Αφηρημένο

Εισαγωγή

Μέχρι σήμερα, μια μελέτη με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο των οργανισμών συλλογικής λεμφαγγείων έχει δεν έχουν διεξαχθεί για να εξετάσει τα αρχικά στάδια της λεμφοίδημα. Ωστόσο, τέτοιες ιστολογικές μελέτες θα μπορούσαν να είναι χρήσιμα για την κατανόηση του μηχανισμού της λεμφοίδημα έναρξης. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διευκρινιστούν οι αλλαγές που συμβαίνουν κατά τη συλλογή λεμφαγγείων μετά από λεμφαδενεκτομή.

Μέθοδοι

Η μελέτη διεξήχθη σε 114 δείγματα από 37 ασθενείς που ανέπτυξαν λεμφοίδημα των κάτω άκρων μετά την παραλαβή χειρουργική θεραπεία για γυναικολογικούς καρκίνους και οι οποίοι ζήτησαν τη γνώμη της Πανεπιστήμιο του Τόκιο Νοσοκομείου και των συνδεδεμένων νοσοκομείων από τον Απρίλιο 2009 έως τον Μάρτιο του 2011. τα λεμφαγγεία που δεν χρειάζονται για lymphatico φλεβική χειρουργική επέμβαση αναστόμωσης ήταν κομμένα και στη συνέχεια εξετάστηκαν με ηλεκτρονική μικροσκοπία και οπτικό μικροσκόπιο.

Αποτελέσματα

με βάση τα μακροσκοπικά ευρήματα, οι ιστοχημικές αλλαγές στις συλλογή λεμφαγγείων ορίστηκαν ως εξής: κανονικό, ectasis, συρρίκνωση, και τον τύπο πλάκας (NECST). Στον τύπο ectasis, μια αύξηση στην πίεση ενδολεμφικού συνοδευόταν από επιπεδοποίηση των λεμφικών ενδοθηλιακών σκάφος κύτταρα. Στον τύπο συστολή, λεία μυϊκά κύτταρα μεταμορφώθηκαν σε συνθετικά κύτταρα και προώθησε την ανάπτυξη των ινών κολλαγόνου. Στην σκλήρυνση τύπου, ινώδη στοιχεία αντιπροσώπευε την πλειονότητα των εξαρτημάτων, τα λεμφαγγεία έχασαν τη μεταφορά τους και την επικέντρωση ικανότητες, και ο αυλός ήταν είτε στένωση ή πλήρη απόφραξη.

Συμπεράσματα

Η αύξηση της πίεσης στο εσωτερικό του συλλογή λεμφαγγείων μετά από λεμφαδενεκτομή συνοδευόταν από ιστολογικές αλλαγές που άρχισαν πριν από την έναρξη της λεμφοίδημα

Παράθεση:. Mihara Μ, Χαρά η, Hayashi Υ, Narushima Μ, Yamamoto Τ, Todokoro T, et al . (2012) Παθολογική Βήματα του καρκίνου που σχετίζονται με λεμφοίδημα: ιστολογικές αλλαγές στα δοχεία συλλογής του λεμφικού μετά Λεμφαδενεκτομή. PLoS ONE 7 (7): e41126. doi: 10.1371 /journal.pone.0041126

Επιμέλεια: Arin Greene, Νοσοκομείο Παίδων της Βοστόνης, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 2η, Ιανουαρίου 2012? Αποδεκτές: 19 Ιουνίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 24 Ιουλίου 2012 |

Copyright: © Mihara et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η επιχορήγηση παρέχεται από ένα ιαπωνικό πρόγραμμα χρηματοδότησης για την παγκόσμια ηγετική ερευνητές επόμενης γενιάς (επόμενο πρόγραμμα, LS039). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Limb λεμφοίδημα, η οποία αναπτύσσει μετά λεμφαδενεκτομή για τη θεραπεία του καρκίνου, είναι η αύξηση του όγκου του άρρωστου σκέλους που προκαλείται από την υποδόρια συσσώρευση ενός ρευστού πλούσιων σε πρωτεΐνες [1], [2]. Επειδή οι λεμφικού υγρά δεν μπορούν πλέον να μεταφερθεί, η πίεση στα συλλέγοντας λεμφαγγείων στα άκρα αυξάνει σταδιακά, η ροή της λέμφου επιβραδύνει [3] – [5], και λεμφοίδημα αναπτύσσεται τελικά. Όταν η διάρκεια της ασθένειας είναι παρατεταμένη, η λεμφοίδημα μπορεί να εξελιχθεί σε λεμφαγγειοσάρκωμα. Το προσδόκιμο ζωής ενός ασθενούς με την προϋπόθεση αυτή περιορίζεται σε λίγους μήνες έως 2 έτη [6], [7].

Επί του παρόντος, ο μηχανισμός παράγοντες για την εμφάνιση του λεμφοιδήματος είναι άγνωστη, και μια θεραπεία δεν έχει ακόμη να καθοριστεί για την πρόληψη της εμφάνισης της ασθένειας αυτής. Ωστόσο, μόλις λεμφοίδημα έχει καθιερωθεί, συγκρότημα φυσική θεραπεία λέγεται ότι είναι το χρυσό πρότυπο για τη θεραπεία της [8] – [11]. Επιπλέον, χειρουργικές θεραπείες, όπως λεμφικό φλεβική αναστόμωση (LVA) [12], [13] και λεμφαδένα μεταμόσχευση [14] έχουν πρόσφατα αναπτυχθεί, επεκτείνοντας τις θεραπευτικές επιλογές για τις περιπτώσεις εκείνες στις οποίες συγκρότημα φυσική θεραπεία από μόνη της είναι ανεπαρκής. Ωστόσο, οι ενδείξεις και οι μη-ενδείξεις της χειρουργικής θεραπείας δεν έχουν καλά καθορισμένα [15].

