Αφηρημένο

Στόχος

είναι

microRNAs (miRNAs) που συμμετέχουν σε διάφορες νεοπλασματικές ασθένειες, συμπεριλαμβανομένου του προστάτη καρκίνο (PCs). Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει το προφίλ miRNA στο PC ιστό, να αξιολογήσει τη σχέση τους με κλινικοπαθολογική δεδομένων, και να αξιολογήσει το δυναμικό των miRNAs ως διαγνωστικοί και προγνωστικοί δείκτες.

Υλικά και Μέθοδοι

από μια κοόρτη 535 ασθενών που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή (RP), ένα δείγμα 30 ασθενών (14 ασθενείς με ταχεία βιοχημικές ανεπάρκεια (BF) και 16 ασθενείς χωρίς BF) με Gleason score 7 αναλύθηκαν. Ένα σύνολο 1435 miRNAs ποσοτικοποιήθηκαν με υβριδισμό μικροσυστοιχιών, και επιλεγμένα miRNAs με την υψηλότερη τυπική απόκλιση (η = 50) επικυρώθηκαν με πραγματικού χρόνου ποσοτική PCR (qRT-PCR).

In situ υβριδισμού

(ISH) χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της έκφρασης του miR-21.

Αποτελέσματα

miR-21 ήταν το μόνο miR που ήταν σημαντικά up-ρυθμίζονται η ομάδα BF (p = 0.045) miR-21 ήταν ρυθμισμένη σε ασθενείς με BF σε σύγκριση με την ομάδα μη-BF (p = 0.05). Στην μονοπαραγοντική ανάλυση, υψηλή έκφραση στρωματικά του miR-21 είχαν προγνωστική επίπτωση στις βιοχημικές αποτυχία επιβίωση χωρίς (BFFs) και κλινική αποτυχία επιβίωση χωρίς (CFFS) (p = 0.006 και ρ = 0,04, αντίστοιχα). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, υψηλή στρωματικά έκφραση του miR-21 έκφραση βρέθηκε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για BFFs σε ασθενείς με Gleason σκορ 6 (HR 2.41, 95% CI 1,06 – 5,49, p = 0,037).

Συμπέρασμα

Υψηλή στρωματικά έκφραση του miR-21 συσχετίστηκε με κακή βιοχημικές επιβίωσης χωρίς υποτροπή μετά την RP. Για τους ασθενείς με Gleason σκορ 6, miR-21 μπορεί να βοηθήσει στην πρόβλεψη του κινδύνου μελλοντικής εξέλιξης της νόσου και έτσι να βοηθήσουν στην επιλογή των ασθενών για τους δυνητικούς επικουρική θεραπεία ή αυστηρότερης παρακολούθησης

Παράθεση:. Melbø-Jørgensen C, Νες Ν, Andersen S, Valkov Α, Dønnem Τ, al-Saad S, et al. (2014) στρωματικά Έκφραση of Mir-21 Προβλέπει Βιοχημική αποτυχία στον καρκίνο του προστάτη ασθενείς με Gleason σκορ 6. PLoS ONE 9 (11): e113039. doi: 10.1371 /journal.pone.0113039

Επιμέλεια: Ichiro Aoki, Yokohama City University School of Medicine, Ιαπωνία

Ελήφθη: 14, Αυγούστου του 2014? Αποδεκτές: 17η Οκτωβρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 17 Νοέμβρη 2014

Copyright: © 2014 Melbø-Jørgensen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από Helse Nord, Η Διοίκηση Βορείου Υγείας (www.helse-nord.no) και το Πανεπιστήμιο του Tromsø Αρκτικής Πανεπιστήμιο της Νορβηγίας (www.uit.no). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PC) είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται στους άνδρες [1]. Το αποτέλεσμα ασθένεια είναι μεταβλητή και δύσκολη να προβλεφθεί. Κατά τη διάρκεια των τελευταίων 30 ετών, ο αριθμός των ρίζα προστατεκτομές (RP) έχει αυξηθεί κατά 25 φορές, κυρίως λόγω ασθενείς υπερδιάγνωση με nonlethal καρκίνο [2]. Δοκιμές για προστατικό ειδικό αντιγόνο (PSA) είναι το πιο κοινό εργαλείο για την ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη. Ωστόσο, πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι οι συγκεντρώσεις του PSA δεν είναι σε θέση να διαφοροποιήσει μεταξύ νωχελικός και απειλητικές για τη ζωή καρκίνους κατά τη στιγμή της διάγνωσης [3]. Ως εκ τούτου, αποτελεί αναγνώριση της καλύτερης προγνωστικοί δείκτες για τη διαστρωμάτωση του κινδύνου θα έχουν σημαντική επίδραση στην κλινική διαχείριση του PC.

