Αφηρημένο

Εισαγωγή

Τα κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα (ΚΜΑ) θα μπορούσε να αποτελέσει μια μη επεμβατική πηγή του καρκίνου κύτταρα που χρησιμοποιούνται για την κατά μήκος παρακολούθηση της κατάστασης καρκινικών μετάλλαξη καθ ‘όλη τη διάρκεια της νόσου. Οι στόχοι της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνήσει την ανίχνευση

KRAS

μεταλλάξεις σε ΚΜΑ από ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου (mCRC) και να συγκρίνουν την κατάσταση μετάλλαξης τους κατά τη διάρκεια της θεραπείας ή εξέλιξης της νόσου με εκείνη των αντίστοιχων πρωτογενών όγκων.

Υλικά και Μέθοδοι

Στοιχεία από τα πιο κοινά

KRAS

μεταλλάξεις στα κωδικόνια 12 και 13 διεξήχθη από νουκλεϊνικών οξέων πεπτιδίων (ΡΝΑ) -με βάση τη μέθοδο επτά qPCR. Η ευαισθησία της δοκιμασίας καθορίστηκε μετά την απομόνωση του

KRAS

μεταλλαγμένα καρκινικά κύτταρα εμπλουτίστηκαν στο αίμα υγιών δοτών », χρησιμοποιώντας το κιτ κυττάρων CellSearch Επιθηλιακός. Συνεπής ανίχνευσης

KRAS

μεταλλάξεις επιτεύχθηκε σε δείγματα που περιέχουν τουλάχιστον 10 κύτταρα του όγκου /7,5 ml αίματος.

Αποτελέσματα

Η κλινική χρησιμότητα της δοκιμασίας εκτιμήθηκε σε 48 δείγματα αίματος από 31 ασθενείς με mCRC. Όλοι οι ασθενείς είχαν

PIK3C

Α και

BRAF

άγριου τύπου πρωτοπαθείς όγκους και 14

KRAS

μεταλλαγμένων όγκων. CTCs ανιχνεύθηκαν σε 65% των δειγμάτων που λαμβάνονται από το 74% των ασθενών.

KRAS

ανάλυση μετάλλαξης στην CTC-εμπλουτισμένα δείγματα έδειξε ότι το 45% και το 16,7% των ασθενών με μετάλλαξη και άγρια ​​πρωτογενείς όγκους τύπου, αντίστοιχα, είχαν ανιχνεύσιμα μεταλλάξεις σε CTCs τους. Αξιολογώντας

KRAS

μεταλλάξεις σε σειρά δείγματα αίματος αποκάλυψε ότι η ΚΜΑ κάθε ασθενούς παρουσίασαν διαφορετικά κατάστασης μεταλλάξεων του

KRAS

τη διάρκεια της θεραπείας.

Συμπεράσματα

Η τρέχουσα υποστήριξη ευρήματα το σκεπτικό για τη χρήση της ΚΜΑ ως δυναμική πηγή των καρκινικών κυττάρων η οποία, από την επαναξιολόγηση τους

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης, θα μπορούσε να προβλέψει, ίσως ακριβέστερα, την ανταπόκριση των ασθενών mCRC σε στοχευμένη θεραπεία.

Παράθεση: Kalikaki Α, Πολιτάκη Η, Souglakos J, Αποστολάκη S, Παπαδημητράκη E, Γεωργούλια Ν, et al. (2014)

KRAS

γονοτυπικές μεταβολές των κυκλοφορούντων κυττάρων όγκου κατά τη θεραπεία ασθενών με μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 9 (8): e104902. doi: 10.1371 /journal.pone.0104902

Επιμέλεια: Γεωργία Σωτηροπούλου, Πανεπιστήμιο Πατρών, Ελλάδα |

Ελήφθη: 29 Απριλίου, 2014? Αποδεκτές: 16 Ιουλίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 19, Αύγ του 2014

Copyright: © 2014 Kalikaki et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από ερευνητικές επιχορηγήσεις από το Σύλλογο Κρητών Ιατροβιολογικών Ερευνών (CABR), της Ελληνικής Εταιρείας Ιατρικής Ογκολογίας (HeSMO) και η Επιχειρησιακό πρόγραμμα «Ανταγωνιστικότητα Ct

mut ανιχνευτή (+ PNA) και Ct

κ.β. καθετήρα (-ρΝΑ) συμβολίζεται το Ct (κατώφλι κύκλου Ct, έχει ονομαστεί ως ο αριθμός κύκλου στην οποία ένα σήμα ανιχνεύεται πάνω από το φθορισμό υποβάθρου) τιμές για το μεταλλαγμένο και κβ ανιχνευτές των αντιδράσεων με και χωρίς ΡΝΑ, αντίστοιχα. Η Ct

καθετήρα mut (+ PNA) αντανακλά το ποσό των

KRAS

μεταλλαγμένο DNA στο δείγμα ενώ η Ct

καθετήρα κ.β. (-ρΝΑ) αντικατοπτρίζει το ποσό των ενισχυόμενο πρότυπο που προέρχεται από τις ποικίλες αριθμούς μολυσματικών λευκοκυττάρων στο CTC κλάσμα [28].

