΤΡ, STMN1, και CXB3 σε κύτταρα LNCaP μετά ADT ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω και TOM40, GRP78 και VDAC2 που αφορούν στη μιτοχονδριακή δραστηριότητα σε LNCaP-s κύτταρα up-ρυθμίζεται από όταν έλαβαν θεραπεία με smsDX.

Α, Κάτω εκφράσεις της πρωτεΐνης ΤΟΤΡ, STMN1, και CXB3 στα κύτταρα LNCaP μετά ADT στα κύτταρα LNCaP-s. Β, Down ρυθμίζονται εκφράσεις TOM40, GRP78 και VDAC2 στα κύτταρα LNCaP από αποστέρησης ανδρογόνων, μέχρι οργανωμένη έκφραση στα κύτταρα LNCaP-s με επεξεργασία smsDX.

Η

μεταβολικές οδούς που ρυθμίζονται από παράγωγο σωματοστατίνης (smsDX) σε καρκινικά κύτταρα προστάτη

με βάση τη βάση δεδομένων οδό KEGG (https://www.genome.jp/kegg/pathway.html), παρουσιάσαμε ένα διάγραμμα των μεταβολικών οδών που ρυθμίζονται από smsDX στον καρκίνο του προστάτη από ανδρογόνων εξαρτάται σε CRPC κατάσταση (Σχήμα 6). Τα ένζυμα στον κύκλο ταυτοποιήθηκαν με 2-DE MS σε αυτή τη παρούσα μελέτη.

Ένζυμα και οι μεταβολίτες που είναι μέρος της γλυκόλυση, σύνθεση λιπαρών acide και ο κύκλος TCA απεικονίζονται. G6PD, γλυκόζη-6-φωσφορική αφυδρογονάση 1-. ΕΝΟ1, η Alpha ενολάση. ΣΔΙΤ, πορεία των φωσφορικών πεντοζών. ACAT2, ακετυλο-CoA ακετυλοτρανσφεράση. ACAMD, ακυλο-CoA αφυδρογονάση. IDH2, Ισοκιτρική αφυδρογονάσης [NADP]. MDHM, Malate αφυδρογονάση. GLUD1, Γλουταμινικό dehydrogenase1. α-KG, α-κετογλουταρικού. Αυτό απλοποιημένο διάγραμμα βασίζεται στην βάση δεδομένων μονοπάτι KEGG (https://www.genome.jp/kegg/pathway.html). Τα ένζυμα στον κύκλο εντοπίστηκαν από 2-DE MS σε αυτήν την τρέχουσα μελέτη.

Η

Συζήτηση

ανδρογόνων διαδραματίζει ουσιαστικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη, έτσι ανδρογόνων στέρηση και τον αποκλεισμό της AR άξονα σηματοδότησης είναι σήμερα η κύρια θεραπεία για τον καρκίνο του προστάτη και την εξέλιξη της. Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι κλινική θεραπεία στέρηση ανδρογόνου συνδέεται με αυξημένη διαφοροποίηση ΝΕ σε καρκινώματα του προστάτη, και εμπλέκονται στη μετάβαση προς ανεξαρτησία από ανδρογόνα [22], τα κύτταρα ΝΕ χαρακτηρίζονται από νευρωνικό φαινότυπο: είναι μη πολλαπλασιαστικός και εκφράζουν νευρωνικές-όπως πρωτεΐνες, όπως NSE και CGA. Στέρησης ανδρογόνων μπορεί να επηρεάσει τα επίπεδα ορού CgA σε διαφορετικούς βαθμούς στον καρκίνο του προστάτη [23]. Η υπερέκφραση της NSE σε LNCaP-s στη μελέτη μας βρέθηκε στην εξέλιξη της NED από εξαρτώμενης από ανδρογόνο κύτταρα LNCaP. Σε αυτήν την τρέχουσα μελέτη, αφού μέχρι και 10 περάσματα των κυττάρων LNCaP σε μειωμένη κατάσταση των ανδρογόνων, οι NE-όπως χαρακτηριστικά LNCaP-s εντοπίστηκαν από νευρωνική μορφολογία και μεταβάλλεται εκφράσεις του AR και NSE.

