Αφηρημένο

Εισαγωγή

Τα microRNAs (miRNAs) ρυθμίζουν αγγελιαφόρο RNA (mRNAs) και ως εκ τούτου έχουν εμπλακεί σε μια ποικιλία ασθένειες, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου. MiRNAs ρυθμίζουν mRNAs μέσω της σύνδεσης της «ακολουθίας σπόρων (~ 7-8 νουκλεοτίδια) στο mRNA 3 ‘του miRNA 5 UTRs? πολυμορφισμούς σε αυτές τις περιοχές έχουν τη δυνατότητα να αλλάξει miRNA-mRNA ενώσεις στόχου. SNPs σε γονίδια miRNA, καθώς και γονίδια miRNA-στόχου έχουν προταθεί για να επηρεάσουν τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου μέσω μεταβάλλονται τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs.

Μέθοδοι

miRNA-SNPs και miRNA-στόχο γονίδιο-SNPs εντοπίστηκαν μέσω η λογοτεχνία. Χρησιμοποιήσαμε SNPs από Genome-Wide Μελέτη Σύνδεσης (GWAS) στοιχεία που ταιριάζουν με τα άτομα με τα δεδομένα της έκφρασης των miRNAs παράγονται από μια πλατφόρμα Agilent για όγκο του παχέος εντέρου και μη-όγκου σε συνδυασμό ιστούς. Αυτά τα δείγματα χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση 327 miRNA-SNP ζεύγη για τις ενώσεις μεταξύ των SNPs και τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs, καθώς και για τις ενώσεις SNP με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Αποτελέσματα

Είκοσι δύο miRNAs που εκφράζονται σε μη ιστό του όγκου ήταν σημαντικά διαφορετικό από το γονότυπο και 21 SNPs συνδέθηκαν με διαφορικό αλλαγμένη όγκου /μη όγκου έκφρασης των miRNAs σε όλη γονότυπους. Δύο miRNAs συνδέθηκαν με SNP γονότυπο και για μη όγκου και όγκου /μη όγκου διαφορική έκφραση. Από τις 41 miRNAs σημαντική συσχέτιση με SNPs όλα αλλά επτά ήταν σημαντικά διαφορικά εκφραζόμενο σε καρκινικό ιστό του παχέος εντέρου. Δύο από τους 41 SNPs σημαντική συσχέτιση με τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs συσχετίστηκαν με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου: rs8176318 (

BRCA1

), ή

AA 1,31 95% CI 1,01, 1,78, και rs8905 (

PRKAR1A

), ή

GG 2,31 95% CI 1.11, 4.77.

Συμπέρασμα

από τις 327 SNPs εντοπίστηκαν στη βιβλιογραφία ως σημαντικά λόγω της πιθανής ρύθμισης αυτών των επιπέδων έκφρασης των miRNAs , 12,5% είχαν στατιστικά σημαντικά ενώσεις με την έκφραση των miRNAs. Ωστόσο, μόνο δύο από αυτά τα SNPs ήταν σημαντικά σχετίζονται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Mullany LE, Wolff RK, Herrick JS, Buas MF, Slattery ML (2015) SNP κανονισμού του microRNA Έκφρασης και μετέπειτα κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (12): e0143894. doi: 10.1371 /journal.pone.0143894

Επιμέλεια: Geraldo Α Passos, Universidade de Sao Paulo, Βραζιλία Αγρόκτημα

Ελήφθη: 16 Σεπτεμβρίου του 2015? Αποδεκτές: 10 του Νοεμ 2015? Δημοσιεύθηκε: 2η Δεκεμβρίου 2015

Copyright: © 2015 Mullany et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Με βάση την υπέγραψαν έντυπα συγκατάθεσης των συμμετεχόντων στη μελέτη, ότι τα δεδομένα μπορεί να απελευθερωθεί μόνο για σκοπούς που αναφέρονται στο έντυπο συγκατάθεσης. το αίτημα των δεδομένων θα πρέπει να απευθύνονται στην Δρ Slattery που θα επανεξετάσει και θα ολοκληρωθεί ανάλογα με την περίπτωση. Τα δεδομένα GWAS SNP που φορτώθηκε με dbGaP από τον Καρκίνο Fred Hutchinson του Ινστιτούτου Ερευνών για τα δύο θέματα Γιούτα και Μινεσότα (αριθμός χώρου αποθήκευσης δεδομένων δεν είναι ακόμη διαθέσιμα)

Χρηματοδότηση:. Η χρηματοδότηση για τη μελέτη αυτή ελήφθη από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου ( https://www.cancer.gov). Οι αριθμοί επιχορήγησης είναι: CA163683 και CA48998. Η χρηματοδότηση έγινε δεκτός από MLS. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

τα microRNAs (miRNAs) είναι μικρά, μη-κωδικοποίησης ρυθμιστικά μόρια RNA [1-5] που έχουν την ικανότητα να μεταβάλλουν την έκφραση του γονιδίου και κατά συνέπεια βιολογική λειτουργία οδού. Οι miRNAs έχουν συσχετιστεί με πολλές ασθένειες, συμπεριλαμβανομένου του ορθοκολικού καρκίνου και τον κίνδυνο η επιβίωση [6-8]. Η σημασία των miRNAs στην διαδικασία της καρκινογένεσης είναι υπό έντονη μελέτη. Έχει προταθεί ότι SNPs που βρίσκεται στο γονίδιο τόπους miRNA και φαίνεται να σχετίζεται με ορθοκολικό καρκίνο μπορεί να λειτουργεί μέσω της επιρροής τους στα επίπεδα έκφρασης miRNA [9]. Άλλοι έχουν προτείνει ότι SNPs εντός γονιδίων στόχων miRNA (δηλ mRNAs) μπορούν να επηρεάσουν δέσμευσης miRNA αυτών των γονιδίων μέσω της μεταβολής των θέσεων σύνδεσης miRNA εντός του mRNA, προκαλώντας αλλαγμένη έκφραση του mRNA [10]. Τα επίπεδα Ώριμη miRNA έχουν προταθεί για να συσχετίζεται με την παρουσία των mRNA στόχου τους

