Αφηρημένο

παράγοντα ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων (PAF) έχει συνδεθεί από καιρό με την οξεία οίδημα και φλεγμονώδεις αποκρίσεις. PAF δρα με σύνδεση προς ένα ειδικό G-πρωτεΐνη υποδοχέα (PAF-R,

Ptafr

). Ωστόσο, ο ρόλος της χρόνιας ενεργοποίησης PAF-R επί παρατεταμένης φλεγμονώδεις αποκρίσεις έχει αγνοηθεί σε μεγάλο βαθμό. Δείξαμε πρόσφατα ότι ποντίκια που στερούνται το PAF-R (

Ptafr

– /- ποντίκια) παρουσιάζουν αυξημένη δερματική καρκινογένεση σε απόκριση σε ένα πρωτόκολλο χημική καρκινογένεση σε δύο στάδια.

Ptafr

– /- ποντίκια επίσης παρουσίασαν αυξημένη χρόνια φλεγμονή σε απόκριση προς εφαρμογή εστέρα φορβόλης. Στην παρούσα μελέτη, δείχνουμε ότι η τοπική εφαρμογή του μη-υδρολυόμενου PAF μιμητικό (καρβαμοϋλ-PAF (CPAF)), ασκεί μία ισχυρή, εξαρτώμενη από τη δόση, και βραχύβια απόκριση οιδήματος σε ποντικούς WT, αλλά όχι

Ptafr

– /- ποντίκια ή ποντίκια με έλλειψη C-

Κιτ

(C-

Κιτ

W-sh /W-sh ποντίκια). Χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο φλεγμονής του αυτιού, η συγχορήγηση τοπική θεραπεία CPAF οδήγησε σε μια παράδοξη μείωση τόσο στις οξείες μεταβολές του πάχους του αυτιού που συνδέεται με μία μόνο εφαρμογή ΡΜΑ, όπως επίσης και την παρατεταμένη φλεγμονή που σχετίζεται με χρόνια επαναλαμβανόμενες εφαρμογές PMA. Επιπλέον, ποντικοί που υπέστησαν αγωγή τοπικώς με CPAF παρουσίασαν επίσης σημαντική μείωση στη χημική καρκινογένεση. Η ικανότητα του να καταστέλλει CPAF οξείες και χρόνιες φλεγμονώδεις αλλαγές στην απόκριση προς εφαρμογή (ες) ΡΜΑ ήταν PAF-R που εξαρτάται, όπως CPAF δεν είχε επίδραση επί της βασικής ή προκαλείται από ΡΜΑ φλεγμονή σε

Ptafr

– /- ποντίκια. Επιπλέον, C-

Κιτ

φαίνεται να είναι αναγκαία για τις αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις της CPAF, όπως CPAF είχε μη αισθητή επίδραση στο C-

Κιτ

W-sh /W-sh ποντίκια. Αυτά τα δεδομένα παρέχουν επιπλέον αποδείξεις ότι η ενεργοποίηση PAF-R ασκεί συγκρότημα ανοσοτροποποιητικές επιδράσεις σε ένα μοντέλο χρόνιας φλεγμονής που είναι σχετικές με νεοπλασματική ανάπτυξη

Παράθεση:. Sahu RP, Rezania S, Ocana JA, DaSilva-Arnold SC, Bradish JR, Richey JD, et al. (2014) τοπική εφαρμογή ενός παράγοντα ενεργοποίησης αιμοπεταλίου Receptor Agonist Καταστέλλει διεγειρόμενη από εστέρα φορβόλης οξείας και χρόνιας φλεγμονής και έχει καρκίνο Χημειοαποτρεπτική Δραστηριότητα στην Mouse Skin. PLoS ONE 9 (11): e111608. doi: 10.1371 /journal.pone.0111608

Επιμέλεια: Παύλος Proost, Πανεπιστήμιο του Leuven, Rega Ινστιτούτο, το Βέλγιο

Ελήφθη: 11 Φεβρουαρίου του 2014? Δεκτές: 2, Οκτωβρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 6 Νοεμβρίου, 2014

Copyright: © 2014 Sahu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (www.nih.gov) (R01 HL062996, R21 ES017497, και R21 ES020965), η Διοίκηση Βετεράνων (www.research.va.gov/funding)(VA Merit 510BX000853), και την Πρόληψη Ίδρυμα Καρκίνου (www.preventcancer.org). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παράγοντα ενεργοποίησης αιμοπεταλίων (1-αλκυλο-2-ακετυλο γλυκεροφωσφοχολίνης, PAF) είναι ένα βιοδραστικό μόριο λιπιδίου που παράγεται από τα δύο ενζυματικά και μη-ενζυματική μηχανισμών [1]. Μη ενζυματική παραγωγή του PAF εξαρτάται ελευθέρων ριζών που προκαλείται τροποποίηση της sn-2 πολυακόρεστων λιπαρών οξέων glycerophosphocholines να σχηματίσει εαυτό του PAF και άλλα οξειδωμένα glycerophosphocholines (ox-GPCs) που εμφανίζουν την ικανότητα να ενεργοποιούν τον υποδοχέα PAF [1] – [5]. Η βιολογική δράση του PAF διαμεσολαβείται από πρόσδεση σε ένα μόνο G-πρωτεΐνη υποδοχέα (PAF-R), που εκφράζεται σε μια ευρεία ποικιλία κυττάρων συμπεριλαμβανομένων των κερατινοκυττάρων [1], [6], [7]. Μόλις παραχθούν, PAF προκαλεί μία ποικιλία φυσιολογικών και παθολογικών επιδράσεων που παίζουν ένα ρόλο στην οξεία φλεγμονή, επούλωση πληγών, και την αγγειογένεση. Ωστόσο, PAF είναι ίσως περισσότερο γνωστή για την προ-φλεγμονώδεις επιδράσεις της που μεσολαβούν στη συστημική αντίδραση στο σοκ, αλλεργικές αντιδράσεις και αναφυλαξία [1]. Σε αυτό το ρόλο, οι δράσεις του PAF πιστεύεται ότι διαμεσολαβείται από την ικανότητά της να διεγείρει αγγειοδιαστολή και αγγειακή διαπερατότητα, τη συσσωμάτωση αιμοπεταλίων, βρογχόσπασμος, και μεταβολές στη λειτουργία των λευκοκυττάρων [1]. Αυτές οι επιδράσεις στα λευκοκύτταρα περιλαμβάνουν την ικανότητα του PAF να διεγείρει την ενεργοποίηση των μαστοκυττάρων και μετανάστευση [8] – [10], μονοπύρηνα και ουδετερόφιλα φαγοκυττάρωση [11] – [13]., Και Μ2 πόλωση των μακροφάγων [14]

