Αφηρημένο

Ιστορικό

Η πρωτεΐνη γλυκοζυλίωση είναι μια σημαντική μετα-μεταφραστική τροποποίηση φαίνεται να μεταβάλλεται σε όλα τα καρκινικά είδη έχουν μελετηθεί μέχρι σήμερα. έχουν βλεννίνη γλυκοπρωτεΐνες καθιερωθεί ως σημαντικό φορείς του

Ο-

συνδεδεμένες γλυκάνες, αλλά και άλλες γλυκοπρωτεΐνες επιδεικνύει αλλαγμένο ρεπερτόρια γλυκοζυλίωσης δεν έχουν ακόμη προσδιοριστεί, αλλά προσφέρει δυνατότητες ως βιοδείκτες για τον μεταστατικό καρκίνο.

Μεθοδολογία

σε αυτή τη μελέτη μια glycoproteomic προσέγγιση χρησιμοποιήθηκε για την ταυτοποίηση γλυκοπρωτεΐνες που παρουσιάζουν μεταβολές στην γλυκοζυλίωση σε καρκίνο του παχέος εντέρου και για την αξιολόγηση των αλλαγών σε

Ο-

συνδεδεμένη γλυκοζυλίωση στο πλαίσιο της ρ53 και KRAS (κωδικόνιο 12/13 ) κατάσταση μετάλλαξης. Ο καθαρισμός συγγένειας με τη σύνδεση υδατάνθρακα πρωτεΐνη από

Helix pomatia

συγκολλητίνη (ΗΡΑ) συζεύχθηκε σε ηλεκτροφόρηση 2 διαστάσεων γέλη με φασματομετρία μάζας για να είναι δυνατή η ταυτοποίηση των χαμηλών αφθονίας

Ο-

συνδέονται γλυκοπρωτεΐνες από την ανθρώπινη παχέος δείγματα καρκίνου.

Αποτελέσματα

η ανώμαλη

Ο-

γλυκοζυλίωση παρατηρήθηκε να είναι ένα πρώιμο γεγονός που συνέβη ανεξάρτητα από την p53 και την κατάσταση KRAS και συσχετίζεται με μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου . Ο καθαρισμός συγγένειας με τη χρήση του ΗΡΑ λεκτίνη ακολουθούμενη από πρωτεομική ανάλυση αποκάλυψε αννεξίνη 4, αννεξίνη 5 και CLCA1 να αυξηθεί στο μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνο δείγματα. Τα αποτελέσματα επικυρώθηκαν με τη χρήση ενός επιπλέον ανεξάρτητο σύνολο των δειγμάτων και αυτό έδειξε μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της βαθμολογίας χρώση για αννεξίνη 4 και ΗΡΑ και το χρόνο για να μετάσταση? ανεξάρτητα (αννεξίνη A4: πλατεία Chi 11.45, Ρ = 0.0007? ΗΡΑ: πλατεία Chi 9,065, P = 0,0026) και σε συνδυασμό (αννεξίνη 4 και ΗΡΑ συνδυασμό: πλατεία Chi 13.47? P = 0.0002)

Συμπέρασμα

οι γλυκοπρωτεΐνες που δείχνει τις αλλαγές στο

Ο-

συνδεδεμένη γλυκοζυλίωση στο μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου έχουν εντοπιστεί. Οι αλλαγές γλυκοζυλίωσης ήταν ανεξάρτητες της p53 και την κατάσταση KRAS. Αυτές οι πρωτεΐνες προσφέρουν δυνατότητες για περαιτέρω διερεύνηση ως βιοδείκτες και πιθανοί στόχοι για τον μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Peiris D, Ossondo Μ, Fry S, Λοϊζίδου Μ, Smith-Ravin J, Dwek MV (2015) Προσδιορισμός των

O

-συνδεδεμένες γλυκοπρωτεΐνες η σύνδεση με τη λεκτίνη

Helix pomatia

Συγκολλητίνης ως δείκτες του μεταστατικού καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (10): e0138345. doi: 10.1371 /journal.pone.0138345

