Αφηρημένο

Ιστορικό

Η καυτηρίαση με ραδιοσυχνότητες (RFA) είναι μία από τις ιαματικές θεραπείες για ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC), ωστόσο, η επιτάχυνση της εξέλιξης του υπολειπόμενου HCC μετά ελλιπή RFA έχει αναφερθεί πιο συχνά . Ο βασικός μοριακός μηχανισμός του φαινομένου αυτού μένει να διευκρινιστεί. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε ένα ατελές ορθοτοπικό HCC μοντέλο γυμνού ποντικού RFA για να μελετήσει την επεμβατική και μεταστατικό δυναμικό του υπολειμματικού καρκίνου, καθώς και τη συσχετισμένη μηχανισμό.

Μέθοδοι

Η ελλιπής RFA ορθοτοπική γυμνό ποντίκι μοντέλα δημιουργήθηκαν με τη χρήση υψηλού μεταστατικού δυναμικού HCC κυτταρική σειρά HCCLM3 και το χαμηλό μεταστατικό δυναμικό HCC κυτταρική σειρά HepG2, αντίστοιχα. Οι αλλαγές στην κυτταρική μορφολογία, την κινητικότητα, τη μετάσταση και επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ), και HCC κύτταρο μοριακών δεικτών μετά

in vitro

και

in vivo

παρατηρήθηκαν ατελής παρέμβαση RFA.

Αποτελέσματα

Η πνευμονική και ενδοπεριτοναϊκή μετάσταση παρατηρήθηκαν σε

in vivo

μελέτη. Η υποκείμενη προ-επεμβατική μηχανισμός ελλιπών RFA φάνηκε να σχετίζεται με την προώθηση των EMT, συμπεριλαμβανομένης της προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και ανοδική ρύθμιση του Ν-καντερίνης και βιμεντίνη. Αυτά τα αποτελέσματα ήταν σύμφωνα με την

in vitro

απόκριση των κυττάρων HCC σε θερμότητα παρέμβαση. Περαιτέρω μελέτες έδειξαν ότι η β-κατενίνης ήταν καθοριστικό παράγοντα κατά τη διάρκεια αυτού του μαθήματος και το κλείδωμα της β-κατενίνης μειωμένη μετάσταση και φαινότυπο EMT αλλαγές στα κύτταρα HCCLM3 θερμικά επεξεργασμένο

in vitro

.

Συμπέρασμα

Ελλιπής RFA ενίσχυσε την επεμβατική και μεταστατικό δυναμικό του υπολειμματικού καρκίνου, που συνοδεύει με EMT-όπως αλλαγές φαινοτύπου με την ενεργοποίηση σηματοδότησης β-κατενίνης στα κύτταρα HCCLM3

Παράθεση:. Zhang N, Wang L, Chai ZT, Zhu ZM, Zhu XD, Ma DN, et al. (2014) Ελλιπής Καυτηρίαση Ενισχύει της διεισδυτικότητας και Μετάσταση της υπολειπόμενης Καρκίνου του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος κυττάρων HCCLM3 μέσω Ενεργοποίηση β-κατενίνης σηματοδότησης. PLoS ONE 9 (12): e115949. doi: 10.1371 /journal.pone.0115949

Επιμέλεια: Terence Lee, Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 14 Ιούνη 2014? Αποδεκτές: 27 Νοεμβρίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 26 Δεκ 2014

Copyright: © 2014 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση: Το έργο αυτό χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (αριθμός επιχορήγησης: 81.372.314).? Σαγκάη Ταμείο Φυσικών Επιστημών για τους μελετητές Νεολαίας (12ZR1442300)? το Εθνικό Σχέδιο Κλειδί για Λοιμώξεων (2012ZX10002012-004). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) είναι η πέμπτη πιο κοινή μορφή καρκίνου παγκοσμίως και η τρίτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται [1]. Αν και η χειρουργική εκτομή είναι η τυπική μορφή θεραπείας για HCC, η χρήση της περιορίζεται συνήθως επειδή η πλειοψηφία των ασθενών, ακόμη και με μικρά HCC, έχουν συνδέσει σοβαρή ηπατική δυσλειτουργία [2], [3]. μεταμόσχευση ήπατος παρέχει μια εναλλακτική θεραπεία για τις μικρές ανεγχείρητο ΗΚΚ, ωστόσο, η έλλειψη μοσχευμάτων ήπατος περιορίζει τη δυνατότητα εφαρμογής αυτής της προσέγγισης [4]. Λόγω αυτών των συνθηκών, έχουν αρκετές μη χειρουργικές τεχνικές έχουν εισαχθεί για θεραπεία HCC, όπως ραδιοσυχνότητας (RFA), διαδερμική έγχυση αιθανόλης (ΡΕΙ) και θεραπεία θρόμβωσης μικροκυμάτων (MCT) [5], [6]. Μεταξύ αυτών των τεχνικών, η RFA είναι σήμερα το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο θεραπευτική επιλογή λόγω της απλότητας, την ασφάλεια, την ελάχιστη εισβολής, την επαναληψιμότητα και την συντομότερη παραμονή στο νοσοκομείο [4]. RFA θεωρείται η καλύτερη επιλογή για ανεγχείρητο ΗΚΚ σε ασθενείς με όχι περισσότερα από τρία οζίδια του ήπατος, η μέγιστη διάμετρος όγκου 3 cm, και με διατηρούμενη λειτουργία του ήπατος (Child-Pugh A και B) [7], [8]. Ωστόσο, μία από τις μεγαλύτερες προκλήσεις με RFA είναι υπολειμματική ιστό του όγκου και τοπικής υποτροπής μετά την τοπική αγωγή, αναφέρθηκε ότι οι επαναλαμβανόμενες ποσοστά μετα-RFA κυμαίνονται από 49 σε 74% [9] – [11]. Επιπλέον, η τοπική υποτροπιάζοντα όγκου μετά RFA έδειξε μια πιο επεμβατική ανάπτυξη, περισσότερες αγγειακή εισβολή και λιγότερο διαφοροποίηση σε σύγκριση με όγκους των ασθενών χωρίς RFA [12].

