Αφηρημένο

Σκοπός

Η τετρασπανίνη CD151 ενεργεί ως υποστηρικτής της μετάστασης και εισβολής σε διάφορες όγκους. Ωστόσο, ο ρόλος του CD151 σε ανθρώπινο γαστρικό καρκίνο (HGC) παραμένει ασαφής.

Μέθοδοι

Είκοσι HGC δείγματα και συμφωνημένα μη όγκου δειγμάτων, τα ανθρώπινα γαστρικά επιθηλιακά κύτταρα (HGEC), και τέσσερα γαστρικού καρκίνου κυτταρική σειρές χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση CD151 έκφρασης. Σύντομη φουρκέτα RNA διαμεσολαβούμενη μειορύθμιση της έκφρασης CD151 σε κύτταρα HGC διεξήχθη για να εξεταστεί ο ρόλος του CD151 στο πολλαπλασιασμό και μετάσταση /εισβολή των κυττάρων HGC

in vivo

και

in vitro

. Η σχέση του CD151 με ιντεγκρίνης α3 σε κύτταρα HGC ερευνήθηκε από φίμωση α3 ιντεγκρίνης που ακολουθείται από συν-ανοσοκατακρήμνιση και χρώση ανοσοφθορισμού. Τέλος, η προγνωστική αξία της CD151 και ιντεγκρίνης α3 αξιολογήθηκε με ανοσοϊστοχημεία σε μικροσυστοιχίες ιστό 76 ασθενών HGC.

Αποτελέσματα

CD151 εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σε ιστούς και τα κύτταρα HGC HGC ό, τι σε μη όγκου ιστών και κυττάρων HGEC. Κάτω ρύθμιση των CD151 από vshRNA-CD151 διαταραγμένη μετάσταση και εισβολή των HGC-27 κύτταρα, αλλά δεν επηρέασε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. CD151 σχηματίζεται ένα σύμπλοκο με ιντεγκρίνης α3 σε κύτταρα HGC. CD151-cDNA επιμόλυνση διασωθεί το μεταστατικό δυναμικό και εισβολής των κυττάρων HGC-27-vshCD151, αλλά όχι αυτά των κυττάρων α3 HGC-27-vshintegrin

in vitro

. Κλινικά, CD151 υπερέκφραση συσχετίστηκε σημαντικά με το στάδιο υψηλής ΤΝΜ, το βάθος της εισβολής και θετική συμμετοχή λεμφαδένων (

σ

& lt? 0.05), και τα υψηλά επίπεδα της ιντεγκρίνης α3 συνδέθηκαν με το μεγάλο μέγεθος του όγκου, το στάδιο υψηλής ΤΝΜ, το βάθος της εμπλοκής εισβολής και λεμφαδένων (

σ

& lt? 0,05). Είναι σημαντικό, η μετεγχειρητική 5-ετή συνολική επιβίωση των ασθενών με CD151

χαμηλή ή /και ιντεγκρίνης α3

χαμηλή ήταν υψηλότερη από εκείνη των ασθενών με CD151

υψηλή ή /και ιντεγκρίνης α3

υψηλή.

Συμπέρασμα

CD151 συνδέεται θετικά με την εισβολής της HGC, και CD151 ή ο συνδυασμός των CD151 και ιντεγκρίνης α3 είναι ένα μυθιστόρημα δείκτης για την πρόβλεψη της πρόγνωσης των ασθενών HGC και μπορεί να είναι πιθανούς θεραπευτικούς στόχους.

Παράθεση: Yang ΥΜ, Zhang ZW, Liu QM, Sun YF, Yu JR, Xu WX (2013) Η υπερέκφραση του CD151 Προβλέπει πρόγνωση σε ασθενείς με εκτομή γαστρικού καρκίνου. PLoS ONE 8 (3): e58990. doi: 10.1371 /journal.pone.0058990

Επιμέλεια: Yves St-Pierre, INRS, Καναδάς

Ελήφθη: 7 Οκτωβρίου του 2012? Αποδεκτές: 8η Φεβρουαρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 22 Μάρτη του 2013

Copyright: © 2013 Yang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Ταμείο Ακαδημαϊκός Workstation του Νοσοκομείου Shaoxing Δεύτερη Λαϊκή. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ανθρώπινου γαστρικού καρκίνου (HGC) είναι η πιο συχνή αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται [1]. Η συχνότητα εμφάνισης της HGC εκτιμάται ότι είναι 934.000 περιπτώσεις ετησίως με το 56% των νέων περιπτώσεων που συμβαίνουν στην Ανατολική Ασία, συμπεριλαμβανομένου 41% στην Κίνα και 11% στην Ιαπωνία [2]. Παρά το γεγονός ότι η παγκόσμια επίπτωση της GC έχει μειωθεί τα τελευταία χρόνια, το ποσοστό θνησιμότητας της στην Κίνα είναι το υψηλότερο μεταξύ όλων των όγκων και αντιπροσωπεύει το 25% της θνησιμότητας GC σε όλο τον κόσμο [3]. Παρά τις πρόσφατες προόδους στην χημειοθεραπεία και χειρουργικές τεχνικές, το ποσοστό του 5-ετή συνολική επιβίωση (OS) στην Κίνα είναι χαμηλό στο 40%. Τα περισσότερα ΚΚΧ διαγιγνώσκονται στο στάδιο ΙΙΙ ή IV, και ο ρυθμός της μετάστασης λεμφαδένα από GC είναι υψηλή (50-75%) [4]. Η παθογένεση της HGC είναι πολυπαραγοντική, συμπεριλαμβανομένων της γενετικής προδιάθεσης και περιβαλλοντικών παραγόντων. Αρκετές γενετικές αλλοιώσεις που σχετίζονται με την προδιάθεση για HGC, περιλαμβανομένων εκείνων που αφορούν ογκοκατασταλτικών γονιδίων, ογκογονίδια, μόρια κυτταρικής προσκόλλησης, αυξητικούς παράγοντες, και γενετική αστάθεια [5]. Ως εκ τούτου, η επίτευξη καλύτερης κατανόησης των μοριακών μηχανισμών που εμπλέκονται στην HGC και τον εντοπισμό πολύτιμο διαγνωστικό δεικτών και νέων θεραπευτικών στρατηγικών έχει μεγάλη κλινική σημασία.

