Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος καχεξία (CC) συνδέεται με κακή πρόγνωση. Αν και οι μηχανισμοί προώθηση αυτής της κατάστασης δεν είναι γνωστά, έχουν αρκετές κυκλοφορούσες πρωτεΐνες έχουν προταθεί για να συνεισφέρουν. Αναλύσαμε το proteome πλάσματος σε θέματα καρκίνου, προκειμένου να προσδιοριστούν οι παράγοντες που συνδέονται με την καχεξία.

Σχεδιασμός /Θέματα

Το πλάσμα ελήφθη από μια ομάδα ελέγχου 59 ασθενών, πρόσφατα διαγνωστεί με υποψία γαστρεντερικού καρκίνου, με (n = 32) ή χωρίς (n = 27) καχεξία. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε πρωτεομική προφίλ χρησιμοποιώντας 760 αντισώματα (που στοχεύουν 698 μεμονωμένες πρωτεΐνες) από το σχέδιο Ανθρώπινη Πρωτεΐνη Atlas. Τα κύρια ευρήματα επικυρώθηκαν σε μία ομάδα από 93 ασθενείς με τις επαληθευμένες και προχωρημένο καρκίνο του παγκρέατος.

Αποτελέσματα

Μόνο έξι πρωτεϊνών εμφανίζεται επίπεδα διαφορικό πλάσμα στην ομάδα ελέγχου. Μεταξύ αυτών, καρνοσίνη διπεπτάση 1 (CNDP1) επιβεβαιώθηκε με ανοσολογική δοκιμή τύπου σάντουιτς για να είναι χαμηλότερη σε CC (p = 0,008). Σε αμφότερες τις ομάδες, τα χαμηλά επίπεδα CNDP1 συσχετίστηκαν με δείκτες κακή πρόγνωση συμπεριλαμβανομένης της απώλειας βάρους, η κακή διατροφή, ανάλυση λιπιδίων, τα χαμηλά /επίπεδα IGF1 κυκλοφορούν αλβουμίνη και κακή ποιότητα ζωής. Έντεκα από τα θέματα στην ομάδα ανακάλυψη τελικά διαγνωστεί με μη κακοήθη νόσο, αλλά παραλείποντας αυτά τα θέματα από τις αναλύσεις δεν είχε καμία σημαντική επίδραση στα αποτελέσματα.

Συμπεράσματα

Σε καρκίνο του γαστρεντερικού, μειωμένα επίπεδα στο πλάσμα της CNDP1 συνεργάτης με τα σημάδια του καταβολισμού και κακή έκβαση. Τα αποτελέσματα αυτά, σε συνδυασμό με πρόσφατα δημοσιευμένα στοιχεία που αποδεικνύουν χαμηλότερη κυκλοφορούν CNDP1 σε ασθενείς με γλοιοβλάστωμα και μεταστατικό καρκίνο του προστάτη, δείχνουν ότι CNDP1 μπορεί να αποτελέσει δείκτη του επιθετικού καρκίνου και CC

Παράθεση:. Arner P, Henjes F, Schwenk JM , Δαρμανής S, Dahlman Ι, Iresjö ΒΜ, et al. (2015) Κυκλοφορούν καρνοσίνη διπεπτάση 1 Associates με την απώλεια βάρους και την κακή πρόγνωση στον καρκίνο του γαστρεντερικού συστήματος. PLoS ONE 10 (4): e0123566. doi: 10.1371 /journal.pone.0123566

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Juergen Eckel, GDC, Γερμανία

Ελήφθη: 4 Δεκ, 2014? Αποδεκτές: 19 Φεβ 2015? Δημοσιεύθηκε: 21 Απριλίου, 2015

Copyright: © 2015 Arner et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από τη σουηδική Καρδιά και Πνευμονολογικό Ίδρυμα, η σουηδική Diabetes Association, το Ίδρυμα Novo Nordisk, η σουηδική Ίδρυμα Καρκίνου, DiabetesWellness, η σουηδική Ιατρικός Σύλλογος, το Συμβούλιο Έρευνας της Σουηδίας, το Στρατηγικό πρόγραμμα Έρευνας στον διαβήτη στο Ινστιτούτο Καρολίνσκα, η Knut και Alice Ίδρυμα Wallenberg και SciLifeLab Στοκχόλμης. Καμία από τις πηγές χρηματοδότησης έχουν λάβει μέρος στο σχεδιασμό, την εκτέλεση, την ανάλυση των δεδομένων ή την εγγραφή του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η καχεξία είναι μια κατάσταση του ακούσια απώλεια βάρους που παρατηρείται σε χρόνιες διαταραχές όπως καρκίνος, φλεγμονώδεις ασθένειες, συμφορητική καρδιακή ανεπάρκεια και τελικού σταδίου νεφρική νόσο [1]. Όπως πολλοί ως το πενήντα τοις εκατό του συνόλου των καχεξία καρκίνου ασθενείς με καρκίνο εμπειρία (CC), η οποία συνδέεται στενά με μειωμένη επιβίωση και την κακή απόκριση σε αντικαρκινική θεραπεία [2]. Μειωμένη πρόσληψη τροφής μπορεί να συμβάλει σε CC [3], αλλά αυτό δεν εξηγεί μόνο την ανάπτυξή της, και συμπληρώματα διατροφής αποτυγχάνει να αντιστρέψει τη διαδικασία [4]. Παρά τις σημαντικές προσπάθειες, οι υποκείμενους αιτιολογικούς μηχανισμούς παραμένουν ασαφείς, και δεν υπάρχει αποτελεσματική θεραπεία, αν και αρκετά ανακουφιστική στρατηγικές έχουν προταθεί [5,6,7,8].

Τόσο η μάζα λίπους και άλιπης μάζας σώματος είναι φτωχό σε προηγμένη CC [5,9]. Ωστόσο, μακροχρόνιες μελέτες έχουν δείξει ότι η απώλεια του λευκού λιπώδους ιστού (WAT) μάζα προηγείται εκείνη της μυϊκής ατροφίας [10,11]. Τα αποτελέσματα τα τελευταία χρόνια έχουν επίσης δείξει ότι WAT μείωσης της μάζας σε CC συνδέεται κυρίως με αυξημένη υδρόλυση (λιπόλυση) [12] και της οξείδωσης [13] των τριγλυκεριδίων των λιποκυττάρων. Οι μηχανισμοί που επηρεάζουν το μεταβολισμό των λιπιδίων σε CC δεν είναι γνωστές, αλλά είναι πιθανό ότι οι παράγοντες απελευθερώνονται στην κυκλοφορία, είτε απευθείας από τον όγκο ή έμμεσα από άλλους ιστούς, μπορούν να προκαλέσουν αλλαγές στην κυτταρική λίπος λιπόλυση /οξείδωση των λιπιδίων [12]. Αρκετές οι υποψήφιοι έχουν προταθεί κατά τη διάρκεια των ετών, συμπεριλαμβανομένου του ψευδαργύρου-α2-γλυκοπρωτεΐνη και παράγοντα νέκρωσης όγκων-άλφα [14], αν και μεταγενέστερες μελέτες έχουν δείξει ότι κανένας από αυτούς δεν μπορεί να

per se

εξηγήσει αυξημένη απώλεια λίπους σε CC [10 , 15].

