Αφηρημένο

Τα επίπεδα των ενζύμων που καθορίζουν την τεστοστερόνη καταβολισμό, όπως το CYP3A4 έχουν συσχετιστεί με τον καρκίνο του προστάτη (PCA) κινδύνου. Αν και μερικές μελέτες έχουν σχετικές

CYP3A4 * 1B

αλληλόμορφο, ένα γονίδιο πολυμορφισμός που τροποποιεί επίπεδο έκφρασης του CYP3A4, με προστάτη τον κίνδυνο, άλλοι απέτυχαν, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι πρόσθετες γενετικές παραλλαγές μπορούν να συμμετέχουν. Η έκφραση του CYP3A4 οφείλεται στην ενεργοποίηση του πρεγνανίου Χ Υποδοχέα (PXR) σε μεγάλο βαθμό. Ιδιαίτερα, rs2472677 και rs7643645

PXR

πολυμορφισμών τροποποιήσετε τα επίπεδα έκφρασης του CYP3A4. Για να αξιολογηθεί κατά πόσον

PXR-HNF3β

/T (rs2472677),

PXR-HNF4 /G

(rs7643645), και

CYP3A4 * 1B

(rs2740574) πολυμορφισμοί που σχετίζονται με προστάτη σε περίπτωση ελέγχου μελέτη εκτελέστηκε. Η ανάλυση πολλαπλές δοκιμές έδειξαν ότι το

PXR-HNF4 /G

πολυμορφισμού συσχετίστηκε με υψηλότερα επίπεδα του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) σε ασθενείς με προστάτη (OR = 3,99, p = 0,03). Αυτή η συσχέτιση ήταν ισχυρότερη στους ασθενείς διαγνώστηκαν στην ηλικία των 65 ετών και άνω (OR = 10,8, p = 0,006). Αν και το

CYP3A4 * 1B /* 1B

γονότυπο ήταν υπερεκπροσωπούνται σε ασθενείς ΣΕΣ, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στη συχνότητα αυτή και

PXR-HNF3β

/T αλληλόμορφα μεταξύ των ελέγχων και των περιπτώσεων. Επιπλέον, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ αυτών των πολυμορφισμών και PSA, το βαθμό Gleason, ή λέμφος όγκου μετάσταση στους λεμφαδένες

Παράθεση:. Reyes-Hernández OD, Vega L, Jiménez-Ρίος MA, Martínez-Cervera PF, Lugo- García JA, Hernández-Cadena L, et al. (2014) Οι rs7643645 PXR πολυμορφισμός σχετίζεται με τον κίνδυνο της Ανώτατης ειδικού προστατικού αντιγόνου Επίπεδα στον καρκίνο του προστάτη ασθενείς. PLoS ONE 9 (6): e99974. doi: 10.1371 /journal.pone.0099974

Επιμέλεια: Daotai Nie, Southern Illinois University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8 Ιαν 2014? Αποδεκτές: 20 Μαΐου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 12 Ιουνίου 2014

Copyright: © 2014 Reyes-Hernandez et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τον αριθμό CONACYT (www.conacyt.gob.mx) επιχορήγηση 13756. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Ανταγωνιστικά συμφέροντα.: οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η δεύτερη πιο κοινή μορφή καρκίνου σε όλο τον κόσμο σε άνδρες και μία από τις πιο συχνές αιτίες θανάτου στους άνδρες (IARC , 2008). Η αιτιολογία της νόσου περιλαμβάνει αρκετούς παράγοντες, όπως την εθνικότητα, ηλικία, το οικογενειακό ιστορικό, και γενετικών και περιβαλλοντικών παραγόντων [1], [2]. Έχει διαπιστωθεί ότι οι στεροειδείς επίπεδα ορμονών, ιδίως ανδρογόνα, επηρεάζουν τον κίνδυνο ανάπτυξης προστάτη [3], [4]. Η τεστοστερόνη και η διϋδροτεστοστερόνη κυρίως μεταβολίτη του αλληλεπιδρούν με τον υποδοχέα ανδρογόνων, η οποία οδηγεί στην έκφραση των γονιδίων που εμπλέκονται στην ανάπτυξη του προστάτη και του πολλαπλασιασμού των κυττάρων καρκίνου του προστάτη [5]. Αρκετές κυτοχρώματα Ρ450 (CYP που) που συμμετέχουν στην σύνθεση και τον καταβολισμό των ορμονών, όπως η τεστοστερόνη [6]. Η βιοδιαθεσιμότητα της διυδροτεστοστερόνης μειώνεται από το CYP3A4, το οποίο μεσολαβεί την 2

β

-, 6β- και 15β- υδροξυλίωση της τεστοστερόνης στο ήπαρ και προστάτη [7] – [9]. Ως εκ τούτου, έχει διατυπωθεί η υπόθεση ότι τα χαμηλά επίπεδα ή /και μειωμένη δραστηριότητα του CYP3A4 μπορεί να οδηγήσει σε χαμηλότερη ικανότητα να αδρανοποιήσουν την τεστοστερόνη ευνοεί τη μετατροπή της σε διυδροτεστοστερόνη και αυξάνοντας τον κίνδυνο εμφάνισης προστάτη. Στην πραγματικότητα, μειωμένη έκφραση του CYP3A4 έχει βρεθεί σε προστατικούς ιστούς από ασθενείς PCa σε σύγκριση με 93% για καλοήθη επιθήλιο, και μόνο το 75% των όγκων του προστάτη που εκφράζονται CYP3A4 [10].

