Αφηρημένο

Το υψηλό ποσοστό θνησιμότητας από καρκίνους των ωοθηκών μπορεί να αποδοθεί στη διάγνωση προχωρημένου σταδίου και η έλλειψη αποτελεσματικής θεραπείας. Παρά την τεράστια προσπάθεια για να αναπτύξει καλύτερα στοχευμένες θεραπείες, με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία παραμένει το πρότυπο φροντίδας για τους ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών, και της αντίστασης συμβαίνει σε ένα υψηλό ποσοστό. Ένα από το ποσοστό περιοριστικούς παράγοντες για τη μετάφραση των νέων ανακαλύψεων φαρμάκου σε κλινικές θεραπείες υπήρξε η έλλειψη κατάλληλων προκλινικά μοντέλα καρκίνου με υψηλή προγνωστική αξία. Έχουμε ήδη παράγονται γενετικά τροποποιημένων ποντικών (GEM) μοντέλα που βασίζονται σε διατάραξη της

TP53

και

Rb

με ή χωρίς

Brca1

ή

BRCA2

που αναπτύσσουν ορώδες επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (SEOC) που μοιάζουν στενά με την ανθρώπινη ασθένεια για ιστολογική και μοριακή επίπεδα. Εδώ, περιγράφουμε μια προσαρμογή αυτών των μοντέλων GEM σε ορθοτοπική αλλομοσχεύματα που αναπτύσσουν ομοιόμορφα όγκους με μικρή καθυστέρηση και είναι ιδανικά για συνήθεις προκλινικές μελέτες. Ωοθηκών όγκοι ανεπάρκεια σε

Brca1

ανταποκρίνονται στη θεραπεία με σισπλατίνη και olaparib, έναν αναστολέα PARP, ενώ

Brca1

-wild όγκους του τύπου είναι μη ανταπόκριση στη θεραπεία, ανακεφαλαιώνοντας τις σχετικές ευαισθησίες που παρατηρούνται σε ασθενείς. Αυτά τα μοντέλα ποντικών παρέχουν την ευκαιρία για την αξιολόγηση των αποτελεσματικών θεραπευτικών, συμπεριλαμβανομένων πρόβλεψη των αποκρίσεων διαφορικού στο

Brca1

-wild τύπο και

Brca1

ελλιπή ως όγκων και την ανάπτυξη των σχετικών βιοδεικτών.

Παράθεση: Szabova L, Bupp S, Καμάλ Μ, Householder DB, Hernandez L, Schlomer JJ, et al. (2014) Pathway-συγκεκριμένα μοντέλα μηχανικής Ποντίκι Αλλομοσχεύματος Λειτουργικά Ανακεφαλαιώνοντας τα Ανθρώπινα υδαρής Τα επιθηλιακά καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 9 (4): e95649. doi: 10.1371 /journal.pone.0095649

Επιμέλεια: Masaru Katoh, Εθνικό Κέντρο Καρκίνου, Ιαπωνία

Ελήφθη: 10η Φεβρουαρίου 2014? Αποδεκτές: 28 Μαρ του 2014? Δημοσιεύθηκε: 18 Απριλίου του 2014

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο έχει χρηματοδοτηθεί εξ ολοκλήρου με ομοσπονδιακά κεφάλαια από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας, με αριθμό σύμβασης HHSN261200800001E. Το περιεχόμενο αυτής της δημοσίευσης δεν αντανακλά απαραίτητα τις απόψεις ή τις πολιτικές του Τμήματος Υγείας και Ανθρωπίνων Υπηρεσιών, ούτε αναφέρει εμπορικών ονομάτων, εμπορικών προϊόντων ή οργανισμών υποδηλώνει την έγκριση από την κυβέρνηση των ΗΠΑ. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η δεύτερη πιο κοινή γυναικολογικό καρκίνο και η πιο συχνή αιτία γυναικολογικών θανάτων από καρκίνο που σχετίζονται με τις ΗΠΑ [1], με πάνω από το 50% παρουσιάζοντας ως ορώδες επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (SEOC). Οι περισσότερες προηγμένες SEOCs έχουν εξαπλωθεί πέρα ​​από την ωοθήκη κατά τη στιγμή της διάγνωσης, και τη διαχείρισή τους περιλαμβάνει τη χειρουργική de-διόγκωσης, που ακολουθείται από χημειοθεραπεία με ένα συνδυασμό πλατίνας και ταξάνιο φάρμακα [2], [3]. Παρά τα αρχικά υψηλά ποσοστά ανταπόκρισης, οι περισσότεροι ασθενείς υποτροπιάζουν με διάμεση επιβίωση χωρίς εξέλιξη 18 μηνών [4], καθιστώντας την αναζήτηση νέων θεραπευτικών επιτακτική.

Κατά τα τελευταία αρκετά χρόνια μεγάλη πρόοδος έχει γίνει στον εντοπισμό σήμα κατατεθέν γενετική βλαβών που συνδέονται με SEOC. Η μελέτη Cancer Genome Atlas (TCGA) μιας μεγάλης υψηλής ποιότητας SEOC ομάδα αποκάλυψε ότι οι μεταλλάξεις στο

TP53

κυριαρχούσε, που συμβαίνουν σε τουλάχιστον 96% των όγκων [5]. Μεταβολές στο δίκτυο RB παρατηρήθηκαν στο 67% των περιπτώσεων, και περίπου 20% των όγκων είχε βλαστικής ή σωματικές μεταλλάξεις σε

BRCA1 /2

με ένα επιπλέον 11% έχοντας χάσει έκφραση BRCA1 μέσω επιγενετικών σίγηση [5] .