miRNAs αποτελούν μια κατηγορία των μικρών μη-κωδικοποίησης μόρια RNA (περίπου 20 νουκλεοτίδια) που εμπλέκονται στη ρύθμιση της έκφρασης της πρωτεΐνης . miRNAs μπορεί να παραχθεί ως ένα υποπροϊόν από την παραγωγή mRNA ως επιβάτες μεταξύ ιντρονίου, ή μπορεί να μεταγραφεί ως ένα μονοκόμματο ή πολυσιστρονικό προϊόν από την RNA πολυμεράση II [4]. Λειτουργούν με σύνδεση προς το 3 ‘UTR του mRNA στόχου, και επάγουν σίγηση του mRNA από το Argonaut (πριν) πρωτεΐνη στο σύμπλοκο πρωτεΐνης Αποσιώπηση RNA επαγόμενη (RISC) [4], [5]. Πολλές miRNAs απορυθμισμένη στον καρκίνο και επιρροή στη διαμόρφωση και την εξέλιξη του όγκου, επειδή βρίσκονται σε περιοχές του γονιδιώματος που συνήθως υπερεκφράζεται ή να διαγραφούν [6]. Αρκετές miRNAs και τους στόχους τους εκφράζονται ανώμαλα σε PC, που οδηγεί στην εξέλιξη του όγκου, εισβολή, και μετάσταση. Οι αλλαγμένες εκφράσεις κάποιων επιλεγμένων miRNAs είναι δυνητικά χρήσιμες ως βιολογικοί δείκτες για τη διάγνωση, την πρόγνωση και σκοπούς ταξινόμησης των PC [7] – [9]. miR-21 ήταν το πρώτο ογκογόνο miRNA να ανακαλύψει [10]. Σε PC, miR-21 θεωρείται ότι ενεργεί ως ένα ογκογονίδιο, αλλά ο ρόλος του δεν είναι σαφής, και οι εκθέσεις είναι αντικρουόμενες. Hulf et al. [11] βρέθηκε miR-21 να δρα ως ογκοκατασταλτικό γονίδιο, ενώ Ribas et al. [12] ανέφεραν ότι η υπερέκφραση του miR-21 προωθείται τόσο την ανάπτυξη του όγκου εξαρτώνται από τις ορμόνες και ορμονικά ανεξάρτητη σε κυτταρικές PC γραμμές. Επιπλέον, συμπέραναν ότι τα αυξημένα επίπεδα του miR-21 αυξάνει την ανάπτυξη όγκου, ανάπτυξη όγκου και επάγεται ευνουχισμός ανθεκτικό φαινότυπο [13]. Σε αντίθεση, Folini et al. [14] δεν βρήκε καμία διαφορά στο miR-21 έκφρασης μεταξύ φυσιολογικού ιστού προστάτη και PC. Shi et al. [15] βρέθηκε miR-21 να συμμετέχουν σε χημειοαντίσταση και ότι miR-21 πάνω ρυθμισμένα σε κύτταρα Docetaxel ανθεκτικά PC3 (PCR3) σε σύγκριση με τα κύτταρα άγριου τύπου PC3.

Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε την miRNA προφίλ σε ασθενείς PC. Μεταξύ 1435 miRNAs, miR-21 ήταν η μόνη υποψήφια miRNA που ήταν σημαντικά up-ρυθμίζονται και υποβλήθηκε σε περαιτέρω αξιολόγηση ως προγνωστικός δείκτης για το σύνολο της ομάδας. Η Περιφερειακή Επιτροπή για την ιατρική και την υγεία Δεοντολογίας (2009/1393), η Επίσημη Προστασίας Δεδομένων για την Έρευνα (NSD), και το Εθνικό Συμβούλιο Ελέγχου Δεδομένων έχουν εγκρίνει τη μελέτη αυτή. Η επιτροπή δεοντολογίας παραιτηθεί από την ανάγκη για συναίνεση. Τα αρχεία των ασθενών ήταν ανώνυμες και αποχαρακτηριστούν πριν από την ανάλυση.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα ιστών

Πρωτοβάθμια καρκινικού ιστού από 535 ριζική προστατεκτομή (RP) ασθενείς διαγνώστηκαν στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Βόρειας Νορβηγίας, Olav Νοσοκομείο Αγίου και Nordland σε νοσοκομεία 1995-2005 χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Επαρκής εμπεδωμένα με παραφίνη μπλοκ ιστού και πλήρη δημογραφικά και κλινικοπαθολογικών δεδομένα ελήφθησαν για όλους τους ασθενείς (Πίνακας 1). Οι όγκοι βαθμολογήθηκαν σύμφωνα με το τροποποιημένο σύστημα ταξινόμησης Gleason [16] και ανέβασε, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της ΠΟΥ [17]. Όλες οι πρωτογενείς ιστοί ιστολογικά επανεξετάζονται από δύο παθολόγους (ER και LTB).

Η

miRNA διαλογής

Για miRNA προφίλ, 30 ασθενείς εντός της Σκορ Gleason (GS) 7 υποομάδας είχαν διαδοχικά επιλεγεί , 14 από αυτούς με ταχεία βιοχημική BF ανεπάρκειας (PSA≥0.4 ng /mL εντός 24 μηνών μετά το χειρουργείο) και 16 ασθενείς χωρίς BF. GS 7 επιλέχθηκε ως αυτοί οι ασθενείς παρουσιάζουν ετερογενείς κλινική έκβαση. Τα miRNAs ταυτοποιήθηκαν με υβριδισμό μικροσυστοιχιών και ποσοτικά με RT-qPCR (Πίνακας 2). Ένα σύνολο 1435 miRNAs ποσοτικοποιήθηκαν με υβριδισμό μικροσυστοιχιών και επιλέγονται miRNAs με την υψηλότερη τυπική απόκλιση (η = 50) έχουν επικυρωθεί από ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR (qRT-PCR). Επτά miRNAs ταυτοποιήθηκαν ως η πιο πάνω ή προς τα κάτω-ρυθμίζονται. Από αυτά, miR-21 ήταν ο μόνος υποψήφιος miR που ήταν σημαντικά up-ρυθμίζεται από πολλαπλή μεταβολή. MiR-21 έκφρασης εξετάστηκε στη συνέχεια σε ολόκληρη την ομάδα από χρωμογόνου

στο

situ υβριδισμού

(CISH) και αξιολογούνται ως προγνωστικός δείκτης για PC. Αμφότερα τα επιθηλιακά κύτταρα του όγκου και σχετίζονται με όγκο περιοχές στρωματικών διερευνήθηκαν ξεχωριστά. Ο μέσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 89 μήνες (εύρος 6-188). Η τελευταία ενημέρωση των ασθενών ήταν Νοεμβρίου 2012.

