Αφηρημένο

Σκοπός

Για να διερευνηθεί η χρήση λιποσωματικής ιρινοτεκάνη (Irinophore C ™ ) συν ή πλην 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) για τη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου.

Πειραματικός Σχεδιασμός

Η επίδραση της ιρινοτεκάνη (IRI) και /ή 5-FU χρόνοι έκθεσης σε κυτταροτοξικότητα εκτιμήθηκε

in vitro

ενάντια σε κύτταρα καρκινώματος ανθρώπινου κόλου LS174T ΗΤ-29 ή. Η φαρμακοκινητική και η βιοκατανομή του Irinophore C ™ (IRC ™) και 5-FU, χορηγούνται μόνες ή σε συνδυασμό, συγκρίθηκαν

in vivo

. Μία υποδόρια μοντέλο του ΗΤ-29 ανθρώπινου ορθοκολικού καρκίνου σε rag2-M ποντικών χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η αποτελεσματικότητα της IRC ™ μόνο, και σε συνδυασμό με 5-FU.

Αποτελέσματα

Η κυτταροτοξικότητα IRI και 5-FU ήταν εξαρτώνται σε μεγάλο βαθμό από το χρόνο έκθεσης. Synergistic παρατηρήθηκαν αλληλεπιδράσεις μετά από παρατεταμένη έκθεση σε συνδυασμούς IRI /5-FU. Φαρμακοκινητική /μελέτες βιοκατανομής κατέδειξε ότι το ποσοστό αποβολής 5-FU μειώθηκε σημαντικά όταν 5-FU ήταν συν-χορηγείται ενδοφλεβίως με IRC ™, έναντι μόνο του. Σημαντικές μειώσεις στην εξάλειψη 5-FU παρατηρήθηκαν επίσης σε πλάσμα, με συνακόλουθη αύξηση του 5-FU σε ορισμένους ιστούς όταν 5-FU χορηγήθηκε με ενδοπεριτοναϊκή ένεση και IRC ™ δόθηκε ενδοφλεβίως. Η εξάλειψη των IRC ™ δεν ήταν σημαντικά διαφορετική όταν χορηγείται μόνη ή σε συνδυασμό με 5-FU. Θεραπευτικές μελέτες έδειξαν ότι μοναδικός παράγοντας IRC ™ ήταν σημαντικά πιο αποτελεσματικός από το συνδυασμό της IRI /5-FU? Όπως ήταν αναμενόμενο, IRC ™ /5-FU συνδυασμοί δεν ήταν περισσότερο αποτελεσματική από μόνη της IRC ™. Η χορήγηση των συνδυασμών της 5-FU (16 mg /kg) και IRC ™ (60 mg IRI /kg) έδειξε αυξημένη τοξικότητα σε σύγκριση με το IRC ™ μόνη της. Η θεραπεία μόνο με IRC ™ (60 mg IRI /kg) καθυστερεί τον χρόνο που απαιτείται για μια 5-πλάσια αύξηση σε αρχικό όγκο του όγκου σε ημέρα 49, σε σύγκριση με την ημέρα 23 για τους ελέγχους. Όταν IRC ™ (40 mg IRI /kg) χρησιμοποιήθηκε σε συνδυασμό με 5-FU (16 mg /kg), ο χρόνος για να αυξήσει τον όγκο του όγκου 5-φορές ήταν 43 ημέρες, η οποία ήταν συγκρίσιμη με αυτή που επιτυγχάνεται όταν χρησιμοποιείται μόνο του IRC ™ ( 40 mg IRI /kg).

Συμπεράσματα

Ενιαία πράκτορα IRC ™ ήταν καλά ανεκτή και έχει σημαντικές θεραπευτικές δυνατότητες. IRC ™ μπορεί να είναι ένας κατάλληλος αντικαταστάτης για θεραπεία IRI, αλλά η χρήση του με ελεύθερο 5-FU περιπλέκεται από IRC ™ -engendered αλλαγές στην 5-FU φαρμακοκινητικές /βιοκατανομή οι οποίες συνδέονται με αυξημένη τοξικότητα κατά τη χρήση του συνδυασμού.

Παράθεση: Λαγός JI, Neijzen RW, Anantha Μ, Dos Santos Ν, Harasym Ν, Webb MS, et al. (2013) Θεραπεία του Καρκίνου παχέος χρησιμοποιώντας ένα συνδυασμό Λιποσωμικά ιρινοτεκάνη (Irinophore C ™) και 5-φθοροουρακίλη. PLoS ONE 8 (4): e62349. doi: 10.1371 /journal.pone.0062349

Επιμέλεια: Δημήτρης Φατούρος, Αριστοτέλειο Πανεπιστήμιο Θεσσαλονίκης, Ελλάδα |

Ελήφθη: 23 του Μάρτη του 2012? Αποδεκτές: 22 Μαρ 2013? Δημοσιεύθηκε: 23 Απρ 2013

Copyright: © 2013 Hare et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τις καναδικές Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας (Αριθμός χρηματοδότησης Αναφορά 82583) και συμπληρωματικά κονδύλια από τον Terry Fox Research Institute (ID Σχέδιο 2008-010). Η χρηματοδότηση για την έρευνα αυτή παρέχεται επίσης από την Pfizer /Κέντρο για την Ανάπτυξη Ταμείου Καινοτομίας Drug Research και. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σε όλο τον κόσμο [1], [2], [3]? στις Ηνωμένες Πολιτείες, CRC είναι η τρίτη πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο και η τρίτη πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος, με σχεδόν 150.000 νέες περιπτώσεις εκτιμάται ότι θα διαγνωστεί το 2013 [4], [5]. Τα χημειοθεραπευτικά ιρινοτεκάνη φαρμάκου (IRI) χρησιμοποιείται σε πολλά πρώτης γραμμής θεραπευτικές αγωγές CRC. Παρόλο που η ίδια IRI είναι ενεργή, μη ειδική πλάσμα, το ήπαρ, γαστρεντερική (GI) και καρβοξυλεστεράσες όγκου [6], [7], [8] μπορεί να μεταβολίσει IRI για την SN-38, το οποίο είναι 100- έως 1000-φορές πιο ισχυρή όταν δοκιμάζεται χρησιμοποιώντας το

