Αφηρημένο

Περίπου το 3-7% των μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα φιλοξενούν ένα αναπλαστικό λέμφωμα κινάσης (

ALK

) σύντηξη του γονιδίου, που αποτελεί ένα νέο μοριακό υπότυπο του καρκίνου του πνεύμονα που ανταποκρίνεται σε crizotinib, ένας

ALK

αναστολέα. Αν και προηγούμενες μελέτες έχουν αξιολογήσει

ALK

-rearranged καρκίνων του πνεύμονα, η περιεκτική ανάλυση του καρκίνου του πνεύμονα στην κινεζική δεν έχει καλά αξιολογηθεί. Εδώ, εντοπίσαμε 44 περιπτώσεις

ALK

-rearranged δείγματα με φθορίζοντα in-situ υβριδισμού (FISH), ανοσοϊστοχημεία (IHC), και αντίστροφη αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μεταγραφής (RT-PCR) σε ένα μεγάλο αριθμό από χειρουργικά καρκίνων του πνεύμονα. Όλοι οι καρκίνοι 44

ALK

-rearranged πνεύμονα ήταν αδενοκαρκινώματα, με 2 περιπτώσεις έχουν επιπλέον εστιακό πλακώδες συστατικά. Ο στόχος ήταν να αναλύσει τις κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά της

ALK

-rearranged πνεύμονα αδενοκαρκινώματα. Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι μια δομή ηθμοειδή, εξέχουσα εξωκυττάρια βλέννα και κάθε είδος των βλεννογόνων μοτίβο κυττάρων μπορεί να είναι είτε ευαίσθητες ή ειδικές για την πρόβλεψη ενός

ALK

αναδιάταξη. Χρησιμοποιήσαμε FISH ως την τυποποιημένη μέθοδο ανίχνευσης. Συγκρίναμε το

ALK

αναδιάταξη ακρίβεια των ψαριών, RT-PCR και IHC. RT-PCR θα μπορούσε να καθορίσει τόσο το

ALK

συνεργάτη σύντηξης και την παραλλαγή της σύντηξης, αλλά φάνηκε ανίκανος να ανιχνεύσει όλες τις μεταθέσεις που αφορούν το

ALK

γονίδιο. Είναι αξιοσημείωτο ότι IHC χρησιμοποιώντας το αντίσωμα D5F3 (Cell Signaling Technology) έδειξε υψηλότερη ευαισθησία και εξειδίκευση από το αντίσωμα ALK1 (Dako). Ως εκ τούτου, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η IHC παραμένει μια οικονομικά αποδοτική και αποτελεσματική τεχνική για τη διάγνωση

ALK

ανακατατάξεις και ότι D5F3 μπορεί να είναι η βέλτιστη αντίσωμα ελέγχου στην κλινική πράξη

Παράθεση:. Li Υ, Παν Y , Wang Ε, Sun Υ, Χου Η, Shen Χ, et al. (2013)

ALK

-Rearranged Καρκίνο του Πνεύμονα στην κινεζική: μια περιεκτική αξιολόγηση της Clinicopathology, IHC, FISH και RT-PCR. PLoS ONE 8 (7): e69016. doi: 10.1371 /journal.pone.0069016

Επιμέλεια: Giuseppe Viglietto, ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ Μεγάλη Ελλάδα, Ιταλία

Ελήφθη: 15 Φεβρουαρίου 2013? Αποδεκτές: 11, Ιουν, 2013? Δημοσιεύθηκε: 26 Ιουλ 2013

Copyright: © 2013 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τα κονδύλια από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81101761, 81172218)? Βασικά Πρόγραμμα κατασκευής του έργου Εθνική «985» (985-YFX0102) URL: https://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default152.htm. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα παραμένει η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με τον κόσμο. Η κλινική σημασία του μοριακού φαινοτύπου του καρκίνου του πνεύμονα έγκειται κυρίως στο θεραπευτικές επιπτώσεις της από διαφορετικούς υποτύπους μπορεί να ανταποκρίνεται σε διαφορετικές θεραπείες στόχο. Ένα γονίδιο σύντηξης που ενώνει 4 (

EML4

) γονίδιο το εχινοδερμάτων σχετίζεται με τους μικροσωληνίσκους πρωτεΐνη όπως με τη αναπλαστικού λεμφώματος κινάση (

ALK

) γονίδιο βρέθηκε σε ένα υποσύνολο των μη-μικρού κυττάρου καρκινώματα του πνεύμονα (NSCLCs) το 2007 [1]. Αυτή η σύντηξη συνέβη λόγω χρωμοσωμική αναστροφή ή μετατόπιση στο χρωμόσωμα 2ρ, με αποτέλεσμα τον σχηματισμό του

EML4-ALK

σύντηξη γονιδίων. Παρά τη σχετικά χαμηλή συχνότητα του

EML4-ALK

σύντηξης,

ALK

-rearranged καρκίνο του πνεύμονα είναι μια μοναδική μοριακή υποομάδα με υψηλή ευαισθησία σε αναστολείς ALK, και είναι αμοιβαία αποκλειόμενες από άλλα καλά γνωστό ογκογόνες μεταλλάξεις που περιλαμβάνουν EGFR ή KRAS [2] – [5]. Για την καλύτερη κατανόηση

ALK

-rearranged καρκίνων του πνεύμονα, είναι σημαντικό να χαρακτηρίσει κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά τους. Τα αποτελέσματα της λεπτομερούς κλινικοπαθολογική αναλύσεις έχουν μεταβληθεί. Στη μελέτη μας, 572 αδενοκαρκινώματα πνεύμονα χωρίστηκαν σε

ALK

-rearranged, κοινή μετάλλαξη του οδηγού, και παν-αρνητικές ομάδες, ανάλογα με την κατάσταση μεταλλάξεων. Συγκρίναμε κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά της

ALK

-θετικό ομάδα με κοινή μετάλλαξη του οδηγού, και με παν-αρνητική ομάδα, επιδιώκοντας να αξιολογήσει κατά πόσον υπήρχαν διακριτικά κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά που σχετίζονται με

ALK

αναδιάταξη ομάδα.