ενδοατομική διακύμανση των επιπέδων του CYP3A4 μέχρι σε 60-πλάσια έχουν αναφερθεί [11], [12], και έχει προταθεί ότι το μεγαλύτερο μέρος της μεταβλητότητας μπορεί να εξηγηθεί από γενετικούς παράγοντες [13]. Η

CYP3A4

γονιδίου είναι ιδιαίτερα πολυμορφικό, και μέχρι σήμερα, 43 διαφορετικές

έχουν CYP3A4

πολυμορφισμοί έχουν αναφερθεί (https://www.cypalleles.ki.se/), από τις οποίες

CYP3A4 * 1B

είναι ένα από τα πιο κοινά.

CYP3A4 * 1B

είναι μια πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP) (rs2740574), που εισάγει ένα Α για υποκατάσταση G στην θέση -290, το οποίο βρίσκεται στο ειδικό nifenipine στοιχείο απόκρισης του υποκινητή του

CYP3A4

γονίδιο. Ενώ μερικές μελέτες έχουν αναφέρει ενώσεις μεταξύ του

CYP3A4 * 1B

αλληλόμορφο και υψηλότερη κλινική βαθμού προστάτη [14], [15], ενώ άλλα έχουν αποτύχει να τηρήσει τη σύνδεση μεταξύ της παρουσίας του

CYP3A4 * 1B

πολυμορφισμό και την ευαισθησία του καρκίνου του προστάτη [16], [17]. Αμφιλεγόμενη στοιχεία σχετικά με τη σύνδεση των

CYP3A4 * 1B

και τη δραστηριότητα του CYP3A4 έχουν επίσης αναφερθεί [18], [19], γεγονός που υποδηλώνει ότι άλλες γενετικές παραλλαγές μπορούν να συμμετέχουν, όπως είναι οι παράγοντες μεταγραφής που διαμεσολαβούν την έκφραση του CYP3A4.

πρεγνανίου Χ υποδοχέα (PXR, NR1I2) είναι μέλος της στεροειδούς οικογένειας των πυρηνικών υποδοχέων των ενεργοποιημένων συνδέτη παράγοντες μεταγραφής. Ενεργοποιημένος-PXR σχηματίζει ένα ετεροδιμερές με 9-cis-υποδοχέα ρετινοϊκού οξέος Χ (RXR) και συνδέεται με ένα στοιχείο πυρηνική απάντηση υποδοχέα στον 5′-πλαγιοκοπική περιοχή των γονιδίων στόχων του. Η επαγωγή του CYP3A4 είναι σε μεγάλο βαθμό οφείλεται στην ενεργοποίηση του PXR [20]. Ως εκ τούτου, οι γενετικές παραλλαγές των

PXR

που μεταβάλλουν τα επίπεδα της πρωτεΐνης PXR ή εν δυνάμει διενεργοποίηση του μπορεί να έχουν σημαντικό αντίκτυπο στην έκφραση του CYP3A4. Αρκετές

PXR

πολυμορφισμοί έχουν περιγραφεί μέχρι σήμερα, αλλά μόνο λίγα έχουν επιπτώσεις στη λειτουργία του CYP3A4. Μεταξύ αυτών, βρήκαμε rs2472677 και rs7643645. Η rs7643645 SNP βρίσκεται στην θέση πρόσδεσης HNF4 του υποκινητή του

PXR

γονίδιο και έχει συνδεθεί με μειωμένα επίπεδα PXR και CYP3A4 mRNA καθώς και τη δραστηριότητα του CYP3A4. Η παραλλαγή rs2472677 βρίσκεται στην θέση πρόσδεσης HNF3β του ίδιου προαγωγέα και έχει ως αποτέλεσμα αυξημένα επίπεδα PXR mRNA καθώς και η βασική δράση του CYP3A4 [21]. Για πρακτικούς λόγους, στην παρούσα μελέτη η παραλλαγή rs7643645 θα ονομάζεται

PXR-HNF4

/G ή

PXR-HNF4 /WT

και η παραλλαγή rs2472677 θα ονομάζεται

PXR-HNF3β

/T ή

PXR-HNF3β

/WT.

Μέχρι στιγμής, δεν έχουν υπάρξει αναφορές στη βιβλιογραφία διερευνά την πιθανή συσχέτιση μεταξύ του

πολυμορφισμούς PXR

και προστάτη . Ως εκ τούτου, πραγματοποιήσαμε μια μελέτη ασθενών-μαρτύρων να διερευνήσει κατά πόσον

CYP3A4 * 1B

,

PXR-HNF4 /G

, και

παραλλαγές αλληλόμορφο PXR-HNF3β

/Τ συνδέονται με κίνδυνο εμφάνισης προστάτη σε μεξικανικά άνδρες.

