Αφηρημένο

Ιστορικό και Στόχοι

Η χρόνια παγκρεατίτιδα και ο καρκίνος του παγκρέατος είναι που χαρακτηρίζεται από εκτεταμένη ίνωση μεσολάβηση αστεροειδών κυττάρων, και την τρέχουσα θεραπευτική ανάπτυξη περιλαμβάνει στόχευση του παγκρέατος αλληλεπιδράσεις στρώμα του καρκίνου και των όγκων-ξενιστή. Πρόσφατα στοιχεία έχουν δείξει ότι κυκλοφορεί μυελού των οστών που προέρχονται βλαστικά κύτταρα (BMDC) συμβάλλουν στη συμπαγή όργανα. Έχουμε ως στόχο να καθορίσει το ρόλο των κυκλοφορούντων αιμοποιητικών κυττάρων στο φυσιολογικό και νοσούντων πάγκρεας.

Μέθοδοι

Ολόκληρο το μυελό των οστών συλλέχθηκαν από αρσενικά ποντίκια δότη β-ακτίνης-EGFP και μεταμοσχεύθηκαν σε ακτινοβολημένα θηλυκά παραλήπτη C57 /BL6 ποντίκια. Η χρόνια παγκρεατίτιδα προκλήθηκε με επαναλαμβανόμενες ενέσεις κερουλεΐνη, ενώ καρκινογένεσης προκλήθηκε με μια ένεση ενδοπαγκρεατική διμεθυλοβενζανθρακενίου (DMBA). Φαινότυπος των εμφυτευμένων κυττάρων προερχόμενων από δότη εντός του παγκρέατος εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία, ανοσοφθορισμό και

in situ υβριδισμού

.

Αποτελέσματα

GFP θετικά κύτταρα ήταν ορατά στον εξωκρινή παγκρεατικό επιθήλια από 3 μήνες μετά τη μεταμόσχευση. Αυτά εμφάνισαν μορφολογία acinar και ήταν θετικά για αμυλάση και συγκολλητίνη φυστικιού. Τα ποντίκια χορηγούνται κερουλεΐνη αναπτυχθεί χρόνια παγκρεατίτιδα ενώ DMBA ποντικών εμφάνισαν πρόδρομος βλαβών και του καρκίνου του παγκρέατος. Δεν κυψελοειδή κύτταρα ταυτοποιήθηκαν ως προερχόμενα από δότη με τη διακοπή της θεραπείας καιρουλίνης, ωστόσο σε σπάνιες περιπτώσεις προέρχονται από μυελό οστών κυψελοειδή κύτταρα παρατηρήθηκαν κατά τη διάρκεια του παγκρέατος αναγέννηση. Αυξημένη πρόσληψη BMDC παρατηρήθηκε εντός δεσμοπλαστικού στρώματος, συμβάλλοντας με τον πληθυσμό ενεργοποιημένων κυττάρων παγκρεατικών αστεροειδής (PASC) σε δύο ασθένειες. Έκφραση των δεικτών αστεροειδών κυττάρων CELSR3, ΡΒΧ1 και GFAP παρατηρήθηκε σε BMD σχετίζονται με τον καρκίνο PaSCs, ωστόσο, σχετίζονται με τον καρκίνο, αλλά δεν παγκρεατίτιδα που σχετίζονται με PaSCs BMD, εξέφρασε τον καρκίνο PASC συγκεκριμένη CELSR3 δείκτη.

Συμπεράσματα

Αυτή η μελέτη αποδεικνύει ότι BMDC μπορεί να ενσωματώσει στο πάγκρεας και να εγκρίνει την διαφοροποιημένη κατάσταση του διαμερίσματος εξωκρινών. BMDC που συμβάλλουν στην ενεργοποιημένος πληθυσμός PASC σε χρόνια παγκρεατίτιδα και παγκρεατικό καρκίνο έχουν διαφορετικούς φαινοτύπους, και μπορεί να παίζει σημαντικό ρόλο σε αυτές τις ασθένειες. Επιπλέον, η μεταμόσχευση μυελού των οστών μπορεί να παρέχει ένα χρήσιμο μοντέλο για τη μελέτη των αλληλεπιδράσεων όγκου-ξενιστή στον καρκίνο και παγκρεατίτιδα

Παράθεση:. Scarlett CJ, Colvin EK, Pinese Μ, Chang DK, Morey AL, Μασγκρόουβ ΕΑ, et al. (2011) στρατολόγηση και ενεργοποίηση του παγκρέατος αστεροειδή κύτταρα από το μυελό των οστών σε καρκίνο του παγκρέατος: ένα μοντέλο όγκου-Host αλληλεπίδρασης. PLoS ONE 6 (10): e26088. doi: 10.1371 /journal.pone.0026088

Επιμέλεια: Hana Algul, Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου, Γερμανία

Ελήφθη: 19 Αύγ του 2010? Αποδεκτές: 19 Σεπ 2011? Δημοσιεύθηκε: 14 Οκτωβρίου 2011

Copyright: © 2011 Scarlett et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Cancer Institute της Νέας Νότιας Ουαλίας (CINSW), το Εθνικό Σύστημα Υγείας και του Συμβουλίου Ιατρικής Έρευνας (NHMRC) της Αυστραλίας, το Αντικαρκινικό Συμβούλιο Νέας Νότιας Ουαλίας, Ίδρυμα Κλινικής του Αγίου Βικεντίου, το Royal Australian College of Surgeons, η αυστραλιανή Καρκίνου Ίδρυμα Ερευνών, και το RT Hall Trust. AVB, CJS, DKC, το ΕΑΜ και EKC υποστηρίζονται από υποτροφίες από το CINSW. RLS είναι Ανώτερος κύριος συνεργάτης του NHMRC και κατέχει το Petre πρόεδρος του Breast Cancer Research. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του παγκρέατος (PC) παραμένει ένα από τα πιο καταστροφικές μορφές καρκίνου, και είναι η τέταρτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις δυτικές κοινωνίες με ένα ρυθμό επιβίωσης μικρότερο από 5% [1]. Τίποτα εκτός από παγκρεατικό εκτομής σε ένα ποσοστό των ασθενών (10-20%), προσφέρει κάθε θεραπευτικού δυναμικού, με χημειοθεραπευτικούς παράγοντες που πληρούν περιορισμένη επιτυχία [2]. Η χρόνια παγκρεατίτιδα είναι σημαντικός παράγοντας κινδύνου για την ανάπτυξη του καρκίνου του παγκρέατος και οι δύο χαρακτηρίζονται από εκτεταμένη ίνωση που προκαλείται αστεροειδής κύτταρο, το οποίο στην περίπτωση του καρκίνου του παγκρέατος διευκολύνει την εξέλιξη του καρκίνου και μετάσταση [3], [4]. Πρόσφατα, Olive

κ.ά.