ALK

-rearranged καρκίνο του πνεύμονα μπορεί να προσδιοριστεί από την IHC, FISH, ή RT-PCR με κάθε μέθοδο που έχει τα πλεονεκτήματα και τα μειονεκτήματα για τον προσυμπτωματικό έλεγχο. Τρέχουσες κλινικές δοκιμές χρήσης crizotinib FISH ως διαγνωστικό τεστ [6]. Ωστόσο, FISH απαιτεί εξειδικευμένο τεχνικό πόρους και τεχνογνωσία, και τα σήματα γρήγορα εξαλείφονται με την πάροδο του χρόνου. Επιπλέον, το κόστος της δοκιμασίας FISH περιορίζει την εφαρμογή του για τη διαλογή στην κλινική πρακτική. RT-PCR σύζευξη άμεση αλληλούχιση έχει χρησιμοποιηθεί για να προσδιορίσει τις γνωστές παραλλαγές της σύντηξης, αλλά μπορεί να χάσουν άγνωστες παραλλαγές. IHC είναι σχετικά φθηνή, πιο γρήγορα, και πραγματοποιείται συνήθως σε φορμόλη-σταθερής εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) ιστούς. Ωστόσο, τα αποτελέσματα των δοκιμών ΑΙΚ IHC στον καρκίνο του πνεύμονα παραμένει να είναι ανικανοποίητη λόγω της σχετικά χαμηλής ευαισθησίας ή εξειδίκευσης, και απουσία ενός ιδανικού αντισώματος. Τώρα, το εξαιρετικά ευαίσθητο μονοκλωνικό αντίσωμα ALK, D5F3 μπορούν να αναγνωρίσουν επιτόπους μέσα στην πρωτεΐνη ALK όλων των γνωστών συντήξεις. IHC είναι άμεσα διαθέσιμη στην καθημερινή πράξη παθολογία και η χρέωση είναι η δοκιμή μόνο το ένα εικοστό των δοκιμών FISH στην Κίνα. Επομένως, αυτή η ανάλυση IHC κρατά την υπόσχεση του να είναι οικονομικά αποδοτική και μία μέθοδο ταχείας διαλογής [7]. Ωστόσο, η ακρίβεια και η ευαισθησία του αντισώματος D5F3 δεν έχουν ελεγχθεί διεξοδικά. Συγκρίναμε τη συμφωνία μεταξύ των IHC, FISH και RT-PCR για να προσδιοριστεί η βέλτιστη μέθοδο διαλογής. FISH είναι η πιο ακριβής μέθοδος και η RT-PCR μπορεί να καθορίσει περισσότερες παραλλαγές σύντηξης ALK, αλλά δεν μπορεί να ανιχνεύσει όλες τις μεταθέσεις ALK. Βρήκαμε ότι IHC με μονοκλωνικό αντίσωμα D5F3 έδειξε τόσο υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα (91% και 98%, αντίστοιχα) και έτσι θα μπορούσε να εφαρμοστεί εύκολα σε κλινική πρακτική.

Υλικά και Μέθοδοι

Επιλογή Case

Ένα σύνολο 572 κατεψυγμένα δείγματα αδενοκαρκίνωμα πνευμονικού ιστού και την αντίστοιχη ιστούς παραφίνης όγκου τους ελήφθησαν στο Πανεπιστήμιο Fudan της Σαγκάης Κέντρο Καρκίνου από τον Οκτώβριο του 2007 μέχρι Ιούνη του 2011, με γραπτή πληροφορημένες συγκαταθέσεις από όλους τους ασθενείς. Όλες οι έρευνες που αφορούν τα ανθρώπινα συμμετέχοντες στη μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Σαγκάης Καρκίνου του νοσοκομείου (Σαγκάη Κέντρο Καρκίνου), Πανεπιστήμιο Fudan, Κίνα. Έχουμε στο παρελθόν έδειξαν ότι το 90% των πνευμόνων αδενοκαρκινώματα από ποτέ καπνιστές έτρεφε αλληλοαποκλείονται ογκογόνων μεταλλάξεων σε μόλις τέσσερα γονίδια (

EGFR

,

KRAS

,

HER2

και ALK) [ ,,,0],8]. Στην παρούσα μελέτη, είχαμε συμπεριλάβει 527 αδενοκαρκινώματα πνεύμονα ανεξάρτητα από το καθεστώς του καπνίσματος εκτός από τα 45 όγκους (41

EGFR

, 3

EML4-ALK

συγχωνεύσεις και 1

KRAS

) προηγουμένως δημοσιευθεί [8]. Υπήρχαν 411 από 572 δείγματα που έτρεφε γνωστές μεταλλάξεις, περιλαμβανομένων 361

EGFR

, 40

KRAS

και 10

BRAF

όγκους, ενώ 161 από 572 δείγματα δεν τρέφουν καμία από οι παραπάνω μεταλλάξεις. Για την ανίχνευση του

EML4-ALK

συντήξεις, εκκινητές σχεδιάστηκαν για να ενισχύσουν όλες τις γνωστές παραλλαγές σύντηξη, χρησιμοποιώντας cDNA, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9]. Σύμφωνα με κατάστασης μεταλλάξεων, 572 αδενοκαρκινώματα πνεύμονα διαιρέθηκαν σε τρεις ομάδες. Υπήρξαν 44 περιπτώσεις που προσδιορίζονται ως ALK αναδιάταξη με FISH και ομαδοποιούνται ως

ALK

-θετικό. Υπήρξαν 411 περιπτώσεις που έτρεφε γνωστό ογκογόνων μεταλλάξεων (361

EGFR

, 40

KRAS

και 10

BRAF

) προσδιορίζονται με RT-PCR και ομαδοποιούνται ως κοινές μεταλλάξεις κίνησης . Υπήρξαν 117 περιπτώσεις που δεν φιλοξενούν κανένα από τα παραπάνω μετάλλαξη και, συνεπώς, ομαδοποιούνται ως παν-αρνητικό. Κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένα που συλλέγονται για τις αναλύσεις περιλάμβαναν την ηλικία, το φύλο, το μέγεθος του όγκου, το ιστορικό καπνίσματος, του υπεζωκότα εισβολή, την κατάσταση των λεμφαδένων και παθολογικές στάδιο. Για κάθε περίπτωση, πολλές διαφάνειες που αντιστοιχούν σε τμήματα ολόκληρη ιστού εξετάστηκαν από δύο παθολόγους και κατατάσσονται σύμφωνα με την τρέχουσα ταξινόμηση IASLC /ATS /ERS [10]. Όλες οι όγκοι βαθμολογήθηκαν από το σύστημα ταξινόμησης μοτίβο που βασίζεται προτείνει Σίκα σε τάξη Ι, κατηγορίας ΙΙ ή κατηγορίας ΙΙΙ. Grade I, ένα lepidic κυρίαρχο μοτίβο? Grade II, ένα κυψελωτά, θηλώδες ή βλεννώδες κυρίαρχο μοτίβο? και Grade III, ένα στερεό, μικροθηλωματώδης ή ηθμοειδή πρότυπο [11]. Περιπτώσεις με τις διαφορές μεταξύ αναθεωρητές είχαν υποβληθεί εκ νέου και συναίνεση ερμηνεία παρασχέθηκε.