Η οδός /β-κατενίνης Wnt είναι ένα σημαντικό μονοπάτι σηματοδότησης σε HCC [13], [14]. Έχει αναφερθεί ότι το ένα τρίτο των HCC σχετίζονται με παρεκκλίνουσα έκφραση του β-κατενίνης [15]. β-κατενίνης (CTNNB1), είναι ένα κεντρικό μόριο στο μονοπάτι σηματοδότησης Wnt, και είναι μια πολυλειτουργική πρωτεΐνη που εμπλέκεται στην προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου, μεταγωγής σήματος, ρύθμιση κυτταρικής διαφοροποίησης και πολλαπλασιασμού. Η ομάδα μας είχε αποδείξει ότι η υποξία θα μπορούσε να επάγει β-κατενίνης υπερέκφραση ή /και ενδοκυτταρική συσσώρευση σε τέσσερις κυτταρικές σειρές HCC μέσω κάτω ρύθμιση της ενδογενούς μηχανήματα αποικοδόμηση, και υποξία μπορεί επίσης ενισχυμένη διεισδυτικότητα

in vitro

και μετάσταση

in vivo

για κύτταρα Hep3B και MHCC97 [16]. Μεταλλάξεις στα μέλη /β-κατενίνης μονοπάτι Wnt οδηγήσει επίσης σε ανώμαλη ενεργοποίηση των γονιδίων-στόχων, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που κωδικοποιεί για ενεργοποιητές επιθηλιακών-μεσεγχυματικών μετάβαση (ΕΜΤ) [17]. EMT διαδραματίζει έναν κεντρικό ρόλο στα κρίσιμα στάδια της εμβρυϊκής ανάπτυξης και συμβάλλει στην φυσιολογικές διαδικασίες, όπως η επισκευή των ιστών, την αναγέννηση και παθολογικών καταστάσεων, συμπεριλαμβανομένης της καρκινογένεση και ίνωση. Επιπλέον, συμμετέχει επίσης σε ενδοηπατική διάδοση και μακρινή μετάσταση κατά τη διάρκεια HCC εξέλιξης [18] – [21]. β-κατενίνης διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην έναρξη και την πρόοδο της EMT. Αρκετές μελέτες έχουν αποδείξει τη σχέση μεταξύ β-κατενίνης και σηματοδότηση ΕΜΤ [22]. Oh et al. ανέφεραν ότι η ενεργοποίηση β-κατενίνης προκάλεσε επαγωγή της έκφρασης σαλιγκάρι και ZEB1, έκφραση μεσεγχυματικών δείκτης κυττάρων και την καταστολή της έκφρασης Ε-καδερίνης σε ορισμένες επιθηλιακά κύτταρα κατά τη διάρκεια της παθογένεσης του αδενομύωση [23]. Zhao et al. υπό την προϋπόθεση αποδείξεις που Wnt /β-κατενίνης οδό σηματοδότησης που εμπλέκονται άμεσα στην ΕΜΤ επάγεται από HIF-1α, και μπλοκάροντας Wnt /β-κατενίνης μονοπάτι σηματοδότησης που προκαλείται αναστροφή της ΕΜΤ και μεταστατικών αλλαγές φαινοτύπους [24]. Ωστόσο, ο ρόλος της β-κατενίνης σε υπολειμματικό καρκίνο μετά από ελλιπή RFA είναι ακόμα ασαφής. Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι η ατελής RFA ενίσχυσε την επεμβατική και μεταστατικό δυναμικό των υπολειμματικών καρκίνου, και εξετάστηκαν οι μεταβολές στην έκφραση β-κατενίνης σε ατελές ιστούς όγκου RFA

in vivo

και σε κύτταρα HCC θερμικά επεξεργασμένο

in vitro

. Επιπλέον, αξιολογείται η σημασία της για μεταστατικό αλλαγές φαινότυπο που επάγεται από την παρέμβαση της θερμότητας.

Υλικά και Μέθοδοι

Cell Culture και Ζώα

HCCLM3 κύτταρα με υψηλό μεταστατικό δυναμικό και HCCLM3-G κύτταρα τα οποία ήταν HCCLM3 κύτταρα επιμολυσμένα με πράσινο φθορίζουσας πρωτεΐνης, κύτταρα HepG2 με χαμηλό μεταστατικό δυναμικό και κύτταρα HepG2-G που HepG2 κύτταρα επιμολυσμένα με πράσινο φθορισμό πρωτεΐνη, χρησιμοποιήθηκαν σε

in vitro

και

in vivo

πειράματα, αντίστοιχα (με έδρα το Ινστιτούτο του καρκίνου του ήπατος, Zhongshan Νοσοκομείο, Πανεπιστήμιο Fudan, Σαγκάη, Κίνα) [25]. Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (DMEM, Gibco BRL, Rockville, MD, USA) με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), 100 U /mL πενικιλίνη στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα που περιείχε 5% CO

2. Αρσενικοί BALB /c ηυ /ηυ ποντίκια, βάρους 18-20 g κατά 4-6 εβδομάδες της ηλικίας, ελήφθησαν από SLAC Laboratory Animal Co, Ltd, Shanghai, Κίνα. Όλοι οι ποντικοί διατηρήθηκαν κάτω από ειδικές συνθήκες χωρίς παθογόνα. Όλα τα πρωτόκολλα των ζώων εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας για τα πειράματα σε ζώα της επιτροπής Animal Care του Πανεπιστημίου Fudan. Όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιηθεί η ταλαιπωρία των πειραματόζωων (S1 Checklist).

Εξοπλισμός και Εγκατάσταση του μοντέλου ποντικού Ελλιπής RFA ορθοτοπική Γυμνό

Ο κύριος εξοπλισμός που χρησιμοποιείται αποτελούνταν του μοντέλου RITA ιατρικό σύστημα 1500X RF γεννήτρια (RITA Medical Systems, Fremont, CA, USA), ανασυρόμενη βελόνα πολλαπλές γάντζο RFA (S1 Α Εικ.) (ΡΙΤΑ αστέρι Burst XL, αγγειοοίδημα Dynamics, Latham, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ), και η Ρίτα γείωση μαξιλάρια (Αγγειοοίδημα Dynamics) .