[5] έδειξε ότι, με στόχο το στρώμα που χρησιμοποιούν αναστολείς της σηματοδότησης hedgehog, βελτιώνει σημαντικά την παράδοση των χημειοθεραπευτικών παραγόντων στο επιθηλιακό διαμέρισμα του όγκου, και αν και το αποτέλεσμα ήταν παροδικό, βελτιωμένη συνολική αποτελεσματικότητα. Περαιτέρω, Kraman

et al

απέδειξαν ότι η στόχευση συγκεκριμένων υπο-πληθυσμούς των στρωματικών κυττάρων για την καταστροφή θα μπορούσε να αφαιρέσει την ανασταλτική τους δράση στην ανοσολογική απόκριση του ξενιστή στον όγκο [6].

Παρατηρήσεις που έγιναν κατά τα τελευταία χρόνια έχουν δείξει ότι τα ενήλικα βλαστικά κύτταρα έχουν αξιοσημείωτη ευελιξία στην ρεπερτόρια διαφοροποίηση τους. Αυτή η πλαστικότητα επιτρέπει ενήλικα βλαστικά κύτταρα, ιδίως αυτών που προέρχονται μυελού των οστών, για να εμφυτευθούν εναλλακτικές μη-αιμοποιητικών θέσεις και transdifferentiate σε τύπους κυττάρων κατάλληλη για τη νέα τους θέση. Αυτό είναι ιδιαίτερα εμφανές όταν ο παραλήπτης όργανο έχει υποστεί βλάβη [7], [8]. προερχόμενα κύτταρα του μυελού των οστών (BMDC) μπορούν είτε να εμφυτευθούν ή ασφάλεια να υιοθετήσουν ή να επαναπρογραμματιστούν, με την διαφοροποιημένη κατάσταση του συγκεκριμένου επιθήλια [9] (αναθεωρούνται στο [10]). Αυτό υποδηλώνει ότι η ενδογενής βλαστικών κυττάρων ενός οργάνου, και ο ρόλος του στην ανάπτυξη και την αναγέννηση, δεν περιορίζεται σε κάθε συγκεκριμένο όργανο, αλλά μπορεί να είναι ένα δυναμικό σύστημα που περιλαμβάνει κυκλοφορούσα BMDC με βλαστοκυττάρων κόγχη περιβάλλοντα που ρυθμίζουν την πρόσληψη, πολλαπλασιασμό και διαφοροποίηση [7], [11]. Αυτό μπορεί να έχει σημαντικές επιπτώσεις όσον αφορά την εξέλιξη των καρκίνων σε πολλά συμπαγή όργανα, συμπεριλαμβανομένου και του παγκρέατος. Houghton

κ.ά.

έδειξαν ότι σε ένα μοντέλο

Helicobacter felis επάγεται

γαστρική καρκινογένεση, την ανάπτυξη των μεταπλασία και δυσπλασία συνδέθηκε με την εμφύτευση και την επέκταση του πληθυσμού BMDC, τελικά προκαλώντας γαστρική αδενοκαρκίνωμα [12]. Παρατηρήσεις σε γυναίκες που έλαβαν μεταμοσχεύσεις μυελού των οστών από αρσενικούς δότες, και που στη συνέχεια ανέπτυξαν ένα καρκίνο, τα οποία προσδιορίζονται ότι μυοϊνοβλάστες (ισοδύναμο του παγκρέατος αστεροειδής κυττάρου) εντός αυτούς τους όγκους που προέρχονται από το μυελό των οστών του δότη [13].

Η πλειοψηφία των προηγούμενες μελέτες αξιολόγηση του ρόλου της BMDC σε παγκρεατικά αναγέννηση και επισκευή έχουν επικεντρωθεί στην αποκατάσταση ενδοκρινή λειτουργία μετά από τραυματισμό των κυττάρων των νησιδίων [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21]. Λίγες μελέτες έχουν επικεντρωθεί στη συμβολή των BMDC στην ανάπτυξη και την αναγέννηση του εξωκρινούς παγκρέατος, ή ο ρόλος τους στον καρκίνο του παγκρέατος. Wang

et al

[22] περιγράφουν τη συμβολή της BMDC στο σχηματισμό παγκρεατικού πόρου σε νεογέννητα ποντίκια, Marrache

et al

[23], και Watanabe

et al

[24 ] επιδεικνύουν σε ένα μοντέλο κερουλεΐνης επάγεται χρόνιας παγκρεατίτιδας που BMDC συμβάλλουν στον πληθυσμό παγκρεατικών κυττάρων stellate υποδηλώνοντας ένα ρόλο στην επιδιόρθωση των ιστών, ενώ πιο πρόσφατα Παν

κ.ά.

[25] προσδιόρισε συμβολή του BMDC στην παγκρεατική stellate κυτταρικό πληθυσμό σε ένα μοντέλο αρουραίου της χημικής καρκινογένεσης.

Εδώ έχουμε δημιουργήσει ένα ισχυρό μοντέλο μεταμόσχευσης μυελού των οστών ολόκληρο για να δείξει ότι σε παγκρεατικά καρκινογένεση, και σε χρόνια παγκρεατίτιδα, BMDC συμβάλλουν σημαντικά στην ενεργοποιημένη παγκρεατικών κυττάρων αστεροειδή (PASC ) του πληθυσμού. Εκείνοι που σχετίζονται με τον καρκίνο του παγκρέατος εκφράζουν γονίδια χαρακτηριστικό περινεοπλασματικής αστεροειδή κύτταρα σε σύγκριση με εκείνους που δεν σχετίζονται με κακοήθεια, υποδηλώνοντας ότι BMDC μπορεί να παίξει ένα σημαντικό ρόλο στην υποστήριξη του παγκρέατος καρκινογένεση. Επιπλέον, τα μοντέλα της μεταμόσχευσης μυελού των οστών μπορεί να αποδειχθεί χρήσιμη στην διερεύνηση των αλληλεπιδράσεων του όγκου-ξενιστή

in vivo

.