δοκιμασία κύρος

ισχύς του αποτελέσματος της δοκιμασίας για κάθε δείγμα προσδιορίστηκε από την τιμή Ct

καθετήρα κ.β. (-ρΝΑ) που θα πρέπει να 24≤Ct

καθετήρα κ.β. (-ρΝΑ) δεν μπορούμε να αποκλείσουμε ότι αυτό μπορεί να οφείλεται στην παρουσία του

KRAS

μεταλλάξεις στο CTC θραύσματα τα οποία δεν θεωρούνται ως πραγματικά ΚΜΑ κατά την τεκμηρίωση και την απαρίθμηση των CTCs από το CellSearch σύστημα ή /και κυττάρων χωρίς DNA (cfDNA) προσροφηθεί στην επιφάνεια των μολυσματικών λευκοκυττάρων [29]. Πρέπει να σημειωθεί ότι προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι και οι δύο ΚΜΑ και θραύσματα CTC συσχετίζονται με την έκβαση των ασθενών με καρκίνο του προστάτη [30].

Παρά το μικρό μέγεθος του δείγματος και του πληθυσμού ετερογενή ασθενών που αναλύθηκαν, η παρούσα μελέτη παρέχει αποδείξεις ότι η

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης της ΚΜΑ μπορεί να διαφέρει ουσιαστικά από εκείνη του αντίστοιχου πρωτογενούς όγκου. ΚΜΑ χωρίς ανιχνεύσιμη

KRAS

μεταλλάξεις ελήφθησαν από έξι από τους 11 ασθενείς με μεταλλαγμένο πρωτοπαθείς όγκους? Αυτό θα μπορούσε να εξηγηθεί από την ενδο-ογκική ετερογένεια και /ή τον εμπλουτισμό του ανηλίκου προϋπάρχοντες κλώνους με αυξημένη μεταστατικό δυναμικό κατά τη διάρκεια της εξέλιξης της νόσου. Παρ ‘όλα αυτά, σε τρεις από τις έξι ασύμφωνα περιπτώσεις, η εκτομή και εξέταση του πρωτογενούς όγκου για

KRAS

μεταλλάξεις διεξήχθη μόνο ένα μήνα πριν από την ανάλυση των ΚΜΑ (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), υποδεικνύοντας πιθανώς ένα μοντέλο παράλληλης εξέλιξης του πρωτογενούς όγκου και μετάσταση. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η κατάσταση μετάλλαξης του ΚΜΑ δεν αντανακλά πάντοτε εκείνο της αντίστοιχης μετάσταση [31]? Ως εκ τούτου, η σύγκριση της

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης του πρωτοπαθούς όγκου, που αντιστοιχούν μεταστάσεις και το σειριακό CTC-εμπλουτισμένα δείγματα αίματος θα μπορούσε να ρίξει φως στην προέλευση των μεταστάσεων.

Αν και οι συνθήκες και το ποσοστό των μετατροπή γονότυπος δεν είναι καλά κατανοητοί, η παρούσα μελέτη δείχνει ότι μπορεί να προκύψουν ΚΜΑ διαφορετικών κατάστασης μετάλλαξης κατά τη διάρκεια της θεραπείας στον ίδιο ασθενή (ασθενείς # 1 και # 15). Πράγματι, θα μπορούσε να υποτεθεί ότι η αγωγή, με ή χωρίς παράγοντες στόχους, εξαλείφοντας ορισμένα χημειοθεραπεία ευαίσθητη κλώνοι μπορούν να επιτρέπουν την εμφάνιση άλλων κλώνων χαμηλής συχνότητας τα οποία διαφέρουν από τα κυρίαρχα καρκινικών κυττάρων σε σχέση με την κατάσταση μετάλλαξης. Η υπόθεση αυτή ενισχύεται από την παρουσία του

KRAS

μεταλλάξεις σε κέντρα θεραπείας χολέρας των δύο από τους 12 ασθενείς με

KRAS

άγριου τύπου πρωτοπαθείς όγκους οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπεία με θεραπευτικά σχήματα που ενσωματώνουν panitumumab ή bevacizumab (ασθενείς # 15 και # 16). Παρ ‘όλα αυτά, η αποτυχία ανίχνευσης μεταλλάξεων στα CTC-εμπλουτισμένα δείγματα θα μπορούσαν επίσης να αποδοθεί στη χαμηλή συχνότητα ΚΜΑ που φέρουν μεταλλάξεις καθώς και μεθοδολογικών περιορισμών? η FDA ενέκρινε CellSearch Τα επιθηλιακά Kit κυττάρων, η οποία φέρεται να είναι κατώτερη από CellSearch Τα επιθηλιακά κιτ κυττάρων Προφίλ όσον αφορά τον μοριακό χαρακτηρισμό ΚΜΑ »[32]. Ωστόσο, έχει αποδειχθεί ότι ΚΜΑ συλλαμβάνονται με τη CellSearch Επιθηλιακών Κυττάρων Kit μπορεί να αναλυθεί επιτυχώς με μεθοδολογίες προσδιορισμού αλληλουχίας επόμενης γενιάς [33]. Επιπλέον, ένας υποπληθυσμός ΚΜΑ δεν μπορούσε να ανιχνευθεί με CellSearch λόγω της ανεπαρκούς έκφρασης EpCAM ή /και κυτοκερατίνες? Ωστόσο, μια πρόσφατη μελέτη σε SCLC έδειξε ότι ΚΜΑ, εκφράζοντας EpCAM, κατέλαβε με CellSearch σύστημα μπορεί να σχηματίζουν όγκους σε ανοσοκατεσταλμένα ποντίκια [34].