in vitro

δοκιμασίες [9], [10]. Gut καρβοξυλοεστεράσες (CE) παράγουν υψηλές τοπικές συγκεντρώσεις του SN-38 [11], [12]. Αυτή η μετατροπή μπορεί να σχετίζεται με θεραπευτική δράση, ωστόσο, έχει επίσης συνδεθεί με την εντερική βλάβη που είναι υπεύθυνη για μεγάλο μέρος των ανεπιθύμητων GI τοξικότητας του IRI [13], [14], [15]. Ένα δευτερεύον μειονέκτημα στη χρήση της IRI και SN-38 είναι η εξαρτώμενη από το ρΗ υδρολυτική μετατροπή από μία δραστική μορφή λακτόνης, σε όξινο ρΗ, σε μία ανενεργό μορφή καρβοξυλικό, σε φυσιολογικό ρΗ, η οποία περιορίζει τη δόση του δραστικού φαρμάκου που φθάνει στο στόχο [16], [17], [18], [19]. Μερικές από τις ανεπιθύμητες τοξικότητες και CE-διαμεσολαβούμενη μετατροπή του IRI μπορούν να βελτιωθούν μέσω της χρήσης συστημάτων χορήγησης φαρμάκων [20], [21], [22], [23], [24], [25]. Irinophore C ™ (IRC ™) είναι ένα σκεύασμα IRI έγκλειστα σε μονοελασματικά, 1,2-διστεαροϋλο-sn-γλυκερο-3-φωσφατιδυλχολίνη (DSPC) /λιποσώματα χοληστερίνης (100 nm διάμετρο) που περιέχουν ένα όξινο υδατικό εσωτερικό του μη ρυθμισμένου CuSO

4. IRI παγιδεύεται στο όξινο υδατικό εσωτερικό των λιποσωμάτων όταν μια βαθμίδωση ρΗ δημιουργείται με την παρουσία δισθενούς μετάλλου ιονοφόρο Α23187, το οποίο απαιτείται για τη σταθερότητα και τη διατήρηση της βαθμίδωσης του ρΗ [21], [26]. Ο συνδυασμός του βαθμιαίου ρΗ ιονοφόρο που δημιουργείται, σε συνδυασμό με την παρουσία του ενθυλακωμένου Cu

2+, καταλήγει σε εξαιρετικές ιδιότητες κατακράτησης του φαρμάκου για τη διαμόρφωση

in vivo

[26], [27], [28 ].

σε προκλινικές μελέτες, IRC ™ κατέδειξαν ότι η δραστηριότητα της IRI μπορεί να αυξηθεί σημαντικά σε ένα ευρύ φάσμα των μοντέλων όγκου [21], [26], [29], [30], με μια βελτιωμένη προφίλ ασφάλειας σε σχέση με το ελεύθερο φάρμακο [21]. Η αύξηση του θεραπευτικού δείκτη της IRC ™, έναντι IRI, πιστεύεται ότι οφείλεται σε διάφορους παράγοντες: i) διατήρηση της IRI σε δραστική μορφή λακτόνης του για εκτεταμένες χρονικές περιόδους [21], [27], [30]? ii) αύξηση της παράδοσης των IRI σε περιοχές της ανάπτυξης του όγκου [21]? iii) παρατεταμένη συστηματική έκθεση στη δραστική μορφή λακτόνης του SN-38 [21]? και iv) την ύπαρξη ενός αντι-αγγειακή δράση που δεν παρατηρείται μετά την χορήγηση βλωμού του ελεύθερου IRI [29], [31]. Υποθέσαμε ότι η θεραπευτική επίδραση του IRC ™ θα είναι πιο σημαντικό, όταν χρησιμοποιείται ως μέρος ενός συνδυασμού φαρμάκων – για παράδειγμα, στην αγωγή χημειοθεραπείας FOLFIRI (leucovorin, 5-φθοριοουρακίλη (5-FU), και IRI), όπου IRC ™ θα αντικαταστήσει δωρεάν IRI. Αυτή η υπόθεση εξετάστηκε σε ένα προ-κλινικό περιβάλλον εδώ, όπου οι συνδυασμοί IRC ™ /5-FU και IRI /5-FU αξιολογήθηκαν σε ένα μοντέλο ποντικού της CRC. Απ ‘όσο γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη έρευνα διερευνά τη χρήση των λιποσωμικών σκευασμάτων IRI, συμπεριλαμβανομένων IRC ™, σε συνδυασμό με 5-FU για τη θεραπεία της CRC. Τα θεραπευτικά αποτελέσματα, αναπάντεχα, κατέδειξε ότι η αποτελεσματικότητα αυτού του συνδυασμού δεν ήταν καλύτερη από αυτή που επιτυγχάνεται με μονοθεραπεία IRC ™. Επιπλέον, στο μοντέλο που χρησιμοποιείται εδώ, υπήρχε μια απροσδόκητη αύξηση στην τοξικότητα του συνδυασμού φαρμάκων, η οποία απαιτούσε μείωση δόσης του IRC ™ σε ένα επίπεδο που ήταν πολύ λιγότερο δραστικό από μια υψηλότερη δόση του IRC ™, αλλά θα μπορούσε να χορηγηθεί με ασφάλεια όταν χρησιμοποιείται ως μοναδικός παράγοντας.

Υλικά και Μέθοδοι

Υλικά |

DSPC και χοληστερίνη ελήφθησαν από Avanti Polar Lipids (Alabaster, Alabama, ΗΠΑ). [

3Η] Χοληστερυλ hexadecylether (CHE) αγοράστηκε από την PerkinElmer (Waltham, Μασαχουσέτη, ΗΠΑ). [

14C] 5-FU αγοράστηκε από Moravek Biochemicals (Brea, Καλιφόρνια, ΗΠΑ). Α23187 αγοράστηκε από την Sigma-Aldrich (Oakville, Ontario, CA). Φυσιολογικός ορός, 5% δεξτρόζη σε νερό (D5W), ιρινοτεκάνη (Camptosar, Sandoz), και 5-FU (Alfa Aesar) ελήφθησαν από το BC Οργανισμό Καρκίνου (Βανκούβερ, Βρετανική Κολομβία, CA). Το αντιδραστήριο alamarBlue, ορό εμβρύου μόσχου (FBS), L-γλουταμίνη και διττανθρακικό νάτριο αγοράσθηκαν από την Invitrogen (Burlington, Ontario, CA). ελάχιστο βασικό μέσο Eagle (ΜΕΜ) με ισορροπημένο διάλυμα αλάτων Earle (BSS), μέσον McCoy 5Α, BSS του Hank (HBSS), μη απαραίτητα αμινοξέα, πυροσταφυλικό νάτριο, και πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη αγοράσθηκαν από StemCell Technologies (Vancouver, British Columbia, CA). Όλα τα άλλα χημικά ήταν αναλυτικού βαθμού.