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Όλα τα ζωικά το έργο εγκρίθηκε από το Garvan Institute of Medical Research Επιτροπή /Σεντ Βίνσεντ Νοσοκομείο ζώων Δεοντολογίας (πρωτόκολλο # 06/53).

μεταμόσχευση μυελού των οστών

Ολόκληρο το μυελό των οστών συλλέχθηκαν από αρσενικό C57 /BL6 -TgN (ACTbEGFP) IOsb /J (Εργαστήριο Jackson, Bar Harbor, μΕ, USA? εφεξής η β-ακτίνης-EGFP ποντικού) με έκπλυση του κνημών και μηριαίων με ϋυΐββοοο Eagle Τροποποιημένο Medium (DMEM? Invitrogen, Eugene, OR, USA) με χρήση βελόνας 26G. Τα κύτταρα διηθήθηκαν μέσα από ένα σουρωτήρι κύτταρο 70 μΜ, μετρήθηκαν, μετά πλύθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε PBS. 5 × 10

6 β-ακτίνης-EGFP κύτταρα μυελού των οστών μεταμοσχεύθηκαν σε ακτινοβολημένα (950 Rads? Gammacell 40 exactor? Nordion International Inc. Καναδάς) λήπτη 4-8 εβδομάδων σε ηλικία θηλυκών C57 /Β6 ποντικούς μέσω της ουραίας φλέβας. Οι ποντικοί έλαβαν αντιβιοτικό νερό (40 mg /5 ml τριμεθοπρίμης + 200 mg /5 ml σουλφαμεθοξαζόλη) για 14 ημέρες. Ενώ η χρήση της ενισχυμένης πράσινης φθορίζουσας πρωτεΐνης (GFP) έχει γίνει ο δείκτης της επιλογής για πολλούς τύπους μεταμόσχευσης κυττάρων και γράμμωσης πειράματα σήμανση, δεν είναι σαφές ότι η GFP που εκφράζεται σε βλαστικά κύτταρα του μυελού των οστών θα συνεχίσει να εκφράζεται σε μη αιμοποιητικά ιστούς μετά την πυρηνική επαναπρογραμματισμό [26], [27], [28]. Συνεπώς, πραγματοποιήσαμε ακατάλληλα μεταμοσχεύσεις φύλο για να παρακολουθείτε την τύχη των κυττάρων του δότη προέρχονται από τη χρήση του χρωμοσώματος Υ γονοτυπικό δείκτη για την επικύρωση Τα ευρήματα που παρατηρήθηκαν με τη χρήση της αναφοράς GFP.

Κανονική Παγκρέατος

Τα ποντίκια θυσιάστηκαν σε 3 (n = 12), 6 (n = 12), 9 (n = 12) και 12 (n = 11) μήνες μετά τη μεταμόσχευση (Σχήμα 1). Σε κάθε χρονικό σημείο, το πάγκρεας συλλέχθηκε, κατά το ήμισυ και τοποθετήθηκαν σε είτε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη έπειτα ενσωματωμένα σε παραφίνη, ή ενσωματωμένο σε κρύο Ενωση Tissue-Tek OCT (Sakura Finetek, Torrance, CA, USA) και καταψύχθηκαν γρήγορα σε υγρό Ν

2. Cellular φαινότυπος των κυττάρων που προέρχονται δότη εντός του παγκρέατος αξιολογήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία, ανοσοφθορισμό και

in situ υβριδισμού

για το χρωμόσωμα Υ. Για την παρακολούθηση της μεταμόσχευσης του δότη β-ακτίνης-EGFP του μυελού των οστών, το περιφερικό αίμα αξιολογήθηκε για GFP θετικότητα χρήση κυττάρων ενεργοποιημένων με φθορισμό (FACS) σε 1 μήνα μετά τη μεταμόσχευση, τότε κατά την θυσία (Πίνακας 1).

5 × 10

6 κύτταρα μυελού των οστών από αρσενικά ποντίκια β-ακτίνης-EGFP μεταμοσχεύθηκαν σε θανάσιμα ακτινοβολημένα θηλυκά C57 /Β6 ποντικούς. Για την αξιολόγηση των κανονικών παγκρέατος, παγκρέατα συνελέγησαν σε 3, 6, 9 και 12 μήνες μετά τη μεταμόσχευση. Για χρόνια παγκρεατίτιδα, στους ποντικούς χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκώς κερουλεΐνη για 10 εβδομάδες στη συνέχεια θυσιάζονται μετά την παύση της θεραπείας, καθώς και 3, 6 και 9 μήνες μετά τη θεραπεία για την αξιολόγηση αναγέννηση. Για τον καρκίνο του παγκρέατος, στον 1 μήνα μετά τη μεταμόσχευση τα ποντίκια χορηγήθηκε ένα ενδοπαγκρεατική ένεση 7,12-διμεθυλοβενζανθρακένιο (DMBA) και θυσιάστηκαν με 4, 8, 12 ή & gt? 12 μήνες μετά τη θεραπεία ϋΜΒΑ ή όταν ανιχνεύθηκε μια παγκρεατική μάζα

Η

χρόνιας παγκρεατίτιδας

Ένα μήνα μετά τη μεταμόσχευση, τα ποντίκια ενδοπεριτοναϊκή ένεση με 50 μg /kg κερουλεΐνης (# 152860? MP Biomedicals Inc., Solon, ΟΗ, USA) 5 φορές πάνω από 4 συνεχόμενες ώρες, δύο φορές την εβδομάδα για 10 εβδομάδες όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29]. Οι ποντικοί θανατώθηκαν μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας κερουλεΐνη (n = 8) και 3 (n = 8), 6 (n = 8) και 9 (n = 8) μήνες μετά κερουλεΐνη θεραπεία για την αξιολόγηση του παγκρέατος αναγέννηση. Ένα επιπλέον βραχίονα αξιολογήθηκε παγκρεατική αναγέννηση σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με κερουλεΐνη στους 6 μήνες μετά τη μεταμόσχευση και θυσιάζονται σε 3 μήνες μετά τη διακοπή της θεραπείας κερουλεΐνη (n = 4) (Σχήμα 1).

