Αφηρημένο

Ιστορικό

Ο καρκίνος των ωοθηκών παραμένει μια κύρια αιτία θανάτου στις γυναίκες και την ανάπτυξη νέων θεραπειών είναι απαραίτητη. Δεύτερον προέρχονται μιτοχόνδρια ενεργοποιητής της κασπάσης (SMAC) έχει περιγραφεί να ευαισθητοποιήσει για απόπτωση. Έχουμε εξερευνήσει την προ-αποπτωτική δραστηριότητα LBW242, ένα μιμητικό του SMAC /DIABLO, στις κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών (Α2780 κυττάρων και στη χημειοθεραπεία του παραγώγου Α2780 /ADR, SKOV3 και ΗΕΥ κύτταρα) και σε πρωτογενείς καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Τα αποτελέσματα της LBW242 σε κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών και πρωτογενή καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών προσδιορίστηκε από τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την απόπτωση και βιοχημικές αναλύσεις.

Κύρια Ευρήματα

LBW242 προστεθεί μόνη της προκάλεσε μόνο μια μέτρια προ-αποπτωτικό αποτέλεσμα ? Ωστόσο, συνεργεί ισχυρά με νέκρωσης όγκου απόπτωση παράγοντα που σχετίζονται με την επαγωγή συνδέτη (TRAIL) ή αντικαρκινικών φαρμάκων στην επαγωγή της απόπτωσης και των δύο κυτταρικών σειρών καρκίνου των ωοθηκών και πρωτογενή καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Μηχανιστικές μελέτες δείχνουν ότι LBW242 επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών συνδέεται με την ενεργοποίηση της κασπάσης-8. Σύμφωνα με αυτό το μηχανισμό, γ-FLIP υπερέκφραση αναστέλλει LBW242-απόπτωση.

Συμπέρασμα

LBW242 ευαισθητοποιεί ωοθηκών καρκινικά κύτταρα με τις αντικαρκινικές επιδράσεις του TRAIL και αντικαρκινικά φάρμακα που χρησιμοποιούνται συνήθως στην κλινική. Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι η SMAC /DIABLO μιμούνται LBW242 θα μπορούσε να έχει αξία για την ανάπτυξη των πειραματικών στρατηγικών για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών

Παράθεση:. Petrucci E, Pasquini L, Bernabei Μ, Saulle Ε, Biffoni Μ, Accarpio F, et al. (2012) Ένα μικρό μόριο SMAC Μιμούνται LBW242 ενισχύει ρυμουλκουμένων και Anticancer Drug-μεσολαβητική κυτταρική θάνατο των κυττάρων του καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 7 (4): e35073. doi: 10.1371 /journal.pone.0035073

Επιμέλεια: Irina V. Λεμπέντεβα, Enzo Life Sciences, Inc., Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 5 Ιούλη 2011? Αποδεκτές: 9 Μαρτίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 25 Απριλίου 2012 |

Copyright: © 2012 Petrucci et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τις επιχορηγήσεις από το ιταλικό υπουργείο Υγείας, Progetto Oncotecnologico σε UT. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος είναι πολύ σύνθετη πολλών σταδίων διαταραχή που περιλαμβάνει την προοδευτική συσσώρευση γενετικών και επιγενετικών ανωμαλιών, οι οποίες τελικά οδηγούν στη μετατροπή των φυσιολογικών κυττάρων σε κακοήθη κύτταρα που εμφανίζουν τις ουσιαστικές ιδιότητες του καρκίνου: αντίσταση στη αποπτωτικών μηχανισμών, ανεξαρτησία από σήματα ανάπτυξης , αναισθησία με αρνητικά σήματα της ανάπτυξης, της εισβολής και μεταστατική ικανότητα, απεριόριστο δυναμικό αντιγραφής και υπέστησαν αγγειογένεση [1]. Μεταξύ αυτών των διαφόρων ιδιοτήτων των καρκινικών κυττάρων, η αντίσταση στην απόπτωση παίζει σίγουρα έναν πολύ σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου. Η ικανότητα των καρκινικών κυττάρων να διαφεύγουν απόπτωση σχετίζεται με διάφορες βιοχημικές ιδιότητες αυτών των κυττάρων, και συγκεκριμένα, με την αυξητική ρύθμιση του αντιαποπτωτικών γονιδίων όπως ορισμένα μέλη της οικογένειας Bcl-2 πρωτεϊνών και των μελών του αναστολέα της απόπτωσης (ΙΑΡ ) οικογένεια πρωτεϊνών [2]. Ιδιαίτερα, τρεις γραμμές αποδείξεων υποστηρίζουν ένα ρόλο για τις πρωτεΐνες ΙΑΡ στον καρκίνο: (i) Τα αυξημένα επίπεδα έκφρασης του ΙΑΡ πρωτεϊνών, ιδιαίτερα ΧΙΑΡ, c-ΙΑΡ 1 και c-IAP2, σε έναν αριθμό ανθρώπινων καρκινικών τύπων συσχετίζονται με το βαθμό του όγκου και πρόγνωση [ ,,,0],3]? (Ii) έναν αριθμό

