Αφηρημένο

Η έρευνα για

hMLH1

και

hMSH2

μεταλλάξεις έχουν την τάση να επικεντρώνονται σε σύνδρομο Lynch (LS) και LS-όπως καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC). Δεν μελέτες μέχρι σήμερα έχουν αξιολογηθεί ο ρόλος του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια σε μάζα σποραδικές CRC (χωρίς προεπιλογή από MSI ή πρώιμη ηλικία έναρξης). Έχουμε ως στόχο να προσδιορίσει τα νέα

hMLH1

και

hMSH2

παραλλαγές του DNA, για να καθορίσει τις συχνότητες μετάλλαξης και sites τόσο σποραδική και LS CRC και τις σχέσεις τους με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά της CRC στα βορειοανατολικά της Κίνας. 452 σποραδικές και 21 LS CRC ασθενείς εξετάστηκαν για βλαστικής σειράς και σωματικών μεταλλάξεων στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια με αλληλούχιση PCR-SSCP. Εντοπίσαμε 11

hMLH1

και επτά

hMSH2

DNA παραλλαγές στην ομάδα μελέτης μας. Έξι από αυτούς ήταν μυθιστόρημα: τέσσερις στο

hMLH1

γονίδιο (IVS8-16 A & gt? T, c.644 GAT & gt? Γ.Ο.Σ., c.1529 CAG & gt? CGG και c.1831 ΣΕΟ & gt? ΤΤΤ) και δύο στο

hMSH2

γονίδιο (-39 C & gt? T, AACAACA εισαγωγή σε c.1127 και διαγραφή AAG σε c.1129). Σε σποραδικές CRC, βλαστική και σωματική μετάλλαξη συχνότητες

hMLH1

/

hMSH2

γονιδίου ήταν 15,59% και 17,54%, αντίστοιχα (

σ

= 0,52). μεταλλάξεις βλαστικής σειράς που υπάρχουν στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 5,28% και 10,78%, αντίστοιχα (

σ

& lt? 0,01). Σωματικές μεταλλάξεις στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 6,73% και 11,70%, αντίστοιχα (

p =

0.02). Στο LS CRC, το γονίδιο τόσο βλαστικής σειράς και σωματικά συχνότητες μετάλλαξης του

hMLH1

/

hMSH2

ήταν 28.57%. Η πιο διαδεδομένη βλαστική ιστοσελίδα μετάλλαξη στο

hMSH2

γονίδιο c.1168 CTT & gt? ΤΤΤ (3,90%), ένας πολυμορφισμός. Σωματικά συχνότητα μετάλλαξης του

hMLH1

/

hMSH2

γονίδιο ήταν σημαντικά διαφορετική σε εγγύς, άπω του παχέος εντέρου και του καρκίνου του ορθού (

σ

= 0,03). Τα ευρήματά μας διαφωτίσει το φάσμα μετάλλαξη και τη συχνότητα των

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια σε σποραδικές και LS CRC, και τις σχέσεις τους με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά της CRC

Παράθεση:. Hu F , Li D, Wang Υ, Yao Χ, Zhang W, Liang J, et al. (2013) Μυθιστόρημα DNA Παραλλαγές και Μετάλλαξη συχνότητες των

hMLH1

και

hMSH2

Τα γονίδια για τον καρκίνο του παχέος εντέρου στα βορειοανατολικά της Κίνας πληθυσμού. PLoS ONE 8 (4): e60233. doi: 10.1371 /journal.pone.0060233

Επιμέλεια: Αντώνης WI. Lo, το Κινεζικό Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 4 Γενάρη 2013? Αποδεκτές: 23 Φεβ 2013? Δημοσιεύθηκε: 3 Απρίλη του 2013

Copyright: © 2013 Hu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τις επιχορηγήσεις του Εθνικού Ιδρύματος Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Αρ 30671801 και 30371243) και το Ίδρυμα για το επιστρεφόμενο μελετητές του Harbin (Αρ 2005AFLXJ017). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθειες σε παγκόσμιο επίπεδο, και κατατάσσεται στην πέμπτη όλων των καρκίνων στην Κίνα. Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας εκτιμά ότι 220.000 νέες περιπτώσεις CRC συνέβη στην Κίνα το 2008 (GLOBOCAN, 2008). Η συχνότητα εμφάνισης της CRC έχει αυξηθεί κατά 5,73% σε ετήσια βάση μεταξύ 1992-2005 (13,06 – 23,54 /10,0000) σε Nangang District, Harbin, Κίνα [1].

Ένα από τα γενετικά μονοπάτια στο ανάπτυξη του CRC είναι η αποτυχία του συστήματος επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων του DNA (MMR) [2], η οποία συμβάλλει στη διατήρηση της σταθερότητας γενωμικού αναγνωρίζοντας και αφαιρώντας μεταλλάξεις εισαγωγής /διαγραφής που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της αντιγραφής του DNA [3]. Τα δύο γονίδια κύρια επισκευή ασυμφωνία είναι

hMLH1

και

hMSH2,

οποία χάρτη για να χρωμοσώματα 3p21.3-23 [4] και 2p21-22 [5], αντίστοιχα.