Χημική Υπόδειγμα καρκίνο του παγκρέατος

ένα μήνα μετά τη μεταμόσχευση, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με ισοφλουράνιο και ένα αριστερό πλευρικό υποπλεύρια τομή στο κοιλιακό τοίχωμα διεξήχθη και η σπλήνα εξωτερικευθεί να αποκαλύψει το σώμα και την ουρά του παγκρέατος. 1 mg /50 μΐ 7,12-διμεθυλοβενζανθρακένιο (DMBA? Sigma-Aldrich, St Louis, ΜΟ, USA) διαλύθηκε σε PBS /0.1% TWEEN και εγχύεται στην ουρά του παγκρέατος με χρήση βελόνας 25G όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30 ]. Η σπλήνα και το πάγκρεας επιστράφηκαν στην κοιλιακή κοιλότητα και το περιτόναιο /μυ στρώματα και δέρμα ράφτηκαν κλειστά. Οι ποντικοί θυσιάστηκαν μεταξύ 1-4 (n = 16), 5-8 (η = 6), 9-12 (n = 4) και & gt? 12 (n = 2) εβδομάδες μετά την αγωγή με DMBA ή όταν ανιχνεύθηκε μια παγκρεατική μάζα ακόλουθες κοιλιακή ψηλάφηση (Σχήμα 1). Όπως και με το μοντέλο της χρόνιας παγκρεατίτιδας, ένα επιπλέον βραχίονα αξιολογήθηκε η συμβολή των BMDC να παγκρεατικής καρκινογένεση μετά την επαγωγή με ΟΜΒΑ τόσο σε 6 (n = 10) και 9 (n = 10) μήνες μετά την μεταμόσχευση.

ανάλυση FACS

κυττάρων περιφερικού αίματος και του μυελού των οστών αναλύθηκαν για έκφραση GFP με χρήση ενεργοποιημένων με φθορισμό κυττάρων (FACS) (Πίνακας 1).

περιφερικού αίματος.

Σε 1 μήνα μετά μεταμόσχευση και μετά τη θυσία, αίμα συλλέχθηκε μέσω εξαέρωσης ουρά και συλλέγονται σε BD μικροδοχεία με λίθιο /ηπαρίνη (BD, Franklin Lakes, NJ, USA). 1000 μl ΡΑΟδΙ ^ νδβ (1Χ) στη συνέχεια προστέθηκε και επωάστηκε για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Οι σωλήνες φυγοκεντρήθηκαν στα 1000 g για 5 λεπτά, το υπερκείμενο απομακρύνθηκε και τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 200 μΐ ψυχρού PBS επί πάγου μέχρι την ανάλυση.

Bone Marrow.

μυελός των οστών ξεπλένεται από το μηριαία οστά των μεταμοσχευμένων ποντικών με κρύο PBS χρησιμοποιώντας βελόνα 26G, διηθείται μέσα από ένα σουρωτήρι κύτταρο 70 μΜ και κρατήθηκε επί πάγου μέχρι την ανάλυση. διαλογή κυττάρων ανάλυση ενεργοποιημένης με φθορισμό (FACS) διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα BD FACS CANTO (BD, Franklin Lakes, NJ, USA).

Ανοσοϊστοχημεία /ανοσοφθορισμού /In-situ υβριδισμού

ανοσοϊστοχημεία.

παραφίνη ενσωματωμένα τμήματα παγκρεατικού ιστού (4 μm) απο-κερωμένο και επανυδατώθηκαν πριν Η &? χρώση Ε για την αξιολόγηση ιστολογική μορφολογία. Για ανοσοϊστοχημεία, αποκάλυψη αντιγόνου επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας διάλυμα στόχων ανάκτησης (s2367, ρΗ 9.0: ϋΑΚΟ Corporation, Carpenteria, California, USA) για 30 λεπτά σε λουτρό ζέοντος ύδατος. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποσβέστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% (5 λεπτά), ξεπλύθηκαν σε ρυθμιστικό ϋΑΚΟ (ϋΑΚΟ Corporation) στη συνέχεια πλακίδια αποκλείσθηκαν με ϋΑΚΟ μπλοκ Protein (10 λεπτά? ΫΑΚΟ Corporation). Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν για 60 λεπτά με πρωτογενές αντίσωμα (βλέπε παρακάτω), τότε ένα σύστημα ανίχνευσης αντι-κουνελιού σημασμένο πολυμερές υπεροξειδάση κρένου χρησιμοποιήθηκε (30 λεπτά? Envision + αντι-κουνελιού? ΫΑΚΟ Corporation) και 3,3′-διαμινοβενζιδίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένα υπόστρωμα. Counter-χρώση έγινε με αιματοξυλίνη Mayer του (ϋΑΚΟ Corporation).

ανοσοφθορισμού.

Για την ανάλυση ανοσοφθορισμού, 4 μm τομές παραφίνης απο-κερωμένο, επανυδατώθηκαν και αντιγόνο ανακτάται όπως περιγράφεται παραπάνω. Οι τομές στη συνέχεια δεσμεύτηκαν με μπλοκ Πρωτεΐνη (10 λεπτά), στη συνέχεια πρωτογενή αντισώματα (βλέπε κατωτέρω) επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, πλύθηκαν σε ρυθμιστικό ϋΑΚΟ (3 χ 5 λεπτά) και επωάστηκαν σε δευτερεύοντα αντισώματα (βλέπε παρακάτω) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Φθορισμού χρώση των μεμβρανών κορυφής εξωκρινή κυψελοειδή κύτταρα διεξήχθη χρησιμοποιώντας ροδαμίνη-συζευγμένα συγκολλητίνη φυστικιού (ΡΝΑ? 1:200? Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Οι πλάκες ξεπλένονται στη συνέχεια αντιχρωματίζεται και τοποθετούνται σε Vectashield σκληρό οριστεί μέσο με DAPI στερέωσης (H-1500? Vector Laboratories)

πρωτογενή αντισώματα:. GFP κουνελιού πολυκλωνικό (A11122? Invitrogen, Eugene, OR, USA? 1: 1000 IHC, 1:200 IF), GFP κατσίκα πολυκλωνικά (ab5450? Abcam, Cambridge, MA, USA? 1:1000), αμυλάση κατσίκα πολυκλωνικά (C-20? Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, USA? 1 :200 IF), δεσμίνης (Thermo Scientific, Fremont, CA, USA? 1:200 IHC), α-λείου μυός μονοκλωνικό ακτίνη ποντικού (κλώνος 1Α4? A5228? Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA? 1: 1: 500 IHC /IF), βιμεντίνη (SP-20? Epitomics, Burlingame, CA, USA? 1:200 IHC), Cytokeratin 5/6 (D-13? Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, USA? 1: 100 IHC), γλοιακή ινιδική όξινη πρωτεΐνη (GFAP) κουνελιού πολυκλωνικό (Z0334? ϋΑΚΟ Corporation, Carpenteria, California, USA? δύο παρα δέκα), προ-Β-κυττάρων λευχαιμίας παράγοντα μεταγραφής 1 (ΡΒΧ1) κουνελιού πολυκλωνικό (ab12001? Abcam, Cambridge , MA, USA? 1:100), καντερίνη EGF ΟΤΔ επτά-pass υποδοχέα G-τύπου 3 (CELSR3) κουνελιού πολυκλωνικό (ab12958? Abcam, Cambridge, MA, USA? 1:100)

