Αφηρημένο

Αν και ο καρκίνος του προστάτη (PCA) έχει αργή εξέλιξη, το ορμονοάντοχο (HRCP) και μεταστατικό οντότητες είναι ουσιαστικά θανατηφόρα και η έλλειψη αποτελεσματικών θεραπειών. μεταγραφικός παράγοντας Slug είναι κρίσιμη στη ρύθμιση μεταστάσεις των διαφόρων όγκων, συμπεριλαμβανομένων του προστάτη. Εδώ μελετήσαμε στοχευμένη θεραπεία έναντι Slug με τη χρήση συνδυασμού των 3 φαρμάκων που στοχεύουν 3 μονοπάτια αντίστοιχα συγκλίνουν μέσω Slug και την περαιτέρω ρύθμιση του προστάτη μετάσταση. Χρησιμοποιώντας

in vitro δοκιμασίες

επιβεβαιώσαμε ότι Slug πάνω ρύθμιση πραγματοποιούνται αναστολή της Ε-καδερίνης που ήταν αντι-μεταστατική, και ανέστειλε ΒΙΜ-ρυθμίζονται κυτταρικής απόπτωσης σε PCa. Ανάντη PTEN /μονοπάτια Akt, mTOR, Erk, και AR /Hsp90 ήταν υπεύθυνοι για Slug up-ρύθμιση και κάθε ένα από αυτά θα μπορούσε να στοχεύσει η ραπαμυκίνη, CI-1040, και 17-ΑΑΟ, αντίστοιχα. Σε 4 κυτταρικές σειρές προστάτη με διαφορετικά χαρακτηριστικά από την άποψη της απώλειας PTEN και ανδρογόνων ευαισθησία έχουμε δοκιμαστεί η αποτελεσματικότητα των μονο- και συνδυασμένης θεραπείας με τα φάρμακα. Βρήκαμε ότι μεταστατικό δυναμικό των κυττάρων μέγιστο αναστέλλεται μόνο όταν συνδυάστηκαν και οι 3 φάρμακα, λόγω της αλληλοπαρεμβολές μεταξύ των οδών. 17-ΑΑΟ μειώνει την έκφραση γυμνοσάλιαγκας μέσω του αποκλεισμού της σταθερότητας AR HSP90-εξαρτώμενη. Συνδυασμός ραπαμυκίνης και CI-1040 μειώνει εισβολής πιο ισχυρά στα κύτταρα του προστάτη που είναι ανδρογόνων αναίσθητη και με την απώλεια PTEN. Slug ανέστειλε ΒΙΜ-μεσολαβούμενη απόπτωση που θα μπορούσαν να διασωθούν από /αναστολείς Erk /HSP90 mTOR. Χρησιμοποιώντας μοντέλα ποντικού για την κυκλοφορία PCa DNA ποσοτικοποίηση, βρήκαμε ότι ο συνδυασμός των αναστολέων mTOR /ΕΚΚ /HSP90 ελαττωμένη κυκλοφορούντων κυττάρων προστάτη

in vivo

σημαντικά ισχυρότερα από συνδυασμό 2 ή μονοθεραπεία. Συμπερασματικά, ο συνδυασμός του mTOR /Εγκ /Hsp90 αναστέλλει τη μεταστατική ικανότητα του καρκίνου του προστάτη μέσω της αναστολής Slug

Παράθεση:. Ding G, Feng C, Jiang Η, Ding Q, Zhang L, Na R, et al. (2013) Συνδυασμός ραπαμυκίνη, CI-1040, και 17-ΑΑΟ Αναστέλλει Μεταστατικό Χωρητικότητα του καρκίνου του προστάτη μέσω Slug Αναστολή. PLoS ONE 8 (10): e77400. doi: 10.1371 /journal.pone.0077400

Επιμέλεια: Νατάσα Κυπριανού, Πανεπιστήμιο του Κεντάκι College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 22, Απριλίου του 2013? Αποδεκτές: 2 Σεπτεμβρίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 10 Οκτωβρίου 2013

Copyright: © 2013 Ding et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε εν μέρει από τις ελίτ Νεολαίας επιστημονική Χρηματοδότηση του Πανεπιστημίου Fudan (NO.144) και Νεολαία επιστημονική Χρηματοδότηση του Εθνικού Ιδρύματος Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC-81202002). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι ένα κοινό νεόπλασμα, το οποίο εξακολουθεί να κατέχει υψηλή θέση ως η κύρια αιτία θανάτου μεταξύ των ουρολογικών κακοήθειες, και παραμένει η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στους άνδρες [1]. Παρά το γεγονός ότι η έγκαιρη διάγνωση του προστάτη έχει βελτιωθεί κλινική έκβαση, μεταστατικό προστάτη και ορμόνες καρκίνου του προστάτη πυρίμαχα (HRPC) παραμένουν ένα από τα πιο δύσκολα κλινικά προβλήματα, που οδηγεί σε μια εκδήλωση τελικού σταδίου με κακή πρόγνωση. PCa έχει μια εντυπωσιακή τάση να μετάσταση στα οστά. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών πρωτοπαθούς καρκίνου του προστάτη προσεγγίζει το 100%, και όμως μειώνεται στο 33%, εάν μετάσταση στα οστά διαγνωστεί [2]. θεραπεία αποστέρησης ανδρογόνων (ADT) είναι επί του παρόντος προτείνεται για τους άνδρες που έχουν διαγνωστεί με ή αναπτύσσουν προχωρημένο ή μεταστατικό προστάτη μετά από τοπική θεραπεία [3]. Δυστυχώς, η αντίσταση στην ADT αναδύεται τελικά, συνήθως εκδηλώνεται ως regrowth όγκος που συνδέεται με μια αύξηση στα επίπεδα (PSA) ορό ειδικού προστατικού αντιγόνου, και στην περίπτωση των HRPC, μοιραία έκβαση συνδέεται συνήθως [4,5]. Οι παραδοσιακές θεραπευτικές στρατηγικές (χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία) που συνδέονται συχνά με ανικανοποίητος αποτελέσματα σε αυτόν τον πληθυσμό. Ως εκ τούτου, στοχευμένη θεραπεία έχει αναδειχθεί ως μια πολλά υποσχόμενη εναλλακτική λύση τροπικότητα για τους ασθενείς με μεταστατικό προστάτη ή HRPC. Ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών θεραπευτικών παρεμβάσεων με βάση τις μοριακές μελέτες με τις οποίες οι όγκοι αναπτύσσουν αντίσταση σε θεραπευτικά φάρμακα είναι επομένως μια επείγουσα ανάγκη. Πρόσφατες εργασίες έχουν στόχο τον προσδιορισμό βασικών μορίων που εμπλέκονται στη μετάσταση ως θεραπευτικοί στόχοι.