in vitro

εντός μοντέλο οργανισμούς [11], και ως τέτοια, SNPs εντός γονίδια στόχους θα μπορούσε να μεταβάλει έκφραση miRNA λόγω των διαταραγμένων επιπέδων mRNA. Έτσι, επίσης έχει προταθεί ότι SNPs εντός γονιδίων στόχων miRNA (mRNAs) που συνδέονται με τον κίνδυνο της νόσου θα μπορούσε να λειτουργεί μέσω της επιρροής τους στην miRNAs. Η πλειοψηφία της ρύθμισης miRNA συμβαίνει μέσω της σύνδεσης της περιοχής σπόρου miRNA (~ 7-8 νουκλεοτίδια στο 5 ‘UTR άκρο του miRNA) προς την 3’ UTR του mRNA [12]? ως εκ τούτου, SNPs στο πλαίσιο της 3 ‘UTR των γονιδίων miRNA-στόχος μπορεί να δημιουργήσει ή να καταστρέψει θέσεις δέσμευσης miRNA [10], και παρουσιάζουν ιδιαίτερο ενδιαφέρον για την παρούσα έρευνα.

Είμαστε σε μια μοναδική θέση να εκτιμήσει κατά πόσον SNPs σε miRNA γονιδίου τόπους και SNPs σε γονίδια-στόχους των miRNAs επηρεάζουν την έκφραση των miRNAs στον ιστό του παχέος εντέρου, και με τη σειρά του να διερευνήσει κατά πόσον αυτές οι ίδιες οι παραλλαγές επηρεάζουν τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. Για να δοκιμαστεί η υπόθεση ότι SNPs μεταβάλλουν επίπεδα έκφρασης miRNA, χρησιμοποιούμε μη καρκινικό ιστό και να αξιολογήσει τις διαφορές στην έκφραση απέναντι γονότυπο. Ωστόσο, δεδομένου ότι ένα SNP θα μπορούσε να μεταβάλει τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs εξίσου και στα δύο όγκων και μη καρκινικών ιστών, μια τέτοια ένωση δεν θα συμβάλει κατ ‘ανάγκην με τον κίνδυνο καρκίνου. Για να προσδιορίσετε αν τα SNPs σχετίζονται με την καρκινογόνο διαδικασία μέσω της ρύθμισης miRNA, μπορούμε επίσης να αξιολογήσει εάν η έκφραση των miRNAs είναι διαφορετική σε όλη γονότυπους μεταξύ των όγκων και μη καρκινικών ιστών. Επιπλέον, έχουμε αξιολογήσει εάν miRNAs που σχετίζονται με SNPs εκφράζονται διαφορικά σε όγκους του παχέος εντέρου. Τέλος, θα αξιολογηθεί η συσχέτιση μεταξύ των SNPs που σχετίζονται με την έκφραση των miRNAs και τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου.

Μέθοδοι

πληθυσμός Μελέτη

Η πληθυσμιακή μελέτη αποτελούνταν από άτομα που στο παρελθόν συμμετείχαν σε μια μελέτη της διατροφής, τρόπου ζωής, και ο καρκίνος του παχέος εντέρου στο Πανεπιστήμιο της Γιούτα και του Kaiser Permanente Medical Πρόγραμμα Έρευνας (KPMRP) [13], για τους οποίους τα δεδομένα GWAS καθώς και miRNA και από τις δύο όγκων και μη καρκινικών ιστών ήταν διαθέσιμη, και στις αδελφοποιημένες πόλεις μητροπολιτική περιοχή στη Μινεσότα για τα δεδομένα GWAS μόνο (Πίνακας 1). Τα άτομα της μελέτης περιλαμβάνονται περιπτώσεις περιστατικό καρκίνου του παχέος εντέρου μεταξύ των ηλικιών 30 και 79, που ήταν μη-ισπανόφωνοι λευκό, Ισπανόφωνος, ή Αφρικανικός Αμερικανός, και ήταν σε θέση να παράσχει ένα υπογεγραμμένο ενημερωμένη συγκατάθεση πριν από τη συμμετοχή στη μελέτη. Η μελέτη εγκρίθηκε από το Πανεπιστήμιο της Γιούτα Διοικητικού κριτική Θεσμική για ανθρώπινα υποκείμενα.

