Αφηρημένο

Ιστορικό

Είμαστε αξιολόγησε τη χρησιμότητα της διπλής PI3K /mTOR αναστολέα NVP-BEZ235 (BEZ235) ως θεραπεία μόνο παράγοντα και σε συνδυασμό με τη συμβατική χημειοθεραπεία για τον καρκίνο του θυρεοειδούς.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Οκτώ κυτταρικές σειρές από τέσσερις τύπους του καρκίνου του θυρεοειδούς (θηλώδες, θυλακιώδες, αναπλαστικό, μυελική ) μελετήθηκαν. Η κυτταροτοξικότητα του BEZ235 και πέντε συμβατικών χημειοθεραπευτικών μόνο και σε συνδυασμό παραγόντων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία LDH. έκφραση Ποσοτική στύπωμα Western αξιολογείται των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τον κυτταρικό κύκλο, απόπτωση και τις οδούς σηματοδότησης. Κυττάρων διανομή κύκλος και η απόπτωση μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Ποντικού πλευρό αναπλαστικό καρκίνων του θυρεοειδούς (ATC) υποβλήθηκαν σε θεραπεία με από του στόματος BEZ235 καθημερινά. Βρήκαμε ότι BEZ235 ανέστειλε αποτελεσματικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του καρκίνου του όλες τις γραμμές, με ATC εμφανίζουν τη μεγαλύτερη ευαισθησία. BEZ235 αδρανοποιηθεί με συνέπεια σηματοδότησης κατάντη της mTORC1. BEZ235 γενικά επάγεται διακοπή του κυτταρικού κύκλου στη G0 /G1 φάση, και επίσης προκάλεσαν απόπτωση στα πιο ευαίσθητα κυτταρικές γραμμές. Baseline επίπεδα ριβοσωμικής πρωτεΐνης ρ-S6 (Ser235 /236) και ρ27 συσχετίζεται με την ευαισθησία BEZ235. Ανάπτυξη των όγκων ξενομοσχεύματος 8505C ATC ανεστάλη με BEZ235, χωρίς οποιαδήποτε παρατηρούμενη τοξικότητα. Η συνδυασμένη θεραπεία του BEZ235 και πακλιταξέλη επέδειξε συνέπεια συνεργική δράση κατά ATC

in vitro

.

Συμπεράσματα

BEZ235 ως ένα ενιαίο θεραπευτικό παράγοντα αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό του καρκίνου του θυρεοειδούς και έχει συνεργιστική δράση σε συνδυασμό με paclitaxel στη θεραπεία του ATC. Τα ευρήματα αυτά ενθαρρύνουν τις μελλοντικές κλινικές δοκιμές χρησιμοποιώντας BEZ235 για τους ασθενείς με αυτό το θανατηφόρο ασθένεια

Παράθεση:. Lin SF, Huang YY, Lin JD, Chou TC, Hsueh C, Wong RJ (2012) Χρησιμότητα ενός PI3K /mTOR αναστολέα (NVP-BEZ235) για καρκίνο του θυρεοειδούς θεραπεία. PLoS ONE 7 (10): e46726. doi: 10.1371 /journal.pone.0046726

Επιμέλεια: Guillermo Velasco, Πανεπιστήμιο Complutense, Ισπανία

Ελήφθη: 21η Απριλίου 2012? Αποδεκτές: 6 Σεπ του 2012? Δημοσιεύθηκε: 15 Οκτωβρίου 2012

Copyright: © Lin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο της Ταϊβάν, Δημοκρατία της Κίνας (NSC 98 έως 2314-Β-182Α-012 -MY3) (https://web1.nsc.gov.tw/) και εν μέρει με επιχορηγήσεις από το Memorial Hospital Chang Gung και Chang Gung Πανεπιστήμιο (CMRPG370581, CMRPG370582, CMRPG370583, CMRPG3A0161) (https://www.cgmh.org.tw/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του θυρεοειδούς είναι η πιο συχνή ενδοκρινική κακοήθεια, που προέρχονται από θυρεοειδή θυλακιώδη κύτταρα (θηλώδη, θυλακιώδη, κακώς διαφοροποιημένο και αναπλαστικό καρκίνο) ή παραθυλακοειδή κύτταρα C (μυελοειδούς καρκίνου). Η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του θυρεοειδούς έχει αυξηθεί κατά τα τελευταία 3 δεκαετίες, κυρίως από την αύξηση του ανίχνευση του καρκίνου θηλώδους. Σε αντίθεση, η συχνότητα εμφάνισης των ωοθυλακίων και κακώς διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς παραμένει αμετάβλητη [1], [2]. Οι περισσότεροι ασθενείς με καλά διαφοροποιημένο καρκίνο, περιλαμβανομένου του θηλώδους (PTC) και θυλακιώδη (FTC) του καρκίνου του θυρεοειδούς έχουν ευνοϊκή πρόγνωση. Παρ ‘όλα αυτά, περίπου 5% των ασθενών αναπτύσσουν ραδιενεργό ιώδιο πυρίμαχα όγκους και συνήθως προκαλεί θάνατο μέσα σε 5 [3] χρόνια. καρκίνο του θυρεοειδούς αναπλαστικό (ATC) είναι ένα σπάνιο, εξαιρετικά επιθετική και συχνά θανατηφόρα ασθένεια, με μέση επιβίωση μόλις 6 μήνες. Μυελοειδούς καρκίνου του θυρεοειδούς (MTC) αντιπροσωπεύει το 3-5% του θυρεοειδούς κακοήθειας. Η συχνότητα των περιφερειακών και μακρινό μεταστατικής νόσου στο MTC μειώνει τα ποσοστά επιβίωσης [4], [5]. Οι νέες θεραπείες για πυρίμαχα και επιθετικό καρκίνο του θυρεοειδούς που απαιτούνται για τη βελτίωση του παρόντος κακή έκβαση για τους ασθενείς αυτούς.

Το μονοπάτι PI3K /mTOR είναι σημαντική για το μεταβολισμό των κυττάρων, την επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό. Class I

ΡΙ3Κ Α είναι ετεροδιμερή που περιέχουν ένα p85 ρυθμιστικών και P110 καταλυτικές υπομονάδες που φωσφορυλιώνει φωσφατιδυλινοσιτόλης-4,5-διφωσφορική (PIP

2), αποδίδοντας φωσφατιδυλινοσιτόλη-3,4,5-τριφωσφορική (PIP

3). PIP

3 συνδυάζει με φωσφοϊνοσιτιδίου-εξαρτώμενη πρωτεϊνική κινάση 1 (ΡϋΚ1) για να φωσφορυλιώσει ΑΚΤ σε Thr308. Επιπλέον, η φωσφορυλίωση της ΑΚΤ σε Ser 473 από mTORC2 απαιτείται για πλήρη δραστικότητα του ΑΚΤ. Η ενεργοποίηση της ΑΚΤ φωσφορυλιώνει mTORC1, η οποία στη συνέχεια φωσφορυλιώνει S6 kinase1 και 4Ε-BP1, οδηγώντας σε G1 /S πρόοδο του κυτταρικού κύκλου και την αναστολή της απόπτωσης. ΡΤΕΝ είναι ένας καταστολέας όγκου που αποφωσφορυλιώνει PIP

3 και αδρανοποιεί αυτή την οδό [6], [7]. Μεταβολές αυτού του μονοπατιού σηματοδότησης συμβαίνουν συχνά σε κακοήθειες και είναι δυνητικοί στόχοι για τη θεραπεία του καρκίνου [6] – [8].