in vitro

και

in vivo

μελέτες έχουν δείξει ότι η ρύθμιση προς τα κάτω του ΧΙΑΡ ή c-ΙΑΡ 1 από διάφορους παράγοντες έχει ως αποτέλεσμα την ευαισθητοποίηση των καρκινικών κυττάρων να χημειοθεραπεία και γάμμα irradiation- επαγόμενη απόπτωση [4]? (Iii) η χρωμοσωμική περιοχή 11q21-q23 περιέχουν c-ΙΑΡ 1 και c-IAP2 γονίδια υπόκειται σε χρωμοσωμική ενίσχυση σε διάφορους όγκους [3], [4].

ΙΑΡ, και ιδιαίτερα ο-IAP1, C- IAP2 και Χ-συνδεδεμένη ΙΑΡ (ΧΙΑΡ), λειτουργούν για να αναστέλλουν την απόπτωση, εμποδίζοντας την ενεργοποίηση των κασπασών-8 ή αναστέλλουν την ενεργότητα των κασπασών-9, -3 και -7, αντίστοιχα [5], [6]. C-IAP1 και c-IAP2 διαθέτουν μία Ε3 περιοχή ουβικιτίνης λιγάση που προωθεί πρωτεασώματος εξαρτώμενη από αποικοδόμηση του c-ΙΑΡ 1 και c-IAP2 [7]. Η δραστικότητα του ΙΑΡ ανταγωνίζεται από SMAC /DIABLO (δεύτερη-μιτοχονδρίων που προέρχεται ενεργοποιητής κασπασών /άμεσος αναστολέας της πρωτεΐνης απόπτωσης πρόσδεσης με χαμηλό ρΐ) ότι, μετά την απελευθέρωση από τα μιτοχόνδρια σε απόκριση σε αποπτωτικό ενεργοποίηση, υποβάλλεται σε ωρίμανση και η αποκοπή Ν του τερματική περιοχή, με επακόλουθη έκθεση της αλληλουχίας AVPI [8]. Αυτό tetrapepetide δεσμεύει ΧΙΑΡ και ανταγωνίζεται με τις ίδιες θέσεις σύνδεσης που εμπλέκονται στην αλληλεπίδραση με κασπάσες [9]. Μέσω αυτού του μηχανισμού, SMAC /DIABLO αποτρέπει την παγίδευση των κασπασών με ΙΑΡ, διευκολύνοντας έτσι το αποπτωτικό μονοπάτι. Δεδομένου ότι η αλληλουχία AVPI είναι σε θέση να προωθήσει την απόπτωση, οι ενώσεις μπορούν να μιμούνται αυτήν την τετραπεπτίδιο, συλλογικά γνωστά ως SMAC-μιμητικά, αντιπροσώπευαν το στόχο εντατικές ερευνητικές προσπάθειες και αρκετά από αυτά τα μέσα έχουν αναπτυχθεί κατά τη διάρκεια αυτών των τελευταίων χρόνων [10] – [15 ].

είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η απορρύθμιση των ΙΑΡ μπορεί να συμβάλει στην ανάπτυξη των όγκων, όχι μόνο μέσω των κασπασών αδρανοποίηση, αλλά και μέσω διαφορετικών μηχανισμών που δεν εξαρτώνται από κασπάσες αδρανοποίηση. Έτσι, μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ξεκάθαρα ότι: ΧΙΑΡ συμβάλλει στην μετάσταση

in vivo

και κυτταρική εισβολή

in vitro

, ανεξάρτητα από κασπάσες δεσμευτικό και αναστολή? ΧΙΑΡ σε σύμπλοκο με survivin οδηγεί την ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ για την προώθηση της κυτταρικής εισβολής και της μετάστασης? c-ΙΑΡ 1 και C-ΙΑΡ2 εμπλέκονται επίσης σε καρκινικές κυτταρικές εισβολή [16].

Έτσι, η απενεργοποίηση του ΙΑΡ, ιδιαίτερα όταν συνδυάζεται με άλλες θεραπείες (όπως χημειοθεραπευτικών φαρμάκων, συνδετήρες θάνατος συμπεριλαμβανομένων TNF-άλφα και TRAIL ), έχει ως αποτέλεσμα τον θάνατο των περισσοτέρων κυττάρων του όγκου, τουλάχιστον υπό συνθήκες καλλιέργειας ιστού [11], [13], [16], [17]. Σημαντικά, αδρανοποίηση του ΙΑΡ δεν φαίνεται να είναι επιζήμια για τα φυσιολογικά κύτταρα. Το σύνολο αυτών των παρατηρήσεων έχει υποστηρίξει την ανάπτυξη των μικρών φαρμακολογικών αναστολέων του ΙΑΡ που έχουν εισαχθεί σε κλινικές δοκιμές φάσης Ι [5].

LBW242 είναι ένα πεπτιδομιμητικό στόχευση ΙΑΡ αναφερθεί πρόσφατα από Zawel και συνεργάτες που ανταγωνίζεται με υψηλή συγγένεια με SMAC /DIABLO για χωρητικότητα του θύλακα σύνδεσης ΧΙΑΡ BIR3 [17]. Αυτή η ένωση δείχθηκε να είναι σε θέση να επάγει απόπτωση των διαφόρων τύπων κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων πολλαπλό μυέλωμα, οξεία μυελοειδή λευχαιμία, γλοιοβλάστωμα και μελάνωμα [18] – [21].

Στην παρούσα μελέτη έχουμε διερευνήσει την ικανότητα των LBW242 να επάγει αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών προστεθεί μόνη της ή σε συνδυασμό είτε με TRAIL ή αντικαρκινικά φάρμακα. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι LBW242 βελτιώνει την ευαισθησία του θανάτου των ωοθηκών καρκίνο κυττάρων που προκαλείται είτε από TRAIL ή αντικαρκινικά φάρμακα όπως είναι η τοποτεκάνη μέσω ενός αποτελέσματος που σχετίζονται με μια ενίσχυση της κασπάσης-8 ενεργοποίησης. Αυτές οι παρατηρήσεις υποστηρίζουν μελλοντικές μελέτες για να διερευνήσει ένα πιθανό ρόλο των LBW242 στη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών.

1 Α- A2780WT, A2780ADR, hey και τα κύτταρα SKOV3 έχουν καλλιεργηθεί για 48 ώρες, είτε με την απουσία ή παρουσία του TRAIL (50 ng /ml) και είτε με την απουσία ή παρουσία αυξανόμενης συγκέντρωσης του LBW242 (από 1 έως 10 μΜ) και στο τέλος της καλλιέργειας προσδιορίστηκε ο αριθμός των ζωντανών κυττάρων. Η διαφορά μεταξύ ελέγχου και TRAIL ήταν στατιστικά σημαντική: p = LBW242 εξασκεί μια συνεργιστική ή αθροιστική δράση κατά των όγκων με TRAIL σε κυτταρικές σειρές καρκίνου ωοθήκης.

Τα πειράματα που πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση αντι-αγωνιστική TRAIL-R1 (MAPATUMUMAB) ή αντι-TRAIL-R2 (LEXATUMUMAB) mAbs στοιχεία που αποδεικνύουν ότι η τελευταία προστίθεται μαζί με LBW242 προκάλεσε υψηλό ποσοστό απόπτωσης και των τεσσάρων κυτταρικών γραμμών καρκίνου ωοθηκών εδώ μελετηθεί (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

c-FLIP

L υπερέκφραση αναστέλλει την προ-αποπτωτική δράση της LBW242

σε προηγούμενες μελέτες αποδείχθηκε ότι υπό ΤΝΡα διέγερση, κασπάσης-8 είναι ένα κρίσιμο αποπτωτικό πρωτεάσης σε ΙΑΡ ανταγωνιστής κυτταρικό θάνατο που επάγεται [27] – [30]. Να διερευνήσει ένα πιθανό ρόλο της κασπάσης-8 ενεργοποίηση σε LBW242 μεσολάβηση κυτταρικό θάνατο, χρησιμοποιήσαμε κυτταρικές σειρές σταθερά επιμολυσμένων με c-FLIP