RT-PCR και μεταλλάξεων Αναλύσεις

Δεν υπήρξαν 572 περιπτώσεις υποβάλλονται σε RT-PCR. Κατεψυγμένα ιστοί κατάφωρα χωρισθεί σε ΤΡΙΖΟΙ (Invitrogen Inc.) για την εξαγωγή RNA ακόλουθα τυποποιημένα πρωτόκολλα. Σύνολο δείγματα RNA μεταγράφεται αντίστροφα σε cDNA μονής έλικας χρησιμοποιώντας RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit (Fermentas, ΕΕ). Κατάστασης μεταλλάξεων του

EGFR

(εξόνια 18-22),

KRAS

(εξώνια 2-3) και

BRAF

(εξώνια 11 έως 15), η πρόσβαση με το πρότυπο RT- PCR και σε συνδυασμό άμεση αλληλούχιση. Για την ανίχνευση του

EML4-ALK

συντήξεις, εκκινητές σχεδιάστηκαν για να ενισχύσουν όλες τις γνωστές παραλλαγές σύντηξης χρησιμοποιώντας cDNA, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [8], [9]. Εμπρόσθια εναύσματα που περιλαμβάνονται

EML4

E2F (5′-TGATGTTTTGAGGCGTCTTG-3 ‘),

EML4

E13F (5′-AGATCGCCTGTCAGCTCTTG-3′),

EML4

E18F (5 ‘ -TTAGCATTCTTGGGGAATGG-3 ‘), και αντίστροφο εκκινητή

ALK

E20R (5′-TGCCAGCAAAGCAGTAGT TG-3′). ανάλυση Multiplex PCR έγινε με ΚΩΔ συν DNA πολυμεράση (Toyobo, Osaka, Japan), με το ακόλουθο πρόγραμμα: 94 ° C 5 λεπτά? 94 ° C 30 δευτερόλεπτα 60 ° C 30 δευτερόλεπτα 68 ° C 1 λεπτό, 35 κύκλοι? 68 ° C 10 λεπτά. PCR προϊόντα απευθείας αλληλουχήθηκαν σε εμπρός και όπισθεν κατευθύνσεις. Όλες οι μεταλλάξεις επαληθεύτηκαν με ανάλυση ενός ανεξάρτητου απομόνωσης PCR. PCR προϊόντα απευθείας αλληλουχήθηκαν σε εμπρός και όπισθεν κατευθύνσεις. Όλες οι μεταλλάξεις επαληθεύτηκαν με ανάλυση ενός ανεξάρτητου PCR απομόνωσης.

φθορισμού in situ υβριδισμού

ALK

-rearranged καρκίνο του πνεύμονα είναι μια μοριακή υποομάδα και αλληλοαποκλείονται από άλλες μεταλλάξεις, όπως όπως

EGFR

,

KRAS

και

BRAF

. Οι 161 περιπτώσεις που δεν τρέφουν καμία από τις ανωτέρω μεταλλάξεις υποβλήθηκαν σε FISH. FISH πραγματοποιήθηκε σε σταθεροποιημένο με φορμαλίνη εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) δείγματα χρησιμοποιώντας ένα εμπορικά διαθέσιμο διαλυόμενο ανιχνευτή ειδικό για το

ALK

γονίδιο (Vysis LSI ΑΙΚ Διπλή χρώμα, οι διαλύσεις χώρια αναδιάταξης ανιχνευτή? Abbott Molecular, Abbott Park, IL) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ο ανιχνευτής υβριδοποιήθηκε σε μπάντα 2p23, εκατέρωθεν του γονιδίου ALK σημείο διακοπής. Το 5 ‘σήμα ALK σημάνθηκε με Spectrum Green (πράσινο), και το 3’

ALK

σήμα σημάνθηκε με Spectrum Orange (πορτοκαλί). 4, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (DAPI) II εφαρμόστηκε για πυρήνες αντιχρωματισμός. Σήματα για κάθε ανιχνευτή αξιολογήθηκαν κάτω από μικροσκόπιο εφοδιασμένο με φίλτρο τριπλής-pass (DAPI /Πράσινο /Πορτοκαλί? ​​Abbott Molecular) και βύθιση του πετρελαίου αντικειμενικό φακό. FISH-θετική περιπτώσεις ορίστηκαν ως δύο θετικές

ALK

αναδιάταξη μοτίβα. Το ένα ήταν το διάλειμμα-εκτός μοτίβο με ένα σήμα σύντηξης και δύο χωριστές πορτοκαλί και πράσινο σήματα. Η απόσταση ανάμεσα σε δύο ξεχωριστά σήματα εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας δύο φορές το μέγεθος του μεγαλύτερου μεγέθους του σήματος. Ένας άλλος ορισμός ήταν μια απομονωμένη κόκκινο περίγραμμα σήματος με ένα σήμα σύντηξης και ένα κόκκινο σήμα χωρίς αντίστοιχη πράσινο σήμα. Οι θετικές περιπτώσεις ορίστηκαν ως σήματα διαιρούμενη περισσότερο από 15% ή απομονωμένα σήματα ερυθρό σήμα σε 50 κύτταρα όγκου. FISH-αρνητικών περιπτώσεων ορίστηκαν ως εκείνες που παρουσιάζουν επικάλυψη του κόκκινου και του πράσινου σήματα (κιτρινωπό) στα καρκινικά κύτταρα, υποδεικνύοντας ότι

ALK

δεν είχε μετατεθεί χρονικά.

Η ανοσοϊστοχημεία

Υπήρχαν 161 περιπτώσεις που δεν φιλοξενούν οποιοδήποτε από τα παραπάνω μεταλλάξεων. Αυτά υποβλήθηκαν σε D5F3, ALK1, p63 και TTF-1 IHC. IHC διεξήχθη σε 4 μm τομές πάχους FFPE. Πλάκες αποπαραφινοποιήθηκαν και προκατεργάστηκαν με 1 mmol /L EDTA και λύση ανάκτησης αντιγόνου θερμότητα μεσολάβηση σε ένα φούρνο μικροκυμάτων. Περαιτέρω βήματα έγιναν σε θερμοκρασία δωματίου σε ένα ενυδατωμένο θάλαμο. Τα πλακίδια προεπωάστηκαν σε 20% φυσιολογικό ορό κατσίκας. ALK (D5F3) XP κουνελιού μονοκλωνικό αντίσωμα (Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ), το ποντίκι μονοκλωνικό αντιανθρώπινο ALK1 (Dako) σε αραίωση 1:10 σε αραιωτικό Dako, p63 (1:400, 4A4, ϋΑΚΟ) και TTF-1 ( 1:100, εφαρμόστηκαν 8G7G3 /1, ϋΑΚΟ). Τα πλακίδια στη συνέχεια πλύθηκαν σε Tris-HCl και ανιχνεύθηκαν με συζευγμένη με υπεροξειδάση χρόνου EnVision αντι-κουνελιού + kit (Dako). Όλα τα πλακίδια με αιματοξυλίνη.