Η

κατασκευή μικροσυστοιχιών

Ιστός μικροσυστοιχιών (TMA) κατασκευή επιλέχθηκε για υψηλής απόδοσης ανάλυση μοριακής παθολογίας [18]. Για κάθε περίπτωση, ένας παθολόγος (ER) ιστολογικά προσδιορίζονται και επισημαίνονται δύο πυρήνες με περιοχές των καρκινικών κυττάρων (επιθηλιακά κύτταρα όγκου), δύο πυρήνες με στρωματικό όγκο του ιστού, ένας πυρήνας από περιοχές με φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα, και ένας πυρήνας με φυσιολογικό στρωματικό ιστό. Η TMAs συναρμολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα όργανο ιστό-παράταξη (Beecher Instruments, Silver Springs, MD, USA). Εν συντομία, χρησιμοποιήσαμε μια βελόνα διαμέτρου 0,6 mm έως τη συγκομιδή των αξιοσημείωτη περιοχές ιστού από τις αντίστοιχες (FFPE) τμήματα ιστού μονιμοποιηθεί με φορμαλίνη εγκλεισμένα σε παραφίνη. Τα δείγματα εισάγονται σε ένα άδειο τμήμα αποδέκτη παραφίνης σύμφωνα με ένα συντεταγμένων μοτίβο. Για να συμπεριλάβετε όλα τα δείγματα πυρήνα, δώδεκα τεμάχια συστοιχία ιστού κατασκευάστηκαν. Πολλαπλές 4 μm τομές κόπηκαν με μικροτόμο Micron (HM355S), τοποθετείται σε γυάλινες πλάκες, και σφραγίζονται με παραφίνη. Η λεπτομερής μεθοδολογία έχει αναφερθεί προηγουμένως [19].

RNA εκχύλιση

RNA απομονώθηκε από σταθεροποιημένο με φορμαλίνη εμπεδωθεί με παραφίνη δείγματα με RecoverAll Total Nucleic Acid Kit Μόνωση για FFPE ιστούς (Life Technologies) και στάλθηκε σε Exiqon (Vedbaek, Δανία), η οποία πραγματοποιήθηκε το πείραμα ελέγχου miRNA. Ιστού που χρησιμοποιείται για την εκχύλιση RNA ήταν βαθιά τρεις 4 χιλιοστά, 0,6 χιλιοστά διάμετρος κυλινδρικό πυρήνων που συλλέγονται από την ένδειξη διαμερίσματα όγκου από το μπλοκ FFPE. Η μικροσυστοιχία που χρησιμοποιήθηκε ήταν LNA σειρά 6

ου ανθρώπινη γενεά, αρουραίους και ιογενή μικροσυστοιχιών σχεδιαστεί με μια βιβλιοθήκη miRNA με 1435 ανθρώπινη, αρουραίου και ιογενείς miRNA. Ολικό RNA (500 ng) και από τις δύο δείγματος και αναφοράς σημάνθηκε με Hy3 και την ετικέτα φθορισμού hY5, αντίστοιχα, με τη χρήση της miRCURY LNA microRNA Hi-Power Labeling Kit, Hy3 /hY5 (Exiqon, Δανία) ακολουθώντας τη διαδικασία που περιγράφεται από τον κατασκευαστή. Οι Hy3-επισημασμένα δείγματα και hY5-σημασμένο RNA δείγμα αναφοράς αναμείχθηκαν κατά ζεύγη και υβριδίστηκαν με τον miRCURY LNA microRNA Array 6ο Gen (Exiqon, Δανία), η οποία περιέχει ανιχνευτές σύλληψης που στοχεύουν όλα τα microRNAs για τον άνθρωπο, ποντίκι ή αρουραίος καταχωρηθεί στο miRBASE 16.0. Ο υβριδισμός διεξήχθη σύμφωνα με το εγχειρίδιο οδηγιών Array miRCURY LNA microRNA χρησιμοποιώντας ένα σταθμό υβριδοποίησης Tecan HS4800 (Tecan, Αυστρία). Μετά τον υβριδισμό, τα πλακίδια μικροσυστοιχιών σαρώθηκαν και αποθηκεύθηκαν σε ένα ελεύθερο περιβάλλον όζοντος (επίπεδο όζοντος κάτω του 2,0 ppb), προκειμένου να αποφευχθεί το δυναμικό λεύκανση των φθορίζουσες χρωστικές. Οι διαφάνειες Array miRCURY LNA microRNA σαρώθηκαν χρησιμοποιώντας την Agilent G2565BA μικροσυστοιχιών σαρωτή Σύστημα (Agilent Technologies, Inc., USA) και η ανάλυση της εικόνας πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του ImaGene 9 (miRCURY LNA microRNA Array Ανάλυση Λογισμικού, Exiqon, Δανία). Οι ποσοτικοί σήματα διορθώθηκαν φόντο και κανονικοποιούνται χρησιμοποιώντας την παγκόσμια Lowess (τοπικά σταθμισμένη Scatterplot Smoothing) αλγόριθμο παλινδρόμησης.

Η ποσοτικοποίηση των ώριμων miRNAs με πραγματικό χρόνο qPCR

Τα κριτήρια για την επιλογή των miRNAs για την επικύρωση PCR ήταν? σημαντική P-αξίας, υψηλής αλλαγή φορές και πριν από αληθοφάνειας. Τα miRNAs που επιλέγονται για περαιτέρω δοκιμές ήταν miR-21, miR-141, miR-23a, miR-222, miR-205, miR-143 και miR-145 (Πίνακας 2). Όλα τα πειράματα σε πραγματικό χρόνο qPCR διεξήχθησαν με Exiqon (Vedbaek, Denmark).

RNA (2 μΙ) μεταγράφηκε αντίστροφα σε 10 μΙ αντιδράσεων χρησιμοποιώντας την miRCURY LNA καθολική RT microRNA PCR, πολυαδενυλίωσης και κιτ σύνθεσης cDNA (Exiqon ). cDNA αραιώθηκε 100 x και προσδιορίστηκαν σε 10 μΐ PCR αντιδράσεις σύμφωνα με το πρωτόκολλο για miRCURY LNA καθολική RT PCR microRNA? κάθε microRNA αναλύθηκε εις τριπλούν από qPCR στο microRNA custom made πάνελ pick-n-mix. Αρνητικοί έλεγχοι εξαιρουμένων πρότυπο από την αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής διεξήχθη και μορφοποιημένης όπως τα δείγματα. Η ενίσχυση πραγματοποιήθηκε σε ένα LightCycler 480 Real-Time PCR System (Roche) σε 384 φρεατίων. Οι καμπύλες πολλαπλασιασμού αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Roche LC, τόσο για τον προσδιορισμό του σημείου διέλευσης (Cp) με τη μέθοδο 2η παράγωγο, και για ανάλυση καμπύλης τήξης.