Slug (Snai2) είναι ένα μέλος της οικογένειας σαλιγκάρι, το οποίο είναι ένας παράγοντας μεταγραφής ψευδαργύρου-δακτύλου. Είναι επίσης ένα από τα σπονδυλωτά-ειδικά γονίδια που σχετίζονται με σαλιγκάρι. Έχει confimred σε έναν αριθμό in vitro μελέτες που Slug είναι κρίσιμη για μετάσταση και εισβολή ικανότητα των καρκινικών κυττάρων [6,7]. Μελέτες έχουν επίσης δείξει ότι η έκφραση Slug μπορεί να αυξηθεί σε ορισμένα όργανα (μαστού και όγκων του στομάχου ιστού), αλλά decresed σε άλλες (όπως στο κόλον, ωοθήκης και του οισοφάγου φυσιολογικούς ιστούς). προηγούμενη μελέτη μας δείχνει ότι Slug πρωτεΐνη εκφράζεται έντονα στους ιστούς του καρκίνου του προστάτη, και ότι η πρωτεΐνη Slug εκφράζεται σε, κυτταρικές γραμμές LNCaP, DU-145, και 22RV1 προστάτη PC-3. Η έκφρασή του μπορεί να υποβληθεί σε ρύθμιση σε μεταγραφή ή μετα-μεταφραστικής τροποποίησης. Βρήκαμε επίσης ότι Slug πρωτεΐνη εκφράζεται έντονα σε δείγματα όγκων αλλά όχι σε φυσιολογικό ιστό του προστάτη [8]. Ως εκ τούτου, στην παρούσα μελέτη στοχεύουμε στη μελέτη το πώς εμπλέκεται Slug στην μεταστατική ικανότητα του προστάτη και σε έλεγχο της αποτελεσματικότητας της στοχευμένης θεραπείας ενάντια σχετίζονται Slug μονοπάτια.

Υλικά και Μέθοδοι

Αντιδραστήρια

Η ραπαμυκίνη, CI-1040, 17-AAG, DHT (0,1 mg /ml) και τα πρωτογενή αντισώματα του Slug (κουνέλι), PS6 (pSer235 /236, κουνέλι), pAkt (pSer473, κουνέλι), PTEN ( κουνέλι), HIF-1α (ποντικού), HSP90 (κουνέλι), AR (κουνέλι), και β-ακτίνη (ποντικού) αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich, Μόναχο, Γερμανία. Αντισώματα Perk (pThr202 /pTyr204, κουνέλι), και Erk (κουνέλι) αγοράστηκαν από την Cell Signaling Technology (Danvers, ΜΑ). Δευτερογενή αντισώματα αγοράστηκαν από την Santa Cruz, USA. Χρησιμοποιήθηκε η χημιφωταύγειας κιτ υπόστρωμα SuperSignal West Pico (Thermo Scientific, IL). Ανθρώπινα Slug και ελέγχου siRNA που αγοράστηκαν από την Santa Cruz.

καλλιέργειας κυττάρων

Ανθρώπινο DU145, PC-3, LNCap και 22RV1 κυτταρικές σειρές αδενοκαρκινώματος του προστάτη ήταν εμπορικό και αγοράστηκαν από την Τράπεζα Κυττάρων της Κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα). LNCap και 22RV1 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 (ΡΑΑ, Γερμανία) με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) (ΡΑΑ). DU145 και PC-3 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε Ham F-12 μέσο (Gibco, ΝΥ) με L-γλουταμίνη (300 mg /L, NaHCO

3 1.5g /L) και 10% FBS. Τα κύτταρα επωάστηκαν με 5% CO

2 στους 37 ° C.

κηλίδωση Western

Η συνολική πρωτεΐνη των προϊόντων της λύσης εκχυλίζεται και καθαρίζεται. Ίση ποσότητα πρωτεΐνης 25μg φορτώθηκε δωδεκυλ θειικού νατρίου 10% γέλη πολυακρυλαμιδίου για ηλεκτροφόρηση. Οι πηκτές στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Οι μεμβράνες απέκλεισαν για 1 ώρα με 5% άπαχο γάλα. Πρωτογενή αντισώματα Slug, PS6, pAkt, ΡΤΕΝ, Perk, Erk, HIF-1α, HSP90, AR, και β-ακτίνης προστέθηκαν στη συνέχεια και οι μεμβράνες επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Αντίστοιχες δευτερογενή αντισώματα εφαρμόστηκαν ακολουθούμενη από την εφαρμογή υπεροξειδάση αρμορακίας.

Μετανάστευση και εισβολή δοκιμασία

Ιη vitro δοκιμασίες μετανάστευσης διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Εν συντομία, τα κύτταρα σπάρθηκαν στον άνω θάλαμο των ενθέτων κυτταρικής καλλιέργειας μέγεθος 8.0μm πόρου που ήταν είτε επικαλυμμένα ή μη επικαλυμμένα με Matrigel για δοκιμασίες μετανάστευσης και εισβολής, αντίστοιχα. Στη συνέχεια, τα ένθετα τοποθετήθηκαν σε μια πλάκα 24 φρεατίων γεμίζουν με μέσο με 5% ορό εμβρύου μόσχου. Τα κύτταρα που διείσδυσαν στο κάτω επιφάνειες των ενθέτων σταθεροποιήθηκαν και χρωματίστηκαν με το Diff-Quick (Fisher Scientific, Pittsburgh, ΡΑ) μέθοδο και μετρήθηκαν κάτω από το μικροσκόπιο. Ο μέσος όρος των τριών πεδίων υψηλής ισχύος για κάθε συνθήκη κίνηση τριπλούν υπολογίστηκε.