Το ανθρώπινο HCC ορθοτοπική γυμνά μοντέλα ποντικών με κύτταρα HCCLM3-G και κύτταρα HepG2-G δημιουργήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26]. Τα γυμνά ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε ημιτελούς ομάδα RFA (n = 12) και ομάδα ελέγχου (n = 12). Δύο εβδομάδες μετά ορθοτοπική εμφύτευση, η ατελής RFA διεξήχθη ως εξής: μετά από αναισθησία με Pelltobarbitalum Natricum με χορηγήθηκε με ενδοπεριτοναϊκή ένεση (50 mg /kg), το ζώο τοποθετήθηκε σε μία αγώγιμη μεταλλική πλάκα με σταθερές άκρων και RITA γείωση τακάκια τηρήθηκαν στο πίσω μέρος αυτού του μετάλλου πλάκα για να εξασφαλίσει καλή ηλεκτρική αγωγιμότητα. Στη συνέχεια, η κοιλιά κοιλότητα του ποντικού ανοίχθηκε και εκτέθηκε η ορθοτοπική όγκου σε αριστερό λοβό του ήπατος (S1B, C Σχ.). Το κέντρο ευθεία μία από βελόνας RITA εισήχθη μέσα στο ξενομόσχευμα και φυσιολογικό αλατούχο διάλυμα έσταζε στο σημείο παρακέντησης για να κρατήσει καλή αγωγιμότητα. Λαμβάνοντας υπόψη το βάρος και ο όγκος του γυμνούς ποντικούς, RFA διεξήχθη με χαμηλότερη ενέργεια πρωτόκολλο, με το έξω δύναμη της 5W και διάρκειας περίπου 30 δευτερόλεπτα, για να διατηρηθεί η ύπαρξη του υπολειμματικού καρκίνου. Μετά RFA, η κοιλιά κοιλότητα των ποντικών κλείσθηκε χρησιμοποιώντας 5-0 μη απορροφήσιμα ράμματα. Τα ποντίκια στην ομάδα ελέγχου ήταν ψευδο-εγχείρηση από την εισαγωγή μιας βελόνας RFA εντός του όγκου, χωρίς να εκτελεί την εκτομή.

Parameters αξιολογούμενο

Τρεις εβδομάδες μετά τη διαδικασία RFA, έξι ποντικοί κάθε ομάδας θυσιάστηκαν για την αξιολόγηση της ανάπτυξης του όγκου και της μετάστασης. Η μακρύτερη (α) και συντομότερη (β) όγκου διάμετρο μετρήθηκαν και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε ως εξής: Ο όγκος του όγκου (mm

3) = a (mm) χ b (mm) χ b (mm) /2 [ ,,,0],27]. Οι πνεύμονες αποκόπηκαν και εικόνες των πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (GFP) -θετικό μεταστατικές εστίες Ελήφθησαν (στερεομικροσκόπιο? Leica, Wetzlar, Germany). Οι ιστοί των πνευμόνων κόπηκαν σειριακά και H & amp? Χρώση Ε διεξήχθη για να επιβεβαιώσει τα παραπάνω αποτελέσματα. Η ενδοπεριτοναϊκή μετάσταση παρατηρήθηκε με φθορίζουσα απεικόνιση.

Heat Παρέμβαση

in vitro

Η

κύτταρα HCCLM3 και τα κύτταρα HepG2 σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων σε πυκνότητα 5 χ 10

4 κύτταρα /φρεάτιο. Μετά από 24 ώρες, οι πλάκες σφραγίστηκαν με παραφίλμ και βυθίζεται σε ένα λουτρό νερού ρυθμίζεται στην επιθυμητή θερμοκρασία για 10 λεπτά. Οι θερμοκρασίες στόχος για τα κύτταρα HCCLM3 και τα κύτταρα HepG2 ήταν 39 ° C, 42 ° C, 45 ° C και 41 ° C, 44 ° C, 47 ° C, αντίστοιχα. Εν τω μεταξύ, η θερμοκρασία ελέγχου ήταν 37 ° C.

κυτταρικού πολλαπλασιασμού, τη μετανάστευση και την εισβολή Δοκιμασία

Τα κύτταρα HCC σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 3 × 10

3 /Λοιπόν. Μετά από 24 ώρες επώασης, οι πλάκες των κυττάρων HCCLM3 και κύτταρα HepG2 σφραγίσθηκαν και θερμάνθηκαν σε υδατόλουτρο για 10 λεπτά στους 39 ° C, 42 ° C ή 45 ° C και 41 ° C, 44 ° C ή 47 ° C, αντίστοιχα . Μετά από επώαση για 24 ώρες, 48 ώρες και 72 ώρες, ο πολλαπλασιασμός μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα κινητό Μετρώντας Kit (Dojin Laboratories, Kumamoto, Japan), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28].

μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή εκτιμήθηκαν με transwell δοκιμασίες (Corning). Εν συντομία, 8 × 10

4 κύτταρα σε DMEM χωρίς ορό σπάρθηκαν σε άνω θάλαμο του κάθε φρεάτιο πλακών 24-φρεατίων που περιέχουν 8.0-μm μεμβράνες μεγέθους πόρου. ΫΜΕΜ που περιέχει 10% βόειο εμβρυϊκό ορό (FBS) προστέθηκε στον κάτω θάλαμο του κάθε φρεατίου. Μετά από 48 ώρες, τα κύτταρα που είχαν φθάσει στην κάτω πλευρά της μεμβράνης βάφτηκαν με Giemsa (Sigma), που υπολογίζονται κατά × 200 μεγέθυνση σε πέντε τυχαία επιλεγμένες περιοχές ανά φρεάτιο. Η δοκιμασία κύτταρο εισβολή διεξάγεται κατά παρόμοιο τρόπο, εκτός του ότι 80 μλ Matrigel (0,8 mg /mL, BD Biosciences) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο 6 ώρες πριν από κύτταρα σπάρθηκαν επί της μεμβράνης.

Κυττάρων μορφολογική παρατήρηση και συνεστιακή ανοσοφθορισμού χρώση

Οι μορφολογίες των κυττάρων HCC παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας μικροσκοπία φάσης (Leica). Η χρώση ανοσοφθορισμού διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως, με ορισμένες αλλαγές [29]. Καλλιεργημένα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε τρυβλία κυτταρικής καλλιέργειας και στη συνέχεια πλένονται και στερεώνονται. Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα προς Ε-καδερίνης, Ν-cadherin, βιμεντίνη και β-κατενίνης (1:200, Abcam, Χονγκ Κονγκ), και αντι-ποντικού FITC, αντι-κουνελιού FITC και /ή τετραμεθυλο ροδαμίνη ισοθειοκυανική-συζευγμένο δευτερογενή αντισώματα (Invitrogen). Οι εικόνες φθορισμού ελήφθησαν με τη χρήση ενός συνεστιακού μικροσκοπίου (Olympus).