Επιμέλεια: Lu-Gang Yu, Πανεπιστήμιο του Λίβερπουλ, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 15, Ιουνίου 2015? Αποδεκτές: 28 Αυγούστου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 23, Οκτωβρίου 2015

Copyright: © 2015 Peiris et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή υποστηρίχθηκε από τον καρκίνο του μαστού, Registered Charity Αριθμός 1121258 (που χρηματοδοτείται DP και SF). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Ιστορικό

η γλυκοζυλίωση είναι μια σημαντική μετα-μεταφραστική τροποποίηση η οποία έχει φανεί ότι μεταβάλλεται σε όλους τους τύπους καρκίνου έχουν μελετηθεί μέχρι σήμερα. Τα γονίδια που κωδικοποιούν για ένζυμα που εμπλέκονται σε αντιδράσεις γλυκοζυλίωσης αντιπροσωπεύουν περίπου το 1% του ανθρώπινου γονιδιώματος που εξηγεί τις μυριάδες των αλλαγών γλυκοζυλίωσης που αναφέρθηκαν σε καρκίνο. Μετάσταση, η διάδοση των κυττάρων από τον πρωτογενή όγκο σε απομακρυσμένα όργανα, είναι ένα σημαντικό πρόβλημα που επηρεάζει ασθενείς που διαγνώστηκαν με καρκίνο του παχέως εντέρου (CRC) [1]. Κατά συνέπεια, η έγκαιρη διάγνωση του μεταστατικού CRC είναι ένας σημαντικός στόχος και οι νέες προγνωστικοί δείκτες που απαιτούνται για την αναγνώριση ασθενών που διατρέχουν τον υψηλότερο κίνδυνο ανάπτυξης μεταστάσεων να επιτρέψει ογκολόγους να προσαρμόσουν τις στρατηγικές θεραπείας για τις ομάδες υψηλού κινδύνου patients.Alterations στην γλυκοζυλίωση έχει αποδειχθεί ότι σχετίζονται με την μεταστατική συμπεριφορά των νεοπλασματικών κυττάρων [2,3] και μπορούν να ταυτοποιηθούν χρησιμοποιώντας δεσμεύσεως υδατανθράκων πρωτεΐνες, λεκτίνες, που απομονώνονται από μία μεγάλη ποικιλία οργανισμών, συμπεριλαμβανομένων βακτηριδίων, τα φυτά, ασπόνδυλα και σπονδυλωτά [4]. Η λεκτίνη

Helix pomatia

συγκολλητίνη (ΗΡΑ) αναγνωρίζει

Ο-

συνδεδεμένη γλυκάνη δομές [5,6] και για πρώτη φορά αποδείχθηκε ότι δεσμεύεται επιλεκτικά με τον καρκίνο του μαστού από ασθενείς με κακή πρόγνωση [2] [ ,,,0],7]. Η χρησιμότητα του ΗΡΑ για την ανίχνευση μεταστατικού καρκίνου έκτοτε έχει δειχθεί για ένα εύρος στερεών όγκων περιλαμβανομένων εκείνων της γαστρεντερικής οδού, για παράδειγμα, του παχέος εντέρου, του στομάχου και του οισοφάγου όγκους [8-11]. Οι γλυκοπρωτεΐνες που αναγνωρίζονται από ΗΡΑ έχουν διερευνηθεί σε παράγωγα CRC κυτταρικές σειρές και αυτό αποκάλυψε ότι η χρησιμότητα του ΗΡΑ έγκειται στην ικανότητά της να συνδέεται ταυτόχρονα σε πολλές γλυκοπρωτεΐνες που εμπλέκονται σε μια σειρά από προ-μεταστατικό λειτουργίες, όπως η κυτταρική μετανάστευση, αντι-απόπτωση και κυτταρική σηματοδότηση [12]. ΗΡΑ έχει αποδειχθεί ότι δεσμεύουν τις ίδιες γλυκοπρωτεϊνών στον καρκίνο του μαστού, όπως εκείνα που ανιχνεύθηκαν σε κύτταρα ΗΤ29 υποδηλώνει ότι ΗΡΑ αναγνωρίζει αλλαγές στην γλυκοζυλίωση που είναι κοινά σε όλη στερεό τύπους όγκων. ΗΡΑ αναγνωρίζει γλυκοπρωτεΐνες τροποποιήθηκε από την κατάσχεση