Η

επεξεργασία miRNA

RNA (miRNA) εξήχθη από φορμόλη σταθερά ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστούς. Εκτιμήσαμε διαφάνειες και τμήματα του όγκου που παρασκευάστηκαν κατά τη διάρκεια της μελέτης πριν από την ώρα της απομόνωσης miRNA να προσδιορισθεί η καταλληλότητά τους. Ο παθολόγος μελέτη επανεξετάζεται διαφάνειες να οριοθετηθούν όγκων και μη καρκινικών ιστών. Τα κύτταρα αποκόπηκαν από 1-4 διαδοχικές ενότητες σχετικά με ανιλίνη μπλε χρωματισμένο διαφάνειες χρησιμοποιώντας ένα H & amp? Ε διαφάνεια για αναφορά. Ολικό RNA που περιέχει miRNA εκχυλίζεται, απομονωμένες, και καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ απομόνωσης RecoverAll Σύνολο Nucleic Acid (Ambion)? RNA αποδόσεις προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο NanoDrop. 100 ng ολικού RNA σημάνθηκε με Cy3 και υβριδοποιήθηκε σε Agilent Ανθρωπίνων miRNA μικροσυστοιχιών V19.0 και σαρώθηκαν σε ένα Agilent SureScan μικροσυστοιχιών μοντέλο σαρωτή G2600D. Η μικροσυστοιχιών Agilent Ανθρώπου δημιουργήθηκε με τη χρήση γνωστών πληροφοριών αλληλουχίας miRNA συγκεντρώνονται στο v19.0 βάση δεδομένων Sanger miRBase. Η μικροσυστοιχία περιέχει ανιχνευτές για 2.006 μοναδικό ανθρώπινο miRNAs, με έναν έως τέσσερις μοναδικές ανιχνευτές για κάθε μία από τις γνωστές miRNAs. Η συστοιχία miRNA περιέχει 60.000 μοναδικές ανθρώπινες ακολουθίες και τους μέσους όρους 30 επαναλήψεις ανά ακολουθία ανιχνευτή. Τα δεδομένα προήλθαν από τη σαρωμένη εικόνα χρησιμοποιώντας Agilent v.11.5.1.1 Χαρακτηριστικό λογισμικού Απόσπασμα. Τα δεδομένα που απαιτούνται για να περάσει αυστηρές παραμέτρους QC ιδρύθηκε από Agilent, που περιλάμβαναν δοκιμασίες για υπερβολική φθορισμό υποβάθρου, η υπερβολική διακύμανση μεταξύ αλληλουχία του ανιχνευτή αναπαράγει στη συστοιχία, και τα μέτρα του συνολικού σήματος γονιδίου στη συστοιχία να αξιολογήσει χαμηλό σήμα. Αν τα δείγματα δεν πληρούν τα πρότυπα ποιότητας για οποιαδήποτε από αυτές τις παραμέτρους, το δείγμα επανα-επισημασμένο, υβριδοποιήθηκε με συστοιχίες, και σαρώνεται. Εάν ένα δείγμα απέτυχε εκτίμηση QC για δεύτερη φορά το δείγμα θεωρείται ότι είναι κακής ποιότητας και το άτομο αποκλείστηκε από κατάντη ανάλυση. Για να ελαχιστοποιηθούν οι διαφορές που θα μπορούσαν να αποδοθούν στη συστοιχία, ποσότητα του RNA, τη θέση σε συστοιχία, ή άλλους παράγοντες που θα μπορούσαν να επηρεάσουν λανθασμένα έκφρασης, συνολικό σήμα γονίδιο κανονικοποιείται πολλαπλασιάζοντας κάθε δείγμα από ένα συντελεστή κλίμακας στρωματοποιημένη κατά θέση του όγκου. Μέσα σε κάθε σημείο του όγκου, ο παράγοντας κλίμακας [14] (https://genespring-support.com/files/gs_12_6/GeneSpring-manual.pdf) είναι η διάμεση τιμή της 75

ου εκατοστημόριο όλων των δειγμάτων διαιρούνται με το μεμονωμένα 75

ο εκατοστημόριο του κάθε δείγματος.

Αναφερόμαστε σε miRNAs χρήση τυποποιημένων ονοματολογία που χρησιμοποιείται στη βάση δεδομένων miRBase [15]. Σε αυτό το συμβολισμό, τα τρία πρώτα γράμματα σημαίνει τον οργανισμό, και αυτά ακολουθούνται από ένα μοναδικό αριθμό. Ο αριθμός ακολουθείται από μια παύλα και τον αριθμό (δηλαδή, -1), εάν περισσότερες από μία κωδικούς τόποι για την miRNA. Μια γράμματα κατάληξη δηλώνει συνδέονται στενά miRNAs. Εάν δύο miRNAs κωδικοποιούνται από τον ίδιο πρόδρομο προϊόν τότε το δευτερεύον προϊόν έχει εκχωρηθεί το επίθημα (*). Αν η κατάσταση κυρίαρχο /δευτερεύον προϊόν δεν είναι γνωστή τότε η -5p κατάληξη και -3p χρησιμοποιούνται για να υποδηλώσουν 5 ‘και 3’ βραχίονα αντίστοιχα. Ένα παράδειγμα θα ήταν, ας-7 μπορεί να αναφερθεί στη βιβλιογραφία στο παρελθόν, ωστόσο από τότε ας-7 έχει ακόμη οριοθετηθεί σε διάφορα στενά συνδεδεμένα ώριμες ακολουθίες και γονιδιώματος τόπους, συμπεριλαμβανομένων ας-7α-3ρ, αφήστε-7α-5ρ, και ας-7β-3ρ.

Εμείς προηγουμένως δοκιμαστεί η αξιοπιστία της Agilent μικροσυστοιχιών την πάροδο του χρόνου, επαναλαμβάνοντας οκτώ όγκου και πέντε συμφωνημένα φυσιολογικά δείγματα (για συνολικά 13 δείγματα) που είχαν να σαρωθεί κατά τη διάρκεια της μελέτης , και βρήκαν συντελεστή συσχέτισης επαναληψιμότητα των 0,98 [16]? προηγούμενη σύγκριση της έκφρασης Agilent miRNA για επιλεγμένα miRNAs με αυτό που παράγεται από qPCR προέκυψε συμφωνία στο 100% όσον αφορά τόσο την κατεύθυνση της αλλαγής και διπλώστε την αλλαγή [17].

GWAS

λήφθηκε αίμα για τους συμμετέχοντες που παρέχονται εν επιγνώσει συναίνεση? Αυτές οι συμμετέχοντες περιλαμβάνονται εκείνοι από την προαναφερθείσα μελέτη στο Πανεπιστήμιο της Γιούτα, KPMRP, και στην μητροπολιτική περιοχή Twin Cities στη Μινεσότα [13]. δεδομένα GWAS ελήφθησαν χρησιμοποιώντας Illumina HumanHap 550K, 610K, ως μέρος της μελέτης GECCO και έχει περιγραφεί στο παρελθόν [18]. Καταλογισμός σε HapMap2 24 Τύπου πραγματοποιήθηκε με τη χρήση MACH που είχε καταλογιστεί HapMap Τύπου 22 χρησιμοποιώντας Beagle. Τα δείγματα GWAS που λαμβάνονται από Γιούτα και Μινεσότα που φορτώθηκε στο dbGaP NCBI του (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gap) με Ερευνητικό Κέντρο Καρκίνου του Fred Hutchinson του.