Υλικά και Μέθοδοι

πληθυσμός μελέτη

Η παρούσα μελέτη χρησιμοποιήθηκε ένα νοσοκομείο με βάση το σχεδιασμό περίπτωση ελέγχου. Η ομάδα περίπτωση είχε προσληφθεί από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου και περιελάμβανε 99 ασθενείς με ιστολογικά επιβεβαιωμένη διάγνωση του προστάτη. Κλινικά χαρακτηριστικά, όπως Gleason τάξη, ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) επίπεδα κατά τη στιγμή της διάγνωσης, δακτυλική εξέταση (DRE?, Σύμφωνα με τις συστάσεις Αμερικανική Ουρολογική Εταιρεία), όγκου μετάσταση λεμφαδένα (TNM) [22], και την ηλικία κατά το χρόνο της διάγνωσης ελήφθησαν από τα ιατρικά αρχεία. Κατηγορίες κλινικά χαρακτηριστικά ορίστηκαν ως εξής: PSA δύο ομάδες, (cut σημείο, 10 ng /mL)? Gleason βαθμού δύο ομάδες (σημείο κοπής, 7)? και ΤΝΜ δύο ομάδες (TNM≤2 και TNM≥3) [15]. Η ομάδα ελέγχου αποτελείτο από 144 ασθενείς χωρίς ιστορικό οποιουδήποτε καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη, με PSA & lt? 4,0 ng /ml, φυσιολογική DRE, και προσλήφθηκε από το Νοσοκομείο Juárez. Όλα τα άτομα ήταν άσχετη άνδρες (αυτο-αναφοράς) μεταξύ 60 και 76 ετών. Το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου και οι Επιτροπές Δεοντολογίας Juárez Νοσοκομείο ενέκρινε την παρούσα μελέτη και την γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς. Τα πλήρη κλινική και γενετική ανά ασθενή δεδομένα μπορούν να βρεθούν στις πληροφορίες υποστήριξης (Πίνακας S1 και S2).

DNA εκχύλιση

Γονιδιωματικό DNA απομονώθηκε από 5 ml πλήρους αίματος χρησιμοποιώντας ένα νάτριο υπερχλωρικό /χλωροφόρμιο μέθοδο εκχύλισης. Εν συντομία, το DNA παρασκευάστηκε συνδυάζοντας κάθε δείγμα αίματος με 35 mL ρυθμιστικού λύσης [320 mM σακχαρόζη, 5 mM MgCl

2, 1% (ν /ν) Triton Χ-100, 10 mM Tris-HCl, ρΗ 8] . Το πυρηνικό σφαιρίδιο συλλέχθηκε με φυγοκέντρηση σε 2000 χ g για 10 λεπτά και μετά επαναιωρήθηκαν σε 2 ml διαλύματος Β [150 mM NaCl, 60 mM EDTA, 1% (β /ό) δωδεκυλ θειικό νάτριο, 400 mM Tris-HCl, ρΗ 8]. Το εναιώρημα αναμίχθηκε με 0,5 mL 5 Μ υπερχλωρικού νατρίου και στη συνέχεια επωάζονται στους 65 ° C για 30 λεπτά. Μετά την επώαση, προστέθηκαν 2 ml χλωροφορμίου, και το μίγμα υποβλήθηκε σε φυγοκέντρηση σε 1400 χ g για 10 λεπτά. Το υδατικό περιέχει DNA άνω φάση καταβυθίστηκε με την προσθήκη 2 όγκων 100% αιθανόλης και πλύθηκε με 70% αιθανόλη. Το DNA μετά επαναιωρήθηκε σε 200 μΐ 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, ρΗ 7,4, και ποσοτικοποιείται με μέτρηση της απορρόφησης σε μήκος κύματος 260 nm.

γονοτυπικός

γονοτυπικός του

CYP3A4 * 1B

,

PXR-HNF3β

, και

PXR-HNF4

διεξήχθη με πραγματικού χρόνου PCR χρησιμοποιώντας ένα StepOne real-Time PCR System με TaqMan Οικουμενική PCR Master Mix (Applied Biosystems, USA). PCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας 5 μl TaqMan καθολική PCR Master Mix, 0.25 μΐ μείγματος εκκινητή-ανιχνευτή (που περιέχει 36 μΜ του κάθε εκκινητή και 8 μΜ χρωστικής επισημασμένου ιχνηλάτη) και 20 μg του εκμαγείου DNA. Ο τελικός όγκος της αντίδρασης φέρθηκε σε 10 μΐ με H

2O. Χρησιμοποιήθηκαν σαράντα κύκλοι PCR από τις ακόλουθες παραμέτρους: αρχική denaturalization στους 95 ° C για 10 λεπτά, 15 s στους 92 ° C, και στη συνέχεια 60 ° C για 1 λεπτό. Μετά από κάθε ενίσχυση η αλληλομόρφων των διακρίσεων έγινε για τον προσδιορισμό του γονοτύπου του κάθε θέματος. Οι εκκινητές και ανιχνευτές αλληλουχίες να χρησιμοποιηθούν για