Ο-

συνδέονται

Ν

-acetylgalactosamine (

Ο-

ΟαΙΝΑο) και

Ν

-ακετυλογλυκοζαμίνης (

Ο-

GlcNAc) [13]. καρκίνο που σχετίζεται με αλλαγές στο

Ο-

γλυκοζυλίωση έχουν αναγνωριστεί εδώ και αρκετό καιρό, αλλά έχουν υπάρξει ασχολείται με τη χαρτογράφηση των πρωτεϊνών στις οποίες οι αλλαγμένη γλυκάνες attached.In την τρέχουσα μελέτη σχετικά λίγες μελέτες, χρησιμοποιήθηκε η HPA λεκτίνη για τον εντοπισμό

Ο-

συνδέονται γλυκοπρωτεΐνες των ιστών CRC που ήταν μεταστατικό στους λεμφαδένες. Οι πρωτεΐνες προ-εμπλουτισμένα με χρωματογραφία συγγενείας λεκτίνης και διαχωρίστηκαν με δισδιάστατη ηλεκτροφόρηση πηκτής (2-DE), ακολουθούμενη από προσδιορισμό χρησιμοποιώντας φασματομετρία μάζας (MS). Επαλήθευση τις γλυκοπρωτεΐνες τις διεξήχθη με ανοσοϊστοχημεία και στύπωμα Western. Η συσχέτιση μεταξύ της πρόσδεσης ΗΡΑ? μεταλλαγμένο Ρ53 σε KRAS και το καθεστώς των CEA δείγματα ιστών αξιολογήθηκε με στόχο την κατανόηση

Ο-

συνδεδεμένη γλυκοζυλίωση στο πλαίσιο άλλων δεικτών για CRC. Μια μελέτη επικύρωσης με περαιτέρω συλλογή CRC δείγματα ανεξάρτητη από την αρχική ομάδα του δείγματος έδειξε ότι οι αλλαγές στο

Ο-

γλυκοζυλίωση αναγνωρίζεται από HPA παραμένουν σχετίζεται με κακή πρόγνωση CRC.

Υλικά και Μέθοδοι

Χημικά λήφθηκαν από Sigma-Aldrich, Poole, Dorset, Ηνωμένο Βασίλειο, εκτός εάν ορίζεται διαφορετικά.

Τα δείγματα ασθενών

Η πρωτεομική μελέτη συμμετείχαν 27 ασθενείς με πρωτοπαθή CRC, που είναι γνωστό ότι να είναι απαλλαγμένο από μεταστάσεις στο ήπαρ, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου, Μαρτινίκα (S1 πίνακα). Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Ιατρικής Σχολής της Μαρτινίκας και της Επιτροπής Ερευνών του Πανεπιστημίου Δεοντολογίας (UREC) από το Πανεπιστήμιο του Westminster. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση για τα δείγματα τους για να χρησιμοποιηθούν στην έρευνα. Τα δείγματα καταψύχθηκαν ακαριαία μετά την επέμβαση και ισοδύναμα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε φορμαλδεΰδη και εμβαπτίστηκαν σε παραφίνη για ιστοπαθολογικών μελετών. Για κάθε δείγμα ιστού καρκίνου, κανονικό ιστό συλλέχθηκε από ελεύθερες περιοχές όγκου στο γειτονικό βλεννογόνο σε ακτίνα 4 cm του όγκου. Οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σε δύο ομάδες με βάση τον βαθμό της συμμετοχής των περιφερειακών λεμφαδένες. Όλες οι ιστοί που χρησιμοποιήθηκαν στην έρευνα εξετάστηκαν και επαληθεύτηκαν για την παρουσία καρκινικών κυττάρων, χρησιμοποιώντας αιματοξυλίνη και ηωσίνη διαφάνειες χρώση. Το έργο επικύρωση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση παραφίνη ήταν ενσωματωμένο μπλοκ CRC ιστών που συλλέγονται στο University College του Λονδίνου Νοσοκομεία (πριν από το 2006) και χρησιμοποιείται σύμφωνα με τον νόμο περί Ανθρωπίνων Ιστών (2008).