κυτταροπλασματική χρώση θεωρήθηκε ως θετικό για D5F3 και ALK1. Αυτό το αναγνωρίζει επιτόπια μέσα στην πρωτεΐνη ALK που σώζονται σε όλες τις γνωστές συγχωνεύσεις ALK. κηλίδωσης βαθμολογήθηκε ως εξής: 0 (καμία χρώση)? 1 (αχνό, κυτταροπλασματική χρώση)? 2 (μέτρια, ομαλή κυτταροπλασματική χρώση)? 3 (έντονη, κοκκώδη κυτταροπλασματική χρώση) σε περισσότερο από το 10% των κυττάρων του όγκου. Η βαθμολόγηση έγινε από δύο παθολόγους. Πυρηνική χρώση των καρκινικών κυττάρων θεωρήθηκε θετικό για TTF-1 και ρ63.

Η στατιστική ανάλυση

Οι ενώσεις αδενοκαρκινώματα πνεύμονα με

ALK

-θετικό και κοινή μετάλλαξη του οδηγού ή το τηγάνι -αρνητικοί ομάδα με κλινικά χαρακτηριστικά αξιολογήθηκαν με τη χρήση Chi-square (για κατηγορικά δεδομένα) και Wilcoxon rank-sum (για συνεχή δεδομένα) δοκιμές.

σ τιμές

βασίστηκαν σε δύο όψεων υπόθεση.

σ

τιμές μικρότερες από 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

Αποτελέσματα

Κλινικά χαρακτηριστικά της

ALK

-rearranged καρκίνο του πνεύμονα

Η 572 χειρουργικά στάδιο I-IV του πνεύμονα αδενοκαρκινώματα ασθενείς ήταν όλα από την Κίνα, τις ηλικίες τους κυμαίνονταν από 22 έως 84 ετών, με μέσο όρο 59 χρόνια. Οι ασθενείς που αποτελείται από 215 άνδρες και 357 γυναίκες. Οι διάμετροι των όγκων κυμαίνονταν από 0,5 έως 11 cm,. Παθολογική στάδια ήταν Ι 285 και II-IV σε 287 ασθενείς. Σύμφωνα με τον κατάστασης μεταλλάξεων, οι 572 ασθενείς χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες, που ονομάζεται

ALK

-θετικό ομάδα (44 περιπτώσεις), συγκροτείται κοινή ομάδα οδηγός μετάλλαξη (411 περιπτώσεις) και παν-αρνητική ομάδα (117 περιπτώσεις). Σε όλες τις

ALK

-θετικό περιπτώσεις, δεν ταυτόχρονη ενεργοποίηση μεταλλάξεων στο

EGFR

,

KRAS

και

BRAF

εντοπίστηκαν. Συγκρίναμε κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά της

ALK

-θετικό ομάδα με την κοινή μετάλλαξη του οδηγού και παν-αρνητικές ομάδες. Των περιπτώσεων με τα κλινικά δεδομένα είναι διαθέσιμα,

ALK

-θετικό καρκίνων του πνεύμονα σχετίζεται με μικρότερη ηλικία σε σύγκριση με την ομάδα μετάλλαξη κοινή οδηγού (

σ

= 0,023, Πίνακας 1), αλλά η ηλικία στην

ALK

-θετικό ομάδα δεν ήταν σημαντικά διαφορετική από το τηγάνι-αρνητική ομάδα (

σ

= 0.83, Πίνακας 1). Η

ALK

-θετικό ομάδα που συνδέεται με μη καπνιστών ιστορία σε σχέση με παν-αρνητικών ασθενών (

σ

& lt? 0.001, Πίνακας 1), ενώ η

ALK

– θετική ομάδα έδειξε καμία διαφορά σημασίας σε σύγκριση με την ομάδα μετάλλαξη κοινή οδηγού (

σ

= 0,828, Πίνακας 1). Παρά το γεγονός ότι

ALK

-rearranged ασθενείς έδειξαν μια τάση για συσχέτιση με θετικούς λεμφαδένες καθεστώς και υψηλότερο στάδιο και σε προηγούμενες εκθέσεις [12], [13], μας

ALK

-θετικό ομάδα δεν είχε καμία διαφορά σημασίας από τις άλλες 2 ομάδες. Κλινικά χαρακτηριστικά του

ALK

-θετικό ομάδα, κοινή ομάδα μετάλλαξη του οδηγού, και παν-αρνητική ομάδα συνοψίζονται στον Πίνακα 1.

Η

Παθολογική ευρήματα του

ALK

-rearranged καρκίνων του πνεύμονα

Ο Πίνακας 1 συνοψίζει τα παθολογικά χαρακτηριστικά του συνόλου των 44 περιπτώσεων. Όλα τα 44 ήταν αδενοκαρκινώματα και 2 είχαν επιπλέον εστιακό πλακώδες συστατικά (λογαριασμός για το 10% του μεγέθους του όγκου). Σύμφωνα με το σύστημα ταξινόμησης μοτίβο που βασίζεται, δεν υπήρχαν διαφορές στο βαθμό του όγκου μεταξύ

ALK

-θετικό, κοινή μετάλλαξη του οδηγού ή παν-αρνητικό ομάδες (

σ

= 0,59 και

p

= 0,344, αντίστοιχα). Σύμφωνα με τους υποτύπους επικράτηση με βάση την ταξινόμηση IASLC /ATS /ERS,

ALK

-θετικό ομάδα μας είχε διάφορα κυρίαρχο υποτύπους: κυψελιδικά 15 περιπτώσεις (34,09%), στερεά 19 περιπτώσεις (43,18%), lepidic 1 περίπτωση (2,27%), θηλώδες 6 περιπτώσεις (13,64%), μικροθηλωματώδης 1 περίπτωση (2,27%, Εικόνα 1Α), βλεννώδες 2 περιπτώσεις (4,55%). Η