από την πρώτη έκθεση του

hMLH1

και

hMSH2

γονιδιακές μεταλλάξεις στο σύνδρομο Lynch (LS) CRC [4], [5], μελέτες για

hMLH1

και

έχουν hMSH2

γονιδιακές μεταλλάξεις έχουν δημοσιευθεί. Ωστόσο, η πλειονότητα των δημοσίευσε έγγραφα επικεντρώθηκε στην LS ή LS-όπως CRC. Συνολικά, 30 μικρό μέγεθος δείγματος (n = 5-61, εκτός από μία από τις 315 ασθενείς) μελέτες έχουν δημοσιευθεί που προβλήθηκε μεταλλάξεις βλαστικής σειράς στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια σε σποραδικές CRC . Παθολογικές μεταλλάξεις του

hMLH1

και

hMSH2

γονιδίων είχαν περισσότερες πιθανότητες να είναι παρόντες σε νεότερους ασθενείς [6], και σε αυτούς με μικροδορυφόρων αστάθεια (MSI). Στην ανάλυσή μας από αυτές τις 30 μελέτες, MSI ή εμφάνιση πρώιμης ηλικίας (κάτω από την ηλικία των 40, 45, 50 ή 55 χρόνια) χρησιμοποιήθηκε για την προεπιλογή των ασθενών για

hMLH1

και

hMSH2

γονίδιο μεταλλάξεις σε σποραδικά CRC. Ωστόσο, καμία μελέτη με στόχο να ανιχνεύσει συχνότητες μετάλλαξης του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια σε μάζα σποραδικές CRC χωρίς MSI ή την ηλικία προεπιλογή. Στην Κίνα, τέσσερις μελέτες (n = 26 έως 58) με έλεγχο βλαστική ή σωματικές μεταλλάξεις του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια σε σποραδικές CRC με προεπιλογή από MSI [7], [8], [ ,,,0],9], [10]. Είτε υψηλές συχνότητες

hMLH1

και

hMSH2

γονιδιακών μεταλλάξεων συμβαίνουν σε σποραδικές CRC στην Κίνα δεν έχει διευκρινιστεί. Επιπλέον, η ισχυρή στοιχεία δείχνουν ότι σπάνιες μεταλλάξεις σοβαρής επίδρασης είναι υπεύθυνες για ένα σημαντικό τμήμα των πολύπλοκων ανθρώπινων καρκινικών [11]. Ως εκ τούτου, διεξάγεται αυτή την μελέτη για τον εντοπισμό νέων

hMLH1

και

hMSH2

παραλλαγές του DNA, για να καθορίσει τόσο τις συχνότητες μετάλλαξης και sites τόσο σποραδικές και LS CRC, και να εκτιμήσουν τις σχέσεις μεταξύ βλαστικής σειράς και σωματικών μεταλλάξεις του

hMLH1 /hMSH2

γονιδίου και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά της CRC στη βορειοανατολική Κίνα.

Υλικά και Μέθοδοι

θέματα

Μετά την απόκτηση του εν επιγνώσει συναίνεση από τα θέματα μελέτης και την έγκριση από την Θεσμική Επιτροπή για την Έρευνα του Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο, εντοπίσαμε ασθενείς CRC που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στο νοσοκομείο του καρκίνου και τον δεύτερο Συνδεδεμένες Νοσοκομείο Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο, χωρίς προεπιλογή και με βάση την παθολογική διάγνωση και μόνο. Οι ασθενείς με καρκίνωμα νευροενδοκρινική, κακόηθες μελάνωμα, λέμφωμα μη Hodgkin, γαστρεντερική στρωματική όγκους και μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνωμα εξαιρέθηκαν από την ανάλυση. Από την 1η Ιουνίου, 2004 μέχρι 15 Μαΐου 2005, και της 15ης Μαΐου, 2007 έως την 1η Ιανουαρίου του 2008, 473 ασθενείς με πρωτοπαθή CRC (452 ​​σποραδικές CRC? 21 LS CRC) προσλήφθηκαν. 457 δείγματα αίματος και 356 ιστούς όγκων συλλέχθηκαν για μοριακή γενετική ανάλυση.

DNA Extraction

Το DNA επιτυχώς εξάγεται από όλα τα δείγματα αίματος 457 (436 σποραδικές CRC και 21 LS CRC) και 356 καρκινικών ιστών (342 σποραδικές και 14 LS) με τη διαδικασία της κλασικής φαινόλη-χλωροφόρμιο [12].