στον καρκίνο του θυρεοειδούς, γενετικές αλλοιώσεις που επηρεάζουν το μονοπάτι ΡΙ3Κ /mTOR έχουν ταυτοποιηθεί.

PIK3CA

(κωδικοποίηση ρ110α της κατηγορίας Ι

Α PI3K) αύξηση του αριθμού αντιγράφων συσχετίζεται με αυξημένο

PIK3CA

πρωτεΐνη έκφρασης.

PIK3CA

αντιγράψετε κέρδος αριθμός εμφανίζεται πιο συχνά από γενετικές μεταλλάξεις του

PIK3CA

ή

PTEN

στον καρκίνο του θυρεοειδούς [9] – [14]. Περισσότερα

PIK3CA /ΑΚΤ1

μεταλλάξεις και

PIK3CA

αντιγραφή κέρδος προσδιορίζονται στο ATC, σε σύγκριση με καλά διαφοροποιημένο καρκίνο, γεγονός που υποδηλώνει ότι δράση ΡΙ3Κ /mTOR μονοπάτι εμπλέκεται στη διαδικασία του καρκίνου de-διαφοροποίηση [ ,,,0],3], [11], [12]. Για MTC,

RET

πρωτο-ογκογονίδιο μεταλλάξεις συμβαίνουν σε όλες σχεδόν τις γνωστές περιπτώσεις (25% των MTC) και περίπου το ήμισυ των σποραδικές MTC. Αυτή η αναδιάταξη κέρδος-of-λειτουργία βελτιώνει την μεταγωγή PI3K /mTOR σηματοδότηση [15], [16]. Σε σποραδικές MTC χωρίς να

RET

μεταλλάξεις, πάνω από το 50% των δειγμάτων όγκου δείχνουν ενεργοποίηση της ΑΚΤ ή mTOR με ανοσοϊστοχημεία [16].

BEZ235 είναι ένας αναστολέας της διπλής PI3K /mTOR που μειώνει PI3K και mTOR δραστικότητα κινάσης με ανταγωνιστική σύνδεση με την ΑΤΡ-δέσμευσης σχισμή των ενζύμων αυτών [17]. BEZ235 μπορεί να τη θεραπεία του καρκίνου μέσω της επαγωγής της G0 /G1 σύλληψη του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης, και έχει εισέλθει πρόσφατα κλινικές δοκιμές φάσης ΙΙ [17] – [22]. Αυτή η μελέτη διεξήχθη για να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα του BEZ235 στη θεραπεία του καρκίνου του θυρεοειδούς από τέσσερις μεγάλες παθολογικές μορφές, συμπεριλαμβανομένης της PTC, FTC, ATC και MTC. Έχουμε διερευνηθούν και συνδυασμό αποτελεσμάτων της BEZ235 και σήμερα απασχολούνται χημειοθεραπευτικών κατά τέσσερις κυτταρικές σειρές ATC.

Αποτελέσματα

Η κυτταροτοξικότητα του BEZ235

BEZ235 ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε όλες τις γραμμές καρκίνου του θυρεοειδούς σε ένα δόση και το χρόνο τρόπο εξαρτώμενο (Σχήμα 1Α). Μια χαμηλή δόση του BEZ235 σε 6,25 nmol /L παρεμποδίζεται τουλάχιστον το 30% της κυτταρικής ανάπτυξης σε 6 από 8 κυτταρικές γραμμές την ημέρα 4. BEZ235 σε 100 nmol /L συλληφθεί ανάπτυξη περισσότερο από το 80% των κυττάρων σε σειρές ATC, 78% σε μυελώδη ( ΤΤ) και περισσότερο από 74% σε καλά διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς γραμμές. Το DM του BEZ235 την ημέρα 4 υπολογίστηκε για κάθε κυτταρική σειρά (Εικόνα 1Β). Τα 4 γραμμές ATC ήταν η πιο ευαίσθητη σε BEZ235 (dm, KAT4C = 3,9, KAT18 = 6,6, 8305C = 6,7, 8505C = 9,3 nmol /L), ακολουθούμενη από την θυλακιώδη αδιαφοροποίητο καρκίνος FRO81-2 (dm, 10.6 nmol /L) . Ο καρκίνος του θυρεοειδούς μυελοειδές (ΤΤ), το καλά διαφοροποιημένο θηλώδες (BHP7-13), και του καρκίνου του ωοθυλακίων (WRO82-1) ήταν λιγότερο ευαίσθητα (Dm 17.1, 17.2 και 43.1 nmol /L, αντίστοιχα).

Α, καμπύλες δόσης-απόκρισης λήφθηκαν καθημερινά από κύτταρα που κατεργάζονται με μια σειρά από έξι 1:01 αραιώσεις του BEZ235. Β, το DM του BEZ235 την ημέρα 4 υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό CompuSyn για κάθε κυτταρική γραμμή. κυτταρικές σειρές ATC (KAT4C, KAT18, 8305C και 8505C) είχαν τη χαμηλότερη Dm και ως εκ τούτου πιο ευαίσθητη, ακολουθήστε με θυλακιώδη καρκίνο του θυρεοειδούς αδιαφοροποίητα (FRO81-2), μυελοειδές (ΤΤ) και καλά διαφοροποιημένο θηλώδες (BHP7-13) και των ωοθυλακίων ( WRO82-1) καρκίνου.