τετρασπανίνη Οι πρωτεΐνες κυτταρικής επιφάνειας που εκτείνονται σε μεμβράνη τέσσερις φορές, και βρίσκονται σε διάφορους τύπους κυττάρων σε πολλούς οργανισμούς. Εμφανίζουν πολυάριθμες ιδιότητες ενδεικτικές της φυσιολογικής σημασίας τους στην κυτταρική προσκόλληση, κινητικότητα, ενεργοποίηση και πολλαπλασιασμό, όπως επίσης και η συμβολή τους σε παθολογικές καταστάσεις όπως η μετάσταση και παθολογική αγγειογένεση [6], [7], [8]. CD151 είναι ένα κυτταρικής επιφάνειας γλυκοπρωτεΐνη που ανήκει στην υπεροικογένεια τετρασπανίνη που δείχθηκε πρώτα για την προώθηση της μετάστασης σε μια μελέτη στην οποία ένα άγνωστο αντίσωμα ειδικώς ανέστειλαν σχηματισμού μετάστασης σε ένα καρκίνωμα ανθρώπινου επιδερμοειδούς

in vivo

[

9

]. Το αντίσωμα αναγνώρισε CD151 και ανέστειλε τη μετανάστευση των κυττάρων χωρίς να επηρεάζει την πρόσφυση ή τον πολλαπλασιασμό. Μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) που προκαλείται μειορρύθμιση της έκφρασης CD151 στην πρωτογενή μελανοκύτταρα είχε ως αποτέλεσμα την απώλεια της κινητικότητας, ενώ είχε μικρή επίδραση στη σταθερή κατάσταση επίπεδα ιντεγκρινών. Επιπλέον, αυτές οι αλλαγές θα μπορούσαν να αντιστραφούν όταν CD151 επανα-εκφράζεται [10]. Η υπερέκφραση του CD151 δείχθηκε να ενεργοποιεί εξαρτώμενη ιντεγκρίνης και ο υποδοχέας αυξητικού παράγοντα οδών σηματοδότησης, που είχε ως αποτέλεσμα την αυξημένη κινητικότητα και διεισδυτικότητα των καρκινικών κυττάρων [11]. Αυτή η διαδικασία Προτάθηκε επίσης να συμβάλει στην ενεργοποίηση των οδών που προκαλούνται από τις μικρές ΟΤΡάσες, το οποίο αυξάνει σύνδεση προς Cdc42 και Rac, οργανωτές του κυττάρου κυτταροσκελετού GTP. Η προσκόλληση εξαρτώμενη από την ενεργοποίηση του Ras, ΕΚΚ /MAPK1 /2 και της πρωτεϊνικής κινάσης Β (ΡΚΒ) /Akt έχει δειχθεί ότι ρυθμίζεται από CD151 [7], [12]. Το ευρύ φάσμα των λειτουργιών του CD151, και ιδίως τη συμμετοχή της στην εισβολής και της μετάστασης των καρκινικών κυττάρων, δείχνουν ότι η καλύτερη κατανόηση της έκφρασης και το ρόλο της στην HGC μπορεί να είναι σημαντικές.

Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η έκφραση του CD151 σε ανθρώπινα γαστρικά επιθηλιακά κύτταρα (HGEC), κυτταρικές σειρές HGC, τα δείγματα HGC, και των παρακείμενων nontumorous ιστούς. Επιπλέον, διερευνήσαμε την επίδραση της siRNA αποσιώπηση του CD151 επί του πολλαπλασιασμού, της διεισδυτικότητας και μεταστατικής ικανότητας των HGC-27 κύτταρα και εξετάστηκε η σχέση μεταξύ CD151 και ιντεγκρίνης α3. Τέλος, η έκφραση του CD151 και ιντεγκρίνης α3 εξετάστηκε με ανοσοϊστοχημεία σε μια μικροσυστοιχία ιστό που αποτελείται από 76 περιπτώσεις HGC, και ο προγνωστικός ρόλος του CD151 ή /και ιντεγκρίνης α3 σε HGC ερευνήθηκε.

Υλικά και Μέθοδοι

κυτταρικές γραμμές

κυτταρικές σειρές HGEC και HGC, συμπεριλαμβανομένων HGC-27, AGS, ΜΚΝ28, και MGC803, ελήφθησαν από την American Type Culture Collection και διατηρήθηκαν στο εργαστήριο μας. Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε μέσο Dulbecco Τροποποιημένο Eagle (ϋΜΕΜ, Invitrogen) συμπληρωμένου με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Hyclone) στους 37 ° C σε υγροποιημένο επωαστή κάτω από 5% CO

2.