Κατά τη συλλογή των δειγμάτων αίματος και ιστού και την εκχύλιση του DNA, δεν θα μπορούσαμε να αποκτήσετε το DNA ιστό του όγκου των 117 ασθενών CRC (110 σποραδική και 7 LS) λόγω ότι οι ιστοί του όγκου ήταν αρκετά μεγάλο μόνο για τη διάγνωση της παθολογίας ή ότι δεν είχαμε εκχύλιση DNA με επιτυχία. Ως εκ τούτου, έχουμε μόνο DNA στο αίμα τους. Στις άλλες 16 σποραδικές ασθενείς CRC, λάβαμε ζεύγη δειγμάτων αίματος και ιστών. Ωστόσο, στην εκχύλιση του DNA, δεν είχαμε εκχύλισμα DNA επιτυχώς από το δείγμα αίματος. Τέλος, 340 ασθενείς CRC (326 σποραδικές και 14 LS) έχουν αντιστοιχιστεί στο αίμα και τους ιστούς του DNA.

Έλεγχος για βλαστικής σειράς και σωματικά Μεταλλάξεις του

hMLH1

και

hMSH2

Γονίδια

ανάλυση της αλληλουχίας των PCR-SSCP.

Οι εκκινητές για 20 ζεύγη όλων των 19 εξώνια στο

hMLH1

γονίδιο και 17 ζεύγη των 16 εξώνια στο

hMSH2

γονίδιο (Πίνακας 1), συμπεριλαμβανομένων των ορίων εξονίων-ιντρονίων, συντέθηκαν για γενωμική PCR. ενισχύσεις PCR διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το ακόλουθο πρωτόκολλο για 35 κύκλους: αποδιάταξη για 30 δευτερόλεπτα στους 95 ° C, ανόπτηση για 30 s στους 54 ° C έως 64 ° C, επέκταση για 30 s στους 72 ° C, ακολουθούμενη από μία τελική επέκταση επί 5 min στους 72 ° C (ΑΒΙ 9700). Τα προϊόντα PCR ταυτοποιήθηκαν με ηλεκτροφόρηση αγαρόζης 1% (Agarose Biowest, Gene Company Ltd).

Η

προϊόντα PCR μετουσιώθηκαν στους 98 ° C για 8 λεπτά και τοποθετούνται επί πάγου. Η ηλεκτροφόρηση πραγματοποιήθηκε επί 8% για να μη μετουσιωτικά πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου 15%. Μετά την ηλεκτροφόρηση, τα πηκτώματα χρωματίστηκαν με άργυρο (Εξευγενισμένο Chemical Plant, Σαγκάη, Κίνα). 15% των δειγμάτων επαναλήφθηκαν στην ανίχνευση μεταλλάξεων του κάθε ενισχυμένου θραύσματος PCR στην ανάλυση PCR-SSCP, με το ποσοστό αντιστοιχίας που κυμαίνεται από 99,1% έως 100% για διάφορα ενισχυμένα θραύσματα PCR.

προϊόντα PCR που δείχνουν ανώμαλη κινητικότητα υπό ανάλυση SSCP εστάλησαν αλληλουχίας χρησιμοποιώντας ABI3730XL. αποτελέσματα αλληλουχίας αναλύθηκαν για τις μεταλλάξεις γονιδίων με χρωματισμούς 2,22 λογισμικό (Technelysium Pty. Ltd, QLD, Αυστραλία).

Για αναφερθεί στο παρελθόν μεταλλάξεις, χρησιμοποιήθηκαν Αξιολόγηση της μετάλλαξης Παθογένεια αποτελέσματα του ελέγχου λειτουργίας για τον προσδιορισμό της παθογένειας. Εάν δεν υπάρχει έλεγχος λειτουργίας αναφέρθηκε, η πρόβλεψη λειτουργίας από οποιαδήποτε δύο από τα PolyPhen /SIFT /ΠΠΣΑ-MMR αποτελέσματα χρησιμοποιήθηκε για να καθορίσει την παθογένεια τους.

Για τις νέες παραλλαγές του DNA, η παθογένεια της υποκατάστασης βάσης σε εξώνια είχαν προβλεφθεί από το πρόγραμμα PolyPhen [13] και ΠΠΣΑ-MMR [14]. Βάση εισαγωγής, διαγραφής και υποκατάστασης υποκινητή, ιντρόνια ή 3’UTR εκτιμήθηκαν με κριτήρια για τον προσδιορισμό των πιθανών παθογένειας [15]. Διαπιστώσαμε επίσης τις νέες παραλλαγές του DNA σε 100 υγιείς μάρτυρες για τον προσδιορισμό των πιθανών παθογένειας.

Στατιστική Ανάλυση

Κατηγορία και συνεχείς μεταβλητές ελέγχθηκαν από το chi-square test και

t

δοκιμή, αντίστοιχα. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με το λογισμικό SAS 9.1 (SAS Institute, Cary, NC, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής).

Αποτελέσματα

Μεταλλάξεις

Οι μεταλλάξεις στο

hMLH1

γονίδιο .