Η αποτελεσματικότητα ενίσχυσης υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας αλγόριθμους παρόμοιο με το λογισμικό LinReg . Όλες οι ανιχνεύσεις επιθεωρήθηκαν για ξεχωριστές καμπύλες τήξης και η θερμοκρασία τήξης (Τ

m) ελέγχθηκε για να είναι εντός γνωστές προδιαγραφές για την δοκιμασία. Περαιτέρω δοκιμασίες ανιχνεύθηκε με 5 Cp είναι μικρότερη από τον αρνητικό μάρτυρα, και με Cp & lt? 37 που πρέπει να περιλαμβάνονται στην ανάλυση των δεδομένων. Τα δεδομένα που δεν πέρασε τα κριτήρια αυτά είχαν παραλειφθεί από οποιαδήποτε περαιτέρω ανάλυση.

Χρησιμοποιώντας NormFinder το καλύτερο normalizer βρέθηκε να είναι το miR-23b. Όλα τα δεδομένα ομαλοποιήθηκε σε αυτό το miRNA σε όλα τα δείγματα (miR-23b – Cp δοκιμασίας).

In situ υβριδισμού

Χρωμογόνο

στο

situ υβριδισμού

(CISH) πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το «Μονοήμερη πρωτόκολλο microRNA ISH» που αναπτύχθηκε από Exiqon, Vedbek, Δανία. Ονομάσθηκε κλειδωμένο νουκλεϊκό οξύ (LNA) τροποποιημένο ανιχνευτές από Exiqon για miR-21 (HSA-miR-21miRCURY LNA Prod. No. 38102-15), θετικό έλεγχο (U6 έχει /MMU /RNO) και αρνητικοί μάρτυρες (αγωνίζομαι-miRNA) ήταν μεταχειρισμένος. Μερικές βελτιστοποιήσεις της μεθόδου έγιναν για να πάρετε μια ειδική και ευαίσθητη ανίχνευση των miRNA σε τμήματα μας από FFPE TMAs.

4 μm TMA πλάκες επωάζονται για τρεις ημέρες στους 37 ° C για να επισυνάψετε πυρήνες σε σούπερ Frost Plus διαφάνειες . Οι τομές αποπαραφινώθηκαν σε ξυλόλιο (3 χ 5 λεπτά) και κατόπιν ενυδατώνεται για διαλύματα αιθανόλης σε PBS, ρΗ 7.4. Πρωτεϊνάση K-20 μm /ml, θεραπεία έγινε σε PK-ρυθμιστικό διάλυμα (5 mM Tris-HCL, ρΗ 7.5, 1 mM NaCl, αυτόκλειστο) στους 37 ° C για 20 λεπτά σε ένα hybridizer ThermoBrite. Μετά πλύση με PBS οι τομές επανυδατώθηκαν μέσω αιθανόλη και ξηραίνεται στον αέρα. Οι LNA-ανιχνευτές μετουσιώθηκαν με θέρμανση στους 90 ° C για 4 λεπτά. Ο υβριδισμός των LNA-ανιχνευτές miR-21 (50 ηΜ), ως κωδικοποιημένο miRNA (50 ηΜ) και U6 (1 ηΜ) διεξήχθησαν σε ένα hybridizer ThermoBrite στους 50 ° C για 60 λεπτά. Αυστηρές εκπλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου 5χ SSC ρυθμιστικό διάλυμα, προ-θερμαινόμενο SSC ρυθμιστικά (50 ° C), 5 λεπτά σε 5χ SSC, 2 χ 5 λεπτά σε 1χ SSC, 2 χ 5 λεπτά σε 0,2 SSC, και 5 λεπτά σε RT 0.2 χ SSC. Τομές δεσμεύτηκαν έναντι μη ειδική σύνδεση σε διάλυμα αποκλεισμού από DIG πλύνετε και ρυθμιστικό Block σύνολο (11 585 762 001, Roche, Mannheim, Γερμανία) για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου σε θάλαμο υγρασίας. Αλκαλική φωσφατάση (ΑΡ), συζευγμένης αντι DIG (11 093 274 910, Roche, Mannheim, Germany) 1:800 επωάστηκε για 30 λεπτά σε RT σε ένα θάλαμο υγρασίας για ανοσολογική ανίχνευση. Μετά ΡΒδ-Τ πλύνετε τα υπόστρωμα ενζυματικές αντιδράσεις διεξήχθη με ΝΒΤ /ΒΟΙΡ (11 697 471 001, Roche, Mannheim, Germany) στους 30 ° C στο ThermoBrite για 120 λεπτά. Η αντίδραση διεκόπη με ένα λεπτό πλύση 2 × 5 σε ρυθμιστικό KTBT (50 ηΜ Tris-HCI, 150 ηΜ ΝαΟΙ, 10 nm KCI) που ακολουθείται από πλύση σε διπλά απεσταγμένο νερό. Οι τομές χρωματίστηκαν με μετρητή πυρηνικής fast red (Waldeck, ZE-012-250) σε RT για 1 λεπτό και στη συνέχεια ξεπλύθηκαν με νερό της βρύσης. Η αφυδάτωση επιτεύχθηκε με την αύξηση κλίσεις των λύσεων αιθανόλης και τέλος τοποθέτηση με μέσο Histokitt στερέωσης (Επίκουρος-Histokitt, 1025/250 Sondheim /Rhoen Γερμανία).