Ασθενείς και Συνέχεια

Είκοσι φρέσκα δείγματα όγκων από περιοχές κοντά στο περιθώριο όγκου και συμφωνημένα μη καρκινικούς ιστούς (πάνω από 3 cm μακριά από τον όγκο) ήταν τυφλά ελήφθησαν από διαδοχικούς ασθενείς με HGC που υποβλήθηκαν σε θεραπευτική εκτομή, μεταξύ Φεβρουαρίου 2009 και τον Νοέμβριο του 2010 στο Shaoxing δεύτερο Νοσοκομείο Λαϊκό (Shaoxing, Κίνα). Άλλοι 76 ασθενείς με καρκίνο του στομάχου που υποβλήθηκαν σε R0 εκτομές με εκτεταμένη λεμφαδένων (D2) μεταξύ Σεπτεμβρίου 2005 και Σεπτεμβρίου 2008 στο Shaoxing Δεύτερο Νοσοκομείο Λαϊκό εντάχθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Η αξιολόγηση των δειγμάτων εκτομή έγινε σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της ιαπωνικής γαστρικού Association Cancer (1998). Κάθε πρότυπο εκτομή περιελάμβανε την απομάκρυνση της ομάδας 1 και 2 λεμφαδένες (εύρος 36-60, σημαίνει 47.6). ταξινόμηση στάδιο πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με την ταξινόμηση ΤΝΜ για HGC (UICC). Δείγματα επιλέχθηκαν με βάση τη διαθεσιμότητα των κατάλληλων μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη, εγκλεισμένους σε παραφίνη ιστούς και πλήρη κλινικοπαθολογική και την παρακολούθηση των δεδομένων από τους ασθενείς. Τα χαρακτηριστικά των υποκειμένων της μελέτης συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Η μελέτη εγκρίθηκε από την Shaoxing Νοσοκομείο Επιτροπή Ερευνητικής Δεοντολογίας Δεύτερη Λαϊκή και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλα τα άτομα. Κανένας από τους ασθενείς έλαβαν χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν ή μετά τη χειρουργική επέμβαση ως μέρος ενός προγράμματος ανοσοενισχυτικό. συλλογής δεδομένων παρακολούθησης τερματίστηκε τον Σεπτέμβριο του 2012. Η μέση παρακολούθηση ήταν 43,0 μήνες (εύρος 6-78 μήνες). Παρακολούθηση διαδικασιών αποτελούνταν από ενδιάμεση ιστορικό, κλινική εξέταση, αξιολόγηση των καρκινικών δεικτών (CEA, CA-199), κοιλιακό υπερηχογράφημα και ακτινογραφία θώρακος κάθε 2-3 μήνες ή CT κάθε 6 μήνες. Συνολική επιβίωση (OS) ορίστηκε ως το διάστημα μεταξύ χειρουργική επέμβαση και θανάτου ή μεταξύ χειρουργική επέμβαση και την τελευταία παρατήρηση σε ασθενείς που επιβίωσαν. Τα δεδομένα περικόπηκαν κατά την τελευταία παρακολούθησης για τη ζωή των ασθενών.

Η

Εξαγωγή RNA και αντίστροφη μεταγραφή-αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (RT-PCR)

Το συνολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας το TRI Αντιδραστήριο (Sigma) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Το RNA στη συνέχεια κατεργάζεται με DNaseI (Roche Diagnostics), καθαρίζεται μέσω μιας στήλης RNeasy (Qiagen) και ηλεκτροφορήθηκαν για να προσδιοριστεί η ακεραιότητα του RNA πριν από τη χρήση σε πειράματα 5′-RACE. Συμπληρωματικό DNA (cDNA) συντέθηκε από 2 μg ολικού RNA χρησιμοποιώντας τυχαία εξαμερή (Proligo) και SuperScript III ανάστροφης μεταγραφάσης (Invitrogen). RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε ένα πάνελ κυτταρικών γραμμών και δείγματα όγκων. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για PCR είχαν ως εξής: CD151, 5′-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 ‘και 5′-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3′? ιντεγκρίνης α3, 5’-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 ‘και 5′-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3′? Γλυκεραλδεΰδη αφυδρογονάση 3-φωσφορικής (GAPDH), 5’-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 ‘και 5′-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3’. Οι συνθήκες RT-PCR ήταν ως εξής: 10 λεπτά στους 94 ° C, μετουσίωση στους 94 ° C για 20 s, ανόπτηση στους 59 ° C για 30 s, και επέκταση στους 72 ° C για 60 s. Η έκφραση του CD151 και ιντεγκρίνης α3 σε σχέση με το γονίδιο GAPDH οικοκυρική αναλύθηκε με ανάλυση πυκνότητας χρησιμοποιώντας το λογισμικό v5.0 Band Scan. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

Ανοσοκηλίδωση και ανοσοφθορισμού Δοκιμασία

Η συνολική πρωτεΐνη κυτταρικό εκχύλισμα (30 μg) διαχωρίστηκε με ηλεκτροφόρηση πηκτής SDS-πολυακρυλαμιδίου, μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου, και επωάζονται με τα αντίστοιχα αντισώματα. Οι μεμβράνες αναπτύχθηκαν με την ενισχυμένη μέθοδο χημειοφωταύγειας (Pierce, Rockford, IL, USA). Ποντικού αντι-ανθρώπινο CD151 (11G5a, 1:200? Serotec, UK) και αντι-ιντεγκρίνης α3 μονοκλωνικά αντισώματα (Ρ1Β5, 1:300? Chemicon International, Temecula, CA) χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση της έκφρασης CD151 και ιντεγκρίνης α3, αντίστοιχα . GAPDH (1:5,000? Chemicon, USA) χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

HGC-27 κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση της θέσης του CD151 και ιντεγκρίνης α3 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [13]. Ποντικού αντι-ανθρώπινο CD151 μονοκλωνικό αντίσωμα (11G5a, 1:200? Serotec, UK) και αντι-ανθρώπινο αντίσωμα ιντεγκρίνης α3 ποντικού (Ρ1Β5, 1:300? Chemicon International, Temecula, CA) χρησιμοποιήθηκαν. Οι φέτες αναλύθηκαν με μικροσκοπία φθορισμού (Leica Microsystems Imaging Solutions).

Η επιμόλυνση των φορέων λεντοϊών που με μικρές φουρκέτα RNA κατά CD151 και Ιντεγκρίνης α3

Ο φορέας pGMLV /Neo-shRNA-CD151 κατασκευάστηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (pGMLV, ένα μικρό φουρκέτα RNA (shRNA) i Vector, Shanghai Genomeditch Co. Ltd). Τρεις shRNA-CD151 φορείς λεντοϊών (pGMLV-GFP-shRNA -CD151) δημιουργήθηκαν για να φιμώσουν την έκφραση του CD151 σε HGC-27 κύτταρα (shRNA-CD151-HGC-27). Οι αλληλουχίες στόχευσης shRNA για CD151 ήταν ως ακολούθως: # 1, 5′-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ‘? # 2, 5’-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ‘? # 3, 5’-CATACAGGTGCTCAA ΤΑΑΑ-3 ‘. Η ακολουθία στόχευσης shRNA για ιντεγκρίνης α3 είχε ως εξής: 5’-CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 ‘(Σαγκάη Genomeditech, Σαγκάη, Κίνα). Σταθερά επιμολυσμένα κλώνοι χαρακτηρίζονται από RT-PCR και αναλύθηκαν με ανοσοστύπωση ως προς τα επίπεδα έκφρασης του CD151 και ιντεγκρίνης πρωτεΐνες α3.