Realtime PCR

Το συνολικό RNA εκχυλίζεται με αντιδραστήριο RNAiso (Takara, Dalian, Κίνα). Μετά συγκέντρωση προσδιορίστηκε με Θέρμο Nanodrop 1000 φασματοφωτόμετρο, RNAs μετατράπηκαν σε cDNAs με κιτ αντιδραστηρίου RT PrimeScript (Takara) υπό τον όρο της 37 ° C, 15 λεπτά? 85 ° C, 5 δευτ. Οι πρόσθιοι και αντίστροφοι εκκινητές της Slug, Ε-καδερίνης, και GAPDH εσωτερικού ελέγχου (αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης) συνετέθησαν (Invitrogen) ως εξής ακολουθίες (Tab. 1): για την ανθρώπινη Ε-καδερίνης, την αίσθηση, 5′-ACA GCC CCG ΚΔ ΤΑΤ GAT Τ-3 ‘και αντίθετης φοράς, 5′-TCG ΟΑΑ CCG CTT ΚΔ TCA-3′? για Bim, αίσθηση, 5’-GGT ΚΔ CCA GTG GGT ΑΤΤ CTT TCT-3 ‘και αντίθετης φοράς, 5′-ACT GAG ΑΤΑ ΟΤΟ GTT GAA GGC CTG G-3′? για κασπάση-3, την αίσθηση, 5’-GAC AGA CAG TGG TGT TGA TGA TGA C-3 ‘και αντινόημα, 5′-GCA TGG CAC ΑΑΑ GCG ACT GGA Τ-3′? για Slug, αίσθηση, 5’-TTC GGA CCCACA CAT TAC CT-3 ‘και αντίθετης φοράς, 5′-GCA ΟΤΟ ΑΓΓ GCA AGA ΑΑΑ AG-3′? για GAPDH, την αίσθηση, 5’-ATG GAA ATC CCA TCA CCA TCT Τ-3 ‘και αντίθετης φοράς, 5′-CGC CCC ACT TGA ΤΤΤ ΤΟΟ-3’. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SYBR Green πρόμιγμα Ex Taq (Takara) σε 20 μ σύστημα ΑΒΙ 7500n (Applied Biosystem, Forster City, CA). Τα δείγματα έτρεξαν σε 95 ° C, 30 sec και ενισχύθηκαν για 40 κύκλους (95 ° C, 5 δευτερόλεπτα? 60 ° C, 34 sec). Για κάθε δείγμα, η μέση τιμή του κύκλου κατωφλίου ομαλοποιήθηκε σε επίπεδο GAPDH με τον τύπο, 2

-ΔΔCt. Τα αποτελέσματα έτσι παρουσιάστηκε από εκφραστικές πτυχές πάνω από τον έλεγχο.

Ξενομοσχεύματος και ενδοφλέβια μοντέλο όγκου

Άντρας BALB /c αθυμικά γυμνά ποντίκια στην ηλικία των 6 εβδομάδων (Vital ποταμού, Πεκίνο, Κίνα) εκτράφηκαν σε άδεια SPF (ειδικές ελεύθερες παθογόνων) εργαστηριακής ποιότητας. Όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ορχεκτομή για στέρησης ανδρογόνων. Ένα σύνολο 2 × 10

6 κύτταρα (DU145, PC-3, LNCap, 22RV1 αντίστοιχα) σε 100μΙ PBS ενέθηκαν υποδορίως σε αμφότερες τις πλευρές του κάθε ποντικού. ομάδα ελέγχου οχήματος δόθηκε 100μΙ PBS. Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε και περιφερικό αίμα συλλέχθηκε σε 1 mo. Για ενδοφλέβιες ενέσεις, 2 × 10

5 κύτταρα ενέθηκαν μέσα στην πλαγία ουραία φλέβα και το περιφερικό αίμα συλλέχθηκε σε 24 ώρες. Όλα τα πρωτόκολλα έχουν εγκριθεί από την επιτροπή δεοντολογίας των ζώων Πανεπιστήμιο Fudan.

ανίχνευσης κυτταρικός θάνατος

Ο θάνατος των κυττάρων ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ΜΤΤ δοκιμασία, μια μέθοδο που είναι καλά οργανωμένη. Εν συντομία, τα κύτταρα κατ ‘αρχάς δίνονται διαφορετικές θεραπείες, και στη συνέχεια εκτέθηκαν σε 400 μΜ H

2O

2 για 4 ώρες. Στις ομάδες ελέγχου, οι RIN-mβ κύτταρα μόνο σε επεξεργασία με 400 μΜ H

2O

2 και το αντίστοιχο φάρμακο, αντίστοιχα. Στο τέλος των θεραπειών, τα μέσα απομακρύνθηκαν και τα κύτταρα χρωματίστηκαν και μετρήθηκαν στα 495 nm χρησιμοποιώντας αναγνώστη Autoplate (Bio-Tek, USA). Η θεραπεία με 400 μΜ H

2O

2 για 4 ώρες θα μπορούσε να προκαλέσει απόπτωση των μισών περίπου από τα κύτταρα του προστάτη (~ 50%) και η δόση ήταν έτσι επιλέχθηκε ως βέλτιστη κατάσταση.

Κυκλοφορούν DNA των όγκων

ανίχνευση

αίμα ποντικού (0,5 ml) συλλέχθηκε σε υποδεικνυόμενους χρόνους με ενδοφθάλμια αιμορραγία, και τα ερυθρά αιμοσφαίρια λύθηκαν πριν από την εκχύλιση του DNA. Το Quick-gDNA κιτ miniprep (Επιγενετική, USA). Εν συντομία, 400 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος λύσης προστέθηκαν σε 100 μΐ πλάσματος. Μετά από έντονη δίνη, όλα τα περιεχόμενα μεταφέρθηκαν σε στήλες και φυγοκεντρήθηκαν. ρυθμιστικό Πρόπλυση προστέθηκε κατόπιν ακολουθούμενο από ένα άλλο φυγόκεντρο και προσθήκη ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης. DNA που τελικά εκλούεται με ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης του DNA και προσδιορίστηκαν ποσοτικά με τη χρήση δοκιμασιών PCR σε πραγματικό χρόνο TaqMan-χημεία που βασίζεται, όπως προαναφέρθηκε, για την ανθρώπινη Slug και E-cadherin εκφράσεις.

Η στατιστική ανάλυση

Ένα-δείγματος και Δύο δειγμάτων μήκους t-tests, και Mann-Whitney test χρησιμοποιήθηκαν για in vitro και in vivo μελέτες. Μία τιμή ρ ή & lt? 0.05 έγινε δεκτή ως στατιστική σημαντικότητα. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση (SD).