Εντοπίσαμε 11 παραλλαγές του DNA σε

hMLH1

γονίδιο. IVS8-16 A & gt? T, c.1831 ATT & gt? ΤΤΤ και c.1845_1847 GAA διαγραφή ήταν σωματικά παραλλαγές του DNA, άλλα οκτώ παραλλαγές του DNA ήταν τόσο βλαστικής σειράς και σωματικά παραλλαγές. Τέσσερις (IVS8-16 A & gt? T, c.704 GAT & gt? Γ.Ο.Σ., c.1529 CAG & gt? CGG, c.1831 ATT & gt? ΤΤΤ) παραλλαγές μυθιστόρημα του DNA εντοπίστηκαν σε σποραδικές ασθενείς CRC (Σχήμα 1 και Πίνακας 2). Όλες οι τέσσερις νέες παραλλαγές του DNA δεν ανιχνεύθηκαν σε 100 υγιείς ελέγχους. c.1529 CAG & gt? CGG είχε προβλεφθεί να μην έχει καμία pathogeneity, η pathogeneity άλλων τρεις νέες παραλλαγές του DNA ήταν αβέβαιο. Επτά μεταλλάξεις (-28 A & gt? G, c.927 CCC & gt? ΚΔ, IVS13 + 14 G & gt? Α, IVS14-19 A & gt? G, c.1742 CCG & gt?. CTG, c.1845_1847 GAA διαγραφή και γ * 35_ * 37 διαγραφή CTT) έχουν αναφερθεί παλαιότερα στη βάση δεδομένων Insight [10], [16], [17], [18], [19], [20], [21]. c.1742 CCG & gt? CTG και c.1845_1847 διαγραφή GAA έχουν αναφερθεί να είναι παθολογικές μεταλλάξεις [21], [22]

Η

Επίσης, εντόπισε δύο πολυμορφισμούς.. c.655 ATC & gt? GTC αναφέρθηκε για να είναι ένας κοινός πολυμορφισμός σε Καυκάσιους [23], [24], [25], ενώ c.1151 Γ.Ο.Σ. & gt? GAT αναφέρθηκε για να είναι πιο κοινή σε ασιατικές πληθυσμού [26]. Ως εκ τούτου, εμείς δεν τους κατατάσσουν στις μεταλλάξεις στη μελέτη μας.

Οι μεταλλάξεις στο

hMSH2

γονίδιο.

Έχουμε εντοπίσει επτά

hMSH2

παραλλαγές του DNA. Εισαγωγή AACAACA σε c.1127 και διαγραφή AAG σε c.1129 ήταν σωματικά παραλλαγές του DNA, άλλα έξι παραλλαγές του DNA ήταν τόσο βλαστικής σειράς και σωματικά παραλλαγές. Δύο παραλλαγές του DNA (-39 C & gt? Τ, AACAACA εισαγωγή στο c.1127 και διαγραφή AAG στα c.1129) ανιχνεύτηκαν νεωστί σε αυτή τη μελέτη (Σχήμα 2 και Πίνακας 2). Κατά τη διαλογή των δύο νέες παραλλαγές του DNA σε 100 υγιείς ελέγχους, δεν παραλλαγές ανιχνεύθηκαν. Η παθογένεια των δύο παραλλαγές του DNA ήταν αβέβαιο. Πέντε άλλες μεταλλάξεις (Γ.23 ACG & gt? ATG, c.471 GGC & gt? GGA, c.505 ΑΤΑ & gt? GTA, c.1168 CTT & gt? ΤΤΤ και c.1886 ΥΠΑ & gt? CGA) έχουν αναφερθεί προηγουμένως στη βάση δεδομένων Insight [14], [27].

Η

δύο άνδρες ασθενείς μεταφέρονται σωματικές μεταλλάξεις και στα δύο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια. Ένας άλλος άνδρας ασθενής έφερε το c.1831 ATT & gt? ΤΤΤ μετάλλαξη του

hMLH1

γονιδίου και την Γ.23 ACG & gt?. ATG μετάλλαξη του

hMSH2

γονιδίου σε δύο ιστούς του όγκου και του αίματος

μετάλλαξη συχνότητες

συχνότητες μετάλλαξης σε σποραδικές ασθενείς CRC.

Μεταξύ 436 σποραδικές ασθενείς CRC με τις διαθέσιμες DNA του αίματος, βλαστική συχνότητες μετάλλαξης του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 5,28% (23/436) και 10,78% (47/436), αντίστοιχα (

ρ

& lt? 0,01) (Πίνακας 3). Με εξαίρεση τις συνώνυμες μεταλλάξεις (c.927 CCC & gt? ΚΔ στο

hMLH1

και c.471 GGC & gt? GGA στο

hMSH2

), οι συχνότητες μετάλλαξης στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 4,59% (20/436) και 8,72% (38/436), αντίστοιχα (

p =

0,01). Εάν ο ασθενής που έφερε δύο μεταλλάξεις βλαστικής σειράς μετρήθηκε μόνο μία φορά (ένας ασθενής έτρεφε τόσο -39 C & gt? T και Γ.23 ACG & gt? ATG μεταλλάξεις στο

hMSH2

και η IVS13 + 14 G & gt? Μια μετάλλαξη του

hMLH1

? ο άλλος ασθενής που διεξήχθη τόσο c.1831 ATT & gt? ΤΤΤ μετάλλαξη στο

hMLH1

και Γ.23 ACG & gt? ATG στο

hMSH2

)? Στη συνέχεια 15.59% (68/436) των ασθενών που παρουσίασαν μεταλλάξεις βλαστικής σειράς στο

hMLH1

/

hMSH2

γονίδιο. συχνότητες παθολογική μετάλλαξη του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 0,23% (1/436) και 0% αντίστοιχα.

