Αφηρημένο

Ιστορικό

Στο ινστιτούτο μας, μια στρατηγική chemoradioselection έχει χρησιμοποιηθεί για την επιλογή των ασθενών για τη συντήρηση των οργάνων βάσει της ανταπόκρισης σε ένα αρχικό 30-40 Gy ταυτόχρονη χημειοακτινοθεραπεία (CCRT) . Ασθενείς με θετική απόκριση (δηλαδή, chemoradioselected? CRS) έχουν δείξει καλύτερα αποτελέσματα από ό, τι εκείνοι με μια δυσμενή απάντηση (δηλαδή, nonchemoradioselected? Ν-CRS). Η επιτυχής στόχευση των μορίων που εξασθενούν την αποτελεσματικότητα των chmoradioselection μπορεί να βελτιώσει τα αποτελέσματα. Έτσι, ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η συσχέτιση ενός νέου στελέχους καρκινικών κυττάρων (CSC) δείκτης, CD44 παραλλαγή 9 (CD44v9), με την κυτταρική ανθεκτικότητα σε chemoradioselection σε προχωρημένο κεφαλής και του τραχήλου ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα (HNSCC).

Υλικά και Μέθοδοι

Μέσα από μια ιατρική έρευνα διάγραμμα, 102 ασθενείς με προχωρημένο HNSCC αντιμετωπίζονται με chemoradioselection 1997-2008 φοιτούσαν. Σύμφωνα με τον αλγόριθμο μας, 30 ασθενείς ήταν CRC μετά την επαγωγή CCRT και 72 ασθενείς ήταν Ν-CRS. Χρησιμοποιώντας την συμβατική ανοσοϊστοχημική τεχνική, δείγματα βιοψίας και αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα όγκου ανοσοχρωματίστηκαν με τα ειδικά αντισώματα αντι-CD44v9.

Αποτελέσματα

Τα εγγενή επίπεδα έκφρασης CD44v9 στα δείγματα βιοψίας δεν συσχετίζονται με η chemoradioselection και την επιβίωση των ασθενών. Ωστόσο, σε ασθενείς Ν-CRS, το CD44v9 θετικά ομάδα έδειξε σημαντικά (

P

= 0,008) χειρότερη πρόγνωση, από το CD44v9-αρνητική ομάδα. αναλύσεις πολυμεταβλητή έδειξε ότι μεταξύ των τεσσάρων υποψήφιων παραγόντων (Τ, Ν, απάντηση σε CCRT, και CD44v9), CD44v9 θετικότητα (HR: 3,145, 95% CI: 1,235 – 8,008,

P

= 0,0163) συσχετίστηκε σημαντικά με η κακή πρόγνωση, μαζί με προχωρημένο στάδιο Ν (HR: 3,525, 95% CI: 1,054 – 9,060,

P

= 0.0228). Περαιτέρω, ο ρυθμός επιβίωσης του CD44v9 επαγόμενης ομάδα ήταν σημαντικά (

P

= 0.04) χειρότερο από το CD44v9-μη επαγόμενη ομάδα.

Συμπεράσματα

CCRT επαγόμενη CD44v9 εκφράζουν ΚΕΠ φαίνεται να είναι ένα σημαντικό εμπόδιο για την chemoradioselection. CD44v9-στόχευση φαίνεται να είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας των chemoradioselection και τη διατήρηση επακόλουθη οργάνων και την επιβίωση

Παράθεση:. Aso T, Matsuo Μ, Kiyohara Η, Taguchi Κ, Rikimaru F, Shimokawa M, et al . (2015) Πρόκληση CD44 παραλλαγή 9-Εκφράζοντας καρκινικά βλαστικά κύτταρα Μήπως Μειώνει την ένταση αποτελεσματικότητα των Chemoradioselection και επιδεινώνει την πρόγνωση των ασθενών με προχωρημένο καρκίνο κεφαλής και τραχήλου. PLoS ONE 10 (3): e0116596. doi: 10.1371 /journal.pone.0116596

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Torbjörn Ramqvist, του Ινστιτούτου Καρολίνσκα, ΣΟΥΗΔΙΑ

Ελήφθη: 24 του Σεπτέμβρη 2014? Αποδεκτές: 12η Δεκεμβρίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 9 Μαρ, 2015

Copyright: © 2015 Aso et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:.. Grant-in -Aid για την Επιστημονική Έρευνα (C) για να Muneyuki Masuda

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

Παρά τις πρόσφατες προόδους στην διεπιστημονική θεραπείες, η συνολική επιβίωση και την ποιότητα ζωής των ασθενών με προχωρημένο καρκίνωμα κεφαλής και λαιμού πλακωδών κυττάρων (HNSCC) δεν έχουν βελτιωθεί σημαντικά κατά την τελευταία δεκαετία [1, 2] . Έτσι, η δημιουργία κλινικά αποτελεσματικών θεραπειών με βάση HNSCC βιολογία είναι επιτακτική ανάγκη. Στο Τμήμα Ωτορινολαρυγγολογία και Κεφαλής και Τραχήλου Χειρουργικής στο Πανεπιστήμιο Kyushu και των συνδεδεμένων ιδρυμάτων της, μια στρατηγική που ονομάζεται chemoradioselection έχει χρησιμοποιηθεί ως εργαλείο για τη μέτρηση της βιολογικής επιθετικότητα ενός ατόμου όγκου από το 1972 [3-5]. Εν συντομία, οι απαντήσεις των όγκων αξιολογούνται μετά από 30-40 Gy ταυτόχρονων chemoradiothepapy (CCRT). Στη συνέχεια, οι ασθενείς οι οποίοι επιδεικνύουν ευνοϊκές απαντήσεις (δηλαδή, chemoradioselected? CRS), να προχωρήσει σε περαιτέρω CCRT μέχρι 60-70Gy, ενώ εκείνοι με δυσμενείς αντιδράσεις (δηλαδή, μη-chemoradioselected? Ν-CRS), υποβάλλονται σε ριζική χειρουργική επέμβαση, η οποία συχνά οδηγεί σε η απώλεια των ζωτικών οργάνων (π.χ., ο λάρυγγας). Περιέργως, ασθενείς με χρόνια ρινοκολπίτιδα καταδεικνύουν σημαντικά καλύτερη διατήρηση επιβίωση και οργάνων, ανεξάρτητα από κλινικά στάδια τους, γεγονός που υποδηλώνει την ακρίβεια των chemoradioselection [3, 5]. Πρόσφατα, μια παρόμοια έννοια της chemoselection Θεωρήθηκε από μια ομάδα στο Πανεπιστήμιο του Michigan, διευκολύνοντας τη βελτίωση της διατήρησης των οργάνων και την επιβίωση [6-8]. Έτσι, εάν η αποτελεσματικότητα του χημειο- /radioselection ενισχύεται, πιο βελτιωμένη επιβίωση και διατήρηση οργάνων σε ασθενείς, ιδιαίτερα, εκείνων με προχωρημένη HNSCC μπορεί να είναι εφικτή [1]. Με βάση αυτή την κερδοσκοπία ο στόχος αυτής της μελέτης είναι να διευκρινίσει τους μηχανισμούς, τα οποία εξασθενούν τα αποτελέσματα της chemoradioselection να αναπτύξουν κλινικά αποτελεσματικές στοχευμένες θεραπείες.