Δοκιμασία ΜΤΤ, κυτταρική μετανάστευση, και εισβολής σε Matrigel Δοκιμασίες

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες των 96 φρεατίων (2000 ανά 200 μΙ φρεάτων) και επωάστηκαν για 24, 48, και 72 ώρες. Ένας όγκος 20 μΐ διαλύματος ΜΤΤ προστέθηκαν στα υποδεικνυόμενα χρονικά σημεία και επωάστηκαν για 4 ώρες. Η (DMEM 200 μλ που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου) μέσο στη συνέχεια αντικαταστάθηκε από 150 μΙ DMSO, πλάκες ανακινήθηκαν για 10 λεπτά και η απορρόφηση στα 490 nm μετρήθηκε για να προσδιοριστεί ο αριθμός των βιώσιμων κυττάρων σε κάθε φρεάτιο. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν τρεις φορές.

μετανάστευση κυττάρων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία επούλωση της πληγής. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε 80-90% συρροή σε πλάκες 24 φρεατίων. Ένα τραύμα έγινε σύροντας ένα πλαστικό ρύγχος πιπέτας σε όλη την επιφάνεια του κυττάρου. Τα υπόλοιπα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές για να απομακρυνθούν τα κυτταρικά υπολείμματα και επωάστηκαν στους 37 ° C με μέσο χωρίς ορό. Στους χρόνους που υποδεικνύονται, τα κύτταρα μεταναστεύουν στο μπροστινό πληγή φωτογραφήθηκαν και συγκρίθηκαν. Τρία ξεχωριστά πειράματα διεξήχθησαν

προσδιορισμοί κυττάρων εισβολής διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας transwells 24-καλά (μέγεθος 8 μm πόρων? Millipore). Προεπικαλυμμένα με Matrigel (Falcon 354 480? BD Biosciences). Ένα σύνολο 1 × 10

5 κυττάρων αιωρήθηκε έπειτα σε 500 μΙ ϋΜΕΜ που περιέχει 1% FBS και προστέθηκαν στον άνω θάλαμο, ενώ 750 μΙ ϋΜΕΜ που περιέχει 10% FBS τοποθετήθηκε στον κάτω θάλαμο. Μετά από 48 ώρες επώασης, Matrigel και τα κύτταρα που παραμένουν στον ανώτερο θάλαμο απομακρύνθηκαν με μπατονέτες. Τα κύτταρα στην κάτω επιφάνεια της μεμβράνης μονιμοποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη και χρωματίστηκαν με Giemsa. Κύτταρα σε 5 μικροσκοπικά πεδία (μεγέθυνση, χ 200) μετρήθηκαν και φωτογραφήθηκαν. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

In Vivo Μετάσταση Αναλύσεις

Για in vivo δοκιμασίες μετάσταση, MGC-803-Mock, MGC-803-vshRNACD151 και MGC-803-vshRNA CD151-cDNA- κύτταρα CD151 μεταμοσχεύθηκαν σε γυμνούς ποντικούς (5-εβδομάδων BALB /c-nu /nu, 5 ανά ομάδα, 1 × 10

6 κύτταρα για κάθε ποντικό) μέσω της πλευρικής φλέβας της ουράς [14]. Μετά από 7 εβδομάδες τα ποντίκια θυσιάστηκαν. πνεύμονές τους αφαιρέθηκαν και υποβλήθηκαν σε αιματοξυλίνη και εοσίνη (Η &? Ε) χρώση. Όλες οι έρευνες που αφορούν τα ζώα διεξήχθη σύμφωνα με τα πρωτόκολλα εγκεκριμένα από την Επιτροπή Νοσοκομείο Ζώων Φροντίδα των Shaoxing Δεύτερη Λαϊκής.

συνανοσοκαθίζησης (Co-ip) Αναλύσεις

Τα κύτταρα λύθηκαν με RIPA ρυθμιστικό λύσης συμπληρωμένο με 40 mM NaF, 100 μΜ Na

3νο

4, και Πλήρης αναστολέα πρωτεάσης (Roche). Μετά την αφαίρεση του αδιάλυτου υλικού με φυγοκέντρηση στα 12.000 χ g, τα προκαταρκτική διαύγαση λύματα επωάστηκαν με πρωτογενές mAb προ-απορροφήθηκε πρωτεΐνη Α- και χάντρες G-Sepharose (Pierce Biotechnology) ολονυκτίως στους 4 ° C. Τα ιζήματα πλύθηκαν τρεις φορές με ρυθμιστικό λύσης, βρασμένο σε 2 × ρυθμιστικό δείγματος SDS για 5 λεπτά, και οι πρωτεΐνες αναλύθηκαν με SDS-PAGE σε γέλες κλίσης 10%. Μεταγενέστερες ανοσοστυπώματα ανιχνεύθηκαν με το κατάλληλο αντίσωμα και ανιχνεύεται με ECL.