Η

Μεταξύ 342 σποραδικές ασθενείς CRC με τις διαθέσιμες DNA σε ιστούς όγκων, οι συχνότητες σωματική μετάλλαξη στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 6,73% (23/342) και 11,70% (40/342), αντίστοιχα (

p =

0,02) (Πίνακας 3). Εξαιρουμένων συνώνυμες μεταλλάξεις (c.927 CCC & gt? ΚΔ στο

hMLH1

και c.471 GGC & gt? GGA στο

hMSH2

), συχνότητες μετάλλαξης του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 5,85% (20/342) και 9,94% (34/342), αντίστοιχα (

p =

0.03). Αν μεταλλάξεις μετρήθηκαν από τους ασθενείς αντί για τον πραγματικό αριθμό των μεταλλάξεων (τρεις ασθενείς μεταφέρονται σωματικών μεταλλάξεων και των δύο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια), τότε 17,54% (60/342) των ασθενών παρουσίασαν σωματικών μεταλλάξεις του γονιδίου

hMLH1

/

hMSH2

. συχνότητες παθολογική μετάλλαξη του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 0,58% (2/342) και 0% αντίστοιχα.

βλαστικής σειράς συχνότητα μετάλλαξης δεν ήταν σημαντικά διαφορετική από εκείνη της σωματική συχνότητα μετάλλαξης στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια, αντίστοιχα (

p =

0,49 και

p =

0,69, αντίστοιχα).

συχνότητες μετάλλαξης σε ασθενείς LS CRC.

Μεταξύ 21 δειγμάτων DNA στο αίμα των ασθενών LS CRC, ένα (4,76%) των ασθενών έφερε μια βλαστική μετάλλαξη του

hMLH1

και πέντε (23,81%) των ασθενών πραγματοποιείται μεταλλάξεις βλαστικής σειράς στο

hMSH2

. Συνολικά, έξι (28,57%) των ασθενών που παρουσίασαν μεταλλάξεις βλαστικής σειράς του

hMLH1

/

hMSH2

γονίδιο.

ιστούς όγκων ήταν διαθέσιμα μόνο σε 14 LS CRC ασθενείς, ένα (7,14 %) των ασθενών έφερε μια σωματική μετάλλαξη στο

hMLH1

και τρεις (21,43%) των ασθενών έφερε μια σωματική μετάλλαξη στο

hMSH2

. Συνολικά, τέσσερις (28,57%) ασθενείς παρουσίασαν σωματικές μεταλλάξεις στο

hMLH1

/

hMSH2

γονίδιο.

Δεν υπάρχουν παθολογικές μεταλλάξεις εντοπίστηκαν σε ασθενείς LS CRC.

Η Κατανομή μετάλλαξη σε διαφορετικές εξώνια

Η υψηλότερη επικράτηση μετάλλαξη βλαστικής σειράς του

hMSH2

σε σποραδικές CRC ανιχνεύθηκε στο εξόνιο 7 (3,90%), ακολουθούμενη από το εξόνιο 12 (2,52%), το εξόνιο 1 (1,38%), και το εξόνιο 3 (0,46%). Μεταλλάξεις σε αυτά τα τέσσερα εξώνια αντιπροσώπευαν το 76,6% του συνόλου των μεταλλάξεων στο

hMSH2

. Όσον αφορά το

hMLH1

, συχνότητες μετάλλαξης ήταν γενικά χαμηλότερες από ό, τι στο

hMSH2

? οι υψηλότερες επιπολασμούς μετάλλαξη ήταν στο εξόνιο 16, το εξόνιο 9, το εξόνιο 13 και εξόνιο 19 (0,23%) (Πίνακας 3).

Οι σχέσεις μεταξύ βλαστικής σειράς και σωματικά Μεταλλάξεις του

hMLH1 /hMSH2

Gene και κλινικοπαθολογικών Χαρακτηριστικά του CRC

σωματικά συχνότητα μετάλλαξης του

hMLH1

/

hMSH2

γονιδίου ήταν 22,7% (15/66) στο εγγύς καρκίνο του παχέος εντέρου, 17,7% (11 /62) σε περιφερικό καρκίνο του παχέος εντέρου και 10,5% (22/209) στον καρκίνο του ορθού (

σ

= 0,03). Ότι, βλαστική συχνότητα μετάλλαξης του

hMLH1

/

hMSH2

γονίδιο δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε εγγύς καρκίνου του παχέος εντέρου (17,3%, 14/81), περιφερική καρκίνου του παχέος εντέρου (17,8%, 13/73) και του καρκίνου του ορθού (10,1%, 28/276) (

σ

= 0,09). (Πίνακας 4 και 5).