παροδική επιμόλυνση των siRNAs

Για να εξεταστεί περαιτέρω ο λειτουργικός ρόλος του β-κατενίνης σε θερμότητα που προκαλείται από κακοήθη συμπεριφορά των κυττάρων HCCLM3, παροδικές επιμόλυνση διεξήχθη σε HCCLM3 κύτταρα με μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) που στοχεύουν CTNNB1 mRNA (siCTTNB1, Gene Πάρμα, Σαγκάη, Κίνα) ή εικονικές επιμόλυνση (Gene Πάρμα). Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν είτε με ένα μάρτυρα ή ένα siRNA χρησιμοποιώντας Λιποφεκταμίνη 2000 (Invitrogen) σε μέσο ΟΡγ-ΜΕΜ (Gibco) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η ακολουθία της β-κατενίνης siRNA ήταν: 5’GGGUUCAGAUGAUAUAAAUTT3 «

Σε πραγματικό χρόνο αλυσιδωτή αντίδραση Ποσοτική Αντίστροφη Μεταγραφή-πολυμεράσης (RT-PCR)

Οι RT-PCR διαδικασίες που χρησιμοποιούνται περιγράφονται αλλού. [30]. Οι αλληλουχίες εκκινητών που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της έκφρασης των γονιδίων στόχων είναι οι εξής: σαλιγκάρι, 5′-TGCAGGACTCTAATCCAAGTTTACC-3 ‘(προς τα εμπρός), και σαλιγκάρι, 5′-GTGGGATGGCTGCCAGC-3′ (αντίστροφο)? Slug, 5’-GGTCAAGAAGCATTTCAAC-3 ‘(προς τα εμπρός), και γυμνοσάλιαγκα, 5′-CTGAGCCACTGTGGTCCTTG-3′ (αντίστροφο)? Twist, 5’-TGTCCGCGTCCCACTAGC-3 ‘(προς τα εμπρός), και Twist, 5′-TGTCCATTTTCTCCTTCTCTGGA-3’ (αντίστροφο).

Δυτική Δοκιμασία Blot

Οι δυτικές διαδικασίες κηλίδα που χρησιμοποιούνται περιγράφονται αλλού [31]. Πρωτογενή αντισώματα που χρησιμοποιούνται περιλαμβάνουν:. Αντι-Ε-καδερίνης, αντι-Ν-καντερίνης, αντι-βιμεντίνη, αντι-β-κατενίνης, αντι-κυκλίνη D1 (Abcam) και αντι-β-ακτίνης (Boster, Wuhan, Κίνα)

η ανοσοϊστοχημεία

όγκου ιστού έχει καθοριστεί, ενσωματωμένα και κομμένο σε 5 μm πάχους τομές. χρώση Ανοσοϊστοχημεία της Ε-καδερίνης, Ν-cadherin, βιμεντίνη και β-κατενίνης διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30]. αποτελέσματα χρώσης αξιολογήθηκαν κάτω από ένα οπτικό μικροσκόπιο σε μεγέθυνση × 200.

Στατιστική Ανάλυση

Στατιστικές συγκρίσεις έγιναν με τη χρήση

t

test του Student, όταν τα δεδομένα είχαν κανονική κατανομή ή οι μη παραμετρικές αναλύσεις των Mann-Whitney U-test όταν τα δεδομένα δεν είχαν κανονική κατανομή. Οι υπολογισμοί έγιναν με τη χρήση SPSS 20.0 (SPSS Inc. Chicago, IL, USA). Τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές σε

σ

αξία των & lt?. 0.05

Αποτελέσματα

προωθείται παρέμβαση Heat πολλαπλασιασμό, την εισβολή και τη μετανάστευση των κυττάρων HCC

in vitro

Ένα

in vitro δοκιμασία πολλαπλασιασμού

απέδειξε ότι οι θερμο-επεξεργασμένα κύτταρα HCC είχαν σημαντικά υψηλότερα πολλαπλασιασμό από εκείνη στον έλεγχο (Εικ. 1Α), ειδικά στους 45 ° C για HCCLM3 κυττάρων και 47 ° C για HepG2 κυττάρων. Στη δοκιμασία μετανάστευσης κυττάρων, όλα τα θερμικά επεξεργασμένα κύτταρα HCCLM3 εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερο δυναμικό μετανάστευση από ότι στην ομάδα ελέγχου. (33.40 ± 2.16, 45.00 ± 3.21, 86.20 ± 3.39

vs.

19.00 ± 2.00), τα κύτταρα HepG2 που έλαβαν θεραπεία με 44 ° C και 47 ° C έδειξαν υψηλότερο δυναμικό της μετανάστευσης από αυτό του ελέγχου (18.00 ± 1.52, 33,80 ± 2,63

vs.

11,60 ± 1,07) (Εικ. 1Β). Στον προσδιορισμό κυττάρων εισβολής, τα κύτταρα HCCLM3 σε επεξεργασία με 42 ° C και 45 ° C έδειξαν την ενισχυμένη ικανότητα επεμβατική (18.40 ± 0.87, 29.00 ± 1.82

vs.

5,60 ± 1,03), τα κύτταρα HepG2 σε επεξεργασία με 44 ° C και 47 ° C εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερη επεμβατική ικανότητα (12.20 ± 1.56, 19.40 ± 1.50

vs.

2,80 ± 0,67) (Εικ. 1Β).

κύτταρα (Α) HCCLM3 και HepG2 καλλιεργήθηκαν με ή χωρίς παρέμβαση θερμότητας. Τα 24 ώρες, 48 ώρες και βιωσιμότητα κυττάρου 72 ώρες των κυττάρων HCC μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία CCK8. παρέμβαση θερμότητας προώθησε σημαντικά HCCLM3 και HepG2 κύτταρα πολλαπλασιασμού. (Β) Η δοκιμασία φρεατίων έδειξε ότι οι υποστεί θερμική επεξεργασία HCCLM3 και HepG2 κύτταρα έδειξαν αυξημένη μετανάστευση και την ικανότητα εισβολής σε σύγκριση με τους ελέγχους.