Η βαθμολόγηση των CISH

Η ανάλυση εικόνας έγινε χρησιμοποιώντας το ARIOL σύστημα απεικόνισης (Genetix, San Jose, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής) συνθέτοντας ένα μικροσκόπιο (Olympus ΒΧ 61) εφοδιασμένο με αυτόματο στάδιο και φορτωτή διαφάνεια, μαζί με μια φωτογραφική μηχανή. Οι πυρήνες φωτογραφήθηκαν χρησιμοποιώντας 20χ μεγεθύνσεις. Η κυρίαρχη ένταση χρώσης σε επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα και καρκινικά στρωματικά κύτταρα που περιβάλλουν βαθμολογήθηκαν ως? 0 = αρνητική, 1 = ασθενής, 2 = μέτρια και 3 = έντονη. Όλα τα δείγματα ανώνυμα και ανεξάρτητα σκόραρε από δύο παθολόγους (ER και AV). Κατά την εκτίμηση μιας μεταβλητής για ένα δεδομένο πυρήνα, οι παρατηρητές δεν γνώριζαν την βαθμολογία των άλλων μεταβλητών και με το αποτέλεσμα. Η μέση βαθμολογία για κάθε περίπτωση υπολογίστηκε από τις τέσσερις πυρήνες και δύο εξεταστές. Σε περίπτωση διαφωνίας (βαθμολογία διαφορά & gt? 1), οι πλάκες επανεξετάστηκαν και συναίνεση επιτεύχθηκε από τους παρατηρητές

Στατιστικές μέθοδοι

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου IBM. SPSS, έκδοση 21 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) (S1). Σκοράροντας τιμές από κάθε παθολόγος συγκρίθηκαν για την αξιοπιστία μεταξύ των παρατηρητών από τη χρήση μιας αμφίδρομης μοντέλο τυχαίο αποτέλεσμα με απόλυτη ορισμό της συμφωνίας. Μια δοκιμή που υπογράφηκε rank Wilcoxon χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση εάν ήταν μία στατιστικά σημαντική διαφορά στην έκφραση του miR-21 μεταξύ φυσιολογικού ιστού και καρκινικό ιστό. Συγκρίνοντας τις δύο ομάδες δειγμάτων (BF έναντι ομάδα μη-BF) από τα αποτελέσματα qPCR, χρησιμοποιήθηκε t-test δύο όψεων σπουδαστή. Για το σύνολο της κοόρτης, πραγματοποιήθηκαν Pearson chi-square τεστ και τεστ συσχέτισης Spearman για να εξεταστούν οι συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης του miR-21 και κλινικοπαθολογοανατομικές δείκτες. Η μέθοδος Kaplan-Meyer χρησιμοποιήθηκε για να κάνει οικόπεδα των BFFs και CFFS. δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμή για στατιστική σημαντικότητα. Σημαντικές μεταβλητές από τις μονοδιάστατες αναλύσεις αξιολογήθηκε περαιτέρω στην πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης χρησιμοποιώντας ένα προς τα πίσω βηματική μοντέλο παλινδρόμησης Cox με πιθανότητα για σταδιακή κατάργηση εισόδου στα 0,05 και 0,10, αντίστοιχα. Το επίπεδο σημαντικότητας που χρησιμοποιήθηκε ήταν p & lt? 0.05 για όλες τις αναλύσεις. Όλα επιβίωση αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση τριών διαφορετικών τελικών σημείων: (i) βιοχημική βλάβη επιβίωση χωρίς (BFFs), (ii) κλινική αποτυχία επιβίωση χωρίς (CFFS), και (iii) ο θάνατος PC επιβίωση χωρίς (PCDFs). BF χαρακτηρίστηκε ως PSA≥0.4 ng /mL και αυξάνεται σε τουλάχιστον δύο διαφορετικά δείγματα αίματος μετεγχειρητικά. CF ορίστηκε ως επαληθεύεται τοπική συμπτωματική εξέλιξη ή /και επαληθεύεται μετάσταση στα οστά, σπλαχνικά όργανα ή λεμφαδένες στο CT, MR, σπινθηρογράφημα οστών ή υπερηχογράφημα. PCDFC ορίστηκε ως ο θάνατος προκλήθηκε από προοδευτική PC.

Αποτελέσματα

χαρακτηριστικά των ασθενών και κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές

Σύνολο ομάδα.

Μια επισκόπηση της κλάσης ασθενούς δημογραφικά, κλινικά και ιστοπαθολογικά χαρακτηριστικά παρουσιάζεται στον πίνακα 1. η μέση ηλικία κατά την επέμβαση ήταν 62 (εύρος 45-75). Οι προστατεκτομών ήταν οπισθοηβική σε 435 περιπτώσεις και περινέου σε 100 περιπτώσεις. Επιτέλους παρακολούθησης, 170 ασθενείς είχαν βιώσει BF, 36 CF, και 15 ασθενείς είχαν πεθάνει από το PC.

miRNA υποομάδα διαλογής.

Στους 30 ασθενείς με Gleason score 7 ο οποίος υποβλήθηκε σε miRNA διαλογής, διάμεση ηλικία ήταν 65 έτη (εύρος 57-71), διάμεση τιμή του PSA 18,8 ng /mL (εύρος 5-79), μέσο μέγεθος όγκου 22 χιλιοστά (εύρος 3-45), 21% παρουσίασαν CF και 14% ήταν νεκροί του προστάτη Καρκίνος. Στη συνολική ομάδα των ασθενών με Gleason score 7 (n = 270), η μέση ηλικία ήταν 62 (εύρος 47-74), διάμεση τιμή του PSA 18,0 ng /mL (εύρος 0,7 – 71), μέσο μέγεθος όγκου 23 mm, 22% έμπειρος CF και 9% είχαν πεθάνει από καρκίνο του προστάτη. Καμία από αυτές τις διαφορές ήταν στατιστικά σημαντικές.