η

Διαμόρφωση των μονοπατιών από BEZ235

σηματοδότησης

Τα αποτελέσματα της BEZ235 σχετικά με τις οδούς σηματοδότησης εξετάστηκαν σε 8505C, ΤΤ και BHP7-13 κυτταρικές σειρές (Σχήμα 2, Εικόνα S1). ρ-4E-BP1 (Thr70), ρ-4E-BP1 (Thr37 /46) και ριβοσωμική πρωτεΐνη ρ-S6 (Ser235 /236) ήταν όλα κατασταλεί με συνέπεια από BEZ235 εντός 2 ωρών και η δράση αναστολής ήταν σημαντική και ανθεκτικό, με λιγότερη από το 12% των πρωτεϊνών ανιχνεύθηκε σε 24 ώρες. ρ-ERK1 /2 (Thr 202 /Tyr204) ενεργοποιήθηκε με BEZ235 με 2,6 να 8,6 φορές αύξηση σε 2 έως 8 ώρες σε τρεις κυτταρικές γραμμές. Ωστόσο, BEZ235 είχε ετερογενή αποτελέσματα επί π-ΑΚΤ (Thr308) και ρ-ΑΚΤ (Ser473), η οποία θα μπορούσε να ανασταλεί για μια περίοδο ΤΤ και BHP7-13, αλλά ήταν συνεχώς αυξήθηκαν σε 8505C. Όπως στα κύτταρα 8505C, σε κύτταρα KAT4C BEZ235 παρομοίως παρεμπόδισε ρ-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης (Ser235 /236), αλλά ενεργοποιείται ρ-ΑΚΤ (Thr308), ρ-ΑΚΤ (Ser473) και ρ-ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204), ( Εικόνα S1 και S2A). Η ανοσοκηλίδα ποσοτικοποιήθηκε και στατιστική ανάλυση διεξήχθη για ρ-4E-BP1 (Thr37 /46) σε BHP7-13 και ριβοσωμική πρωτεΐνη ρ-S6 (Ser235 /236) σε 8505C και BHP7-13. BEZ235 ανέστειλε έντονα αυτές τις πρωτεΐνες με 2 έως 4 ώρες, και το αποτέλεσμα αυτό ήταν σταθερό για 24 ώρες (Εικόνα S1). ρ-4E-BP1 (Thr37 /46) είχε κατασταλεί σε λιγότερο από 12% από 2 έως 24 ώρες και επιτυγχάνεται στατιστική σημαντικότητα σε σύγκριση με το βασικό επίπεδο σε BHP7-13 (Ρ & lt? 0,02, t-test). Παρομοίως, ριβοσωμική πρωτεΐνη ρ-S6 (Ser235 /236) μειώθηκε σημαντικά σε λιγότερο από 7% και 13% από το 4 έως 24 ώρες σε 8505C (Ρ & lt? 0,01, t-test) και BHP7-13 (Ρ & lt? 0,02, t- test), αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι BEZ235 έχει μια ισχυρή ικανότητα να αναστέλλει mTORC1 (που οδηγεί σε μειώσεις των p-4E-BP1 και π-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης) και ασθενέστερες επιδράσεις στην mTORC2 (που οδηγεί σε ποικίλες επιπτώσεις στην π-ΑΚΤ σε Ser473).

p-ΑΚΤ (Thr308) και p-ΑΚΤ (Ser473) αυξήθηκε σε 8505C για περισσότερο από 24 ώρες. p-ΑΚΤ (Thr308) και p-ΑΚΤ (Ser473) μειώθηκε παροδικά σε ΤΤ και BHP7-13. ρ-4E-BP1 (Thr70), ρ-4E-BP1 (Thr37 /46) και ριβοσωμική πρωτεΐνη ρ-S6 (Ser235 /236) μειώθηκαν σταθερά από 2 ώρες κατά τη διάρκεια 24 ωρών σε τρεις κυτταρικές γραμμές. BEZ235 προκάλεσε ταχεία αύξηση του ρ- ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204) κατά 2 έως 4 ώρες σε τρεις κυτταρικές γραμμές.

Η

Επιδράσεις της BEZ235 επί του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης

KAT4C , 8505C, ΤΤ, BHP7-13 και WRO82-1 εκτέθηκαν σε BEZ235 για 24 ή 72 ώρες (Σχήμα 3Α). Σε σύγκριση με μη επεξεργασμένα κύτταρα ελέγχου, BEZ235 στο 6,25, 25 και 100 nmol /L επαγόμενη αύξηση κλάσματα των κυττάρων σε G0 /G1phase σε όλες τις κυτταρικές σειρές. Ένα αντιπροσωπευτικό κυτταρική γραμμή BHP7-13 κατέδειξε την επίδραση του BEZ235 στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου (Σχήμα 3Β).

Α, ανάλυση του κυτταρικού κύκλου με μετρήσεις της περιεκτικότητας σε DNA αποκάλυψε αυξανόμενες δόσεις BEZ235 συσσωρεύεται κυττάρων σε G0 /G1 με 24 ώρες (KAT4C, 8505C, BHP7-13 και WRO82-1) και 72 ώρες (ΤΤ). Β, ένας εκπρόσωπος κυτταρική γραμμή, BHP7-13 αποδειχθεί σύλληψη του κυτταρικού κύκλου σε G0 /G1 φάση. C, πρωτεΐνες που ρυθμίζουν τον κυτταρικό κύκλο αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ανοσοστυπώματος σε κύτταρα κατεργασμένα με BEZ235 σε 100 nmol /L. ρ53 μειώθηκε κατά 2 έως 4 ώρες σε 8505C και ΤΤ. BEZ235 μειώνεται σταδιακά p21 σε ΤΤ και BHP7-13. ρ27 αυξήθηκε σε όλες τις κυτταρικές σειρές. Κυκλίνη D1 μειώθηκε σταδιακά σε 8505C και BHP7-13. D, η απόπτωση μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής για τη μέτρηση των κυττάρων υπο-G1 αποκάλυψε ότι BEZ235 αυξάνει αναλογίες των κυττάρων υπο-G1 σε KAT4C και KAT18 στις 96 ώρες. Ε, ανοσοκηλίδος έδειξε προκαλούμενη BEZ235 υποβάθμιση του δημίου της κασπάσης-3 σε KAT4C και KAT18.

Η

εξετάστηκε Τα αποτελέσματα του BEZ235 (100 nmol /L) για την έκφραση των πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου G0 /G1 σχετίζονται ( Το Σχήμα 3C, Σχήμα S2B και S3). Η μετάβαση του G0 /G1 στην S φάση είναι μία πολύπλοκη διαδικασία που περιλαμβάνει κυκλίνες, εξαρτώμενες από κυκλίνη κινάσες (CDKs) και σχετιζόμενες πρωτεΐνες, συμπεριλαμβανομένων των ρ53, ρ21, ρ27 και την κυκλίνη D1 [31]. ρ53 είναι ένας καταστολέας όγκου που μπορεί να ενεργοποιούν ρ21, και οι δύο ρ21 και ρ27 είναι αναστολείς της G1 εξαρτώμενων από κυκλίνη κινασών.