Η επιλογή των miRNA που σχετίζονται με SNPs

Μια αναζήτηση βιβλιογραφίας πραγματοποιήθηκε για να εντοπίσει όλα τα miRNA που σχετίζονται με SNPs που φαίνεται να σχετίζεται με ευαισθησία σε κάθε είδος καρκίνου και πιο συγκεκριμένα σε καρκίνο του παχέος εντέρου [9,19-51]. Αποκλείσαμε SNPs από την εξέταση που απέτυχε Illumina μέτρα για την ποιότητα ή πρότυπες διαδικασίες ποιοτικού ελέγχου [52]. Συγκεκριμένα, εξαιρέθηκαν SNPs εάν κάποιο από τα παρακάτω κριτήρια ικανοποιούνται: i) βαθμολογία Illumina GenTrain & lt? 0,6 ή το χωρισμό του συμπλέγματος & lt? 0.4? ii) ασύμφωνα γονότυπο καλεί σε κάθε ζεύγος των δειγμάτων εις διπλούν μελέτης? iii) Μέντελ λάθους σε κάθε μία από τις τρίο HapMap QC ή ένα μικρό αριθμό οικογενειών που προσδιορίζονται στα δεδομένα BEACON? iv) σημαντική απόκλιση από την ισορροπία Hardy-Weinberg Ισορροπίας (P & lt? 10

4)

Στατιστική Ανάλυση

Η ροή των δεδομένων της μελέτης φαίνεται στο σχήμα 1 και απεικονίζει την αλληλουχία που οδηγεί στον τελικό. ανάλυση των miRNAs και των σχετικών SNP τους. Το δείγμα αποτελούνταν από 344 άτομα που είχαν τόσο δεδομένα miRNA και τα δεδομένα GWAS και 1.115 περιπτώσεις και 1.173 ελέγχους με τα δεδομένα SNP για την αξιολόγηση του κινδύνου του παχέος εντέρου. Ξεκινήσαμε με ένα συνολικό 559 ζεύγη miRNA-SNP. Αυτά τα ζεύγη επεκτάθηκαν ώστε να περιλαμβάνει συγκεκριμένη ορολογία miRNA (δηλαδή 3ρ, 5ρ, κλπ) για να αποδώσει 835 ζεύγη miRNA-SNP για την αξιολόγηση. Από τον αριθμό αυτό, αποκλείσαμε miRNAs που δεν εκφράζονται σε τουλάχιστον ένα δείγμα του κόλον αφήνοντας 622 ζεύγη. Αποκλείσαμε περαιτέρω τυχόν SNPs για τις οποίες δεν είχαμε πληροφορίες GWAS, αφήνοντας 552 ζεύγη. Εμείς Εξαιρούνται επίσης SNPs που δεν έχουν διαφορές (δηλαδή μερικά με μικρές αλληλόμορφο στο δείγμα μας), αφήνοντας 548 ζεύγη. τελική ανάλυση μας περιλαμβάνονται 327 ζεύγη αφού αποκλείονται περαιτέρω τυχόν miRNAs, και συνδέονται SNP τους, που δεν έχουν την έκφραση σε μη-καρκινικών ιστών του παχέος εντέρου σε τουλάχιστον 5% του πληθυσμού.

Η

Εμείς χρησιμοποιούνται διάφορες εργαλεία βιοπληροφορικής. DbSNP (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/) χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό SNP συντεταγμένες: όλες οι χρωμοσωμικές συντεταγμένες SNP είναι από το συγκρότημα GRCh37 (GRCh37.p13). Παραλλαγή Επίδραση Predictor (VEP) εργαλείο Ensembl είχε χρησιμοποιηθεί μέσω του site Ensembl GRCh37 (https://grch37.ensembl.org/info/docs/tools/vep/index.html) για να αποδώσει την τοποθεσία παραλλαγή και το αποτέλεσμα. VEP χρησιμοποιήθηκε χρησιμοποιώντας όλες τις προεπιλεγμένες ρυθμίσεις. Όλα τα SNPs βρέθηκαν στα VEP. MiRNASNP v2.0, με βάση miRBase χτίσει 19 και την έκδοση dbSNP 137 (https://bioinfo.life.hust.edu.cn/miRNASNP2/index.php) [53] χρησιμοποιήθηκε για να εντοπίζουν προβλέψει χαμένα και κέρδισε τη ρύθμιση miRNAs ως αποτέλεσμα της 3 ‘UTR αλλάζει σε γονίδια mRNA λόγω SNPs που συνδέεται με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. Αυτά τα miRNAs στη συνέχεια αξιολογήθηκαν επίσης με συνδεδεμένες SNPs τους για σημαντικές μεταβολές στην έκφραση miRNA.

Αξιολογήσαμε έκφραση miRNA σε αμφότερες κολονικό διαφορές των ιστών και την έκφραση μη καρκινικών μεταξύ όγκου και μη καρκινικό ιστό για να ληφθεί μια καλύτερη κατανόηση της πώς τα SNPs σχετίζονται με την έκφραση των miRNAs. Κοιτάζοντας μη καρκινικό ιστό μας επέτρεψε να αξιολογηθεί η επίδραση της SNP επί miRNA έκφραση. Ένας SNP που συνδέεται με την έκφραση miRNA απέναντι γονότυπων σε μη καρκινικό ιστό θα μπορούσε να επηρεάσει το επίπεδο έκφρασης της βασικής γραμμής του miRNA αλλά δεν επηρεάζει τον κίνδυνο καρκίνου, αν εξίσου αλλοιωμένη έκφραση miRNA σε όγκους. Έτσι, οι αλλαγές στην έκφραση μεταξύ όγκου και μη καρκινικό ιστό εκτιμήθηκαν λόγω της δυνατότητάς τους σημασίας για την καρκινογόνο διαδικασία.