Ταυτοποίηση νέων κυκλοφορούσες πρωτεΐνες που συνδέονται με την CC έχει παρακωλυθεί για διάφορους λόγους, κυρίως το γεγονός ότι το πλάσμα /ορό είναι μια σύνθετη μήτρα, όπου οι 20 πιο άφθονες πρωτεΐνες αντιπροσωπεύουν ~ 98% της περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες [16]. Κατά συνέπεια, η ανίχνευση των πρωτεϊνών που υπάρχουν σε χαμηλότερα επίπεδα απαιτεί συγγένεια πρωτεομική προσεγγίσεις όπου το μεγαλύτερο εμπόδιο ήταν η διαθεσιμότητα των ειδικών αντιδραστηρίων συγγένειας. Πρόσφατα, αρκετές κοινοπραξίες έχουν ξεκινήσει προσπάθειες για να λυθεί αυτό το εμπόδιο και να παράγει ειδικά συνδετικά συγγένεια [17]. Το Atlas έργο Ανθρώπινη Πρωτεΐνη (HPA) [18] αποσκοπεί στη δημιουργία τουλάχιστον ενός αντισώματος εναντίον κάθε ανθρώπινη πρωτεΐνη και σήμερα ~ 22.000 αντισωμάτων, που στοχεύουν ~ 16.000 πρωτεϊνών, εκπροσωπούνται με τα στοιχεία εντοπισμού της πρωτεΐνης και της έκφρασης σε δημόσια προσβάσιμη βάση δεδομένων (www.proteinatlas .org).

καθοριστεί αν το πλάσμα από ασθενείς με καρκίνο με καχεξία, σε σύγκριση με το βάρος σταθερά υποκείμενα καρκίνου (WS), εμφανίζουν συγκεκριμένες μεταβολές στα επίπεδα πρωτεΐνης η οποία συνδεδεμένη με το σωματικό βάρος /λίπος απώλεια μάζας και /ή άλλα κλινικά χαρακτηριστικά της CC. Για το σκοπό αυτό, 760 αντισώματα (που στοχεύουν 698 μοναδικές πρωτεΐνες) από το Έργο ΗΡΑ χρησιμοποιήθηκαν σε συστοιχίες χάντρα ανάρτησης (SBA). Η προσέγγιση αυτή προσδιορίζεται ένα μικρό σύνολο των διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών, μεταξύ των οποίων καρνοσίνη διπεπτιδάση 1 (CNDP1), μια πρωτεΐνη που φαίνεται πρόσφατα να μειωθεί σε μεταστατικό καρκίνο του προστάτη και το γλοιοβλάστωμα [19,20], επιβεβαιώθηκε με ανοσολογική δοκιμή τύπου σάντουιτς που πρέπει να μειωθεί σε CC. Ως εκ τούτου, τα κυκλοφορούντα επίπεδα της CNDP1 συγκρίθηκαν με την κλινική μέτρα της νοσηρής κατάστασης.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς

Τα κλινικά χαρακτηριστικά της κλάσης 1 και 2 είναι αναλυτική στον Πίνακα 1. Cohort 1 αποτελούνταν από 59 ασθενείς με υποψία καρκίνου του γαστρεντερικού, 43 άνδρες και 16 γυναίκες, 26 από τα οποία έχουν σε μεγάλο βαθμό έχουν περιγραφεί αλλού [21]. Τριάντα δύο ασθενείς πληρούσαν τα κριτήρια της καχεξίας, δηλαδή ακούσια απώλεια βάρους άνω των πέντε τοις εκατό της συνήθους σωματικού βάρους στους τρεις προηγούμενους μήνες ή δέκα τοις εκατό κατά τους προηγούμενους έξι μήνες [21]. Είκοσι επτά αναφερθεί καμία σημαντική απώλεια βάρους και ορίστηκαν ως το βάρος σταθερό (WS). Οι ασθενείς CC διαγνώστηκαν με αδενοκαρκίνωμα στο γαστρικό περιοχή δηλαδή καρδιακή /κοιλία (n = 3), του παχέος εντέρου (n = 2, εκ των οποίων το ένα με ηπατικές μεταστάσεις), του παγκρέατος (η = 11), του οισοφάγου (n = 9, έξω από τις οποίες οι 4 με πλακώδες καρκίνωμα) και χολαγγειοκαρκίνωμα (n = 1). Οι ασθενείς WS διαγνώστηκαν με αδενοκαρκίνωμα του οισοφάγου (n = 4), γαστρικό περιοχή (n = 2), του παχέος εντέρου (n = 7, όλα με ηπατικές μεταστάσεις), του παγκρέατος (η = 8) ή χολαγγειοκαρκίνωμα (n = 1). Έντεκα άτομα (έξι στο CC και πέντε στην ομάδα WS), προεγχειρητικά καθορίστηκε να έχει μια κακοήθη νόσο, είχαν μετεγχειρητικά φαίνεται να έχουν ένα μη-καρκινική σχετίζονται διάγνωση. Στην ομάδα CC η τελική διάγνωση ήταν καλοήθεις κύστεις του παγκρέατος (n = 1), χολοκυστίτιδα (n = 2), δυσπλασία στον οισοφάγο (n = 1) και τη χρόνια παγκρεατίτιδα (η = 2). Στην ομάδα WS οι τελικές διαγνώσεις ήταν χολοκυστίτιδα (n = 1) και τη χρόνια παγκρεατίτιδα (η = 4). Όπως περιγράφεται στα αποτελέσματα, αν και αυτά τα θέματα συμπεριλήφθηκαν στη συνολική ανάλυση, παράλειψη αυτών των ατόμων δεν έχουν καμία σημαντική επίπτωση στις συσχετίσεις μεταξύ CNDP1 και διαφορετικές κλινικές παραμέτρους. Cohort 2 αποτελούνταν από 93 ασθενείς που διαγιγνώσκονται με ανεγχείρητο πορογενές καρκίνωμα του παγκρέατος. Αυτά τα δείγματα επιλέχθηκαν από μια βιοτράπεζα που συλλέγονται κατά τη διάρκεια μιας περιγράφηκε προηγουμένως [22] πρόγραμμα παρηγορητικής φροντίδας στην εξωνοσοκομειακή κλινική του Τμήματος Χειρουργικής, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Sahlgrenska μεταξύ 1993 και 2005. Μόνο οι ασθενείς οι οποίοι κρίθηκαν εύλογα σωματικά ικανός συμπεριλήφθηκαν στην παρούσας μελέτης. Κανένας από τους ασθενείς δεν είχε σημάδια έκδηλο σακχαρώδη διαβήτη ή οποιαδήποτε άλλη πρόσθετη διάγνωση καρκίνου ή σοβαρή ασθένεια.