Δευτερογενή Αντισώματα:. Αντι-κουνελιού Cy5 (1:250? # 711-176-152? Jackson ImmunoResearch, West Grove, ΡΑ, USA), αντι-κατσίκας Cy5 (1:250? # 705-175-003? Jackson ImmunoResearch, West Grove, ΡΑ, USA), αντι-κατσίκας Cy3 (1:500? # 715-166-147? Jackson ImmunoResearch), αντι-ποντικού Cy3 (1:500? # 715- 166-150? Jackson ImmunoResearch)

In-situ υβριδισμού

Ολόκληρο το ποντίκι Υ χρωμόσωμα ανιχνευτής σημαίνεται με φλουορεσκεΐνη (Star * FISH, # 1189-YMF-01?.. εφαρμόστηκε Cambio Ltd) έως 3 um τομές παραφίνης εξής αποπαραφίνωση σε ξυλόλιο, προ-κατεργασία με διάλυμα ϋΑΚΟ ανάκτησης στόχου (TRS: 30 λεπτά στους 95 ° C), πέψη με πρωτεάση στους 37 ° C για 15 λεπτά και μετά σταθεροποίηση σε ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη για 10 λεπτά. θέση υβριδοποίησης επελέγη με αναφορά σε μια σειριακή τομή χρωματίστηκαν με Η + Ε. 3.5 μλ ανιχνευτής εφαρμόστηκε κάτω από καλυπτρίδα 15 x 15 mm σφραγίζονται με τσιμέντο καουτσούκ. Co-μετουσίωση στους 90 ° C ακολουθήθηκε από ολονύκτιο υβριδισμό στους 37 ° C σε ένα θερμικό κυκλοποιητή. Μετά υστέρων υβριδισμό εκπλύσεις σε 2Χ SSC /0.3% ΝΡ-40 (2 × 2 λεπτά στους 72 ° C), τα πλακίδια ξηραίνονται και αντίθετα με DAPI. Signal αναλύθηκε με μικροσκόπιο Zeiss Axioscope II με ψηφιακό AxioCam και λογισμικό AxioVision.

Αποτελέσματα

Η επιτυχής ανασύσταση του μυελού των οστών σε μεταμοσχευμένα ποντίκια ήταν αποδείξιμη στο περιφερικό αίμα σε 1 μήνα μετά τη μεταμόσχευση με χρήση ανάλυσης FACS για έκφραση GFP. Επιπλέον, η μακροχρόνια εμφύτευση επαληθεύτηκε κατά τον χρόνο της θυσίας. GFP θετικότητα του περιφερικού αίματος και του μυελού των οστών σε κάθε χρονικό σημείο ήταν συγκρίσιμη με εκείνη του δότη β-ακτίνης-EGFP ποντικού (Blood, 70,07% ± 3,90 SEM? Marrow, 30,87% ± 1,60 SEM). (Πίνακας 1)

BMDC και κανονική εξωκρινείς του παγκρέατος

από 3 μήνες μετά τη μεταμόσχευση, μεμονωμένα, προερχόμενα από δότη GFP θετικά κύτταρα παρατηρήθηκαν κατά την εξωκρινή παγκρεατικό επιθηλιακό διαμέρισμα του μη επεξεργασμένου ελέγχου μεταμοσχευθεί ποντικούς (Σχήμα 2Α). Μικρές GFP θετικά κύτταρα που είχαν ατρακτοειδόμορφα, ή ανοσολογική κυτταρική μορφολογία ήταν διάσπαρτα σε όλο το διάμεσο (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), ενώ σε σπάνιες περιπτώσεις GFP θετικών κυττάρων με μορφολογία κυψελοειδή ήταν παρόντα στο διαμέρισμα εξωκρινή. Μετά από περαιτέρω εξέταση χρησιμοποιώντας συν-ανοσοφθορισμού, αυτά τα κύτταρα ήταν θετικά για GFP, αμυλάση και συγκολλητίνη φυστικιού (Σχήμα 2C, 2D), δείκτες ειδικούς για παγκρεατικά κυψελιδικά κύτταρα, υποδηλώνοντας ότι BMDC μπορεί να ενσωματώσει στον ενήλικο πάγκρεας και να εγκρίνει την διαφοροποιημένη κατάσταση του εξωκρινούς διαμέρισμα. Συνεκτική συστάδες 2-3 κυττάρων παρατηρήθηκαν από 6 μήνες μετά τη μεταμόσχευση, ενώ περιστασιακές ολόκληρο κυψελοειδή μονάδες αποτελούνται προερχόμενων από δότη GFP θετικά κύτταρα ήταν επίσης εμφανής (Σχήμα 2Β, 2Ε, 2F).

GFP ανοσοϊστοχημείας του παγκρέατα αναγνώριση μεμονωμένων GFP + ve κυττάρων προερχόμενα από δότη με κυψελοειδή κυτταρική μορφολογία από 3 μήνες μετά τη μεταμόσχευση (Α), και περιστασιακή ολόκληρο μονάδες λοβιώδη (Β), παρατηρήθηκαν από 6 μήνες μετά τη μεταμόσχευση. εικόνες ανοσοφθορισμού προέρχονται δότη GFP + ve κυψελοειδή κύτταρα συν-χρώση θετικά τόσο για GFP και της αμυλάσης (C, E)? και GFP και PNA (D, F).