BRCA1 και BRCA2 παίζουν σημαντικό ρόλο σε ομόλογο ανασυνδυασμό (HR), και την απώλεια των δύο πρωτεϊνών οδηγεί σε ανεπάρκεια σε διπλό σπάσιμο κλώνου DNA (DSB) επισκευάσει [6]. Στην HR-ανεπαρκή κύτταρα, οι DSBs επισκευαστεί από επιρρεπής σε λάθη μηχανισμούς, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε γενωμική αστάθεια. Χημική αναστολή μονού κλώνου (ss) DNA επιδιόρθωση διάλειμμα στην HR-ανεπαρκή κύτταρα μπορεί να οδηγήσει σε συνθετικά θνησιμότητα λόγω της ταυτόχρονης απουσίας δύο οδούς επιδιόρθωσης του DNA [7], [8]. Στην κλινική, οι ριβόζης αναστολείς της πολυμεράσης πολυ (ADP) (PARPi) που υποβάλλονται σε αξιολόγηση ως μέθοδος εκμετάλλευσης των συνθετικών θνησιμότητας για θεραπευτική παρέμβαση. PARP-1 απαιτείται για την αναγνώριση του ssDNA διαλείμματα (SSB) και την πρόσληψη πρωτεϊνών επισκευής σε κατεστραμμένα περιοχές [9]. Αναστολή αυτής της διεργασίας σε BRCA-ελλειμματικά κύτταρα οδηγεί στη συσσώρευση DSBs, λόγω συνεπτυγμένη πιρούνια αντιγραφής, και τελικά σε κυτταρικό θάνατο [10] – [12]. Με βάση αυτά τα ευρήματα, PARPi έχουν δοκιμαστεί σε κλινικές δοκιμές ως εφάπαξ ή συνδυασμού θεραπειών σε ασθενείς με προχωρημένους συμπαγείς όγκους [13] – [15]. Πρόσφατα, η από του στόματος δραστικός PARPi, olaparib (AZD2281), έδειξε κλινική αντικαρκινική δράση σε καρκίνους των ωοθηκών και του μαστού BRCA-συνδέονται [15] – [19].

Μέχρι στιγμής, οι κλινικές δοκιμές νέων θεραπευτικών παραγόντων έχουν στηριχθεί σε προκλινικές μελέτες που διεξήχθησαν σε κυτταρικές σειρές και τα μοντέλα ανοσοκατεσταλμένους κυτταρικής γραμμής ξενομοσχεύματος. Μεταγενέστερες υψηλά ποσοστά αποτυχίας σε ανθρώπινες δοκιμές υποδεικνύουν την ανάγκη για προκλινικά μοντέλα με καλύτερη προγνωστική αξία [20]. Γενετικά μοντέλα ποντικού (GEMMs) έχουν σημαντικά πλεονεκτήματα σε σχέση με τα μοντέλα ξενομοσχεύματος κυτταρικής γραμμής, από το ότι οι όγκοι οδηγούνται από ορίζεται γενετικά γεγονότα και να προκύψει λόγω της συσσώρευσης των πρόσθετων στοχαστικών γεγονότων μέσα στο όργανο που μας ενδιαφέρει και είναι, ως εκ τούτου, υπόκεινται σε σχετικούς μικροπεριβάλλον και να φιλοξενήσει τις απαντήσεις των κυττάρων. Αρκετές επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών GEMMs που αναπτύσσουν όγκους που μοιάζει με την ανθρώπινη ασθένεια έχει αναφερθεί [21] – [25]? Ωστόσο, τα μοντέλα αυτά δεν έχουν σχεδιαστεί για αποτελεσματική χρήση σε προκλινικές μελέτες, και λίγα ανακεφαλαίωση το πλήρες φάσμα των γενετικών και βιολογικών χαρακτηριστικών του ανθρώπινου SEOC.

Στο παρελθόν, έχουμε αναφερθεί GEMMs που αναπτύσσουν καρκίνους των ωοθηκών με τη γενετική και βιολογική χαρακτηριστικά της ανθρώπινης SEOCs [26]. Στοχευμένες στην επιφάνεια του επιθηλίου των ωοθηκών, κατάργηση της RB καταστολής όγκου (TS) ξεκίνησε τη νόσο, και

TP53

εκτροπή (παρερμηνεύσιμη μετάλλαξη ή διαγραφή) διευκόλυνε την εξέλιξη της νόσου στην επιθετική περιτοναϊκή διάδοση και την μετάσταση. Ωοθηκών όγκοι από αυτά τα μοντέλα, συμπεριλαμβανομένων εκείνων ανεπαρκή είτε

Brca1

ή

BRCA2

, αντιπροσωπεύουν όλες τις 4 μεταγραφική υποκατηγορίες της ανθρώπινης SEOC. Εδώ, θα χρησιμοποιήσουν αυτά τα μοντέλα για να δημιουργήσετε μοντέλα μεταμόσχευσης ανοσοεπαρκών ορθοτοπική, και να δημιουργήσει συγχρονισμένη ομάδες ποντικών κατάλληλο για προκλινικές μελέτες. Για να καθοριστεί εάν τα μοντέλα αυτά είναι προσιτό για χρήση στη ρουτίνα μελέτες αποτελεσματικότητας και αν θεραπευτικές απαντήσεις τους αντικατοπτρίζουν παρατηρούμενη αποτελέσματα σε ανθρώπινες δοκιμές, θα πραγματοποιηθεί εφάπαξ ή θεραπείας συνδυασμού με κλασική χημειοθεραπεία πλατίνα και olaparib. Όπως παρατηρήθηκε σε ασθενείς, ανταπόκριση στη θεραπεία εξαρτάται από

Brca1

κατάσταση, καταδεικνύοντας έτσι τη χρησιμότητα αυτών των μοντέλων για την αξιολόγηση του δυναμικού της αποτελεσματικότητας των νέων θεραπευτικών για τον καρκίνο των ωοθηκών.

Υλικό και Μέθοδοι

πειραματόζωα

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο της μελέτης των ζώων που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών ζωικά Φροντίδα και Χρήση του Frederick Εθνικό Εργαστήριο για την Έρευνα του Καρκίνου και τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας Οδηγός για τη Φροντίδα και Χρήση των πειραματοζώων. FNLCR είναι διαπιστευμένο από AAALAC International και ακολουθεί την πολιτική Υπηρεσία Δημόσιας Υγείας για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου. φροντίδα των ζώων χορηγήθηκε σύμφωνα με τις διαδικασίες που περιγράφονται στον «Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των Ζώων Εργαστηρίου» (Εθνικό Συμβούλιο Έρευνας? 1996? National Academy Press? Ουάσινγκτον). Τα ζώα διατηρούνται σε μια εγκατάσταση φράγμα FNLCR κάτω HEPA διήθηση σε μικρο κλουβιά απομονωτή και τροφοδοτείται με αυτόκαυστο εργαστηρίου τρωκτικών διατροφή (LabDiet, St. Louis, ΜΟ). Όλες οι διαδικασίες ζώων πραγματοποιήθηκαν υπό αναισθησία χρησιμοποιώντας εισπνοή 1-2,5% ισοφλουράνιο. Το τελικό σημείο για τα ποντίκια ήταν η αλλαγή στη γενική υγεία, ειδικότερα & gt? 20% απώλειας σωματικού βάρους, αδυναμία να φάτε, να πιείτε, ή να περπατά, σκυμμένοι στάση του σώματος, δυσκολία στην αναπνοή ή σημάδια υποθερμίας, καθώς και σημάδια ασκίτη με διάταση της κοιλιάς και ψηλαφητό όγκο των περίπου 2 μέγεθος cm. Τα ζώα που εμφάνισαν κλινικά σημάδια, ανάπτυξη στερεού όγκου του 2 εκατοστών, ή έγινε ετοιμοθάνατα πριν μέγιστη διαστολή ασκίτη (κατά προσέγγιση διπλασιασμός του πλάτους της κοιλιάς) έγιναν αμέσως σε ευθανασία με εισπνοή CO2.