Κατά τη διάρκεια της τελευταίας δεκαετίας, έχει γίνει φανερό ότι τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ), οι οποίες χαρακτηρίζονται από μεγάλες δυνατότητες για την αυτο-ανανέωση και τον πολλαπλασιασμό των ετερογενών όγκου, μπορεί να είναι η κύρια αιτία της ανθεκτικότητα του όγκου στη συμβατική χημειοθεραπεία /ραδιόφωνο θεραπείες [9]. Επιβίωση ενός ενιαίου CSC μπορεί να προκαλέσει όγκους εκ νέου ανάπτυξη και το πιο σημαντικό έχουν ΚΕΠ έχουν προταθεί για να είναι μια πηγή απομακρυσμένων μεταστάσεων [9]. Σε HNSCC, η τυπική μορφή του CD44 (CD44s) αναγνωρίστηκε για πρώτη φορά ως δείκτης επιφάνεια του ΚΕΠ από τον πρίγκιπα et al, και εκφράζεται σε & lt.? 10% των κυττάρων HNSCC [10]. Ωστόσο, τα αποτελέσματα μιας ανοσοϊστοχημική μελέτη, η οποία έδειξε ότι το 60% -95% των κυττάρων στο φυσιολογικό επιθήλιο της κεφαλής και του τραχήλου και το 60% -100% των κυττάρων HNSCC εξέφρασε CD44s, έχουν εγείρει αμφιβολίες όσον αφορά την αξιοπιστία αυτού του δείκτη [ ,,,0],11]. Επιπλέον, ο εμβολιασμός ενός μικρού αριθμού CD44s-αρνητικών κυττάρων που προκαλείται HNSCC ανάπτυξη ενός χύδην όγκου σε ανοσοκατασταλμένους ποντικού [12, 13]. Αντίθετα, μέσα από μια σειρά από

in vitro

και

in vivo

δοκιμασίες και πειράματα με κλινικά δείγματα, εκτελείται κυρίως στο εργαστήριο του Prof. Saya στο Πανεπιστήμιο Keio, CD44 παραλλαγή 9 (CD44v9) , μια παραλλαγή ματίσματος του CD44, έχει αναδειχθεί ως ένα νέο δείκτη βλαστική ικανότητα του καρκίνου σε μία ποικιλία στερεών όγκων συμπεριλαμβανομένων HNSCC [14-18]. Λειτουργικά, CD44v9 αυξάνει τα ενδοκυτταρικά επίπεδα ανηγμένης γλουταθειόνης (GSH) όταν συνδυάζεται με XCT, προστατεύοντας έτσι τα κύτταρα από ROS και το οξειδωτικό στρες, η οποία είναι μία από τις ξεχωριστές ιδιότητες του ΚΕΠ [14]. Αυτό το σενάριο καλά εξηγεί τον μηχανισμό με τον οποίο μπορούν να επιβιώσουν ΚΕΠ χημειο- /ραδιο θεραπείες, επειδή οι εν λόγω παράγοντες έχουν αναφερθεί ότι ασκούν κυτταροτοξικά αποτελέσματα κυρίως μέσω της παραγωγής ROS από [14, 19]. Πράγματι, σε δείγματα όγκων HNSCC, διπλό ανοσοκηλιδώσεις με ινβολουκρίνη, ένα δείκτη διαφοροποίησης, και CD44v9 κατέδειξε σαφώς μια αλληλοαναιρούνται πρότυπο χρώσης και επαγωγή χημειοθεραπεία κατά προτίμηση θανατώνονται ινβολουκρίνης-θετικά καρκινικά κύτταρα, με αποτέλεσμα την έντονη επαγωγή του CD44v9-θετικά κύτταρα. Τα επίπεδα έκφρασης CD44v9 σε κυτταρικές σειρές HNSCC συσχετίστηκαν με τα αυξημένα επίπεδα ενδοκυτταρικής GHS και αντοχή στη σισπλατίνη. Ετσι, οι θεραπείες του CD44v9-κυτταρικές σειρές που εκφράζουν HNSCC με έναν αναστολέα του XCT, σουλφασαλαζίνη, ανέστειλε σημαντικά την κυτταρική βιωσιμότητα και την ανάπτυξη του όγκου σε γυμνούς ποντικούς και αυξημένη ευαισθησία στη σισπλατίνη [16].