Κατασκευή ιστικές μικροσυστοιχίες και ανοσοϊστοχημεία

μικροσυστοιχίες ιστού κατασκευάστηκαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [15]. Εν συντομία, όλα τα δείγματα από ασθενείς HGC εξετάστηκαν ιστολογικά με αιματοξυλίνη & amp? χρώση ηωσίνης και αντιπροσωπευτικές περιοχές είχαν premarked στα παραφίνη μπλοκ, μακριά από νεκρωτικές και αιμορραγική υλικά. Αντίγραφα των κυλίνδρων 1-mm-διαμέτρου από δύο διαφορετικές περιοχές, στο κέντρο του όγκου και του πλησιέστερου noncancerous περιθώριο (που ορίζεται ως ενδοογκική και peritumor, αντίστοιχα? Συνολικά τέσσερις διατρήσεις) συμπεριλήφθηκαν σε κάθε περίπτωση, μαζί με διαφορετικά στοιχεία ελέγχου, για να εξασφαλίζεται η επαναληπτικότητα και ομοιογενή χρώση των διαφανειών (Shanghai Biochip Co. Ltd, Shanghai). Έτσι, τέσσερα διαφορετικά μπλοκ μικροσυστοιχιών ιστού κατασκευάστηκαν, που το καθένα περιέχει 140 κυλίνδρους. Τμήματα πάχους 4 μm τοποθετήθηκαν σε πλακίδια επικαλυμμένα με 3-αμινοπροπυλοτριαιθοξυσιλάνιο. Μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-ανθρώπου CD151 (11G5a, 1:200? Serotec, UK) και αντι-ανθρώπινης ιντεγκρίνης α3 ποντικού (Ρ1Β5, 1:300? Chemicon International, Temecula, CA) αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση της έκφρασης CD151 και ιντεγκρίνης α3 . Εικόνες συλλαμβάνονται από το λογισμικό v3 Leica QWin Plus. Η ένταση του θετική χρώση μετρήθηκε όπως περιγράφεται. Η ένταση του CD151 και ιντεγκρίνης α3 ταξινομήθηκε σε δύο επίπεδα έκφρασης σύμφωνα με την μέση περιοχή του θετική χρώση ως τιμή αποκοπής ως εξής: CD151

υψηλό, & gt? 50% του τμήματος του όγκου? και ιντεγκρίνης α3

υψηλή, & gt? 25% του τμήματος του όγκου? CD151

χαμηλή, & lt? 50%, και ιντεγκρίνης α3

χαμηλή, & lt? 25% [15]

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με SPSS 16.0 λογισμικού (. SPSS). Οι τιμές εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση. Για ανοσοϊστοχημικές δείκτες, η τιμή αποκοπής για τον ορισμό των υποομάδων ήταν διάμεση τιμή έντασης. Το χ

2-test και έλεγχος τ χρησιμοποιήθηκαν για συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων. OS ορίστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15]. Προγνωστική σημασία αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας εκτιμήσεις επιβίωσης Kaplan-Meier και δοκιμές log-rank. μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων του Cox χρησιμοποιήθηκε για να αναλυθούν τα ανεξάρτητα προγνωστικούς παράγοντες. Όλες οι δοκιμασίες ήταν αμφίδρομες και

σ

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

CD151 υπερεκφράζεται σε HGC

έκφραση CD151 αναλύθηκε. με RT-PCR και ανοσοστύπωμα σε HGC όγκου και μη όγκου συμφωνημένα ιστούς. CD151 εκφράστηκε σε χαμηλά επίπεδα σε μη όγκου ιστών σε σύγκριση με τους ιστούς HGC. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1Α, Β και C, η σχετική έκφραση της πρωτεΐνης CD151 σε δείγματα HGC ήταν 2,95 ± 0,21 (εύρος, 1,13 – 3,59) σε σύγκριση με 1.30 ± 0.09 (εύρος, 1.00-1.81) σε μη όγκου δείγματα, και η διαφορά ήταν στατιστικώς σημαντική (

σ

& lt? 0,01). Επιπλέον, τα επίπεδα έκφρασης CD151 ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε σύγκριση με HGEC HGC-27, AGS, ΜΚΝ28 και MGC803 κυττάρων (ρ & lt? 0,05). Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στα επίπεδα έκφρασης CD151 ανιχνεύθηκαν μεταξύ των κυττάρων HGC (Εικ. 1 D, Ε και F). Immunohistochemstry (IHC) αναλύσεις επιβεβαίωσαν ότι η πρωτεΐνη CD151 εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σε ιστούς HGC ό, τι σε μη όγκου συμφωνημένα ιστούς (Εικ. 1 G).

(Α) Η έκφραση του CD151 mRNA και πρωτεΐνης σε δείγματα GC και ο συμφωνημένα nontumorous δείγματα? (Β και Γ) ένα ιστόγραμμα έδειξε CD151 mRNA σε δείγματα GC και τα συμφωνημένα nontumorous δείγματα (ρ & lt? 0,05)? (D) RT-PCR και ανοσοστύπωμα ανέλυσαν την έκφραση του CD151 σε HGEC και HGC-27, AGS, ΜΚΝ28 και MGC803 κυττάρων (ρ & lt? 0,05)? (Ε και F) Ένα ιστόγραμμα έδειξε CD151 mRNA και πρωτεΐνης σε HGEC και HGC-27, AGS, ΜΚΝ28 και MGC803 κύτταρα (p & lt? 0,05).

Η

CD151 Προωθείται η εισβολή και η μετάσταση της HGC κύτταρα

in vitro και in vivo

η

Για να εξεταστεί ο ρόλος του CD151 σε κύτταρα HGC, τροποποιήσαμε την έκφραση του CD151 σε HGC-27 κύτταρα με παρεμβολή RNA και cDNA-CD151 διαμόλυνση (Εικ. 2Α) . Τα αποτελέσματα της δοκιμασίας επούλωσης τραύματος έδειξε μία καθυστέρηση στον ρυθμό κλεισίματος τραύματος των shRNA-CD151-HGC-27 κύτταρα στις 48 ώρες σε σύγκριση με HGC-27-Mock κύτταρα, τα οποία ανακτήθηκε από cDNA-CD151 διαμόλυνση (Σχ. 2Β). Κάτω ρύθμιση των CD151 δεν είχε σημαντική επίδραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (

σ

& gt? 0.05, Σχήμα 2C.). Ωστόσο, η καταστολή της έκφρασης CD151 απομείωση της εισβολής των HGC-27 κύτταρα (Σχήματα 2D, Ε.)