Η

BMDC και παγκρεατική βλάβη

Ένα πειραματικό βραχίονα για την αξιολόγηση εμφύτευση του δότη BMDC στο πάγκρεας ειδικής ζημίας (χρόνια παγκρεατίτιδα) και η αναγέννηση ήταν επίσης καθιερωμένος. Μετά από 10 εβδομάδες θεραπείας κερουλεΐνης, τα ποντίκια είχαν πάγκρεας που είχε ατροφήσει, και περι-acinar ίνωση αναπτύχθηκε ως ένα λεπτό πλέγμα σε όλο τον αδένα εξωκρινών. Ενδο-acinar αυλούς είχαν διασταλεί. Ορισμένες μονάδες acinar φάνηκε να αναπτύξει ένα πορογενές φαινότυπο με την απώλεια των κόκκων ζυμογόνου και πιο κεντρική τοποθεσία πυρήνες. Αυτά τα σωληνοειδή συγκροτήματα αποτελούνταν από τους κυλίνδρους με ένα ευρύ αυλό με επένδυση από μια μονοστιβάδα ισοπέδωσε αγωγού-όπως κύτταρα (Σχήματα S1B, E) [31], [32]. παγκρέατα ελέγχου ήταν ιστολογικά φυσιολογικό (Εικόνα S1A). Sirius red χρώση ενδιάμεσου κολλαγόνου ήταν πιο εμφανή στα ποντίκια που αντιμετωπίστηκαν κερουλεΐνη, ενδεικτικό της χρόνιου τραυματισμού. Χρώση σε ζώα ελέγχου ήταν εντοπισμένη κυρίως γύρω αγωγών, μικρά αιμοφόρα αγγεία με λεπτές λωρίδες που εκτείνονται μεταξύ των μεγαλύτερων λόβια, και όχι γύρω από μεμονωμένα κυψελοειδή μονάδες. Στα ζώα που έλαβαν κερουλεΐνη periacinar κολλαγόνο αυξήθηκε, γύρω επιμέρους λοβίων μονάδων, παρόμοια με την ίνωση που παρατηρείται σε ανθρώπινα χρόνια παγκρεατίτιδα (Σχήματα S1D, E).

Με την διακοπή της θεραπείας κερουλεΐνη (3 μήνες μετά τη μεταμόσχευση αμέσως μετά τον τραυματισμό) εκεί αυξήθηκε BMDC πρόσληψη στο πάγκρεας (Εικόνα 3Α). Αυτό περιλαμβάνεται πρόσληψη GFP θετικών φλεγμονωδών κυττάρων όπως τα λεμφοκύτταρα (θετικά για έκφραση CD45? Δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα) και των μακροφάγων, ενώ ορισμένα BMDC βρίσκεται διάμεσα ήταν θετικά για δεσμίνη, και ατρακτοειδόμορφα περι-κυψελοειδή κύτταρα κατείχαν την μορφολογία των παγκρεατικών αστεροειδή κύτταρα ( PASC του? Εικόνα 3C). Δεν κυψελοειδή κύτταρα ταυτοποιήθηκαν ως προερχόμενα από δότη (GFP θετικά) σε αυτό το πρώιμο χρονικό σημείο.

Σημειώστε την αυξημένη παρουσία GFP θετικών κυττάρων εντός της διάμεσο των τραυματισμένων παγκρέατος, συμπεριλαμβανομένων φλεγμονώδους διηθήματος (Α), σε σύγκριση με η αναγεννημένη παγκρέατος (Β)? καθώς και τα θετικά ατρακτοειδόμορφα κύτταρα GFP (μαύρα βέλη) με ένα παγκρεατικό κύτταρο αστεροειδή μορφολογία (C) που περιβάλλει λοβιώδη μονάδες (α)? (D) το Υ χρωμόσωμα FISH επιβεβαίωσε την ελάχιστη συνεισφορά του BMDC στην αναγέννηση των εξωκρινών παρεγχύματος, ενώ παρατηρήθηκαν κάποιες Υ θετικά λεμφοκύτταρα σε όλη την παρέγχυμα (λευκά βέλη).

Η

BMDC και αναγέννηση του παγκρέατος

με την διακοπή της κερουλεΐνης θεραπείας, τα ζώα αφέθηκαν να ανακτήσουν την αξιολόγηση της συμβολής των BMDC στην αναγέννηση του παγκρέατος. Μετά από 3 μήνες ανάκαμψης μετά τη διακοπή της θεραπείας κερουλεΐνη, παγκρέατα από ζώα που υπέστησαν αγωγή επέστρεψαν σε ιστολογικά φυσιολογικό φαινότυπο (Σχήμα S1c), που μοιάζει με εκείνη των μη επεξεργασμένων ζώων. Η μείωση της διάμεσης και periacinar κολλαγόνο ήταν επίσης ορατή (Σχήμα S1F). Όσο για κανονικό πάγκρεας, μόνο σε σπάνιες περιπτώσεις σε ενιαία και μικρές συστάδες των GFP θετικών κυττάρων κυψελιδικά εμφάνιση αμυλάση και PNA θετικότητα παρατηρήθηκαν, γεγονός που υποδηλώνει ότι BMDC μπορούσε να εκδώσει την διαφοροποιημένη κατάσταση του διαμερίσματος εξωκρινών κατά την αναγέννηση του παγκρέατος. Διάμεση GFP θετικά φλεγμονώδη κύτταρα μειώθηκαν σε αριθμό καθώς ο χρόνος αναγέννησης αυξημένη (Σχήμα 3Β). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν για ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με κερουλεΐνη ακόλουθες μακροχρόνια εμφύτευση (6 μήνες μετά τη μεταμόσχευση) και αφέθηκε να ανακάμψει.

In situ υβριδισμού

για το χρωμόσωμα Υ επιβεβαίωσε ότι δεν υπήρξε αύξηση της συμβολής των BMDC στο εξωκρινές πάγκρεας με αναγέννηση (Σχήμα 3D).

BMDC και τον καρκίνο του παγκρέατος

Δύο εβδομάδες μετά την ένεση του DMBA, σωληνωτά συγκροτήματα ήταν παρόντες εστιακά μεταξύ κυψελοειδή κύτταρα με πόρου μεταπλασία δίπλα σε κανονικό ιστό κυψελοειδή παρατηρήθηκε από 1 μήνα. Από 1 μήνα μετά τη θεραπεία DMBA, παγκρεατική πρόδρομες βλάβες (mPanIN) με διάφορους βαθμούς δυσπλασίας ήταν παρόντες. Εστίες αδενοκαρκινώματος σε σχέση με mPanIN παρατηρήθηκαν στο πάγκρεας από 2 μήνες μετά την DMBA, ενώ πόρου αδενοκαρκίνωμα (sarcomatoid παραλλαγή) που αναπτύσσονται σε 3-4 μήνες (Εικόνες S1G-Ι). Αυτός ο φαινότυπος έμοιαζε πολύ με αυτή που παρατηρείται σε ένα παρόμοιο μοντέλο που χρησιμοποιείται από Kimura et al [30].