Εν όψει των ευρημάτων αυτών, εμείς ανοσοϊστοχημικά εξέτασε τα επίπεδα έκφρασης CD44v9 πρωτεΐνης σε κλινικά δείγματα που λαμβάνονται από ασθενείς με προχωρημένο HNSCC αγωγή σύμφωνα με την με βάση την πλατίνα στρατηγική chemoradioselection για να προσδιοριστεί εάν CD44v9-κύτταρα που εκφράζουν HNSCC κατέχουν βλαστική ικανότητα και να προκαλέσει κυτταρική ανθεκτικότητα σε chemoradioselection.

Υλικά και Μέθοδοι

τα χαρακτηριστικά των ασθενών, υπο-ομαδοποίηση και δείγματα ιστών

Μέσα από μια αναζήτηση ιατρικό διάγραμμα για τους ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπεία σε ινστιτούτο μας 1997-2008, επιλέξαμε 102 ασθενείς σε αυτή τη μελέτη οι οποίοι συναντήθηκαν τα ακόλουθα κριτήρια: (1) τα άτομα με μη προθεραπευμένο υποφάρυγγα, του λάρυγγα ή ασθενείς με καρκίνο του στόματος κοιλότητα με το στάδιο ΙΙΙ ή IV του όγκου σύμφωνα με την κατάταξη UICC ΤΝΜ (2002)? (2) εκείνους που έλαβαν με τη στρατηγική chemoradioselection? (3) εκείνους που δεν έχουν μακρινή μετάσταση? και (4) εκείνες με βιοψία ή /και αφαιρούνται χειρουργικά δείγματα που προφανώς περιείχαν επεμβατική μέτωπα του όγκου που ήταν παρακείμενα ή περιβάλλονται από σχετίζονται με όγκους στρώματος σε σταθεροποιημένο με φορμαλίνη εγκλεισμένο σε παραφίνη ιστό αρχείο μας? Αυτό το τελευταίο κριτήρια συμπεριλήφθηκε επειδή βαθμολόγησης της ανοσοχρώση πραγματοποιήθηκε σε αυτά τα μέτωπα του όγκου, όπως περιγράφεται παρακάτω. Οι HNSCCs που σχετίζονται με ιούς (δηλαδή, ρινοφάρυγγα και του στοματοφάρυγγα) αποκλείστηκαν από τις αναλύσεις για να επικεντρωθεί στο βιολογικό ρόλο της CD44v9. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Εθνικού Kyushu Κέντρο Καρκίνου (Όχι 2013 με 107). Γραπτή συγκατάθεση δόθηκε από τους συμμετέχοντες για τα κλινικά αρχεία τους για να χρησιμοποιηθούν σε αυτή τη μελέτη

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Όλοι οι ασθενείς ήταν υπό παρακολούθηση για & gt?. 60 μήνες? η μέση περίοδος παρακολούθησης ήταν 51,7 μήνες (εύρος: 2-151). μέσος όρος ηλικίας τους ήταν 60,8 χρόνια. Υπήρχαν 27 ασθενείς με καρκίνωμα υποφάρυγγα, 40 ασθενείς με καρκίνωμα του στόματος, και 35 ασθενείς με καρκίνωμα του λάρυγγα.

Η

Τα μαθήματα θεραπεία των ασθενών που φαίνεται στο Σχ. 1. Μετά 30-40 Gy του CCRT που περιλαμβάνει cisplatin (CDDP? 15mg /m

2 /ημέρα) ή parapalatin (CBDCA? AUC = 1 /ημέρα) από την ημέρα 1 έως 5 και εξωτερική ακτινοβολία (2.0 Gy /ημέρα) 5 ημέρες την εβδομάδα, 30 ασθενείς ταξινομήθηκαν στην ομάδα CRS (κλινική πλήρη ανταπόκριση στην αρχική τοποθεσία) και οι υπόλοιποι 72 ασθενείς ταξινομήθηκαν στην ομάδα Ν-CRS

CCRT, ταυτόχρονη χημειοακτινοθεραπεία.? CDDP, σισπλατίνη? CBDCA, Paraplatin? AUC, περιοχή κάτω από την καμπύλη? και PND, προγραμματισμένη ανατομή λαιμό.

Η

Μετά από προσεκτική εξέταση του αρχείου ιστού, επιλέχθηκαν 30 δείγματα βιοψίας από ασθενείς Ν-CRS και 30 ζεύγη βιοψίας και αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα από τους ίδιους τους ασθενείς Ν-CRS. Ωστόσο, οι υπόλοιποι 42 ασθενείς στο σκέλος Ν-CRS δεν έχουν την κατάλληλη δείγματα βιοψίας που πληρούσαν τα κριτήρια που αναφέρονται παραπάνω? Ως εκ τούτου, μόνο αφαιρεθεί χειρουργικά ιστοί συλλέχθηκαν από αυτόν τον πληθυσμό. Κατά συνέπεια, συνολικά 132 (60 βιοψίας και 72 αφαιρεθεί χειρουργικά) δείγματα ιστού υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σε αυτή τη μελέτη.