L (A2780WT FLIP, A2780ADR FLIP και SKOV3 FLIP), ένα φυσικό αναστολέα της κασπάσης-8. A2780WT, A2780ADR και SKOV3 κύτταρα εκφράζουν χαμηλά επίπεδα του c-flip, c-FLIP

L είναι το μόνο ισομορφή ανιχνεύσιμη σε αυτά τα κύτταρα (Εικ. 2 και το Σχ. S2). Σε αντίθεση, όπως είναι αναμενόμενο, A2780WT FLIP, A2780ADR FLIP και SKOV3 FLIP εκφράζουν υψηλά επίπεδα του c-FLIP

L (Εικ. 2 και Εικ. S2). C-FLIP

S ήταν μη ανιχνεύσιμη σε όλες αυτές τις κυτταρικές σειρές (Εικ. S2).

Αξίζει να σημειωθεί ότι, σε A2780WT, ADR και SKOV3 κύτταρα (Εικ. 2,

αριστερό πάνελ

s

) επιμολυσμένα με άδειο φορέα (ΡΙΝΟΟ), η ενιαία θεραπεία με LBW242 ή TRAIL επάγει μια μέτρια αποπτωτική δράση, ενώ η συνδυασμένη θεραπεία LBW242 με TRAIL επάγει μια αξιοσημείωτη αύξηση σε κυτταρικό θάνατο. Σε αυτά τα κύτταρα που υπερεκφράζουν γ-FLIP

L (Εικ. 2,

δεξί πάνελ

s

) η επίδραση της θεραπείας LBW242 μόνη της ή σε συνδυασμό με TRAIL είναι πολύ αναστέλλεται, στηρίζοντας έτσι το υπόθεση ότι SMAC /DIABLO μιμητικό μπορεί να δρουν μέσω επαγωγής μίας οδού ενεργοποίηση της κασπάσης-8

Για το σκοπό αυτό τα κύτταρα υποβλήθηκαν επίσης σε αγωγή με έναν αναστολέα παν-κασπάσης zVAD, ή με έναν ειδικό αναστολέα κασπάσης-8, zIETD.? στο Σχ. 3 το ποσοστό του κυτταρικού θανάτου δεν αναφέρθηκε. Όπως αναμένεται zVAD προστατεύει τα κύτταρα από την αποπτωτικό αποτέλεσμα δύο μονά και συνδυασμός θεραπειών, υποδεικνύοντας έτσι τη συμμετοχή ενεργοποίηση της κασπάσης σε χαμηλό βάρος γέννησης 242 + TRAIL-μεσολαβούμενη κυτταρικού θανάτου. Επιπλέον, είναι δυνατόν να σημειωθεί ότι η επίδραση της zIETD είναι συγκρίσιμη με εκείνη του zVAD, υποδεικνύοντας έτσι ένα ρόλο κλειδί της κασπάσης-8 ενεργοποίησης υπό τη συνδυασμένη δράση των LBW242 και θεραπείες TRAIL (Εικ. 3,

αριστερό πάνελ

s

).

LBW242 προστίθεται μαζί με επαγόμενη TRAIL κασπάσης-8

ενεργοποίηση

Βιοχημικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν από τη διερεύνηση της έκφρασης των διαφορετικών πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην αποπτωτική παθολογική οδό σε A2780WT ΡΙΝΟΟ, A2780ADR ΡΙΝΟΟ, SKOV3 ΡΙΝΟΟ και A2780WT flip, A2780ADR FLIP και flip κυτταρικές σειρές SKOV αντιμετωπίζονται ως παραπάνω. Στο Σχ. 4 Α, Β και C μετά από 24 ώρες θεραπείας, είναι δυνατόν να σημειωθεί ότι τα επίπεδα ΧΙΑΡ δεν επηρεάζονται από LBW242. Το εύρημα αυτό είναι σύμφωνο με προηγούμενες μελέτες που δείχνουν ότι LBW242 αναστέλλει τη δράση ΧΙΑΡ, χωρίς να επηρεάζει την έκφραση του [17] – [21]. Όπως ήταν αναμενόμενο με βάση προηγούμενες εκθέσεις [17] – [21], LBW242 downmodulates δραματικά επίπεδα c-IAP1, ένα φαινόμενο που φαίνεται καθαρά σε όλες τις κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που υπερεκφράζουν γ-FLIP