Η

βλαστικής σειράς και σωματικά συχνότητα μετάλλαξης του

hMLH1

/

hMSH2

γονίδιο δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε άλλες κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά ( την ηλικία, το φύλο, BMI, το στάδιο κατά Dukes, Histotypes, Παθολογική τύπους, Διαφοροποιημένες βαθμός και το μέγεθος του όγκου) της CRC.

Λόγω της λιγότερο LS CRC ασθενείς, δεν είχαμε αναλύσει τις σχέσεις μεταξύ της βλαστικής σειράς και σωματικών

hMLH1 /hMSH2

μεταλλάξεις γονιδίων και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά του LS CRC.

Συζήτηση

Σύμφωνα με το υποτιθέμενο μοντέλο της κοινής παραλλαγή της νόσου σπάνια [28], [29], θα προβληθεί τις σπάνιες παραλλαγές του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια σε σποραδικές και LS CRC. Εμείς εντοπίστηκαν 18 είδη του DNA Παραλλαγές στη μελέτη μας. Έξι ήταν νέες παραλλαγές του DNA και 12 έχουν προηγουμένως αναφερθεί. Από τις έξι νέες παραλλαγές του DNA, οι τέσσερις ήταν σε

hMLH1

και δύο στο

hMSH2

.

Δύο από τα τέσσερα νέα

hMLH1

παραλλαγές του DNA, σ .Asp235 Val (c.644 GAT & gt? Γ.Ο.Σ.) και p.Gln510Arg (c.1529 CAG & gt? CGG), και τα δύο οδηγούν σε αμινοξέα αλλαγές πολικότητας οξύ, το οποίο μπορεί να επηρεάσει τη δομή του

hMSH2

περιοχή δέσμευσης και

hPMS2 /hPMS1

δεσμευτική περιοχή του em> hMLH1

γονίδιο

hPMS2 /hPMS1

περιοχή σύνδεσης του

hMLH1

προϊόν του γονιδίου, μπορεί να έχει καμία επίδραση στη λειτουργία του συστήματος DNA MMR [30]. IVS8-16 A & gt? T προβλέπεται να έχει καμία επίδραση στην μάτισμα στο εξώνιο 9.

Ένα από τα δύο νέα

hMSH2

παραλλαγές του DNA, -39 C & gt? T, ήταν μια διακύμανση σε 5 ‘UTR, το οποίο μπορεί να επηρεάσει mRNA μεταγραφή. Η άλλη διακύμανση, c.1127 ins AACAACA και c.1129 del ΑΑΟ, ήταν μια μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου, το οποίο μπορεί να επηρεάσει το

hMSH6

περιοχή πρόσδεσης και

hMutL

ομόλογο αλληλεπίδραση του

hMSH2

γονιδιακό προϊόν και να προκαλέσουν τη δυσλειτουργία του συστήματος DNA MMR [30].

Αν και η αποτυχία του συστήματος DNA MMR είναι ένα από τα γενετικά μονοπάτια στην ανάπτυξη του CRC [2]. Σύμφωνα με τα κριτήρια της αξιολόγησης μετάλλαξης pathogeneity, ένα μυθιστόρημα παραλλαγή του DNA, c.1529 CAG & gt? CGG, είχε προβλεφθεί να μην έχει καμία pathogeneity, η pathogeneity άλλων πέντε νέες παραλλαγές του DNA ήταν αβέβαιο. Ως εκ τούτου, δεν μπορούμε να διαλευκανθεί ο ρόλος αυτών των παραλλαγών μυθιστόρημα του DNA των

hMLH1

και

hMSH2

γονιδίων στην εμφάνιση και ανάπτυξη της CRC

c.1742 CCG & gt?. CTG της

hMLH1

και c.1886 ΥΠΑ & gt? CGA του

hMSH2 ήταν

ιδρυτικές μεταλλάξεις στο ασιατικό πληθυσμό της [31]. Τρεις άλλες μεταλλάξεις του

hMSH2

, Γ.23 ACG & gt? ATG, c.505 ΑΤΑ & gt? GTA και c.1168 CTT & gt? ΤΤΤ, ήταν υψηλότερη επικράτηση σε Ασιάτες (2,44%, 1,74% και 6,97%, αντίστοιχα) σε σύγκριση με τους Καυκάσιους (0,05%, 0,05% και 0,53%, αντίστοιχα) [31]. Μπορεί να εξηγήσει την φυλετική διαφορά των ασθενών CRC. Επιπλέον, μπορεί να είναι πιο αποτελεσματική για την ανίχνευση αυτών των μεταλλάξεων σε πληθυσμούς Ασιατικής καταγωγής