Cell Culture

Το ανθρώπινο ορθοκολικό κυτταρικές σειρές LS174T και ΗΤ-29 αποκτήθηκαν από την ATCC (Manassas, Βιρτζίνια, ΗΠΑ). Στοκ κύτταρα γραμμές διατηρήθηκαν εν απουσία πενικιλίνη και στρεπτομυκίνη, και υποβλήθηκαν σε διαλογή για

Mycoplasma

πριν την παρασκευή ενός αποθέματος κυττάρων που καταψύχθηκε για χρήση σε πειράματα. Τα κύτταρα επανα-εναιωρήθηκαν σε κατάψυξη μέσα (10% (νοί /νοί? Ν /ν) διμεθυλοσουλφοξείδιο FBS) και αργά καταψύχονται σε Nalgene περιέκτες C κατάψυξης 1 ° (Ρότσεστερ, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ) που περιέχει 100% ισοπροπανόλη σε -80 ° C για 24 ώρες πριν από την αποθήκευση σε υγρό άζωτο. Τα κατεψυγμένα κύτταρα τήχθηκαν γρήγορα στους 37 ° C, φυγοκεντρείται προς απομάκρυνση κατάψυξη μέσα ενημέρωσης, επιμεταλλωμένα και ανακαλλιεργήθηκαν δύο φορές πριν από τη χρήση σε πειράματα. κύτταρα LS174T καλλιεργήθηκαν σε ΜΕΜ Eagle με BSS του Earle συμπληρωμένου με 2 mM Ε-γλουταμίνη, 1 mM πυροσταφυλικό νάτριο, 0,1 mM μη-απαραίτητα αμινοξέα, 1,5 g /L διττανθρακικό νάτριο, 1% (ν /ν) πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη, και 10% (ν /ν) FBS, στους 37 ° C σε ένα 5% CO

2 περιβάλλον. ΗΤ-29 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε τροποποιημένο μέσο McCoy 5Α συμπληρωμένο με 1,5 mM Ε-γλουταμίνη, 2,2 g /L διττανθρακικό νάτριο, 1% (ν /ν) πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη, και 10% (ν /ν) FBS, στους 37 ° C σε 5% CO

2 περιβάλλοντος.

Δοκιμασίες κυτοτοξικότητας

η βιωσιμότητα των ανθρώπινων κυτταρικών σειρών CRC μετά από έκθεση σε διαφορετικές συγκεντρώσεις IRI και /ή 5-FU προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το alamarBlue δοκιμασία [32], [33]. Κύτταρα (LS174T, 10.000 κύτταρα /φρεάτιο? ΗΤ-29, 5000 κύτταρα /φρεάτιο) σπάρθηκαν σε πλάκες επίπεδου πυθμένα 96 φρεατίων. Μετά είχε συμβεί κυτταρική προσκόλληση, αυξανόμενες συγκεντρώσεις IRI ή 5-FU προστέθηκαν στα κύτταρα για 1-72 ώρες, με απομάκρυνση του φαρμάκου, όπως απαιτείται στην ενδεικνυόμενη χρονικό σημείο. Σε πειράματα για να προσδιοριστεί η χρονική εξάρτηση της από έκθεση των κυττάρων σε συνδυασμούς φαρμάκων, ΗΤ-29 κύτταρα εκτέθηκαν IRI /5-FU σε αναλογία 1:01 γραμμομοριακή για 1-48 ώρες, με απομάκρυνση του φαρμάκου, όπως απαιτείται στο υποδεικνυόμενο σημείο (α) του χρόνου. Για όλα τα πειράματα, η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε στις 72 ώρες μετά την έναρξη της έκθεσης στο φάρμακο. Το αντιδραστήριο alamarBlue προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο σε αραίωση 1:10, και τα κύτταρα επωάστηκαν για επιπλέον 4-8 ώρες προτού μετρήθηκε φθορισμό. Για τα δεδομένα της βιωσιμότητας, το κλάσμα που πλήττονται (FA), ήταν ένα μέτρο της φθορισμού alamarBlue κανονικοποιημένης ως προς το φθορισμό των ελέγχων: α δεν κύτταρα ελέγχουν τον καθορισμό του 100% επηρεάσουν το επίπεδο και ένα φάρμακο-ελεύθερο ελέγχου ορίζει το 0% να επηρεάσει τα επίπεδα. Αλληλεπιδράσεις μεταξύ IRI /5-FU όταν χρησιμοποιείται σε συνδυασμό

in vitro

καθορίστηκαν με βάση ένα ενιαίο τελικό σημείο του προσδιορισμού (δοκιμασίας βιωσιμότητας alamarBlue, παραπάνω), και τα αποτελέσματα αναλύθηκαν μέσω του μέσου-αποτελέσματος Αρχή [34 ], όπως εκτιμάται με λογισμικό CompuSyn (ComboSyn, Inc .; Paramus, New Jersey, ΗΠΑ) [35]. Για κάθε χρόνο έκθεσης, οι καμπύλες δόσης-απόκρισης δημιουργήθηκαν για τους παράγοντες, μόνα τους και σε συνδυασμό, και, στη συνέχεια, οι τιμές του δείκτη συνδυασμού (CI) υπολογίστηκαν σε διάφορα επηρεάσουν τα επίπεδα (που ορίζεται ως κλάσμα επηρεάζονται). Μία τιμή CI 0.8-1.2 αντιπροσωπεύει μια αλληλεπίδραση πρόσθετο, λιγότερο από 0,8 αντιπροσωπεύει μία συνεργιστική αλληλεπίδραση και μεγαλύτερη από 1,2 αντιπροσωπεύει μία ανταγωνιστική αλληλεπίδραση.

Παρασκευή Irinophore C ™

IRC ™ παρασκευάστηκε όπως περιγράφεται από τον Ramsay

et al

. [26]. DSPC: χοληστερόλη λιποσώματα (55:45 mol%) παρασκευάστηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [36], [37], με τη χρήση ιχνοποσότητες του μη-μεταβολίσιμου, μη ανταλλάξιμο λιπίδιο ιχνηθέτη [

3Η] CHE [38]. Το λεπτό λιπιδική μεμβράνη ενυδατώθηκε με 300 mM CuSO

4 διάλυμα στους 65 ° C, τα προκύπτοντα λιπιδικά κυστίδια υποβλήθηκαν σε 5 κύκλους κατάψυξης-απόψυξης και-και τα λιποσώματα εξωθήθηκαν σε διάμετρο ~ 100 nm. Το μη εγκαψουλωμένο CuSO

4 απομακρύνεται μέσω χρωματογραφίας χρησιμοποιώντας μια στήλη Sephadex G-50, ισορροπήθηκε με ρυθμιστικό διάλυμα SHE (300 mM σακχαρόζη, 20 mM HEPES, 15 mM EDTA? ΡΗ = 7,5). Τα λιποσώματα επωάστηκαν με 0.5 μg Α23187 /mg ολικού λιπιδίου για 30 λεπτά στους 60 ° C. IRI προστέθηκε στα λιποσώματα σε μία μοριακή αναλογία φαρμάκου προς λιπίδια του 0.2:1, και το μίγμα επωάστηκε στους 50 ° C για 1 ώρα. Το μη εγκαψουλωμένο φάρμακο αφαιρέθηκε μέσω χρωματογραφίας σε στήλη Sephadex G-50, εξισορροπημένη με PBS (ρΗ = 7.4), και η αποτελεσματικότητα φόρτωσης φαρμάκου προσδιορίστηκε μετά τη μέτρηση της IRI απορρόφηση στα 370 nm. Όταν απαιτείται, IRC ™ συμπυκνώθηκε σε 3.000 ×

g

χρήση φυγοκεντρικών σωλήνων φίλτρου (μοριακό βάρος αποκοπής 100 kDa).