(Α) Η έκφραση του CD151 σε HGC-27 κύτταρα με παρεμβολή RNA και cDNA-CD151 επιμόλυνση.? (Β) Η προς τα κάτω ή /και up-ρύθμιση του CD151 δεν έχουν καμία επίδραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (

σ

& gt? 0,05)? (Γ) Ο προσδιορισμός επούλωση της πληγής αποκάλυψε ότι μια εμφανής καθυστέρηση στον ρυθμό κλεισίματος τραύματος των κυττάρων HGC-27-vshRNA-CD151 βρέθηκε σε 24 και 48 ώρες, σε σύγκριση με HGC-27-Mock κύτταρα, ενώ ήταν ανάκαμψης με cDNA- CD151 επιμόλυνση? δοκιμασίες εισβολή (D και Ε) Matrigel έδειξε ότι κάτω /ή ανοδική ρύθμιση της έκφρασης CD151 συνοδεύτηκε από μια κατάβαση /ή ανέβει εισβολή των κυττάρων HGC in vitro? (F και G) Serial τμήματα από πνεύμονα ποντικού έδειξε την ικανότητα μετάστασης των καρκινικών κυττάρων που εκφράζουν διαφορετικές (bar Κλίμακα: 50 μm) CD151.

Η

Για να διερευνήσουν περαιτέρω το ρόλο της CD151 στη μετάσταση του όγκου in vivo, MGC-803-Mock, MGC-803-vshRNACD151 και MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 κύτταρα μεταμοσχεύθηκαν σε γυμνούς ποντικούς μέσω της πλευρικής φλέβας της ουράς. Η ιστολογική ανάλυση των πνευμόνων των ποντικών επιβεβαίωσε ότι το προς τα κάτω ρύθμιση CD151 καταστέλλεται σχηματισμός μετάσταση στους πνεύμονες. Οι αριθμοί και το μέγεθος των οζιδίων μετάστασης πνεύμονα μειώθηκε σημαντικά στην ομάδα MGC-803-vshRNACD151 σε σύγκριση με MGC-803-Mock και τα κύτταρα MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 (Σχ. 2 F, G). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι CD151 είναι ένας θετικός ρυθμιστής της γαστρικής μετάστασης του καρκίνου.

CD151 σχηματίζει ένα σύμπλοκο με την ιντεγκρίνη α3 και κατασιγάσει της ιντεγκρίνης α3 βλάπτει HGC κυττάρων εισβολή Induced από CD151 υπερέκφραση

Η εμπλοκή τετρασπανίνη στην διαμεσολαβούμενη από ιντεγκρίνη ρύθμιση της μετάστασης του καρκίνου έχει αποδειχθεί, και α3β1 ιντεγκρίνης έχει δειχθεί ότι προάγει GC εισβολή και τη μετάσταση [16]. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε τη σχέση μεταξύ της ιντεγκρίνης α3 και CD151 στα κύτταρα HGC. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3Α, ιντεγκρίνης α3 εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σε κύτταρα HGC παρά σε κύτταρα HGEC. πειράματα συν-ανοσοκατακρήμνισης έδειξε ότι CD151 σχημάτισε σύμπλοκο με ιντεγκρίνης α3 σε HGC-27 κύτταρα (Σχ. 3Β, C). Επιπλέον, CD151 και ιντεγκρίνης α3 συν-εντοπίζεται στη μεμβράνη των HGC-27 κύτταρα πλάσματος όπως φαίνεται με ανοσοφθορισμό (εικ. 3D).

(Α) Η έκφραση της ιντεγκρίνης α3 ήταν πολύ υψηλότερες σε κύτταρα HGEC και HGC ? (Β και Γ) Η συν-IP διαπίστωσε ότι η α3 ιντεγκρίνης σχηματίζει ένα σύμπλοκο με ιντεγκρίνης α3? (D) Διπλή χρώση έδειξε ότι η CD151 και integrinα3 συν-εντοπίζεται στη μεμβράνη των HGC-27 κύτταρα? (Ε) Η ρύθμιση προς τα κάτω της ιντεγκρίνης α3 στα κύτταρα HGC? δοκιμασίες εισβολής (F) Matrigel έδειξε ότι κάτω ρύθμιση της ιντεγκρίνης α3 συνοδεύτηκε από μια εισβολή κάθοδο των κυττάρων HGC, τα αντισώματα ιντεγκρίνης α3 παρεμβολές και ιντεγκρίνης α3 ανέστειλε την εισβολή κυττάρων προικισμένο από CD151.

Η

Για να περαιτέρω εξετάζει την εμπλοκή των CD151 σε ιντεγκρίνης λειτουργία α3, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε παρεμβολή RNA ή την επιμόλυνση του cDNA και αναλύθηκαν με πειράματα Transwell μετά την αντικατάσταση της γέλης μήτρας με λαμινίνη-332 [17]. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αποσιώπηση της ιντεγκρίνης α3 ανέστειλε σημαντικά την εισβολή των HGC-27 κύτταρα, και CD151 cDNA επιμόλυνση έσωσαν την επεμβατική ικανότητα της HGC-27-vshRNACD151, αλλά όχι εκείνη της HGC-27-vshRNA ιντεγκρίνης κυττάρων α3. Επιπλέον, τα αντισώματα ιντεγκρίνης α3 ανέστειλε την εισβολή των κυττάρων HGC-27-vshRNACD151-cDNA-CD151 (Σχ. 3Ε, F). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν τη συντονισμένη λειτουργία του συγκροτήματος α3 CD151-ιντεγκρίνης, και ανέφερε ότι τα υψηλά επίπεδα CD151 και ιντεγκρίνης α3 συνδέονται με την αυξημένη μεταστατικό δυναμικό των κυττάρων GC.

Η έκφραση του CD151 ή ιντεγκρίνη α3 συνδέεται θετικά με κακοήθεις φαινότυποι των HGC με ανοσοϊστοχημεία

Η έκφραση του CD151 και ιντεγκρίνης πρωτεΐνη α3 ερευνήθηκε σε 76 ασθενείς με πρωτοπαθή HGC χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό (TMA). CD151 ανοσοαντιδραστικότητα πρωτεΐνη εντοπίζεται στην κυτταρική μεμβράνη (Σχ. 4Α). Σε ιστούς όγκων, η έκφραση CD151 έδειξε σημαντική ετερογένεια στα διαφορετικά δείγματα (Σχ. 4Α1, Β1, C1 και D1). CD151

υψηλή αντιπροσώπευαν το 50% (38/76) του συνόλου του ομάδα. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, CD151

υψηλή συσχετίστηκε σημαντικά με το μέγεθος του όγκου (

p =

0.021), το βάθος της εισβολής (

p =

0.004), η συμμετοχή των λεμφαδένων (

p =

0,028) και το στάδιο υψηλού όγκου (

p =

0,002). Ωστόσο, άλλα κλινικά χαρακτηριστικά, όπως η ηλικία, το φύλο και τη διαφοροποίηση του όγκου, δεν ήταν συνδεδεμένοι σημαντικά στην έκφραση του CD151.