Από τη στιγμή που εντοπίστηκε υψηλότερο επιπολασμό c.1168 CTT & gt?. ΤΤΤ του

hMSH2

στις δύο LS (14,29%, 3/21) και σποραδικές (3,90%, 17/436) CRC, εμείς διαλογή για την μετάλλαξη σε υγιείς μάρτυρες. Η συχνότητα μετάλλαξης σε υγιείς μάρτυρες ήταν 4,16% (21/505), η οποία δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε σύγκριση με CRC (

σ

= 0,84). Η συγκεκριμένη μετάλλαξη αναφέρθηκε επίσης ως πολυμορφισμός στην Κορέα από Kim et al, οι οποίοι δεν ανίχνευσε μια σημαντική διαφορά μεταξύ των περιπτώσεων και των ελέγχων [26].

Σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μόνο μεταξύ των σωματικών

hMLH1 /hMSH2

μεταλλάξεις γονιδίων και τη θέση του όγκου των σποραδικές CRC (

p =

0.03). Η σωματική συχνότητα μετάλλαξης του

hMLH1 /hMSH2

γονιδίου ήταν υψηλότερη στον καρκίνο του ορθού, τα ακόλουθα ήταν στο εγγύς καρκίνο του παχέος εντέρου, και το χαμηλότερο στην άπω καρκίνου του παχέος εντέρου. Η μη pathogeneity ή αβέβαιη pathogeneity μπορεί να εξηγήσει τη μη σημαντική συσχέτιση μεταξύ

hMLH1 /hMSH2

μεταλλάξεις γονιδίων και άλλα κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά σποραδικές CRC.

Σε προηγούμενες μετα-ανάλυση μας βασίζεται στην βλαστική μεταλλάξεις του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια (χαρτί δεκτή, 10.1371 /journal.pone.0051240), η συγκεντρωτική παθολογική συχνότητα μετάλλαξης του

hMLH1

ήταν 8,72% (95% CI: 6,12% -12,29%) σε σποραδικές CRC. Ήταν 10.28% (95% CI: 4,28 – 22,70%) σε αμερικανικές μελέτες, 7,47% (95% CI: 4,06 – 13,34%) σε ευρωπαϊκές σπουδές, και 3,21% (95% CI: 0,88 – 11,03%) στις ασιατικές μελέτες (

p =

0,65). Στην ομάδα μας, ήταν μόνο 0,23%. Η συγκεντρωτική παθολογική συχνότητα μετάλλαξης του

hMSH2

ήταν 7,28% (95% CI: 5,12% -10,26%) σε σποραδικές CRC. Ήταν 5.89% (95% CI: 2,08 – 15,61%) σε αμερικανικές μελέτες, 7,58% (95% CI: 4,05 – 13,76%) σε ευρωπαϊκές σπουδές, και 3,64% (95% CI: 1,96 – 6,65%) στις ασιατικές μελέτες (

σ

= 0.85). Ωστόσο, καμία παθολογική μετάλλαξη του

hMSH2

ανιχνεύθηκε στη μελέτη μας.

Οκτώ [7], [9], [32], [33], [34], [35], [36], [37] και εννέα μελέτες [7], [9], [32], [33], [34], [35], [36], [37], [38] στην Ασία ανιχνεύεται σωματικές μεταλλάξεις του

hMLH1

και γονίδια

hMSH2

σε σποραδικές CRC. Η συγκεντρωτική επικράτηση των παθολογικών μεταλλάξεων ήταν 11,86% (95% CI: 7,62 – 18,01%) και 7,90% (95% CI: 4,72 – 12,94%) αντίστοιχα κατά την μετα-ανάλυση, η οποία είναι υψηλότερη από ότι στη μελέτη μας (0,58% και 0%).

Όλες οι δημοσιευμένες μελέτες ανιχνεύονται βλαστική ή σωματικές μεταλλάξεις σε σποραδικά CRC με προεπιλογή (MSI, πρώιμη έναρξη της ηλικίας, ή TGF-β μετάλλαξη RII) [36], η οποία θα μπορούσε να εξηγήσει την υψηλότερη συχνότητα μετάλλαξης στις δημοσιευμένες ατομικές μελέτες και μετα-αναλύσεις των προηγουμένως δημοσιευμένων μελετών. Επιπλέον, το μικρό μέγεθος του δείγματος σε αυτές τις δημοσιευμένες μελέτες μπορεί επίσης να συμβάλει στις αντιφατικά αποτελέσματα.

Μόνο μία μελέτη στην Ασία ανιχνεύεται σωματικές μεταλλάξεις του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια σε 31 σποραδικές ασθενείς CRC χωρίς προεπιλογή [37]. Το μεγαλύτερο ανίχνευση βλαστική μεταλλάξεις μελέτης ήταν 315 ασθενείς Ευρωπαϊκού BG-CRC κάτω από την ηλικία των 55? η συχνότητα μετάλλαξης του

hMSH2

βρέθηκε να είναι 0,32% (1/325, αβέβαιη παθογένειας), ενώ καμία μετάλλαξη στο

hMLH1

εντοπίστηκε [39].