Ενώ είναι σαφές ότι ο PAF δρα για την προώθηση οξείες φλεγμονώδεις επιδράσεις, ιδιαίτερα εκείνων που σχετίζονται με την αναφυλαξία και σοκ, πιο πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι το PAF μπορεί να παίζει ένα πιο σύνθετο ρόλο στη λειτουργία του ανοσοποιητικού. παραγωγή PAF μέσω ενζυματικής και οξειδωτική μονοπάτια φαίνεται να παίζει ένα ρόλο στις αποκρίσεις κερατινοκυττάρων σε γονοτοξικούς παράγοντες, όπως η υπεριώδης Β, ο καπνός του τσιγάρου ή χημειοθεραπευτικών παραγόντων [3], [15] – [18]. Μελέτες σχετικά με τους μηχανισμούς της υπεριώδους Β (UVB) προκληθείσα συστηματική ανοσοκαταστολή έχουν καταδείξει μια απαίτηση για ενεργοποίηση PAF-R [3], [10], [19], [20]. Αυτό UVB επαγόμενη συστηματική ανοσοκαταστολή χαρακτηρίζεται από ένα αντιγόνο-ειδική καταστολή της προσαρμοστικής Τ-κύτταρο ανοσοαποκρίσεων [21], [22]. Επιπλέον, έχουμε καταδείξει πρόσφατα ότι

Ptafr

– /- ποντίκια επιδεικνύουν μία αύξηση σε δερματική χημική καρκινογένεση που σχετίζεται με αντίστοιχη αύξηση του εστέρα φορβόλης (ΡΜΑ) προκληθείσα δερματική φλεγμονή [7]. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ενεργοποίηση του ΡΑΡ-R μπορεί να είναι επίσης να είναι σημαντική στη ρύθμιση του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος. Ωστόσο, οι κατάντη κυτταρική μεσολαβητές της δραστηριότητας αυτής ανοσοτροποποιητική είναι άγνωστες.

Η C-

Kit

γονίδιο κωδικοποιεί για ένα υποδοχέα κινάσης τυροσίνης που συνδέεται με το συνδέτη, παράγοντα αρχέγονων κυττάρων (SCF), και είναι σημαντικό στο [23]. Η C-

Kit

W-sh

(φύλλου) μετάλλαξη είναι μια αντιστροφή μιας Mbp τμήμα 3.1 που διαταράσσουν την περιοχή του υποκινητή του c-

Κιτ

γονίδιο [23]. Ποντίκια ομόζυγα για το C-

Kit

W-sh

μετάλλαξη εμφανίζουν μια βαθιά απώλεια των μαστοκυττάρων, αλλά επίσης στερούνται μελανοκύτταρα και κύτταρα Cajal [23], [24]. Έτσι, c-Kit

W-sh /W-sh ποντίκια αντιπροσωπεύουν ένα κοινό εργαλείο για την αξιολόγηση της λειτουργίας των μαστοκυττάρων. Mast κύτταρα είναι ιστός κάτοικος του μυελού των οστών προερχόμενα κύτταρα, τα οποία σαν PAF, είναι καλά γνωστές μεσολαβητές αλλεργικών και αναφυλακτικών αντιδράσεων [25]. Τα μαστοκύτταρα στρατηγικά εντοπίζεται στα subepithelial και υποβλεννογόνια χώρους επιρρεπείς σε περιβαλλοντικές και μολυσματικών προσβολές [25]. Επιπλέον, η ικανότητα του PAF για την προώθηση της αναφυλακτικής αποκρίσεις εξαρτάται από την ενεργοποίηση των ιστιοκυττάρων [8]. PAF είναι επίσης ένας γνωστός ενεργοποιητής και χημειοτακτικός παράγων για τα μαστοκύτταρα [9]. Εκτός από το ρόλο τους στην προώθηση του τροχού και φωτοβολίδα αντιδράσεων που σχετίζονται με αντιδράσεις υπερευαισθησίας τύπου Ι, τα μαστοκύτταρα έχουν επίσης δειχθεί να καταστέλλει χρόνια φλεγμονή όπως επίσης και προσαρμοστικές άνοσες αποκρίσεις [26] – [31]. Που παρουσιάζουν ιδιαίτερο ενδιαφέρον, σιτευτικά κύτταρα δρουν για να περιορίσουν ποντικού μοντέλα της υπερευαισθησίας επαφής και χρόνιο UVB που προκαλείται από φλεγμονή [32]. Επιπλέον, ο ρόλος του PAF-R σε UVB επαγόμενη ανοσοκαταστολή έχει δειχθεί ότι προκύπτει από PAF-R-εξαρτώμενη μετανάστευση των ιστιοκυττάρων στο λεμφαδένα, όπου ασκούν μια ιντερλευκίνη (IL) -10-εξαρτώμενο ανοσοκατασταλτική επίδραση [ ,,,0],10].

Ενώ έχουμε την προϋπόθεση πρόσφατα στοιχεία ότι PAF έχει αντι-φλεγμονώδεις επιδράσεις σε χρόνια που προκαλείται από ΡΜΑ προαγωγή όγκων [7], είναι πιθανό ότι οι επιπτώσεις της απώλειας βλαστικής σειράς του PAF-R μπορεί να είναι λόγω αντισταθμιστικά εμβρυϊκή ή μεταγεννητική μεταβολές στην ανάπτυξη του δέρματος [7]. Έτσι, μια επίδειξη ότι η θεραπεία με αγωνιστή ΡΑΡ-R σε καταστολή του ϋΜΒΑ /PMA-επαγόμενης καρκινογένεσης και της φλεγμονής θα παρέχουν περαιτέρω υποστήριξη για την ιδέα ότι η ΡΑΡ-R έχει σημαντικές αντι-νεοπλασματικές και ανοσορυθμιστικές επιδράσεις. τρέχουσες μελέτες μας την εξέταση του ρόλου του PAF-R σε προκαλείται από ΡΜΑ φλεγμονή προσθέτει στην προηγούμενη αναφορά μας και αποκαλύπτει ένα σύνθετο ρόλο ανοσοδιαμορφωτική για ΡΑΡ-R σηματοδότηση. Επιπλέον, τα ευρήματά μας χρησιμοποιώντας C-

Kit

W-sh /W-sh

ποντίκια επιδεικνύουν ένα ρόλο για

c-Kit

και, ενδεχομένως, μαστοκύτταρα στις ανοσοτροποποιητικές δράσεις του PAF.