Η ανοσοϊστοχημεία και σκοράροντας

Αντι-ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα IgG CD44v9 αρουραίου (RV3), η οποία συγκεκριμένα αναγνωρίζει την ανθρώπινη CD44v9, δημιουργήθηκε και παραχωρήθηκε ευγενικά από τον καθηγητή Saya, το Keio University. Αυτό το αντίσωμα έχει χρησιμοποιηθεί σε προηγούμενες μελέτες [15, 16, 18]. Η ανοσοχρώση για CD44v9 διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15]. Εν συντομία, ένας Vectastain Elite ABC Πρότυπο Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) με ένα θερμαινόμενο επαγόμενη, αντιγόνο ανάκτηση βήμα χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει ανοσοϊστοχημική χρώση για CD44v9. Ξυλόλιο χρησιμοποιήθηκε για deparaffinize τα τμήματα, τα οποία επανυδατώθηκαν σε μια σειρά από αιθανόλες. Heat-επαγόμενη ανάκτηση επιτόπου διεξήχθη σε Target Ανάκτηση Solution (S-1699, ϋΑΚΟ, Tokyo, Japan) σε αυτόκλειστο στους 121 ° C για 15 λεπτά. Μετά από ψύξη σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά, τα πλακίδια πλένονται επιμελώς σε Tris-ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα (TBS), ρΗ 7.6. Η ενδογενής δράση υπεροξειδάσης αποκλείσθηκε σε θερμοκρασία δωματίου με επεξεργασία με υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3% εντός μεθανόλης επί 30 λεπτά. Οι τομές πλύθηκαν σε TBS και στη συνέχεια μεταφέρθηκε σε ένα σύστημα χρώσης Shandon Sequenza σε υγροποιημένο θάλαμο (Thermo Fisher Scientific Κ.Κ., Yokohama, Ιαπωνία). Η μη ειδική δέσμευση αντισώματος αναστάλθηκε με επώαση των τμημάτων σε 10% φυσιολογικό ορό κουνελιού. Τα πλακίδια επωάστηκαν με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι CD44v9 (RV3) (αραιωμένο 1: 12.500? 0,2 μg /ml) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Αυτές οι τομές πλύθηκαν τρεις φορές με TBS και επωάστηκαν για 30 λεπτά σε βιοτινυλιωμένη IgG κουνελιού αντι-αρουραίου (Dako, Tokyo, Japan) αραιωμένο 1: 200 σε αραιωτικό αντισώματος. Το Metal Enhanced Kit ΣΔΠ υποστρώματος (Thermo Scientific) χρησιμοποιήθηκε για την οπτικοποίηση της έκφρασης CD44v9. Τα πλακίδια με αιματοξυλίνη. Κατάλληλη αρνητικοί και θετικοί έλεγχοι χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε πείραμα χρώσης. Υπήρχαν 2 τύποι αρνητικών μαρτύρων: 1) μη-άνοση αρουραίου IgG2a-Αρνητικός μάρτυρας ισοτύπου (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA) με την ίδια συγκέντρωση όπως το πρωτογενές αντίσωμα και 2) ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης χωρίς το πρωτεύον αντίσωμα. Ο καρκίνος του μαστού ιστός χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος,

Θεωρώντας ότι τα βασικά κύτταρα στην κανονική επιθήλιο της ανώτερης αναπνευστικής οδού δείχνουν θετική χρώση για CD44v9 (Εικ. 2Α), καταμέτρηση του CD44v9-θετικών κυττάρων πραγματοποιήθηκε σε οι επεμβατικές μέτωπα των όγκων που ήταν δίπλα ή περιβάλλεται από σχετίζονται με τον όγκο στρώμα για να μετρήσει αποκλειστικά τα καρκινικά κύτταρα. Η προσέγγιση αυτή βασίζεται στην κερδοσκοπία που ΚΕΠ, συμπεριλαμβανομένων και εκείνων των HNSCC, συχνά κατοικούν στην κόγχη που βρίσκεται στο σχετίζονται με τον όγκο στρώματος [9, 20]. Μικροσκοπική ανάλυση διεξήχθη με 2 ανεξάρτητους παρατηρητές, καθώς και μια εξειδικευμένη ιστοπαθολόγου (ΚΤ) και της μέσης τιμής υιοθετήθηκε για τη βαθμολόγηση.

Η ένταση χρώσης που ελήφθησαν στα βασικά κύτταρα του φυσιολογικού επιθηλίου χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος (Α) . δείγματα όγκου κατέδειξε ισχυρή (Β), μέτρια (C), και ασθενή (D) εντάσεις σε σχέση με το μάρτυρα (Α). Αντίστοιχες θετικό (Ε) και αρνητικό (F) χρώσεις. Bar δείχνει 200 ​​um.

Η

Η βαθμολογία χρώση CD44v9 καθορίστηκε από το άθροισμα της βαθμολογίας ποσότητα (δηλαδή, το ποσοστό των θετικών καρκινικών κυττάρων) και η ποιότητα βαθμολογία (δηλαδή η ένταση της χρώσης σε σύγκριση με η χρώση των φυσιολογικών βασικών κυττάρων) χρησιμοποιώντας μία μέθοδο που είχε προταθεί αρχικά από Bankfalvi κ.ά. [21]. Οι βαθμολογίες ποσότητα ορίστηκαν ως ακολούθως: 0%, κανένα θετικό κύτταρο? 1, 1% -25%? 2, 26% -75%? και 3, 76% -100%. Οι βαθμολογίες ποιότητας ορίστηκαν ως εξής: -1, ομοιογενώς ασθενή χρώση? 0, ετερογενή παρόμοια ή ισχυρή χρώση? και 1, ομοιογενώς παρόμοια ή ισχυρή χρώση. Με βάση αυτό το σύστημα βαθμολόγησης, δείγματα με βαθμολογίες από -1~1 ταξινομήθηκαν ως CD44v9-αρνητικά και τα δείγματα με τα αποτελέσματα από 2~5 κατηγοριοποιήθηκαν ως CD44v9 θετικά.

Η ταξινόμηση των απαντήσεων όγκου CCRT

τα θεραπευτικά αποτελέσματα της CCRT στα χειρουργικά δείγματα αξιολογήθηκαν σύμφωνα με τα κριτήρια που καθορίζονται στους γενικούς κανόνες για κλινικές μελέτες σε καρκίνο κεφαλής και τραχήλου (5

ου Edition) άλλαξε από την Japan Society για καρκίνο κεφαλής και τραχήλου. Εν συντομία, τα αποτελέσματα κατατάσσονται σε 4 κατηγορίες: Βαθμός 0, καμία επίδραση? Grade 1, μικρή επίδραση με ≤1 /3 καρκινικά κύτταρα εξακολουθούν να είναι βιώσιμα? Βαθμού 2, ισχυρή επίδραση με 1/3 & gt? καρκινικά κύτταρα βιώσιμο? και 3ου βαθμού, πλήρης ανταπόκριση χωρίς βιώσιμα κύτταρα.