Η

παρέμβασης θερμότητας προσδίδει χαρακτηριστικά μεσεγχυματικά κύτταρα να HCC

in vitro

τα θερμικά επεξεργασμένα κύτταρα HCC θα μπορούσε επίσης να αποκτήσουν μια EMT φαινότυπο, μορφολογικά, τα κύτταρα HCCLM3 και τα κύτταρα HepG2 στις 48 ώρες μετά από τη θερμική παρέμβαση του 45 ° C και 47 ° C, αντίστοιχα, έδειξαν ένα ακανόνιστη ινοβλαστών-όπως το σχήμα, αντί του ένα τυπικό επιθηλιακών εμφάνιση πλακόστρωτα (Εικ. 2Α). Εν τω μεταξύ, στύπωμα Western (Εικ. 2Β) και χρώση ανοσοφθορισμού (Εικ. 2C) έδειξαν μείωση στην έκφραση του επιθηλιακού κυττάρου δείκτη Ε-καδερίνης σε αυτά τα θερμικά επεξεργασμένα κύτταρα, σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Ταυτόχρονα, η αυξημένη έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών κυττάρων Ν-cadherin και βιμεντίνης ανιχνεύθηκαν επίσης. Επιπλέον, η έκφραση του mRNA των παραγόντων EMT μεταγραφής (σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας και Twist) ανιχνεύθηκαν με RT-PCR. Η ενίσχυση του σαλιγκαριού mRNA σε κύτταρα HCCLM3 θερμικά επεξεργασμένο και Slug mRNA σε κύτταρα HepG2 θερμικά επεξεργασμένο ήταν στατιστικά υψηλότερα από εκείνα του μάρτυρα (Σχ. 2D).

(Α) κύτταρα HCCLM3 και κύτταρα HepG2 καλλιεργήθηκαν μετά από 45 ° C και 47 ° C παρέμβαση θερμότητα, αντίστοιχα. Μορφολογικές μεταβολές σύμφωνες με EMT (ατρακτοειδή κύτταρα με απώλεια της πολικότητας και αυξημένη μεσοκυττάρια διαχωρισμού) παρατηρήθηκαν σε κύτταρα HCC θερμικά επεξεργασμένο σε 48 ώρες, σε σύγκριση με εκείνους σε έλεγχο. (Β) Ανάλυση Western Blot έδειξε την έκφραση της Ε-καδερίνης, Ν-cadherin, βιμεντίνη σε κύτταρα HCC θερμική κατεργασία και σε μάρτυρες. κύτταρα HCCLM3 και κύτταρα HepG2 καλλιεργήθηκαν 48 ώρες μετά από 45 ° C και 47 ° C θερμότητα παρέμβαση, αντίστοιχα. χρώση ανοσοφθορισμού (C) έδειξαν ότι οι μεταβολές στην κυτταρική δείκτες EMT σε απόκριση σε θερμότητα παρέμβαση όπως χαρακτηρίζεται από τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και ανοδική ρύθμιση του Ν-καδερίνης και βιμεντίνης, σε σύγκριση με τους ελέγχους. RT-PCR (D) αποκάλυψε ότι η έκφραση του mRNA της EMT που σχετίζονται με παράγοντες μεταγραφής σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας, και Twist στα κύτταρα HCC.

Η

Ελλιπής RFA ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου, αλλά προωθείται εισβολής και μακρινή μετάσταση

στο vivo

η

Έχουμε αναπτύξει μια ασφαλή και αξιόπιστη μέθοδο για τη δημιουργία ενός ατελούς ορθοτοπικό γυμνό μοντέλο ποντικού RFA και αυτό το ζωικό μοντέλο μπορεί να είναι η πρώτη φορά ελλιπής ορθοτοπικό γυμνό μοντέλο ποντικού RFA σύμφωνα με τη βιβλιογραφία στο PubMed. Στην ελλιπή ομάδα RFA, το μέγεθος του όγκου των HCCLM3-G και HepG2-G μοντέλο ήταν 449,58 ± 143,19 χιλιοστά

3 και 299,83 ± 131,45 χιλιοστά

3, αντίστοιχα, τα οποία ήταν μικρότερα από εκείνα των ελέγχων (1788,75 ± 248,53 mm

3 HCCLM3-G και 942,67 ± 144,16 χιλιοστά

3 σε HepG2-G,

P

& lt?. 0,05) (Σχήμα 3Α). Η πνευμονική μετάσταση ποσοστό στην ελλιπή ομάδα RFA του HCCLM3-G (6/6) ήταν υψηλότερη από ότι στην ομάδα ελέγχου (2/6) (Σχ. 3Β). Για να αξιολογηθεί περαιτέρω η μεταστατικό δυναμικό των υπολειμματικών καρκίνο του HCCLM3-G μετά ατελής RFA, χρησιμοποιήθηκαν διαδοχικές τομές πνεύμονα παραφίνη. Οι πνευμονικές μεταστάσεις σε ατελές ομάδα RFA ήταν σημαντικά αυξημένα σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (29,67 ± 2,56

vs

2,50 ± 1,58,

P

& lt?. 0.001) (Εικ. 3C). Από την άλλη πλευρά, η πνευμονική μετάσταση δεν ανιχνεύθηκε σε HepG2-G μοντέλο, ανεξάρτητα από τη λήψη RFA ή όχι (S2 Σχ.), Όμως, ελλιπείς RFA μπορούσε να προκαλέσει περιτοναϊκή μετάσταση (6/6), και όχι περιτοναϊκή μετάσταση παρατηρήθηκε σε έλεγχο ομάδα (0/0) (Σχήμα 3D).