Μέθοδοι

δήλωση Ηθικής

Τα πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα του Πανεπιστημίου Indiana Ιατρική Σχολή (Θεσμικών φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήση (IACUC) .. (Αριθμός πρωτοκόλλου: 3841 και 10639) Κάθε προσπάθεια έγινε για να ελαχιστοποιηθεί η ταλαιπωρία των ζώων

Τα αντιδραστήρια και τα χημικά

φορβόλη 12-μυριστικό 13-οξικό (PMA) αγοράστηκε από την Promega, Madison, WI. 7,12-διμεθυλοβενζ (α) ανθρακένιο (DMBA) ελήφθη από την Acros Organics, Fair Lawn, NJ. Carbamyl-PAF ελήφθη από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ).

Ζώα

Ptafr

νοκ-άουτ (

Ptafr

– /-) σε C57BL /6 υπόβαθρο είχαν αρχικά ληφθεί από τον Δρ Satoshi Ishii (Τμήμα Βιοχημείας και Μοριακής Βιολογίας, Τμήμα Ιατρικής , Το Πανεπιστήμιο του Τόκυο), που προέρχεται όπως περιγράφηκε προηγουμένως [33]. Ηλικία (8-12 εβδομάδες) -matched

Ptafr

+ /+ C57BL /6 (WT) χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες (The Jackson Laboratories, Bar Harbor, ΜΕ). SKH-1 άτριχα, albino ποντίκια ελήφθησαν από Charles Rivers (Wilmington, ΜΑ). Ποντικοί που περιέχουν την W-φύλλο (W-sh) αναστροφή μετάλλαξη στην περιοχή προαγωγέα του

c-kit

γονίδιο (

Kit

W-sh

) ελήφθησαν από τα Jackson Laboratories στην C57BL /6 υπόβαθρο (B6.Cg-

Kit

W-sh

/HNihrJaeBsmGlliJ). Τα ποντίκια στεγάστηκαν κάτω από ειδικές συνθήκες άνευ παθογόνου στο Indiana University School of Medicine.

μετρήσεις του πάχους του ωτός

Το αριστερό αυτί του κάθε ποντικός υποβλήθηκε σε θεραπεία με 20 μλ cPAF (0.1, 0.3, ή 1 mM σε ακετόνη). Το δεξί αυτί υφίσταται κατεργασία με 20 μΙ οχήματος (ακετόνη) μόνο. Για θεραπείες PMA, το αριστερό αυτί υφίσταται κατεργασία με 10 μg του ΡΜΑ σε 20 μΐ ακετόνης, και το δεξί αυτί υποβλήθηκε σε επεξεργασία με όχημα (VEH) μόνο 3 φορές την εβδομάδα (βέλη) για 16 ημέρες. Για ΡΜΑ και CPAF θεραπείες, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με ΡΜΑ πρώτα, και στη συνέχεια 20 μΙ 0.3 mM CPAF (σε ακετόνη) προστέθηκε αμέσως μετά τη θεραπεία ΡΜΑ. Το πάχος του αυτιού μετρήθηκε στα δεικνυόμενα χρονικά σημεία μετά τη θεραπεία χρησιμοποιώντας έναν μετρητή αναλογικό πάχος σταθερή πίεση (Peacock Model G, 0,4 Ν).

μετρήσεις επιδερμικό πάχος

αυτιά ποντικού αγωγή 18 ημέρες τρεις φορές σε εβδομαδιαία βάση με όχημα, CPAF (6 nmole), ΡΜΑ, ή ΡΜΑ και CPAF σταθεροποιήθηκαν με φορμαλίνη και εγκλεισμένα σε παραφίνη (FFPE), και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη & amp? ηωσίνη (Η & amp? Ε). Μετρήθηκε το επιδερμικό πάχος με μέτρηση του πάχους του επιδερμικού 10 φορές σε 5 διαδοχικές 200 x πεδία, ξεκινώντας από το άπω άκρο του αυτιού και κινείται εγγύτατα στο επόμενο γειτονικό πεδίο. επιδερμικό πάχος προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας ένα σταυρόνημα προσοφθαλμίου βαθμονομημένη με ένα στάδιο μικρόμετρο. Όλα τα πλακίδια τυφλωθεί πριν από τη μέτρηση.

μελέτες Ογκογένεση

Για μελέτες χημικής καρκινογένεσης δύο σταδίων, το ραχιαίο δέρμα του SKH-1 άτριχα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με μία φορά με DMBA, που ακολουθείται από επαναλαμβανόμενες θεραπείες με PMA όπως περιγράφηκε προηγουμένως [7]. Για τη μέτρηση του όγκου, μόνο μια διαρκή όγκοι & gt? Μετρήθηκαν το 1 mm μεγαλύτερη διάμετρο. Μετά από 25 εβδομάδες θεραπείας ΡΜΑ, ποντικοί θυσιάστηκαν και το μέγεθος του όγκου (μεγέθους σε μεγαλύτερη διάσταση) μετρήθηκε για κάθε όγκο. τμήματα όγκου FFPE από WT και

Ptafr

– /- ποντίκια βάφτηκαν με Η & amp? Ε και τον τύπο του όγκου (θηλωμάτων και μικροεπεμβατική SCC (MISCC)) αξιολογήθηκε σε τυφλό τρόπο από δερματοπαθολόγο πίνακας-επικυρωμένο, όπως προηγουμένως περιγράφεται [34]. Για MPO δραστηριότητα, όγκου-ελεύθερες περιοχές αντιμετωπίζονται δέρματος αφαιρέθηκαν και τα επίπεδα δραστηριότητας MPO αξιολογήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [35].

PMA-που προκαλείται από φλεγμονή στην επιδερμίδα ραχιαίο

Το πίσω μέρος του δέρματος των γυναικών WT ή

Ptafr

– /- ποντίκια ξυρίστηκε υπό αναισθησία και στη συνέχεια κατεργάστηκε με ΡΜΑ ή όχημα τρεις φορές την εβδομάδα για 18 ημέρες όπως περιγράφεται παραπάνω. Αμέσως μετά από κάθε εφαρμογή ΡΜΑ, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή 100 μΐ 0.3 mM CPAF (σε ακετόνη). Την ημέρα 18, οι ποντικοί θανατώθηκαν και τα κατεργασμένα επιδερμίδα ραχιαία αποκόπηκε για μετρήσεις του πάχους του δέρματος, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [35].