ALK

-θετικό όγκων συσχετίστηκε σημαντικά με τον στερεάς και acinar- κυρίαρχο πρότυπα σε σχέση με τα αδενοκαρκινώματα μεταλλαγμένο κοινή οδηγού (

σ

& lt? 0,0001 και

σ

= 0.013, αντίστοιχα), ενώ δεν συνδέεται σημαντικά με άλλους κυρίαρχη ιστολογική μοτίβα. Επιπλέον,

ALK

Θετικοί οι όγκοι που δεν συνδέονται σημαντικά με την κυρίαρχη ιστολογική πρότυπα σε σχέση με παν-αρνητικό αδενοκαρκινώματα

(Α) θηλώδες και μικροθηλωματώδης μοτίβα.? (Β) βλεννώδες μοτίβο ηθμοειδή αποτελείται από άφθονα εξωκυττάρια βλέννα και δομές ηθμοειδή? (C) στερεά μοτίβο με κύτταρα δαχτυλίδι σφραγίδα? (D) βλεννώδες μοτίβο ηθμοειδή συχνά επιπλέουν εντός των χώρων φατνιακή βλέννας-γεμάτο? (Ε) βλεννογόνους κύτταρα σε μορφή των καλυκοειδών κυττάρων? (F) στερεά μοτίβο με hepatoid καρκινικά κύτταρα έχουν άφθονο κυτταρόπλασμα ηωσινοφιλική, στρογγυλό πυρήνες, και εξέχοντα πυρήνια? οι πυρήνες των κυττάρων του όγκου είναι σχετικά μονομορφικής.

Η

ALK

-θετικό επίσης όγκοι που σχετίζονται με διακριτά μορφολογικά χαρακτηριστικά. Από τους 44 όγκους, 52.27% (23/44) έδειξε ένα πρότυπο ηθμοειδή (Σχήμα 1Β), είτε εστιακή ή διάχυτη. Σε αντίθεση, μόνο 20 από 411 κοινών μεταλλαγμένων οδηγού (

σ

& lt? 0.001) και 34 117 παν-αρνητικούς όγκους είχαν ένα μοτίβο ηθμοειδή (

σ

= 0,006). Υπήρχαν 29.55% (13/44) των

ALK

-θετικό, αλλά μόνο το 2% (8/411) των όγκων μεταλλαγμένων κοινού οδηγού (

σ

& lt? 0.001) που είχαν τουλάχιστον κάποια βαθμός των κυττάρων σφραγιστικό δαχτυλίδι (Σχήμα 1C). κύτταρα Signet δακτύλιο συνδέθηκαν με ένα στερεό κυρίαρχο μοτίβο σε 11

ALK

-θετικό όγκων, ένα πρότυπο κυψελοειδή σε 1, και οι δύο κυψελοειδή και στερεά σχήματα σε ένα. Η αναλογία των κυττάρων σφραγιστικά δακτυλίου με το σύνολο των κυττάρων του όγκου μεταβάλλεται, με μια σειρά από 5 έως 80 τοις εκατό. Είναι ενδιαφέρον,

ALK

-θετικό όγκοι δεν συσχετίστηκαν σημαντικά με τα κύτταρα σφραγίδα δακτύλιο μοτίβο σε σύγκριση με παν-αρνητικούς όγκους, αποδεικνύοντας ότι το σχέδιο σφραγίδα δακτύλιος μπορεί να παρατηρηθεί και σε άλλα σπάνια ογκογόνο μετάλλαξη του καρκίνου του πνεύμονα. Επίσης βρήκε ήταν εξέχοντα εξωκυττάρια βλέννα και κάθε είδους βλεννογόνων κυττάρων ήταν σημαντικά πιο συχνή σε

ALK

-θετικό όγκους (P & lt? 0,0001) σε σύγκριση με τα άλλα 2 ομάδα (

σ

& lt? 0.001 ). Σε 22 περιπτώσεις (50%) υπήρχε προεξέχων εξωκυττάρια βλέννα, με βλέννα επέκταση σε κυψελιδικούς χώρους στην περιφέρεια του όγκου (Σχήμα 1 D). Οποιοσδήποτε τύπος βλεννογόνους κύτταρα βρέθηκε σε 26 περιπτώσεις (59,09%) και είχε διάφορες μοτίβο, αλλά βρέθηκαν συχνότερα σε ένα στερεό ή κυψελοειδή μοτίβο. Βλεννογόνους κύτταρα συχνότερα Σφραγιστικό δαχτυλίδι και στήλες τύπους Κύπελλο (Σχήμα 1Ε). Στις 2 βλεννώδες περιπτώσεις, καλυκοειδή κύτταρα πολλαπλασιάστηκαν σε κυψελωτά και lepidic μοτίβα. Σε 11 (25%) περιπτώσεις υπήρχε τουλάχιστον ένα κομβικό πληθυσμός hepatoid καρκινικών κυττάρων με άφθονο ηωσινοφιλική κυτταρόπλασμα, στρογγυλό πυρήνες, και εξέχοντα πυρήνια σε ένα κυρίως στερεά μορφή (Σχήμα 1 F). Επιπλέον, δεν υπάρχει μόνο η ιστολογική μοτίβο ήταν εντελώς ευαίσθητες ή ειδικές για την πρόβλεψη

ALK

αναδιάταξη, και ακόμη και περιπτώσεις με κυτταρικές σφραγίδα δακτύλιο ή μοτίβα ηθμοειδή θα μπορούσαν να είναι παρόντες στις άλλες 2 ομάδες. Σε όλες τις

ALK

-θετικό περιπτώσεις, οι πυρήνες των κυττάρων του όγκου ήταν σχετικά μονομορφικής (Σχήμα 1 F), εκτός από δύο περιπτώσεις δείχνουν εστιακές περιοχές πλειομορφία. Από τους 44, 40 ήταν TTF-1 θετικός, ενώ στο 6, η εστίες αδενοκαρκινώματος συν-εκφράζεται TTF-1 και ρ63.

EML4-ALK ανίχνευση παραλλαγής σύντηξης με πολλαπλή RT-PCR και ανάλυση αλληλουχίας σε παγωμένο υλικό

Ερευνήσαμε την παρουσία του

EML4-ALK

παραλλαγή σύντηξης σε 161 περιπτώσεις, οι οποίες δεν τρέφουν

EGFR

,

KRAS

και

BRAF

με RT-PCR. Εμείς εντοπίστηκαν 38 περιπτώσεις

EML4-ALK

παραλλαγή σύντηξης με RT-PCR.

