Αφηρημένο

Ιστορικό

Η μελέτη σχεδιάστηκε για να ανιχνεύει το επίπεδο έκφρασης της thimet ολιγοπεπτιδάση (THOP1) πρωτεΐνη σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) και τη διερεύνηση της συσχέτισης με κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά και την πρόγνωση.

Μέθοδοι

η ανοσοϊστοχημική χρώση χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η έκφραση της πρωτεΐνης THOP1 σε 120 δείγματα NSCLC και 53 μακρινό φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου και κηλίδωση Western χρησιμοποιήθηκαν για να μετρηθεί η έκφραση του THOP1 σε 16 ζεύγη των πρωτογενών NSCLC και αντίστοιχων φυσιολογικών ιστών.

Αποτελέσματα

Ανάλυση ανοσοϊστοχημική χρώση πρότεινε χαμηλή THOP1 έκφραση βρέθηκε σε 71 (59,2%) των δειγμάτων 120 NSCLC και συσχετίστηκε σημαντικά με θετικό μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

= 0,048). Ωστόσο, χαμηλή έκφραση THOP1 βρέθηκε σε 22 (41,5%) από τους 53 φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Chi-square test πρότεινε ότι η έκφραση της THOP1 ήταν σημαντικά υψηλότερη στους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων από ότι στα δείγματα NSCLC (

P

= 0,032). Real-Time PCR και κηλίδωση Western έδειξε ότι τα δείγματα NSCLC είχε μειωθεί THOP1 mRNA και έκφρασης πρωτεΐνης σε σύγκριση με τα αντίστοιχα φυσιολογικούς ιστούς. Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η χαμηλή έκφραση THOP1 σημαντικά προβλεπόμενη μείωση 5-ετή επιβίωση ελεύθερη νόσου (

P

= 0,038) και τη συνολική επιβίωση (

P

= 0,017). Επιπλέον, θετική μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

= 0,025) και προχωρημένο στάδιο ΤΝΜ (

P

= 0,009) σημαντικά προβλεπόμενη μείωση 5-ετή συνολική επιβίωση. Ωστόσο, πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox έδειξε ότι μόνο χαμηλή έκφραση THOP1 διατήρησε τη σημασία της ως ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για δυσμενείς 5-ετή επιβίωση ελεύθερη νόσου (

P

= 0,046) και τη συνολική επιβίωση (

P

= 0.021).

Συμπεράσματα

THOP1 μπορεί να έχει κλινική δυνατότητες να χρησιμοποιηθεί ως μια πολλά υποσχόμενη βιοδείκτης για τον εντοπισμό ατόμων με καλύτερη πρόγνωση και ένα νέο αντικαρκινικό μέσο για τη θεραπεία των ασθενών με NSCLC.

Παράθεση: Qi L, Li Sh, Si Lb, Lu Μ, Tian Η (2014) Έκφραση του THOP1 και τη σχέση του με την πρόγνωση σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 9 (9): e106665. doi: 10.1371 /journal.pone.0106665

Επιμέλεια: Domenico Κόπολα, H. Lee Moffitt Cancer Center & amp? Research Institute, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 23, 2014? Αποδεκτές: 30 Ιουλίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 2 Σεπτέμβρη του 2014

Copyright: © 2014 Qi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Το έργο αυτό υποστηρίζεται από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 30571844), το Ίδρυμα Επιστήμης και Τεχνολογίας Ανάπτυξης της επαρχίας Shandong (Όχι . 2009GG10002007), και το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Shandong (Νο ZR2009CM090). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC) είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθειες ενδοθωρακική σε όλο τον κόσμο λόγω της καθυστερημένης κλινική παρουσίαση της και ταχεία εξέλιξη [1], [2]. Παρά τις κάποιες προόδους στην έγκαιρη ανίχνευση και ριζική χειρουργική εκτομή σε συνδυασμό με συμπληρωματική θεραπεία κατά τη διάρκεια της πρόσφατης δεκαετίας, η πρόγνωση των ασθενών με NSCLC παραμένουν σχετικά φτωχή [3]. Είναι γενικά παραδεκτό ότι η γενετική ετερογένεια και περιβαλλοντικοί παράγοντες οδηγούν σε ογκογένεση του καρκίνου του πνεύμονα ταυτόχρονα. Ως εκ τούτου, ταυτοποίηση νέων προγνωστικών βιοδεικτών με πιθανή θεραπευτική και προγνωστική σημασία είναι σημαντική για τη βελτιστοποίηση της θεραπείας του NSCLC