Mast κύτταρο μετρώντας

Τα μαστοκύτταρα βάφτηκαν με κυανούν τολουϊδίνης σε αποπαραφινωθείσες τμήματα FFPE όπως περιγράφεται [36]. Τέσσερις 200x εικόνες ανά δείγμα βιοψίας συνελήφθησαν διαδοχικά κατά μήκος του τμήματος χρησιμοποιώντας ένα 80i Nikon Eclipse. Nikon Στοιχεία Βασική Έρευνα λογισμικό ανάλυσης εικόνας (v. 4.13) χρησιμοποιήθηκε για να μετρήσει τα μαστοκύτταρα και τη μέτρηση της δερματικής περιοχής ενδιαφέροντος. Η συνολική έκταση και κυττάρων μετρήσεις τότε ο μέσος όρος [(σιτευτικά κύτταρα /μm

2) x10

-5]. Δεδομένου ότι οι μετρήσεις των μαστοκυττάρων διαφέρουν σε διαφορετικά σημεία του σώματος σε ποντίκια, οι μετρήσεις των μαστοκυττάρων πραγματοποιήθηκαν σε δύο από τα αυτιά και τη ραχιαία (πίσω) επιδερμίδα.

Η στατιστική ανάλυση

Η στατιστική σημαντικότητα αξιολογήθηκε από Prism 5.0 λογισμικό (Graph Pad Software, San Diego CA) και σημαντικότητας ορίστηκε ως

σ

& lt?. 0.05

αποτελέσματα

CPAF είναι τοπικά ενεργό και οδηγεί σε ένα δόσης εξαρτώμενη παροδική αύξηση στο πάχος του αυτιού που εξαρτάται από μαστοκύτταρα

σε μια προηγούμενη μελέτη [7] και στο Σχήμα 1Α, δείχνουμε ότι μία μόνο τοπική εφαρμογή αυξανόμενων δόσεων της μη υδρολύσιμο αγωνιστής ΡΑΡ-R, CPAF, οδηγεί σε μια δοσοεξαρτώμενη αύξηση στο πάχος του αυτιού σε δύο ώρες μετά την εφαρμογή. Στο Σχήμα 1Β, μια μελέτη χρονικής πορείας καταδεικνύει ότι CPAF μεταβολές που προκλήθηκαν από το πάχος του αυτιού συμβούν ταχέως, με σημαντικές αυξήσεις στο πάχος του αυτιού σημειώνεται από 1 ώρα μετά την εφαρμογή και πάχος κορυφής αυτί σημειώθηκε σε 2 ώρες. Είναι σημαντικό ότι, μετά από μια μόνο εφαρμογή του CPAF οι αλλαγές στο πάχος του αυτιού ήταν παροδικές και μειώθηκε στο πλησίον της τιμής αναφοράς από 8 ώρες μετά την εφαρμογή. Η ταχεία και παροδική φύση της απόκρισης υποδηλώνει σαφώς ότι οι αλλαγές στην αγγειακή διαπερατότητα που οδηγεί σε σχηματισμό οιδήματος είναι σε μεγάλο βαθμό υπεύθυνη για τις αλλαγές στο πάχος του αυτιού. Αυτό είναι σύμφωνο με τη γνωστή ικανότητα του PAF να επάγει αγγειοδιαστολή και αγγειακή διαπερατότητα [37]. Για να αποκλειστεί PAF-R ανεξάρτητες επιδράσεις [38], τα ποντίκια με βλαστική απώλεια του

Ptafr

γονίδιο (

Ptafr

– /- ποντίκια) υποβλήθηκαν επίσης σε αγωγή με CPAF. Σε όλες τις δόσεις που μελετήθηκαν, η τοπική εφαρμογή CPAF απέτυχε να προκαλέσει μία φλεγμονώδη αντίδραση σε

Ptafr

– /- ποντίκια (Σχήματα 1Α & amp? Β), επιβεβαιώνοντας την εξειδίκευση του φαρμακολογικού αποτελέσματος

. 1Α

.

Τοπική CPAF δοσοεξαρτώμενο επάγει ταχεία φλεγμονώδεις αποκρίσεις όπως μετρήθηκαν με μετρήσεις του πάχους του αυτιού

ένα αυτί του WT και

Ptafr

. (- /-) Υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με μία από τις τρεις δόσεις του CPAF (20 μΐ ενός 0.1, 0.3, και 1.0 mM λύση για μια συνολική δόση 2, 6, ή 20 nmole CPAF ανά αυτί). Το ετερόπλευρο αυτί υφίσταται κατεργασία με ακετόνη μόνο (VEH). Το πάχος του αυτιού μετρήθηκε πριν από την αγωγή και 2 ώρες μετά τη θεραπεία. Μετά αφαιρέθηκαν οι τιμές του πάχους του αυτιού προεπεξεργασίας, το μέσο και SEM απεικονίσθηκαν (n = 4 για 20 nmole και η = 8 για 2 & amp? 6 nmole CPAF & amp? VEH αγωγή αυτιά ποντικού).

1Β

.

Τοπική θεραπεία CPAF επάγει μία ταχεία, αλλά παροδική αύξηση της φλεγμονής, όπως μετράται με τις αλλαγές του πάχους του αυτιού

ένα αυτί του άγριου τύπου (WT) και

Ptafr

. (- /-) Ποντικούς υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 20 μλ CPAF (20 nmoles από ένα 0,1 mM διάλυμα σε ακετόνη) και 20 μΙ ακετόνης (VEH) εφαρμόστηκε στο ετερόπλευρο αυτί. Το πάχος του αυτιού μετρήθηκε ακριβώς προ της εφαρμογής Αντιδραστήριο και σε 1, 2, 4, και 8 ώρες μετά την εφαρμογή. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν την μέση και SEM (n = 4 ποντικοί) μετά την αφαίρεση του πάχους προεπεξεργασίας αυτί. CPAF προκάλεσε μια σημαντική αύξηση στο πάχος του αυτιού σε WT ποντικούς σε σχέση με το WT + VEH αγωγή αυτιά. *,

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt? 0,01? ***?

σ

& lt? 0.001? 2-tailed

t-test

.

Η

Τέλος, η ικανότητα της CPAF να προκαλέσει ταχεία αντιδράσεις οιδήματος έχει συνδεθεί με κατάρτι κυτταρική ενεργοποίηση [8], [9]. Ως εκ τούτου, καθορίζεται κατά πόσον η ικανότητα των CPAF να προκαλέσει μια πρώιμη αντίδραση οιδήματος σε 2 ώρες θα μπορούσε να μπλοκαριστεί σε ποντίκια που στερούνται μαστοκύτταρα (c-Kit

W-sh /W-sh ποντίκια). Στο Σχήμα 2 επαληθεύουμε ότι τα μαστοκύτταρα πράγματι απαιτούνται για την πρόωρη αύξηση του πάχους του αυτιού που προκαλείται από την εφαρμογή CPAF.