CYP3A4

είχαν ως εξής: 5′-TGGAATGAGGACAGCCATAGAGA-3 ‘(προς τα εμπρός), 5′-AGTGGAGCCATTGGCATAAAATCT-3’ (αντίστροφο),

* 1Α

ανιχνευτή ( VIC): AAGGGCAAGAGAGAG, και

* 1Β

καθετήρα (FAM): AAGGGCAGGAGAGAG. Για

PXR-HNF3β

: 5′-GCACAAACATTTTCAATTTCAATGAAGTTCA-3 ‘(προς τα εμπρός), 5′-CATTCGGAAGACTTATTCTATTCCTGTCT-3’ (αντίστροφο),

PXR-HNF3β /WT

καθετήρα (VIC): CCATATTTTTTCTGATTAAA και

PXR-HNF3β /T

καθετήρα (FAM): CCATATTTTTTTTGATTAAA. Για

PXR-HNF4

: 5′-CACCATGCTTAGCTACAGCTCTATT-3 ‘(προς τα εμπρός), 5′-GGCAAGATCACAACATGGGAAGA-3’ (αντίστροφο),

PXR-HNF4 /WT

καθετήρα (VIC): AAAATGGCCTGTGGTCC και

PXR-HNF4 /G

καθετήρα (FAM):. TGGCCCGTGGTCC

η στατιστική ανάλυση

η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του στατιστικού πακέτου STATA (έκδοση 10,1, STATA Corp. , College Station, TX). T-test,

X

2

δοκιμή ή την ακριβή δοκιμασία του Fisher χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί κατά πόσον η κατανομή των συχνοτήτων γονοτύπου του

CYP3A4 * 1B

,

PXR-HNF4

και

PXR-HNF3β

ποικίλη μεταξύ ασθενών και μαρτύρων. Για τη σύγκριση των κλινικών χαρακτηριστικών της ομάδας περίπτωση, ΕΑΠ υπολογίστηκαν ως εκτίμηση του σχετικού κινδύνου και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης (ΠΙ) υπολογίστηκαν με τη χρήση διδιάστατων μοντέλο λογιστικής. Μια τιμή του ρ & lt? 0,03 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική μετά από πολλαπλές προσαρμογή δοκιμές με τη διόρθωση Bonferroni. Η

X

2

δοκιμή χρησιμοποιήθηκε επίσης για την εκτίμηση αποκλίσεις των αλληλομόρφων συχνοτήτων από την ισορροπία Hardy-Weinberg. Η αλληλεπίδραση μεταξύ αλληλόμορφων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό Ρσυνδετήρ V 1.07. Ο αριθμός (n) του πληθυσμού περίπτωση για κάθε συνδυασμό με κλινικά χαρακτηριστικά που αναφέρονται στους πίνακες.

Η ευαισθησία και ειδικότητα από σημαντικά μοντέλα εκτιμάται [23]. χρησιμοποιήθηκαν Μια αποκοπής του 50% για την κατάταξη της εκδήλωσης και του λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη (ROC καμπύλη). Όλοι οι υπολογισμοί πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού STATA ως μετα λογιστικής εκτίμησης μοντέλο.

Αποτελέσματα

Κλινικά χαρακτηριστικά των υπό μελέτη θεμάτων ελήφθησαν από ιατρικά αρχεία και παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στην οικογενειακή κατάσταση ή την ηλικία μεταξύ των δύο ομάδων. Όπως ήταν αναμενόμενο, οι ασθενείς με καρκίνο του προστάτη που παρουσιάζονται σημαντικά υψηλότερα επίπεδα του PSA σε σχέση με την ομάδα ελέγχου (167 έναντι 1,73 ng /ml, αντίστοιχα), καθώς και μια υψηλότερη βαθμολογία για DRE βαθμού ΙΙΙ.

Η

Ανάλυση μεταξύ περίπτωση και τον έλεγχο των ομάδων

Οι συχνότητες γονοτύπου του

CYP3A4

και

PXR

μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του προστάτη και των ελέγχων παρουσιάζονται στον πίνακα 2. αλληλόμορφα για

PXR

ήταν σε Hardy-Weinberg ισορροπία (HWE), αλλά

CYP3A4 * 1B

ήταν μόνο σε HWE στην ομάδα ελέγχου (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Η

CYP3A4 * 1B /* 1B

γονότυπο ήταν παρούσα μόνο σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές για

CYP3A4 * 1A /1B *

ή

CYP3A4 * 1A /* 1A

γονότυπους μεταξύ των δύο ομάδων. Επιπλέον, όταν το

PXR

πολυμορφισμοί συγκρίθηκαν μεταξύ περιπτώσεων και ομάδες ελέγχου, δεν διαπιστώθηκαν διαφορές στις συχνότητες γονότυπο είτε για

-HNF3β PXR

ή

παρατηρήθηκαν PXR-HNF4

αλληλόμορφα.