Ζώα και Ηθική Δήλωση

Όλα

στο vivo

πειράματα διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας 129S6 /SvEvTac-

rag2

tm1Fwa

(rag2-Μ) ποντίκια ελήφθησαν από το Κέντρο ζώων πόρων του BC Οργανισμού Καρκίνου στο Ερευνητικό Κέντρο Βανκούβερ (Βανκούβερ, βρετανική Columbia, CA). Οι μελέτες διεξήχθησαν σύμφωνα με το Καναδικό Συμβούλιο για τις κατευθυντήριες γραμμές φροντίδας των ζώων με την εποπτεία από το Πανεπιστήμιο της επιτροπής Animal Care Βρετανική Κολούμπια (πρωτόκολλα A10-0171 και A10-0206). Τα ποντίκια στεγάστηκαν υπό κανονικές συνθήκες με εμπλουτισμό, με πρόσβαση σε τροφή και νερό

κατά βούληση

.

Η φαρμακοκινητική και η βιοκατανομή

Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί αν η ταυτόχρονη χορήγηση του IRC ™ /5-FU, μέσω ενδοφλέβιας (IV) ή ενδοπεριτοναϊκή (ip) ένεση, τροποποίησε τις ιδιότητες PK /BD είτε παράγοντα. Αρσενικά ποντίκια rag2-M (ηλικίας 8-10 εβδομάδων? 4 ποντίκια ανά χρονικό σημείο) έλαβαν ενδοφλεβίως ενέσεις, μέσω της πλευρικής φλέβας της ουράς, των [

3Η] CHE-επισημασμένο IRC ™ (40 mg IRI /kg), [

14C] 5-FU (40 mg /kg), ή συν-χορηγείται [

3Η] CHE-σημασμένο IRC ™ και [

14C] 5-FU (40 mg IRI /kg και 40 mg /kg, αντίστοιχα), σε ένα συνολικό όγκο ένεσης 0.2 mL. Η δόση της 5-FU που επιλέγεται για αυτές τις μελέτες βασίστηκε σε προηγούμενα πειράματα αποδεικνύουν ότι αυτή η δόση ήταν καλά ανεκτή όταν χορηγείται σε μια φορά την εβδομάδα (κάθε 7 ημέρες) δοσολογικό σχήμα, συγκρίσιμη με εκείνη που χρησιμοποιείται για IRC ™ (τα αποτελέσματα δεν φαίνονται). Σε διάφορα χρονικά σημεία μετά την ένεση, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία μέσω CO

2 ασφυξία. Το αίμα συλλέγεται αμέσως με καρδιακή παρακέντηση, και φυγοκεντρήθηκε για να διαχωριστεί το πλάσμα. Συλλέχθηκαν τα όργανα και χωρίζεται σε 2 κομμάτια? ήμισυ του πλάσματος ή οργάνου παρασκευάστηκε για μέτρηση υγρού σπινθηρισμού (LSC) για να προσδιοριστεί το επίπεδο της ραδιενέργειας που συνδέεται (λιπίδιο και 5-FU), ενώ το άλλο μισό υπέστη επεξεργασία για ανάλυση HPLC για να προσδιοριστεί IRI και τα επίπεδα SN-38. Να περιορίσει τη μετατροπή μεταξύ του λακτόνη και καρβοξυλικών μορφών, τα δείγματα πλάσματος και τα όργανα διατηρήθηκαν σε πάγο και μεταφέρθηκαν σε -70 ° C μέσα σε 1 ώρα από τη συλλογή.

Μια ξεχωριστή μελέτη για να καθοριστεί εάν οι ιδιότητες PK /BD του 5-FU, χορηγούμενη QD × 2 μέσω ip ένεση, επηρεάστηκαν από τη συγχορήγηση με IRC ™ σε μια δόση των 60 mg IRI /kg. Αυτή η δοσολογία ήταν συγκρίσιμη με αυτή που χρησιμοποιείται στις μελέτες αποτελεσματικότητας που περιγράφονται παρακάτω. Το πείραμα ολοκληρώθηκε με τη χρήση αρσενικών ποντικών rag2-M (παλιά 7-10 εβδομάδες? 3 ποντίκια ανά χρονικό σημείο). Τα ποντίκια ενέθηκαν ί.ρ. με 16 mg /kg 5-FU τις ημέρες 1 και 2, με ή χωρίς συγχορήγηση IRC ™ (60 mg IRI /kg) μέσω ί.ν. ένεση την ημέρα 1 σε 2 ώρες μετά την ένεση της 5-FU. Όταν χορηγήθηκαν επαναλαμβανόμενες δόσεις της 5-FU, η τελική δόση περιείχε [

14C] 5-FU ως επισήμανση για την ανίχνευση των επιπέδων 5-FU. Σε διάφορα χρονικά σημεία μετά την ένεση, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία μέσω CO

2 ασφυξία. Το αίμα συλλέγεται αμέσως με καρδιακή παρακέντηση, και φυγοκεντρήθηκε για να διαχωριστεί το πλάσμα. Όργανα συλλέχθηκαν και αποθηκεύτηκαν σε πάγο, και μεταφέρθηκε σε -70 ° C μέσα σε 1 ώρα από τη συλλογή. Τα δείγματα παρασκευάστηκαν για LSC για μέτρηση της ραδιενέργειας που συνδέεται

Κατά την προετοιμασία για LSC, προϊόντα ομογενοποίησης ιστών (10% βάρος /όγκος) παρασκευάστηκαν σε αλατούχο διάλυμα χρησιμοποιώντας ένα ομογενοποιητή Polytron (Brinkmann Instruments? Rexdale, Ontario, CA). και 0,5 mL από κάθε ομογενοποίημα μετά υποβλήθηκε σε πέψη σε 0.5 mL Solvable (DuPont Καναδά? Mississauga, Ontario, CA) για 1 ώρα στους 50 ° C. Μετά από ψύξη σε θερμοκρασία δωματίου, τα δείγματα αποχρωματίζεται με την προσθήκη 0,2 ml 30% H

2O

2. Αυτά τα δείγματα στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C για την αποφυγή υπερβολικού αφρισμού. Scintillation κοκτέιλ προστέθηκε σε δείγματα, και μετά από σκούρο εξισορρόπησης της ραδιενέργειας ([

3Η] CHE και [

14C] 5-FU) που συνδέεται με το πλάσμα και τα όργανα ποσοτικοποιήθηκε μέσω LSC.