Αποτελέσματα

ανδρογόνων προάγει μεταστατικό δυναμικό του προστάτη μέσω up-ρύθμιση του Slug

Ο καρκίνος του προστάτη που τρέφονται με ανδρογόνων στο πλειονότητα των περιπτώσεων και η μετάβαση στο ορμονοάντοχο φαινότυπο (HRPC) συνήθως απαιτείται μακροχρόνια θεραπεία στέρησης ανδρογόνων. έτσι Ερευνήσαμε εδώ αν Slug ενεπλάκη στην ανδρογόνων διαμεσολαβείται μεταστατικής οδού στον καρκίνο του προστάτη. Με την εφαρμογή διυδροτεστοστερόνη (DHT) σε 1 ηΜ έως 4 κυτταρικές σειρές προστάτη με διαφορετικά χαρακτηριστικά, βρήκαμε ότι τα κύτταρα ήταν διαφορετική για την εγγενή ικανότητα μεταναστεύουσα τους με διαφορετική ευαισθησία στο ανδρογόνου (Σχήμα 1Α). Τα κύτταρα PC-3 ήταν πιο εγγενώς επεμβατική, και LNCaP και 22RV1 ήταν πιο ευαίσθητα σε διέγερση ανδρογόνου με σημαντικές αυξήσεις σε μεταστατικό προφίλ. Παρόμοιο μοτίβο μεταβολής διηθητικότητας παρατηρήθηκε επίσης στην δοκιμασία εισβολής, επιβεβαιώνοντας τα προφίλ προαναφερθέντα (Σχήμα 1Β). Για να διαλευκανθεί αν Slug εμπλεκόταν στην ενίσχυση μετάσταση /εισβολή ορμονών που σχετίζονται με, διερευνήσαμε τα επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης σε αυτά τα κύτταρα. Κατά συνέπεια, η έκφραση του Slug ήταν σημαντικά αυξημένη σημαντικά σε LNCaP και 22RV1 κυττάρων που ήταν ορμόνη ευαίσθητα σε απόκριση DHT (Σχήμα 1 C). Η αλλαγή στην έκφραση του mRNA αντιστοιχούσε επίσης σε αλλαγές στο επίπεδο πρωτεΐνης, όπως αποκαλύπτεται στο ανοσοστύπωμα (Εικόνα 1D). Ε-καδερίνη, μία πρωτεΐνη κρίσιμη για προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου έχει καθιερωθεί για την πραγματοποίηση κατάντη του Slug, αναστέλλοντας επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ) και μετέπειτα διαφυγή των κυττάρων. Μελετήσαμε περαιτέρω αν η ενεργοποίηση του Slug με ανδρογόνων που προκύπτουν αναστολή της Ε-καδερίνης για την προώθηση της μετανάστευσης των κυττάρων και εισβολή. Σύμφωνα με προηγούμενες δοκιμασίες, τόσο mRNA και τα επίπεδα της πρωτεΐνης Ε-καδερίνης μειώθηκαν μετά την προσθήκη DHT σε κύτταρα ευαίσθητα σε ανδρογόνου (Σχήμα 1Ε, F). Συμπερασματικά, εδώ έχουμε καταδείξει τις διαφορές των ευαισθησιών των ανδρογόνων των 4 κυτταρικών σειρών προστάτη και αποκάλυψε ότι τα κύτταρα ευαίσθητα στην ανδρογόνα διεγείρονται είχε αυξηθεί η ικανότητα για τη μετανάστευση και την εισβολή μέσω αυξημένων Slug και μειωμένη δραστηριότητα E-cadherin. Έτσι, για τα κύτταρα ευαίσθητα στην ανδρογόνα, τα οποία υποτίθεται ότι είναι ορμόνη-στέρηση ανθεκτικά, θα πρέπει να υπάρχουν μονοπάτια στα οποία στηρίχθηκε η μετανάστευση και οι οποίες θα μπορούσαν να έχουν ως στόχο την εισβολή.

Μετανάστευση (Α) και την εισβολή (Β ) δοκιμασίες διεξάγονται σε 4 κυτταρικές σειρές προστάτη σε κατεργασία με διυδροτεστοστερόνη (DHT) και ελέγχου. Επίπεδα του mRNA (C) και της πρωτεΐνης (Δ) του Slug σε κυτταρικές σειρές προστάτη σε επεξεργασία με DHT ή ελέγχου. Επίπεδα mRNA (Ε) και της πρωτεΐνης (F) του Ε-καδερίνης σε κυτταρικές σειρές προστάτη σε επεξεργασία με DHT ή PBS (έλεγχος). (Error bar = τυπική απόκλιση? N = 3 για κάθε ομάδα? * Ρ & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01).

Η

Συνδυασμός της ραπαμυκίνης και CI-1040 μειώνει εισβολής του προστάτη

Υπερκινητικότητα της PTEN /Akt /mTOR δρόμος έχει αποδειχθεί ότι είναι προ-ογκογόνο σε μια ποικιλία καρκίνων, συμπεριλαμβανομένης της ογκογένεσης του προστάτη, στην οποία γυμνοσάλιαγκας ήταν γνωστό ότι είναι ένας κατάντη τελεστή της υποξίας επαγώγιμου παράγοντα-1α ( HIF-1α). Στη συνέχεια σπούδασε αν η αναστολή της mTOR μείωσε το μεταστατικό δυναμικό του προστάτη μέσω Slug. Διαπιστώσαμε σημαντική απώλεια του ΡΤΕΝ σε DU145 και PC-3 κύτταρα, μικρή απώλεια σε LNCaP κυττάρων σε σύγκριση με 22RV1 κύτταρο. Τα υποκατάστατα κατάντη για Akt, mTOR, και τις δραστηριότητες HIF-1α ήταν όλα αυξήθηκαν στα ΡΤΕΝ-αρνητικά κύτταρα, υποδεικνύοντας μία αλλαγή σε mTOR μονοπάτι για ανδρογόνο ευαίσθητη φαινότυποι (Σχήμα 2Α). Η προσθήκη της ραπαμυκίνης στο 10ηΜ μειωμένα επίπεδα Slug σε όλες τις κυτταρικές σειρές, αλλά το βασικό επίπεδο γυμνοσάλιαγκα εμφανίστηκε υψηλότερη σε DU145 και PC-3 κύτταρα (Σχήμα 2Β). Η ραπαμυκίνη στην ίδια δόση ανέστειλε την μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων με απώλεια του ΡΤΕΝ κατά ~ 30% και δεν επηρέασε 22RV1 (Σχήμα 2C, D). Όπως αναστολή mTOR μπορεί να επιφέρει ανατροφοδοτήσεις που ήταν αντίθετα pro-ογκογόνο, εξετάσαμε τη δραστηριότητα των ERK1 /2, η οποία αναφέρθηκε για να παίξει εναλλακτικό ρόλο στη ρύθμιση της έκφρασης γυμνοσάλιαγκας στο προστάτη προηγουμένως. Εντυπωσιακά, δραστηριότητα ERK1 /2 ήταν αυξημένα σε όλες τις 3 κυτταρικές σειρές με την απώλεια του ΡΤΕΝ μετά την εφαρμογή ραπαμυκίνη, υποδεικνύοντας μία παράκαμψη των υφιστάμενων παρακάμπτοντας mTOR προς Slug (Σχήμα 2Ε). Έχουμε έτσι δοκιμάζεται αν ο συνδυασμός ραπαμυκίνης και CI-1046, ένας /2 αναστολέα ERK1, η οποία είναι σε κλινική δοκιμή θα μπορούσε να μειωθεί περαιτέρω το μεταστατικό προφίλ σε αυτά τα κύτταρα. Κηλίδωση Western έδειξε ότι ο συνδυασμός των φαρμάκων μειώνεται σημαντικά το επίπεδο Slug σε όλες τις κυτταρικές σειρές προστάτη (Σχήμα 2F). Στη συνέχεια εξετάστηκε εάν η ραπαμυκίνη που πραγματοποιούνται μέσω του αποκλεισμού της mTORC1 και ασκείται προς τα κάτω δράση του μέσω της ERK και Slug. Αγωγή κυττάρων DU145 με διαφορετικούς συνδυασμούς της ραπαμυκίνης, αρπακτικών και Rictor siRNAs, βρήκαμε ότι, αν και ένας πλήρης αποκλεισμός των δύο στοιχείων MTOC-1 και -2 οδήγησε σε μέγιστη αναστολή της ERK και Slug, η ανασταλτική επίδραση της ραπαμυκίνης ήταν ενδεχομένως μέσω mTORC1- ERK-γυμνοσάλιαγκας οδού (Σχήμα 2G). Η συνεργική δράση του συνδυασμού 1 ηΜ ραπαμυκίνης και 0,5 μΜ CI-1040 δείχθηκε στα Σχήματα 2Η, Ι Υπήρχαν μεγαλύτερη αναστολή της μετανάστευσης και της εισβολής ικανότητα σε κύτταρα με επίτευξη απώλειας ΡΤΕΝ ~ 50% σε σύγκριση με τη μονοθεραπεία της ραπαμυκίνης. Εν κατακλείδι, ανδρογόνο-αναίσθητη προστάτη ήταν γενικά mTOR υπερκινητικά λόγω της απώλειας PTEN. Μονοθεραπεία με ραπαμυκίνη όμως συνεπάγεται την ενεργοποίηση ΕΚΚ, το οποίο ενεργοποιείται γυμνοσάλιαγκας ως παράκαμψη. Συνδυασμός αναστολέων mTOR και ERK που ανατίθενται καλύτερα αποτελέσματα από τη μονοθεραπεία.