διαλογή μικροσυστοιχιών και qPCR επικύρωση

600 από 1435 miRNAs διερευνάται από microarrays, είχε έκφραση παραπάνω δύναμη φόντο (σήμα υποβάθρου που ορίζεται ως 1,2 φορές την ένταση του 1 -quartile κάθε διαφάνεια) (Πίνακας 2). Από αυτούς, 50 miRNAs με την υψηλότερη τυπική απόκλιση (SD) αναλύθηκαν περαιτέρω. Από τις αναλύσεις η μικροσειρά, μια ιεραρχική συσταδοποίηση 2D-έδειξαν σχετικό επίπεδο έκφρασης των miRNAs που ήταν πάνω ρυθμισμένα σε αμφότερες τις ομάδες (Σχήμα 1α). Τα επίπεδα έκφρασης της 7ης miRNAs επικυρώθηκαν με RT-qPCR (Πίνακας 3, Σχήμα 1α). Πέντε από τις επτά αναλύονται miRNAs έδειξαν παρόμοια τάση και στις δύο ομάδες. Το διάγραμμα Heat χάρτης δείχνει το αποτέλεσμα της αμφίδρομης ιεραρχική συσταδοποίηση του επιπέδου έκφρασης των πέντε miRNAs. Το z-score είχε περικοπεί -2 έως 2 (Σχήμα 1β). miR-21 ήταν η μόνη miRNA που ήταν σημαντικά πάνω ρυθμισμένα στην ομάδα BF. Αυτό ήταν σε αντιστοιχία με τα αποτελέσματα του πίνακα. Υπήρξε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ του υβριδισμού πίνακα και qRT-PCR.

α) Τα σχετικά επίπεδα έκφρασης των 50 miRNAs που εκφράζονται σε όλα τα 30 αντίστοιχα δείγματα ιστού με Gleason σκοράρει 7. Το Χ-άξονας δείχνει ατόμων και η Υ-άξονας δείχνει miRNAs. Κόκκινα τετράγωνα κωδικοποιούν up-ρυθμίζονται miRNAs και πράσινο πλατείες κωδικοποιούν τα κάτω-ρυθμίζονται miRNAs. β) τα αποτελέσματα θερμότητας Χάρτης της αμφίδρομης ιεραρχική ομαδοποίηση με βάση την qPCR αποτέλεσμα. Τα miRNAs έδειξαν την ίδια τάση με την επικύρωση qPCR και στην ανάλυση μικροσυστοιχιών. Οι κανονικοποιημένες τιμές (DCP) έχουν χρησιμοποιηθεί για την ανάλυση. Κόκκινο χρώμα αντιπροσωπεύει ένα επίπεδο έκφρασης πάνω από τη μέση, το μπλε χρώμα αντιπροσωπεύει την έκφραση χαμηλότερη από τη μέση τιμή.

Η

Η έκφραση του miR-21 και τους συσχετισμούς στο σύνολο της κοόρτης

Σε γενικές γραμμές, miR-21 εκφράστηκε σε υψηλότερο επίπεδο σε περιοχές στρωματικών όγκων σε σχέση με καρκινικά επιθηλιακά κύτταρα (Σχήμα 2). Η ένταση του miR-21 έκφραση ήταν ισχυρότερη σε κυτταρόπλασμα του ιστού του όγκου σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς από τους ασθενείς (ρ & lt? 0.001). Δεν υπήρχε διαφορά στην έκφραση miR-21 μεταξύ των επιθηλιακών κυττάρων του όγκου και φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα. Μια σημαντική υψηλότερη έκφραση του miR-21 βρέθηκε στην περιοχή στρωματικό όγκο από ό, τι σε μη νεοπλασματικά περιοχή στρωματικών (ρ & lt? 0.001). Με τη σύγκριση των επιθηλιακών κυττάρων του όγκου με στρωματικά κύτταρα του όγκου, miR-21 εκφράστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σε στρωματικά κύτταρα του όγκου (p & lt? 0.001).

Η

Δεν υπήρχαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των υψηλών στρωματικών όγκων έκφραση του miR-21 και ρΤ-στάδιο (

r

= 0,134, p = 0,003), περινευρικό διείσδυση (PNI) (

r

= 0,175, p & lt? 0.001) και η αγγειακή διήθηση (

r

= 0,222 p & lt? 0.001). Βρήκαμε ένα αδύναμο συσχετισμό μεταξύ στρωματικών έκφραση mir-21 και το σκορ Gleason (

r

= 0.218, p & lt? 0.001). Υπήρχαν επίσης σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των στρωματικών έκφραση του miR-21 και Gleason Score (GS)? GS & lt? 7, GS 7 και GS & gt? 7 (r = 0,238, p & lt? 0.001).

Δεν υπήρχαν διαφορές στα στρωματικά έκφραση του miR-21 μεταξύ των υποομάδων της βαθμολογίας Gleason, 3 + 4 (n = 220, 41%) και 4 + 3 (n = 80, 15%) (r = – 0,001, p = 0,991)

μονοπαραγοντική ανάλυση

Η κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές pT-στάδιο (. p & lt? 0.001), η προεγχειρητική τιμή PSA διχοτομήθηκε σε 10 ng /dL (n = 221, p & lt? 0.001), το σκορ Gleason (p & lt? 0.001), το μέγεθος του όγκου διχοτομήθηκε σε 20 mm (n = 285, p & lt? 0.001), περινευρικό διείσδυση (PNI) (όχι = 134, σ & lt? 0.001), θετικός χειρουργικά όρια (PSM) (n = 286, p = 0,041), τα θετικά χειρουργική περιφερειακή περιθώριο (n = 154, σ & lt? 0.001), θετικός χειρουργική ακραίο περιθώριο (n = 210, ρ = 0,04), και η αγγειακή διήθηση (n = 43, ρ & lt? 0.001) ήταν όλοι συσχετίζονται σημαντικά BFFs στην μονοπαραγοντική επιβίωση αναλύσεις (Πίνακας 1)

Ο 4

ου χρησιμοποιήθηκε τεταρτημόριο. ως cut-off. Μια υψηλή έκφραση του miR-21 σε περιοχές στρωματικών όγκων συσχετίστηκε σημαντικά με BF (n = 170, p = 0,006, σχήμα 3α), και CF (n = 36, p = 0,041, όχι αριθμός που εμφανίζεται.) Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ υψηλή έκφραση στρωματικά του miR-21 και ΣΑΠ (n = 14, p = 0,505).