Η

Ηθική Δήλωση

Ηθικές εγκρίσεις για τις μελέτες ελήφθησαν από τα περιφερειακά συμβούλια δεοντολογίας ( στη Στοκχόλμη και το Γκέτεμποργκ, αντίστοιχα) πριν από την έναρξη της μελέτης, και όλοι οι ασθενείς έδωσαν υπέγραψε συγκατάθεση τους. Η μελέτη διεξήχθη σε πλήρη συμφωνία με τις δηλώσεις στη Διακήρυξη του Ελσίνκι.

Η κλινική εξέταση

Στην ομάδα 1, οι ασθενείς ήρθαν στο εργαστήριο μετά από ολονύκτια νηστεία. Εκτός από τη μέτρηση του ύψους και του βάρους, τη σύνθεση του σώματος προσδιορίστηκε με βιοαντίστασης χρησιμοποιώντας ένα QuadScan 4000 (Bodystat Ltd, Isle of Man, Βρετανικά νησιά). Έμμεση θερμιδομετρία να καθορίσει ανάπαυσης δαπάνες ενέργειας (REE) και το αναπνευστικό πηλίκο (RQ) πραγματοποιήθηκε με τη χρήση Deltatrac (Datex-Engströms, Ελσίνκι, Φινλανδία). Η διατροφική κατάσταση αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα τυποποιημένο ερωτηματολόγιο για την ογκολογία ονομάζονται ασθενούς που δημιουργήθηκε Υποκειμενική Σφαιρική αξιολόγηση (PG-SGA) [23]. Ένα δείγμα φλεβικού αίματος χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των κυκλοφορούντων παραγόντων. Εν συντομία, 20 ml φλεβικού αίματος από κάθε δότη και κρύο φυγοκεντρήθηκαν για να ληφθεί πλάσμα το οποίο στη συνέχεια κλασματοποιήθηκε σε 2 mL Eppendorf σωλήνες και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι τη χρήση. Τα επίπεδα λεπτίνης εκτιμήθηκαν με ELISA (συστήματα RD, Abingdon, UK), ενώ η αλβουμίνη, τρανσφερίνη, ινσουλίνη αυξητικού παράγοντα-1 (IGF1) και η C-αντιδρώσα πρωτεΐνη (CRP) προσδιορίστηκαν με την διαπιστευμένο ρουτίνας εργαστήριο χημείας του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Karolinska . γλυκερόλη πλάσματος προσδιορίστηκε με βιοφωταύγεια, όπως περιγράφεται [24] χρησιμοποιώντας ηπαρίνη πλάσμα, τα δείγματα αναλύθηκαν εις διπλούν (2×25 μΙ) και μέσες τιμές διορθώθηκαν για συνολική μάζα λίπους (σε kg) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21]. Η αναλογία της γλυκερόλης προς το συνολικό βάρος του σωματικού λίπους θεωρήθηκε ένας δείκτης των

in vivo

λιπόλυση [21]. Θέματα στην ομάδα 2 εξετάσθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11,22]. Εν συντομία, οι μετρήσεις στον ορό και στο πλάσμα εκτελέστηκαν από το διαπιστευμένο εργαστήριο αναλύσεων ρουτίνας χημεία του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Sahlgrenska εκτός από την λεπτίνη η οποία καθορίστηκε inhouse με RIA (Linco Research Inc). σύσταση του σώματος μετρήθηκε με απορροφησιομετρία ακτίνων Χ διπλής ενέργειας (DXA) με τη χρήση ενός σεληνιακού DPX-L σαρωτή (Scanexport Ιατρική, Helsingborg, Σουηδία). Ολόσωμα σπινθηρογραφήματα, ελήφθησαν σε γρήγορη λειτουργία σάρωσης. σωματικού λίπους και μυϊκής μάζας του ιστού αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη λειτουργία εκτεταμένης έρευνας του λογισμικού DPX-L LUNAR (v1.31). REE και η οξείδωση του λίπους μετρήθηκαν με έμμεση θερμιδομετρία κατά τις πρωινές ώρες μετά από ολονύκτια νηστεία χρησιμοποιώντας Deltatrac (Datex-Engströms, Ελσίνκι, Φινλανδία). Η σύντομη μορφή ερωτηματολόγιο υγείας SF-36 (www.sf-36.org/tools/sf36.shtml) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της ποιότητας ζωής, σύμφωνα με τη φυσική λειτουργία (PF), σωματικός πόνος (ΒΡ), ο ρόλος-φυσική (RP ), τη γενική υγεία (GH), η περίληψη σωματικών παραμέτρων (PCS), της ζωτικότητας (VT), την κοινωνική λειτουργία (SF), ο ρόλος-συναισθηματική (RE), την ψυχική υγεία (ΜΗ) και η περίληψη ψυχική συνιστώσα (MCS).