επίπεδα Basal του ΡΤΕΝ, φωσφορυλιωμένου Akt και S6, και HIF1α στις κυτταρικές σειρές προστάτη υποδεικνύεται με κηλίδα Western (Α). Αλλαγή του επιπέδου Slug στα κύτταρα του προστάτη που έλαβαν θεραπεία με ραπαμυκίνη τον έλεγχο (Β). Μετανάστευση (C) και την εισβολή (D) δοκιμασίες σε κυτταρικές σειρές προστάτη, με ή χωρίς ραπαμυκίνης θεραπεία. Η ενεργοποίηση του Erk 1/2 οδού σε κύτταρα προστάτη ανταποκρίνεται στη θεραπεία ραπαμυκίνη (Ε). θεραπείες συνδυασμού ραπαμυκίνης (R) και CI-1040 (CI) σε κυτταρικές σειρές προστάτη και την επίδραση στην Slug (F). Συνδυασμοί ραπαμυκίνης και Raptor /Rictor siRNAs και οι επιπτώσεις στην ERK και Slug στα κύτταρα DU145 (G). Η μετανάστευση (H) και της εισβολής (Ι) δοκιμασίες σε κυτταρικές σειρές προστάτη, με ή χωρίς επεξεργασία συνδυασμό με ραπαμυκίνη και CI-1040. (Error bar = τυπική απόκλιση? N = 3 για κάθε ομάδα? * Ρ & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01).

Η

17-ΑΑΟ μειώνει την έκφραση γυμνοσάλιαγκας μέσω αναστολής της HSP90 που εξαρτώνται AR σταθερότητας

Αν και ορμόνη στέρησης είχε μακροχρόνιες επιπτώσεις στις ΣΕΣ, θα μπορούσε να προκύψει μια σειρά συστηματικών ανεπιθύμητων ενεργειών. Όπως ανδρογόνων που εξασκείται επιδράσεις της μέσω πρόσδεσης στον υποδοχέα της (AR), το οποίο προκάλεσε την ενεργοποίηση Slug, ελέγξαμε εάν η στοχευμένη θεραπεία έναντι Slug μονοπάτι θα μπορούσαν να στοχεύουν στην AR. Έχει διαπιστωθεί ότι θερμικού σοκ πρωτεΐνη 90 (Hsp90) απαιτείται για τη σταθερότητα των πρωτεϊνών, συμπεριλαμβανομένων AR. Στη συνέχεια σπούδασε αν η χρήση της Hsp90 αναστολέα 17-ΑΑΟ θα μπορούσε να μειώσει την επίδραση των ανδρογόνων στο μεταστατικό προφίλ του προστάτη μέσω αναστολής της Slug. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε μόνο με DHT ή με συνδυασμό των 300 ηΜ του 17-AAG. Όπως αναμένεται, ο συνδυασμός του 17-AAG απέκλεισαν δραστηριότητα Slug περισσότερο προφανώς σε ευαίσθητες κυτταρικές γραμμές ορμόνης (Σχήμα 3Α). Επιπροσθέτως, η αναστολή της μετανάστευσης και της εισβολής δεν ήταν μόνο παρατηρήθηκε σε ανδρογόνο ευαίσθητες κυτταρικές σειρές αλλά σε κύτταρα PC-3 όπως επίσης (Σχήμα 3Β, C). Για να συνοψίσω, ο αποκλεισμός της Hsp90 αποσταθεροποίησε AR αποτέλεσμα τη μειωμένη επίδραση των ανδρογόνων για την προώθηση της μετανάστευσης κυττάρων και εισβολής. Παρεμβολή επίδραση της 17-AAG θα μπορούσε να υπάρξει, όπως ασκείται επίσης επίδραση σε αναίσθητη κύτταρα ανδρογόνων. Επίπεδα

Slug σε κύτταρα προστάτη σε επεξεργασία με DHT ή συνδυασμό DHT και 17-AAG (Α). Μετανάστευση (Β) και την εισβολή (C) δοκιμασίες σε κυτταρικές σειρές προστάτη, με ή χωρίς συνδυασμό με θεραπεία DHT ή συνδυασμό DHT και 17-AAG. (Error bar = τυπική απόκλιση? Η = 3 για κάθε ομάδα? * Ρ & lt? 0,05? ** Ρ & lt? 0,01).