Στη συνέχεια, προσδιορίζεται η κατανομή της συνδυασμένης

CYP3A4

και

PXR

αλληλικές παραλλαγές. Τα άτομα με το συνδυασμό γονοτύπων

CYP3A4 * 1B /* 1B

και

PXR-HNF4G /G

, ή

CYP3A4 * 1B /* 1B

και

PXR-HNF3β

WT /WT, ήταν παρόντες μόνο στην ομάδα υπόθεσης. Για τους άλλους συνδυασμούς, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ του ελέγχου και την περίπτωση των ομάδων (Πίνακας 3).

Η

Ανάλυση ανάμεσα περιπτώσεις

διαστρωμάτωση

του

CYP3A4

και

PXR

γονότυπους και PSA, Gleason βαθμού και σκορ ΤΝΜ μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του προστάτη παρουσιάζονται στο Σχήμα 1 και τον πίνακα S3. Δεν υπήρχαν διαφορές στο

CYP3A4

γονότυπο από τη σύγκριση του PSA ή βαθμό Gleason. Είκοσι πέντε τοις εκατό των ασθενών με καρκίνο του προστάτη με TNM≥3 ήταν ετερόζυγο για το

CYP3A4

παραλλαγή και είχε OR 3,16 σε σύγκριση με το

* 1A /* 1A

γονότυπο, αλλά αυτή η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική (ρ = 0,10) (Πίνακας S3). Για τα

PXR-HNF4

γονότυπο, μια ένωση του

PXR-HNF4

/παραλλαγή G με υψηλότερα επίπεδα PSA παρατηρήθηκε στην περίπτωση της ομάδας (Εικόνες 1 και 2). Τα άτομα με PSA & gt? 10 ng /ml ήταν

WT /G

(49,2%) και

G /G

(34.92%) με ΕΑΠ 2,46 (p = 0,10) και 3,99 (p = 0,03), αντίστοιχα. Από την άλλη πλευρά, εξήντα δύο τοις εκατό των περιπτώσεων με TNM≥3 ήταν ετερόζυγα για το

PXR-HNF4

αλληλόμορφο με ένα OR 2,96, αλλά το αποτέλεσμα αυτό δεν ήταν στατιστικά σημαντικό. Δεν συσχετίσεις παρατηρήθηκαν για

PXR-HNF4

γονότυπων με το βαθμό Gleason. Η PSA, Gleason βαθμό, και τις αξίες βαθμολογία ΤΝΜ δεν συνδέθηκαν με το

PXR-HNF3β

γονότυπο μεταξύ των ασθενών του προστάτη. Προκειμένου να προσδιοριστεί η ισχύς της παρούσας μελέτης για

PXR-HNF4

πολυμορφισμού μια ανάλυση δύναμης έγινε, και λήφθηκε μια τιμή 1-β 84 (Σχήμα 3).

ομάδας υπόθεση κατηγοριοποιήθηκε ως εξής: PSA δύο ομάδες, (σημείο κοπής, 10 ng /mL)? Gleason βαθμού δύο ομάδες (σημείο κοπής, 7)? και ΤΝΜ δύο ομάδες (TNM≤2 και TNM≥3). ΕΑΠ υπολογίστηκαν ως εκτίμηση του σχετικού κινδύνου και 95% διαστήματα εμπιστοσύνης (ΠΙ) υπολογίστηκαν με τη χρήση διδιάστατων μοντέλο λογιστικής. PSA, προστάτη-ειδικό αντιγόνο. TNM, λεμφικό όγκου κόμβοι μετάσταση. * P = 0,03

Η

Τα άτομα από την ομάδα την περίπτωση ήταν ο γονότυπος για την παραλλαγή

PXR-HNF4

/G και χωρίζονται σε ομάδες ανάλογα με το γονότυπο τους:. 20 άτομα αντιστοιχούσαν σε ομόζυγη

PXR-HNF4-WT /WT

, 45 αντιστοιχούσαν σε ετερόζυγη

PXR-HNF4-WT /G

, και 28 αντιστοιχούσαν σε

PXR-HNF4-G /G

. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση της δοκιμής Mann Whitney U. Οριζόντια γραμμή δείχνει τη μέση.

WT /WT vs WT /G

, p = 0,05?

WT /WT vs G /G

, p = 0.02.

Η

Επίσης θεωρείται η ψευδο R2, λογιστικό μοντέλο (R2 = 0,0432). Για ένα μέγεθος δείγματος 93 ατόμων η δύναμη υπολογίζεται ήταν 0,84.

Η

Μια ισχυρότερη συσχέτιση μεταξύ του

CYP3A4

γονότυπο και Gleason και ΤΝΜ βαθμούς σε ασθενείς που διαγνώστηκαν στην ηλικία των 65 ετών παλαιότερα έχει αναφερθεί προηγουμένως [15]. Ως εκ τούτου, διερευνήθηκε η συσχέτιση της

CYP3A4

και

PXR-HNF4

γονότυπων με τα κλινικά χαρακτηριστικά μεταξύ των ατόμων που έχουν διαγνωστεί στην ηλικία των 65 ετών και άνω. Προκειμένου να συγκριθούν τα αποτελέσματα με αυτά που έχουν αναφερθεί προηγουμένως, χρησιμοποιήθηκε ένα κυρίαρχο μοντέλο (δηλαδή WT έναντι ετερόζυγα και ομόζυγα για την παραλλαγή).