αντισώματα

Όλα τα αντισώματα που χρησιμοποιούνται στην αρχική διαλογή και χαρακτηριστικών προέρχονται από τους πόρους των αντιδραστηρίων συγγένειας που παράγονται εντός της ανθρώπινης πρωτεΐνης Atlas (www.proteinatals.org). Πρωτόκολλα για την επιλογή αντιγόνου, κλωνοποίηση, έκφραση, καθαρισμό, και ανοσοποίηση κουνελιών, που ακολουθείται από καθαρισμό συγγένειας για να δώσει μονο-ειδικά πολύκλωνα αντισώματα, και τον χαρακτηρισμό τους με κηλίδες Western και μικροσυστοιχίες αντιγόνο εφαρμόσθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25]. Όλα τα πρωτεϊνικά θραύσματα που χρησιμοποιούνται για την ανοσοποίηση παρήχθησαν με μια ετικέτα His6 πρωτεΐνη-δεσμεύσεως λευκωματίνης και πρωτεΐνης-στόχου μέρος 80-120 αμινοξέων. Τα αντισώματα αυτά συγκεντρώνονται σε ομάδες των 380 για πρακτικούς πειραματικούς λόγους και δύο τέτοιες σειρές χρησιμοποιήθηκαν. Τα κριτήρια ένταξης βασίστηκαν μόνο για τη διασφάλιση της ποιότητας και τεχνικές παραμέτρους όπως η θετική επικύρωσης για μικροσυστοιχίες πρωτεϊνών και εντός μιας ευρείας πάνελ ιστών σε ανοσοϊστοχημεία, όπως επίσης και η συγκέντρωση του αντιγόνου καθαρισμένα πολύκλωνα αντισώματα. Από εκεί και πέρα, υπάρχουν εκτιμήσεις έγιναν για σχολιασμό ή τη λειτουργία των στοχευόμενων πρωτεϊνών. Η τελική σύνταξη οδηγήθηκε από τα οποία αντισώματα συμπτωματικά παρήχθησαν και επικυρώθηκαν κατά τη στιγμή της επιλογής.

συστοιχίες χάντρα αναστολή αντισωμάτων

Τα αντισώματα συνδέονται με χρωματική κωδικοποίηση μαγνητικά σφαιρίδια (MagPlex μικροσφαιρίδια, Luminex Corp .) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή και όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20]. Η απόδοση σύζευξης για κάθε αντισώματος προσδιορίστηκε μέσω αντίσωμα IgG αντι-κουνελιού R-φυκοερυθρίνη (Jackson ImmunoResearch Laboratories). Ένα μίγμα 384-plex χάντρα δημιουργήθηκε με 380 αντιγόνο καθαρίστηκε πολύκλωνα αντισώματα ΗΡΑ και τέσσερα χάντρα ταυτότητες χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Το τελευταίο αποτελείτο από IgG από μη ανοσοποιημένους ως αρνητικοί έλεγχοι κουνελιού και ρυθμιστικό διάλυμα αντισώματος-free ενώ αντι-λευκωματίνης και αντισωμάτων αντι-ανθρώπινης IgG (Dako) θεωρήθηκαν ως θετικοί έλεγχοι. Το μίγμα περιείχε ίσες ποσότητες των σφαιριδίων, όπου κάθε πληθυσμός μιας διακριτής χρώμα-code μετέφερε ένα συγκεκριμένο αντίσωμα. Τα δείγματα πλάσματος επισημάνθηκαν και αναλύθηκαν σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες με μικρές αλλαγές. Οι δείγμα πλάκες (AbGene) φυγοκεντρήθηκαν (2 λεπτά στις 2000 στροφές ανά λεπτό), και 3 μΐ κάθε δείγματος προστέθηκαν σε 22 μΐ αποστειρωμένου με διήθηση PBS με ένα χειριστή υγρού (SELMA, CYBIO). Ν-υδροξυηλεκτριμιδυλεστέρας του βιοτινοϋλ tetraoxapentadecanoic οξέος (Pierce) προστέθηκε στη συνέχεια σε δέκα-πλάσια γραμμομοριακή περίσσεια για να δώσει μια συνολική αραίωση 1:10 του δείγματος που ακολουθείται από επώαση 2 ωρών στους 4 ° C σε έναν αναδευτήρα πλάκας μικροτίτλου (Thermomixer, Eppendorf) . Η αντίδραση σταμάτησε με την προσθήκη ενός 250-πλάσια γραμμομοριακή περίσσεια Tris-HCl, ρΗ 8.0 πάνω από βιοτίνη και επωάστηκαν για άλλα 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT) πριν από την τελική αποθήκευση στους -20 ° C. Όλα τα δείγματα χρησιμοποιήθηκαν στη συνέχεια χωρίς την αφαίρεση μη ενσωματωμένα βιοτίνη και αραιωμένο 1:50 σε ρυθμιστικό δοκιμασίας που αποτελείται από 0.5% (β /ο) πολυβινυλο αλκοόλη και 0.8% (w /v) πολυβινυλοπυρρολιδόνη (Sigma) σε 0,1% καζεΐνη σε PBS συμπληρωμένο με 0,5 mg /ml IgG κουνελιού (Bethyl Laboratories). Τα δείγματα έχει υποστεί θερμική επεξεργασία σε ένα θερμικό κυκλοποιητή για 30 λεπτά στους 56 ° C και 10 λεπτά στους 23 ° C. Στη συνέχεια, 45 μλ προστέθηκαν σε 5 μΐ των μιγμάτων σφαιριδίων σε ένα επίπεδο πυθμένα πλάκας 96-φρεατίων μισής περιοχής (Greiner), και η επώαση πραγματοποιήθηκε επί μία νύκτα σε τροχιακό αναδευτήρα στους 650 σ.α.λ σε RT. Τα σφαιρίδια πλύθηκαν σε φρεάτια με 3 χ 100 μΙ PBST (1 PBS, ρΗ 7,4, 0,05% Tween20) σε μαγνήτη χρησιμοποιώντας μία ροδέλα πλάκα (EL406, BioTek) ακολουθούμενο από 10 min στερέωση με 50 μΐ 0,4% παραφορμαλδεϋδη σε PBS. Τα σφαιρίδια πλύθηκαν και πάλι πριν από 50 μΐ 0,5 μg /ml R-φυκοερυθρίνη στρεπταβιδίνη (Invitrogen) σε PBST προστέθηκε και επωάστηκε για 20 λεπτά. Τέλος, χάντρες πλύθηκαν και μετρήθηκαν σε 100 μΙ PBST χρησιμοποιώντας ένα ειδικό μέσο (FlexMap3D, Luminex Corp.).