Λεπτομερείς πληροφορίες στέλεχος ποντικού και δημιουργία αδενοϊικώς προκάλεσαν μοντέλα SEOC έχουν περιγραφεί προηγουμένως [26]. Μπεζ nude [Cr: ΝΙΗ-bg-ηυ-Xid], αθυμικά γυμνά [Αθυμικοί NCr-ηυ /ηυ] και FVB [FVB /NCr] θηλυκά ποντίκια ελήφθησαν από το Πρόγραμμα Animal Production, FNLCR ή από τα Jackson Laboratories [FVB /NJ ].

μεταμόσχευση ορθοτοπική όγκου

για να εκτελέσετε ορθοτοπική μεταμόσχευση του όγκου, η οσφυϊκή περιοχή της FVB γυναίκες (ηλικίας 5-8 εβδομάδων) ήταν ξυρισμένο, τα ζώα αναισθητοποιούνται και το δέρμα άσηπτες συνθήκες προετοιμαστεί για τη χειρουργική επέμβαση . Μια πλευρική διαμήκης τομή του δέρματος έγινε στην περιοχή πλευρό επικαλύπτει το δικαίωμα ωοθήκη και μια άλλη μικρότερη τομή έγινε στο περιτόναιο. Η εκτεθειμένη ωοθήκη, με τον περιβάλλοντα επίθεμα λίπους, εξετέθη και ένα μικρό θραύσμα όγκου δότη (περίπου 2 mm) εισήχθη κάτω από την θύλακο μέσω μιας μικρής χειρουργικής δάκρυ. Οι ωοθήκες αντικαταστάθηκαν πίσω στην κοιλιακή κοιλότητα, το περιτόναιο ράβεται και το δέρμα κλείνεται με μεταλλικά κλιπ.

κυτταροκαλλιέργειες

Ανθρώπινο ωοθηκών κυτταρική γραμμή καρκινώματος HeyA8 ήταν ένα δώρο από τον Dr. Elise Kohn , NCI, και αρχικά περιγράφεται στο [27]? γραμμές 1Α9 και σισπλατίνη ανθεκτικά 1A9CP80 ήταν δώρα από τον Dr. Tito Fojo (NCI), και προέκυψαν όπως στο [28], [29]?

BRCA1

μεταλλαγμένη γραμμή UWB1.289 λήφθηκε από ATCC (Manassas, VA). Όλες οι γραμμές των ωοθηκών καλλιεργήθηκαν σε RPMI (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ) με 10% ορό εμβρύου βοός (Hyclone, Pittsburg, ΡΑ) και τυπικά αντιβιοτικά? 1A9CP80 κυτταρικό μέσο συμπληρώθηκε με 80 mM σισπλατίνη (Tocris, Bristol, UK). Μια λεπτομερής διαδικασία για την ίδρυση του ποντικού κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών παρέχεται δεδομένων S1.

In vitro

δοκιμασίες κυτταροτοξικότητας

Η βιωσιμότητα των συνημμένων καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ΧΤΤ όπως περιγράφεται [30]. Εν συντομία, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων σε πυκνότητα 1-2,000 κύτταρα /50 μΐ /φρεάτιο και επωάστηκαν για 24 ώρες. Η σισπλατίνη (Tocris, Bristol, UK) και olaparib (AZD2281, Σέλεκ Chemicals, Houston, ΤΧ) παρασκευάστηκαν σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) αποθέματα και εφαρμόστηκε σε επιστρώθηκαν κύτταρα από φρέσκα παρασκευασμένα διαλύματα εργασίας αραιώθηκαν σειριακά σε μέσο. Τα κύτταρα αναπληρώνονται με φρέσκο ​​φάρμακα μετά από 3 ημέρες και η βιωσιμότητα προσδιορίστηκε μετά από 7 ημέρες με επώαση καλλιεργειών με ΧΤΤ και μετρώντας την απορρόφηση χρησιμοποιώντας αναγνώστη πλακός Tecan F200 (Triangle Park Research, NC). Η πυκνότητα των κυττάρων σε φρεάτια αντιμετωπίζονται εκφράστηκε ως ποσοστό του ελέγχου. Πειράματα που περιλαμβάνονται εις τριπλούν δείγματα και επαναλήφθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές. Οι τιμές IC50 (συγκεντρώσεις που παράγουν απώλεια βιωσιμότητας σε 50% των κυττάρων) υπολογίστηκαν με γραμμική παλινδρόμηση.

Προκλινικές μελέτες σε ποντικούς

Για

in vivo μελέτες

, σισπλατίνη (Tocris , Bristol, UK) ανασυστάθηκε σε στείρο διάλυμα φυσιολογικού ορού 0,9% και ενίεται ενδοπεριτοναϊκά, και olaparib (AZD2281, Σέλεκ Chemicals, Houston, ΤΧ) χορηγήθηκε από του στόματος σε όχημα [PBS που περιέχει 10% DMSO (Sigma, St. Luis, ΜΟ) και 10% (2-υδροξυπροπυλ) κυκλοδεξτρίνη (Sigma, St. Luis, ΜΟ)]. Για τις φαρμακοδυναμικές μελέτες ποντικών με καθιερωμένες ορθοτοπική όγκους των ωοθηκών (-0.5 cm σε διάμετρο) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με: 1) σισπλατίνης (5 mg /kg), η = 3? 2? 3 και 3 για τη γραμμή 29255? 32233? 39877 και 30200? αντίστοιχα, 2) olaparib (50 mg /kg), η = 1? 3? 2 και 3 για τη γραμμή 29255? 32233? 39877 και 30200? αντίστοιχα 3) σισπλατίνης (5 mg /kg) ακολουθούμενη από olaparib (50 mg /kg) 1 ώρα αργότερα, η = 3? 2? 2 και 2 για τη γραμμή 29255? 32233? 39877 και 30200? αντίστοιχα ή 4) του οχήματος, η = 2? 2? 2 και 1 για τη γραμμή 29255? 32233? 39877 και 30200? αντίστοιχα, την ημέρα 1. Οι ομάδες 2 και 4 έλαβαν άλλη δόση olaparib και η ομάδα 4 άλλη δόση του οχήματος 24 ώρες αργότερα. Όλα τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία την ημέρα 2, δύο ώρες μετά τελευταία δόση. ιστοί όγκου συλλέχθηκαν και τα επίπεδα PAR μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας την PARP ΗΤ

in vivo

Φαρμακοδυναμικές Δοκιμασία II (Trevigen, Gaithersburg, MD). προϊόντα λύσης του όγκου παρασκευάστηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και 2 μα συνολικών πρωτεϊνών αναλύθηκαν.