Thimet ολιγοπεπτιδάση (THOP1? EC3.4.24.15 ή ΕΡ 24.15). Είναι ένα χαρακτηριστικό μεταλλοπεπτιδασών με ψευδάργυρο ΗΕΧΧΗ μοτίβο σύνδεσης και συνδέεται με το μεταβολισμό πολλών νευροπεπτιδίων περιέχει από 5 έως 17 αμινοξέα, όπως βραδυκινίνη, ορμόνη απελευθέρωσης γοναδοτροπίνης, οπιοειδή και νευροτενσίνη [4], [5], [6]. Συσσωρευμένες αποδείξεις πρότεινε ότι THOP1 ήταν κυρίως εκφράζεται στο κυτταρόπλασμα, ενδοπλασματικό δίκτυο, μιτοχόνδρια και πυρήνας των διαφορετικών κανονικών ανθρώπινων ιστών και κυττάρων όγκου [7], [8], [9]. Επιπλέον, ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ότι THOP1 ήταν παρούσα στο 90% των NSCLC κυτταρικής σειράς Η1299 και εκκρίνεται από τα κύτταρα για να διασπούν και να ενεργοποιήσει DTS-201 [10]. Πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι τα υψηλά mRNA επίπεδα έκφρασης THOP1 στην κανονική φόντο ήπαρ του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC) συσχετίστηκε σημαντικά με καλύτερη επιβίωση [11]. Επιπλέον, θα μπορούσε να αναστείλει THOP1 αγγειογένεση όγκου και του πολλαπλασιασμού των όγκων προωθείται από BK σε κύτταρα μελανώματος [12]. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν THOP1 μπορεί να είναι ένας πιθανός παράγων κατά του όγκου για θεραπεία όγκου.

Έκφραση THOP1 και το ρόλο της στην πρόγνωση του NSCLC δεν έχει ερευνηθεί μέχρι σήμερα. Ως εκ τούτου, ανιχνεύσαμε επίπεδα έκφρασης της THOP1 πρωτεΐνης σε ασθενείς με ΜΜΚΠ χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική μέθοδο για να ερευνήσει ο συσχετισμός της με κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά, μετεγχειρητική υποτροπή του όγκου και την πρόγνωση.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Qilu Νοσοκομείο. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή για να δημοσιεύουν τις λεπτομέρειες περίπτωση, και την απόκτηση των δειγμάτων ιστού εκτελείται όπως καθορίζεται από τις οδηγίες του ιδρύματος.

Ασθενείς

δείγματα όγκων (n = 120, μέση ηλικίας 61 ± 4,35 χρόνια) και μακρινό φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων (n = 53, 5 cm από το περιθώριο του όγκου) συλλέχθηκαν από ασθενείς με ΜΜΚΠ οι οποίοι υποβλήθηκαν σε πλήρη εκτομή του όγκου (λοβεκτομή ή πνευμονεκτομή) με περιφερειακές ανατομή λεμφαδένων μεταξύ του Ιανουαρίου του 2006 και Δεκεμβρίου 2007 το Τμήμα Χειρουργικής θώρακος, Qilu Νοσοκομείο. Η ιστολογική εξέταση και ο βαθμός διαφοροποίησης των καρκινικών κυττάρων έγιναν με βάση το σύστημα ταξινόμησης της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας αναθεωρήθηκε το 2004 και το σύστημα σταδιοποίησης ΤΝΜ της UICC 2009. Δεν ασθενείς είχαν υποβληθεί σε ατελή εκτομή και έλαβαν χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Τα κλινικά χαρακτηριστικά αυτών των 120 ασθενείς παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Η

Ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημική χρώση για THOP1 διεξήχθη με τη χρήση της στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης μέθοδο. Εν συντομία, 4-μm πάχους τομές κόπηκαν από τεμάχια εμπεδωθεί με παραφίνη, αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και αφυδατώνονται μέσω σειράς διαβαθμισμένης αλκοόλης. Οι τομές επωάστηκαν σε κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6,0) με ένα φούρνο μικροκυμάτων. Μετά να ψύχεται σε θερμοκρασία δωματίου, τα πλακίδια επωάστηκαν σε υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% επί 15 λεπτά για να εμποδίσει την ενδογενή δραστηριότητα υπεροξειδάσης και επωάστηκαν με ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι THOP1 (Abcam, Cambridge, ΜΑ, USA, 1:50 αραίωση) επί μία νύκτα στους 4 ΝΤΟ. Στη συνέχεια, εφαρμόστηκαν το βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα και συζευγμένη με υπεροξειδάση στρεπταβιδίνη σύμπλοκο αντιδραστηρίου, ακολουθούμενη από αντικηλίδωση με αιματοξυλίνη Mayer του. Θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες συμπεριλήφθηκαν σε κάθε βήμα.

Αξιολόγηση των THOP1 έκφρασης της πρωτεΐνης

Οι ανοσοχρωματισμένες πλακίδια αξιολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητους ερευνητές με τυφλό τρόπο και επαναξιολογηθεί από αυτούς τους ερευνητές κάτω από ένα μικροσκόπιο multihead στην ασύμφωνα περιπτώσεις να καταλήξουν σε συναίνεση. Η έκφραση της πρωτεΐνης THOP1 αξιολογήθηκαν με υπολογισμό συνολική βαθμολογία ανοσοχρώση ως το προϊόν τόσο της βαθμολογίας ένταση (0, αρνητική χρώση? 1, ασθενής χρώση? 2, μέτρια χρώση? 3, ισχυρή χρώση) και σκορ ποσοστό (0, 0- 5%? 1, 6-25%? 2, 26-50%? 3, 51-75%? 4, ≥76%), αντίστοιχα. Έτσι, η συνολική βαθμολογία κυμαίνεται από 0 έως 7. Η τιμή αποκοπής για υψηλή και χαμηλή έκφραση THOP1 προσδιορίστηκε με βάση την αξία της ετερογένειας μετριέται μέσω ενός log-rank στατιστική ανάλυση σε σχέση με τη συνολική επιβίωση. Η εκατοστημόριο που απέδωσε το ελάχιστο

P

αξία επιλέχθηκε ως σημείο αποκοπής [13]. Εν συντομία, οι 120 ασθενείς ήταν τοποθετημένα κατά σειρά συνολικής βαθμολογίας κηλίδωση ανιχνεύθηκε με ανοσοϊστοχημική ανάλυση από μεγάλες σε μικρές. Σε κάθε εκατοστημόριο από 10 έως 90, τα δεδομένα χωρίζονται σε δύο ομάδες και οι διαφορές στη συνολική επιβίωση αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Η 41η εκατοστιαία που αντιστοιχεί στο συνολικό σκορ χρώση των 4 απέδωσε την ελάχιστη

P

αξίας (

P

= 0,017) και επιλέχθηκε ως σημείο αποκοπής. Ως εκ τούτου, η συνολική βαθμολογία χρώση των 4 επιλέχθηκε ως σημείο αποκοπής για την διάκριση μεταξύ υψηλής και χαμηλής έκφρασης THOP1. Όγκοι με συνολικό σκορ χρώση ≥4 ήταν όλα ορίζεται ως υψηλή THOP1 έκφρασης, και οι όγκοι με συνολικό σκορ χρώση & lt?. 4 ήταν όλα χαρακτηρίζονται ως χαμηλής THOP1 έκφραση

Εξαγωγή RNA, αντίστροφη μεταγραφή-αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης και ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Ολικά RNAs που εξάγονται από ιστούς χρησιμοποιώντας το ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Συμπληρωματικό DNA (cDNA) συντέθηκε με SuperScript III First-Strand Synthesis System (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε με τη χρήση SYBR Green Supermix (Bio-Rad, CA, USA) για THOP1 σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα επίπεδα του THOP1 αγγελιοφόρου RNA (mRNA) κανονικοποιήθηκαν με το επίπεδο έκφρασης ανθρώπινης β-ακτίνης και υπολογίζεται χρησιμοποιώντας το 2

– μέθοδος (△△ CT). Οι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν ως εξής: έννοια: Οι εκκινητές για β-ακτίνη ήταν: 5′-GCATCCACGAAACTACCT-3 ‘(προς τα εμπρός) και 5′-GAAAGGGTGTAACGCAAC-3′ (αντίστροφο). THOP1 εκκινητών ήταν: 5’-CAT GGC CAA GAC CAG CCA GA-3 ‘(προς τα εμπρός) και 5′-CGC ACG CTT CAG CTC CAG AA-3’ (αντίστροφο)

SDS-PAGE και Western Blot.