Κατά την προετοιμασία για την ανάλυση HPLC, το δεύτερο ήμισυ του κάθε οργάνου ομογενοποιήθηκε σε παγωμένο νερό. Φάρμακο και μεταβολίτες εκχυλίζονται από το ομογενοποίημα χρησιμοποιώντας παγωμένο ακετονιτρίλιο /μεθανόλη (1:01 ν /ν) διάλυμα, και φυγοκέντρηση στα 14.000 χ

g

για 15 λεπτά για να καθιζάνουν οι πρωτεΐνες. Το υπερκείμενο συλλέχθηκε, και οι συγκεντρώσεις του IRI (λακτόνη και καρβοξυλικών μορφών) και SN-38 (λακτόνη και καρβοξυλικών μορφών) στα δείγματα υπερκειμένου οργάνων και πλάσματος προσδιορίστηκαν μέσω HPLC. HPLC διαχωρισμός του IRI και SN-38 λακτόνης και καρβοξυλικών μορφών διεξήχθη χρησιμοποιώντας 250 χ 4.6 mm στήλη C18 Symmetryshield και στήλη φύλακα C18 Symmetryshield (Waters? Mississauga, Ontario, CA). Η έκλουση βαθμίδας χρησιμοποιήθηκε με κινητή φάση Α, που αποτελείται από 75 mM οξικό αμμώνιο και 7,5 mM βρωμιούχου τετραβουτυλαμμωνίου, ρυθμίστηκε σε ρΗ 6,4 με παγόμορφο οξικό οξύ (Fisher Scientific? Nepean, Οντάριο, CA), και κινητή φάση Β, που αποτελείται από ακετονιτρίλιο. Κλίση προφίλ ήταν ως ακολούθως: χρόνος = 0 λεπτά: 78% Α: 22% Β, χρόνος = 10 min: 64% Α: 36% Β, χρόνος = 12 min: 78% Α: 22% Β, χρόνος = 20 min: 78% Α: 22% Β ένα δείγμα 0,01 mL εγχύθηκε επί της (θερμοκρασία στήλης 35 ° C) στήλη και εκλούστηκε σε ένα ρυθμό ροής 1 mL /min. Οι μορφές λακτόνης και καρβοξυλικών τόσο IRI και SN-38 ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Waters 2475 πολλαπλού μήκους κύματος ανιχνευτή φθορισμού (Waters? Mississauga, Οντάριο, CA), που με το χρόνο γεγονότα πρόγραμμα λεχ = 370 nm, λem = 425 nm μεταξύ 0 και 12,5 min για το λακτόνης IRI και IRI καρβοξυλικό, και λβχ = 370 nm, λem = 535 nm μεταξύ 12,5 και 20 λεπτά για την SN-38 λακτόνη και SN-38 καρβοξυλικό. Πριν την ένεση, όλα τα δείγματα διατηρήθηκαν στους 4 ° C για να μειωθεί η μετατροπή μεταξύ των μορφών λακτόνης και καρβοξυλικού του IRI ή SN-38. Πρότυπες καμπύλες της λακτόνης IRI και SN-38 λακτόνη παρασκευάστηκαν με σειριακές αραιώσεις σε 2:01: 1 οξικό νάτριο (100 mM): μεθανόλη: ακετονιτρίλιο (ρΗ 4,0) ρυθμιστικό διάλυμα. Για καρβοξυλικού IRI και SN-38 καρβοξυλικό, σειριακές αραιώσεις παρασκευάστηκαν σε 2:01: 1 βορικού νατρίου (100 mM): μεθανόλη: ακετονιτρίλιο (ρΗ 9,0) ρυθμιστικό διάλυμα. Το όριο ποσοτικοποίησης για IRI και SN-38 λακτόνης και καρβοξυλικών μορφών ήταν 10 ng /mL. Πλάσμα και στους ιστούς τιμές AUC υπολογίστηκαν από τις καμπύλες συγκέντρωσης έναντι του χρόνου (μέση τιμή +/- τυπική απόκλιση) χρησιμοποιώντας GraphPad Prism 5.00 λογισμικού (GraphPad Software? La Jolla, California, ΗΠΑ). Η στατιστική σημαντικότητα για τη μελέτη ΡΚ /BD υπολογίστηκε με αμφίδρομη ανάλυση διακύμανσης με Bonferroni post-test χρησιμοποιώντας GraphPad Prism 5.00 του λογισμικού.

Θεραπευτική αποτελεσματικότητα

Το μοντέλο όγκου ΗΤ-29 χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η θεραπευτική αποτελεσματικότητα. ΗΤ-29 κύτταρα (5 χ 10

6 κύτταρα σε 0.05 ml μέσου) ενέθηκαν υποδορίως (s.c.) στις κεντρικές κάτω πλάτες των θηλυκών ποντικών rag2-M (ηλικίας 6-9 εβδομάδων). Οι όγκοι εμφανίστηκαν εντός 2 εβδομάδων μετά τον ενοφθαλμισμό των κυττάρων, και, αυτή τη στιγμή, οι ποντικοί χωρίστηκαν τυχαία σε ομάδες θεραπείας των 6 ποντικών ανά ομάδα, εκτός εάν υποδεικνύεται διαφορετικά. Οι θεραπείες ξεκίνησαν όταν οι όγκοι είχαν φθάσει σε μέσο όγκο -150 mm

3 (0.5-0.7 cm σε διάμετρο), το οποίο συνέβη περίπου την 14η ημέρα μετά τον εμβολιασμό του κυττάρου. Οι αγωγές χορηγήθηκαν σε ποντικούς ως ακολούθως: αλατούχο + D5W, 5-FU (16 mg /kg), IRI (60 mg /kg), IRC ™ (40 ή 60 mg IRI /kg), IRI + 5-FU (60 mg /kg 16 mg /kg), ή IRC ™ + 5-FU (40 ή 60 mg IRI /kg 16 mg /kg). D5W και 5-FU χορηγήθηκε ημερησίως για 5 ημέρες (QD × 5) κάθε εβδομάδα για 3 εβδομάδες μέσω ί.ρ. ένεση; όλες οι άλλες θεραπείες χορηγήθηκαν μία φορά την εβδομάδα για 3 εβδομάδες (q7d × 3) μέσω ί.ν. ένεση στην πλευρική φλέβα της ουράς. Όταν οι ποντικοί έλαβαν δύο διαφορετικούς παράγοντες, είτε IRI και 5-FU ή IRC ™ και 5-FU, την ίδια ημέρα, 5-FU εγχύθηκε σε 2 ώρες πριν από την IRI ή χορήγηση IRC ™. Προκειμένου να αυξηθεί ο συνολικός χρόνος έκθεσης 5-FU, καθημερινή χορήγηση της 5-FU εχρησιμοποιήθη [39], με βάση το σχήμα που περιγράφεται από Saltz

κ.ά.