EML4-ALK

παραλλαγή 1 ανιχνεύθηκε σε 19 δείγματα. Πέντε περιπτώσεις ήταν παραλλαγή 2, 7 περιπτώσεις ήταν παραλλαγή 3α /3β και 1 ήταν V3b, E17? A20, E17 ins 65? Α20, Ε17Β ins 39? A20 E10a /β, Ε13? Α20, Ε6α /b ins 18? Α20 και Ε6α? A19 καθένα (Πίνακας 2). Συγχωνεύσεις επιβεβαιώθηκαν με άμεση αλληλούχιση.

Η

ALK

αναδιατάξεις ανίχνευση με FISH

Δεν υπήρξαν 161 περιπτώσεις υποβλήθηκαν σε ALK FISH. ALK αναδιάταξη ορίζεται συνήθως με τη διασπασμένη πράσινο και πορτοκαλί σήματα που βρίσκονται τουλάχιστον δύο φορές τις περιόδους μεγαλύτερο μέγεθος σήματος. Υπήρξαν 44 περιπτώσεις θετικά, όπως προσδιορίζονται από FISH. Τυπικά, δύο ξεχωριστές διασπάσεις σε κόκκινο και πράσινο σήματα παρατηρήθηκαν 38 περιπτώσεις (Πίνακας 2, Σχήμα 2Α). Έξι από τους FISH-θετική υποθέσεις που χαρακτηρίζεται από την απώλεια ενός πράσινου σήματος (Σχήμα 2Β). Τρεις από αυτές τις 6 περιπτώσεις ήταν δύο παραλλαγή 1 περιπτώσεις, μία περίπτωση παραλλαγή 3b και τρεις αρνητικές περιπτώσεις. Έξι RT-PCR- αρνητικές περιπτώσεις ήταν θετικά με FISH. Δύο περιπτώσεις της συνύπαρξης των δύο αδενοκαρκίνωμα και το εστιακό ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα αποδειχθεί FISH-θετικό μήνυμα να είναι παρούσα μόνο στο συστατικό αδενοκαρκίνωμα.

(Α) δύο διακριτές κόκκινες και πράσινες σήματα. (Β) Μεμονωμένες κόκκινο σήμα.

Η

ALK αναδιατάξεις ανίχνευση από την IHC χρησιμοποιώντας ALK1 και D5F3 αντισώματος

δοκιμών ALK IHC στον καρκίνο του πνεύμονα παραμένει δύσκολη εξαιτίας της σχετικά χαμηλής έκφρασης της ALK πρωτεΐνη, με πολλά αποτελέσματα που δείχνουν ότι αυτή είναι η περίπτωση, χρησιμοποιώντας ALK1 αντισώματος. Για να προσδιορίσετε αν IHC χρησιμοποιώντας το αντίσωμα D5F3 θα μπορούσε να είναι καλύτερη, θα αξιολογηθεί τόσο σε 161 περιπτώσεις. έκφραση ALK1 αντίσωμα ανιχνεύθηκε σε 32, με αποτέλεσμα IHC βαθμολογίες από το 1 (n = 14), 2 (n = 14), και 3 (η = 4), ενώ 28 ασθενείς ήταν FISH-θετικοί (Πίνακας 2). Παρατηρήσαμε ότι όλες οι IHC 0 περιπτώσεις ήταν FISH-αρνητικό, όλα IHC 3+ και 2+ περιπτώσεις ήταν FISH-θετική, 4 IHC 1+ περιπτώσεις ήταν FISH-αρνητικά, και 10 IHC 1+ περιπτώσεις ήταν FISH-θετική. Μεταξύ των 32 ALK1 IHC-θετικές περιπτώσεις, μόνο 4 IHC 3+ επέδειξε μία ισχυρή κυτταροπλασματική ένταση χρώσης, που παρατηρήθηκε στο 20% έως 100% των θετικών κυττάρων (μέσος όρος 60%). IHC1 + και 2+ περιπτώσεις παρατηρήθηκαν μόνο σε ποσοστό 10% έως 50% των θετικών κυττάρων (μέσος όρος 30%) (Σχήματα 3Β, 3D, 3F)

Περίπτωση 1:. (Α) βαθμολογία 3+ δείχνει έντονο κοκκώδη κυτταροπλασματική χρώση με αντισώματα D5F3? (Β) βαθμολογία 1+ δείχνει εξασθενημένο κυτταροπλασματική χρώση με ALK1? Περίπτωση 2: (C) αποτέλεσμα 3+ παρουσιάζει έντονη κοκκώδη κυτταροπλασματική χρώση με D5F3? (D) 2+ δείχνει μέτρια, κοκκώδη κυτταροπλασματική χρώση με ALK1? Περίπτωση 3: (Ε) αποτέλεσμα 3+ παρουσιάζει έντονη κοκκώδη κυτταροπλασματική χρώση με D5F3? (F) βαθμολογία 1+ δείχνει εξασθενημένο, δυσδιάκριτα κυτταροπλασματική χρώση με ALK1.

Η

Στη μελέτη μας, η δοκιμή D5F3 IHC έδειξε πολύ υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα για την ανίχνευση της έκφρασης ALK. D5F3 ανοσοθετικότητα εντοπίστηκε σε 41 περιπτώσεις (σχήματα 3Α, 3C, 3Ε). Θετική ανοσοχρώση βρέθηκε μόνο στο συστατικό αδενοκαρκίνωμα από τα 2 αδενοχοληδωτό καρκινώματα. Μεταξύ 41 D5F3-θετικές περιπτώσεις, 34 ήταν 3+ εμφανίζουν ισχυρή κυτταροπλασματική ένταση χρώσης, που παρατηρήθηκε στο 60% έως 100% των θετικών κυττάρων (μέσος όρος 80%). Από τις υπόλοιπες 7 περιπτώσεις, 2 περιπτώσεις εμφάνισαν κυτταροπλασματική και πυρηνική θετική χρώση. Υπήρχαν 4 IHC-θετικό που ήταν 2+, δείχνει μέτρια κυτταροπλασματική χρώση, και 3 IHC-θετικές περιπτώσεις ήταν 1+, δείχνοντας αμυδρά κυτταροπλασματική χρώση. Δεν υπόβαθρο παρατηρήθηκε σε στρωματικά κύτταρα ή εντός φυσιολογικού πνεύμονα. Σε σύγκριση το ανοσοδραστικότητα του ALK1 αντισώματος, D5F3 έδειξαν περισσότερο έντονη χρώση των καρκινικών κυττάρων. Η σχετική ποσότητα χρώσης περιοχής με D5F3 ήταν επίσης πολύ υψηλότερη. Ως εκ τούτου, οι βαθμολογίες ένταση της χρώσης αντισώματος D5F3 ήταν υψηλότερες από αντίσωμα ALK1 (Πίνακας 2). Είναι ενδιαφέρον, D5F3 IHC αποτελέσματα σε 1 περίπτωση δείχνουν ότι μπορεί να συμβεί ετερογενή χρώση. Ένα τετράγωνο ιστός δεν έδειξε καμία χρώση, παρά τις επανειλημμένες δοκιμές IHC, ενώ ένα άλλο μπλοκ έδειξε θετική χρώση. ανάλυση FISH επιβεβαίωσε την παρουσία της γενετικής ανωμαλίας. Θεωρήσαμε το ενδεχόμενο ότι τα διαφορετικά αποτελέσματα οφειλόταν στην ετερογένεια.