οι πρωτεΐνες εξήχθησαν χρησιμοποιώντας RIPA ρυθμιστικό λύσης. Ίσες ποσότητες (20 μg) της πρωτεΐνης υποβλήθηκαν σε ανάλυση SDS-PAGE, μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης και ανιχνεύθηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα. Αντίσωμα έναντι THOP1 αγοράστηκε από Abcam (Abcam, Cambridge, MA, USA, αραίωση 1:1000). Αντι-β-ακτίνης αντίσωμα αγοράστηκε από την Sigma (Sigma, St. Louis, USA). Οι ζώνες της πρωτεΐνης ανιχνεύθηκαν με τη χρήση της ενισχυμένης χημειοφωταύγειας μέθοδο (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA). Η πυκνότητα οπτική ζώνη ποσοτικά (Imager της Alpha Corporation, San Leandro).

Συνέχεια

Όλοι οι ασθενείς εξιτήριο από το νοσοκομείο παρακολουθήθηκαν στα εξωτερικά ιατρεία κάθε 3 έως 6 μήνες. Παρακολούθηση αξιολόγηση των ασθενών αποτελείτο από τη φυσική εξέταση, εξετάσεις αίματος, αξονική τομογραφία, υπερηχογράφημα, ακτινογραφία θώρακος, και βρογχοσκόπηση αν είναι απαραίτητο. Η θέση και η ώρα της υποτροπής του όγκου καταγράφηκαν. Παρακολούθηση ολοκληρώθηκε σε όλους τους ασθενείς μέχρι τον Δεκέμβριο του 2013, και η μέση περίοδος παρακολούθησης ήταν 48 μήνες (εύρος: 15~96 μήνες).

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση των δεδομένων ήταν εκτελούνται από SPSS σύστημα 17.0. Chi-square test διεξήχθη για να εξετάσει τη σύνδεση των THOP1 και διάφορα κλινικοπαθολογική παράγοντες. χρόνο παρακολούθησης λογοκρίθηκε εάν ο ασθενής χάθηκε κατά την παρακολούθηση. Οι καμπύλες επιβίωσης σχεδιάζονται χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν με τη δοκιμασία log-rank. ανάλυση παλινδρόμησης Η πολυπαραγοντική Cox χρησιμοποιήθηκε για τον εντοπισμό σημαντικών ανεξάρτητων προγνωστικών παραγόντων. Όλα τα δεδομένα είναι μέσες ± τυπική απόκλιση (SD) από ανεξάρτητους προσδιορισμούς. Άλλες στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση t-test του Student.

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

1.. Έκφραση των THOP1 στον NSCLC και συσχέτιση με κλινικοπαθολογική παράγοντες

Διαπιστώσαμε την έκφραση της πρωτεΐνης THOP1 σε 120 NSCLC δείγματα και 53 φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1, ανοσοϊστοχημεία με αντισώματα THOP1 παρουσίασαν θετική αντίδραση στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων NSCLC. Σύμφωνα με προηγούμενες καθορισμένα κριτήρια μας, υψηλή έκφραση THOP1 βρέθηκε σε 49 (40,8%) των δειγμάτων όγκου 120 και χαμηλή THOP1 έκφραση βρέθηκε σε 71 (59,2%) των δειγμάτων όγκου 120. Επιπλέον, ως αρνητικοί έλεγχοι, ανοσοχρώση χωρίς πρωτογενή αντισώματα είχε ως αποτέλεσμα καμία χρώση. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2, THOP1 ήταν ιδιαίτερα εκφράζονται στο κυτταρόπλασμα των φυσιολογικών βρογχικών επιθηλιακών κυττάρων και πνευμονοκύτταρα. Υψηλή έκφραση THOP1 βρέθηκε σε 31 (58,5%) από τους 53 φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων και χαμηλής THOP1 έκφραση βρέθηκε σε 22 (41,5%) από τους 53 φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων. Η έκφραση της THOP1 ήταν σημαντικά υψηλότερη στους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων από ότι στα δείγματα NSCLC (chi-square test,

P

= 0,032).