(Α) στην ορθοτοπικό μοντέλο HCC, τα μεγέθη του όγκου στην ελλιπή ομάδα RFA ήταν μικρότερες από εκείνες στον έλεγχο (HCCLM-G:. 449,58 ± 143,19

vs

1788,75 ± 248,53,

P

= 0,002? HepG2-G: 299.83 ± 131.45

vs

942,67 ± 144,16,

P

= 0,008) . (Β) Ποσοτικοποίηση των βιοφωταύγεια έδειξε ότι η ατελής RFA επιταχυνόμενη πνευμονική μετάσταση σε HCCLM3-G ξενομοσχευμάτων, σε σύγκριση με τους μάρτυρες (τα βέλη δείχνουν πνευμονικές μεταστάσεις). Τρεις όγκοι από τους ελέγχους και τριών ατελής RFA αγωγή όγκων συγκρίθηκαν τόσο φωτεινό πεδίο (β) και φθορισμού (F). Η συχνότητα εμφάνισης της πνευμονικής μετάσταση (6/6) αυξήθηκε στην ελλιπή ομάδα RFA, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (2/6). (Γ) Η & amp? Ε χρώση επιβεβαίωσε ότι η ατελής RFA που προκαλείται περισσότερες πνευμονικές μεταστάσεις στα ξενομοσχεύματα HCCLM3-G (29.67 ± 2.56

vs

2.50 ± 1.58,

P

& lt?. 0.001). (Δ) Ποσοτικοποίηση των βιοφωταύγεια έδειξε ότι η ατελής RFA μπορούσε να προκαλέσει ενδοπεριτοναϊκή μετάσταση σε HepG2-G ξενομοσχεύματα (6/6), σε σύγκριση με τους μάρτυρες (0/6) (βέλη δείχνουν ενδοπεριτοναϊκή μεταστάσεις).

Η

ατελής RFA επάγεται αλλαγές που συμφωνούν με EMT σε HCC ξενομοσχεύματα

Ανοσοϊστοχημεία παρουσίαζε την τυπική μεμβρανώδη έκφραση Ε-καδερίνης στις επαφές κυττάρου-κυττάρου σε ομάδα ελέγχου HCCLM3-G, αντίθετα, ατελής όγκοι RFA αγωγή έδειξε ότι το μείωση της έκφρασης Ε-καδερίνης, καθώς και την προς τα πάνω ρύθμιση του Ν-καντερίνης και βιμεντίνη. Στο μοντέλο HepG2-G, η ρύθμιση προς τα κάτω της έκφρασης Ε-καδερίνης και ανοδική ρύθμιση της έκφρασης Ν-καδερίνης παρατηρήθηκαν επίσης σε ατελές ομάδα RFA (Σχ. 4Α). Η επαγωγή της ΕΜΤ από ελλιπείς RFA καταδείχθηκαν σε ξενομοσχεύματος όγκους δύο κυτταρικές σειρές με κηλίδα western, και χαρακτηρίστηκαν από την απώλεια του Ε-καδερίνης και ανοδική ρύθμιση του Ν-καδερίνης και βιμεντίνης στους ιστούς του όγκου του ατελούς ομάδα RFA (Σχ. 4Β). Επιπλέον, η αυξημένη έκφραση του mRNA του παράγοντα μεταγραφής ΕΜΤ σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα εξετάσθηκαν με RT-PCR σε HCCLM3-G-προερχόμενα και HepG2-G-προερχόμενο ξενομοσχεύματα, αντίστοιχα (Εικ. 4C).

(Α) Ανοσοϊστοχημεία αποκάλυψε ότι η έκφραση Ε-καδερίνης μειώθηκε σε ατελές ομάδα RFA και των δύο μοντέλων κυττάρων HCC, το επίπεδο έκφρασης του Ν-καδερίνης σε καρκινικούς ιστούς ήταν υψηλότερες σε ατελές ομάδα RFA από ότι στους ελέγχους, και στο μοντέλο HCCLM3-G, αυξημένη έκφραση του βιμεντίνης ανιχνεύθηκε επίσης σε ελλιπή ομάδα RFA. (Β) κηλίδας Western έδειξε ότι οι αλλαγές των υπολειμματικών όγκων ήταν σύμφωνα με EMT σε ατελές ομάδα RFA (π.χ., προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και ανοδική ρύθμιση του Ν-καδερίνης, βιμεντίνη) και των δύο μοντέλων κυττάρων HCC. (Γ) RT-PCR έδειξε ότι η έκφραση του μεταγραφικοί παράγοντες σαλιγκάρι, Slug, και Twist στο επίπεδο του mRNA σε ιστό όγκου. Ωστόσο, μόνο σαλιγκάρι mRNAs στο μοντέλο HCCLM3-G και Slug mRNA σε μοντέλο HepG2-G ήταν σημαντικά πάνω ρυθμισμένα σε ελλιπή ομάδα RFA, αντίστοιχα (

P

& lt? 0,05).

Η

Ελλιπής RFA που προκαλείται από την ενεργοποίηση της β-κατενίνης συνοδεύεται με EMT

in vivo

και

in vitro

της HCCLM3

Για να διερευνήσουν των μοριακών μηχανισμών που εμπλέκονται στην EMT του θερμικά επεξεργασμένου HCC κύτταρα, επιχειρήσαμε να εξετάσουμε εάν σηματοδότηση β-κατενίνης ενεργοποιήθηκε. Στο μοντέλο HCCLM3-G, χρώση ανοσοϊστοχημική αποκάλυψε μια σημαντικά αυξημένη ενδοκυτταρική συσσώρευση β-κατενίνης σε ατελές RFA-αγωγή όγκου, αλλά όχι σε HepG2-G μοντέλο (Σχ. 5Α). Τα αποτελέσματα αυτά ήταν συνεπή με την έκφραση της πρωτεΐνης β-κατενίνης στην ελλιπή ομάδα RFA και της ομάδας ελέγχου με κηλίδα western (Σχ. 5Β). Συσσώρευση των κυτταροπλασματικών και πυρηνικών β-κατενίνη είναι μια ένδειξη της ενεργοποιημένης β-κατενίνης εξαρτώμενη σηματοδότηση, έτσι ώστε να εξετασθεί περαιτέρω κατά πόσον η αυξημένη έκφραση β-κατενίνης επηρεάζονται δραστικότητα μονοπατιού β-κατενίνης. χρώση ανοσοφθορισμού έδειξε την αυξημένη έκφραση του β-κατενίνης τόσο κυτταρόπλασμα και στον πυρήνα των κυττάρων HCCLM3 σε θερμική επεξεργασία, σε σύγκριση με τον έλεγχο κυττάρων

in vitro

, ωστόσο, η ίδια τάση στα κύτταρα HepG2 σε θερμική επεξεργασία ήταν δεν παρατηρήθηκε (Εικ. 5C). Επιπλέον, μια σημαντική ενδοκυτταρική μετακίνηση της β-κατενίνης στα κύτταρα HCCLM3 θερμικά επεξεργασμένο πιστοποιήθηκε με ανάλυση κηλίδας Western (Σχ. 5D). Για να εξεταστεί η επίδραση της παρέμβασης θερμότητα επαγωγής πυρηνική μετατόπιση του β-κατενίνης επί της έκφρασης γονιδίου, στρίψαμε προσοχή στη β-κατενίνης οδού σηματοδότησης γονίδιο προς τα κάτω στόχος κυκλίνη-D1. κηλίδα Western αποκάλυψε ότι η έκφραση της κυκλίνης-D1 επίσης αυξάνεται με το συνολικό υπερέκφραση β-κατενίνης στα κύτταρα HCCLM3 θερμικά επεξεργασμένο

in vitro

(Σχ. 5Ε).