Προηγούμενες μελέτες έχουν χρησιμοποιήσει διαφορετικές μεθοδολογίες, προκειμένου να απομονωθούν και μοριακά χαρακτηρίζουν την ΚΜΑ. Σε μεταστατικό καρκίνο του μαστού και του καρκίνου του προστάτη, γονιδιακό προφίλ των CTCs απομονώθηκαν με ανοσομαγνητικό εμπλουτισμό και ενεργοποιείται με φθορισμό κυτταρική διαλογή αποκάλυψε νέα γενωμική αλλαγές που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της εξέλιξης της νόσου [35], [36]. Χρησιμοποιώντας μια microfluidic συσκευή καταγραφής CTC, η

TMPRSS2-ERG

σύντηξης, η TKIs ευαισθητοποίηση

EGFR

ενεργοποίηση μεταλλάξεων και το

EGFR

Τ790Μ ΤΚΙ-αντίσταση μετάλλαξη ανιχνεύθηκαν σε ΚΜΑ από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη και του πνεύμονα μεταστατική νόσο αντίστοιχα, ενώ οι μεταλλάξεις του

AR

,

KRAS

και

έχουν BRAF

γονίδια έχουν εντοπιστεί στην CTC-εμπλουτισμένα δείγματα απομονώθηκαν από προστάτη και ασθενείς mCRC, αντίστοιχα, χρησιμοποιώντας το CellSearch Προφίλ Kit [24], [37], [38], [39]. Γονότυπων του ενιαίου ΚΜΑ απομονωθεί από το CellSearch ή το σύστημα IsoFlux σε ασθενείς με mCRC επιβεβαίωσε την ενδο- και δια- ετερογένειας των ασθενών με βάση το

PIK3CA

και

KRAS

κατάσταση μετάλλαξης [22], [ ,,,0],31]? Επιπλέον, διάφορες γενετικές αλλοιώσεις σε ενιαία κέντρα θεραπείας χολέρας έχουν ήδη αναφερθεί σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού και καρκίνο του οισοφάγου [23], [40].

Προηγούμενες εκθέσεις πρότειναν μια σύνδεση μεταξύ της παρουσίας της ΚΜΑ και την ελεύθερη DNA των κυττάρων (cfDNA ) στον ορό ή το πλάσμα των ασθενών με καρκίνο [41].

KRAS

μεταλλάξεις που ανιχνεύονται στον ορό ασθενών με mCRC έχουν προταθεί για την παρακολούθηση της ανταπόκρισης στη θεραπεία πριν από την κλινική εμφάνιση της εξέλιξης της νόσου, ενώ σε ασθενείς με NSCLC έχει αναφερθεί μια υψηλότερη ευαισθησία για ανίχνευση μετάλλαξης EGFR σε cfDNA ό, τι στην ΚΜΑ [7], [8], [42]. Παρ ‘όλα αυτά, η προέλευση του cfDNA δεν είναι καλά κατανοητή, δεδομένου ότι μπορεί να προέρχεται από αποπτωτικά κύτταρα όγκου, αποπτωτικά λευκοκύτταρα που παράγεται από την κυτταροτοξική θεραπεία, καθώς και από εξωσώματα ή CTCs απελευθερώνεται από κύτταρα όγκου στο αίμα. Αν και η απομόνωση και ανάλυση του cfDNA είναι απλούστερη και περισσότερο αναπαραγώγιμη από την απομόνωση και τον προσδιορισμό του γονότυπου ΚΜΑ, το μοριακό χαρακτηρισμό των CTCs εκτός του ότι είναι χρήσιμες για την αποτυχία της θεραπείας παρακολούθησης ή υποτροπή της νόσου μπορεί επίσης να παρέχει πληροφορίες για την καθοδήγηση βέλτιστη επιλογή ή /και την ανάπτυξη νέων θεραπεία θεραπείες.

Εν κατακλείδι, τα παρουσίασε στοιχεία περιγράφουν μια απλή μεθοδολογία με βάση την καθημερινή χρήση του CellSearch πλατφόρμας για την ταυτοποίηση του

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων του ΚΜΑ από ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου και να παρέχει ένα σκεπτικό για την εξέταση επαναξιολόγηση των

KRAS

κατάστασης μεταλλάξεων σε κέντρα θεραπείας χολέρας προκειμένου να προβλέψει την καλύτερη ανταπόκριση στις αντι-EGFR θεραπείας.