Σύγκριση μεταξύ IHC και RT-PCR

Υπήρχαν 26 από 38 περιπτώσεις που ήταν RT-PCR-θετικά ήταν ALK1 IHC θετικών , με τις άλλες 12 περιπτώσεις που είναι IHC αρνητική. Ευαισθησία ALK1 IHC για την ανίχνευση του ALK αναδιάταξης ήταν έτσι 68.4% (26 από 38), σε σύγκριση με RT-PCR. Ωστόσο, 36 από 38 RT-PCR-θετικά περιπτώσεις ήταν D5F3-θετικά (Πίνακας 3). Έτσι, η ευαισθησία του D5F3 ήταν 94.7% (36 από 38), σε σύγκριση με RT-PCR (Πίνακας 3). D5F3-θετικών κρουσμάτων συμπεριλαμβάνονται παραλλαγή 1, 2, 3α /3β, 3β, E17? A20, E17 ins 65? Α20, Ε17Β ins 39? Α20, E10a /β, Ε13? Α20, Ε6α /b ins 18? Α20 και Ε6α? Α19. Δύο D5F3-αρνητικών περιπτώσεων των 38 RT-PCR-θετικών κρουσμάτων ήταν μια παραλλαγή 3α /β και Ε17Β ins 39? Α20 περίπτωση (Πίνακας 2). Πέντε από 123 αρνητικές περιπτώσεις RT-PCR ήταν D5F3 θετικά.

Η

Σύγκριση μεταξύ IHC και FISH

Υπήρχαν 28 από 44 FISH-θετική περιπτώσεις που ήταν ALK1 IHC-θετικά, και 4 ALK1 IHC-θετικών κρουσμάτων που ήταν FISH αρνητικά. Η συνολική ευαισθησία και ειδικότητα της ALK1 IHC σε σύγκριση με FISH ήταν 64% και 91%, αντίστοιχα. Σε αντίθεση, 40, 44 FISH-θετική περιπτώσεις ήταν D5F3 θετικά. Τέσσερις από 44 FISH-θετική περιπτώσεις ήταν D5F3 αρνητικά. Ένα ψάρι αρνητική περίπτωση ήταν D5F3 θετικά. Συνολική ευαισθησία και ειδικότητα της D5F3 σε σύγκριση με FISH ήταν 91% και 98% (Πίνακας 4).

Η

Συζήτηση

Αν και

καρκίνους ALK

-rearranged πνεύμονα κάνει μόνο το 5% έως 7% του συνόλου των NSCLC περιπτώσεις, έχουν επιδείξει εντυπωσιακή ανταπόκριση στον αναστολέα της κινάσης της τυροσίνης ALK, crizotinib, και αντιπροσωπεύουν ένα θεραπευτικά σημαντική υποκατηγορία. Προηγούμενες μελέτες έχουν αξιολογήσει ALK αναδιάταξη καρκίνο του πνεύμονα, αλλά η ολοκληρωμένη ανάλυση των

ALK

-rearranged καρκίνων του πνεύμονα στην κινεζική δεν έχει καλά αξιολογηθεί. Εμείς εντοπίστηκαν 44 περιπτώσεις

ALK

-rearranged περιπτώσεις στις 572 καρκίνους του πνεύμονα. Στη σειρά μας, αυτοί οι όγκοι δεν είχαν μετάλλαξη του

EGFR, KRAS ή BRAF

, σε συμφωνία με τις προηγούμενες παρατηρήσεις [14]. Σε προηγούμενες εκθέσεις, τα αποτελέσματα της λεπτομερούς κλινικοπαθολογική αναλύσεις

ALK

-rearranged καρκίνων του πνεύμονα έχουν μεταβληθεί. Μια ενδελεχής μελέτη των κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά αυτών των ασθενών σε σύγκριση με τις κοινές μεταλλάξεις

EGFR

και

KRAS

ή σπάνια άγνωστες μεταλλάξεις είναι μια αναδυόμενη θέμα με κλινικό ενδιαφέρον. Επιδιώξαμε να συγκρίνετε τα χαρακτηριστικά clincopathologic του

ALK

-rearranged καρκίνο του πνεύμονα με τις κοινές μεταλλάξεις οδηγού και παν-αρνητικούς όγκους

κύρια ευρήματα κλινική μας της μελέτης μας ήταν ως εξής: (1).

ALK

-rearranged καρκίνων του πνεύμονα ήταν πιο συχνές σε νεότερους ασθενείς σε σύγκριση με την ομάδα μετάλλαξη κοινή μονάδα (

σ

= 0,023), σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες [4], [15], ενώ δεν υπήρχε καμία διαφορά σημασίας σε σύγκριση με τους ασθενείς σε παν-αρνητική ομάδα (

σ

= 0,83). (2)

ALK

-rearranged ασθενείς σχετίζεται με κανένα ιστορικό καπνίσματος σε σύγκριση με τον παν-αρνητική ομάδα (

σ

& lt? 0.001), ενώ το κάπνισμα ιστορία του

ALK

– αναδιαταγμένα ασθενείς δεν ήταν διαφορετική από την κοινή ομάδα μετάλλαξη κίνησης (

σ

= 0.828). (3) Δεν υπήρχαν διαφορές στο φύλο, το μέγεθος του όγκου, την κατάσταση των λεμφαδένων, του βαθμού του όγκου ή το στάδιο μεταξύ

ALK

-θετικό, κοινή μετάλλαξη του οδηγού ή παν-αρνητικών ομάδων. Αυτή η διαφορά μπορεί να οφείλεται στο μικρό αριθμό των περιπτώσεων που εξετάστηκαν σε άλλη μελέτη, ή διαφορετικό σχεδιασμό πειράματος ομαδοποίηση, ή διαφορές στην εθνικότητα. Ως εκ τούτου, τα κλινικά χαρακτηριστικά από μόνα τους δεν επαρκούν για την επιλογή των επιμέρους περιπτώσεις για περαιτέρω δοκιμές για

ALK

αναδιάταξη.