BEZ235 αυξήθηκε ρ27 από 4 έως 24 ώρες σε όλες τις κυτταρικές σειρές, με μέγιστη αυξήσεις από 3,5 έως 723,2 – φορές σε KAT4C, ΤΤ και BHP7-13. Μια τέτοια αναλογία αύξησης δεν ήταν μετρήσιμη σε 8505C λόγω μη ανιχνεύσιμο σήμα σε μη επεξεργασμένα κύτταρα. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε για έκφραση ρ27 σε ΤΤ, και επιτυγχάνεται σημαντικότητα σε 8 ώρες, σε σύγκριση με βασική έκφραση (P = 0.019, t-test) (Σχήμα S3C). Αυτά τα δεδομένα είναι συνεπή με τα ευρήματα μας G0 /G1 διακοπή του κυτταρικού κύκλου. BEZ235 είχε ποικίλες επιδράσεις στην έκφραση του ρ53, ρ21 και την κυκλίνη D1 σε 4 κυτταρικές σειρές, που δείχνει ότι μπορεί να υπάρχουν ποικίλες συνεισφορές αυτών των πρωτεϊνών επί επηρεάζουν την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου. Μια σταθερή αύξηση του p27 στα κύτταρα αντιμετωπίζονται BEZ235 πιθανό ασκείται ανασταλτική επίδραση στην εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου στη G0 /G1. Είναι πιθανό ότι η σύλληψη G0 /G1 του κυτταρικού κύκλου είναι το αποτέλεσμα μιας συνδυασμένη επίδραση της /πρωτεΐνης που σχετίζονται G1 περισσότερες από μία G0 επηρεάζονται από BEZ235. Εναλλακτικά, η επαγωγή του ρ27 μόνη της μπορεί να είναι αρκετή για να συλλάβει την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου. Σε μια p53 αρνητική PC3M κυτταρική γραμμή, BEZ235 επαγόμενη έκφραση ρ27 και πλήρη διακοπή του κυτταρικού κύκλου στη φάση G1, χωρίς να επάγουν ρ21 [17]. Αυτή η μελέτη έδειξε G1 αναστολή του κυτταρικού κύκλου που προκαλείται από BEZ235 δεν είναι απαραίτητο να απαιτούν συνεργασία με p53 και p21.

Η αναστολή του μονοπατιού PI3K /mTOR μπορεί επίσης να οδηγήσει σε απόπτωση [6], [8]. Η ικανότητα του BEZ235 να προκαλούν αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο σε κύτταρα του θυρεοειδούς καρκίνο εξερευνήθηκε (Σχήμα 3D). Σε σύγκριση με τον έλεγχο, BEZ235 στα 25 και 100 nmol /L σημαντικά την απόπτωση που επάγεται όπως μετράται με την αναλογία των κυττάρων υπο-G1 σε 96 ώρες σε KAT4C. Παρόμοια ευρήματα παρατηρήθηκαν σε KAT18, με BEZ235 σε 6,25, 25 και 100 nmol /L οδήγηση ένα αυξανόμενο ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων. Ωστόσο, BEZ235 απέτυχε να δείξει αύξηση των κυττάρων υπο-G1 σε 8505C, ΤΤ, BHP7-13 και WRO82-1.

Για να επικυρώσετε την επαγωγή της απόπτωσης σε KAT4C και KAT18 από BEZ235, κασπάσης-3 ήταν αξιολογούνται με ανοσοστύπωμα μετά από 72 ώρες αγωγής (Εικόνα 3Ε, Σχήμα S4). Σε γενικές γραμμές, οι υψηλότερες δόσεις BEZ235 επαγόμενης περισσότερο αποδόμηση αποπτωτικών δήμιου κασπάσης-3, με λιγότερο από 12% της κασπάσης-3 ανιχνεύθηκε σε 100 nmol /L σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι αποπτωτικών μηχανισμών εξηγήσει την κυτταροτοξικότητα του BEZ235 σε KAT4C και KAT18. Αυτά τα ευρήματα είναι συνεπή με προηγούμενες αναφορές του BEZ235 προκαλεί απόπτωση σε ορισμένες, αλλά όχι όλες, οι κυτταρικές γραμμές [17] – [22] .Οι μηχανισμούς που διέπουν τις ποικίλες δυνατότητες των BEZ235 να επάγει απόπτωση σε διαφορετικές δόσεις και σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές παραμένουν ασαφείς [6] – [8].

ευαισθησία BEZ235 συσχετίζεται με αρχική έκφραση της ριβοσωμικής πρωτεΐνης p-S6 (Ser235 /236) και p27

Η Dm του BEZ235 καλύπτει ένα ευρύ φάσμα σε όλη 8 διαφορετικές κυτταρικές σειρές, με ένα 11-πλάσια διαφορά μεταξύ KAT4C και WRO82-1.To διερευνήσει πιθανούς βιοδείκτες που συσχετίζονται με την ευαισθησία του BEZ235, η βασική έκφραση των πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην PI3K /mTOR και RAS /RAF /ERK μονοπατιών και των κυττάρων κύκλου περίπου συνδεδεμένες πρωτεΐνες αξιολογήθηκαν σε 6 κυτταρικές σειρές (Σχήμα 4Α). Η ευαισθησία των έξι κυτταρικές σειρές σε BEZ235 διατάχθηκε σύμφωνα με την αξία Dm.

Α, τα επίπεδα κατά την έναρξη των πρωτεϊνών που σχετίζονται με σηματοδότηση μεταγωγή και του κυτταρικού κύκλου αξιολογήθηκαν με ανοσοαποτύπωση. Η αλληλουχία των πρωτεϊνών που φορτώνονται ήταν σύμφωνα με γερμανικά μάρκα. Η έκφραση της ριβοσωμικής πρωτεΐνης p-S6 (Ser235 /236) μειώθηκε σταδιακά από KAT4C να BHP7-13, ενώ π-27 έδειξε την αντίθετη σειρά. Η έκφραση των άλλων πρωτεϊνών έδειξε μία τυχαία κατανομή. Β, πυκνότητες Band απεικονίστηκαν και ποσοτικά. Οι σχέσεις μεταξύ Dm και της πρωτεΐνης έκφρασης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας συντελεστές συσχέτισης του Pearson, και γραφήματα αντλήθηκαν χρησιμοποιώντας KAT4C. Η έκφραση της ριβοσωμικής πρωτεΐνης p-S6 (Ser235 /236) είχε μια θετική συσχέτιση, και ρ27 μια αντίστροφη συσχέτιση, με ευαισθησία σε BEZ235.