Στατιστικές αναλύσεις

Μια δοκιμή αθροίσματος κατάταξης Wilcoxon χρησιμοποιήθηκε για να αναλυθεί η σημασία της έκφρασης CD44v9 σε δείγματα βιοψίας με chemoradioselection (δηλαδή, CRS έναντι Ν -CRS). Αναλύσαμε τους συσχετισμούς μεταξύ των επιπέδων έκφρασης CD44v9 σε δείγματα βιοψίας και την επαγωγή CD44v9 και θεραπείες επιπτώσεις στο αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα που χρησιμοποιεί το ακριβές τεστ του Fisher ενός. Για να συγκρίνετε τις συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωση (DSS) ρυθμούς μεταξύ των συγκεκριμένων ομάδων, οι καμπύλες Kaplan-Meier δημιουργήθηκαν, καθώς και μια δοκιμή Wilcoxon χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των στατιστικές διαφορές. Μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική μοντέλο αναλογικού κινδύνου Cox χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό των επιπτώσεων των clinicopathlogical παραγόντων σχετικά με τα ποσοστά DSS. Οι τιμές των

P

& lt? 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές. Όλες οι αναλύσεις επιβεβαιώθηκε από μια εξειδικευμένη στατιστικολόγο (M.S).

Αποτελέσματα

ανοσοκηλιδώσεις

Οι αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες της χρώσης CD44v9 φαίνονται στο Σχ. 2. Η κατανομή των βαθμολογιών για τα 60 δείγματα βιοψίας ήταν ως ακολούθως: στείλει -1, 0? σκοράρει 0, 13? σκοράρει 1,15: σημειώσει 2, 24? βαθμολογία: 3, 4? βαθμολογία: 4, 4? και να σκοράρει 5, 0. Από την άλλη πλευρά, τα 72 χειρουργικά δείγματα έδειξε την ακόλουθη κατανομή: σκοράρει -1,0? σκοράρει 0, 11? βαθμολογία, 1,30: σκορ 2, 18? βαθμολογία: 3, 13? βαθμολογία: 4, 0? και το σκορ 5, 0. Κατά συνέπεια, η CD44v9 θετικό ποσοστό ήταν 53% (32/60) για τα δείγματα βιοψίας, και 43% (31/72) για τα χειρουργικά δείγματα. Τρία κύρια αξιοθέατα, στοματική κοιλότητα, υποφάρυγγα και λάρυγγα, έδειξε παρόμοια επίπεδα έκφρασης CD44v9 στη βιοψία (

Ν

= 60,

P

= 0,39) και αφαιρούνται χειρουργικά (

N

= 72,

P

= 0.092) δείγματα. Όταν συγκρίθηκαν οι βαθμολογίες χρώσης μεταξύ ζευγών βιοψίας και χειρουργικά δείγματα που λαμβάνονται από την ταυτόσημη 30 ασθενείς, 12 ασθενείς έδειξαν μία αύξηση στην έκφραση CD44v9 στα χειρουργικά δείγματα (που ορίζεται ως το CD44v9 επαγόμενη ομάδα), ενώ στις υπόλοιπες 18 ασθενείς (που ορίζεται ως το CD44v9-μη επαγόμενη ομάδα), οι βαθμολογίες μειώθηκαν ή αμετάβλητη. Τα ζευγαρωμένα δείγματα βιοψίας αποτελούνταν όγκων από υποφάρυγγα (9), της στοματικής κοιλότητας (13), και του λάρυγγα (9). Κάθε τρεις περιοχές έδειξαν παρόμοια ποσοστά της επαγωγής CD44v9 (38-44%).

Κλινικά μαθήματα, απαντήσεις σε CCRT και μετεγχειρητική CCRT

Καμπύλες κατά Kaplan-Meier χρησιμοποιήθηκαν (Εικ. 3Α) για την ανάλυση τα κλινικά αποτελέσματα της χρόνιας ρινοκολπίτιδας και Ν-CRS ασθενείς (Εικ. 1). Συνεπής με τα προηγούμενα ευρήματά μας, ασθενείς με χρόνια ρινοκολπίτιδα έδειξαν σημαντικά (

P

& lt? 0.001) καλύτερη επιβίωση [3, 5]. Οι 72 αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα αποδεικνύεται G1 (

Ν

= 58) ή G2 (

Ν

= 14) απαντήσεις σε αρχική CCRT. Μεταξύ των ασθενών Ν-CRP 72, 54 υποβλήθηκαν σε pot-operative CCRT. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ των καμπυλών Kaplan-Meier των ασθενών με ή χωρίς pot-λειτουργική CCRT (

P

= 0,507).

(Β) Νόσος καμπύλες συγκεκριμένες επιβίωσης με βάση το CD44 V9 θετικότητα των δειγμάτων βιοψίας (n = 60) που λαμβάνεται από 30 chemoradioselected (CRS) ασθενείς και 30 μη-chemoradioselected (Ν-CRS) ασθενείς. καμπύλες συγκεκριμένες επιβίωσης (C) νόσου με βάση τον CD44 V9 θετικότητα των δειγμάτων βιοψίας που λαμβάνονται από 30 ασθενείς με Ν-CRS.

Η

Σύλλογος πρωτογενούς όγκου με chemoradioselection και πρόγνωση

Στη συνέχεια, εξετάστηκε κατά πόσον η κύρια περιοχή του όγκου επηρέασε την chemoradioselection και ασθενείς επιβίωσης. Οι καρκίνοι της στοματικής κοιλότητας αποδειχθεί αισθητά χαμηλότερο ποσοστό chemoradioselection (1/40, 3%) από ό, τι στοματοφάρυγγα (14/27, 52%) και του λάρυγγα (15/35, 42%), σύμφωνα με μια γενική συναίνεση ότι ο καρκίνος της στοματικής κοιλότητας είναι σχετικά ανθεκτικά στην χημειοθεραπεία /ακτινοβολία μεταξύ HNSCCs [22]. Ωστόσο, στην Kaplan-Meier αναλύσεις των αφαιρεθεί χειρουργικά δείγμα (

N

= 72), ο ρυθμός DSS 5-yr από τον καρκίνο του στόματος κοιλότητα (50%) ήταν παρόμοια (Ρ = 0,80) με εκείνα του υποφάρυγγα (65%) και του λάρυγγα (55%).