. [40], [41], και η δόση 16 mg /kg επιλέχθηκε μετά από μια μελέτη κλιμάκωσης της δόσης προσδιορίστηκε ότι ήταν η MTD σε ποντικούς RAG2-M (μη δημοσιευμένα αποτελέσματα). Η υψηλότερη δόση IRC ™ (60 mg IRI /kg) χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη είναι καλά ανεκτή και είναι περίπου το 66% της MTD καθορίζεται από την ομάδα μας για ποντικούς RAG2-M. Διασταυρούμενες διαστάσεις του όγκου μετρήθηκαν 3 φορές την εβδομάδα? όγκος του όγκου υπολογίσθηκε με τη χρήση (ab

2) /2 (Α, μεγαλύτερη διάσταση? b, μικρότερη διάσταση). Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία εάν η απώλεια σωματικού βάρους (BWL) ξεπέρασε το 20%, εάν ο όγκος του όγκου ξεπέρασαν τα 1000 mm

3, εάν παρατηρήθηκε εξέλκωση του όγκου, ή αν παρατηρήθηκαν σημαντικές φθορές στην υγεία του ποντικιού (κλινική βαθμολογία, όπως ορίζεται από το εγκεκριμένο πρότυπο λειτουργίας διαδικασία). Κατά την αξιολόγηση φορές αύξηση όγκου του όγκου, το μέγεθος του όγκου κατά την ημέρα 0 (την ημέρα της έναρξης της θεραπείας) ορίστηκε ως 1.

Αποτελέσματα

5-FU και IRI Παρουσίαση Χρόνος έκθεσης Εξάρτηση σαν απλούς παράγοντες και σε συνδυασμό

επιδράσεις συνδυασμού φαρμάκων εξαρτώνται από έναν αριθμό παραγόντων, συμπεριλαμβανομένης της αναλογίες φαρμάκου-φαρμάκου, τις παραγγελίες και ο χρόνος ακολουθίες της διοίκησης, και χρόνους έκθεσης. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει μία αναλογία φαρμάκου εξάρτησης για το IRI /φλοξουριδίνη συνδυασμούς [42]? μια παρόμοια αναλογία φαρμάκου εξάρτησης αποδείχθηκε επίσης στις τρέχουσες μελέτες με συνδυασμούς IRI /5-FU (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ωστόσο, οι μελέτες που περιγράφονται εδώ θεωρείται επιπλέον το ρόλο των χρόνων έκθεσης φαρμάκου επί επιδράσεις του συνδυασμού φαρμάκων. Αυτό μπορεί να επιτευχθεί, για παράδειγμα, με τη χρήση των εγχύσεων φαρμάκου, βελτιστοποιημένο σχήμα χορήγησης του φαρμάκου, ή μέσω της χρήσης σκευασμάτων αντικαρκινικού φαρμάκου νανοσωματίδιο σχεδιασμένο για βελτιστοποιημένη ρυθμούς απελευθέρωσης του φαρμάκου και βελτιωμένη χρόνους έκθεσης φαρμάκου. Η επίδραση του χρόνου έκθεσης σε κυτταροτοξικότητα /κυτταρόστασης προσδιορίστηκε για συνδυασμούς IRI /5-FU, και αυτά τα δεδομένα συνοψίζονται στο Σχ. 1. Τα θεραπευτικά αποτελέσματα της 5-FU και IRI, όταν χρησιμοποιείται μόνο του, εξαρτώνται από το χρόνο έκθεσης (Σχ. 1Α-D) πολύ. Για το LS174T κυτταρική γραμμή, το IC

50 για IRI (0,3 μΜ? Σχήμα 1Α.) Και 5-FU (3,0 μΜ? Εικ. 1Β) ήταν πάνω από 100 φορές χαμηλότερη όταν ο χρόνος έκθεσης στο φάρμακο ήταν 72 ώρες, σε σχέση σε ένα χρόνο έκθεσης 1 h (44 μΜ και 330 μΜ, αντιστοίχως). Για τους κύτταρα ΗΤ-29, το IC

50 για 5-FU ήταν 9 μΜ για ένα χρόνο έκθεσης στο φάρμακο του 72 h, σε σύγκριση με 4.000 μΜ για έναν χρόνο έκθεσης 1 ώρας (Σχ. 1D). Περαιτέρω, το IC

50 για IRI δεν ήταν μετρήσιμη στα ΗΤ-29 κύτταρα όταν ο χρόνος έκθεσης ήταν 1, 4, ή 8 ώρες (Εικ. 1 C). Θα πρέπει να σημειωθεί (βλέπε Μέθοδοι) ότι σε αυτές τις μελέτες, οι εκτιμήσεις τοξικότητας προσδιορίστηκαν σε 72 ώρες, και έτσι μόνο ο χρόνος έκθεσης φάρμακο μεταβάλλεται εδώ.