WT και c-Kit

W-sh /ποντίκια W-sh υποβλήθηκαν σε θεραπεία με όχημα ( VEH) μόνο στο ένα αυτί, και 20 ml 0.3 mM CPAF (6 nmole) στον αντίπλευρο αυτί. Το πάχος του αυτιού μετρήθηκε τόσο πριν όσο και 2 ώρες μετά την εφαρμογή του αντιδραστηρίου. Μετά την αφαίρεση του πάχους του αυτιού στο χρόνο 0, η μέση και SEM απεικονίσθηκαν (n = 5 για τα ποντίκια WT, η = 4 για Kit

W-sh /sh W-ποντίκια). *,

σ

& lt? 0,05? 2-tailed

t-test

.

Η

Επίκαιρα CPAF προστατεύει από δερματική χημική καρκινογένεση

Οι μελέτες στο Σχήμα 1 δείχνουν ότι CPAF παρουσιάζει συγκεκριμένες δοσοεξαρτώμενη φαρμακολογική δράση μετά από τοπική εφαρμογή. Η χρήση μιας τοπικής προσέγγισης παράδοσης αποφεύγει επίσης δυναμικό τοξικότητες που σχετίζονται με συστημική αγωγή αγωνιστή PAF-R [37]. Επιπλέον, το PAF-R είναι επιρρεπείς στο φαινόμενο του συνδέτη που προκαλείται από τα κάτω ρύθμιση και απευαισθητοποίηση [1], [39]? αυτό το ρυθμιστικό στοιχείο είναι χαρακτηριστικό των υποδοχέων που συνδέονται με G-πρωτεΐνη και μπορεί να οδηγήσει σε μια παράδοξη απώλεια της ενεργοποίησης του υποδοχέα με επακόλουθη δέσμευση συνδέτη [1], [40]. Έτσι, δεδομένου ότι οι μελέτες καρκινογένεσης θα απαιτούσε μακροχρόνια επαναλαμβανόμενη εφαρμογή του CPAF, χρησιμοποιήσαμε το 0,3 mM συγκέντρωση CPAF που προκαλείται από ένα ενδιάμεσο, αλλά σημαντική αύξηση στις μετρήσεις του πάχους του αυτιού (Εικ 1Α). Για τις μελέτες αυτές, CPAF εφαρμόσθηκε αμέσως μετά DMBA ή ΡΜΑ αίτηση για τη διάρκεια της μελέτης

Σύμφωνα με προηγούμενη μελέτη μας, που έδειξαν ότι το

Ptafr

-. /- Ποντίκια επιδεικνύουν αυξημένη ϋΜΒΑ /PMA σχηματισμός επαγόμενη όγκου, σε σχήμα 3Α δείχνουμε ότι τοπική θεραπεία CPAF οδήγησε σε σημαντική μείωση της ϋΜΒΑ /ΡΜΑ-επαγόμενη φορτίο του όγκου. επεξεργασία CPAF έδειξαν επίσης μια μικρή, αλλά σημαντική προστατευτική επίδραση στην συχνότητα εμφάνισης όγκου (Σχήμα 3Β). Επιπλέον, ενώ

Ptafr

– /- ποντίκια παρουσίασαν μια σημαντική αύξηση στη συχνότητα των μεγαλύτερων όγκων [7], οι ποντικοί που έλαβαν θεραπεία με τοπική CPAF παρουσίασαν σημαντική αύξηση σε μικρότερα μεγέθη του όγκου (Σχήμα 3C). Επιπλέον, προηγουμένως αποδειχθεί ότι

Ptafr

– /- ποντίκια επιδεικνύουν μία αύξηση στην SCC σχηματισμό σε σχέση με τα ποντίκια WT [7]. Ωστόσο, σε αυτή τρέχουσα μελέτη, δεν Frank κλώνοι ενός κυττάρου παρατηρήθηκαν και ποντικούς που υπέστησαν αγωγή τοπικώς απέτυχε να παρουσιάζουν σημαντική μεταβολή στο ποσοστό των θηλωμάτων βαθμού 1-3 ή κλώνοι ενός κυττάρου μικροεπεμβατική (Σχήμα S1 σε S1 File). Τέλος, χωρίς όγκο περιοχές του δέρματος που έλαβαν θεραπεία με CPAF παρουσίασαν σημαντική μείωση σε ϋΜΒΑ /προκαλείται από ΡΜΑ φλεγμονή, όπως αξιολογείται χρησιμοποιώντας μυελοϋπεροξειδάση (ΜΡΟ δραστηριότητα), ένα δείκτη κοκκιοκυτταρικής κυτταρικές διηθήσεις (Εικόνα 3D) [41]. Αυτό είναι συνεπές με τα προηγούμενα αποτελέσματα μας σε

– /-

ποντίκια, τα οποία επέδειξαν μια αύξηση της δραστικότητας ΜΡΟ μετά από χρόνια, επαναλαμβανόμενες θεραπείες ΡΜΑ [7]

3Α.. Τοπική θεραπεία με CPAF καταστέλλει ϋΜΒΑ /ΡΜΑ-επαγόμενη πολλαπλότητα όγκου.

SKH-1 ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή μία φορά με DMBA +/- CPAF, έπειτα με ΡΜΑ ή ΡΜΑ + CPAF για 25 εβδομάδες. Ανθεκτική όγκοι μετρήθηκαν σε εβδομαδιαία βάση. Tumor πολλαπλότητα (αριθμός των όγκων ανά ποντίκι Μέσος απεικονίστηκε γραφικά σε κάθε εβδομάδα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν το μέσο και SEM για η = 19-20 ποντίκια /ομάδα

ρ

& lt?.. 0.05 για εβδομάδες 9-12,14-25?

σ

& lt? 0,01 για την εβδομάδα 13?. Mann-Whitney U test

3Β Επίκαιρα CPAF καθυστερημένη εμφάνιση όγκων σε ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ϋΜΒΑ /PMA

το ποσοστό των ποντικών που παραμένουν χωρίς όγκο πάνω από το.. 25 εβδομάδα σπουδών χημική καρκινογένεση χαράχθηκαν χρησιμοποιώντας μια καμπύλη επιβίωσης. Η θεραπεία με CPAF οδήγησε σε σημαντική μεταβολή στη συχνότητα εμφάνισης όγκου, με μέσο χρόνο μέχρι την πρώτη εμφάνιση του όγκου των 8 εβδομάδων για την ϋΜΒΑ /ΡΜΑ κατεργασία και 9 εβδομάδες για την ϋΜΒΑ /PMA + CPAF ποντίκια με αγωγή *,

σ

& lt?. 0,05?.. Log-rank (Mantel-Cox) Test

3C

Επίκαιρα CPAF αποτελέσματα της θεραπείας σε ένα μικρότερο αριθμό μεγάλων όγκων ( ≥3 mm σε μεγαλύτερη διάμετρο) μετά από 25 εβδομάδες θεραπείας.