Για τις μελέτες αποτελεσματικότητας και μακροχρόνια θεραπεία ζώων με ψηλαφητούς όγκους (-0.5 cm σε διάμετρο) απεικονίστηκαν και τυχαιοποιήθηκαν σε 4 ομάδες θεραπείας, όπως περιγράφεται παραπάνω, με βάση τον όγκο του όγκου για να επιτευχθεί περίπου ίδια διανομή των όγκων σε όλες τις ομάδες. Η σισπλατίνη χορηγήθηκε ενδοπεριτοναϊκά μία φορά την εβδομάδα. Olaparib και όχημα χορηγήθηκαν στοματικά για 5 διαδοχικές ημέρες την εβδομάδα. Ζώα σε μελέτες αποτελεσματικότητας υποβλήθηκαν σε αγωγή για 2 ή 3 εβδομάδες, απεικονίζεται να προσδιορισθούν οι μεταβολές στον όγκο του όγκου και ευθανασία 2 ώρες μετά τη χορήγηση olaparib /οχήματος. Ζώα σε μακροχρόνια μελέτη δόσης υποβλήθηκαν σε αγωγή για έως και 10 εβδομάδες και απεικονίζονται δύο φορές την εβδομάδα χρησιμοποιώντας υπερήχους (ΗΠΑ) για τον προσδιορισμό των όγκων του όγκου. Είχαν παρακολουθείται μετά τη διακοπή της θεραπείας για την ανάπτυξη του όγκου και θανατώθηκαν μία φορά ετοιμοθάνατα λόγω του φορτίου του όγκου. Ιστός όγκου συλλέχθηκαν για ιστολογική ανάλυση και ανοσοϊστοχημεία (IHC).

Gene έκφραση προφίλ

προφίλ γονιδιακής έκφρασης και η σύγκριση των ποντικού και ανθρώπου σύνολα δεδομένων διεξήχθη όπως περιγράφεται προηγουμένως [26]. Στοιχεία για την ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης των πρωτογενών ποντικού και προέρχεται ορθοτοπική όγκους SEOC είναι διαθέσιμα στο κοινό στο Gene Expression Omnibus βάση δεδομένων με αριθμό πρόσβασης GSE51927.

Δεδομένα S1 περιέχει υλικό και μεθόδους για την δημιουργία του ποντικού κυτταρικές σειρές πρωτοπαθούς όγκου, εμφυτεύσεις κυττάρων, απεικόνισης και ο όγκος του όγκου μετρήσεις, συλλογή ιστών, παθολογική και IHC ανάλυση, ποσοτική ανάλυση του IHC λεκέδες, χρώση ανοσοφθορισμού των ανθρώπινων και ποντικού κύτταρα και ποσοτική ανάλυση PCR του

Brca1

κατάσταση.

Αποτελέσματα

Μεταμόσχευση διατηρούν βιολογική και γενετικά χαρακτηριστικά του πρωτογενούς SEOCs

μοντέλα GEM SEOC προκλήθηκαν με έγχυση ενός αδενοϊικού φορέα Cre μέσα στο θύλακο ωοθηκών ποντικών που φέρουν διάφορους συνδυασμούς που εξαρτάται από CRE αλληλόμορφα. Όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26], όταν η λειτουργία RB-TS αδρανοποιήθηκε μέσω έκφραση του

TgK18

T121

αλληλόμορφο και συνδυάστηκε με

ΤΡ53

διαγραφή ή παρερμηνεύσιμη μετάλλαξη (

ρ53

R172H

), καρκίνους εξελιχθεί κατά τη διάρκεια των 8-12 μηνών για την παραγωγή υψηλής ποιότητας μεταστατική νόσο. Απώλεια

Brca1

ή

2

συνδυασμό με RB-TS αδρανοποίηση δεν είχε ως αποτέλεσμα την εξέλιξη της νόσου μετά το στάδιο Ι χωρίς ταυτόχρονη εκτροπή ΤΡ53, και δεν αισθητά επηρεάσει την βιολογία της εξέλιξης της νόσου όταν συνδυάζεται με διαταραχή του

Rb

και

TP53

. Ωστόσο,

Brca1

ή

Κατάσταση BRCA2

σαφώς επιπτώσεων ορισμένων θεραπευτικά αποτελέσματα σε ανθρώπους? Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να διατηρηθεί μοντέλα με και χωρίς άγριου τύπου

Brca1

για προκλινικές μελέτες. Οι

de novo

SEOC μοντέλα είναι άριστες για την κατανόηση αιτιολογία της νόσου και για βιοδεικτών ανακάλυψη, ωστόσο, παρουσιάζουν ένα μακρύ λανθάνουσα κατάσταση για προχωρημένη νόσο, καθιστώντας τον χρονισμό της παραγωγής κοόρτης για προκλινικές μελέτες προκλητική. Επιπλέον, λόγω της παρουσίας της ρ53

R172H αλληλόμορφο (α ανενεργό αλληλόμορφο πριν από ανασυνδυασμό), τα μοντέλα GEM SEOC μπορεί να αναπτύξουν όγκους εκτός της ωοθήκης, όπως λεμφώματα και σαρκώματα [26], μειώνοντας το μέγεθος προβλέψιμη ομάδα. Αυτά τα χαρακτηριστικά καθιστούν τα μοντέλα υπο-βέλτιστη για προκλινικές θεραπευτικές μελέτες.