Η

Slug αναστέλλει Bim απόπτωση που διαμεσολαβείται από το οποίο μπορεί να διασωθεί από mTOR /Erk /HSP90 αναστολείς

Μέχρι τώρα, έχουμε δημιουργήσει επιπτώσεις της στόχευσης 3 γυμνοσάλιαγκας που σχετίζονται με οδούς με σοβαρές επιπτώσεις στην αναστολή μεταστατικό προφίλ. Όπως Slug ήταν επίσης υπεύθυνος για την κατάντη αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα της στα καρκινικά κύτταρα, εξετάσαμε αν ο συνδυασμός των Slug-στόχευση φαρμάκων που ανατίθενται προ-αποπτωτικά αποτελέσματα. Εμείς μιμήθηκε πρώτο αντιδραστικό είδος οξυγόνου (ROS) χρησιμοποιώντας H

2O

2, και βρέθηκε ότι τα κύτταρα με ανδρογόνο αναισθησία ήταν πιο ανθεκτικά στην ROS και ανδρογόνων θα μπορούσε να διασώσει την απόπτωση σε ευαίσθητες κυτταρικές γραμμές ορμόνης (Σχήμα 4Α). Όπως Bim ήταν υπεύθυνος για την Slug μεσολάβηση αντι-απόπτωσης, προσδιορίσαμε περαιτέρω την έκφραση του Bim σε όλα τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με DHT. Έκφραση Bim παρέμεινε αμετάβλητη σε ανδρογόνων αναίσθητη κυττάρου και μειώθηκαν σημαντικά σε ανδρογόνο ευαίσθητα κύτταρα (Σχήμα 4Β). Για να χαρακτηριστεί καλύτερα τον ρόλο του Slug σε αντι-απόπτωση, εφαρμόσαμε siRNA κατά έκφραση Slug σε όλες τις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 4C). Το ανασταλτικό αποτέλεσμα ήταν προεξέχων εκτός από 22RV1 κύτταρο, στο οποίο η δραστικότητα Slug ήταν ιδιοσυστατικά χαμηλή, αντιπροσωπεύοντας χαμηλότερη εγγενή μεταστατική ικανότητα του (Σχήμα 1Α). Δοκιμάσαμε περαιτέρω τη δράση της κασπάσης-3 μετά Slug νοκ ντάουν. Έκφραση της κασπάσης-3 ήταν σημαντικά μειωμένη σε 3 κυτταρικές γραμμές με υπερδραστήρια Slug και παρέμεινε αμετάβλητη σε 22RV1 κύτταρα (Σχήμα 4Ε). Στη συνέχεια εφαρμόζεται ο συνδυασμός ραπαμυκίνης, CI-1040, και 17-AAG στα μη επιμολυσμένα κύτταρα για τη δοκιμή των συνεργιστικά αποτελέσματα. Εντυπωσιακά, ο συνδυασμός έσωσε το αντι-αποπτωτικό αποτέλεσμα του Slug ξεκίνησε από ανδρογόνο και ROS σε όλες τις κυτταρικές σειρές, στις οποίες λήφθηκαν στατιστικά σημασίες για DU145, PC-3 και LNCaP κύτταρα (Σχήμα 4F). Συνολικά, Slug ανατίθενται αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα σε κύτταρα προστάτη μέσω αναστολής του Bim, διαδρομή πιο πιθανό να ενεργοποιούνται στα ευαίσθητα κύτταρα ορμόνης με την παρουσία ανδρογόνων. Ένα τηγάνι-αποκλεισμό του mTOR /ERK /Hsp90 φάνηκε να είναι σε αναστολή Slug, καθώς και ότι η δραστηριότητα κάτω-ροή.

κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα προστάτη αντιμετωπίζονται με DHT σε απάντηση ROS προσομοιώνεται με H

2O

2 (Α). Το επίπεδο έκφρασης του Bim σε κύτταρα προστάτη σε επεξεργασία με DHT (Β). Knockdown του Slug με siRNA (C) και το επίπεδο του mRNA του Bim σε κυτταρικές γραμμές προστάτη εξής Slug knockdown (D). Αλλαγή της κασπάσης 3 επιπέδων mRNA στα κύτταρα του προστάτη μετά από Slug νοκ ντάουν (Ε). Επίδραση του συνδυασμού της ραπαμυκίνης, 17-ΑΑΟ, και CI1040 σε κυτταρικό θάνατο των κυττάρων του προστάτη αντιμετωπίζονται με DHT και H

2O

2. (Error bar = τυπική απόκλιση? N = 3 για κάθε ομάδα? * Ρ & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01).

Η

Συνδυασμός αναστολείς mTOR /Εγκ /HSP90 μειώνει κυκλοφορούντα κύτταρα του προστάτη

in vivo

Η

προστάτη είναι πολύ πιο επιρρεπείς σε μετάσταση στα οστά σε σχέση με άλλα όργανα, για την οποία αιματογενής μετάσταση είναι απαραίτητη προϋπόθεση. Έχουμε έτσι καθιερωμένα ζωικά μοντέλα για να δοκιμαστεί η επίδραση του φαρμάκου συνδυασμού in vivo. Αντί για την ίδρυση της οστικής μεταστατικό μοντέλο, το οποίο ήταν δύσκολο να εντοπίσουμε τα ελάχιστα μεταστατικών βλαβών, επιδιώξαμε να ανιχνεύσει κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων, προφίλ της μεταστατικής ικανότητας του πρωτογενούς όγκου. Ιδρύσαμε πρώτα μοντέλα ξενομοσχεύματος με τις κυτταρικές σειρές 4 αντίστοιχα. Προκειμένου να ομαλοποιήσει το μέγιστο επίπεδο ανδρογόνων, ορχεκτομή εκτελέσαμε σε όλους τους ποντικούς και ενέθηκαν 200 μg του DHT στο σησαμέλαιο-αιθανόλης υποδορίως κάθε δεύτερη ημέρα. Οι ποντικοί εγχύθηκαν με 200 μΙ ενός διαλύματος 1,2 mg /ml της ραπαμυκίνης ημερησίως (5 ημέρες την εβδομάδα). Τα ποντίκια υποβλήθηκαν επίσης σε αγωγή δύο φορές την ημέρα με ενδοπεριτοναϊκή ένεση (ΙΡ) 100 mg /kg CI-1040 ενώ 17-AAG (80mg /kg /d σε αποστειρωμένο αραβοσιτέλαιο) παραδόθηκε από 1 ένεση ΙΡ ανά ημέρα. Κατά τη διάρκεια της θεραπείας, τα σωματικά βάρη όλων των ποντικών παρακολουθήθηκαν για την παρακολούθηση της τοξικότητας. Τα Σχήματα 5Α, Β, C, D έδειξε τα βάρη των ποντικών implaneed με διαφορετικές κυτταρικές σειρές προστάτη υπό διαφορετικές θεραπείες. Δεν υπήρχαν σημαντικές αλλαγές μεταξύ θεραπειών και των ομάδων ελέγχου, υποδεικνύοντας μη τοξικές επιδράσεις των θεραπειών. Αφού το αίμα είχε συγκομισθεί το ποσοτικό πραγματικό χρόνο PCR αποκάλυψε ότι τα κύτταρα LNCaP ήταν η πιο ισχυρή στο μεταστατικό ικανότητα ενώ 22RV1 κύτταρα δύσκολα κάνει μετάσταση. Η τριπλή θεραπεία αναχαιτιστεί αποτελεσματικά τη φοροδιαφυγή όγκου στο σύστημα που κυκλοφορεί στις υπόλοιπες 3 κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με είτε 2 φάρμακα ή ορμόνες στέρηση μόνο (έλεγχος) (Σχήμα 5Ε). Εμείς δίπλα προσπάθησε να μελετήσουμε αν ο συνδυασμός που επηρεάζονται αγκύρωσης ικανότητα των κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων και έτσι εγχέεται καρκινικά κύτταρα στην κυκλοφορία του ποντικιού. Μετά την επεξεργασία με μία μόνο δόση ραπαμυκίνης και 17-AAG, και δύο φορές ένεση του CI-1040 όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, το αίμα συλλέχθηκε σε σημείο καθορισμένη ώρα. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5Β, η τριπλή θεραπεία μείωσε σημαντικά κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων. Συνδυασμός ραπαμυκίνης και CI-1040 επιτευχθούν παρόμοια αποτελέσματα σε σύγκριση με στέρησης ανδρογόνων. Στο σύνολό τους, δεν έχουμε μόνο κατέδειξε ότι η τριπλή φαρμακευτική αγωγή αναστολής mTOR /ΕΚΚ /Hsp90 μειωμένη μεταστατική ικανότητα του όγκου, αλλά επίσης έδειξε ότι μια τέτοια στοχευμένη θεραπεία συγκλονισμένοι την ευαισθησία προς ανδρογόνα των κυττάρων. Η ανασταλτική ήταν συνεπής σε κύτταρα με ή χωρίς ευαισθησία ορμόνη και ανεξάρτητα από την παρουσία των ανδρογόνων (Σχήμα 5F).