κατανομή μεγέθους του όγκου συναρτήσει ως ο αριθμός των όγκων σε κάθε κατανομή μεγέθους για κάθε ομάδα θεραπείας. η ιστοπαθολογική εξέταση δεν έδειξε σημαντική διαφορά στα ποσοστά του θηλώματος και του σχηματισμού SCC μεταξύ οι ομάδες θεραπείας (δεν φαίνεται). ***

exact test p = 0,0001

Fisher.

3D

.

ϋΜΒΑ /PMA-επαγόμενη δραστηριότητα MPO καταστέλλεται από CPAF.

Μετά τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία μετά από 25 εβδομάδες θεραπείας ϋΜΒΑ /PMA +/- CPAF, χωρίς όγκο περιοχές του δέρματος αποκόπηκαν και δραστηριότητα MPO αξιολογήθηκε σε ιστό λύματα. Μετά την κανονικοποίηση για συνολική πρωτεΐνη, ΜΡΟ δραστηριότητα απεικονίστηκε γραφικά ως η μέση τιμή και SEM (n = 5-9 ποντικοί ανά ομάδα). **

σ

& lt? 0,05? ***

σ

& lt? 0.001? 2-tailed

t-test

.

Η

Τοπική θεραπεία CPAF καταστέλλει τη φλεγμονή που προκαλείται από επαναλαμβανόμενες εφαρμογές του υποκινητή όγκου PMA

Στην προηγούμενη έκθεσή μας [7], δείξαμε ότι μια πρώτη εφαρμογή ΡΜΑ προκάλεσε μια σημαντική αύξηση του πάχους του αυτιού σε ποντικούς WT 2 ημέρες μετά την εφαρμογή. Μία δεύτερη εφαρμογή ΡΜΑ οδήγησε σε περαιτέρω αύξηση του πάχους του αυτιού που μερικώς επιλυθεί. Στη συνέχεια, οι μεταγενέστερες αιτήσεις PMA απέτυχε να προκαλέσει περαιτέρω αύξηση στο πάχος του αυτιού. Σε αντίθεση, μία σημαντική και επίμονη αύξηση στο πάχος του αυτιού που παρατηρήθηκε κατά τη διάρκεια των 18 ημερών θεραπείας PMA (παρατεταμένη χρόνιες φλεγμονώδεις φάση). Όπως και στην προηγούμενη μελέτη μας, η απώλεια του PAF-R οδήγησε σε άμβλυνση της κορυφής πάχους του αυτιού που παρατηρήθηκε μετά τη δεύτερη εφαρμογή ΡΜΑ, αλλά υψηλότερο επίπεδο παρατεταμένης χρόνιας φλεγμονής μετά συνεχίστηκε τρεις φορές την εβδομάδα εφαρμογές ΡΜΑ (Σχήμα S2 σε File S1 και [ ,,,0],7]). Κατά συνέπεια, εξετάσαμε αν η τοπική χορήγηση CPAF θα είχε το αντίθετο αποτέλεσμα και καταστέλλουν την παρατεταμένη χρόνια φλεγμονή που προκαλείται από θεραπεία ΡΜΑ. Στο Σχήμα 4Α δείχνουμε ότι η εφαρμογή της τοπικής CPAF αμέσως μετά από κάθε εφαρμογή των αποτελεσμάτων ΡΜΑ σε σημαντική μείωση τόσο της κορυφής φλεγμονώδη απόκριση σημειώνεται την ημέρα 4, καθώς και μια μείωση της παρατεταμένης φλεγμονώδους απόκρισης που παρατηρήθηκε καθ ‘όλη τη διάρκεια της περιόδου εφαρμογή ΡΜΑ (18 ημέρες). Είναι ενδιαφέρον ότι, σε αυτές τις μετέπειτα χρονικά σημεία, CPAF δεν είχε καμία επίδραση στις μετρήσεις του πάχους του αυτιού σε WT ποντικούς δεν αντιμετωπίζονται με ΡΜΑ, υποδηλώνοντας ότι η τοπική CPAF είναι αναποτελεσματικό στην επαγωγή μια σημαντική παρατεταμένη φλεγμονώδη απόκριση κατά την εξεταζόμενη δόση (0.3 mM). Τέλος, δίπλα έδειξαν ότι η επίδραση της CPAF ήταν εξαρτάται εξ ολοκλήρου από την PAF-R, καθώς και εφαρμογές CPAF Veh έδειξαν σχεδόν ταυτόσημες μετρήσεις του πάχους του αυτιού σε όλα τα χρονικά σημεία μετά την εφαρμογή ΡΜΑ να

Ptafr – /- ποντίκια

( Σχήμα 4Β). Ενώ CPAF μπλοκαριστεί σημαντικά προκαλείται από ΡΜΑ πάχος αυτιού σε ποντικούς WT (σχήμα 4Α), αυτή η απόκριση ήταν εντελώς χαθεί στο

Ptafr

– /- ποντικών που υπέστησαν αγωγή με ΡΜΑ (Σχήμα 4Β). Τέλος, το σχήμα 4Γ, δείχνουμε ότι η ικανότητα του να καταστέλλει CPAF που προκαλείται από ΡΜΑ αλλαγές του πάχους του δέρματος δεν εξαρτιόταν από ανατομικό χώρο. CPAF κατέστειλε σημαντικά PMA-που προκαλείται από αυξήσεις στην ραχιαία πίσω πάχος του δέρματος μετά από 18 ημέρες από την εβδομαδιαία θεραπεία τρεις φορές.

4Α. Τοπική θεραπεία CPAF καταστέλλει που προκαλείται από ΡΜΑ αλλαγές στο πάχος του αυτιού σε ποντικούς WT.

CPAF (6 nmoles) μόνο ή ΡΜΑ +/- CPAF εφαρμόστηκαν σε WT αυτιά ποντικού τρεις φορές την εβδομάδα για 18 ημέρες. Οι μετρήσεις του πάχους του δέρματος λήφθηκαν σε χρόνο μηδέν και μόλις πριν από κάθε εφαρμογή του αντιδραστηρίου. Μετά την αφαίρεση του πάχους αυτιού χρόνο 0, οι αλλαγές του πάχους του αυτιού σχεδιάστηκαν ως η μέση τιμή και SEM (n = 4-5 ποντικοί ανά ομάδα). PMA σε σχέση με PMA + CPAF (

α), PMA + CPAF σε σχέση με CPAF (

β)? *,

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt? 0,01? ***

σ

& lt? 0.001? 2-tailed

t-test

.