Σάντουιτς Immunoassay

με βάση σφαιρίδια ανοσοδοκιμασίες σάντουιτς διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26 ]. Δύο διαφορετικές ανιχνεύσεις χάντρα δημιουργήθηκαν, ένα που περιέχει διάφορες μονο- και πολυκλωνικά αντισώματα στόχευσης CNDP1 καθώς και πρωτεΐνες ελέγχου [26], ενώ το δεύτερο περιείχε ένα αντίσωμα (HPA008933) στόχευσης CNDP1 καθώς και τους ελέγχους. Σε αμφότερες τις περιπτώσεις, BAF2489 (R &? D Systems) χρησιμοποιήθηκε ως αντίσωμα ανίχνευσης. Εν συντομία, τα δείγματα του πλάσματος αραιώθηκαν 1: 500 σε ρυθμιστικό δοκιμασίας και θερμικά επεξεργασμένο σε ένα θερμοκυκλοποιητή στους 56 ° C για 30 λεπτά και 23 ° C για 10 λεπτά. Στη συνέχεια, 45 μΙ αραιωμένου δείγματος συνδυάστηκαν με 5 μΙ της συστοιχίας σφαιριδίων σε πλάκες μικροτιτλοδότησης (Greiner), και η επώαση πραγματοποιήθηκε Ο /Ν σε έναν αναδευτήρα σε θερμοκρασία δωματίου και 650 rpm. Τα σφαιρίδια πλύθηκαν επί ενός μαγνήτη 3χ με PBST χρησιμοποιώντας ένα πλυντήριο πλάκας (EL406, BioTek). Αυτό ακολουθήθηκε από 1 ώρα από 0,4 μg /ml βιοτινυλιωμένου αντισώματος ανίχνευσης, 3χ πλύση με PBST, και 10 λεπτά με ένα διάλυμα που περιέχει 0,4% παραφορμαλδεΰδη σε PBS. Τα σφαιρίδια πλύθηκαν και πάλι, και 0,5 μg /ml R-φυκοερυθρίνη στρεπταβιδίνη (Invitrogen) σε PBST προστέθηκε και επωάστηκε για 20 λεπτά. Τέλος, χάντρες πλύθηκαν και μετρήθηκαν σε PBST χρησιμοποιώντας ένα ειδικό όργανο (FlexMap3D, Luminex Corp.).

Στατιστικές μέθοδοι

Οι συνεχείς μεταβλητές παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD σε μορφή κειμένου και μέση τιμή ± SEM σε στοιχεία. διαφορές του Ομίλου προσδιορίστηκαν από Wilcoxon-Rank-Sum-Test, του Student ζεύγη ή αταίριαστο

t-test

όπως υποδεικνύεται. χ

2 τεστ που χρησιμοποιούνται για τις ονομαστικές μεταβλητές. Συσχετίσεις μεταξύ συνεχών μεταβλητών πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση συσχέτισης Spearman (όπου δεν θα μπορούσε να αποδειχθεί κανονική κατανομή /υποτίθεται) ή απλή γραμμική παλινδρόμηση. Η στατιστική σημαντικότητα ορίστηκε στο επίπεδο του

P

& lt? 0,05. Στην ομάδα ανακάλυψη, δεν υπολογισμός δύναμης πραγματοποιήθηκε. Στατιστική υπολογισμοί πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση τυποποιημένων πακέτων λογισμικού.

Αποτελέσματα

Κλινικά χαρακτηριστικά της ανακάλυψης ομάδα

Στην ομάδα 1, CC και WS θέματα ήταν της ίδιας ηλικίας και φύλου διανομής, αν και τα δύο υποομάδες αποτελούνταν κυρίως από άνδρες (Πίνακας 1). Όπως ήταν αναμενόμενο, οι ασθενείς ανέφεραν CC πιο έντονη απώλεια βάρους και εμφανίζονται σημάδια του καταβολισμού, όπως αποδεικνύεται από χαμηλότερο ΔΜΣ, χαμηλότερη λευκωματίνη του πλάσματος και τα επίπεδα της τρανσφερίνης καθώς και φτωχότερες διατροφική κατάσταση αποδεικνύεται από τα υψηλότερα PG-SGA βαθμολογίες. Η απώλεια βάρους που παρατηρήθηκε στην ομάδα καχεκτικό οφειλόταν κυρίως στην απώλεια της λιπώδους μάζας, αφού άλιπης μάζας σώματος (LBM) ήταν παρόμοια στις δύο ομάδες. Σε συμφωνία με προηγουμένως δημοσιευμένα δεδομένα, οι καχεκτικά άτομα που εμφανίζονται κάτω αναπνευστική πηλίκο (RQ), ένα έμμεσο μέτρο της οξείδωσης λιπαρών οξέων, καθώς επίσης και σημάδια αυξημένης

in vivo

λιπόλυση αποδεικνύεται από σημαντικά αυξημένα επίπεδα γλυκερίνης πλάσματος (διορθωμένα για συνολική μάζα λίπους). Στο σύνολό τους, τα καχεκτικά ομάδα σε ομάδα 1 εμφανίζεται κυρίως WAT απώλεια μάζας, καθώς και όλα τα κλασικά χαρακτηριστικά και την κλινική χαρακτηριστικά του διαταραγμένου μεταβολισμού των λιπιδίων έχουν αναφερθεί στο παρελθόν σε CC.