Για την προσαρμογή αυτών των μοντέλων για την αποτελεσματική προκλινικές εργαλεία διατηρώντας τα χαρακτηριστικά των στρωματικών SEOC και ανοσοϊκανότητας, εμείς βελτιστοποιημένη ορθοτοπική μεταμόσχευση θραυσμάτων όγκου από πρωτογενείς SEOCs GEM-προέρχονται στο ωοθηκών θύλακο του δέκτη ποντικών (Σχ. 1Α). 35 πρωτογενείς όγκους, 17 όγκοι επιτυχώς περάστηκαν σε συγγενή ποντίκια αποδέκτες (Πίνακας 1). Το ποσοστό απορρόφησης στο πέρασμα 1 κυμαινόταν από 20-100% μεταξύ των διαφόρων γραμμών όγκου με σημαντικές διαφορές στο ποσοστό απορρόφησης μεταξύ

Brca1

null (

TgK18G

T121

TG /+ /Brca1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ)

και

Brca1

άγριου τύπου

(TgK18G

T121

TG /+ /p53

Δ /Δ)

όγκους (95% ± 5,0 έναντι 64,5% ± 5.6, p & lt? 0,01). Και για τις δύο γονότυπους, ο λανθάνων χρόνος της ανάπτυξης στον ακροδέκτη στάδιο ουσιαστικά μικρότερη από 9,95 ± 1,29 σε 2,12 ± 0,61 μήνες σε σύγκριση με το μοντέλο de ηονο (Πίνακας 1). Μεταγενέστερες

in vivo

πέρασμα ακόμη πιο βραχείες λανθάνουσες και συχνά βελτίωσε τα ποσοστά απορρόφησης (Πίνακας 1). Παρατηρήσαμε επίσης διαφορές σε λανθάνουσα κατάσταση μεταξύ διόδου όγκους

TgK18G

T121

TG /+ /Brca1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ

ν

s TgK18G

T121

TG /+ /p53

Δ /Δ

γονότυπους στην πρώτη (Ρ1) (2,8 ± 0,2 μήνες έναντι 3,6 ± 0,1 μηνών, p & lt? 0,01) και το δεύτερο (P2) πέρασμα (1,8 ± 0,1 μήνες έναντι 2,7 ± 0,2 μηνών, p & lt? 0,01). Αξίζει να σημειωθεί ότι, προσπαθήσαμε επίσης να καθιερώσει μοντέλα ορθοτοπική αλλομοσχεύματος χρησιμοποιώντας κύτταρα καλλιεργήθηκαν από πρωτογενείς όγκους ή ασκίτη. Ενώ θα μπορούσε να δημιουργηθεί εύκολα τέτοιες καλλιέργειες

in vitro

και αποδείχθηκαν χρήσιμες για την αξιολόγηση της κυτταροτοξικότητας του φαρμάκου (βλέπε παρακάτω), ορθοτοπικό εμφύτευση

in vivo

ήταν πολύ λιγότερο επιτυχής σε αποτελεσματικά για την ίδρυση όγκους με απαιτούμενη πιστότητα σε σύγκριση με άμεση μεταμόσχευση ιστών όγκου σε συγγενικά τους αποδέκτες (Data S1).

Α, αλλομοσχεύματος μοντέλα SEOC παρήχθησαν από μεταμόσχευση ωοθηκών θραυσμάτων όγκου από το

de novo

μοντέλα SEOC στο πλαίσιο του θύλακες των συγγενικών ποντίκια με φυσιολογικό ανοσοποιητικό σύστημα. Πρωτογενής κυτταρικές γραμμές καρκινώματος ωοθηκών δημιουργήθηκαν ταυτόχρονα. Ο λανθάνων χρόνος για την ανάπτυξη του όγκου σε ορθοτοπική μοντέλα μειωθεί σημαντικά σε σχέση με την καθυστέρηση του

de novo

μοντέλο. Β, Η &? Ε πρωτογενών όγκων (ΡΤ) και αντίστοιχη δίοδο 1 (Ρ1) όγκους από 4 διαφορετικές γραμμές όγκου υποδεικνύοντας SEOC ιστολογία σε ΡΤ και προέρχονται ορθοτοπική μεταμόσχευση του όγκου. μπαρ κλίμακας αντιπροσωπεύει 100 μm. C, ανάλυση κύριων συνιστωσών της κανονικής επιφάνειας επιθηλίου των ωοθηκών, πρωτογενείς όγκους των ωοθηκών και διάφορα χωρία της προέρχεται ορθοτοπική όγκων. Α, ανάλυση διασποράς των δεδομένων συγχωνευθείσας ανθρώπου και ποντικού χρησιμοποιώντας γονιδιακή ταξινομητή σύνολα έδειξε ότι διόδου όγκους, παρόμοια με πρωτογενείς όγκους, αντιπροσώπευε όλες τις 4 υποομάδες της ανθρώπινης SEOC αρχικά προέρχονται από τη μελέτη TCGA [5].

Η

Για να καθοριστεί εάν σημαντικές αλλαγές στο φαινότυπο του όγκου συσχετίστηκαν με αυξημένο αριθμό πέρασμα, πρωτοβάθμια και ορθοτοπική histopathologies όγκου αξιολογήθηκαν και ταξινομούνται ως SEOC θηλώδη, SEOC κακώς διαφοροποιημένο θηλώδες, ή αδιαφοροποίητο καρκίνωμα (βλέπε δεδομένων S1). Υπήρξε μια υψηλή συμφωνία στην ταξινόμηση του δότη και το Ρ1 και Ρ2 όγκων, αν και παρατηρήθηκε μία τάση προς την απώλεια της καλά διαφοροποιημένο ιστολογίας SEOC με αυξημένο αριθμό δίοδο (σχ. 1Β, Πίνακας 1). Όπως και με το

de novo

SEOC μοντέλο ποντικού και ανθρώπινη ασθένεια, ένα σημαντικό ποσοστό των ποντικών με ορθοτοπικό όγκοι αναπτύχθηκαν κοιλιακό καρκινωμάτωση (μέσος όρος = 32%) ή απομακρυσμένες μεταστάσεις (μέσος όρος = 40%).

Για την παρακολούθηση διόδου όγκων σε μοριακό επίπεδο, συγκρίναμε μεταγραφικό προφίλ ενός προηγουμένως δημοσιευμένου σύνολο δεδομένων [26] που αποτελείται από φυσιολογικό επιθήλιο των ωοθηκών επιφάνεια και πρωτογενείς SEOCs με μια πρόσφατα παράγεται σύνολο ταιριάζουν πρωτογενούς SEOC και προέρχονται ορθοτοπική όγκους. Με την ανάλυση κύριων συνιστωσών (PCA), φυσιολογικά δείγματα διαχωρίζονται σαφώς από τους όγκους, ενώ διόδου όγκοι σε σύμπλεγμα με πρωτοπαθείς όγκους που δείχνει ομοιότητα τους με τις de novo SEOCs (Εικ. 1Γ). Επιπλέον, η ανάλυση διασποράς των δεδομένων συγχωνευθείσας ανθρώπου και ποντικού χρησιμοποιώντας σύνολα γονιδίων ταξινομητή έδειξε ότι διόδου όγκους, παρόμοια με πρωτογενείς όγκους, αντιπροσώπευε όλες τις 4 υποομάδες της ανθρώπινης SEOC αρχικά προσδιορίστηκαν στη μελέτη TCGA [5] (Εικ. 1D). Ως εκ τούτου, οι ορθοτοπική μεταφυτεύσιμων μοντέλα καρκίνου των ωοθηκών ανακεφαλαίωση της ανθρώπινης ασθένειας σε μοριακές και ιστοπαθολογικές επίπεδα.