Είμαστε αξιολόγησε τη συμβολή του BMDC να δεσμοπλαστικού στρώματος, ιδίως στον πληθυσμό των παγκρεατικών αστεροειδών κυττάρων, αξιολογώντας συνεργασία έκφραση της GFP και ο αστεροειδής κύτταρο επιλεκτικούς δείκτες δεσμίνης, γλοιακή ινιδική όξινη πρωτεΐνη (GFAP), α-λείου μυός ακτίνη (αSMA), της οποίας η συν-έκφραση ορίζει ενεργοποιημένων αστεροειδών κυττάρων [3], [33], [34] ( αναθεωρούνται στο [35]). Αυτοί οι δείκτες, αρχικά αναγνωρίστηκε ως PASC συγκεκριμένες, χρησιμοποιούνται για να διακρίνουν PASC από φυσιολογικούς ινοβλάστες, λόγω της συν-έκφραση του ενδιάμεσου πρωτεϊνών νήματος δεσμίνη και GFAP [33], [34], ενώ η έκφραση του αSMA σε PASC είχε αρχικά περιγραφεί ως ένα πηγή της ίνωσης στη χρόνια παγκρεατίτιδα και καρκίνο του παγκρέατος, ο ορισμός ενεργοποιηθεί PASC [3], [36]. Υπήρξε σημαντική στρατολόγηση BMDC στο στρώμα που περιβάλλει πρόδρομες βλάβες μετά από θεραπεία ϋΜΒΑ, με συμβολή του BMDC στο ενεργοποιημένο πληθυσμό κυττάρων παγκρεατικών αστεροειδής (GFP, δεσμίνη και αSMA θετικός? Σχήμα S2A, C, E). Ανάλυση Συν-ανοσοφθορισμού έδειξαν επίσης ότι προερχόμενα από δότη BMDC θετικά τόσο για το GFP και αSMA ήταν παρούσα στα κύτταρα που γειτνιάζουν άμεσα με παγκρεατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (mPanIN) βλάβες (Σχήμα S2B, D, F). Παρατηρήσαμε επίσης την ανάπτυξη ενός μεγάλου, χαμηλής διαφοροποίησης και επεμβατικές κυτοκερατίνη θετική /βιμεντίνη αρνητικό πόρου αδενοκαρκίνωμα (sarcomatoid) όγκο με σημαντικό πληθυσμό BMDC (Σχήμα 4Α, 4Β), η οποία περιελάμβανε ένα εκτεταμένο δότη προέρχονται φλεγμονώδες διήθημα, καταδειχθεί χρησιμοποιώντας FISH για το Υ-χρωμόσωμα (Y-FISH? Σχήμα 4C), καθώς επίσης και του μυελού των οστών που προέρχονται ενεργοποιημένα παγκρεατικά αστεροειδή κύτταρα (Εικόνα 4D), εμφανιζόμενα με συν-ανοσοφθορισμό του GFP με αSMA (Εικόνα 4D). Ο μυελός των οστών που προέρχονται επιθηλιακά κύτταρα του όγκου δεν παρατηρήθηκαν. Εμείς ποσοτικοποιηθεί το ποσοστό των BMDC εντός μικροπεριβάλλον του όγκου σε 5 πεδία υψηλής μεγέθυνσης ισχύος (400Χ) και προσδιορίστηκε ότι το 41,8% (± 2,77 SEM) των κυττάρων προήλθαν του μυελού των οστών (Σχήμα 4). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν όταν χορηγήθηκε DMBA παρακάτω μακροχρόνια εμφύτευση (6 μήνες μετά τη μεταμόσχευση)

(Α) H & amp?. Ε δείχνει την κακή διαφοροποιημένη, επεμβατική παγκρεατικά καρκινικά? (Β) GFP IHC και (Γ) Υ χρωμόσωμα FISH, καταδεικνύουν την εκτεταμένη του μυελού των οστών που προέρχονται πληθυσμό κυττάρων εντός του όγκου? (D) Co-ανοσοφθορισμού της GFP με προέρχονται αSMA προσδιορίζονται μυελού των οστών ενεργοποιείται αστεροειδή κύτταρα εντός του όγκου (βέλος).

Η

Πιο πρόσφατα, Erkan

et al

[37] χρησιμοποιείται μεταγραφή προφίλ για τον εντοπισμό δεικτών για τη διαφοροποίηση PASC που σχετίζεται με χρόνια παγκρεατίτιδα έναντι εκείνων του καρκίνου του παγκρέατος, με στόχο την υποτύπους PASC του είτε σε φλεγμονή ή σχετίζονται με τον καρκίνο. Προ-Β-κυττάρων παράγοντα μεταγραφής λευχαιμίας 1 (ΡΒΧ1) ρυθμίζεται αυξητικά σε φλεγμονή που σχετίζεται με PASC σε σύγκριση με τον όγκο που σχετίζεται ΦΕΑΚ, ενώ καντερίνη LAG EGF επτά-pass υποδοχέα G-τύπου 3 (CELSR3) έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά σε PASC που σχετίζονται με όγκους σε σύγκριση με εκείνη της φλεγμονής που σχετίζεται με PASC του [37]. Εξετάσαμε 5 τμήματα το καθένα από 3 ποντίκια που ανέπτυξαν αδενοκαρκίνωμα και παρατήρησε ότι GFAP, ΡΒΧ1 και CELSR3 έκφραση συν-εντοπίζεται με GFP σε PASC που σχετίζονται με όγκο (σχήμα S3A, S3b, S3C αντίστοιχα), και αν και ΡΒΧ1 (αλλά όχι CELSR3) ανιχνεύθηκε στο στρώμα σε παγκρεατίτιδα, δεν συν-εντοπίζεται με GFAP, γεγονός που υποδηλώνει ότι δεν εκφράστηκε σε ενεργοποιημένα αστεροειδή κύτταρα.