Όχι συσχέτιση μεταξύ της

CYP3A4

γονότυπους και PSA ή βαθμό Gleason παρατηρήθηκαν. Ωστόσο, οι άνδρες με

* 1Β

αλληλόμορφο έδειξε αυξημένο κίνδυνο να έχουν μια υψηλότερη βαθμολογία ΤΝΜ (OR = 2.2), αλλά η στατιστική ανάλυση έδειξε ότι η συσχέτιση αυτή δεν ήταν σημαντική (Πίνακας 4). Πίνακας 5 δείχνει ΕΑΠ σύγκριση

PXR-HNF4

–

WT

να

PXR-HNF4 WT /G

και

PXR-HNF4-G /G

στην συνδυασμός (κυρίαρχο μοντέλο). Τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι οι άνδρες με την παραλλαγή G έδειξε αυξημένο κίνδυνο να έχουν υψηλότερα επίπεδα PSA (OR = 10,8? P = 0,006). Η ευαισθησία και η ανάλυση ειδικότητα δείχνουν ότι το 84% των ατόμων άνω των 65 ετών με WT /G ή G /G γονότυπο θα έχουν υψηλό κίνδυνο να παρουσιάσουν υψηλότερα επίπεδα PSA.

Η

PSA, του προστάτη -εξειδικευμένης αντιγόνο. TNM, λεμφικό όγκου κόμβοι μετάσταση.

aComparing εκείνοι με

WT έναντι

εκείνοι με

G /G

και

WT

/

G

γονότυπους (κυρίαρχο μοντέλο).

* Logistic μοντέλο.

n, αρ θεμάτων.

Δεν υπάρχουν ενώσεις με Gleason βαθμού και βαθμολογία ΤΝΜ εντοπίστηκαν. Στο σύνολό τους, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν σαφώς ότι PXR-

HNF4 /G

πολυμορφισμοί αυξάνουν τον κίνδυνο υψηλότερα επίπεδα PSA μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του προστάτη.

Συζήτηση

Η αιτιολογία του προστάτη ο καρκίνος παραμένει ασαφής και περιλαμβάνει διάφορους παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων των γενετικών καθοριστικών παραγόντων. Ως εκ τούτου, ο προσδιορισμός των γενετικών παραγόντων κινδύνου για επιδεκτικότητα καρκίνου του προστάτη είναι σημαντική. Πολλές μελέτες έχουν επικεντρωθεί σε

CYP3A4

πολυμορφισμών του γονιδίου, επειδή το ένζυμο αυτό συμμετέχει στο μεταβολισμό της τεστοστερόνης. Στην παρούσα μελέτη ασθενών-μαρτύρων, ερευνήσαμε εάν

CYP3A4 * 1B

παραλλαγή συνδέθηκε με διάφορα χαρακτηριστικά κλινική του καρκίνου του προστάτη. Η

CYP3A4 * 1B

παραλλαγή δεν ήταν σε HWE στην ομάδα περίπτωση πιθανότατα λόγω της υπέρβασης της ομόζυγη

CYP3A4 * 1B

γονότυπο που παρουσιάζονται σε αυτή την ομάδα. Απόκλιση από HWE δεν πρέπει να είναι απροσδόκητο, ιδιαίτερα όταν ένα αλλήλιο συσχετίζεται με μια ασθένεια, η οποία είναι η περίπτωση σε αυτή τη μελέτη. Στην πραγματικότητα, οι μελέτες δείχνουν παρόμοια δεδομένα που δεν πληρούν τις νομοθετικές πληθυσμός Hardy-Weinberg [14], [15], [24]. Αν και το

CYP3A4 * 1B /* 1B

γονότυπο υπερεκπροσωπείται σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στη συχνότητα του αλληλόμορφου μεταξύ των ελέγχων και των περιπτώσεων (Πίνακας S4). Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε καμία συσχέτιση αυτού του πολυμορφισμού με την PSA, το βαθμό Gleason, ή ΤΝΜ. Από την άλλη πλευρά, έχει αναφερθεί ότι η συχνότητα εμφάνισης του προστάτη είναι υψηλότερη σε ασθενείς με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη που έχει η

CYP3A4 * 1B

αλληλόμορφο σε σύγκριση με εκείνους που έχουν το

CYP3A4 * 1A

αλληλόμορφο [25]. Λαμβάνοντας υπόψη τα ανωτέρω, θα ήταν ενδιαφέρον να αξιολογηθεί εάν η συσχέτιση αυτή είναι επίσης παρούσα στη μεξικανική πληθυσμού. Μια άλλη σημαντική παράμετρος είναι η πιθανή κλινική επίδραση του

CYP3A4 * 1B

παραλλαγή στην ατομική ανταπόκριση στην ορμονική θεραπεία.