η έκφραση της CD44v9 σε δείγματα βιοψίας

για να εκτιμηθεί η κλινική σημασία της επίδρασης της εγγενούς έκφρασης CD44v9 σε chemoradioselection και ασθενείς επιβίωση, συγκρίναμε τα επίπεδα έκφρασης CD44v9 στα 60 μη επεξεργασμένα δείγματα βιοψίας που λαμβάνεται από CRS (

N

= 30) και Ν-CRS (

N

= 30) ασθενείς. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στα επίπεδα έκφρασης CD44v9 μεταξύ της CRS και των δειγμάτων Ν-CRS (

P

= 0,8289). Επιπλέον, CD44v9 θετικότητα δεν επηρέασε Καμπύλες κατά Kaplan-Meier DSS είτε στο CRS συν Ν-CRS ομάδα (

P

= 0,64? Εικ. 3Β) ή στην ομάδα Ν-CRS (

P

= 0,97? Εικ. 3C). Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με την μονομεταβλητό μοντέλο Cox αναλογικών κινδύνων (HR: 1.086, 95% CI: 0,68 – 1,72?

P

= 0,72). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα επίπεδα έκφρασης των εγγενών CD44v9 στα δείγματα βιοψίας δεν είναι χρήσιμο ως προγνωστικός δείκτης chemoradioselection και την επιβίωση των ασθενών.

Η έκφραση της CD44v9 σε οι αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα

Κατά την άποψη της οι παραπάνω διαπιστώσεις, αναλύσαμε το αν τα επίπεδα έκφρασης των CCRT που προκαλείται CD44v9 συσχετίστηκαν με τα δυσμενή αποτελέσματα στα αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα που λαμβάνονται από ασθενείς Ν-CRS. Η βάση για την ανάλυση αυτή ήταν η προηγούμενη παρατήρηση ότι η επαγωγή χημειοθεραπεία προφανώς ενίσχυσε την υποσύνολο του CD44v9 κυττάρων που εκφράζουν στους όγκους HNSCC [16]. Σε ασθενείς με Ν-CRS, το CD44v9-θετική ομάδα (

Ν

= 31) έδειξε σημαντικά (

P

= 0,008) χειρότερα DSS από την CD44v9-αρνητική ομάδα (

N

= 41) (Σχ. 4Α). Δεδομένου ότι επιβεβαιώθηκε ότι η κύρια περιοχή του όγκου δεν επηρέασε το DSS όπως προαναφέρθηκε, εξετάσαμε τα αποτελέσματα των τεσσάρων παραγόντων, δηλαδή, Τ, Ν, αποκρίσεις όγκου σε CCRT και CD44v9 θετικότητα στο ρυθμό ΣΑΤ των ασθενών τόσο από μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντικές αναλύσεις με ένα μοντέλο Cox αναλογικών κινδύνων (Πίνακας 2). Οι μονοδιάστατες αναλύσεις έδειξαν σημαντικά αυξημένο κίνδυνο θανάτου από ασθένειες ειδικά σε CD44v9-θετικούς ασθενείς (HR: 2,033, 95% CI: 1,071 – 3,859?

P

= 0,03) και με την προηγμένη Ν (HR: 3.091, 95 % CI: 1,045 – 9,060?

P

= 0,0397). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, CD44v9 θετικότητα (HR: 3,145, 95% CI: 1,235 – 8,008,

P

= 0,0163) και προχωρημένο στάδιο Ν (HR: 3,525, 95% CI: 1,054 – 9,060,

P

= 0.0228) συσχετίζονταν σημαντικά με κακή πρόγνωση (HR: 3,140, ​​95% CI: 1,230 – 8,017?

P

= 0,0167), γεγονός που υποδηλώνει ότι μεταξύ των τεσσάρων αυτών παραγόντων, επίπεδο έκφρασης CD44v9 είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη στον πληθυσμό Ν-CRS, μαζί με προχωρημένο στάδιο Ν.

(Β) Diseasespecific καμπύλες επιβίωσης των 30 ασθενών Ν-CRS που είχαν ζεύγη βιοψίας και αφαιρούνται χειρουργικά δείγματα. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε 2 ομάδες ανάλογα με τα επίπεδα της έκφρασης CD44v9 πριν και μετά την ταυτόχρονη χημειοραδιοθεραπεία.

Η

Σύγκριση των ζευγών δειγμάτων

Στη συνέχεια, ανέλυσε το αν η CD44v9-θετικότητα στο δείγμα βιοψίας συσχετίζεται με την επαγωγή της CD44v9 στα αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα. Περιέργως, οι αυξήσεις της βαθμολογίας CD44v9 παρατηρήθηκαν κυρίως (

P

= 0,0236) σε ασθενείς με CD44v9-αρνητικά δείγματα βιοψίας (64%, 9/14) από ό, τι CD44v9-θετικούς ασθενείς (19%, 3/16) . Τα επίπεδα έκφρασης CD44v9 στα δείγματα βιοψίας δεν συσχετίζονται με την κατάταξη της ανταπόκρισης του όγκου σε CCRT αξιολογούνται τα ζεύγη αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα (

P

= 0,3992). Εμείς περαιτέρω σύγκριση DSS καμπύλες μεταξύ του CD44v9 που προκαλείται από την ομάδα (

Ν

= 12) και ομάδα CD44v9-μη-επαγόμενη (

Ν

= 18) και διαπίστωσε ότι ο πρώην είχαν σημαντικά (p = 0.04) τον χειρότερο λόγο DSS (Σχ. 4Β).

Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν έντονα ότι CCRT επαγόμενη έκφραση CD44v9 όχι ενδογενή έκφραση είναι ένα θεραπευτικό εμπόδιο για chemoradioselection.

Συζήτηση

κατά τη διάρκεια της τελευταίας δεκαετίας, ο στυλοβάτης της θεραπείας για προχωρημένους HNSCC έχει μετατοπιστεί από την αρχική ριζική χειρουργική εκτομή σε συνδυασμό με μετεγχειρητική ακτινοθεραπεία με τη δόση-ενταθεί θεραπευτικά πρωτόκολλα, τα οποία έχουν ως κύριο στόχο τη διατήρηση του οργάνου [23, 24]. Η τάση αυτή έχει σημαντικά προχωρήσει από την πρόσφατη εισαγωγή της CCRT (π.χ. κλινικές δοκιμές με επικεφαλής τον Therapy Oncology Group Ακτινοβολία (RTOG)) και διαδοχική θεραπεία περιλαμβάνει χημειοθεραπεία εφόδου και CCRT (π.χ., Φορολογικές 324 πρωτόκολλα), οι οποίες οδήγησαν σε περαιτέρω βελτιώσεις στην διατήρηση οργάνων, τοποπεριοχική έλεγχο, και την επιβίωση [25-28]. Παρ ‘όλα αυτά, όπως υποδεικνύεται από πρόσφατες μελέτες ή αξιολογήσεις, αυτά τα πρωτόκολλα φαίνεται να έχουν φθάσει στο ανώτατο όριο της ανθρώπινης ανοχής της οξείας και υποξείας τοξικότητας, τα οποία έχουν προκαλέσει συχνές δυσλειτουργία laryngoesophageal και πιθανή θάνατοι σχετίζονται με τη θεραπεία [29-31]. Ως εκ τούτου, κρίνεται απαραίτητο να μειώσετε την τρέχουσα υπερβολική ένταση της θεραπείας για προχωρημένους HNSCC με τη βελτιστοποίηση του θεραπευτικού δείκτη. Από την άλλη πλευρά, έχουμε χρησιμοποιήσει μια στρατηγική chemoradioselection να επωφεληθούν πλήρη πλεονεκτήματα ριζική εκτομή και CCRT, αποφεύγοντας τις σοβαρές οξείες και αργά τοξικότητες. Σε προηγούμενες μελέτες μας, ασθενείς με χρόνια ρινοκολπίτιδα έδειξαν σημαντικά καλύτερη επιβίωση με ένα λειτουργικό λάρυγγα από τους ασθενείς Ν-CRS [3, 5], σύμφωνα με τα ευρήματα της παρούσας μελέτης. Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η στρατηγική chemoradioselection μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη προσέγγιση για την προηγμένη HNSCC, η οποία μπορεί να βελτιστοποιήσει τη θεραπευτική σχέση. Ωστόσο, είναι προφανές ότι το ποσοστό των ασθενών με χρόνια ρινοκολπίτιδα πρέπει να αυξηθεί για την περαιτέρω βελτίωση των ποσοστών διατήρησης των οργάνων και την επιβίωση του ασθενούς. Ο εντοπισμός και η στόχευση των μορίων που παρακάμπτουν τις επιπτώσεις της chemoradioselection φαίνεται να είναι μια πολύ αποτελεσματική στρατηγική για την επίτευξη αυτού του στόχου [1]. Όπως αναφέρθηκε παραπάνω, εντός του τρέχοντος εννοιολογικό πλαίσιο της βιολογίας του καρκίνου, ΚΕΠ είναι πιθανότατα οι κύριες αιτίες της κυτταρικής ανθεκτικότητα σε CCRT? Ως εκ τούτου, οι ΚΕΠ αναμένεται να σχετίζονται με το μηχανισμό που εξασθενεί την αποτελεσματικότητα του chemoradioselection [1, 9].

Σε αυτό το πλαίσιο, υποθέσαμε ότι σε προχωρημένες HNSCC η έκφραση ενός θεωρούμενου δείκτη CSC, CD44v9, Μάιος είναι υπεύθυνη για την κυτταρική αντίσταση σε chemoradioselection. Τα δεδομένα μας έδειξε σαφώς ότι η έκφραση του CD44v9 συσχετίστηκε με κακή έκβαση των ασθενών που έλαβαν θεραπεία με τη στρατηγική chemoradioselection, η οποία επιβεβαίωσε την υπόθεσή μας. Επιπλέον, παρείχε την πρώτη κλινική απόδειξη ότι CD44v9 μπορεί να είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη και, κατά συνέπεια, μια εκμεταλλεύσιμη μοριακός στόχος για τη θεραπεία του προχωρημένου HNSCC. Επιπλέον, μεταξύ άλλων κλινικοπαθολογοανατομικές παράγοντες που έχουν χρησιμοποιηθεί ως συμβατικός προγνωστικοί δείκτες της HNSCC, η έκφραση του CD44v9 ήταν σημαντικά σχετίζονται με την κακή πρόγνωση των ασθενών σε πολυπαραγοντικές αναλύσεις, μαζί με προχωρημένο στάδιο Ν (Πίνακας 2). Αξίζει να σημειωθεί ότι CD44v9 κατέδειξε τη χαμηλότερη