L. Θεραπεία του καρκίνου κυτταρικών γραμμών ωοθήκης με LBW242 επαγόμενη επίδραση στην c-IAP2 έκφραση πολύ διαφορετική από αυτή που παρατηρήθηκε για το C-ΙΑΡ 1. Στην πραγματικότητα, 24 ώρες έκθεση των κυττάρων να LBW242 προκάλεσε μια σαφή upmodulation των επιπέδων c-IAP2 (Εικ. 4), σύμφωνα με μια προηγούμενη αναφορά [31]. Όπως είναι αναμενόμενο, c-FLIP

L υπερέκφραση δεν τροποποίησε την επίδραση της LBW242 στα επίπεδα c-IAP2 (Εικ. 4). Από την άλλη πλευρά, το TRAIL επήγαγε μια μέτρια αύξηση της c-IAP2, ένα εύρημα σύμφωνο με προηγούμενες μελέτες [32]. Αξιοσημείωτα, c-FLIP υπερέκφραση εμπόδισε την διεγερτική δράση του TRAIL στα επίπεδα c-IAP2 (Εικ. 4). Η συνδυασμένη θεραπεία με LBW242 και TRAIL είχε ως αποτέλεσμα σημαντική upmodulation των επιπέδων c-IAP2 (Εικ. 4). Επιπλέον, LBW242 απέτυχε να επάγει είτε κασπάσης-8, κασπάσης-9 ή κασπάσης-3 ενεργοποίησης, όπως μπορεί να συναχθεί από την απουσία οποιασδήποτε σημαντικής μείωσης του procaspase-8, -9 και -3 επίπεδα και της εμφάνισης του ενεργού κασπάσης διασπασμένα θραύσματα (βλέπε Εικ. 4 Α έως Γ και το Σχ. S3). Σε συμφωνία με αυτά τα ευρήματα, LBW242 απέτυχαν να επάγουν διάσπαση της PARP, ενός ευαίσθητου στόχου ενεργοποιημένων κασπάσης-3 (Σχήμα 4Α έως C).

Όταν LBW242 προστέθηκε μαζί με TRAIL σημαντικά ενίσχυσε τη δράση αυτού του συνδέτη θανάτου επί κασπάσης-8 και κασπάσης-3 ενεργοποίησης και σε διάσπαση PARP σε Α2780 WT, Α2780 ADR και SKOV 3 κυτταρικές σειρές επιμολύνθηκαν με τους άδειους φορείς, αλλά όχι σε εκείνα που υπερεκφράζουν c-FLIP

L (Εικ. 4 Α έως γ) . Είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η ενεργοποίηση της κασπάσης-8, που προκλήθηκε από TRAIL και ως επί το πλείστον από LBW242 + TRAIL, οδηγεί σε BID αποικοδόμηση, επιτυγχάνοντας έτσι την ενεργοποίηση της εγγενούς αποπτωτικής παθολογικής οδού (Εικ. 4 Α έως C). υποβάθμιση προσφορά αποτράπηκε σχεδόν πλήρως από το c-FLIP υπερέκφραση (Εικ. 4 Α έως C).