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε σε τρία στάδια. Κατ ‘αρχάς, αξιολογήσαμε την έκφραση των miRNAs για γραμμική τάση σε όλη γονότυπους προσαρμογή για την ηλικία, το κέντρο μελέτης και το σεξ χρησιμοποιώντας ένα γραμμικό μοντέλο παλινδρόμησης. Ρ-τιμές παρήχθησαν από τη μέθοδο bootstrap [54] με τη δημιουργία μιας κατανομής των 10.000 β συντελεστών των γονοτύπων και αξιολόγησης H

0: β = 0 vs. H

1: β ≠ 0 χρησιμοποιώντας R 3.1.2 (cran.r-project.org). Όλα στατιστική ανάλυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας δεδομένα έκφρασης miRNA που ήταν τόσο κανονικοποιημένη και log2 μεταμορφωθεί. Οι μέσες εκφράσεις αναφέρονται στους Πίνακες 2, 3 και 4, ομαλοποιούνται, αλλά δεν log2 μετασχηματίζονται για να παρουσιάσει τα δεδομένα σε ένα πιο διαισθητικό τρόπο. Όλα μετέπειτα ανάλυση διεξήχθη σε SAS 9.4 4 (SAS Institute, Cary, NC). Αναφέρουμε αργού p-τιμές, δεδομένου ότι κάθε ανάλυση κατά ζεύγος ήταν ειδικά η υπόθεση, καθώς και μια προσαρμοσμένη τιμή p, λαμβάνοντας υπόψη όλα τα 327 συγκρίσεις που γίνονται με τη χρήση του ψευδείς ρυθμό ανακάλυψης (FDR) [55]. Δεύτερον, αξιολογήσαμε miRNAs και SNPs από το παρελθόν εντοπιστεί ζεύγη για να καθορίσει τη σχέση τους με τον καρκίνο του παχέος εντέρου. Στην ανάλυση αυτή, αξιολογήσαμε διαφορικής έκφρασης miRNA μεταξύ όγκου και μη όγκου κολικού ιστού για να καθοριστεί εάν η έκφραση miRNA είχε διαφορικά εκφραζόμενα σε όγκους του παχέος εντέρου. Χρησιμοποιήσαμε ένα αντιστοιχισμένο t-test για αυτή την ανάλυση και υπολογίζεται Ρ-τιμές χρησιμοποιώντας 10.000 bootstrap δείγματα. Τέλος, αξιολογήσαμε τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου σχετίζεται με SNPs που επηρέασε σημαντικά την έκφραση των miRNAs χρησιμοποιώντας λογιστική ανάλυση παλινδρόμησης. Αναφέρουμε Δείκτες Αποδόσεις (OR) και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% (CI) που έχουν προσαρμοστεί ηλικία, το φύλο, και κέντρο μελέτης.

Η

Η

Αποτελέσματα

Πριν να προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις, έξι SNPs εντός γονίδια miRNA και 16 SNPs εντός γονίδια miRNA-στόχος συνδέθηκαν με εκφράζονται διαφορικά miRNAs σε μη-όγκου ιστού του κόλου με γονότυπο (Πίνακας 2). Δώδεκα από τους 16 SNPs του γονιδίου miRNA-στόχος ήταν μέσα στο 3 ‘UTR. Μετά από προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις, καμία από τις προσδιοριζόμενες ενώσεις παρέμειναν στατιστικά σημαντικές.

Έξι SNPs μέσα στα γονίδια miRNA και 15 SNPs στο miRNA-στόχους γονιδίων ταυτοποιήθηκαν ως συνδεόμενα με τα επίπεδα διαφορική miRNA μεταξύ όγκου και μη καρκινικό ιστό (Πίνακας 3)? 12 από τις 15 SNPs εντός γονίδια miRNA-στόχος εμφανίστηκε στην 3 ‘UTR. Όπως φάνηκε με τις ενώσεις μη-όγκου, αυτές οι ενώσεις miRNA-SNP δεν ήταν σημαντική μετά από προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις.

Η περαιτέρω αξιολόγηση των miRNAs που επηρεάστηκαν σημαντικά από SNPs πριν από την προσαρμογή για πολλαπλές συγκρίσεις είτε σε μη ιστού όγκου ή κατά τη σύγκριση των διαφορών μεταξύ του όγκου /μη-όγκου (βλέπε πίνακες 1 και 2 αντίστοιχα) έδειξε ότι όλοι πλην επτά miRNAs ήταν σημαντικά διαφορικά εκφραζόμενο μεταξύ όγκου κόλου και μη καρκινικό ιστό (Πίνακας 4). Από αυτά τα miRNAs συνδέονται με SNPs σε μη καρκινικό ιστό (Πίνακας 2), εννέα miRNA ήταν στατιστικά σημαντικά προς τα κάτω σε ιστό όγκου και έξι είχαν αυξητικά. Αξιολόγηση των miRNAs που σχετίζονται με SNPs στον Πίνακα 3 (εκφράζονται διαφορικά σε όλη γονότυπο μεταξύ τύπων ιστού όγκου /μη-όγκου) έδειξαν ότι οι έξι στατιστικά σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω και έξι ρυθμίστηκαν προς τα κάτω σε όγκο ιστό σε σχέση με μη καρκινικό ιστό. Δύο από τα τρία miRNAs που παρατηρήθηκαν σε δύο πίνακες 1 και 2, HSA-miR-146a-5P και HSA-miR-25-3p, ήταν και οι δύο στατιστικώς απορυθμίζεται σημαντικά σε όγκο ιστό σε σχέση με μη καρκινικό ιστό (Πίνακας 4).