Τάση μεταβολής του βάρους κατά τη διάρκεια της περιόδου θεραπείας σε όλες τις 4 προστάτη ποντίκια κυττάρων ξενομοσχεύματος (Α-Δ). Κυκλοφορούν PCa DNA ποσοτικοποίηση σε μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού εμφυτευμένων με 4 κυτταρικές σειρές προστάτη και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με διαφορετικούς συνδυασμούς φαρμάκων (Ε). Κυκλοφορούν PCa DNA ποσοτικοποίηση 24 ώρες μετά την φλεβική έγχυση κυττάρων προστάτη σε ποντίκια που λαμβάνουν μόνο θεραπεία των συνδυασμών φαρμάκων (F). (Error bar = τυπική απόκλιση? N = 6 για κάθε ομάδα? * Ρ & lt? 0,05? ** P & lt? 0,01).

Η

Συζήτηση

Καταπολέμηση του προστάτη παραμένει σημαντική για την υγεία πρόβλημα, ειδικά για ασθενείς με προχωρημένο στάδιο της νόσου, για τους οποίους η στοχευμένη θεραπεία μπορεί να φέρει την ελπίδα. Εδώ έχουμε καταδείξει ότι το συνδυασμένο στοχευμένη θεραπεία έναντι Slug είναι αποτελεσματική σε μεταστατικό μοντέλα PCa. Με βάση την προηγούμενη βιβλιογραφία και τα αποτελέσματά μας, μπορούμε να συμπεράνουμε τα διαφορετικά χαρακτηριστικά των κυττάρων του προστάτη, η οποία μπορεί να ωφελήσει τις μελλοντικές μελέτες για τις κατάλληλες εγκαταστάσεις μοντέλο (Σχήμα 6Α). Το πιο σημαντικό, μπορούμε να προτείνουμε ότι Slug βρίσκεται στη σύγκλιση του mTOR /Erk μονοπάτι /HSP90-AR και, συνεπώς, ανταποκρίνεται περισσότερο στο συνδυασμό παρά τη μονοθεραπεία (Εικόνα 6Β). Με αποκλεισμό του ανάντη της Slug, η αναστολή της μεταστατικής ικανότητας θα πρέπει να επωφεληθούν άμεσα από την ενεργοποίηση E-cadherin. E-cadherin είναι μια πρωτεΐνη προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου εξαρτώμενη από ασβέστιο και λειτουργεί ως καταστολέας όγκου. Η απώλεια της έκφρασης Ε-καδερίνης ή της λειτουργίας είναι ένα κοινό συμβάν στην πρόοδο του όγκου [9]. Κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης είναι ο βασικός στόχος της επιθηλιακής προς μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) ρυθμιστές, που είναι γνωστό να διαλύσει κόμβους κυττάρου-κυττάρου καντερίνης-φαρμακευτική και απαραίτητη για την εμβρυϊκή ανάπτυξη, την εξέλιξη του καρκίνου και αντίσταση χημειοθεραπεία [10,11] . Λόγω της κρίσιμο ρόλο της στην EMT, E-cadherin απαιτεί αυστηρό έλεγχο στον καρκίνο. Έτσι, στις περισσότερες σενάρια του καρκίνου, η έκφραση Ε-καδερίνης καταστέλλεται στο μεταγραφικό επίπεδο. Διάφορα pro-ογκογόνο μονοπάτια, όπως ΜΑΡΚ /ΕΚΚ, PI3K /Akt /mTOR, και Hsp90 /AR, συμμετέχει στη ρύθμιση της EMT [12,13], και όλοι ένα κοινό τελικό σημείο: την ενεργοποίηση μιας σειράς παραγόντων μεταγραφής που καταστέλλουν άμεσα E-cadherin. Αρκετοί παράγοντες μεταγραφής έχουν ταυτοποιηθεί που καταστέλλουν E-cadherin συμπεριλαμβανομένων σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας, Twist και ZEB1 μέσω της αλληλεπίδρασης τους με την θέση πρόσδεσης E-box στον υποκινητή E-cadherin [14,15].