4Β. Η τοπική θεραπεία CPAF είναι αναποτελεσματικό στην αλλαγή που προκαλείται από ΡΜΑ μεταβολές του πάχους του αυτιού στο Ptafr – /- ποντίκια. Ptafr

– /- ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή και αξιολογήθηκαν όπως στο 4Α παραπάνω. Για λόγους σύγκρισης, τα δεδομένα για τη θεραπεία ΡΜΑ + CPAF σε WT ποντικούς συμπεριλαμβάνεται. (Μέση τιμή και SEM? Η = 4-5 ποντικοί ανά ομάδα). WT ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ΡΜΑ + CPAF εμφανίζουν μια σημαντική μείωση στο αυτί μετρήσεις του πάχους σε σχέση με

Ptafr

– /- ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ΡΜΑ + CPAF (*,

ρ

& lt? 0,05? **,

σ

& lt? 0,01? ***,

σ

& lt? 0.001? 2-tailed

t

-τεστ).

4C. Τοπική θεραπεία CPAF καταστέλλει που προκαλείται από ΡΜΑ δέρμα πάχος αυξήσεις στη ραχιαία επιδερμίδα ακόλουθες 18 ημέρες θεραπείας.

Η επιδερμίδα της ράχης του SKH-1 ποντίκια υποβλήθηκε σε επεξεργασία τρεις φορές την εβδομάδα με όχημα, CPAF, ΡΜΑ, ή ΡΜΑ + CPAF. Δόσεις PMA και CPAF ήταν η ίδια με αυτή που χρησιμοποιείται για τις μελέτες ογκογένεση στο σχήμα 3. ***,

σ

& lt? 0,05 σε σχέση με PMA θεραπεία του δέρματος? 2-tailed

t-test

(n = 3 ανά ομάδα).

Η

επόμενο καθόρισαν τις ιστοπαθολογικές αλλοιώσεις στο δέρμα του αυτιού που προκύπτουν από πολλαπλές εφαρμογές PMA, με ή χωρίς θεραπείες CPAF. Πολλαπλές εφαρμογές PMA στο δέρμα ποντικού είναι γνωστό ότι επάγουν επιδερμική υπερπλασία και διήθηση λευκοκυττάρων [42], [43]. Στο Σχήμα 5Α-Ι, δείχνουμε ότι πολλαπλές εφαρμογές ΡΜΑ στην WT αυτιά ποντικού οδηγεί σε σαφή αύξηση του πάχους του αυτιού που συνοδεύεται από δερματική επέκταση, διήθηση λευκοκυττάρων και επιδερμική υπερπλασία. Επιπλέον, η συν-θεραπεία του WT αυτιά ποντικών με CPAF οδήγησε σε μείωση που προκαλείται από ΡΜΑ λευκοκυττάρων διηθήσεις ενώ

Ptafr

– /- ποντίκια εμφάνισαν μια αξιοσημείωτη αύξηση στο πάχος του αυτιού, δερματική επέκταση, φλεγμονώδεις διηθήσεις των κυττάρων, και επιδερμική υπερπλασία (Σχήμα 5Α-Η). Σε σχέση με WT ποντικούς,

Ptafr

– /- ποντίκια εμφάνισαν μια αξιοσημείωτη αύξηση της κοκκιοκυτταρικής διηθήσεις ακόλουθες χρόνιες θεραπείες ΡΜΑ (Σχήμα 5 και το Σχήμα S3 σε S1 File). Επιπλέον, η θεραπεία CPAF κατέστειλε τις παρατηρούμενες που προκαλείται από ΡΜΑ φλεγμονώδεις διηθήσεις σε WT, αλλά όχι

Ptafr

– /- ποντίκια. Αυτά τα δεδομένα είναι σε συμφωνία με τα προηγούμενα, καταδεικνύοντας μελέτη μας ότι

Ptafr

– /- ποντίκια επιδεικνύουν μία σημαντική αύξηση στην δραστικότητα ΜΡΟ μετά από θεραπεία ΡΜΑ [7], καθώς και τα δεδομένα μας στο σχ 3D που δείχνει ότι καταστέλλει θεραπεία CPAF δραστηριότητα MPO σε DMBA /PMA ποντίκια με αγωγή. Δεδομένου ότι τα ουδετερόφιλα φαίνεται ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στην φωτοκαρκινογένεσης δέρμα ποντικού [35], αυτή η μείωση της κοκκιοκυτταρικής διηθήσεις μπορούσε να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στις παρατηρούμενες επιδράσεις κατά του όγκου των τοπική θεραπεία CPAF στη χημική καρκινογένεση (σχήμα 3Α & amp? Β). Δεδομένου ότι ο βαθμός της χρόνιας φλεγμονής συνήθως συνδέεται με επιδερμική υπερπλασία, είναι κάπως περίεργο ότι ενώ θεραπεία CPAF κατέστειλε προκαλούμενη από ΡΜΑ κοκκιοκυτταρική φλεγμονή σε ποντικούς WT, θεραπεία CPAF δεν μετέβαλλε που προκαλείται από ΡΜΑ επιδερμική υπερπλασία είτε WT ή

Ptafr – /-

ποντίκια (Εικ 5Θ)

5Α

-.

H. Οι φλεγμονώδεις διηθήσεις αυξήθηκε σε Ptafr – /- ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ΡΜΑ, ενώ CPAF καταστέλλει φλεγμονωδών κυττάρων διηθήματα στο ΡΜΑ αγωγή ποντικούς WT

Μετά κατεργασία WT και

Ptafr

-. /- αυτιά ποντικού για 18 ημέρες, με VEH , CPAF, ΡΜΑ, ή ΡΜΑ + CPAF όπως περιγράφεται στο σχήμα 4, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και τα αυτιά αποκόπηκαν για μονιμοποίηση φορμαλίνης, εμβάπτιση σε παραφίνη και αιματοξυλίνη & amp? ηωσίνη (Η &? Ε) χρώση. Οι φωτομικρογραφίες λαμβάνονται σε μεγέθυνση 400χ απεικονίζεται.