Ιστοχημείας

Η ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε το σύστημα ανίχνευσης υπεροξειδάσης (HRP) (EnVision κιτ συν διπλής σύνδεσης πολύπλοκο σύστημα-HRP, Anti-Mouse /Rabbit-HRP, Dako, Carpinteria, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, 4 μm πάχους τομές από το σταθεροποιημένο με φορμαλίνη παραφίνη κερί ενσωματωμένα (FFPE) αρχειακό ιστούς κόλου (όγκων και φυσιολογικά αντίστοιχα) από-παραφινοποιήθηκαν με ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν μέσω σειράς βαθμονομημένων αλκοολών (70% – 100%). Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη χρησιμοποιώντας το διάλυμα Target Ανάκτηση ή κιτρικό ρυθμιστικό ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποσβέστηκε με επώαση με το μπλοκ διπλής ενδογενές ένζυμο (Dako, Carpinteria, CA, USA). Οι τομές επωάστηκαν με το αντίστοιχο πρωτεύον αντίσωμα: μονοκλωνικό αντι-ρ53 (κλώνος DO1? Immunotech, 1:50 αραίωση) ή πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού έναντι αννεξίνης 4 και 5 (1:50 αραίωση? Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) . Οι συνθήκες που χρησιμοποιήθηκαν για κάθε αντίσωμα ήταν όπως περιγράφεται από τον κατασκευαστή. Χρώση χωρίς το πρωτογενές αντίσωμα εκτελέστηκε ως αρνητικός έλεγχος. Το σύστημα Envision, HRP, αντι-ποντικού ή αντι-κουνελιού χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση των πρωτογενών αντισωμάτων (Dako, Carpinteria, CA, USA) και χρώση του ιστού οπτικοποιήθηκε με διαμινοβενζιδίνη (DAB) διαλύματος χρωμογόνου (Dako, Carpinteria, CA, ΗΠΑ). Οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη για 5 λεπτά. Οι τομές αφυδατώθηκαν διαμέσου μιας σειράς βαθμονομημένων αλκοολών καθαρίστηκαν σε ξυλόλιο και τοποθετήθηκαν σε δι-η-βουτυλο φθαλικό εστέρα σε ξυλόλιο (DPX) μέσο στερέωσης. Ιστοχημεία για την ανίχνευση ΗΡΑ δεσμευτικός χρησιμοποιούνται 10 μg /ml βιοτινυλιωμένου λεκτίνη σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (PBS) με 5% β /ο αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) που εφαρμόζονται στις διαφάνειες για 1 ώρα, πλύθηκαν τρεις φορές με PBS με 0,01% ν /v Tween-20 και επωάστηκαν με 5 μg /ml στρεπταβιδίνης-HRP επί 30 λεπτά. Οι τομές πλύθηκαν και πάλι σε αλλαγές του PBS με 0,01% ν /ν Tween-20 και λεκτίνη δέσμευση αποκαλύφθηκε με επώαση με 1% w /v DAB και 0,3% ν /ν H

2O

2. Τα κύτταρα βάφτηκαν αντίθετα και να τοποθετηθεί ως ανωτέρω.