Α-Δ) Ενιαία παράγοντας χρόνος έκθεσης εξάρτησης. κύτταρα LS174T (Α και Β) και ΗΤ-29 (C και D) εκτέθηκαν σε IRI (Α και C) ή 5-FU (Β και D) για 1 (•, διακεκομμένη γραμμή), 4 (□, συνεχής γραμμή) , 8 (▾, διακεκομμένη γραμμή) 24 (⋄, συμπαγής γραμμή), 48 (Χ, διακεκομμένη γραμμή), ή 72 ώρες (○, συνεχής γραμμή). Ε) η έκθεση Συνδυασμός χρόνο εξάρτηση. ΗΤ-29 κύτταρα εκτέθηκαν IRI /5-FU (1:01 γραμμομοριακή αναλογία) για 1 h (•), 8 h (▾), ή 48 ώρες (Χ). F) Υπολογισμένη τιμές CI σε FA = 0,9 για ΗΤ-29 κύτταρα που εκτέθηκαν σε IRI /5-FU (1:01 γραμμομοριακή αναλογία) για 1-72 ώρες. Α-Δ) Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει το μέσο όρο +/- τυπική απόκλιση (η = 3-9) από την 2-3 πειράματα, κάθε συμπληρωμένο εις τριπλούν. E, F) Κάθε σημείο ή γραμμή αντιπροσωπεύει μια τιμή δείκτη συνδυασμού υπολογίστηκε από τα δεδομένα που συγκεντρώθηκαν από την κυτταροτοξικότητα 2-4 ξεχωριστά πειράματα, έκαστο συμπληρωμένο εις τριπλούν. CI των 0,8 έως 1,2 προτείνει πρόσθετο αλληλεπιδράσεις? CI & lt? 0,8 προτείνει συνεργιστικές αλληλεπιδράσεις? και CI & gt? 1.2 προτείνει ανταγωνιστικές αλληλεπιδράσεις

Η

Τα κυτταροτοξικά αποτελέσματα των συνδυασμών της IRI /5-FU προσδιορίστηκαν για ΗΤ-29 κύτταρα για διαφορετικούς χρόνους έκθεσης.. Μικροί χρόνοι έκθεσης (1 h) που παράγεται ισχυρό ανταγωνισμό, με CI τιμές μεγαλύτερες από 5 σε τιμές FA μεγαλύτερη από 0,1 (Εικ. 1 Ε). Σε αντίθεση, ο συνεργισμός (CI τιμές μικρότερες από 0,8) παρατηρήθηκε σε μια ευρεία περιοχή τιμών FA όταν ο χρόνος έκθεσης αυξήθηκε σε 48 ώρες. Σε αξία FA 0,9 (δηλαδή, ο προσδιορισμός alamarBlue αναγράφεται μια τιμή που ήταν 90% χαμηλότερο από αυτό που ανιχνεύθηκε για τους ελέγχους χωρίς ναρκωτικά), οι τιμές CI ήταν & gt? 10, 0.8, 0.9, και 0.4 όταν οι χρόνοι έκθεσης ήταν 1, 8, 48, και 72 ώρες, αντίστοιχα (Εικ. 1 F). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ο χρόνος έκθεσης είναι μια σημαντική μεταβλητή για να εξετάσει, όταν προσπαθούν να μετρήσουν αλληλεπιδράσεις φαρμάκου-φαρμάκου σε δοκιμασίες διαλογής με βάση κύτταρα.

PK /BD μελέτες μετά τη χορήγηση της 5-FU και IRC ™ Μόνες τους και σε Συνδυασμό

για

in vivo

μελέτες αξιολόγησης των επιπτώσεων συνδυασμό IRC ™ με 5-FU, είναι σημαντικό να καθοριστεί πρώτα εάν ένα από τα φάρμακα μεταβάλλει τη φαρμακοκινητική ή βιοκατανομή συμπεριφορά του άλλου φαρμάκου, όταν αυτά συγχορηγούνται (Εικ. 2-4). Οι καμπύλες εξάλειψης πλάσματος για 5-FU χορηγείται μόνη της ή σε συνδυασμό με IRC ™ συνοψίζονται στο Σχ. 2Α. Όταν χορηγείται μόνη, 5-FU παρατηρήθηκε ταχεία κάθαρση και τα επίπεδα της 5-FU στο πλάσμα ήταν λιγότερο από 3% της εγχυόμενης δόσης εντός 15 λεπτών από την ένεση. Το πλάσμα AUC

0-24h για 5-FU, συν-χορηγείται με IRC ™, ήταν σχεδόν 10 φορές υψηλότερη από αυτήν που παρατηρήθηκε για 5-FU χορηγείται μόνη της, ένα αποτέλεσμα που είναι πιο εμφανής στα χρονικά σημεία πέραν της 1ης h ( Σχ. 3Α). Τα υψηλότερα επίπεδα πλάσματος 5-FU ήταν επίσης συνδέεται με υψηλότερα επίπεδα της 5-FU στο ήπαρ, σπλήνα, και τους πνεύμονες, αλλά όχι τα νεφρά (Εικ. 3Α). Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η αποβολή του 5-FU ήταν μειωμένη όταν το φάρμακο χορηγήθηκε ταυτόχρονα (ενδοφλεβίως) με IRC ™.

Οι ποντικοί εγχύθηκαν ί.ν. με ραδιο-επισημασμένο 5-FU (40 mg /kg) ή IRC ™ (40 mg IRI /kg), ή και των δύο παραγόντων ταυτόχρονα. Σε διάφορα χρονικά σημεία μετά την ένεση, προσδιορίσθηκαν οι συγκεντρώσεις της 5-FU και IRI (λακτόνη) του πλάσματος. Α) Η μέση συγκέντρωση στο πλάσμα του 5-FU +/- τυπική απόκλιση (n = 4) μετά τη χορήγηση μόνο του (στερεού γκρι γραμμή) ή μετά από συγχορήγηση με IRC ™ (στερεά μαύρη γραμμή). Β) Η μέση συγκέντρωση στο πλάσμα της IRI λακτόνη +/- τυπική απόκλιση (n = 4) μετά τη χορήγηση του IRC ™ μόνο (διακεκομμένη γραμμή γκρι) ή μετά από συγχορήγηση του IRC ™ με 5-FU (στερεά μαύρη γραμμή).

Ποντίκια ενέθηκαν IV με ραδιο-επισημασμένο 5-FU (40 mg /kg? γραμμοσκιασμένες ράβδοι) ή IRC ™ (40 mg IRI /kg? μαύρες μπάρες), ή και των δύο παραγόντων ταυτόχρονα (λευκές ράβδοι). Σε διάφορα χρονικά σημεία μετά την ένεση, οι συγκεντρώσεις των ειδών λιπιδίου και φαρμάκου στο πλάσμα και οργάνων προσδιορίστηκαν, και AUC

0-24h τιμές υπολογίσθηκαν από τις προκύπτουσες καμπύλες συγκέντρωσης-χρόνου. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσες πλάσματος και της περιοχής όργανο κάτω από την καμπύλη (0-24 h) (n = 4) για 5-FU (Α), το σύνολο των λιπιδίων (Β), IRI λακτόνη (C), IRI καρβοξυλικό άλας (D), και SN-38 λακτόνη (Ε).