Η

Η έκφραση της ριβοσωμικής πρωτεΐνης p-S6 (Ser235 /236 ) μειώνεται βαθμιαία κατά μήκος αύξηση Dm, ενώ το επίπεδο της ρ-27 αυξάνει βαθμιαία σε όλη την αύξηση Dm. Στατιστική σχέσεις αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας συντελεστή συσχέτισης Pearson (Εικόνα 4Β). Η έκφραση της p-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης (Ser235 /236) είχε μια σημαντική συσχέτιση (R

2 = 0,8475, Ρ = 0,009) με ευαισθησία BEZ235, ενώ p27 είχε μια σημαντική αντίστροφη συσχέτιση (R

2 = 0,8117, P = 0,014). Μια επαναλαμβανόμενη ανοσοκηλίδα p27 έδειξε συνεπή αποτελέσματα (Παράρτημα S1). Η έκφραση της βασικής γραμμής ρ-ΑΚΤ (Thr308), ρ-ΑΚΤ (Ser473), ρ-4E-BP1 (Thr70), ρ-4E-BP1 (Thr37 /46), ρ-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης (Ser240 /244), ρ -ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204), ρ53, ρ21 και την κυκλίνη D1 απέτυχε να αποκαλύψει τυχόν συσχετίσεις με ευαισθησία BEZ235 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

θεραπεία BEZ235 όγκων πλευρό ποντικών

αθυμικών γυμνών ποντίκια με ξενομοσχεύματα πλευρό του 8505C χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη των θεραπευτικών αποτελεσμάτων και της ασφάλειας των BEZ235

in vivo

. Τα ζώα με καθιερωμένους όγκους πλευρό παρόμοιων όγκων εκκίνησης υποβλήθηκαν σε θεραπεία με από του στόματος BEZ235 (50 mg /kg) ή φορέα ημερησίως για 25 ημέρες και ακολούθησε μέχρι την ημέρα 31 (Σχήμα 5Α). BEZ235 καθυστέρηση ανάπτυξης του όγκου και η διαφορά των όγκων του όγκου μεταξύ BEZ235 και ποντίκια ελέγχου ήταν στατιστικά σημαντική κατά την ημέρα 21 (94.1 ± 26,4 mm

3 και 335,1 ± 78,5 mm

3, Ρ = 0.009, t-test) και την ημέρα 24 (109,9 ± 29,6 mm

3 και 403,1 ± 112,8 mm

3, Ρ = 0.019, t-test). Η διαφορά των όγκων του όγκου χάσει τη σημασία την ημέρα 28, 4 ημέρες μετά την αγωγή που είχε διακοπεί (402,7 ± 123,6 χιλιοστά

3 και 750,3 ± 198,3 χιλιοστά

3, P = 0,15, t-test). Εκπρόσωπος ποντίκια φωτογραφήθηκαν για την τελευταία ημέρα της θεραπείας (Εικόνα 5Β).

Α, καθημερινή καθετηριασμό του BEZ235 (50 mg /kg) από του στόματος καταστέλλει την ανάπτυξη του όγκου 8505C. Οι διαφορές του μεγέθους του όγκου μεταξύ BEZ235 και την ομάδα ελέγχου επιτεύχθηκε στατιστική σημαντικότητα τις ημέρες 21 και 24. Σημασία έχει χάσει την 28η ημέρα, 4 ημέρες μετά τη θεραπεία που είχε διακοπεί. Β, εκπρόσωπος ποντίκια με όγκους ξενομοσχεύματος 8505C (βέλη) φωτογραφήθηκαν για την τελευταία ημέρα της θεραπείας (ημέρα 24). C, BEZ235 δεν οδηγεί σε καμία απώλεια βάρους, σε αγωγή και ποντίκια ελέγχου (Ρ & gt? 0.05 και για τις δύο συγκρίσεις). D, BEZ235 καταστέλλει ρ-ΑΚΤ (Thr308) και ρ-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης (Ser235 /236) από 2 ώρες και κασπάσης-3 με 4 ώρες σε βιολογικό περιβάλλον. PCNA ήταν ελαφρώς μειωμένη σε πρώιμη περίοδο. Ε, έκφραση της ριβοσωμικής πρωτεΐνης ρ-S6 σε καρκινικά κύτταρα ανιχνεύεται με ανοσοχρώση στις υποδεικνυόμενες περιόδους (μεγέθυνση, χ 200). Αυτά τα αποτελέσματα ήταν σε συνεπή με τα αποτελέσματα κηλίδος Western.

Η

BEZ235 δεν μείωσε σημαντικά το σωματικό βάρος μεταξύ των δύο ομάδων κατά την διάρκεια της περιόδου μελέτης (σχήμα 5C). Στοματική BEZ235 μειωμένη φωσφορυλίωση της ΑΚΤ και S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης από 2 ώρες και επιτυγχάνονται μεγαλύτερες ανασταλτικές επιδράσεις της σε 4 ώρες με μόλις 2% και 10% του ρΑΚΤ και PS6 υπόλοιπα, αντιστοίχως. Αυτή η ανασταλτική επίδραση παρέμεινε για 24 ώρες σε όγκους ξενομοσχεύματος (Σχήμα 5D, Εικόνα S5). PCNA ελαφρώς και παροδικά καταστέλλονται από 2 έως 4 ώρες. Ωστόσο, σημαντική υποβάθμιση της κασπάσης-3 χώρα κατά 4 ώρες, με μόνο το 4% της κασπάσης-3 υπόλοιπα από 24 ώρες. Ανοσοϊστοχημεία των ριβοσωμικής πρωτεΐνης ρ-S6 (Ser235 /236) σε όγκους που έλαβαν θεραπεία με BEZ235 παρομοίως έδειξαν μείωση χρώση, τα περισσότερα αισθητά από 2 έως 6 ώρες (Σχήμα 5Ε).

Αλληλεπίδραση BEZ235 και χημειοθεραπεία σε κύτταρα ATC

Μελετήσαμε το συνδυασμό των χημειοθεραπευτικών παραγόντων και BEZ235 κατά ATC. Πέντε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες (paclitaxel, ιρινοτεκάνη, ετοποσίδη, 5-FU και η δοξορουβικίνη) απέδειξαν κυτταροτοξικά αποτελέσματα σε μια δόση και το χρόνο εξαρτώμενο τρόπο σε τέσσερις κυτταρικές σειρές ATC (Σχήμα S6). Τα δεδομένα χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό της διάμεση δόση επίδραση (DM) κατά την ημέρα 4 με τη χρήση του λογισμικού CompuSyn (Σχήμα 6Α).