LBW242 βελτίωσε την προ-αποπτωτική δράση των αντικαρκινικών φαρμάκων για τον καρκίνο των ωοθηκών κύτταρα

Η τυπική ιατρική θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών περιλαμβάνει σε πρώτο βαθμό τη χρήση πλατίνη και ταξόλης αντικαρκινικά φάρμακα. Ως εκ τούτου, φάνηκε ενδιαφέρον να αξιολογήσει την πιθανή συνεργατική επίδραση μερικών αντικαρκινικά φάρμακα, όπως η σισπλατίνη, ταξόλη, τοποτεκάνη, ετοποσίδη και δοξορουβικίνη σε συνδυασμό με LBW242. Έτσι, σε μια πρώτη σειρά πειραμάτων που αντιμετωπίζονται ΗΕΥ κύτταρα με σισπλατίνη ή πακλιταξέλη ή τοποτεκάνη ή ετοποσίδη ή δοξορουβικίνη, προστίθενται σε δύο δόσεις, μια κατώτερη κλινική δόση που αντιστοιχεί στη δόση κορυφή που παρατηρείται κατά τη διάρκεια της έγχυσης αυτών των φαρμάκων σε ασθενείς με καρκίνο και σε 5 φορές υψηλότερη supraclinical δόσης, μόνη ή σε συνδυασμό με μια δόση οροπέδιο του LBW242 (30 μΜ). Τα αποτελέσματα αυτού του πειράματος έδειξε σαφώς ότι LBW242 ήταν σε θέση να ενδυναμώσουν τις κυτταροτοξικές επιδράσεις όλων αυτών των φαρμάκων (Σχ. 5Α). ανάλυση ισοβολογράμματος έδειξε συνεργιστική δράση κατά των όγκων των LBW242 με Σιπλατίνη (CI = 0,82) ή συν πακλιταξέλη (CI = 0,70) ή συν τοποτεκάνη (0,72) ή συν Etoposide (CI = 0,73) ή συν δοξορουβικίνη (p = 0,78). Σε ένα δεύτερο πείραμα ελέγξαμε την ικανότητα διαφόρων δόσεων LBW242 να ενισχύσει την κυτταροτοξικότητα που προκαλείται από μια κλινική δόση σισπλατίνης, ταξόλη ή τοποτεκάνη. Αυτό το πείραμα έδειξε ότι LBW242 με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο αύξησε την κυτταροτοξική απόκριση σε αυτά τα φάρμακα, την επίτευξη των μέγιστα αποτελέσματα στους 20-30 μΜ δόσεις (Σχ. 5Β). ανάλυση ισοβολογράμματος έδειξε συνεργιστική δράση κατά των όγκων των LBW242 συν τοποτεκάνη (CI = 0,70) ή ταξόλη (CI = 0,71) ή Cisplatin (CI = 0,82).

Με βάση αυτά τα ευρήματα, σε μια δεύτερη σειρά πειραμάτων που εστίασε την προσοχή μας στην ικανότητα των LBW242 να ενισχύσει τα αποτελέσματα του τοποτεκάνη, ένα φάρμακο που χρησιμοποιείται στη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών και είναι γνωστή ως μια πιθανή κασπάσης-8 ενεργοποιητή [33].

στο Σχ. 6Α είναι δυνατό να σημειωθεί ότι τοποτεκάνη ασκεί μια σημαντική προ-αποπτωτικό αποτέλεσμα όταν προστέθηκε σε συνδυασμό με LBW242 και TRAIL σε κύτταρα A2780WT PINCO? το κυτταρικό θάνατο των καρκινικών κυττάρων που προκαλείται από αυτούς τους παράγοντες, όταν χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό αναστέλλεται σε μεγάλο βαθμό από το τηγάνι-κασπάσης αναστολέα-ίτηκ και ως εκ τούτου είναι κυρίως προκαλείται μέσω της ενεργοποίησης της κασπάσης.

Σε κύτταρα FLIP A2780WT την αποπτωτική επαγωγή που προκλήθηκε από η συσχέτιση μεταξύ LBW242, TRAIL και τοποτεκάνη είναι σχεδόν αναστέλλεται πλήρως, υποδηλώνοντας έτσι έναν σημαντικό ρόλο της κασπάσης-8 στην επαγωγή κυτταρικού θανάτου καρκινικών (Σχ. 6Α).

οι παρατηρήσεις επιβεβαιώθηκαν σε SKOV3 PINCO και SKOV3 κύτταρα FLIP (Σχ. 6Α). Ένας ρόλος για τις κασπάσες-8 ενεργοποίηση σε Τοποτεκάνη που προκαλείται θάνατος των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών υποστηρίχθηκε περαιτέρω από πειράματα ποσοτικού προσδιορισμού της ενεργοποίησης κασπασών-8.