Η

Ποντίκια με ένεση ip με 5-FU (16 mg /kg) τις ημέρες 1 και 2 (γκρι γραμμή /bar)? 5-FU εμπλουτίστηκε με ραδιο-επισημασμένο 5-FU την ημέρα 2. Τα μισά από τα ποντίκια ενέθηκαν επίσης ενδοφλεβίως με IRC ™ (60 mg IRI /kg) την ημέρα 1 (μαύρη γραμμή /γραμμή), στις 2 ώρες μετά την ένεση της 5-FU. Σε διάφορα χρονικά σημεία μετά την ένεση, οι συγκεντρώσεις της 5-FU στο πλάσμα και στους ιστούς προσδιορίστηκαν, και AUC

0-8h τιμές υπολογίσθηκαν από τις προκύπτουσες καμπύλες συγκέντρωσης-χρόνου. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση συγκέντρωση 5-FU στο ήπαρ (Α), σπλήνα (Β), του πνεύμονα (C), νεφρού (D), πλάσμα (Ε) +/- τυπική απόκλιση (η = 3), ή σημαίνει πλάσμα και περιοχή όργανο κάτω από την καμπύλη (0-8 ώρες) (n = 3) για 5-FU (F).

η

Οι καμπύλες εξάλειψης πλάσματος για την IRI λακτόνη μετά τη χορήγηση του IRC ™ μόνη της, ή σε συνδυασμό με 5-FU, φαίνονται στο Σχ. 2Β. Στα πρώιμα χρονικά σημεία μέχρι 4 ώρες μετά την ένεση, υπήρξε μια μικρή, αλλά σημαντική, μείωση στα επίπεδα στο πλάσμα του IRI λακτόνης για τα ζώα που ενέθηκαν με IRC ™ σε συνδυασμό με 5-FU, έναντι IRC ™ μόνο? στις 8 και 24 ώρες χρονικά σημεία, μια πιο έντονη μείωση στα επίπεδα λακτόνης IRI στο πλάσμα παρατηρήθηκε για τα ποντίκια που συγχορηγήθηκαν IRC ™ /5-FU, σε σύγκριση με μόνο παράγοντα IRC ™. Ωστόσο, κατά την εκτίμηση του πλάσματος AUC

0-24 ώρες δεδομένα υπολογίζεται για (Σχ. 3Β), IRI, με τη μορφή λακτόνη (Σχ. 3C) ή καρβοξυλικού μορφή (Εικ. 3D) και SN-38 στη λακτόνη λιποσωματικό λιπίδιο μορφή (Σχ. 3Ε) οι τιμές ήταν ουσιαστικά ισοδύναμο με το πλάσμα AUC

0-24 ώρες προσδιορίστηκε μετά τη χορήγηση του IRC ™ και μόνο. Αυτό αντανακλάται επίσης στον ιστό AUC

0-24h δεδομένα (Σχ. 3Β-Ε), με την εξαίρεση του σπλήνα, όπου αυξημένα επίπεδα IRI λακτόνης και IRI καρβοξυλικό άλας παρατηρήθηκαν μετά από συγχορήγηση (iv) του IRC ™ /5-FU, σε σχέση με μόνη IRC ™. HPLC ανάλυση του IRI και SN-38 στο ήπαρ δεν μπορεί να πραγματοποιηθεί σε ζώα στα οποία χορηγήθηκε IRC ™ ή IRC ™ /5-FU, λόγω φασματική παρεμβολή από έναν άγνωστο μόριο που συν-εκχυλίζεται με IRI και SN-38 από το ήπαρ ομογενοποιήματος. Αν και η δοκιμασία που χρησιμοποιήθηκε σε αυτές τις μελέτες ήταν ικανό να ανιχνεύσει SN-38 στο καρβοξυλικό άλας μορφή, δεν ανιχνεύθηκε σε οποιοδήποτε πλάσμα ή ιστό δείγματα πάνω από το όριο ανίχνευσης HPLC του 10 ng /mL.

μελέτες αποτελεσματικότητας που περιγράφονται παρακάτω αξιολόγησε τη δραστικότητα της 5-FU (μόνο και σε συνδυασμό) με χρήση δόσης έντονη (καθημερινά) πρόγραμμα, ένα πρόγραμμα που κατέστησε αναγκαία την χορήγηση του φαρμάκου ενδοπεριτοναϊκώς. Η αλλαγή στο ΦΚ /BD προαναφέρθηκε, όταν τα φάρμακα και τα δύο χορηγούμενα ενδοφλεβίως, επίσης αναμένεται να είναι λιγότερο από μια ανησυχία όταν IRC ™ δόθηκε ενδοφλεβίως και 5-FU δόθηκε ε.π. Τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται στο Σχ. 4 αντιμετωπίσει αυτό το σχεδιασμό της μελέτης. Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα στο Σχ. 3, τα δεδομένα δείχνουν, τουλάχιστον στα πρώιμα χρονικά σημεία, ότι οι συγκεντρώσεις της 5-FU στο πλάσμα και οργάνων είναι υψηλότερες όταν IRC ™ χορηγείται σε συνδυασμό με 5-FU. Η επίδραση αυτή ήταν λιγότερο εμφανής απ ‘ότι όταν δοσολογία τόσο ενδοφλεβίως φάρμακα, όπως οι 5-FU συγκεντρώσεις δεν ήταν στατιστικά διαφορετικά στα περισσότερα χρονικά σημεία πέραν των 2 ωρών. Ωστόσο, στα 0.5 ώρες μετά την ένεση, οι συγκεντρώσεις 5-FU ήταν υψηλότερες στο ήπαρ (Ρ & lt? 0,001? Σχ. 4Α), του πνεύμονα (Ρ & lt? 0,05? Εικ. 4C), νεφρό (Ρ & lt? 0,001? Εικ. 4D) , και το πλάσμα (Ρ & lt? 0,05? Εικ. 4Ε) ποντικών που είχαν δοθεί IRC ™ /5-FU, σε σχέση με εκείνα τα ζώα που δόθηκαν 5-FU μόνο. Σε σύγκριση με τα ζώα που ενέθηκαν με 5-FU ως μοναδικός παράγοντας, όταν οι ποντικοί έλαβαν συνδυασμό IRC ™ /5-FU, 2-φορές υψηλότερες συγκεντρώσεις της 5-FU ανιχνεύθηκαν στο ήπαρ σε 0.5 ώρες (Ρ & lt? 0.001) και 1 h (Ρ & lt? 0,01) μετά την ένεση, και μία αντίστοιχη αύξηση στο ήπαρ AUC 0-8h της 5-FU (Σχ. 4F) παρατηρήθηκε επίσης

. Η AUC

0-8h του 5-FU στο πλάσμα (Σχ. 4F) ήταν -1.5 φορές υψηλότερη μετά τη χορήγηση του IRC ™ /5-FU, σε σύγκριση με ζώα που έλαβαν 5-FU μόνο. Όπως απεικονίζεται στο Σχ.