Διάφορα εντάσεις THOP1 έκφραση της πρωτεΐνης σε αδενοκαρκίνωμα, αρνητική έκφραση (Α), με ασθενές (Β), μέτρια (C), και ισχυρή (Δ) της έκφρασης. Διάφορες εντάσεις της έκφρασης της πρωτεΐνης THOP1 στον καρκίνο εκ πλακωδών κυττάρων, αρνητική έκφραση (Ε), με ασθενή (F), μέτρια (G), και ισχυρή (H) έκφρασης.

Η

Οι σχέσεις μεταξύ THOP1 έκφραση της πρωτεΐνης και κλινικοπαθολογική παράγοντες που εξετάστηκαν από το chi-square test, και τα δεδομένα μας έδειξαν ότι τα χαμηλότερα THOP1 έκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με θετικό μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

= 0,048). Δεν υπήρξε καμία στατιστική σημασία στις σχέσεις μεταξύ THOP1 έκφρασης και άλλα κλινικοπαθολογική μεταβλητές (

P

& gt? 0,05, Πίνακας 1).

Για να διερευνηθεί η έκφραση του γονιδίου THOP1 στο NSCLC, χρησιμοποιήσαμε ποσοτική πραγματικού -Time PCR για να μετρηθεί η έκφραση των επιπέδων mRNA THOP1 σε 16 ζεύγη των πρωτοπαθών όγκων και των αντίστοιχων φυσιολογικών ιστών. Σε σύγκριση με αντίστοιχες φυσιολογικούς ιστούς τους, τα δείγματα NSCLC είχε μειωμένη έκφραση THOP1 mRNA (Σχήμα 3Α). Σταθερά, κηλίδωση Western ανάλυση έδειξε ότι 12 από 16 δείγματα NSCLC είχε μειωθεί THOP1 έκφραση πρωτεΐνης σε σύγκριση με τα αντίστοιχα φυσιολογικούς ιστούς τους (Εικόνα 3Β).

A. Η έκφραση του mRNA THOP1 στους ιστούς NSCLC ήταν χαμηλότερη από ότι στους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων (

P

& lt? 0,01). Η ανάλυση στυπώματος Western Β πρότεινε ότι τα δείγματα NSCLC είχε μειωθεί THOP1 έκφραση πρωτεΐνης σε σύγκριση με τα αντίστοιχα φυσιολογικούς ιστούς. N: Κανονική πνευμονικό ιστό, Τ:. NSCLC δείγματα

Η

2. Μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης για 5-ετή επιβίωση ελεύθερη νόσου

υποτροπή των όγκων που αναπτύσσονται στο πλαίσιο της περιόδου παρακολούθησης σε 82 (68,3%) από τους 120 ασθενείς: τοπική υποτροπή σε 18 ασθενείς, μακρινή μετάσταση σε 52 ασθενείς , και οι δύο τοπικής υποτροπής και μακρινή μετάσταση σε 12 ασθενείς. Μονοπαραγοντική ανάλυση (δοκιμασία log-rank) έδειξε ότι τα χαμηλά THOP1 έκφραση (25,4% έναντι 40,8%,

P

= 0,038, Εικόνα 4Α) προέβλεψε σημαντικά μειωμένα 5-ετή επιβίωση ελεύθερη νόσου. Επιπλέον, τα αποτελέσματα της πολυπαραγοντικής ανάλυσης παλινδρόμησης κατά Cox έδειξε ότι η χαμηλή THOP1 έκφραση διατήρησε τη σημασία της ως ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για δυσμενείς 5-ετή επιβίωση ελεύθερη νόσου (

P

= 0,046, Πίνακας 2).

3. Μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης για 5-ετή συνολική επιβίωση

Από τους 120 ασθενείς, οι 73 (60,8%) περιπτώσεις πέθανε από καρκίνο σχετίζονται με τις αιτίες μέσα σε 5 χρόνια μετά τη λειτουργία, το 5-ετή συνολική επιβίωση ήταν 39,2%. Μονοπαραγοντική ανάλυση (δοκιμασία log-rank) έδειξε ότι τα χαμηλά THOP1 έκφραση (29,6% έναντι 53,1%,

P

= 0,017, Εικόνα 4Β), θετικό λεμφαδένα μετάσταση (29,0% έναντι 50,0%,

P

= 0,025, Σχήμα 4C) και προηγμένο στάδιο ΤΝΜ (30,1% έναντι 53,2%,

P

= 0.009, Εικόνα 4D) προβλεπόμενη σημαντικά φτωχή 5-ετή συνολική επιβίωση (Πίνακας 3). Τα αποτελέσματα της πολυπαραγοντικής ανάλυσης παλινδρόμησης Cox έδειξε ότι η σημαντική προγνωστική επίδραση των θετικών μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

= 0.653, Πίνακας 3) και προχωρημένο στάδιο ΤΝΜ (

P

= 0,218, Πίνακας 3) παρατηρήθηκε στην μονοπαραγοντική ανάλυση εξαφανίστηκε, και μόνο χαμηλά THOP1 έκφραση διατήρησε τη σημασία της ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την αρνητική συνολική επιβίωση (

P

= 0,021, Πίνακας 3).

η

Συζήτηση

Παρά το γεγονός ότι θεωρείται ότι διαδραματίζουν ρόλο στο σύστημα νευροενδοκρινικού [14], THOP1 έχει γίνει μια πρόσφατη εστίαση στην έρευνα του όγκου. μελέτες κυττάρων κλασματοποίηση απέδειξαν ότι THOP1 είναι παρούσα στα σωματίδια υποκυτταρικά κλάσματα του κεντρικού νευρικού ιστού [15] και εκκρίνεται από διακριτικό κυτταρικές σειρές, όπως η γλοιώματος αρουραίου C6 [16] και ποντικού AtT-20 [17]. Επιπλέον, η υψηλή THOP1 έκφραση του mRNA σε αντίστοιχο φυσιολογικό ιστό του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (HCC) συσχετίστηκε με καλύτερη συνολική επιβίωση [11]. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν ανιχνεύσει την έκφραση της πρωτεΐνης THOP1 σε ιστούς όγκων και τη σχέση του με την πρόγνωση όγκων.

Στην παρούσα μελέτη, μελετήθηκε η έκφραση του THOP1 σε NSCLC και αντίστοιχοι φυσιολογικοί ιστοί, και στη συνέχεια αναλύθηκαν οι σχέσεις μεταξύ THOP1 έκφρασης και άλλα κλινικοπαθολογική μεταβλητές σε NSCLC. Τα ευρήματα της μελέτης μας έδειξαν ότι THOP1 ήταν καθολικά εκφράζονται σε NSCLC και των αντίστοιχων φυσιολογικών ιστών, και έκφραση THOP1 σε φυσιολογικούς ιστούς του NSCLC ήταν σημαντικά αυξημένα σε δύο επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης. Επιπλέον, χαμηλότερη έκφραση THOP1 στον NSCLC συσχετίστηκε σημαντικά με θετικό μετάσταση στους λεμφαδένες. Η ανάλυση Kaplan-Meier στην παρούσα μελέτη έδειξε ότι η χαμηλή έκφραση THOP1 σημαντικά προβλεπόμενη μείωση 5-ετή επιβίωση ελεύθερη νόσου και συνολική επιβίωση. Επιπλέον, θετική μετάσταση λεμφαδένα και στάδιο advanced ΤΝΜ σημαντικά προβλεπόμενη μειώθηκαν 5-ετή συνολική επιβίωση. Για την εξάλειψη των επιπτώσεων της μικτής παράγοντες συσχετίζονται με την πρόγνωση για στατιστική ανάλυση, η πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox εκτελέστηκε για να προσδιοριστεί ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες. Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι μόνο THOP1 διατήρησε προγνωστική αξία του ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την κακή ελεύθερη νόσου και συνολική επιβίωση. ανάλυση επιβίωσης μας έδειξαν ότι η έκφραση της πρωτεΐνης THOP1 θα μπορούσε να είναι ένα χρήσιμο διαγνωστικό δείκτη για τους ασθενείς με NSCLC. Όπως προαναφέρθηκε, τα αποτελέσματά μας υπονοείται ότι THOP1 πρωτεΐνη μπορεί να έχει αντικαρκινική δράση στην καρκινογένεση και την εξέλιξη του όγκου των NSCLC.