Μια προηγούμενη μελέτη ανέφερε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ του

CYP3A4 * 1B

γονότυπου και του βαθμού Gleason και το σκορ ΤΝΜ σε ασθενείς που διαγνώστηκαν στην ηλικία των 65 ετών και άνω [14], [15]. Στην παρούσα πληθυσμό ασθενών, το κυρίαρχο μοντέλο ανάλυσης έδειξαν ότι τα άτομα διαγνώστηκαν στην ηλικία των 65 ετών και άνω και με το

CYP3A4 * 1B

αλληλόμορφο είχαν υψηλότερο κίνδυνο ενός TNM≥3 (OR = 2.2). Ωστόσο, η αύξηση αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Επιπλέον, η παρούσα μελέτη δεν διαπίστωσε σύνδεσης μεταξύ

CYP3A4 * 1B

πολυμορφισμούς και τα χαρακτηριστικά κλινική του καρκίνου του προστάτη. Άλλες μελέτες έχουν επίσης αποτύχει να δείξει συσχέτιση μεταξύ καρκίνου του προστάτη και αυτή την παραλλαγή αλληλομόρφων [17]. Η λειτουργική σημασία του

CYP3A4 * 1B

πολυμορφισμός έχει μελετηθεί χρησιμοποιώντας το

in vitro

και

in vivo

προσεγγίσεις. μελέτες Μετενεργοποίησης δείχνουν ότι οι -290A /G παραλλαγής ως αποτέλεσμα μία αύξηση στη δραστικότητα γονιδίου ανταποκριτού, υποδηλώνοντας ότι η

CYP3A4 * 1B

πολυμορφισμός είναι απίθανο να μειώσει την ικανότητα να αδρανοποιήσουν την τεστοστερόνη και ως εκ τούτου αυξάνουν τον κίνδυνο για την PCA ανάπτυξη [ ,,,0],26] [27]. Περισσότερα αμφιλεγόμενα αποτελέσματα αναφορικά με

σε έχουν αναφερθεί vivo

μελέτες. Wandel και συνεργάτες [19] έδειξαν μια μέτρια διαφορά στη δραστηριότητα του CYP3A4 μεταξύ Αφροαμερικανών και των ευρωπαϊκών Αμερικανούς που συνδέονται με το

CYP3A4 * 1B

συχνότητα. Ωστόσο, Λάμπα και συνεργάτες [28] δεν βρήκε καμία σχέση μεταξύ αυτού του πολυμορφισμού και το φαινότυπο του CYP3A4. Μπάλα [29] ανέφεραν παρόμοια αποτελέσματα. Η έλλειψη συσχέτισης θα μπορούσε να εξηγηθεί από άλλους γενετικούς πολυμορφισμούς που εμπλέκονται στο μεταβολισμό των ορμονών, όπως εκείνες που παρουσιάζονται στο

CYP3A5

γονίδιο. Επιπλέον, παραλλαγή ακολουθίας μεταγραφικών παραγόντων που ρυθμίζουν την έκφραση του CYP3A4 και άλλων ενζύμων που μεταβολίζουν ορμόνη θα πρέπει να θεωρούνται επίσης. Ειδικότερα, PXR μπορούν να διαδραματίσουν σημαντικό ρόλο, δεδομένου ότι πολλές μεταφορείς και ένζυμα μεταβολισμού, συμπεριλαμβανομένων των CYP3A4, είναι σύμφωνα με τον κανονισμό της μεταγραφής του. Στην παρούσα μελέτη, ούτε

PXR-HNF4 /G

ούτε

PXR-HNF3β

/T αλληλόμορφα ήταν υπερεκπροσωπούνται σε περίπτωση ομίλου. Ωστόσο, παρατηρήθηκε μια σαφής σύνδεση μεταξύ των G

επίπεδα

PXR-HNF4 /αλληλόμορφο και PSA. Βρήκαμε ότι οι ασθενείς ομόζυγα και ετερόζυγα καρκίνου του προστάτη είχαν υψηλότερο κίνδυνο να παρουσιάσει υψηλότερα επίπεδα PSA (OR = 2,46 και OR = 3,99, αντίστοιχα). Όταν η ανάλυση εφαρμόστηκε σε ασθενείς που διαγνώστηκαν στην ηλικία των 65 ετών και άνω, το κυρίαρχο μοντέλο ανάλυσης έδειξαν ότι τα άτομα με αυτό το αλληλόμορφο παρουσίασε ένα ακόμη υψηλότερο κίνδυνο να έχουν υψηλά επίπεδα PSA ≥10 (OR = 10,8).