Συζήτηση

μεταμοσχεύσεις μυελού των οστών ολόκληρη την Ισότητα-αταίριαστα απέδειξε ότι BMDC μεταναστεύουν στο πάγκρεας και να επεκταθεί όσο κλωνική μονάδες να υιοθετήσουν διαφοροποιημένες καταστάσεις του διαμερίσματος εξωκρινών. Αν και υπήρχε ελάχιστη πρόσληψη στον πληθυσμό κυψελιδικά κύτταρα, οι οποίες δεν αυξάνουν με τον τραυματισμό, την αναγέννηση, ή καρκινογένεση, υπήρξε σημαντική πρόσληψη στο στρώμα. Αν και η πλειοψηφία των κυττάρων κατά τη διάρκεια προσληφθεί οξεία βλάβη και ο καρκίνος ήταν φλεγμονώδη κύτταρα, ένα ποσοστό διαφοροποιούνται σε αστεροειδή κύτταρα. Εκείνοι που σχετίζονται με τον καρκίνο που εκφράζεται δείκτες χαρακτηριστικό των αστεροειδών κυττάρων που σχετίζονται με όγκους που υποδηλώνει ότι ήταν συν-επέλεξε, και μεταβάλλεται από το μικροπεριβάλλον του όγκου.

Ενώ αναγεννητική ικανότητα διατηρείται στο πάγκρεας ενηλίκου εξωκρινές, η προέλευση της αναγέννησης υπολείμματα επιθηλίου ασαφές [38]. Πρόσφατα, ένας μηχανισμός της κλωνικής ανάπτυξη των παγκρεατικών acini έχει περιγραφεί με αποδείξεις υπό την προϋπόθεση ότι ένα μόνο προγονικό κύτταρο, είτε πρόκειται για ένα ώριμο κύτταρο κυψελοειδή ή ένα πολυδύναμο βλαστοκύτταρο, δημιουργεί όλα τα κύτταρα εξωκρινή ενός acinus [39]. Περαιτέρω, γενεαλογία εντοπισμό μελέτες παρέχουν ενδείξεις ότι τα νέα κυψελοειδή κύτταρα που δημιουργούνται από προϋπάρχοντα κυψελοειδή κύτταρα μετά από μερική παγκρεατεκτομή [40] και κερουλεΐνης παγκρεατίτιδας [41]. Με δεδομένες αυτές τις στοιχεία, και οι παρατηρήσεις μας στις κανονικές πάγκρεας, υποθέσαμε ότι BMDCs συμβάλουν στην αναγέννηση του διαμερίσματος εξωκρινών. Παρά τη χρήση διαφορετικών πρωτόκολλο τραυματισμού χρονικά σημεία δεν μπορέσαμε να επιδείξουν μια σημαντική αύξηση της συνεισφοράς BMDC στον πληθυσμό κυψελοειδή κυττάρου. Υ χρωμόσωμα δεδομένων FISH αποκλείεται αποσιώπηση GFP [42], [43], [44] ως μια πιθανή αιτία για την έλλειψη της έκφρασης GFP, και αντανακλάται GFP θετικά κατανομή των κυττάρων.

PASC είναι κάτοικος μυοϊνοβλαστών-όπως τα κύτταρα που υπάρχουν στην η periacinar χώρος του εξωκρινούς παγκρέατος, και υπάρχουν αυξανόμενες ενδείξεις να δείχνουν ότι είναι βασικοί συμμετέχοντες στην παθογένεση των παγκρεατικών ασθενειών εξωκρινούς, ιδιαίτερα στην παραγωγή των άφθονων ινώδους στρώματος, το οποίο είναι ένα χαρακτηριστικό του καρκίνου του παγκρέατος [3]. Αν και υπήρχε σημαντική πρόσληψη BMDC στο φλεγμονώδες διήθημα κατά το χρόνο της παγκρεατική βλάβη σε συμφωνία με προηγούμενες αναφορές [45], [46], αυτό ήταν παροδικές και κυττάρων αριθμούς μειώθηκε με την πάροδο του χρόνου σε χαμηλά επίπεδα όταν η αναγέννηση ήταν πλήρης. Ωστόσο, αστεροειδή κύτταρα παρέμειναν μεταξύ του υπολειμματικού πληθυσμού της BMDC. Η παρατήρηση αυτή υποδηλώνει ότι BMDC παίζουν ένα ρόλο στην υποστήριξη της αναγεννητική διαδικασία, αλλά δεν μετατρέψει να συμβάλει στην ίδια την αναγεννητική επιθήλιο. Που σχετίζεται με όγκους BMDC PASC μπορεί να διατηρηθεί στο περι-καρκινική στρώμα, ενώ εκείνα που συνδέονται με παγκρεατίτιδα δεν είναι. Αν και ο αριθμός των του μυελού των οστών που προέρχονται PASC ήταν ελαφρώς μικρότερη στη ρύθμιση της παγκρεατίτιδας σε σύγκριση με τον καρκίνο, είναι πλέον χρονικά σημεία θα απαιτούνταν για να καθοριστεί εάν BMDC είχαν προτίμηση διατηρείται στο πάγκρεας στη ρύθμιση του καρκίνου.

Όπως σε χρόνιες παγκρεατίτιδα, υπήρχε αυξημένη πρόσληψη BMDC στο πάγκρεας μετά από θεραπεία με ϋΜΒΑ. Αυτό περιελάμβανε και πάλι μια φλεγμονώδη διήθηση και ενεργοποιείται PASC του. Σημαντικά, η έκφραση της CELSR3 σε BMDC σχετίζονται με όγκο, υποδηλώνει ότι υπήρξε τροποποίηση αυτών PASC κατά μικροπεριβάλλον του όγκου. Αυτό υποστηρίζεται από πρόσφατες μελέτες όπου μυελό των οστών προερχόμενα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα κατά προτίμηση εντοπίζονται σε περιοχές του παγκρεατικού όγκου ανάπτυξης [47] και έχουν δειχθεί να μετατρέψει σε μυοϊνοβλάστες που σχετίζονται με όγκους σε ινσουλινώματα [48]. Ο καρκίνος του παγκρέατος κύτταρα εκκρίνουν αυξητικούς παράγοντες όπως ΤΟΡ-β1, PDGF και VEGF, καθώς και εξωκυττάρια μήτρα (ECM) επαγωγείς μεταλλοπρωτεϊνάσης που μετατρέπουν τις συνήθως ηρεμίας PASC του σε ένα ενεργοποιημένο φαινότυπο μυοϊνοβλάστη-τύπου και εκκρίνουν υπερβολικές ποσότητες ECM και ένζυμα αποικοδόμησης μήτρας [ ,,,0],3], [4], [49] (που επισκοπείται στο [50]).