Τα αποτελέσματα της αναστολής της σωματοστατίνης στη βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων και τον πολλαπλασιασμό δεν εξετάστηκαν καλά αλλά με τις γνώσεις μας, τα αποτελέσματά της επί της ικανότητας εισβολής δεν είχε διερευνηθεί. Χρησιμοποιώντας την επούλωση των πληγών και δοκιμασία εισβολής Matrigel παρατηρήσαμε ότι smsDX ανέστειλε την διεισδυτικότητα των δύο LNCaP και κυττάρων LNCaP-s. Αν και οι ακριβείς μηχανισμοί της smsDX επαγόμενη καταστολή της ικανότητας εισβολής δεν είναι επί του παρόντος σαφές, θα μπορούσε να οφείλεται σε αποκρίσεις σε κατεστραμμένο μιτοχονδριακό λειτουργίες. Σε προηγούμενες μελέτες μας [7], [24], πρωτεΐνες ρυθμίζονται μιτοχονδριακή και συναφών smsDX τόσο στην εξαρτώμενη από ανδρογόνα και ανεξάρτητη κύτταρα καρκίνου του προστάτη, έτσι ώστε οι σχετιζόμενες με καρκίνο μεταβολές στον μεταβολισμό είναι πιθανώς υπεύθυνα για τα σήματα του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της επιβίωσης σε υποτροπιάζοντα καρκίνο προστάτη και CRPC.

για να καθοριστούν τα αποτελέσματα ρύθμιση του μεταβολισμού του smsDX στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη από ανδρογόνο-εξαρτώμενη να ανδρογόνα ανεξάρτητο καθεστώς, εκτελέσαμε δισδιάστατη ηλεκτροφόρηση πηκτής (2-DE), ακολουθούμενη από MALDI-TOF φασματομετρία μάζας ανάλυση. Μετά τη σύγκριση της έκφρασης πρωτεϊνών σε LNCaP-s και γονικά κύτταρα LNCaP του, πενήντα έξι πρωτεΐνες βρέθηκαν να να εκφράζονται διαφορικά έως 1,2 φορές αλλαγή όπως φαίνεται στον πίνακα S1. Αυτές οι πρωτεΐνες ταξινομούνται ανάλογα με τις διαφορετικές λειτουργίες τους στο μεταβολισμό των κυττάρων, συμπεριλαμβανομένης της ζάχαρης, της ενέργειας, των λιπιδίων και διαδικασία αμινοξέων. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα ανδρογόνα μεταβολικά ρυθμιζόμενη μεταβολή είναι οι κύριες διαφορές κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του καρκίνου του προστάτη από ευαίσθητο σε ανδρογόνο στην κατάσταση των ανδρογόνων ανθεκτικά. Τα παρόμοια και τα διαφορετικά αποτελέσματα που προκαλούνται από smsDX βρέθηκαν μεταξύ LNCaP και κυττάρων LNCaP-s. Το στρες που προκαλείται από ανδρογόνων στέρηση και smsDX στο περιβάλλον του καρκίνου του προστάτη κύτταρο θα μπορούσε ενδεχομένως να προκαλέσει ζημία μιτοχονδριακή λειτουργία και να ενεργοποιήσετε AMPK μονοπάτι στα καρκινικά κύτταρα του προστάτη. Μιτοχονδριακή διαδικασίες, διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην έναρξη και την εξέλιξη του όγκου. Η αυξημένη μεταβολική δραστηριότητα είναι ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων καρκίνου [25]. Έτσι καταστολή της μεταβολικής δραστηριότητας το καρκινικό κύτταρο παρέχει μια εναλλακτική στρατηγική για το στάδιο CRPC. ADT για τον καρκίνο του προστάτη που προκαλείται ανώμαλη κατάσταση μικροπεριβάλλον εκμαιεύσει απαντήσεις των καρκινικών κυττάρων να επηρεάσει τη μεταβολική δραστηριότητα. Αυτές οι προσαρμογές βελτιστοποιήσετε το μεταβολισμό των κυττάρων του όγκου για να πάρει την ενέργεια και τα θρεπτικά συστατικά από το μικροπεριβάλλον του όγκου. Πολλές αναφορές έχουν δείξει ότι η βιοσύνθεση των ανδρογόνων και Ar σηματοδότηση σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη επηρεάζονται στενά από λιπογένεση [26] – [28]. Έτσι στόχευση των πιθανών υποκείμενων μοριακών μηχανισμών που συνδέουν το μεταβολισμό θα μπορούσε να διευκολύνει την περαιτέρω ανάπτυξη των πολλά υποσχόμενων θεραπευτικών προσεγγίσεων για CRPC κατάσταση.