Α, Dm υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας δεδομένα κυτταροτοξικότητας χρησιμοποιώντας λογισμικό CompuSyn για κάθε φάρμακο σε κάθε κυτταρική σειρά σε ημέρες 4. Β, οι κυτταροτοξικές επιδράσεις του BEZ235 και χημειοθεραπευτικών παραγόντων (paclitaxel, ιρινοτεκάνη και ετοποσίδη) μόνη ή σε συνδυασμό μετά από μια θεραπεία 4 ημερών σε ATC αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας προσδιορισμούς LDH. Ο συνδυασμός του BEZ235 και πακλιταξέλης έδειξαν συνεργιστικά αποτελέσματα σε όλες τις κυτταρικές σειρές. Ο συνδυασμός του BEZ235 και irinotecan είχαν αυξημένες κυτταροτοξικές επιδράσεις στις υψηλότερες δόσεις, αλλά αποκάλυψε περιορισμένη ή καθόλου ευεργετικά θεραπευτικά αποτελέσματα σε χαμηλότερες δόσεις. Ο συνδυασμός του BEZ235 συν ετοποσίδης εμφανίζεται λίγο επιπλέον κυτταροτοξικότητα. C, ο ΚΚΠ του BEZ235 και κάθε χημειοθεραπευτικό παράγοντα υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό CompuSyn. BEZ235 συν πακλιταξέλη παρουσίασαν συνεργιστικά αποτελέσματα σε όλες τις κυτταρικές σειρές, με CI & lt? 0,8 σε περισσότερες συνθήκες. BEZ235 συν ιρινοτεκάνη είχε συνεργιστική σε ανταγωνιστικές δράσεις σε 8305C, 8505C και KAT18, και ανταγωνιστικές επιδράσεις στο KAT4C. BEZ235 συν ετοποσίδη αποδεικνύεται κυρίως ανταγωνιστικά αποτελέσματα σε όλες τις κυτταρικές σειρές. Οι οριζόντιες διακεκομμένες γραμμές στο CI = 1 συντάχθηκαν για τις διακρίσεις της συνεργίας (CI & lt? 1) και τον ανταγωνισμό (CI & gt? 1). D, οι τυπικές περιοχές τιμών DRI για χημειοθεραπευτικά σε συνδυασμό με το BEZ235. Με την παρουσία του BEZ235, paclitaxel είχε ως επί το πλείστον τις μεγαλύτερες dris σε 8505C, KAT4C και KAT18, και έδειξε επίσης ευνοϊκή dris σε 8305C.

Η

Αυτά Dm του paclitaxel, ιρινοτεκάνη και ετοποσίδη είναι εφικτό στον ορό των ασθενών , και είναι κλινικά σημαντική [32] – [34]. Παρά το γεγονός ότι η δοξορουβικίνη χρησιμοποιείται κλινικά για αναπλαστικό καρκίνο του θυρεοειδούς, η σχετικά υψηλή Dm σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές υπονοείται ότι κλινικά σχετική δοσολογία δεν είναι εφικτό σε ασθενείς ορό και ως εκ τούτου αποκλείστηκε από αυτές τις μελέτες. Αλληλεπιδράσεις μεταξύ BEZ235 και paclitaxel, ιρινοτεκάνη, και ετοποσίδη αξιολογήθηκαν (Σχήμα 6Β). Ο συνδυασμός του BEZ235 και paclitaxel βελτίωσε σημαντικά την κυτταροτοξικότητα υπεράνω θεραπεία μονοθεραπεία σε τέσσερις κυτταρικές σειρές. BEZ235 σε συνδυασμό με ιρινοτεκάνη ενισχυμένη επίσης θεραπευτική αποτελεσματικότητα, ιδιαίτερα όταν επηρεάστηκαν περισσότερα κύτταρα. BEZ235 συν ετοποσίδη μόνο ελαφρώς αυξημένη κυτταροτοξικότητα.

Οι αλληλεπιδράσεις μεταξύ BEZ235 και κάθε χημειοθεραπευτικό παράγοντα προσδιορίστηκαν από τον υπολογισμό του CI με Chou-Talalay εξίσωση (Σχήμα 6C). Συνεργιστικά αποτελέσματα προσδιορίστηκαν για το συνδυασμό των BEZ235 και πακλιταξέλη σε όλες τις γραμμές ATC (CI, 8305C = 0,77 – 0,86, 8505C = 0,43 – 0,59, KAT4C = 0,66 – 0,81 και KAT18 = 0,64-0,71).

Η συνδυασμός BEZ235 με ιρινοτεκάνη κυμαίνονταν από συνεργιστική σε ανταγωνιστή σε 8305C, 8505C και KAT18 (CI, 0,86 έως 1,34, 0,97 έως 1,23 και 0,74 έως 1,14) και ήταν ανταγωνιστής στην KAT4C (CI, 1,09 έως 1,36). Ο συνδυασμός του BEZ235 με ετοποσίδη ήταν ελαφρώς συνεργική να ανταγωνιστή σε 8305C (CI, 0,95-1,15) και ανταγωνιστή σε 8505C, KAT4C και KAT18 (CI, 01.16 – 01.17, 01.13 – 02.05 και 01.05 έως 01.19, αντιστοίχως).

Αυτά τα αποτελέσματα αποδεικνύουν ότι η πακλιταξέλη BEZ235 και είχε τις καλύτερες συνδυασμένες επιδράσεις στη θεραπεία ATC. Η υπολογιζόμενη DRI του χημειοθεραπευτικού παράγοντος σημαίνει την πτυχή της δόσης φαρμάκου που θα μπορούσε να μειωθεί με την παρουσία του BEZ235 (Σχήμα 6D). Μεταξύ των τριών χημειοθεραπευτικών παραγόντων, πακλιταξέλη είχε τις μεγαλύτερες dris σε 8505C (2,55 έως 4,2), KAT4C (02/25 – 03/19) και KAT18 (2,59 – 2,63), και έδειξαν επίσης ευνοϊκή dris σε 8305C (1,55 – 2,16).

Συζήτηση

BEZ235 αποτελεσματικά ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε οκτώ σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς που προέρχονται από τέσσερις μεγάλες ιστολογικές μορφές. ATC ήταν η πιο ευαίσθητη, ακολουθούμενη από θυλακιώδη αδιαφοροποίητα, μυελοειδές και καλά διαφοροποιημένο καρκίνο του θυρεοειδούς κυτταρικές γραμμές. Τα καρκινικά κύτταρα που φιλοξενούν ένα PI3K κέρδος-of-λειτουργίας μετάλλαξη ή

PTEN

διαγραφή επιδεικνύουν υψηλότερη δραστηριότητα μονοπατιού PI3K /mTOR και μεγαλύτερη ευαισθησία σε BEZ235 [22]. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η ATC βασίζεται στη δραστηριότητα PI3K /mTOR, και η διακοπή αυτής της οδού με BEZ235 παρεμποδίζει την ανάπτυξη ATC πιο σημαντικά από ό, τι άλλες ιστολογίες καρκίνο του θυρεοειδούς. Οι μέσες δόσεις σχετικά χαμηλή επίδραση του BEZ235 σε όλες τις σειρές καρκίνου του θυρεοειδούς (& lt? 44 nmol /L) υποδηλώνουν ότι BEZ235 μπορεί να έχουν χρησιμότητα για την αγωγή ενός φάσματος θυρεοειδούς κακοήθειας. Πυρίμαχα καρκίνου που αναπτύσσονται ενεργοποίηση της ΡΙ3Κ σηματοδότησης /mTOR στη διαδικασία της όγκου de-διαφοροποίηση μπορεί να είναι ιδιαίτερα ελκυστικοί στόχοι για θεραπεία.