Διαφάνειες αξιολογήθηκαν κάτω από ένα οπτικό μικροσκόπιο και βαθμολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητα άτομα με τυφλό τρόπο. Σε περιπτώσεις όπου υπήρχε αρχική διαφωνία, μια συναίνεση λήφθηκε μετά από συζήτηση. P53 καταγράφηκε ως θετική όταν βάφτηκαν οι κυττάρου όγκου πυρήνες, ανεξάρτητα από το ποσοστό των θετικών κυττάρων. Η συνολική βαθμολογία ανοσοαντιδραστική προσδιορίστηκε (για P53) σύμφωνα με τη μέθοδο που χρησιμοποιήθηκε προηγουμένως [6]. IRS είναι η αθροιστική αξία της έντασης του ανοσοχρώσης (0 (-) χωρίς χρώση? 1 (+) για ασθενή χρώση? 2 (++) για μέτρια χρώση και 3 (+++) για την ισχυρή χρώση) και το ποσοστό των θετικά καρκινικά κύτταρα . Για ΗΡΑ: χρώση% των κυττάρων ≥50 οδήγησε σε μέση επιβίωση 11,5 μήνες? αλλά όταν λήφθηκε χρώση των κυττάρων ≤50% διάμεση επιβίωση ήταν 60 μήνες (Chi-square test 11.74? P value = 0,0006), τα δεδομένα δεν εμφανίζονται. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η σύνδεση του ΗΡΑ και αντι-αννεξίνης 4 αντισώματα να τομές ιστού από CRC είναι δείκτες κακής πρόγνωσης. Τόσο η

Ο- συνδεδεμένη γλυκοζυλίωση

-όπως μετράται με ΗΡΑ χρώση-και τα επίπεδα αννεξίνης 4 είναι δείκτες κακής πρόγνωσης CRC. Η πολυπλοκότητα του proteome καθιστά όγκου δείκτη εργασία ανακάλυψη προκλητική? Παρ ‘όλα αυτά, υπάρχει μία ανάγκη για την ταυτοποίηση βιοδεικτών και νέους στόχους για τη θεραπεία της CRC. Από τις πολλές μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις να συμβεί σε πρωτεΐνες, γλυκοζυλίωση είναι το πιο άφθονο και ποικίλο [18] και εκτροπές σε πρωτεΐνη γλυκοζυλίωσης αναφερόμενη στον καρκίνο [19] προσφέρουν δυνατότητες για εντοπισμό του καρκίνου-συγκεκριμένες αλλαγές. πρωτεΐνες συνδέσεως υδατανθράκων, λεκτίνες, έχουν περιγραφεί προηγουμένως για την εκ των προτέρων σύλληψη του καρκίνου που σχετίζεται με γλυκοπρωτεΐνες [20, 21]. Υπήρξε μεγάλο ενδιαφέρον για τις γλυκοπρωτεΐνες που αναγνωρίζονται από τη λεκτίνη ΗΡΑ, καθώς η συμμετοχή των επιτόπων πρόσδεσης ΗΡΑ στη μεταστατική διαδικασία έχει καθορίστηκε σύμφωνα με καρκινικές κυτταρικές σειρές που προέρχονται από ιστούς ανθρώπινου όγκου [22]. Ιντεγκρίνης α5 και α6 και αννεξίνης 2 και 4 έχουν προηγουμένως αναγνωρίστηκαν ως οι κύριοι εταίροι δέσμευσης ΗΡΑ στο μεταστατικό CRC κυτταρική σειρά ΗΤ29 [12]. Σε αυτή τη μελέτη πρωτεϊνών από δείγματα ιστού CRC είχαν προ-κλασματώθηκαν χρησιμοποιώντας χρωματογραφία συγγένειας ΗΡΑ επιτρέποντας έτσι πρωτεΐνες μικρής αφθονίας που πρέπει να απομονωθεί και να ταυτοποιηθεί. Οι διαφορές στην ΗΡΑ γλυκοπρωτεΐνες πρόσδεσης σε δείγματα που είχαν μεταστάσεις στους λεμφαδένες κατά τη στιγμή της διάγνωσης ήταν εμφανείς όταν οι γλυκοπρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με 1-DE και στυπώθηκε σε νιτροκυτταρίνη ενδείξεως συνολική αύξηση σε