Affinity πρωτεομική ανάλυση των κυκλοφορούντων παραγόντων

προκειμένου να εντοπιστούν κυκλοφορούντα παράγοντες που συνδέονται με CC, δείγματα πλάσματος από κοόρτη 1 αναλύθηκαν με πρωτεομική προφίλ χρησιμοποιώντας συστοιχίες χάντρα ανάρτησης (SBA, οι λεπτομέρειες σχετικά με τη διαδικασία επιλογής αντίσωμα που περιγράφεται στο τμήμα Μέθοδοι). Από τα ~ 700 διαλογή πρωτεϊνών, έξι έδειξαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των CC και WS ομάδες? τρεις ήταν χαμηλότερα? (CNPD1, APOa4, DACH1), ενώ τρεις ήταν υψηλότερες (BCl3 NARS2, ATP13A4) σε άτομα CC (Πίνακας 2). DACH1 είναι ένας παράγοντας μεταγραφής, BCl3 είναι ένας μεταγραφικός συν-ενεργοποιητή, CNDP1, NARS2, ATP13A4 προτείνονται ένζυμα και APOa4 είναι μια λιποπρωτεΐνη. CNDP1 και APOa4 περιγράφονται ως εκκρίνεται εξωκυττάρια παράγοντες, ενώ τα υπόλοιπα τέσσερα είναι ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες. Επιπλέον, CNDP1 και APOa4 έχουν δειχθεί ότι μεταβάλλεται στο πλάσμα /ορό υποκειμένων καρκίνου. Έτσι, έχουν μειώσει τα επίπεδα CNDP1 έχουν αναφερθεί σε διάφορα επιθετικές μορφές καρκίνου του [19,20] ενώ APOa4 έχει δειχθεί να αυξηθεί σε παιδιατρικούς μορφές υψηλού κινδύνου οξείας λευχαιμίας [27], αλλά χαμηλότερο σε ενήλικες γυναίκες με καρκίνο των ωοθηκών [28,29] . Ως εκ τούτου, οι μελέτες μας επικεντρώθηκαν στην CNDP1 και APOa4 όπου το πρώτο βήμα ήταν να επικυρώσει τα αποτελέσματα μας SBA με ανοσολογική δοκιμή τύπου σάντουιτς (SIA). Ενώ η μείωση των APOa4 δεν μπορούσε να επιβεβαιωθεί με ΣΙΑ (S1 σχήμα, p = 0.21), CNDP1 μειώθηκε σε CC σε συγκρίσιμο βαθμό στην SBA (Σχήμα 1Α) και ΣΙΑ (Σχήμα 1Β). Επιπλέον, οι μεμονωμένες τιμές CNDP1 λαμβάνονται με τη χρήση SBA ή ΣΙΑ συσχετίζονταν ισχυρά (Σχήμα 1C, ρ = 0,78, με βαθμό συσχέτισης Spearman, το ρ & lt? 0.001) και την αξιοπιστία της τελευταίας ανάλυσης επιβεβαιώθηκε περαιτέρω από δύο ανεξάρτητους ΕΑΑ χρησιμοποιώντας διαφορετικά αντισώματα που αποκάλυψε εξαιρετικές συσχετίσεις ενδο- και δια-δοκιμασίας (εύρος ρ = 0,93-0,99, δεν γραφικές παραστάσεις). επίπεδα CNDP1 μετράται με ΣΙΑ δεν συνδέονται είτε με την ηλικία ή το φύλο (Σχήμα 1δ και 1ε, αντίστοιχα).

Οι Εντοπίστηκε επίπεδα πρωτεΐνης εμφανίζεται για Α της οθόνης χρησιμοποιώντας Πίνακες Σάντουιτς Στεφάνη (SBA) και Β επικύρωση από Ανοσοδοκιμασίες sandwich (SIA) και εκφράζονται ως μέση ένταση φθορισμού (MIF). Γ Υπήρχε μια εξαιρετική συσχέτιση μεταξύ των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται με SBA και ΣΙΑ. επίπεδα CNPD1 μετράται με ΣΙΑ δεν επηρεάστηκαν από τον Δ ηλικία ή το φύλο Ε. ΣΤ Κατανομή των κυκλοφορούντων συγκεντρώσεων CNDP1 προσδιορίζονται με ΣΙΑ στην Cohort 2. WS = βάρος σταθερό, CC = Καρκίνος καχεξία. P- και rho τιμές δίνονται.

Η

επίπεδα CNDP1 συσχετίζονται αρνητικά με παράγοντες που σχετίζονται με CC

Τα κυκλοφορούντα επίπεδα CNDP1 συγκρίθηκαν με διαφορετικές κλινικές παραμέτρους στην ομάδα 1 (Πίνακας 3). Υπήρξαν θετικές σχέσεις με ΔΜΣ, μάζα λίπους (που εκφράζεται σε επί τοις εκατό ή απόλυτες τιμές), καθώς και με τα κυκλοφορούντα επίπεδα λευκωματίνης, τρανσφερρίνης και IGF1. Αντίθετα, CNPD1 αρνητικά που συνδέονται με την απώλεια τοις εκατό κατά βάρος, PG-SGA βαθμολογία και

in vivo

λιπόλυση (που εκφράζεται ως P-γλυκερόλης /λιπώδους μάζας kg). Οι συσχετίσεις μεταξύ CNDP1 και ΔΜΣ, η λιπώδης μάζα (kg), απώλεια βάρους τοις εκατό, ορό-IGF1 /τρανσφερίνης και

in vivo

λιπόλυση παρέμεινε στατιστικά σημαντική μετά τον αποκλεισμό από τα έντεκα άτομα που είχαν διαγνωστεί με μη κακοήθη νόσο των υστέρων -surgery.

Η

Μειωμένα επίπεδα CNDP1 σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε επικύρωση ομάδα

Τα ευρήματα της SBA και ΣΙΑ λήφθηκαν σε μια μάλλον μικρή ομάδα, που είχαν διαγνωστεί με διαφορετικές γαστρεντερικών καρκίνων και πού δεν υπάρχουν στοιχεία αποτέλεσμα είναι διαθέσιμα. Για να είναι έγκυρη, αλλά και να καθοριστεί καλύτερα η συσχέτιση μεταξύ μειωμένων επιπέδων CNDP1 και την πρόγνωση, που κυκλοφορεί CNDP1 προσδιορίστηκε με ΣΙΑ σε μια ξεχωριστή, πιο ομοιογενής, επικύρωση ομάδα περιλαμβάνει μόνο άτομα με προχωρημένο καρκίνο του παγκρέατος (Cohort 2, Πίνακας 1 και Σχήμα 1 F) . Σε αυτούς τους ασθενείς, οι τιμές CNDP1 αρνητικά που σχετίζονται με την απώλεια βάρους τοις εκατό και τα μέτρα της οξείδωσης των λιπών, ενώ υπήρξε μια θετική σχέση με τη λευκωματίνη του πλάσματος, IGF1 και φυσικές μετρήσεις της ποιότητας ζωής (SF-36) (Πίνακας 4) σχετίζονται με την υγεία. Παρά την έλλειψη σύνδεσης μεταξύ των επιπέδων CNDP1 και καθιέρωσε δείκτες όγκου (CEA, CA 125 και CA19-9), υπήρχε μια σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ CNDP1 και την επιβίωση (μετρούμενη ως ημέρες επιβίωσης μετά τη διάγνωση). Σε αντίθεση με τα ευρήματα σε ομάδα 1, δεν υπήρχε σχέση μεταξύ CNDP1 και ΔΜΣ, η συνολική μάζα λίπους ή

in vivo

λιπόλυση.