ποντικών καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών εμφανίζουν ένα προφίλ ευαισθησίας των ναρκωτικών παρόμοια με ανθρώπινες κυτταρικές σειρές

Για σύγκριση ανταπόκριση στη θεραπεία ναρκωτικών σε κύτταρα ποντικού και ανθρώπου, μετρήσαμε κυτταροτοξικότητα μετά από έκθεση σε σισπλατίνη και olaparib σε καθιερωμένες κύτταρα ανθρώπινου καρκινώματος των ωοθηκών και καλλιέργειες κυττάρου όγκου που προέρχονται από πρωτογενή ποντίκι SEOCs και ασκίτη (Εικ. 1Α). Ενώ η ανθρώπινη γραμμή UWB1.289 εκφράζει μία κολοβωμένη ανενεργή πρωτεΐνη BRCA1, το καθεστώς BRCA1 σε ανθρώπινο γραμμές 1Α9 (ένας υποκλώνος της γραμμής Α2780), 1A9CP80 και HeyA8 είναι άγνωστη. Για να προσδιοριστεί εάν αυτές οι ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές ήταν ικανές πρόσληψης RAD51 και επομένως ομόλογο ανασυνδυασμό με τη μεσολάβηση επισκευή, αξιολογήσαμε προκαλούμενη από ακτινοβολία σχηματισμός εστίες γH2AX και RAD51. Ενώ γH2AX σηματοδοτεί περιοχές της ϋδΒδ ανεξάρτητη από τη λειτουργικότητα BRCA1, RAD51 προσλήψεις ϋδΒδ είναι BRCA1-εξαρτώμενη. 1A9CP80 και HeyA8 κύτταρα υποβάλλονται σε 10Gy ακτινοβολίας και βάφονται 6 ώρες αργότερα, έδειξε βαθιά σχηματισμό RAD51 και γH2AX εστίες. Σε αντίθεση, η πλήρης απουσία της RAD51 εστιών παρατηρήθηκε σε 1Α9 και UWB1.289 κύτταρα (Σχ S1.), Υποδεικνύοντας την έλλειψη λειτουργικότητας BRCA1

Όπως έχει ήδη αναφερθεί [27] – [29]. UWB1.289 και 1A9 ήταν πιο ευαίσθητα στη θεραπεία με σισπλατίνη, ενώ οι IC50s των γραμμών 1A9CP80 και HeyA8 ήταν γενικά 2-2,5 φορές μεγαλύτερη από ό, τι τα ευαίσθητα τους ομολόγους τους (Εικ. 2Α). θεραπεία Olaparib παράγεται το μεγαλύτερο κυτταροτοξικότητα σε 1Α9 κύτταρα, ενώ 1A9CP80, HeyA8 και UWB1.289 ήταν παρόμοιες και περίπου 2-φορές λιγότερο ευαίσθητος (Εικ. 2Β).

Ανθρώπινο (Α, Β) και ποντικού (C- Η) ωοθηκών καρκινικά κύτταρα εκτέθηκαν σε σισπλατίνη, olaparib ή όχημα για 7 ημέρες μετά από το οποίο η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΧΤΤ. Αναλογική βιωσιμότητα υπολογίστηκε με σύγκριση των φαρμάκων με τους ελέγχους οχήματος του οποίου η βιωσιμότητα υποτέθηκε ότι είναι 100%. επιλεγμένα Γ Πίνακας των κυτταρικών σειρών ποντικού βασίστηκε σε

Brca1

κατάσταση που περιέχει

Brca1

ελλιπή ως (ριγέ μπαρ) και -wild γραμμές τύπου (γεμάτο μπαρ) διατηρώντας παρόμοια

Brca1

έκφραση ως όγκοι προέλευσής τους (D). Οι τιμές IC50 για τις μεμονωμένες κυτταρικές σειρές καρκίνου δεικνύεται στις λεζάντες (Α, Β, Ε, G, παρένθεση πίσω από την ονομασία γραμμή κυττάρων). Σύγκριση της IC50 για σισπλατίνη (F) και olaparib (H) σε άγριου τύπου (

TgK18G

T121

TG /+ /p53

Δ /Δ

? R5810T, R5838T) και μεταλλαγμένων (

TgK18G

T121

TG /+ /Brca1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ

? 39647T, 60577T, 60580T, 82394T) κυτταρικές σειρές ποντικού παρουσιάζει σημαντική διαφορά μεταξύ οι γονότυποι (T-test, 333,7 ± 54,1 έναντι 146,0 ± 8,2, ρ & lt? 0,01 και 18,2 ± 1,4 έναντι 10,4 ± 1,2, ρ & lt? 0,05, αντίστοιχα, για τα φάρμακα). Ο μέσος όρος και το τυπικό σφάλμα παρουσιάζεται.

Η

Για συγκριτικές δοκιμασίες κυτταροτοξικότητας, πρωτοβάθμια ποντίκι SEOC κυτταρικές σειρές, που φιλοξενούν είτε άγριου τύπου

Brca1

ή το μεταλλαγμένο διαγραφή, καλλιεργήθηκαν. Όπως έχει ήδη αναφερθεί [31],

BRCA1

ελλιπή ως κύτταρα να αναπτυχθούν πολύ λίγο στον πολιτισμό. Έτσι, επειδή Cre ανασυνδυασμός μέσω in vivo δεν είναι 100%, υπάρχει ισχυρή

in vitro

επιλογή για κύτταρα με ανεπαρκές

Brca1

διαγραφή σε κυτταρικές σειρές που προέρχονται από κυρίως

Brca1

ανεπάρκεια όγκων [31]. Από 32 κυτταρικών σειρών που ελέγχθηκαν, τέσσερις κυτταρικές γραμμές που διατήρησε τη χαμηλότερη

Brca1

επίπεδα έκφρασης (κάτω του 20%) σε σχέση με το

Brca1

άγριου τύπου γραμμές επελέγησαν να αντιπροσωπεύουν

Brca1

-deficiency (Σχ. 2C). Αυτά τα επίπεδα

Brca1

ήταν συγκρίσιμα με τη γονική όγκοι τους (Εικ. 2 D).