(Α) Ανοσοϊστοχημεία αποκάλυψε ότι η έκφραση β-κατενίνης ήταν αυξημένη σε ελλιπή ομάδα RFA του HCCLM3-G ξενομοσχεύματα (

P

= 0,002)? σε HepG2-G ξενομοσχεύματα, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων σε έκφραση β-κατενίνης (

P

= 0,843). (Β) στύπωμα Western έδειξε την αυξημένη έκφραση β-κατενίνης στους ιστούς του όγκου μετά ατελής RFA σύγκριση με τους ελέγχους του HCCLM3-G ξενομοσχεύματα. (Γ) χρώση ανοσοφθορισμού έδειξε την ισχυρή κυτταροπλασματικό και πυρηνικό εντοπισμό του β-κατενίνης σε κύτταρα HCCLM3 υποστεί θερμική επεξεργασία, και το τυπικό μεμβρανώδη έκφραση β-κατενίνης στα κυττάρου-κυττάρου επαφή των κυττάρων HCCLM3 τον έλεγχο. Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων σε β-κατενίνης έκφραση των κυττάρων HepG2. (D) Διανομή β-κατενίνης σε κυτταρόπλασμα και στον πυρήνα των κυττάρων HCCLM3 ανιχνεύθηκε με κηλίδα western

in vitro

. (Ε) ανάλυση κηλίδας Western εμφάνισε την έκφραση της συνολικής β-κατενίνης και γονίδιο προς τα κάτω στόχος Κυκλίνη D1-του, με τα δύο κύτταρα HCC

in vitro

.

Η

Η ενισχυμένη δυνατότητα εισβολή και ΕΜΤ-σαν μεταβολές των κυττάρων HCCLM3 θερμικά επεξεργασμένου μπορεί να μειωθεί μερικώς με την αποσιώπηση β-κατενίνης

in vitro

η

Για την περαιτέρω διαλεύκανση αν η ενεργοποίηση των β-κατενίνης ήταν λειτουργικά σχετίζεται με ενισχυμένη διεισδυτικότητα και EMT-όπως αλλαγές στα κύτταρα HCCLM3 έχει υποστεί θερμική επεξεργασία, που χρησιμοποιείται CTNNB1 siRNA επιμόλυνση και εξέτασε τις επιπτώσεις της στα κύτταρα HCCLM3. Για να ελέγξετε τα αποτελέσματα της επιμόλυνσης, χρησιμοποιήθηκε χρώση ανοσοφθορισμού και κηλίδα western. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6Α, η τυπική έκφραση της κυτταρικής μεμβράνης των β-κατενίνης μειώθηκε μετά την επιμόλυνση, και η συνολική πρωτεΐνη β-κατενίνης ήταν μειωμένη σε κύτταρα HCCLM3-siCTNNB1, σε σύγκριση με τον έλεγχο των HCCLM3-mock κύτταρα (Εικ. 6Β). Όπως φαίνεται στο Σχ. 6C, υπό κανονικές συνθήκες, η διαφορά στην διεισδυτική αριθμούς κυττάρων μεταξύ HCCLM3-mock κύτταρα και κύτταρα HCCLM3-siCTNNB1 δεν ήταν στατιστικά σημαντικές. Ωστόσο, μετά την εισαγωγή της παρέμβασης θερμότητας, ο αριθμός των κυττάρων HCCLM3-siCTNNB1 τόσο συστοιχία μετανάστευση και εισβολή συστοιχία ήταν λιγότερο από εκείνα των HCCLM3-mock κύτταρα (Σχ. 6C). Επιπλέον, η φίμωση CTNNB1 θα μπορούσε να επηρεάσει την έκφραση του παράγοντα μεταγραφής EMT, RT-PCR αποκάλυψε ότι η έκφραση του σαλιγκαριού mRNA των κυττάρων HCCLM3-siCTNNB1 υποστεί θερμική επεξεργασία μειώθηκε, σε σύγκριση με το αντίστοιχο στην θερμικά επεξεργασμένο HCCLM3-mock κύτταρα (Σχ . 6D). Η ανάλυση στυπώματος Western επιβεβαίωσε επίσης ότι η καταστολή της β-κατενίνης επηρέασε την έκφραση των δεικτών ΕΜΤ β-κατενίνης που προκαλούνται στα κύτταρα HCCLM3 θερμικά επεξεργασμένο, και η έκφραση της κυκλίνης-D1 επίσης εξασθενημένος (Σχ. 6Ε). Συλλογικά, τα ανωτέρω ευρήματα έδειξαν ότι η ενεργοποίηση των β-κατενίνης ήταν λειτουργικά σχετικές με εισβολή και τη μετάσταση των κυττάρων που προκαλείται από HCCLM3 παρέμβαση θερμότητα.

(Α) χρώση ανοσοφθορισμού έδειξε ότι η έκφραση β-κατενίνης μερικώς εξασθενημένη με αποσιώπηση του CTNNB1 στα κύτταρα HCCLM3. (Β) Τα επίπεδα πρωτεΐνης του β-κατενίνης μετράται με ανάλυση Western blot μετά siCTNNB1 διαμόλυνση. (C) Εκπρόσωπος εικόνες της μετανάστευσης και της εισβολής των HCCLM3-mock κύτταρα και κύτταρα HCCLM3-siCTNNB1 στο φρεατίων δοκιμασία. HCCLM3-mock κύτταρα και κύτταρα HCCLM3-siCTNNB1 καλλιεργήθηκαν 48 ώρες μετά από 45 ° C θερμότητα παρέμβαση και φυσιολογική κατάσταση, αντίστοιχα, RT-PCR (D) έδειξε η σχετική έκφραση του mRNA του μεταγραφικών παραγόντων σαλιγκάρι, Slug, και Twist. Western blot (Ε) αποκάλυψε την έκφραση των μεταγραφικών παραγόντων που σχετίζονται με EMT και κυκλίνη-D1.