Ο χαρακτηρισμός του κύτταρα του προστάτη βασίζεται σε αυτή τη μελέτη με βάση τα αποτελέσματα μας και αναφορές της βιβλιογραφίας (Α). Το σχηματικό σχέδιο που δείχνει πώς

Η

Η PI3K /Akt /mTOR σηματοδοτικό μονοπάτι είναι καλά τεκμηριωμένο ότι είναι ο συνδυασμός της επίδρασης φαρμάκων μέσω στόχο την γυμνοσάλιαγκας που σχετίζονται μονοπάτι όπου Slug βρίσκεται στην πλήμνη (Β). συχνά απορυθμισμένη και χρησιμεύει ως ογκογόνο οδό σε διάφορα είδη καρκινωμάτων [16]. Έχει καθιερωθεί ότι η mTOR μονοπάτι σηματοδότησης ρυθμίζει τη σύνθεση πρωτεϊνών σε απόκριση προς διάφορους παράγοντες ανάπτυξης και, κατά συνέπεια, επηρεάζει τόσο κυτταρική επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [17]. Στην παρούσα μελέτη, η αναστολή της ΡΙ3Κ σηματοδότησης /Akt /mTOR, με ραπαμυκίνη, μερικώς κατήργησε HIF-1α που προκαλείται σαλιγκάρι και τα επίπεδα έκφρασης Slug σε βραχείας διάρκειας, υποδηλώνοντας έκφραση Slug μπορεί να ρυθμίζεται από ΡΙ3Κ /Akt /mTOR σηματοδότηση [18, 19]. Η ενεργοποίηση του ΡΙ3Κ /Akt σηματοδότηση έχει βρεθεί ότι διεγείρει σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα έκφραση μέσω GSK-3β /σηματοδότηση β-κατενίνης και στη συνέχεια να ρυθμίζουν προς τα κάτω Ε-καδερίνης σε διαφορετικά κυτταρικά περιβάλλοντα [20]. Η τρέχουσα δεδομένων υποστηρίζει έναν κρίσιμο ρόλο για την HIF-1α /PI3K /Akt /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης στην διαμεσολάβηση γυμνοσάλιαγκας-ρύθμιση της E-cadherin στην ΣΕΣΣ. Παρ ‘όλα αυτά, η παρατεταμένη αναστολή της mTOR με ραπαμυκίνη εμφάνισε μειωμένη ρύθμιση προς τα κάτω του Slug, η οποία είναι ενδεικτική του να ενεργοποιείται ένας ανθεκτικός οδό.

Όπως αναδυόμενες στοιχεία δείχνουν ότι τόσο η ΜΑΡΚ /ΕΚΚ και η PI3K /Akt οδών που εμπλέκονται στη ρύθμιση της E-cadherin, εξετάσαμε την ενεργοποίηση Erk και είναι έκπληξη να μάθετε ότι η παράκαμψη με Erk λογαριασμοί για το αντίσταση στην αναστολή mTOR για Slug. Σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, Slug εξαρτώμενη ανοδική ρύθμιση έχει δειχθεί ότι ρυθμίζει προς τα κάτω την έκφραση Ε-καδερίνης μέσω του /ΕΚΚ μονοπάτι σηματοδότησης ΜΑΡΚ [21]. Χαρακτηρίζεται θηλαστικών ενεργοποιημένη πρωτεΐνη κινάση είναι (ΜΑΡΚ) μέλη μονοπάτι χωρίζεται σε τρία κύρια υπο-οικογένειες? Εξωκυτταρικό σήμα-Ρυθμιζόμενη Κινάσης 1/2 (ERK 1/2), ρ38 ΜΑΡΚ, και c-Jun Ν-τερματικής κινάσης (JNK)? Οι διατηρούμενες μέσω της εξέλιξης, η οδός σηματοδότησης ERK 1/2 οργανώνεται σε τριών κινάση καταρράκτη φωσφορυλίωσης που περιλαμβάνουν Raf (ή ΜΑΡΚ κινάση κινάση), ΜΕΚ (κινάση ή ΜΑΡΚ) και ERK 1/2 (ή ΜΑΡΚ) [22,23] . Η ενεργοποίηση της ERK 1/2 σε αποκρίσεις σε μια σειρά από εξωτερικά ερεθίσματα μπορεί να προωθήσει την έκφραση ειδικών γονιδίων μέσω φωσφορυλίωσης πολλών παραγόντων μεταγραφής όπως Elk-1 [24]. Λόγω της εγγύτητας προς την οδό mTOR, Erk είναι πολύ πιθανό να πραγματοποιούν ελιγμούς όταν δραστικότητα του mTOR αναστέλλεται, όπως φαίνεται στη μελέτη μας. Συνεπώς, η αναστολή των οδών ΜΑΡΚ /ΕΚΚ, με Cl-1040 θα μπορούσαν τόσο χρησιμοποιηθεί ως αυτόνομο θεραπεία και ως ευαισθητοποιητής για τη ραπαμυκίνη.

Οι πρωτεΐνες θερμικού σοκ 90 (Hsp90) αποτελούνται από μία άκρως συντηρημένη οικογένεια πρωτεϊνών που απαιτούνται για την ανοχή του στρες σε ζωντανά κύτταρα. Hsp90 είναι ένα πανταχού παρόν μοριακός συνοδός, βρέθηκε να υπερεκφράζεται σε μία ποικιλία καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη, η οποία είναι μοναδική μεταξύ των μοριακών συνοδών όπως η πλειονότητα των γνωστών υποστρωμάτων του είναι πρωτεΐνες μεταγωγής σήματος [25]. Μεταξύ των πρωτεϊνών πελατών της είναι παράγοντες μεταγραφής, ρυθμιστές του κυτταρικού κύκλου, κινάσες σηματοδότησης, μεσολαβητές απόπτωσης όπως επίσης και υποδοχείς στεροειδούς ορμόνης, όπως ο υποδοχέας ανδρογόνων (AR), τα οποία έχουν κρίσιμο ρόλο στην καρκινογένεση προστάτη και στην εξέλιξη της HRPC [26] . Επιπλέον, ο AR προωθεί την αύξηση του HRPC μέσω ενός αριθμού μηχανισμών που βασίζονται επί στενά Hsp90 για την επιβίωση των κυττάρων, ιδιαίτερα AR υπερέκφραση και να αποκτήσουν-of-λειτουργίας του γονιδίου AR μεταλλάξεων [27]. Ως εκ τούτου, η στόχευση Hsp90 είναι ένα ιδιαίτερα ελκυστικό αντικαρκινικό προσέγγιση για τον καρκίνο του προστάτη. Η ευρεία ανασταλτική δράση των αναστολέων Hsp90 φαίνεται να είναι αποτελεσματική σε κύτταρα που εκφράζουν ματισμένες παραλλαγές του AR τα οποία στερούνται την περιοχή δέσμευσης συνδέτη και επομένως ανθεκτικό σε συμβατικές AR ανταγωνιστές [28]. Η πρώτη τάξη του Hsp90 αναστολέων εξετάστηκε ήταν γελδαναμυκίνη ανάλογα, συγκεκριμένα 17-αλλυλαμινο-17-δεμεθοξυ-γκελνταναμυκίνη (17-ΑΑΟ).