Αξιολόγηση των ενώσεων μεταξύ καρκίνου του παχέος εντέρου και SNPs που σχετίζονταν σημαντικά με τα επίπεδα έκφρασης miRNA έδειξε δύο SNPs που επίσης σχετίζονται σημαντικά με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου (Πίνακας 5). Εντός του 3 ‘UTR του

BRCA1

, η παραλλαγή ομοζυγώτες με γονότυπο του rs8176318 συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου (ή

AA 1,34 95% CI 1,01, 1,78. Το σχετίζεται miRNA, HSA-ΜΙΚ 525-5p, δεν εκφράστηκε σε ένα μεγάλο τμήμα του πληθυσμού με το ομόζυγο γονότυπο-σπάνιο? ως εκ τούτου, οι διαφορές στην έκφραση απέναντι γονότυπους θα μπορούσε να αποδοθεί στη μείωση στο ποσοστό που εκφράζει ένα δεύτερο SNP, rs8905, εντός της 3 ‘UTR. του

PRKAR1A

σχετίστηκε με πάνω από μια διπλή αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου (ή

GG 2,31 95% CI 1,11, 4,77). μια τρίτη SNP, rs276466, συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου με το ετερόζυγο γονότυπο (ή

AG 1,21 95% CI 1,02, 1,44) μόνο και όχι το ομοζυγώτες σπάνιο γονότυπος και, επομένως, μπορεί να είναι μια ψευδή ένωση.

η

Συζήτηση

έχει πρότεινε ότι SNPs που σχετίζονται με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου θα μπορούσαν να λειτουργούν μέσω της επίδρασής τους στη ρύθμιση miRNA [9]. στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε SNPs εντός των περιοχών miRNA γονιδίων και γονιδίων miRNA-στόχος έχει ήδη αναφερθεί στη βιβλιογραφία ως σχετίζονται με τον καρκίνο, για να αξιολογήσει αν αυτά τα SNPs επηρεάζουν την έκφραση των miRNAs και να μεταβάλλουν τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. Από τους 327 SNP miRNA ζεύγη /αξιολογούνται, 22 SNPs σχετίστηκαν με σημαντική (Ρ & lt? 0,05) διαφορές στην έκφραση miRNA σε μη καρκινικό ιστό με γονότυπο, και 21 SNPs σχετίστηκαν με σημαντική διαφορά miRNA έκφραση μεταξύ όγκου και μη καρκινικό ιστό με γονότυπο. Η αξιολόγηση αυτών των SNPs με καρκίνο του παχέος εντέρου έδειξε μόνο δύο SNPs συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. Αυτό υποδηλώνει ότι η πλειοψηφία των ενώσεων υπέθεσαν δεν υποστηρίζονται όταν αξιολογούνται απευθείας με δεδομένα miRNA

Δύο SNPs σε γονίδια miRNA-στόχους εντοπίστηκαν ως σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου.? αυτά τα SNPs επίσης συνδέθηκαν με στατιστικά σημαντική μέση διαφορική έκφραση των miRNAs σε όλη γονότυπους. Από αυτά, rs8176318, που βρίσκεται στο 3 ‘UTR

BRCA1

και προβλέπεται να είναι θέση δέσμευσης για HSA-miR-525-5p όταν το αλληλόμορφο G (ή C σε δεδομένα μας) είναι παρόν [21] , συνδέθηκε με μία γραμμική μείωση στην έκφραση HSA-miR-525-5p σε μη καρκινικό ιστό κατά τη σύγκριση ομοζυγώτη συχνές (CC) για να ομοζυγώτη σπάνιες γονότυπους (ΑΑ). MiRNA HSA-miR-525-5p επίσης ήταν προς τα κάτω ρυθμισμένη σε όγκο σε σύγκριση με μη καρκινικό ιστό (p = 0,0044) και rs8176318 συσχετίστηκε σημαντικά με αύξηση του κινδύνου καρκίνου του παχέος εντέρου (ή

ΑΑ 1,34 95% CI 1.01, 1.78). Αυτή η παραλλαγή έχει αναφερθεί ως συνδεόμενα με μειωμένο

BRCA1

έκφραση, αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του μαστού, και μεγαλύτερη πιθανότητα να έχουν καρκίνο του μαστού σταδίου IV [56]. επίπεδα έκφρασης αυτού του miRNA είναι κάπως χαμηλή, και μπορεί ως εκ τούτου λιγότερο ακριβείς, ωστόσο, από κοινού τα ευρήματα αυτά θα μπορούσαν να στηρίξουν τον ισχυρισμό ότι οι rs8176318 SNP συμβάλλει στην εμφάνιση και την εξέλιξη ορισμένων μορφών καρκίνου του μαστού και του παχέος εντέρου, μέσω μεταβληθεί ρύθμιση miRNA εντός αυτών των ιστών.

Εντοπίσαμε επίσης μια άλλη SNP, rs8905, στο 3 ‘UTR του

PRKAR1A

, ότι ήταν σημαντικά σχετίζεται με μειωμένη έκφραση σε όγκους σε σχέση με μη καρκινικό ιστό του miRNA ότι οι στόχοι em

PRKAR1A

, HSA-miR-214-3p, σε άτομα του κοινού (ΤΤ) γονότυπο ομοζυγώτη σε σύγκριση με το ετεροζυγώτη και ομοζυγώτη σπάνιες (TG, ΓΚ αντίστοιχα) γονότυπους. Επιπλέον, ένα πολύ υψηλότερο ποσοστό μη καρκινικό ιστό δεν εξέφρασαν HSA-miR-214-3p στο γονότυπο ετεροζυγώτη σε σύγκριση με το ΤΤ (κοινή) γονότυπο, και ακόμη λιγότερο έκφραση παρατηρήθηκε για την ομοζυγώτη σπάνια γονότυπο. HSA-miR-214-3p ήταν στατιστικά σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω στον όγκο σε σχέση με μη καρκινικούς ιστούς, και οι rs8905 SNP φάνηκε να αυξάνει σημαντικά τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου (ή

GG 2,31 95% CI 1,11, 4,77). Σε αυτήν την περίπτωση, είναι πιθανό ότι η μεταβολή της έκφρασης των miRNAs προκαλείται από το SNP και αυτό συμβάλλει άμεσα με τον κίνδυνο του όγκου του παχέος εντέρου.