Η

PXR-HNF4

(69789A & gt? G) πολυμορφισμός τροποποιεί μια θέση δέσμευσης HNF4 βρίσκεται στο

PXR

υποκινητή του γονιδίου, η οποία οδηγεί σε χαμηλότερα PXR και τα επίπεδα CYP3A4 mRNA μαζί με μια μείωση του CYP3A4 βασική δραστηριότητα [30]. Από την άλλη πλευρά, έχει δειχθεί ότι η προστατικό ιστό από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη εκφράζουν χαμηλότερα επίπεδα των πρωτεϊνών PXR και CYP3A4 σε σύγκριση με καλοήθη ιστό προστάτη από την ομάδα ελέγχου [31] [10]. Αυτό πιθανότατα ευνοεί τη μετατροπή της τεστοστερόνης σε διυδροτεστοστερόνη (DHT) αυξάνοντας τον κίνδυνο ανάπτυξης προστάτη, καθώς και δείκτες καρκίνου του προστάτη, όπως PSA. PSA είναι ένα μέλος της οικογένειας γονιδίων καλλικρεϊνης. Αρκετά στοιχεία δείχνουν ότι το PSA είναι υπό ανδρογόνο κανονισμού. Η επαγωγή της PSA mRNA οδηγείται από μιβολερόνη και DHT και αναστέλλεται από αντιανδρογόνα, προτείνοντας ότι αυτή η επίδραση ανδρογόνων εξαρτώμενη από τον υποδοχέα [32] [33] [34]. Μόλις PSA εκκρίνεται υποβιβάζει εξωκυτταρικές πρωτεΐνες που διευκολύνουν την εισβολή των καρκινικών κυττάρων του προστάτη [35]. PSA έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για τον έλεγχο των ανδρών για προστάτη που οδηγεί σε δραματική μείωση των ποσοστών θανάτου του προστάτη. Ωστόσο, η χρήση του είναι αμφιλεγόμενη λόγω όριο να γίνει διάκριση μεταξύ του καρκίνου και της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη, ή μεταξύ νωχελικός και επιθετικό καρκίνο με αποτέλεσμα overdetection και υπερθεραπεία. Τα παρόντα αποτελέσματα θα πρέπει να γίνει κατανοητό από την εξέταση της παραπάνω.

Εκτός από το CYP3A4, PXR ρυθμίζει την έκφραση άλλων γονιδίων που εμπλέκονται στο μεταβολισμό των στεροειδών ορμονών, όπως CYP17 και CYP24A1, που θα μπορούσαν να ευθύνονται για μεταβολές στην βιοδιαθεσιμότητα της τεστοστερόνης [ ,,,0],36] [37]. Η

PXR-HNF4 /G

συχνότητα αλληλόμορφου στην ομάδα ελέγχου ήταν 0,37, η οποία είναι παρόμοια με αυτή που παρατηρήθηκε για τους Καυκάσιους (0,36) [30]. Αντίθετα, αυτή η συχνότητα αλληλόμορφο στην ομάδα καρκίνου του προστάτη ήταν 0.56. Ωστόσο, η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική. Παρ ‘όλα αυτά, η παρουσία του

PXR-HNF4 /G

αλληλόμορφο είναι υψηλή και στους δύο πληθυσμούς, του Καυκάσου και της Μεξικανοί, και ως εκ τούτου, θα ήταν ενδιαφέρον να διερευνήσει πιθανές συσχετίσεις αυτού του πολυμορφισμού και του μεταβολισμού του φαρμάκου, καθώς και άλλες παθολογίες.

Είναι ενδιαφέρον ότι, οι ασθενείς ομόζυγο για το

CYP3A4 * 1B

αλληλόμορφο ήταν επίσης ομόζυγο για το

PXR-HNF4 /G

αλληλόμορφο. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε αν ένα φαινόμενο επίστασης συμμετείχε και διαπίστωσε ότι οι δύο αλληλόμορφα δεν αλληλεπιδρούν μεταξύ τους.

Εν κατακλείδι, η παρούσα μελέτη είναι η πρώτη που δείχνει ότι η παρουσία του

PXR-HNF4 /G

αλληλόμορφο αυξάνει τον κίνδυνο να έχουν υψηλότερα επίπεδα του PSA σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Είναι επίσης η πρώτη μελέτη που αξιολογεί, σε ένα μεξικάνικο πληθυσμό, τη σύνδεση των

CYP3A4

και

PXR

γονιδίου πολυμορφισμούς με προστάτη. Σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες, τα παρόντα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το

CYP3A4 * 1B

πολυμορφισμός φαίνεται να είναι ένα γονίδιο με χαμηλή διεισδυτικότητα και ως εκ τούτου έχει μέτρια αποτελέσματα σχετικά με τον κίνδυνο ανάπτυξης καρκίνου του προστάτη. Τέλος, οι μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να γίνει για να αξιολογηθεί η PXR παραλλαγές ρόλο στην ανάπτυξη του προστάτη.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Κλινικά και γενετικά ανά ασθενή αποτελέσματα (Cases)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099974.s001

(DOC)

Πίνακας S2.

Κλινικά και γενετικά ανά ασθενή αποτελέσματα (έλεγχοι)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099974.s002

(DOCX)

Πίνακα S3.

Σχέση μεταξύ

CYP3A4

και

PXR

γονότυπους και κλινικά χαρακτηριστικά μεταξύ των περιπτώσεων

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099974.s003

(DOC)

Πίνακας S4.

CYP3A4

και

PXR

αλληλομόρφων συχνότητες

doi:. 10.1371 /journal.pone.0099974.s004

(DOC)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Humberto García Ortiz για την τεχνική βοήθεια του.