προηγούμενη μετα-ανάλυσή μας, τα συγκεντρωμένα συχνότητες μετάλλαξης βλαστικής σειράς του

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 28,55% (95% CI: 26.04% -31.19%) και 19,41% (95% CI: 15,88% -23,51%) στο Άμστερνταμ-κριτήρια θετική LS CRC. Στο Άμστερνταμ-κριτήρια αρνητική LS CRC, αυτές ομαδοποιούνται συχνότητες μετάλλαξης ήταν 16,70% (95% CI: 14,53 – 19,13%) και 11.13% (95% CI: 9,49 – 13,42%) για

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια, αντίστοιχα. Στη μελέτη μας, δεν μετάλλαξη βλαστικής σειράς στο

hMLH1

εξώνια βρέθηκε, παρόμοια με μια μελέτη στην Ιαπωνία [40]. Η συχνότητα μετάλλαξης βλαστικής σειράς του

hMSH2

ήταν 9,52% (2/21) (εκτός από το πολυμορφικό c.1168 μετάλλαξη CTT & gt? ΤΤΤ), η οποία ήταν σχετικά χαμηλότερη από ότι στην μετα-ανάλυση (11.13%, 95% CI:. 9,49 – 13,42%)

Πέντε ασιατικές μελέτες εντόπισε την σωματική μετάλλαξη του

hMLH1

ή

hMSH2

στο LS CRC [7], [41], [42 ], [43], [44]. Τα συγκεντρωτικά συχνότητες σωματική μετάλλαξη στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 9,57% (95% CI: 1,36 – 44,73%) και 25,65% (95% CI: 10,30 – 50,89%), αντίστοιχα κατά την μετα-ανάλυση. Στη μελέτη μας, η σωματική συχνότητα μετάλλαξης του

hMSH2

στο LS CRC ήταν 14,29% (2/14) (εκτός από το πολυμορφικό μετάλλαξη, c.1168 CTT & gt? ΤΤΤ). Ωστόσο, δεν σωματικές μεταλλάξεις σε

hMLH1

εξώνια βρέθηκαν στο LS CRC, παρόμοια με τις δύο Ιαπωνικές μελέτες [41], [43]. Η σωματική συχνότητα μετάλλαξης του

hMSH2

στο LS CRC κυμαινόταν από 5,88% έως 58,33% σε πέντε ασιατικές δημοσιευμένες μελέτες. Ένα μικρό μέγεθος του δείγματος μπορεί να εξηγήσει τις διακυμάνσεις της συχνότητας μετάλλαξης στο LS CRC.

Εν κατακλείδι, εντοπίσαμε έξι νέες παραλλαγές του DNA (τέσσερις στο

hMLH1

και δύο στο

hMSH2

). Σε σποραδικές CRC, βλαστικής σειράς και σωματική μετάλλαξη συχνότητες

hMLH1 /hMSH2

γονίδιο ήταν 15,59% και 17,54%, αντίστοιχα. Η επικράτηση των μεταλλάξεων βλαστικής σειράς ήταν 5,28% στο

hMLH1

και 10,78% το

hMSH2

. Οι συχνότητες σωματική μετάλλαξη στο

hMLH1

και

hMSH2

γονίδια ήταν 6,43% και 11,70%, αντίστοιχα. Στο LS CRC, το γονίδιο τόσο βλαστικής σειράς και σωματικά συχνότητες μετάλλαξης του

hMLH1

/

hMSH2

ήταν 28.57%. Η πιο διαδεδομένη βλαστική ιστοσελίδα μετάλλαξη στο

hMSH2

γονίδιο c.1168 CTT & gt? ΤΤΤ (3,90%), ένας πολυμορφισμός. Σωματικά συχνότητα μετάλλαξης του

hMLH1

/

hMSH2

γονίδιο ήταν σημαντικά διαφορετική σε εγγύς καρκίνου του παχέος εντέρου, περιφερική καρκίνου του παχέος εντέρου και του καρκίνου του ορθού.

Τα ευρήματά μας μπορεί να συμβάλει στην διαλεύκανση της παραλλαγή του DNA φάσματος και η συχνότητα του

hMLH1

και

hMSH2

γονιδίων σε ασθενείς CRC, ιδιαίτερα σποραδικές ασθενείς CRC στην Κίνα, και τις σχέσεις τους με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά σποραδικές CRC. Λειτουργικές μελέτες για να καθορίσουν πώς αυτές οι νέες παραλλαγές του DNA επηρεάζει την λειτουργία της πρωτεΐνης είναι υποχρεωτικά.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε για τη μητρική επιμέλεια του Διεθνούς Επιστήμης Επεξεργασία.