Στη μελέτη μας, όλοι οι καρκίνοι του 44

ALK

-rearranged πνεύμονα ήταν αδενοκαρκινώματα, με 2 περιπτώσεις έχουν επιπλέον εστιακό πλακώδες συστατικά. Είναι ενδιαφέρον ότι, σε καμία περίπτωση δεν ήταν το

ALK

αναδιάταξη που υπάρχει στο συστατικό πλακωδών κυττάρων, επιβεβαιώνεται τόσο από FISH και ανοσοϊστοχημείας. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με μια έκθεση όπου

ALK

αναδιάταξη συνυπήρχαν και στις δύο συνιστώσες [15]. Αν και οι περισσότεροι

ALK

-rearranged καρκίνων του πνεύμονα είναι αδενοκαρκινώματα, άλλα ιστολογικών τύπων δεν θα πρέπει να αποκλειστεί η παρουσία της. Στη μελέτη μας,

ALK

-rearranged όγκοι χαρακτηρίζονται από ένα στερεό ή κυψελωτά πρότυπο ανάπτυξης και η έλλειψη lepidic ανάπτυξης. Σε σύγκριση με τα κοινά όγκους μετάλλαξη του οδηγού, στερεά ή κυψελωτά-κυρίαρχο μοτίβο, δομή ηθμοειδή, τα κύτταρα σφραγίδα δακτύλιο, hepatoid εμφάνιση, εξέχουσα εξωκυττάρια βλέννα, και κάθε είδους βλεννογόνους κύτταρα ήταν σημαντικά σχετίζονται με το

ALK

– θετικών όγκων. Αυτό είναι σε συμφωνία με προηγούμενη έκθεση [13]. Όταν σε σύγκριση με παν-αρνητικούς όγκους, μόνο δομή ηθμοειδή, εξέχουσα εξωκυττάρια βλέννα και κάθε είδους βλεννογόνους κύτταρα συσχετίστηκε σημαντικά με τον

ALK

-θετικό αδενοκαρκινώματα πνεύμονα. Ως εκ τούτου, τα δεδομένα μας έδειξαν ηθμοειδή δομή, εξέχουσα εξωκυττάρια βλέννα και κάθε είδους βλεννογόνους κύτταρα μοτίβο είναι ευαίσθητη και /ή ειδικές για την πρόβλεψη

ALK

αναδιάταξη. Στις περισσότερες

Alk-

αναδιατάσσονται οι όγκοι, οι πυρήνες του όγκου ήταν σχετικά μονομορφικοί, εκτός από τις 2 περιπτώσεις δείχνουν εστιακές περιοχές πλειομορφία. Αυτά τα χαρακτηριστικά διακριτά μορφολογικά του

ALK

αναδιάταξη όγκοι είναι σύμφωνα με προηγούμενες εκθέσεις τόσο από δυτικές και ασιατικές ομάδες [15], [16] και μπορεί να είναι χρήσιμη για την επιλογή των υποθέσεων για περαιτέρω ακριβείς μοριακές δοκιμές.

Αν και ρ63 θετικότητα χρησιμοποιείται συχνά ως δείκτης του πλακώδους καρκινώματος στην διαγνωστική παθολογία, βρήκαμε ότι μερικά

ALK

-rearranged όγκων συνεκφράστηκε ρ63 και TTF1 στο συστατικό αδενοκαρκίνωμα. Τα δεδομένα μας είναι πολύ διαφορετική από την προηγούμενη έκθεση, η οποία απέδειξε ότι περισσότερο από το ήμισυ των όγκων τους συν-εκφράζεται TTF-1 και ρ63, δείχνοντας διάχυτη κηλίδωση των δύο [16]. Αν p63 χρησιμοποιήθηκε ως πλακωδών κυττάρων δείκτη να κάνει μια παθολογική διάγνωση,

ALK

-rearranged όγκους θα μπορούσε να διαγνωσθεί λανθασμένα ως αδενοχοληδωτό καρκινώματα

Η ακριβής ταυτοποίηση του

ALK

. – αναδιαταχθέντος όγκων απαιτεί μια ευαίσθητη και ειδική μέθοδο δοκιμής. Επί του παρόντος, υπάρχουν αρκετές τέτοιες μεθόδους, όπως IHC, FISH και RT-PCR. RT-PCR είναι κατάλληλη για την ανίχνευση

EML4-ALK

ή εναλλακτικά μετάγραφα σύντηξης [14], αλλά δεν είναι διαθέσιμο σε πολλά τμήματα ρουτίνα παθολογία. Επιπλέον, η πλειοψηφία των δειγμάτων αποθηκεύονται ως FFPE, στην οποία περίπτωση το RNA μπορεί να υποβαθμιστεί σημαντικά. Επιπλέον, RT-PCR μπορεί να μην ανιχνεύσει όλες τις μετατοπίσεις που περιλαμβάνουν το γονίδιο. FISH, με τη χρήση του ανιχνευτή διάλειμμα-εκτός ALK, ήταν η πρότυπη δοκιμή για την εγγραφή σε μια κλινική δοκιμή με crizotinib [6]. Ωστόσο, FISH θεωρείται χαμηλής απόδοσης, έτσι δεν είναι κατάλληλο για την ανίχνευση

ALK

ανακατατάξεις στον έλεγχο μεγάλης κλίμακας. IHC, όμως, είναι μια χαμηλού κόστους, σχετικά εύκολη τεχνική για τη διαλογή και τη διάγνωση

ALK

-rearranged όγκων σε ρουτίνα χειρουργική πρακτική παθολογία, αν και, ορισμένες αντισώματα ALK έχουν αναφερθεί ότι έχουν έλλειψη εξειδίκευσης και ευαισθησίας [4].

Εμείς αξιολογούνται

EML4-ALK

σύντηξης παραλλαγές χρησιμοποιώντας RT-PCR και διαπίστωσε ότι E13? Α20 (παραλλαγή 1), Ε6α /β? Α20 (παραλλαγή 3α /β), E20? Α20 (παραλλαγή 2) είναι οι πιο κοινές παραλλαγές. Αυτή η συχνότητα κατανομής είναι αρκετά παρόμοια με αυτή που αναφέρθηκε [17]. Στη μελέτη μας, 6 RT-PCR αρνητικά περιπτώσεις ήταν FISH-θετική, γεγονός που υποδηλώνει την παρούσα άλλων άγνωστες παραλλαγές.