Η αποτυχία του BEZ235 να καταστέλλει ρ-ΑΚΤ (Ser473) σε 8505C και KAT4C μπορεί να είναι σχετίζεται με μια αρνητική αναδραστική αναστολή. Έχει προηγουμένως δειχθεί ότι η αναστολή της mTORC1 οδηγεί σε απενεργοποίηση του S6 κινάση 1, η οποία μπορεί στη συνέχεια κατακλύζει το ανασταλτικό αποτέλεσμα του BEZ235 επί mTORC2, ενεργοποιεί mTORC2, και αυξάνει ρ-ΑΚΤ (Ser473) σε 8505C [35]. Πριν εκθέσεις έδειξαν επίσης ότι οι χαμηλότερες δόσεις BEZ235 αποτυγχάνουν να αναστείλουν π-ΑΚΤ (Ser473) σε ορισμένες κυτταρικές σειρές, και υψηλότερες δόσεις BEZ235 μπορεί να ξεπεράσει την αρνητική ανατροφοδότηση της mTORC1 /S6 κινάση 1 βρόχος ανάδρασης [18], [20]. Αν και π-ΑΚΤ (Ser473) ενεργοποιήθηκε σε 8505C και KAT4C, BEZ235 είχε καλύτερη ανασταλτική δράση σε αυτές τις κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με το ΤΤ και BHP7-13, γεγονός που υποδηλώνει ότι άλλα μόρια που επηρεάζονται από BEZ235 διαδραματίσει έναν πιο σημαντικό ρόλο στον καθορισμό του θεραπευτικού αποτελέσματος.

Βρήκαμε ότι η έκφραση της ριβοσωμικής πρωτεΐνης p-S6 (Ser235 /236) και p27 συσχετίζεται με την ευαισθησία του BEZ235 στον καρκίνο του θυρεοειδούς. S6 ριβοσωμική πρωτεΐνη είναι μεταγενέστερος του S6 κινάση 1, η οποία ενεργοποιείται από mTORC1 [6] – [8]. Η φωσφορυλίωση της ριβοσωμικής πρωτεΐνης S6 αυξάνει μεταφραστικού ελέγχου της πρωτεϊνικής σύνθεσης και ενισχύει την ανάπτυξη των κυττάρων. Τα κύτταρα με υψηλότερα επίπεδα ριβοσωμικής πρωτεΐνης ρ-S6 (Ser235 /236) είναι πιο επιρρεπή σε BEZ235, υποδηλώνοντας ότι η αναστολή της mTORC1 και S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης είναι η κύρια θεραπευτική δράση του BEZ235.

Ριβοσωμική πρωτεΐνη

ρ-S6 (Ser235 /236) έχει επίσης πρόσφατα αναγνωριστεί ως ένας δείκτης για την πρόβλεψη θεραπευτικό αποτέλεσμα ενός αναστολέα mTOR σε σάρκωμα [36]. Σε αυτή τη μελέτη, ο καρκίνος του θυρεοειδούς γραμμές με υψηλότερες εκφράσεις του ρ-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης (Ser235 /236) έδειξαν επίσης χαμηλότερα επίπεδα ρ27. Το εύρημα αυτό υποδηλώνει S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης είναι ένας καταστολέας της ρ27 στον καρκίνο του θυρεοειδούς, και μπορεί να εξηγήσει γιατί τα δύο ρ-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης (Ser235 /236) και ρ27 ήταν προγνωστικούς παράγοντες ευαισθησίας σε BEZ235. Είναι ενδιαφέρον, ρ27 ήταν προηγουμένως σημειωθεί να έχουν μια αντίστροφη συσχέτιση με τη δραστικότητα της ΡΙ3Κ /mTOR μονοπάτι στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα, και η καταστολή της οδού αυτής αυξάνει ρ27 [37].

4E-BP1 είναι μια άλλη πρωτεΐνη κατάντη mTORC1. Αναστολή της mTORC1 οδηγεί σε αποφωσφορυλίωση (ενεργοποίηση) του 4Ε-BP1, ενισχύοντας την δέσμευση του 4Ε-BP1to eIF4E, και το μπλοκάρισμα της μετάφρασης πρωτεϊνών και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων [7], [8]. Αν και BEZ235 επηρεάζει τόσο S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης και 4Ε-BP1 αποτελεσματικά, μόνο ρ-S6 ριβοσωμικής πρωτεΐνης (Ser235 /236) έκφραση προβλέπει για την ευαισθησία στην BEZ235 σε αυτή τη μελέτη. Στον καρκίνο των ωοθηκών, βιοδείκτες πρόβλεψη επιδεκτικότητας του BEZ235 αναφέρθηκαν [22], και η έκφραση του ρ-4E-BP1 (Thr37 /46) είχε συσχετίζεται με την ευαισθησία του BEZ235.

Εκτός από την αναστολή της προόδου του κυτταρικού κύκλου , BEZ235 προκάλεσε απόπτωση σε δύο από τα έξι κυτταρικών γραμμών. Η αναστολή της προόδου του κυτταρικού κύκλου είναι μια γνωστή επίδραση του BEZ235, ακόμη και σε χαμηλότερες δόσεις (≤100 nmol /L). Ωστόσο, η απόπτωση εμφανίζεται μόνο σε μερικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου και είναι πιο εμφανής σε υψηλότερες δόσεις (100-1000 nmol /L) του BEZ235 [17] – [22]. BEZ235 αποτελεσματικά ανέστειλε mTORC1, ένα μόριο που ελέγχει τόσο του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης που μπορεί να οδηγήσει σε διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης σε KAT4C και KAT18 [7]. Η κατανόηση των μηχανισμών μέσω των οποίων BEZ235 συμβάλλει στην αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο, θα απαιτήσει περαιτέρω μελέτη.