Brca1

ανεπάρκεια αυτή επιβεβαιώθηκε και από λειτουργική δοκιμασία, όπου ακτινοβολημένα κύτταρα δεν ήταν σε θέση να προσλάβει RAD51 στους χώρους του ϋδΒδ (Εικ. S2).

Brca1

ελλιπή ως κυτταρικές σειρές (39647, 60580, 60577 και 82394? Όλα

TgK18G

T121

TG /+ /p53

Δ /Δ /Brca1

Δ /Δ

γονότυπος) ήταν περίπου 2 φορές πιο ευαίσθητα στην σισπλατίνη σε σύγκριση με

Brca1

-wild γραμμές τύπου (R5810 και R5838? τόσο

TgK18G

T121

TG /+ /p53

Δ /Δ

γονότυπο? Σχ. 2Ε-F). Ομοίως, η θεραπεία με olaparib έδειξε μεγαλύτερη ισχύ σε

Brca1

ελλιπή ως από

Brca1

-wild κυτταρικές σειρές τύπου (Εικ. 2 G-Η). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι αυτές οι κυτταρικές σειρές αναπαράγουν σχετική ευαισθησίες των ανθρώπινων όγκων όπου

BRCA μεταλλάξεις

βρίσκονται πιο συχνά σε πλατίνα ευαίσθητα από πλατίνα ανθεκτική νόσο [32], [33].

ορθοτοπική μοντέλα μεταμόσχευσης ανακεφαλαιώνουν

BRCA

-σχετικών διαφορές στην ανταπόκριση στη θεραπεία παρατηρήθηκε σε ασθενείς

στην ιδανική περίπτωση, για την αποτελεσματική χρήση οποιασδήποτε προκλινικό μοντέλο για την ανάπτυξη των ανθρώπινων θεραπευτικών και βιοδείκτες σχετιζόμενη με τη θεραπεία, την προβλεψιμότητα των γνωστών ανθρώπινων αντιδράσεων θα πρέπει να καθιερωθεί. Για το σκοπό αυτό, θα αξιολογηθούν οι απαντήσεις στα

Brca1

ελλιπή ως και -wild μοντέλα τύπου SEOC με σισπλατίνη και olaparib. Πρώτον, για να προσδιοριστεί μία βέλτιστη δοσολογικό σχήμα, εξετάσαμε την κινητική της ανάπτυξης του όγκου μέσω σειριακής μαγνητικού συντονισμού (MR), απεικόνιση (Εικ. S3). Τα ζώα δέκτες ανέπτυξαν μικρούς όγκους των 70 έως 80 mm ωοθηκών

3 (~ 0,5 εκατοστά σε διάμετρο) με 21 έως 28 ημέρες μετά την εμφύτευση (σελ. θ.) που ακολουθείται από ταχεία ανάπτυξη του όγκου. Τα ζώα έγιναν ετοιμοθάνατα λόγω μεγάλοι όγκοι ωοθηκών και ασκίτη με 40 έως 60 ημέρες μετά τον εμβολιασμό Για τις μελέτες αποτελεσματικότητας, η θεραπεία ξεκίνησε κάποτε ένα μικρό (& gt? 80 mm

3). Μάζα του όγκου είχε αναπτυχθεί προκειμένου να μιμηθεί ασθενείς με υπολειπόμενη φορτίο όγκου μετά από de-διογκωτικοί χειρουργική (. Σχεδιασμού μελέτη που απεικονίζεται στο σχήμα 3Α)

Α, Σχηματικά του δοσολογικού σχήματος και απεικόνισης σε μελέτες αποτελεσματικότητας. Β, Αναστολή της PAR σχηματισμού σε προϊόντα λύσης του όγκου σε επεξεργασία με olaparib για 2 (C). Ο μέσος όρος και το τυπικό σφάλμα εμφανίζεται. Α, Αντιπροσωπευτικές MR εικόνες πριν και μετά από 2 εβδομάδες θεραπείας με όχημα, olaparib, σισπλατίνη ή συνδυασμός olaparib και cisplatin παρουσιάζονται. μπαρ κλίμακας αντιπροσωπεύει το 1 cm. Λευκά βέλη δείχνουν τους όγκους, τα πράσινα βέλη δείχνουν προς ετερόπλευρο ωοθήκες. MRI βασίζονται ποσοτικοποίηση των μεταβολών όγκου του όγκου εκφράζεται ως εξής RTV 2 εβδομάδα (Ε) και αγωγή θεραπείας 3 εβδομάδα (F). Οι στατιστικές διαφορές μεταξύ των ομάδων αναλύθηκαν με μονόδρομη ANOVA και τεστ πολλαπλών συγκρίσεων του Tukey. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει ένα ζώο. V? όχημα, O? olaparib, C? σισπλατίνη, O + C? olaparib και σισπλατίνη.

Η

Για να προσδιοριστεί in vivo δραστικότητα και ρύθμιση στόχου από olaparib στο ορθοτοπικό μοντέλο, που προσδιορίστηκαν για τα επίπεδα PAR σε όγκους θεραπεία. λύματα όγκων από όλα τα ζώα που λαμβάνουν θεραπεία olaparib είχε μειωθεί σημαντικά τα επίπεδα PAR μετά από μικρής διάρκειας (28 ώρες? p & lt? 0,01 για τη γραμμή 32233, σ & lt? 0,001 για τη γραμμή 30200) και μακροπρόθεσμα (2 εβδομάδες? p & lt? 0,01 για τη γραμμή 29255 και 30200, ρ & lt? 0,0001 για τη γραμμή 39877) δοσολόγηση σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με όχημα ή σισπλατίνη (Σχήμα 3Β, C), υποδεικνύοντας ότι η έκθεση του όγκου σε olaparib ήταν επαρκής για αναστολή PARP.. Όπως ήταν αναμενόμενο, δεν υπήρχε διαφορά στα επίπεδα PAR μεταξύ

Brca1

ελλιπή ως και άγρια ​​όγκους τύπου, σύμφωνα με το σχηματισμό PAR συμβαίνουν ανάντη του BRCA1, ανεξάρτητα από την κατάσταση του μηχανισμού επιδιόρθωσης HR.