Η

Συζήτηση

Για να μας γνώση, το κυκλοφορούν proteome στο CC δεν έχει χαρακτηριστεί πριν. Χρησιμοποιώντας περιγράφηκε προηγουμένως αναστολή αντισώματος τεχνολογία array χάντρα μας [30], πραγματοποιήθηκε διαλογή περίπου 700 πρωτεΐνες. Βρήκαμε ότι μόνο ένα περιορισμένο σύνολο παραγόντων, που αντιστοιχεί σε λιγότερο από το 1% των διαλογή πρωτεϊνών, εμφανίζεται σημαντικά επίπεδα απόκλιση πλάσμα σε CC-ασθενείς σε σύγκριση με το βάρος σταθερό θέματα καρκίνου. Αυτό θα μπορούσε ενδεχομένως να εξαρτάται από το γεγονός ότι τα υποκείμενα στην ομάδα αυτή αποτελείτο διαλογή των ασθενών με καρκίνο νεοδιαγνωσθέντες και αναλύθηκαν σε πρώιμο στάδιο της CC ή ότι πράγματι μερικά κυκλοφορούσες πρωτεΐνες συνδέουν με CC. Είναι επίσης πιθανό ότι μπορεί να έχουμε χάσει κάποια σχετικών πρωτεϊνών οφείλεται στο γεγονός ότι πολλοί σήματα σε ένα πρωτεομική οθόνη μπορεί να είναι στην περιοχή του θορύβου ή /και ότι η οθόνη περιλαμβάνονται αντισώματα που κατευθύνονται έναντι μόνο ένα περιορισμένο σύνολο των πρωτεϊνών. Μεταξύ των διαφορικά εκφρασμένων πρωτεϊνών, τέσσερις παράγοντες (CNDP1, APOa4, DACH1 και BCl3) έχουν προηγουμένως μελετηθεί σε διάφορες πτυχές του καρκίνου, αλλά μόνο APOa4 και CNDP1 αποτελούν εκκρίνεται πρωτεΐνες. Οι δύο τελευταίες έχουν προηγουμένως μελετηθεί στην κυκλοφορία των θεμάτων του καρκίνου, αν και όχι στο πλαίσιο της καχεξίας. ανοσολογική δοκιμή τύπου σάντουιτς επιβεβαίωσε χαμηλότερα επίπεδα στο πλάσμα της CNDP1 στο CC και τα χαμηλά επίπεδα CNDP1 συνδέονται με διάφορα μέτρα του CC. Τα κύρια ευρήματα θα μπορούσαν να επικυρωθούν σε ένα ξεχωριστό αποδεικνύουν ομάδα που μειώνεται CNDP1 συσχετίζονται με την απώλεια βάρους, πιο προηγμένες καταστάσεις ασθένειας, και μειωμένη επιβίωση. Βεβαίως, κάποιες από τις ενώσεις διέφερε μεταξύ των δύο ομάδες. Έτσι, ενώ ΒΜΙ, λιπώδους μάζας και

in vivo

λιπόλυση συσχετίζεται με κυκλοφορία CNDP1 σε κοόρτη 1, οι σχέσεις αυτές δεν ήταν σημαντικές σε κοόρτης 2. Αυτό θα μπορούσε ενδεχομένως να εξαρτάται από το γεγονός ότι τα άτομα σε ομάδα 2 είχε ένα πιο προχωρημένο το στάδιο της νόσου.

Έντεκα από τους ασθενείς στην ομάδα 1 ήταν τελικά διαγνωστεί με μη κακοήθη νόσο. Εμείς δεν θεωρούμε αυτό να έχει σημαντικές επιπτώσεις στα αποτελέσματα μας σχετικά με CNDP1, βασίζεται εν μέρει στο γεγονός ότι παραλείποντας αυτά τα άτομα από τις αναλύσεις που δεν έχουν καμία σημαντική επίπτωση στις σημαντικές συσχετίσεις με διαφορετικές κλινικές παραμέτρους. Το πιο σημαντικό, όμως, παρόμοιες συσχετίσεις με CNDP1 βρέθηκαν στην ομάδα 2, το οποίο αποτελούνταν μόνο από άτομα με επιβεβαιωμένη καρκίνο του παγκρέατος.

Το

CNDP1

γονίδιο κωδικοποιεί μια kDa γλυκοπρωτεΐνη της οικογένειας μεταλλοπεπτιδάση M20 57. Στους ανθρώπους, είναι κατά κύριο λόγο εκφράζεται στο κεντρικό νευρικό σύστημα και (σε ​​μικρότερο βαθμό) στο ήπαρ από όπου εκκρίνεται ως ομοδιμερές. [31]. Αν και η ταυτότητα αλληλουχίας των

CNDP1

είναι άκρως συντηρημένη μεταξύ των ειδών, το μη-ανθρώπινο γονίδιο εκφράζεται σχεδόν αποκλειστικά στο νεφρό, αλλά επειδή στερείται ένα Ν-τερματικό πεπτίδιο σήμα δεν είναι ανιχνεύσιμη στην κυκλοφορία [31] . Η λειτουργία του CNDP1 δεν προσδιορίζεται πλήρως, αλλά εμφανίζει καρβοξυ-και διπεπτιδάσης δραστηριότητα και κύρια υποστρώματα του φαίνεται να είναι η διπεπτίδια καρνοσίνη (β-αλανυλ-ιστιδίνη) και ομοκαρνοσίνη (γ-αμινοβουτυρυλ-L-ιστιδίνη) [31,32,33 ]. Καρνοσίνη είναι κατά κύριο λόγο παρούσα σε μυς και στον εγκεφαλικό ιστό και έχει εμπλακεί σε πολλές παθοφυσιολογικές διεργασίες που περιλαμβάνει ένα προστατευτικό ρόλο σε atheroscleroisis [34], ηπατική στεάτωση [35], η διαβητική νεφροπάθεια [36,37,38,39] και στον καρκίνο [40] , όπου αντι-πολλαπλασιαστικές ιδιότητες σε διαφορετικά κακοήθη κύτταρα έχουν κεντρίσει ιδιαίτερο ενδιαφέρον [41,42,43]. Τα χαμηλά επίπεδα CNDP1 έχουν βρεθεί να συνδέεται με τη μετάσταση λεμφαδένα σε μια μεγάλη σειρά ασθενών με καρκίνο του προστάτη [20]. Επιπλέον, μια πρόσφατη πρωτεομική ανάλυση χρησιμοποιώντας ένα μη-ανοσο-based (φασματομετρία μάζας χρωματογραφία-tandem υγρό) προσέγγιση που προτείνεται ότι CNDP1 είναι μία από τις πολλές πρωτεΐνες ρυθμίζονται κάτω στο πλάσμα του δέκα ασθενών με γλοιοβλάστωμα σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες [19]. Συνεπώς, είναι πιθανό ότι τα μειωμένα επίπεδα CNDP1 μπορεί να είναι ένας κοινός παρονομαστής σε διάφορες επιθετικές μορφές καρκίνου. Βεβαίως, μπορεί να φαίνεται αντιφατικό ότι η καρνοσίνη, προτείνεται να έχουν αποτελέσματα κατά των όγκων, ενώ μειωμένα επίπεδα της καρνοσίνης ταπεινωτική ένζυμο συνεργάτης με προχωρημένα στάδια του καρκίνου. Ωστόσο, θα μπορούσε να υποτεθεί ότι CNDP1 κάτω ρύθμιση, με αποτέλεσμα αυξημένα επίπεδα καρνοσίνης, μπορεί να αποτελέσει μια αντισταθμιστική /αμυντικού μηχανισμού ενεργοποιούνται σε συνθήκες με υψηλό κύκλο εργασιών των κυττάρων. Αν τα επίπεδα καρνοσίνης πλάσμα μεταβάλλεται σε καρκίνο δεν είναι γνωστός, και δεν είχαμε αρκετό υλικό για να καθορίσουν τη σχέση μεταξύ CNDP1 και καρνοσίνης στην κυκλοφορία. Ως εκ τούτου, η ασαφής συνάρτηση της CNDP1