Με βάση τα δεδομένα που συλλέγονται εδώ, βρήκαμε το smsDX ρυθμίζονται PI3K /AKT /mTORC1 μονοπάτι και TCA κύκλου, μέσω πάνω και κάτω ρύθμιση διαφορετικές μεταβολικές πρωτεΐνες που αναφέρονται στα tbale S2A και τραπέζι S2B. Στον καρκίνο του προστάτη Akt ενεργοποιείται μέσω της οδού ΡΙ3Κ που έχει προκύψει ως ένα κρίσιμο μονοπάτι για την επιβίωση των κυττάρων. Αφαίρεση υποστήριξη των ανδρογόνων από τα κύτταρα LNCaP πυροδοτεί μια σειρά γεγονότων, συμπεριλαμβανομένης της σύλληψης του κυτταρικού κύκλου και την αύξηση /Akt δραστηριότητα PI3K, με αποκορύφωμα την ενδεχόμενη απόκτηση του ανδρογόνα ανεξάρτητο φαινότυπο [29]. Ενεργοποιείται PI3K /AKT οδηγεί σε αυξημένη πρόσληψη γλυκόζης και γλυκόλυση [30] μονοπάτι .Αυτό προωθεί επίσης γλυκόζης ροή του άνθρακα σε βιοσυνθετικών οδών που στηρίζονται λειτουργικά μιτοχονδριακό μεταβολισμό, συμπεριλαμβανομένων των λιπαρών οξέων, χοληστερόλης και isopronoid σύνθεση απαιτούν ακετυλο-CoA. AKT ενεργοποιεί επίσης ΑΤΡ-citratelyase (ACL) την προώθηση της μετατροπής των μιτοχονδριακών που προέρχονται από κιτρικό σε ακετυλο-CoA για τη σύνθεση των λιπιδίων. mTORC1 είναι μια καλά χαρακτηρισμένη ρυθμιστής της κυτταρικής ανάπτυξης δρουν ως κατάντη του ΡΙ3Κ /ΑΚΤ, έχει πολλές ανεπιθύμητες ένα σύμπλεγμα με τη μιτοχονδριακή μεταβολισμό. mTORC1 είναι περισσότερο γνωστή για την ενίσχυση της πρωτεϊνικής σύνθεσης [25]. Άλφα ενολάση (ΕΝΟ1), επίσης γνωστή ως πυροσταφυλικής αφυδρογονάσης φωσφατάση, είναι κρίσιμο για τον μεταβολισμό κυτταρικής ενέργειας [31]. ΕΝΟ1, ως βασικό γλυκολυτικό ένζυμο, παίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην αναερόβια γλυκόλυση. Σε αυτήν την τρέχουσα μελέτη, ΕΝΟ1 θα μπορούσαν να ρυθμίζονται από επάνω smsDX, η οποία έδειξε ότι smsDX έχει ρυθμιστική επίδραση επί της γλυκολύσεως σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη.

Ο κύκλος TCA είναι ένα κεντρικό μονοπάτι στο μεταβολισμό των σακχάρων, των λιπιδίων και αμινο οξύ, metablites κύκλο TCA να οδηγήσει σε μειωμένη κυτταρική διαφοροποίηση.