αξιολογήσαμε την αποτελεσματικότητα των olaparib, σισπλατίνη και ο συνδυασμός τους στο

Brca1

ελλιπή ως μοντέλα μετά από δύο εβδομάδες θεραπείας (Εικ. 3D, E) με τη μέτρηση των σχετικών όγκων των όγκων (RTV), οι μεταβολές του όγκου του όγκου από την αρχική τιμή (προ-δόση) στον τελικό σημείο όπως προσδιορίζεται με MRI. Κάθε σημείο στο διάγραμμα αντιπροσωπεύει ένα χωριστό ποντικό. Όλα τα 13 υπό αγωγή με όχημα ζώα από 2 ανεξάρτητους μοντέλα όγκων παρουσίασε ταχεία ανάπτυξη του όγκου μέσα σε 2 εβδομάδες, με 3 ζώα θυσιάζονται πριν από την ημέρα 14 λόγω της επιδείνωσης της υγείας που σχετίζονται με την ανάπτυξη του όγκου (Σχ. 3D, E). Η θεραπεία με olaparib οδήγησε σε μέτρια μείωση της ανάπτυξης του όγκου στο

Brca1

ελλιπή ως μοντέλο όγκου 30.200 και σε σημαντική μείωση μοντέλο 39877 (ρ & lt? 0,01). Ωστόσο, και στις δύο περιπτώσεις η μείωση της RTV ήταν πιο βαθιά όταν έλαβαν θεραπεία με σισπλατίνη (ρ & lt? 0.001) και τον συνδυασμό σισπλατίνης και olaparib σύγκριση με olaparib μόνο (ρ & lt? 0,01) (Εικ. 3D, E)

για να διερευνηθεί αν ανταπόκριση στη θεραπεία εξαρτάται από

Brca1

κατάσταση, πραγματοποιήσαμε μια μελέτη θεραπείας 3 εβδομάδων στο

Brca1

ελλιπή ως μοντέλο 30200 και ένα

Brca1

– άγριου τύπου μοντέλου 29255. Έξι από 9 ποντικούς υπό αγωγή με όχημα και από τις δύο γραμμές έγιναν ετοιμοθάνατα πριν από την ημέρα 21. Η σισπλατίνη μονο- ή θεραπεία συνδυασμού ήταν εξίσου αποτελεσματική στα χρονικά σημεία 3 και 2 εβδομάδας. Ωστόσο, επεκτάθηκε θεραπεία του

Brca1

ελλιπή ως όγκους με olaparib οδήγησε σε μεγαλύτερη μείωση του όγκου σε σύγκριση με τους όγκους που έλαβαν φορέα (2.037 ± 0.282 RTV vs 5.598 ± 2.296 RTV, σ & lt? 0.01) στα 3 σε σύγκριση με την αγωγή 2 εβδομάδων (3.008 ± 0.509 έναντι 3.710 ± 1.325 RTV, ns), γεγονός που υποδηλώνει ότι το όριο της βλάβης του DNA είναι απαραίτητη για τη βέλτιστη δραστικότητα. Σε αντίθεση, η

Brca1

-wild μοντέλο τύπου όγκου δεν ανταποκρίνονται στις olaparib, παρά την αναστολή PARP σε όγκους, που δείχνει τη σημασία των κατεστραμμένων επισκευής ΥΕ για την αποτελεσματικότητα olaparib (Εικ. 3Β, F). θεραπεία με σισπλατίνη ήταν εξίσου αναποτελεσματική στο

Brca1-

άγρια ​​όγκους τύπου (Εικ. 3F).

Brca1

γονότυπο-συγκεκριμένες απαντήσεις σε φάρμακα πλατίνα καθώς olaparib έχουν επίσης τεκμηριωθεί σε ασθενείς [34] – [37], ως εκ τούτου, το ορθοτοπικό μοντέλο είναι ένα χρήσιμο εργαλείο για την εξέταση αυτών των διαφορικών απαντήσεις και πρόβλεψη πιθανών αποτελεσμάτων.

ιστοπαθολογικές μεταβολές που προκύπτουν από olaparib και θεραπεία με σισπλατίνη αντικατοπτρίζουν τις διαφορές που παρατηρούνται στους όγκους των όγκων

για να αξιολογηθεί η επίδραση της θεραπείας από τα ναρκωτικά σε κυτταρικό επίπεδο, H & amp? E-τομές όγκων αναλύθηκαν για ιστολογικές μεταβολές (Εικ. 4aa-L). Σε αμφότερες

Brca1

ελλιπή ως μοντέλα, η θεραπεία με olaparib οδήγησε σε λιγότερο διαφοροποιημένες SEOC με αυξημένο μέγεθος και την πυρηνική πλειομορφισμό σε σύγκριση με την καλά έως μετρίως διαφοροποιημένες δομές θηλώδεις των όγκων των ωοθηκών σε ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή (Σχ. 4Α μια , β). Σε αντίθεση, η μονοθεραπεία σισπλατίνης είχε πιο βαθιά επίδραση στην ιστολογία του όγκου (Σχ. 4AC), παράγοντας ελάχιστα διαφοροποιημένο SEOC θηλώδες ή αδιαφοροποίητο καρκίνωμα με αύξηση του στρώματος του όγκου, νεκρωτικές εστίες, και αποπτωτικά κύτταρα με υψηλό βαθμό πυρηνικής πλειομορφισμό και παρουσία άτυπων πολυπύρηνα γιγαντιαία όγκου. Θεραπεία του

Brca1

ελλιπή ως μοντέλα με συνδυασμό σισπλατίνης και olaparib οδήγησε στην ιστολογία πολύ παρόμοια με εκείνη της σισπλατίνης όγκων μόνη αγωγή (Σχ. 4AD). Αντίθετα, ελάχιστες επιπτώσεις φαρμακευτική θεραπεία παρατηρήθηκαν στο

Brca1

μοντέλο όγκου -wild τύπου, αναφέροντας μια συνολική συμφωνία των ιστοπαθολογικών και ο όγκος του όγκου αλλαγές μετά από φαρμακευτική αγωγή (Εικ. S4).

Α, ένα παράδειγμα ιστολογία και IHC του

TgK18G

T121

TG /+ /Brca1

Δ /Δ /p53

Δ /Δ

όγκοι που έλαβαν θεραπεία με σισπλατίνη ή /και olaparib (α -μεγάλο). γραμμή όγκου 39.877 ήταν ευαίσθητη σε φαρμακευτική αγωγή, η οποία οδήγησε σε μείωση του πολλαπλασιασμού (Κί67) (A e-h) και αυξημένη βλάβη του DNA (γ-Η2ΑΧ) (A i-l).