(Α) Ανοσοαντιδραστικότητα CD151 και integrinα3 πρωτεΐνη που βρίσκεται στις κυτταρικές μεμβράνες. Στους ιστούς όγκων, η έκφραση CD151 έδειξε σημαντική ετερογένεια στα διαφορετικά δείγματα (Fig.4a1, Β1, Γ1 και Δ1). Θετική χρώση Integrinα3 παρατηρήθηκε στην μεμβράνη των κυττάρων καρκινώματος (Σχ. 4 a2, b2, c2, και d2). (Β, Γ και Δ) προγνωστική σημασία αξιολογείται από τις εκτιμήσεις επιβίωσης Kaplan-Meier και δοκιμές log-rank. Οι συγκρίσεις του OS από CD151 (B), Integrinα3 (C), και συν-υπερέκφραση του CD151 και integrinα3 (D).

Η

Οι μεμβράνες των κυττάρων του όγκου χρωματίζονται θετικά για ιντεγκρίνης α3 (Εικ. 4Α2, b2, c2, και d2). Σε όλους τους ιστούς που αναλύθηκαν, τα υψηλά επίπεδα της ιντεγκρίνης α3 έκφρασης ανιχνεύθηκαν σε 27 δείγματα ιστού HGC (35,52%). Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα προηγούμενων μελετών [16], [18], οι ασθενείς με έκφραση α3 ιντεγκρίνης υψηλή ήταν πιο πιθανό να παρουσιάζουν επιθετική χαρακτηριστικά. Ιντεγκρίνης α3

υψηλή ασθενείς εμφάνισαν μεγαλύτερους όγκους (

p =

3.46E-4), μεγαλύτερο βάθος της εισβολής (

p =

0.001), ανώτερο στάδιο του όγκου (

p =

0.005) και μεγαλύτερη συμμετοχή των λεμφαδένων (

p =

0.040) από τους ασθενείς με έκφραση α3 χαμηλή ιντεγκρίνης (Πίνακας 1).

Η υπερέκφραση του CD151 ή /και ιντεγκρίνης α3 είναι Ανεξάρτητοι παράγοντες Προβλέποντας την πρόγνωση της HGC ασθενείς

μέχρι την τελευταία παρακολούθηση, οι 3 και 5 ετών, τα ποσοστά OS στο σύνολο του πληθυσμού ήταν 53.0 και 40.78%, Η 5-ετή OS στο CD151

χαμηλή ομάδας ήταν σημαντικά υψηλότερο από ότι στο CD151

υψηλή ομάδα (68,42%

vs.

23,68%, αντίστοιχα,

σ

= 0.007, Σχ. 4Β), και η μετεγχειρητική 5-ετή OS ασθενών HGC ήταν υψηλότερη στην α3 ιντεγκρίνης

χαμηλά σε σχέση με το ιντεγκρίνης α3

υψηλή ομάδα (66,67%

vs.

13,51%,

σ

= 6.67 Ε-6). Αξιολόγηση της συνδυασμένης επίδρασης της CD151 και ιντεγκρίνης α3 σχετικά με την πρόγνωση της HGC έδειξε ότι το 5-ετή OS της CD151

υψηλή /ιντεγκρίνης α3

υψηλή ασθενείς (ομάδα ΙΙΙ, n = 23) ήταν 17,40%, η οποία ήταν σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη του CD151

χαμηλά /ιντεγκρίνης α3

χαμηλή ασθενείς (77,78% της ομάδας Ι, n = 27) και είτε χαμηλή ασθενείς (ασθενείς είτε με χαμηλή CD151 ή μόνοι χαμηλή α3 ιντεγκρίνης) (23,08%, ομάδα ΙΙ , n = 26, Σχ. 4C και D).

η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι το μέγεθος του όγκου, το βάθος της εισβολής, η συμμετοχή των λεμφαδένων, στάδιο υψηλό όγκο, υψηλή έκφραση CD151, το υψηλό επίπεδο της ιντεγκρίνης α3 και συν-έκφραση του CD151 και α3 ιντεγκρίνης ήταν προγνωστικοί παράγοντες για το OS. Άλλα χαρακτηριστικά όπως η ηλικία, το φύλο και τη διαφοροποίηση δεν είχε καμία προγνωστική σημασία για το OS (Πίνακας 2). Η πολυπαραγοντική Cox μοντέλο αναλογικού κινδύνου έδειξε ότι το βάθος της εισβολής ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για το OS (Πίνακας. 2).

Η

Συζήτηση

Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης έδειξαν ότι CD151 εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σε κύτταρα GC και ιστούς όγκου από ό, τι στα κύτταρα HGEC και μη όγκου ιστών, η οποία είναι συνεπής με προηγούμενες αναφορές επί της έκφρασης CD151 σε μια ποικιλία όγκων, συμπεριλαμβανομένων ενδοηπατική χολαγγειοκαρκίνωμα, HCC, του μαστού, του πνεύμονα, του παχέος εντέρου και του καρκίνου του προστάτη [15], [19], [20], [21]. Επιπλέον, η μελέτη μας έδειξε ότι CD151 σχηματίζει ένα λειτουργικό σύμπλοκο με ιντεγκρίνης α3, και προς τα κάτω ρύθμιση των CD151 ή ιντεγκρίνης έκφραση α3 ανέστειλε σημαντικά την εισβολή και τη μετάσταση των κυττάρων HGC in vitro. Κλινικά, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι υψηλά επίπεδα έκφρασης CD151 ή συν-υπερέκφραση του CD151 και ιντεγκρίνης α3 μπορεί να έχει αρνητικά προγνωστικά συνέπειες για τους ασθενείς με GC.