in vivo

, καθώς και ο σχεδιασμός της μελέτης μας, δεν μας επιτρέπουν να αποδειχθεί η αιτιώδης συνάφεια μεταξύ των μειωμένων επιπέδων CNDP1 και CC.

Οι μηχανισμοί που ελέγχουν τα κυκλοφορούντα επίπεδα CNDP1 δεν είναι γνωστή και δεν μπορούμε να αποκλείσουμε ότι ο ιστός /κυτταρική πηγή CNDP1 μπορεί να διαφέρουν μεταξύ υγιών ατόμων και ασθενών με καρκίνο. Επιπλέον, αν η μείωση CNDP1 συμβαίνει σε άλλες μορφές απώλειας βάρους δεν είναι γνωστή. Όπως έχουμε δημιουργούνται στο παρελθόν παγκόσμια transcriptomic δεδομένα από WAT της κλάσης 1 [44], θα εξεταστεί κατά πόσον

CNDP1

γονιδιακή έκφραση επηρεάστηκε από CC. Το γεγονός ότι δεν παρατηρήθηκαν διαφορές (τα δεδομένα δεν φαίνονται) δείχνουν ότι οι μεταβολές στα κυκλοφορούντα CNDP1 παρατηρήθηκε στην παρούσα μελέτη δεν μπορεί να εξηγηθεί από αλλαγμένη

CNDP1

έκφραση σε WAT. Μια πιο εκτεταμένη χαρτογράφηση της έκφρασης CNDP1 σε άλλες συνθήκες είναι απαραίτητη προκειμένου να διευκρινίσει πως, και στην οποία ο ιστός, το σωματικό απώλεια βάρους πρωτίστως επιπτώσεις στη γονιδιακή έκφραση και έκκριση της πρωτεΐνης. Μια προειδοποίηση αναφέρθηκε παραπάνω, η οποία αποκλείει μηχανιστικές μελέτες CNDP1 σε ζωικά μοντέλα, είναι ότι το ορθόλογο ποντικού δεν εκκρίνεται στην κυκλοφορία. Πράγματι, μολονότι η SIA αναπτύχθηκαν στην παρούσα εργασία θα πρέπει θεωρητικά να αναγνωρίζει το ποντίκι CNDP1 (με βάση την ομολογία αλληλουχίας) δεν ήμασταν σε θέση να παρατηρήσουμε τυχόν ανιχνεύσιμα επίπεδα στον ορό /πλάσμα των πολλών διαφορετικών στελεχών ποντικού (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

CNDP1 υποβάλλεται σε μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις, συμπεριλαμβανομένων ομοδιμερισμό και γλυκοζυλίωσης. Είναι προς το παρόν ασαφές πώς το καθεστώς γλυκοζυλίωση επηρεάζει τη δραστηριότητα και λειτουργικός ρόλος CNDP1. Αν και μπορεί να επηρεάσει συγγένεια αντίσωμα, το γεγονός ότι τα επίπεδα CNDP1 συσχετίζονται ισχυρά μεταξύ δοκιμασίες χρησιμοποιώντας τέσσερα διαφορετικά αντισώματα, δείχνει ότι οι διαφορές στην κατάσταση της γλυκοζυλίωσης δεν είναι πιθανό να εξηγήσουν τη διαφορά επίπεδα που παρατηρήθηκαν στις CC και WS ομάδες.

Συμπερασματικά, των χαρακτηριστικών των ~ 700 κυκλοφορούσες πρωτεΐνες στον καρκίνο του γαστρεντερικού δείχνει ότι τα επίπεδα CNDP1 μειωθεί σε καχεξία και ότι οι χαμηλές συγκεντρώσεις ορού συσχετίζονται με διάφορες παραμέτρους CC σχετίζονται με την κακή έκβαση. Το γεγονός ότι μόνο ένα περιορισμένο σύνολο των πρωτεϊνών του πλάσματος αλλοιώνονται με CC υποδηλώνει ότι λίγοι κυκλοφορούντων παραγόντων είναι πιθανοί δείκτες CC, τουλάχιστον στα αρχικά στάδια της νόσου. Είτε CNDP1 έχει προγνωστική αξία δεν μπορεί να καθοριστεί στην παρούσα πιλοτική μελέτη και πρέπει να επικυρωθεί σε πολύ μεγαλύτερες ομάδες. Επιπλέον, ο κύριος ιστός /κυτταρική πηγή, οι μηχανισμοί που ελέγχουν κυκλοφορούντα επίπεδα της, καθώς και το λειτουργικό ρόλο της CNDP1 παραμένουν ασαφείς και θα είναι το επίκεντρο των μελλοντικών μελετών.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. . Τα επίπεδα APOa4 σε δοκιμασία επικύρωσης

Εντοπίστηκε επίπεδα πρωτεΐνης εμφανίζεται για APOa4 χρησιμοποιώντας ανοσολογική δοκιμή τύπου σάντουιτς και εκφράζονται ως μέση ένταση φθορισμού (ΠΔΠ)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0123566.s001

(EPS)

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες για την Kerstin Wahlen, Εύα Sjölin, Gaby Åström, Yvonne Widlund, Katarina Hertel και Britt-Marie Leijonhufvud για ειδικευμένους τεχνικούς και κλινικές βοήθειά τους.