Ο-

συνδέονται γλυκοζυλίωση? πιθανό να σχετίζεται με Tn και σιαλυλο-Τη έκφραση αντιγόνου στον καρκίνο [23]. Όταν ΗΡΑ χρησιμοποιήθηκε για να διερευνήσει αποτυπώσεις κατά Western των παρασκευασμάτων πρωτεΐνης του καρκίνου, ο αριθμός των ζωνών και η ένταση τους διέφερε σε σύγκριση με όταν οι πρωτεΐνες είχαν προ-κλασματώθηκαν με χρωματογραφία συγγένειας λεκτίνης (S1 Εικ). Αυτό μπορεί να αντανακλά λεπτές διαφορές σε δέσμευση όταν ΗΡΑ ακινητοποιήθηκε ομοιοπολικά σε μια μήτρα συγγένειας σε σύγκριση με όταν η λεκτίνη ήταν σε ελεύθερο διάλυμα. Η αναγνώριση των γλυκοπρωτεϊνών δέσμευσης ΗΡΑ του CRC ήταν μια σημαντική στόχος αυτής της εργασίας, αυτά συγκρίθηκαν με τα επίπεδα του CEA από τα ίδια δείγματα ιστών και επιβεβαιώθηκε να είναι ανεξάρτητη από τα επίπεδα του CEA (S1 Εικ). Ενώ η μελέτη των βλεννών ήταν πέρα ​​από το πεδίο εφαρμογής της παρούσας τρέχουσες εργασίες, με σαφήνεια τα επίπεδα των MUC1 και MUC2 και ιδιότητες δέσμευσης τους HPA είναι θέμα κάποιο ενδιαφέρον. Ομοίως, η ενδοκυτταρική εντόπιση των πρωτεϊνών πρόσδεσης ΗΡΑ έχει ενδιαφέρον. Δεν είναι τεχνικά εφικτό να κλασματοποίηση κυτταρικά οργανίδια όταν τα δείγματα ιστού τα κατεψυγμένα καρκίνος χρησιμοποιείται ως πρώτη ύλη και έτσι ήμασταν σε θέση να προσδιορίσει εάν γλυκοπρωτεΐνες από τη συσκευή Golgi καθαρίστηκαν χρησιμοποιώντας το βήμα χρωματογραφίας συγγένειας. Ο πρωταρχικός στόχος ήταν για την ταυτοποίηση πρωτεϊνών που δεσμεύονται με το ΗΡΑ λεκτίνη και ότι αλλοιώνονται με μεταστατικό και μη μεταστατικό CRC. Καθώς ο ιστός-χρώση χρησιμοποιώντας ΗΡΑ έδειξαν χρώση τόσο ενδοκυτταρικά και έντονη μεμβράνη, εμείς υποθέτουν ότι οι γλυκοπρωτεΐνες πρόσδεσης ΗΡΑ που προσδιορίζονται στην παρούσα μελέτη είναι πιθανό να προέρχεται από την κυτταρική μεμβράνη, το κυτοσόλιο και ενδεχομένως, από τη συσκευή Golgi. Πρωτεομική ανάλυση των καθαρισμένων πρωτεϊνών συγγένειας δέσμευσης ΗΡΑ αποκάλυψε επτά γλυκοπρωτεΐνες συμπεριλαμβανομένων αννεξίνης 4 και 5 και CLCA1 που αυξήθηκαν στα παρασκευάσματα από μεταστατικών καρκινικών ιστών. Αννεξίνη 4 έχει ήδη δειχθεί σε μια ξεχωριστή μελέτη για να αναγνωρίζονται από ΗΡΑ στο CRC κυτταρική γραμμή ΗΤ29 [12]. Και οι τρεις από αυτές τις πρωτεΐνες έχουν περιγραφεί προηγουμένως σε σχέση με το CRC αλλά οι πρωτεΐνες δεν έχουν προηγουμένως ταυτοποιηθεί μέσω προ-εμπλουτισμού μέσω

Ο-

συνδεδεμένη γλυκάνη moeities. Αννεξίνες είναι μία οικογένεια ρυθμιζόμενο από το ασβέστιο και φωσφολιπίδιο υδατάνθρακα δεσμευτικές πρωτεΐνες με ποικίλες ενδο- και εξωκυτταρικά ρόλους στην περιοχή κυτταρικών διεργασιών συμπεριλαμβανομένης της σηματοδότησης, μεταφορά ιόντων, την κυτταρική διαίρεση και την απόπτωση [24].