Η αρχική απόδειξη ότι CD151 προωθεί μετάσταση προήλθε από μια μελέτη που δείχνει ότι ένα αντίσωμα με άγνωστη ειδικότητα ανέστειλε το σχηματισμό μετάστασης από μία γραμμή ανθρώπινου επιδερμοειδούς καρκινώματος

in vivo

. Το αντίσωμα αναγνώρισε CD151 και ανέστειλαν μετανάστευση κυττάρου προσκόλληση χωρίς να επηρεάζει ή πολλαπλασιασμό [22]. Η υπερέκφραση του CD151 έχει ανιχνευθεί σε πολλούς τύπους όγκων, και αυξημένη έκφραση CD151 έχει συσχετισθεί με κακή πρόγνωση σε μαστού, του παγκρέατος, και καρκίνων του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου, καθώς και HCC. Επιπλέον, CD151 έχει δειχθεί να είναι ένας καλύτερος προγνωστικός δείκτης πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη από ιστολογική διαβάθμιση [23]. Στην παρούσα μελέτη, δύο γραμμές αποδεικτικά στοιχεία δείχνουν ότι η υπερέκφραση του CD151 είναι κλινικής σημασίας σε HGC. Κατ ‘αρχάς, CD151 υπερέκφραση παρατηρήθηκε συχνότερα σε ασθενείς HGC με κακή πρόγνωση. Δεύτερον, αυξημένη έκφραση του CD151 ενίσχυσε την εισβολή και τη μετάσταση των κυττάρων HGC. Επιπλέον, τα κλινικά δεδομένα αποκάλυψαν ότι η αυξημένη έκφραση CD151 ξεπέρασε άλλα κοινώς χρησιμοποιούμενα κλινικές παραμέτρους, όπως η αύξηση του μεγέθους του όγκου και την κακή διαφοροποίηση για την πρόβλεψη HGC πρόγνωση. Λαμβανόμενα μαζί αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι CD151 παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη της HGC. Στην παρούσα μελέτη, δείχνουμε ότι CD151 αλληλεπιδρά με ιντεγκρίνης α3 στα κύτταρα HGC. Διαφοροποιηθούν τα επίπεδα έκφρασης ιντεγκρίνης α3 σε κύτταρα HGC-27-vshCD151-cDNA-CD151 αποκάλυψε το σχηματισμό ενός λειτουργικού συμπλόκου α3 CD151-ιντεγκρίνης και έδειξαν ότι συν-υπερέκφραση CD151 και ιντεγκρίνης α3 συσχετίστηκε με αυξημένο μεταστατικό δυναμικό των κυττάρων HGC . Λαμβάνοντας υπόψη τον καθιερωμένο ρόλο της ιντεγκρίνης α3 σε HGC [16], είναι λογικό να υποθέσουμε ότι CD151 υπερέκφραση μπορεί να προωθήσει την μετάσταση /εισβολή στο GC.

Λόγω των υδρόφοβων φύσης τους, τετρασπανίνη συνεργάτης με το άλλο και με άλλους μεμβράνη πρωτεΐνες [24]. Πράγματι, είναι καλά τεκμηριωμένο ότι τετρασπανίνη παρέχουν μια πλατφόρμα σηματοδότησης στην πλασματική μεμβράνη μέσω του σχηματισμού μικροεπικράτειες τετρασπανίνη εμπλουτισμένου (tems) [6], [7]. Μέχρι σήμερα, έχουν διαφορετικούς τύπους πρωτεϊνών μεμβράνης, συμπεριλαμβανομένων των υποδοχέων αυξητικού παράγοντα, ιντεγκρίνες, περιοχές ανοσοσφαιρίνης και EWI-F (μια υπο-οικογένεια πρωτεϊνών Ig) έχουν βρεθεί σε ματα [25]. Επιπλέον, οι λειτουργίες αυτών των πρωτεϊνών μεμβράνης έχουν αναφερθεί ότι συνδέονται στενά με ματα. Για παράδειγμα, διαφορετικοί συνδυασμοί τετρασπανίνη σχηματίζουν ματα βρέθηκαν να επηρεάζουν τη λειτουργία των υποδοχέων αυξητικού παράγοντα και ιντεγκρίνης. Το πιο σημαντικό, το επίπεδο έκφρασης των ατομικών τετρασπανίνη σε ματα έχει επίσης μια σημαντική επίδραση επί των σχετικών πρωτεϊνών [26], [27]. Σε πρόσφατες μελέτες, knock-down του CD151 έδειξε να επηρεάζει τον σχηματισμό του στημάτων και διαγραφής CD151 ανέστειλαν την λειτουργία αρκετών μεμβράνη πρωτεΐνες, υποδεικνύοντας ότι CD151 διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στο σχηματισμό και τη λειτουργία ΤΕΜ [7], [26]. Επιπλέον, το κλείδωμα της CD151 απομειωθεί σημαντικά την ικανότητα διήθησης και μετάστασης των καρκινικών κυττάρων, και στοχεύει την πρωτεΐνη CD151 ή ματα έχει γίνει μια πολλά υποσχόμενη θεραπευτική στρατηγική [23]. Στην παρούσα μελέτη, η έκφραση του CD151 φάνηκε να είναι ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για το OS. Ωστόσο, η συνδυασμένη έκφραση των CD151 και ιντεγκρίνης α3 ήταν πιο αξιόπιστος προγνωστικός δείκτης OS από CD151 ή ιντεγρίνης έκφραση α3 μόνο, υποστηρίζοντας την ιδέα ότι και οι δύο CD151 και ιντεγκρίνης α3 διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο σε HGC. Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας είναι σημαντικές και δείχνουν ότι CD151 ή το σύμπλοκο α3 CD151-ιντεγκρίνης μπορεί να είναι σημαντικοί στόχοι για τη θεραπεία των ασθενών με GC.

Εν κατακλείδι, η υπερέκφραση CD151 είναι ένας προγνωστικός δείκτης της κακής έκβασης σε ασθενείς με HGC