Η

Συζήτηση

Προς το παρόν, ένας αυξανόμενος αριθμός κλινικών μελετών έχουν αναγνωρίσει την ταχεία εξέλιξη των υπολειμματικών καρκίνο μετά από ελλιπή RFA στην αντιμετώπιση HCC [32], [33]. Προηγούμενες έρευνες είχαν παράσχει αρκετές πιθανούς μηχανισμούς που θα μπορούσαν να εξηγήσουν τα ευρήματα. Υπερθερμία μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στην ταχεία ανάπτυξη των υπολειμματικών HCC μετά RFA με την προώθηση της αγγειογένεσης των υπολειμματικών HCC μέσω του HIF-1α /VEGFA [34]. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι αναντίστοιχο RFA επιτάχυνση της ανάπτυξης HCC και εξαπλώθηκε από παροδικά επαγωγή μιας EMT-όπως και πιο επιθετική κυτταρικό φαινότυπο [35]. Στην παρούσα μελέτη, εισαγάγαμε RFA σε ένα ορθοτοπικό γυμνό μοντέλο HCC του ποντικιού και κατέδειξε τη σημασία της ατελούς επεξεργασίας RFA στην αύξηση του όγκου και της εισβολής. Παρά το γεγονός ότι οι όγκοι των όγκων ξενομοσχεύματος μειώθηκαν μετά ατελής θεραπεία RFA, οι υπολειμματικές όγκοι έδειξαν περισσότερο επεμβατικές ικανότητες σε ατελές ποντίκια RFA-θεραπεία, όπως υποδεικνύεται από την αυξημένη πνευμονική ή ενδοπεριτοναϊκή μετάσταση. Από την άλλη πλευρά,

in vitro

θερμικά επεξεργασμένα κύτταρα HCC παρουσίασαν αυξημένη κινητικότητα και διεισδυτικότητα. Αυτά τα ευρήματα ήταν σύμφωνα με τα αποτελέσματα των προηγούμενων μελετών που χρησιμοποιούν άλλα μοντέλα καρκίνου του ζώου. Σε ένα μεταφραστικό μοντέλο ποντικού, Kroeze et al. διαπίστωσε ότι ατελής θερμικής εκτομής διεγείρει τον πολλαπλασιασμό των υπολειμματικών κυττάρων νεφρικού καρκινώματος [36]. Ke et al. βρέθηκε υπολειμματική ηπατικό καρκίνωμα VX2 μετά ελλιπή RFA θα μπορούσε να διευκολύνει την ταχεία εξέλιξη του σε ένα μοντέλο κουνέλι καρκινώματος VX2, και το εστιακό όγκο του όγκου και του πνεύμονα μεταστάσεις του RFA κουνέλια που έλαβαν αυξήθηκε σημαντικά [37].

Τοποθέτηση αποδεικτικά στοιχεία είχαν εντοπιστεί σημαντική συσχέτιση μεταξύ ΕΜΤ και διεισδυτικότητα σε διάφορους τύπους όγκων [38] – [40]. Εδώ δείξαμε ότι η παρέμβαση θερμότητα διεγερμένα μετασχηματισμό των κυττάρων HCC από μια τυπική επιθηλιακή φαινότυπο σε ατρακτοειδή μεσεγχυματικών φαινότυπο, συνοδευόμενη από την προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και ανοδική ρύθμιση του Ν-καντερίνης και βιμεντίνη. Περαιτέρω στοιχεία που παρέχονται από ξενομοσχεύματα σε γυμνά ποντίκια μετά από ελλιπή RFA ήταν ότι οι μεταβολές πρωτεϊνικό επίπεδο αυτών των δεικτών EMT ανιχνεύθηκαν επίσης. Επιπλέον, εξετάσαμε επίσης τις up-ρυθμίζονται παράγοντες μεταγραφής EMT στην ελλιπή όγκους RFA και στα κύτταρα HCC θερμική επεξεργασία. Τα ευρήματα αυτά σε συνδυασμό με τα αποτελέσματα των προηγούμενων μελετών που αναφέρονται παραπάνω, περαιτέρω διαπίστωσε ότι ο «διακόπτης cadherin» του ιστού του όγκου θα μπορούσε να προκληθεί από ελλιπή RFA που οδηγούν σε ενισχυμένη δυνατότητα μετάστασης.

Για να κατανοήσουμε πλήρως το μοριακό μηχανισμό της σχέση μεταξύ θερμότητας παρέμβασης και τις αλλαγές του φαινοτύπου των κυττάρων, εστιάσαμε την προσοχή μας σε β-κατενίνης. Ως κεντρικό παράγοντα στο μονοπάτι Wnt σήμα, β-κατενίνης παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη HCC, την ανάπτυξη, την εξέλιξη φαινότυπο και καρκινογένεση. β-κατενίνης μετάλλαξη είναι ένας παράγοντας που μπορεί να είναι κρίσιμη για την ανάπτυξη του HCC. Μεταλλάξεις συμμετέχει η οδός /β-κατενίνης Wnt φαίνεται να είναι μια από τις πιο συχνές γενετικές γεγονότα που συμβάλλει στην καρκινογένεση του ήπατος και την εξέλιξη [41]. Δυσλειτουργία του β-κατενίνης μπορεί να προάγει την καρκινογένεση? ποντίκια ετερόζυγο για διαγραφή LKB1 έδειξε μια ταχεία εξέλιξη σε HCC όταν ζευγαρώνουν με μεταλλαγμένα ποντίκια β-κατενίνης αδενοϊό επαγώγιμος [42]. Εν τω μεταξύ, μερικές αναφορές είχαν εμπλακεί ότι η μετάλλαξη β-κατενίνης ήταν μια μάλλον κοινό μηχανισμό νεοπλασμάτων στο ήπαρ ποντικού, περιλαμβανομένων των αδενωμάτων και καρκινωμάτων [43]. Από την άλλη πλευρά, ο συσχετισμός μεταξύ της β-κατενίνης οδό σηματοδότησης και EMT έχει επαληθευθεί σε αρκετές μελέτες. Yang et al.