P

-τιμή από Ν στάδιο. Παρ ‘όλα αυτά, τα ευρήματά μας που CCRT επαγόμενη έκφραση CD44v9 παρά την εγγενή έκφραση είχε προγνωστική αξία θα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Προφανώς, CD44v9 έκφραση από μόνη της δεν είναι αρκετή για να δείξει την ιδιότητα των βλαστική ικανότητα σε καρκινικά κύτταρα? CD44v9 που εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα είναι πιθανόν να αποτελείται από ΚΕΠ και μη ΚΕΠ. Κατά συνέπεια, η κλινική σημασία της έκφρασης CD44v9 στη στρατηγική chemoradioselection μπορούσε να εξηγηθεί από τουλάχιστον 3 σενάρια, όπως απεικονίζεται στο Σχ. 5. Όταν οι όγκοι δεν περιέχουν CD44v9 εκφράζουν ΚΕΠ, η συνολική θανάτωση των κυττάρων από CCRT είναι εφικτό (δηλαδή, CRS? Εικ. 5Α). Από την άλλη πλευρά, όταν οι όγκοι περιέχουν CD44v9 εκφράζουν ΚΕΠ μπορούν να επιβιώσουν CCRT (δηλαδή, Ν-CRS? Εικ. 5Β). Επιπλέον, υπάρχει μια πιθανότητα ότι CCRT, εργάζεται ως επιλεκτική πίεση, μπορεί να προκαλέσει βλαστική ικανότητα σε CD44v9 που εκφράζουν μη-ΚΕΠ και να οδηγήσουν σε επιβίωση των κυττάρων του καρκίνου (δηλαδή, Ν-CRS? Εικ. 5C). Αυτές οι επιλεκτικές επιβιώσεις των ΚΕΠ θεωρείται πηγές της τοπικής εισβολής, καθώς και τις περιφερειακές και απομακρυσμένες μεταστάσεις, οι οποίες στη συνέχεια να επιδεινώσει τα αποτελέσματα των ασθενών Ν-CRS. Τα προηγούμενα ευρήματα ότι η επαγωγή χημειοθεραπεία αυξάνει το CD44v9 που εκφράζει πληθυσμό κυττάρων στον καρκίνο του στόματος [16], όταν λαμβάνονται μαζί με διαπίστωσή μας ότι CCRT επαγόμενη έκφραση CD44v9 συσχετίζεται σημαντικά με κακή πρόγνωση, υποστηρίζουν τη θεωρία μας ότι χημειο- /ακτινοθεραπεία, σε μια δεδομένη περίσταση, μπορεί να λειτουργήσει ως δύναμη της επιλεκτικής σκούπισμα ή επιλεκτική πίεση που οδηγεί την εξέλιξη HNSCC, που οδηγεί στην εμφάνιση των πολυδύναμων ΚΕΠ [1]. Αυτά τα σενάρια (Εικ. 5) φαίνεται να εξηγήσει το λόγο για τον οποίο δεν είναι η εγγενής, αλλά η CCRT επαγόμενη έκφραση CD44v9 ήταν χρήσιμο ως βιοδείκτη στη στρατηγική chemoradioselection μας. Στα δείγματα βιοψίας, δεν είναι εφικτό να ανιχνεύσει ειδικά το CD44v9 που εκφράζει CSC ή CD44v9 εκφράζουν πληθυσμός μη CSC που τελικά αποκτούν βλαστική ικανότητα μετά CCRT: δηλαδή να διακρίνει το μοτίβο Β και Γ από A. Από την άλλη πλευρά, στην αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα των ασθενών Ν-CRS που υποβλήθηκαν σε CCRT, οι CD44v9-κύτταρα που εκφράζουν υποτίθεται ότι πρέπει να εμπλουτισμένου με ΚΕΠ, ενισχύοντας την αξία της έκφρασης CD44v9 ως βιοδείκτη.

(Α) CD44v9 εκφράζουν μη -CSCs είναι ευαίσθητα σε CCRT. Εγγενή ΚΕΠ CD44v9 εκφράζουν (Β) ή ΚΕΠ CD44v9 εκφράζουν CCRT που προκαλείται από (C) μπορεί να επιβιώσει CCRT. Αυτά τα CD44v9 εκφράζουν ΚΕΠ θεωρείται εξαιρετικά διεισδυτική και μεταστατική. CSC, καρκίνο βλαστικών κυττάρων? CCRT, ταυτόχρονη χημειοραδιοθεραπεία? CRS, chemoradioselected? και Ν-CRS, μη chemoradioselected.

Η

Η σουλφασαλαζίνη είναι ένα καλά χαρακτηρισμένο ειδικός αναστολέας της XCT μεταφορά μέσω κυστίνη [17] και ως εκ τούτου αναμένεται να στερήσει CD44v9 που εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα από το μηχανισμό άμυνας κατά ROS. Πράγματι, η χορήγηση της σουλφασαλαζίνης ενίσχυσε την ενδοκυτταρική δραστηριότητα των ROS σε

in vivo δοκιμασίες

[17] και ευαισθητοποιημένα κυτταρικές σειρές HNSCC να CDDP [16]. Ως εκ τούτου, αναμένεται ότι η θεραπεία συνδυασμού της σουλφασαλαζίνης και CCRT μπορεί να ενισχύσει σημαντικά τις επιδράσεις της chemoradioselection ευαισθητοποιώντας τόσο εγγενή και CCRT επαγόμενη ΚΕΠ CD44v9 που εκφράζουν (Εικ. 5Α και 5Β) να CCRT, και να βελτιώσει τα αποτελέσματα των ασθενών με προχωρημένο HNSCC. Δεδομένου ότι η σουλφασαλαζίνη είναι ένα εμπορικά διαθέσιμο φάρμακο που έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό για τη θεραπεία ασθενών με ελκώδη κολίτιδα και η ρευματοειδής αρθρίτιδα, οι κλινικές δοκιμές του πρωτοκόλλου αυτού είναι τώρα υπό περισυλλογή.

Εν κατακλείδι, CD44v9 στόχευση μπορεί να παρέχει μια νέα προσέγγιση στην κλινικά εφικτό CSC-στοχευμένη θεραπεία για HNSCC που μπορεί να ενισχύσει την αποτελεσματικότητα της chemoradioselection και τη βελτίωση της διατήρησης των οργάνων και την επιβίωση.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς ευχαριστήσω τον καθηγητή Hideyuki Saya για την παροχή μας με το αντίσωμα CD44v9 ( RV3) και για τις εποικοδομητικές παρατηρήσεις του σχετικά με αυτή τη μελέτη.