β) Οι ασθενείς με Gleason σκορ 6.

Η

Σε αναλύσεις υποομάδων βρήκαμε υψηλή έκφραση στρωματικά του miR-21 να σχετίζεται σημαντικά με αυξημένο κίνδυνο για BF σε ασθενείς με GS 6 (n = 167, ρ = 0.023, Εικόνα S3b), αλλά αυτό δεν βρέθηκαν σε ασθενείς με GS 7 (n = 262, p = 0,228) , Gleason βαθμού 3 + 4 (n = 189, p = 0,0290, Gleason βαθμού 4 + 3 (n = 73, p = 0,818), και GS & gt?. 7 (η = 36, ρ = 0,895) Βρήκαμε επίσης υψηλά στρωματικά έκφραση συσχετίζεται με BF για τους ασθενείς με θετικά περιφερειακή περιθώρια (n = 139, p = 0,026), αλλά όχι για εκείνους με δωρεάν περιμετρικό περιθώριο (n = 339, p = 0,107).

πολυπαραγοντική ανάλυση

Σημαντικές κλινικοπαθολογοανατομικών και μοριακών δεικτών από την μονοπαραγοντική ανάλυση εισήχθησαν στο μοντέλο πολλών μεταβλητών. Ο Πίνακας 4 παρουσιάζει τους ανεξάρτητους προγνωστικούς παράγοντες για BF? pT-στάδιο (p = 0,001), Gleason Βαθμός (p = 0.021), μη-κορυφής PSM (n = 286, p = 0,001), ακραίο PSM (n = 210, p = 0,003). Για CF? Gleason Βαθμός (p = 0,013), ΡΝ (n = 134, p = 0,028), μη ακραίο PSM (p = 0,028).

Η

Υψηλή στρωματικά έκφραση του miR-21 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για BF σε ασθενείς με Gleason σκορ 6 (n = 167, HR 2,40, 95% CI 1,06 – 5,49, p = 0,037). Μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ υψηλής στρωματικά έκφραση του miR-21 και BF βρέθηκε επίσης στην υποομάδα των ασθενών με PSM (HR 1.95, 95% CI 1,95 – 3,21, p = 0,008). Ωστόσο, για το σύνολο της κοόρτης (n = 471), υπήρχε μόνο μια τάση προς μια ανεξάρτητη συσχέτιση μεταξύ στρωματικών έκφραση του miR-21 και BF (η = 170, p = 0,089). Υψηλή στρωματική έκφραση του miR-21 δεν ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό μεταβλητή για CF (n = 36, p = 0,395).

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε μια υψηλότερη έκφραση του ΜΙΚ 21 σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με το φυσιολογικό προστατικό ιστό. Η έκφραση ήταν υψηλότερη σε περιοχές στρωματικών όγκων. Υψηλή στρωματικών όγκων έκφραση του miR-21 ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για βιοχημικές ανεπάρκεια σε ασθενείς με Gleason βαθμό 6 αλλά όχι κλινική αποτυχία, πιθανώς λόγω λίγες γεγονότα στην τελευταία ομάδα. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη που ανέφερε στρωματική έκφραση του όγκου του miR-21 ως προγνωστικός δείκτης για BF μετά από ριζική προστατεκτομή. Επιπλέον, βρήκαμε επίσης υψηλή έκφραση στρωματικά να είναι ένας ανεξάρτητος δείκτης για PSM σε δείγματα RP.

Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι τα miRNAs μεταβάλλονται σημαντικά σε καρκίνο του προστάτη, γεγονός που υποδηλώνει ότι miRNAs δρουν ως ρυθμιστές κλειδιά της καρκινογένεσης του προστάτη. Αρκετές μελέτες έχουν διεξαχθεί για τον προσδιορισμό του υπολογιστή ειδικά miRNA υπογραφή, αλλά n συναίνεση έχει επιτευχθεί σε σχέση με miRNAs ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη των PC [20], [21]. Σε μια μελέτη από Violinia et al. [22], το συνολικό RNA εκχυλίστηκε από 363 στερεών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη, και 177 φυσιολογικούς ιστούς. Βρήκαν μια γενική ρύθμιση προς τα πάνω από 39 miRNAs, συμπεριλαμβανομένων των miR-21, ενώ 6 miRNAs ήταν κάτω-ρυθμίζονται. Τα αποτελέσματα αυτά ήταν σε μερική συμφωνία με μια μελέτη από Ambs et al. στους οποίους το συνολικό RNA που εκχυλίζεται από 60 μικρο-ανατομή PC και 16 περιβάλλοντες ιστούς μη-όγκου αναλύθηκαν [23]. MiR-21 θεωρείται γενικά ένα ογκογονίδιο, αλλά μέχρι στιγμής ο ρόλος του στην PC είναι ασαφής και οι εκθέσεις έχουν αντικρουόμενα [11], [12], [14], [20]. miR-21 έχει βρεθεί να είναι αυξημένα σε PC3 και DU145 κυτταρικές σειρές ανεξάρτητος από ανδρογόνο [24]. Επιπλέον, miR-21 ταυτοποιήθηκε ως υποδοχέα ανδρογόνων ρυθμιζόμενων miRNA των οποίων το επίπεδο ήταν αυξημένη σε σύγκριση με το PC παρακείμενο φυσιολογικό ιστό [12]. Αναστολές miR-21 μειώνει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων PC προκαλούνται από τα ανδρογόνα, ενώ αυξημένη έκφραση του miR-21 προάγει ενισχυμένη ανάπτυξη του όγκου και την αντίσταση ευνουχισμός

σε

vivo

[12]. Άλλοι έχουν επίσης βρεθεί miR-21 πάνω ρυθμισμένα σε ασθενείς με ορμόνες και χημειοθεραπεία PC [13], [15].