Προηγούμενη μελέτη προτείνει ότι THOP1 ήταν σε θέση να υδρολύει διάφορα είδη βιοδραστικών πεπτιδίων όπως βραδυκινίνη (ΒΚ) [ ,,,0],18]. BK είναι ένας σημαντικός μεσολαβητής υπεύθυνος για σχετίζονται με όγκους αγγειογένεση και την ανάπτυξη του όγκου [19], [20], [21]. Επιπλέον, ΒΚ συμμετείχε στην καρκινογένεση και της εξέλιξης του καρκίνου με την αύξηση της α2β1 ιντεγκρίνης έκφραση μέσω της οδού σήματος υποδοχέα BK [22]. Επιπλέον, ως παράγοντας ανταγωνιστής να BK, THOP1 θα μπορούσε να αναστείλει την αγγειογένεση και την ανάπτυξη όγκων που προωθείται από BK [12]. Η παθολογική αγγειογένεση είναι ένα σχετικά πρώιμο συμβάν στην καρκινογένεση και την αυξημένη αγγειογένεση όγκου συσχετίζεται με την εισβολή όγκου, μετάσταση και φτωχή πρόγνωση [23], [24]. Ως εκ τούτου, μειωμένη έκφραση των THOP1 σε NSCLC μπορεί να είναι υπεύθυνη για την ανάπτυξη του καρκίνου, κακοήθεια και χαμηλό ποσοστό επιβίωσης λόγω μείωσης της στην λειτουργία αντι-BK.

Συναρπαστική έχει σημειωθεί πρόοδος σε απασχολούν THOP1 για ανοσοθεραπεία σε καρκίνους. Έχει αναφερθεί ότι THOP1 εκκρίνονται από κύτταρα όγκου ήταν πολύ πιθανό υποψήφιο για το εξωκυτταρικό ενεργοποίηση της CPI-0004Na το οποίο ήταν ένα προφάρμακο δοξορουβικίνης, και η βελτιωμένη θεραπευτικό δείκτη CPI-0004Na σύγκριση με ελεύθερη doxorubicin επιβεβαιώθηκε σε τρία μοντέλα ξενομοσχεύματος όγκου του του προστάτη, του μαστού, και τον καρκίνο του πνεύμονα [10], [25]. Μια άλλη μελέτη για κυτταροτοξικά Τ λεμφοκύτταρα (CTLs) πρότεινε THOP1 θα μπορούσε να ενισχύσει την ανοσολογική άμυνα εναντίον ενδοκυτταρικών παθογόνων οργανισμών και του καρκίνου με τη συμβολή στην C-τερματική αποκοπή των CTL επιτόπων [26]. Ως εκ τούτου, THOP1 μπορεί να έχει κλινική δυνατότητα να χρησιμοποιηθεί ως μια πιο χρήσιμος παράγοντας της αντικαρκινικής θεραπείας για τους ασθενείς με NSCLC.

Εν κατακλείδι, αναδρομική ανάλυση μας στοιχεία που αποδεικνύουν ότι η έκφραση της THOP1 ήταν σημαντικά υψηλότερη στους φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων από ότι στα δείγματα NSCLC, και χαμηλή έκφραση THOP1 συσχετίστηκε σημαντικά με θετικό λεμφαδένα μετάστασης σε NSCLC. Επιπλέον, η υψηλή έκφραση της πρωτεΐνης THOP1 παρουσίασαν αντικαρκινική ιδιότητα και έδειξε θετική επίδραση τόσο ελεύθερη νόσου και συνολική επιβίωση. Ως εκ τούτου, THOP1 μπορεί να έχει κλινική δυνατότητες να χρησιμοποιηθεί ως μια πολλά υποσχόμενη βιοδείκτης για τον εντοπισμό ατόμων με καλύτερη πρόγνωση και ένα νέο αντικαρκινικό μέσο για τη θεραπεία των ασθενών με NSCLC.