ATC είναι μακράν η πιο επιθετικές από τις τέσσερις μεγάλες ιστολογικές μορφές του καρκίνου του θυρεοειδούς. Η χημειοθεραπεία έχει εφαρμοστεί για τη θεραπεία ασθενών με ATC με ποσοστά ανταπόκρισης περίπου 20 έως 50%. Μυθιστόρημα στρατηγικές για τη βελτίωση τα αποτελέσματα που χρειάζεται. Μεταξύ τρεις αγωγές θεραπείας συνδυασμού, BEZ235 σε συνδυασμό με πακλιταξέλη είχε την καλύτερη συνεργιστική δράση σε τέσσερις κυτταρικές σειρές ATC. Τα καρκινικά κύτταρα με την ενεργοποίηση του ΡΙ3Κ σηματοδότησης /mTOR είναι πιο ανθεκτικά στην πακλιταξέλη, και η συν-χορήγηση των αναστολέων ΡΙ3Κ /mTOR με πακλιταξέλη βελτιώνει θεραπευτικά αποτελέσματα [38] – [40]. Αυτό το εύρημα είναι κλινικά σημαντική δεδομένου ότι η πακλιταξέλη, ένας σταθεροποιητής μικροσωληνίσκων, έχει αποδειχθεί για να επιτευχθεί ένα ποσοστό ανταπόκρισης 53% σε ασθενείς με ATC σε μια κλινική δοκιμή φάσης ΙΙ [41]. Ο συνδυασμός του BEZ235 με βινκριστίνη φάρμακο μικροσωληνίσκων αποπολυμερισμό αποκάλυψε επίσης ελπιδοφόρα δράση στην θεραπευτική αγωγή του σαρκώματος [20]. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι οι συνδυαστικές επιπτώσεις των BEZ235 με αναστολείς της DNA τοποϊσομεράσης τύπου Ι (ιρινοτεκάνη) ή τύπου II (ετοποσίδη) στη θεραπεία της ATC ήταν σε μεγάλο βαθμό ανταγωνιστική. Παρόμοια ανταγωνιστικές δράσεις της αναστολής τόσο της τοποϊσομεράσης δραστικότητα και ΡΙ3Κ μονοπάτι /ΑΚΤ έχουν παρατηρηθεί σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [42]. Κύτταρα σε φάση S είναι πιο επιρρεπή σε topoisomearse αναστολέων. BEZ235 που προκαλείται από τη συσσώρευση των κυττάρων στην φάση G0 /G1 μπορεί συνεπώς να μειώσει το θεραπευτικό πλεονέκτημα της ταυτόχρονης θεραπείας με αναστολείς της τοποϊσομεράσης, εξηγώντας τις δυσμενείς επιπτώσεις συνδυασμό BEZ235 με ιρινοτεκάνη και ετοποσίδη.

Η καθημερινή θεραπεία του BEZ235 σημαντικά καθυστερημένος 8505C ξενομόσχευμα ανάπτυξη του όγκου κατά τη διάρκεια της θεραπευτικής περιόδου. Το ανασταλτικό αποτέλεσμα ήταν λιγότερο εμφανή μετά την διακοπή της θεραπείας, γεγονός που υποδηλώνει ότι η παρατεταμένη θεραπεία μπορεί να είναι αναγκαία για να διατηρηθεί η θεραπευτική αποτελεσματικότητα. BEZ235 υποβαθμιστεί σημαντικά κασπάσης-3 σε όγκους 8505C ξενομοσχευμάτων, υποδεικνύοντας αυτήν την ένωση μπορεί να επάγει απόπτωση

in vivo

. Μετά τη διακοπή του BEZ235, ο όγκος των όγκων ξενομοσχεύματος 8505C συνέχεια αυξήθηκε. Αυτή η διεύρυνση του όγκου μετά από διακοπή της θεραπείας μπορεί να οφείλεται σε ομαλοποίηση του μεγέθους των κυττάρων και επανάληψη του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, όπως mTOR και κατάντη πρωτεΐνες του S6 κινάση 1 και 4Ε-ΒΡ1 παίζουν καθοριστικό ρόλο από την άποψη αυτή [43]. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική απώλεια βάρους ή ασθένεια παρατηρήθηκε κατά την περίοδο της μελέτης, υποδηλώνοντας ότι αυτή η θεραπεία μπορεί να έχει μια πολλά υποσχόμενη προφίλ ασφάλειας.

Μια προηγούμενη έκθεση έδειξε ότι η παρουσία γενετικών αλλοιώσεων του

ΡΤΕΝ

,

PIK3CA

και

ΑΚΤ1

συσχετίζεται καλά με ευαισθησία σε έναν αναστολέα ΑΚΤ, αλλά είχε ασθενέστερη συσχετίσεις με έναν αναστολέα mTOR [44]. Αυτό απόκλισης υποδηλώνει ότι η δραστηριότητα του mTOR δεν εξαρτάται μόνο από τη δραστηριότητα PI3K /AKT. Τα αναφερόμενα δεδομένα των γενετικών αλλοιώσεων σε καρκινικές κυτταρικές γραμμές 8 θυρεοειδούς συνοψίστηκε (προσάρτημα S2). Εντοπίστηκαν περιορισμένες γενετικές αλλαγές σε RAS /RAF /ERK και PI3K μονοπάτια /mTOR. Τα διαθέσιμα δεδομένα δεν δείχνουν καμία συσχέτιση μεταξύ των γενετικών ανωμαλιών του ΡΙ3Κ οδών /mTOR και την ευαισθησία του BEZ235, καθώς δεν μετάλλαξη αυτής της οδού σε αυτές τις κυτταρικές σειρές που αναφέρθηκαν. Οι μεταλλάξεις του p53 και BRAF, επίσης, φαίνεται να μην συσχετίζονται με την ευαισθησία του BEZ235, γιατί τόσο ευαίσθητο (8305C) και λιγότερο ευαίσθητα (WRO82-1) κυτταρικές σειρές φιλοξενούν τις μεταλλάξεις. Εξερεύνηση των γενετικών αλλαγών του mTOR, ο κύριος στόχος του BEZ235, μπορεί να παρέχει κάποια μέρα πληροφοριών που μπορεί να προβλέψει θεραπευτική αποτελεσματικότητα.

Η αναστολή της mTORC1 μπορεί να ενεργοποιήσει την οδό ΜΑΡΚ μέσω PI3K-εξαρτώμενο βρόχος ανάδρασης [45], γεγονός που εξηγεί γιατί BEZ235 είχε δει εδώ για να ενεργοποιήσετε ERK1 /2 στον καρκίνο του θυρεοειδούς κύτταρα. Συνδυάζοντας BEZ235 με έναν αναστολέα στόχευση ΜΑΡΚ οδού μπορεί να είναι μια πιθανή προσέγγιση για την ενίσχυση της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας. Πρόσφατα, ο συνδυασμός ενός αναστολέα παν-RAF και BEZ235 δείχθηκε ότι επάγει διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε G0 /G1 φάση, και είχε ευεργετικά αποτελέσματα συνδυασμού στη θεραπεία του καρκίνου του θυρεοειδούς [46]. Οι τομές με αιματοξυλίνη.