5Θ. Που προκαλείται από ΡΜΑ επιδερμικό πάχος αυξάνεται στο Ptafr – /- ποντίκια, ενώ CPAF δεν έχει καμία επίδραση επί προκαλείται από ΡΜΑ επιδερμικού πάχους σε είτε WT ή Ptafr – /-. Ποντίκια

Μετρήθηκε το επιδερμικό πάχος σε WT και

Ptafr

– /- ποντίκια σε αγωγή για 18 ημέρες, με VEH, CPAF, ΡΜΑ, και ΡΜΑ + CPAF όπως περιγράφεται στο Σχ 4Α & amp? Β. επιδερμικό πάχος σε mm εκφράζεται στη μέση και SEM για 3-4 αυτιά ανά πειραματική ομάδα. Σημαντικά διαφορετική από έλεγχο WT VEH (

α), διαφέρει σημαντικά από το

Ptafr

– /- ελέγχου VEH (

β). *,

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt? 0,01? ***

σ

& lt? 0.001? 2-tailed

t-τεστ

.

Η

PAF εξασκεί συγκρότημα επιδράσεις στην αρχική φλεγμονώδη απόκριση στο ΡΜΑ εφαρμογή

Ο προ-φλεγμονώδη συγκαρκινογόνου PMA είναι γνωστό ότι προκαλέσει μια ταχεία αντίδραση οίδημα στα αυτιά του ποντικιού [42], [43]. Αυτό ακολουθείται από μία σταδιακή αύξηση της διείσδυσης λευκοκυττάρων όπως μετράται με Ν-ακετυλογλυκοζαμινιδάση (NAF) δραστηριότητα που κορυφώνεται σε περίπου 24 ώρες [42], [43] MPO και /ή. Δεδομένου ότι ο PAF είναι ένας ισχυρός αγγειοδραστικό λιπίδιο μεσολαβητής που προάγει την ταχεία αντιδράσεις οιδήματος [37], εξετάσαμε έπειτα πώς CPAF θα επηρεάσει νωρίς φλεγμονώδεις αλλοιώσεις μετά την πρώτη εφαρμογή ΡΜΑ σε WT και

Ptafr

– /- ποντίκια. Όπως φαίνεται στο σχήμα 6Α, θεραπεία ΡΜΑ επάγει μια ταχεία αύξηση του πάχους του αυτιού που παρατηρήθηκε για πρώτη φορά δύο ώρες μετά την εφαρμογή. Αυτί αλλαγές πάχους κορυφώθηκε σε περίπου 24 έως 48 ώρες. Σε αντίθεση,

Ptafr

– /- ποντίκια παρουσίασαν μία μείωση στις αρχικές αλλαγές πάχους του αυτιού σημειωθεί στους 2 & amp? 8 ώρες, γεγονός που υποδηλώνει ότι προκαλείται από ΡΜΑ αποκρίσεις οιδήματος ήταν PAF-εξαρτώμενη. Επομένως, ήταν εκπληκτικό να βρεθεί ότι η WT ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με CPAF αμέσως μετά την εφαρμογή ΡΜΑ παρουσίασαν επίσης μια απώλεια περίπου 50% του προκαλείται από ΡΜΑ αλλαγές πάχους νωρίς αυτί παρατηρήθηκε σε 2 ώρες (Εικόνα 6Β). Αυτό υποδηλώνει μια σύνθετη ρόλο για το PAF-R στη ρύθμιση της αρχικής αγγειοδραστικών αλλαγές οίδημα σε απόκριση στο ΡΜΑ

Για όλες τις μελέτες στα σχήματα 6, WT και

Ptafr

-. /- Ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με VEH, ΡΜΑ, CPAF (6 nmole) ή ΡΜΑ + CPAF όπως περιγράφεται στο Σχ 4Α & amp? Β. Οι μετρήσεις του πάχους του ωτός έγιναν μόλις πριν την εφαρμογή αντιδραστήριο όσο και σε δεικνυόμενα χρονικά σημεία μέχρι 48 ώρες.

6Α. Ptafr – /- ποντίκια εμφανίζουν μια μείωση στην πρώιμη και καθυστερημένη αυξάνει το πάχος του αυτιού μετά από μια μόνο εφαρμογή PMA οικόπεδα πάχος

αυτί για WT και

Ptafr

-. /- Φαίνονται ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με και χωρίς PMA. Οι στατιστικά σημαντικές αλλαγές σημειωθεί σε WT ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με ΡΜΑ σε σχέση με

Ptafr

– /- ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ΡΜΑ. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή και SEM του πάχους αυτιού μετά την αφαίρεση του πάχους του αυτιού στο χρόνο 0 (n = 4-12 ποντικοί ανά ομάδα). *,

σ

& lt? 0,05? **

σ

& lt? 0,01?

t-test

.

6Β. Η συγχορήγηση της τοπικής μπλοκ CPAF PMA-που προκαλείται από την αύξηση στο πάχος του αυτιού σε όλα τα χρονικά σημεία (2-48 ώρες)

PMA-μεταβολές που προκαλούνται από το πάχος του αυτιού εκτιμήθηκαν σε WT ή

Ptafr

-. /- Ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με PMA ή PMA + CPAF. Μετά την αφαίρεση του πάχους του αυτιού στο χρόνο 0, η ικανότητα του να καταστέλλει CPAF που προκαλείται από ΡΜΑ μεταβολές πάχους του αυτιού υπολογίστηκε ως ποσοστό αναστολής της επαγόμενης από ΡΜΑ αυτί αυξάνει το πάχος. θεραπεία CPAF οδήγησε σε σημαντική αναστολή της ΡΜΑ μεταβολές που προκλήθηκαν από το πάχος του αυτιού σε όλα τα χρονικά σημεία (ρ & lt? 0,01-0,05?% αναστολή σημαντικά διαφορετική από τη μη αναστολή, Wilcoxon Signed Rank Test). επεξεργασία CPAF δεν είχε σημαντική επίδραση στην PMA-μεταβολές που προκαλούνται από το πάχος του αυτιού στο

Ptafr

– /- ποντίκια (Μια ανάλυση δείγματος, Wilcoxon Signed Rank Test). Η επί τοις εκατό αναστολή της ΡΜΑ μεταβολές που προκλήθηκαν από το πάχος του αυτιού με CPAF σε WT ποντικούς ήταν επίσης σημαντικά διαφορετική από εκείνη που παρατηρήθηκε σε

Ptafr

– /- ποντίκια (*,

ρ

& lt? 0,05? ** ,

σ

& lt? 0,01?

t-test

)

η

Αν και η παραπάνω στοιχεία δείχνουν ένα σύνθετο ρόλο για τον ΡΑΡ-R στη ρύθμιση της αρχικής ΡΜΑ-.