Τα στοιχεία μας έκαναν υποστηρίζουν ορισμένοι της βιβλιογραφίας όσον αφορά την SNP και miRNA ενώσεις. Σε μια πρόσφατη μελέτη, δύο SNPs εντός της περιοχής του υποκινητή του HSA-miR-143/145 rs353292 και rs353293, ήταν σημαντικά σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC) σε ένα κυρίως κινεζικού πληθυσμού [9]. Δεδομένου ότι αυτές οι SNPs βρίσκονται στην περιοχή του υποκινητή του miRNAs, Li et al. πρότεινε ότι ο μηχανισμός με τον οποίο αυτά τα SNPs αυξημένο CRC κίνδυνος ήταν μέσω της έκφρασης της HSA-miR143 /145 [9]. Στην έρευνά μας, τόσο rs353292 και rs353293 σχετίστηκαν με διαφορική έκφραση του HSA-miR-145-3p και HSA-miR-143-5p μεταξύ γονότυπων μεταξύ όγκου και μη καρκινικούς ιστούς (Πίνακας 3). Σε αμφότερες τις περιπτώσεις, η έκφραση miRNA ήταν μεγαλύτερη μεταξύ των ατόμων με δύο αντίγραφα του κοινού αλληλομόρφου (δηλ ομόζυγο γονότυπο κοινό) σε μη καρκινικό ιστό. Έχοντας ένα αντίγραφο του αλληλόμορφου παραλλαγής είχε ως αποτέλεσμα μία μείωση στην έκφραση miRNA σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με μη καρκινικό ιστό. Από αυτά τα δύο, HSA-miR-145-3p ήταν σημαντικά διαφορικά εκφραζόμενο μεταξύ όγκου και μη καρκινικό ιστό, ωστόσο καμία από αυτές τις SNPs σημαντικά σχετίζονται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου.

Δικαιάκος et al. [44] ανέφεραν υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης CRC μεταξύ των ατόμων με το γονότυπο CC και με το αλληλόμορφο C του rs2910164, η οποία είναι ο πρόδρομος miRNA περιοχή της HSA-miR-146a, και πρότεινε ότι αυτή η αύξηση του κινδύνου αποδίδεται σε αλλαγές στην έκφραση των miRNAs και μεταβολές στη δομή του [44]. Παρατηρήσαμε ότι miR-146a εκφράζεται διαφορικά σε όλη γονότυπους του rs2910164 για μη καρκινικό ιστό, καθώς και μεταξύ των όγκων και μη καρκινικών ιστών. Επιπλέον, η έκφραση της HSA-miR-146a-5P ήταν στατιστικά σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με μη καρκινικό ιστό, υποδηλώνοντας ότι αυτό το SNP μπορεί να επηρεάσει miRNA έκφραση. Ωστόσο, σε αντίθεση με Δικαιάκος, δεν παρατηρήσαμε ότι αυτό το SNP σχετίζεται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου.

Σε μια ανασκόπηση από τον Ryan et al. [20],

KIAA0423

(ή

FAM179B

) rs1053667 AFF1

rs17703261 και, συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με μη καθορισμένη τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου. Σε αυτή την εργασία,

AFF1

rs17703261 σχετίστηκε αντίστροφα με τον κίνδυνο καρκίνου (OR για την Α /Τ ήταν 0,34 95% CI 0,20, 0,58) και

KIAA0423

rs1053667 σχετιζόταν άμεσα με τον κίνδυνο καρκίνου ( Ή για την C /T ήταν 3,29 95% CI 1,72, 6,32) [20]. Τα miRNAs που στοχεύουν

AFF1 are Κίνα HSA-Mirs-19α, -19β, -585, και -648. Στη μελέτη μας, έχουμε εντοπίσει μια σημαντική μείωση της έκφρασης της HSA-miR-648 στο ομοζυγώτες σπάνιες (ΤΤ) γονότυπο σε μη καρκινικό ιστό. Επιπλέον, βρήκαμε ότι η έκφραση αυτού του miRNA σημαντικά προς τα κάτω σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με μη καρκινικούς ιστούς. Ωστόσο, δεν παρατηρήσαμε σύνδεσης μεταξύ

AFF1

rs17703261 με τον κίνδυνο ανάπτυξης καρκίνου του παχέος εντέρου. Τα miRNAs που αναγνωρίστηκαν ως στόχευση

KIAA0423

στο Ryan et al. ήταν HSA-Mirs-19α και -19β. Ταυτοποιήσαμε σημαντικά χαμηλότερη έκφραση του HSA-miR-19b-3ρ στο γονότυπο ετεροζυγώτη σε σύγκριση με την κοινή ομοζυγώτη γονότυπο σε μη-όγκου του παχέος ιστούς. Βρήκαμε επίσης η έκφραση αυτού του miRNA να ρυθμίζεται προς τα πάνω σε όγκου έναντι μη καρκινικούς ιστούς. Ωστόσο, rs1053667 δεν συσχετίστηκε με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου.

Wu et al. [43] διερευνήθηκαν διάφορα SNPs εντός των 3 ‘UTRs γονιδίων στο μονοπάτι σηματοδότησης B7 /CD28, που εμπλέκονται στην διέγερση των Τ κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των rs7628626 (

CD80

), rs1305 (

VTCN1

), και rs44044254 και rs1559931 (

ICOS

). Στη μελέτη τους, βρήκαν έναν αυξημένο κίνδυνο CRC με την ομοζυγώτες σπάνια γονότυπου rs1305 και μειωμένο κίνδυνο CRC με την συνεπικρατούν και κυρίαρχο μοντέλο για rs4404254 και rs1559931. Είδαμε ελαφρώς μειωμένη, μη σημαντικό κίνδυνο για όλα αυτά τα SNPs με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Έχει προταθεί ότι τα επίπεδα έκφρασης miRNA που συνδέονται με την έκφραση του αντίστοιχου γονιδίων στόχων τους, και ότι η παρουσία των γονιδίων στόχων αποτρέπει την υποβάθμιση miRNA από νουκλεάσες [11]. Για να διερευνήσουν τη σχέση αυτή, χρησιμοποιήσαμε miRNASNP v2.0 για την αξιολόγηση SNPs στο 3 ‘UTRs των mRNAs για τις αλλαγές στην προβλεπόμενη ρύθμιση miRNA. Πολλά από τα SNPs συζητήθηκε προηγουμένως είχε τεκμηριωθεί προβλεπόμενη απώλεια ή κέρδος των miRNA στόχευση με βάση τις μεταβολές του SNP κάνει στην 3 ‘UTR του mRNA στόχου, και έτσι την περιοχή δέσμευσης του miRNA. Ένα παράδειγμα αυτής της αλλαγής είναι το SNP στο