Βρήκαμε ότι μια στρωματική έκφραση υψηλού όγκου του miR-21 σε όγκους με Gleason σκοράρει 6 προέβλεψε BF. Αυτό είναι σύμφωνο με προηγούμενες αναφορές [25]. miR-21 ανάλυση της έκφρασης στρωματικών μπορεί να είναι ένα δυναμικό εργαλείο για να προβλέψουμε ποια άκρως διαφοροποιημένη όγκους που είναι πιο πιθανό να προχωρήσουν. Πρόσφατες μελέτες έχουν παράσχει πολύτιμες πληροφορίες για τη διευκρίνιση της involment του miR-21 στο μικροπεριβάλλον του όγκου: Bullock et al. [26] έδειξαν ότι η έκφραση ρυθμίζεται αυξητικά miR-21 εμφανίζεται σε καρκινο-συναφές στρωματικά κύτταρα αλλά όχι σε Colo-ορθού καρκινικά κύτταρα. Επιπλέον, βρήκαν ότι η έκτοπη miR-21 έκφραση σε ινοβλάστες διαμορφωμένου την κυτταροτοξική επίδραση του οξαλιπλατίνη (chemotherapheutic χρησιμοποιείται στη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου), η οποία είχε ως αποτέλεσμα την εξέλιξη του καρκίνου. Bronisz et al. [27] έδειξε ότι προς τα κάτω ρύθμιση του mir-320 σε μαστικούς στρωματικά ινοβλάστες επαναπρογραμματίζει το μικροπεριβάλλον του όγκου με την ενεργοποίηση ενός προ-ογκογόνο secretome, και έχει ενδιαφέρον, Yao et al. [28] ανέφεραν ότι μυοϊνοβλάστη transdifferentiation από προγονικά ινοβλάστες σε απάντηση του ΤΟΡ-β θα μπορούσε να προληφθεί με τη χρήση ειδικών αναστολέων αντινόημα του miR-21. Μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν προ-μεταστατικό επιρροή των mRNAs στη διαφοροποίηση των ινοβλαστών και φαινότυπο, και ότι miR-21 μπορεί να προκαλείται μέσω της μικροπεριβάλλον του όγκου. Ωστόσο, βιολογικές και λειτουργικές στοιχεία που να υποστηρίζουν αυτά τα ευρήματα, ειδικά καρκινώματα του προστάτη, είναι περιορισμένη.

Είναι γνωστό ότι λιγότερο από το 3% των ασθενών με Gleason score≤6 θα προχωρήσουν ποτέ επεξεργασμένο ή όχι, και ότι ένα σημαντικό ποσοστό αυτών των ασθενών συνεχίζουν να υποβάλλονται περιττές θεραπεία μετά τη διάγνωση του χαμηλού κινδύνου PC (με βάση ένα PSA & lt? 10 ng /mL και το στάδιο ≤ Τ2α) [29], [30]. miR-21 ανάλυση της έκφρασης στρωματικών μπορεί να είναι ένα δυναμικό εργαλείο για να προβλέψουμε ποια άκρως διαφοροποιημένη όγκους που είναι πιο πιθανό να προχωρήσουν. Περαιτέρω μελέτες για να διευκρινιστεί ο ακριβής ρόλος του miR-21 σε αυτές τις εξαιρετικά διαφοροποιημένες όγκοι χρειάζονται. Σε αντίθεση με προηγούμενες εκθέσεις, βρήκαμε υψηλή έκφραση του miR-21 σε ασθενείς με θετικά χειρουργικά όρια, [25]. Οι μοριακοί μηχανισμοί για αυτό είναι άγνωστο.

Τα αποκλίνοντα αποτελέσματα του miR-21 σε διάφορες μελέτες που μπορεί να αντανακλά την ετερογένεια του υπολογιστή, καθώς και διαφορετικό σχεδιασμό και τη μεθοδολογία της μελέτης. Μια προβολή miRNA ολόκληρης ομάδα θα ενίσχυε τη μελέτη μας. Εκτός αυτού, η ποιότητα των ιστών που εξετάστηκαν (συμπεριλαμβανομένου του χειρισμού) μπορεί να επηρεάσει δραστικά την ερμηνεία των δεδομένων μικροσυστοιχίας. Εκτός από τα ενδιαφέροντα στοιχεία για BF, η μελέτη μας είναι κάπως περιορισμένη από τον χαμηλό αριθμό των περιπτώσεων με την κλινική υποτροπή ή ΣΑΠ. Περαιτέρω μελέτες αυτού του microRNA και των συναφών οδών της μπορεί να αποκαλύψει νέους μηχανισμούς για την εξέλιξη του καρκίνου και θεραπευτική παρέμβαση.

Συμπέρασμα

Αυτή η μελέτη για miRNA προφίλ και την επικύρωση του καρκίνου του προστάτη, προσθέτει περαιτέρω ενδείξεις για το miR-21 ως προγνωστικός δείκτης για PC. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η στρωματική έκφραση του miR-21 έχει ένα σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη της νόσου, αλλά ο υποκείμενος μηχανισμός χρειάζεται περαιτέρω διερεύνηση.

Υποστήριξη Πληροφορίες

αρχείου S1.

doi: 10.1371 /journal.pone.0113039.s001

(Τ.Κ.)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε οι συμμετέχουσες τεχνικούς εργαστηρίων στο Τμήμα Παθολογίας, UNN για την υποστήριξή τους και την τεχνικές δεξιότητες. Ιδιαίτερα θέλουμε να ευχαριστήσουμε Magnus Persson, Μόνα Pedersen και Μάριτ Νίνα Nilsen, Christopher Fenton, Øystein Størkersen και Anders Angelsen.