AFF1

, rs17703261 η οποία αναμένεται να προκαλέσει απώλεια της στόχευσης με HSA-miR-648. Αυτό miRNA είναι ελαφρώς προς τα κάτω σε όγκου σε σύγκριση με μη καρκινικούς ιστούς στα δεδομένα μας. Το ομόζυγο γονότυπο σπάνια έχει σημαντικά μικρότερη έκφραση του HSA-miR-648 από τους άλλους γονότυπους. Άλλα παραδείγματα είναι

SLC10A7

rs105760 και

KIAA0423

rs1053667, η οποία προβλέπεται να προκαλέσει απώλεια της στόχευσης με HSA-miR-25-3p και HSA-miR-19b-3ρ, αντιστοίχως. Rs1053667 και rs105760 συσχετίστηκαν με μειωμένη έκφραση σε καρκινικά σε σύγκριση με μη καρκινικούς ιστούς των προβλεπόμενων χάνεται miRNAs με το αλληλόμορφο παραλλαγής. Ένα άλλο παράδειγμα, rs9874 (

SELS)

προβλέπεται να προκαλέσει μια αποκτήθηκε στόχευση από HSA-miR-181-5ρ, και βλέπουμε μια αύξηση της μέσης έκφρασης μεταξύ όγκου και μη καρκινικό ιστό με το αλληλόμορφο παραλλαγής. Επιπλέον,

BRCA1

rs8176318, προβλέπεται να έχει κέρδος της λειτουργίας για HSA-miR-20a-3ρ. Αξιολογήσαμε αυτό το ζευγάρι miRNA /SNP και δεν βλέπετε σύνδεσης μεταξύ της προβλεπόμενης αποκτήσει miRNA και αυτό το SNP. Ωστόσο, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως,

BRCA1

rs8176318 συσχετίστηκε με το αλληλόμορφο συγκεκριμένη G (C σε τραπέζια μας) miRNA HSA-miR-525-5p και κάναμε δούμε μια μείωση στην έκφραση της HSA-miR-525- 5p σε μη καρκινικούς ιστούς με το αλληλόμορφο παραλλαγής καθώς και ένα μειωμένο επίπεδο της μέσης έκφρασης miRNA σε καρκινικό ιστό σε σύγκριση με μη καρκινικό ιστό. Αυτά τα αποτελέσματα θα υποστηρίζουν τη θεωρία ότι η απώλεια της παρουσίας του στόχου (ως αποτέλεσμα της SNP) προκαλεί μία μείωση του επιπέδου της έκφρασης miRNA.

Υπάρχουν διάφορες εκτιμήσεις κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων μας. Κατ ‘αρχάς, η μελέτη μας αποτελείται από περιπτώσεις καρκίνου του παχέος εντέρου, ενώ πολλές μελέτες που περιλαμβάνονται τόσο του παχέος εντέρου και του ορθού περιπτώσεις καρκίνου. Οι διαφορές σε ενώσεις με καρκίνο θα μπορούσαν να διαφέρουν ανάλογα με τις διαφορές στις περιπτώσεις ορισμό. Τα ευρήματά μας διαφωτίσει την πολυπλοκότητα της ρύθμισης miRNA, ιδιαίτερα το ρόλο των SNPs στο καρκινογόνες διαδικασία που περιλαμβάνει miRNA. Τα miRNAs εμπλέκονται στη ρύθμιση πολλαπλών γονιδίων και, παρόλο SNPs συνδέθηκαν με miRNAs, η επιρροή των miRNAs σε άλλα γονίδια μπορεί να καθορίσει τη συσχέτιση με τον καρκίνο. Για παράδειγμα, HSA-miRNA-25-3p, μαζί με την ρύθμιση του

SLC10A7

, συνδέεται με

MCM7

,

MIR106B

,

MIR25

,

MIR93

και

AP4M1

και αρκετές SNPs, rs105756, rs999885 και rs1527423. Αυτό μπορεί να κάνει η ερμηνεία των αποτελεσμάτων είναι δύσκολο. Ενώ υπάρχουν περιορισμοί μελέτη, ένα σημαντικό πλεονέκτημα αυτής της μελέτης είναι η δυνατότητα να αξιολογήσει υποτιθέμενους συσχετισμούς SNP /miRNA και να αξιολογήσει συναφείς SNPs και miRNAs με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Από τα 327 μοναδικά ζεύγη SNP-miRNA αξιολογούνται μόνο 41 συνδέθηκαν με τα επίπεδα έκφρασης των miRNAs. Από αυτά, μόνο δύο SNPs συσχετίστηκαν με τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου. Ενώ έχει διατυπωθεί η υπόθεση ότι SNPs σε miRNA περιοχές μπορούν να επηρεάσουν τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου μέσω της ρύθμισης των miRNAs, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι τέτοιες ενώσεις είναι σχετικά σπάνιες κατά την αξιολόγηση του καρκίνου του παχέος εντέρου.

Ευχαριστίες

Το περιεχόμενο αυτού του χειρογράφου είναι αποκλειστική ευθύνη των συγγραφέων και δεν εκφράζουν κατ ‘ανάγκη την επίσημη άποψη του Εθνικού Ινστιτούτου Καρκίνου. Θα θέλαμε να αναγνωρίσουμε Ulrike Peters για την εποπτεία και τη χρηματοδότηση που σχετίζονται με τα δεδομένα GWAS, Erika Wolff και ο Michael Hoffman για την επεξεργασία miRNA, και Sandie Edwards για τις προσπάθειές της στη συνολική παρακολούθηση της μελέτης και του όγκου συλλογής ιστού