Οι συλλογικές λεμφαγγεία, τα οποία διαδραματίζουν κεντρικό ρόλο στην έναρξη της λεμφοίδημα, δείχνουν μια σχετικά απλή οργάνωση. Όπως φλέβες, οι εταιρείες συλλογικής λεμφαγγεία εμφανίζουν μια δομή trilaminar, που αποτελείται από ένα εσωτερικό, έσω και εξωτερική μεμβράνη. Η εσωτερική στιβάδα αποτελείται από ενδοθηλιακά κύτταρα? το μεσαίο στρώμα, διάφορες αναλογίες λείου μυός? και το εξωτερικό στρώμα, ένα εξωκυτταρικό πλέγμα που περιέχει λεπτά δέσμες ινών κολλαγόνου και ελαστίνης. Ένα χιτώνα που ενσωματώνει τη μικροκυκλοφορία πλούσια σε λίπος είναι επίσης παρούσα [16].

Μια μελέτη με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο για να εξετάσει τη συγκέντρωση λεμφαγγείων του πρώτα στάδια λεμφοίδημα δεν έχει πραγματοποιηθεί. Ωστόσο, τέτοιες μελέτες θα μπορούσαν να είναι χρήσιμες για την αποσαφήνιση του μηχανισμού της έναρξης λεμφοίδημα, τη δημιουργία μιας θεραπευτικής μεθόδου, και την ανάπτυξη προληπτικών μεθόδων. Σε αυτή τη μελέτη, ερευνήσαμε τις αλλαγές που συμβαίνουν κατά τη συλλογή των λεμφικών αγγείων μετά από λεμφαδενεκτομή εκτελώντας ηλεκτρονίων και φωτός (ανοσοχρώση) μικροσκοπικές μελέτες της συλλογής λεμφαγγείων στο ανθρώπινο σώμα.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να αποσαφηνίσει τις αλλαγές ότι εμφανίστηκαν σε ασθενείς «συλλογή λεμφαγγείων μετά από λεμφαδενεκτομή μέχρι νωρίς μετά την έναρξη της λεμφοίδημα.

η

Μέθοδοι

ασθενείς

η ιστολογική αξιολόγηση (ανοσοχρώση και ηλεκτρονίων μικροσκοπική εξέταση) της συλλογής λεμφαγγείων πραγματοποιήθηκε σε 114 δείγματα από 37 ασθενείς που ανέπτυξαν λεμφοίδημα των κάτω άκρων μετά από χειρουργική επέμβαση για καρκίνο γυναικολογικών και που συμβουλεύτηκε το Πανεπιστήμιο του Τόκιο Νοσοκομείο και Saiseikai Καβαγκούτσι Γενικό Νοσοκομείο από Απρίλιος 2009 έως Μάρτιος 2011 (Πίνακας 1 ). ασθενείς λεμφοίδημα άνω άκρου εξαιρέθηκαν επειδή ο ρυθμός της προόδου είναι διαφορετική μεταξύ των άνω και κάτω άκρων lymphedemas ως συνέπεια της βαρύτητας. Τα πειράματα που έγιναν σε αυτή τη μελέτη έγιναν με την έγκριση των επιτροπών δεοντολογίας στο Πανεπιστήμιο του Τόκιο και Saiseikai Καβαγκούτσι Γενικό Νοσοκομείο. Όλοι οι ασθενείς με την προϋπόθεση γραπτή συγκατάθεση. Εξετάσαμε 28 περιπτώσεις καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, 7 περιπτώσεις καρκίνου του ενδομητρίου, και 2 περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών. Η σταδιοποίηση της λεμφοίδημα πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το σύστημα ταξινόμησης της Διεθνούς Εταιρείας του Lymphology (ISL). Στάδιο 0 αναφέρεται σε μια λανθάνουσα ή υποκλινική κατάσταση όπου το πρήξιμο δεν είναι εμφανής, παρά διαταραχή της λέμφου μεταφορές. Στάδιο Ι αντιπροσωπεύει μία πρώιμη συσσώρευση του υγρού που είναι σχετικά υψηλή περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες και ότι υποχωρεί με την ανύψωση των άκρων. Επιπλέον, σκασίματα μπορεί να συμβεί σε αυτό το στάδιο. Στάδιο ΙΙ σημαίνει ότι ανύψωση των άκρων και μόνο σπάνια μειώνει το πρήξιμο των ιστών? σκασίματα είναι πρόδηλη. Αργά το Στάδιο ΙΙ, το σκέλος μπορεί να είναι ή μπορεί να μην δείχνετε σαν supervenes ίνωση ιστού. Φάση ΙΙΙ περιλαμβάνει lymphostatic ελεφαντίαση στην οποία σκασίματα είναι απούσα και τροφικές δερματικές αλλοιώσεις, όπως ακάνθωση, λίπους, και να αναπτύξουν overgrowths warty. Στάδιο 0 αντιπροσώπευαν 4 περιπτώσεις (αριθμός δειγμάτων: 15)? Στάδιο Ι, 5 περιπτώσεις (18)? Στάδιο ΙΙα, 12 περιπτώσεις (36)? Στάδιο IIb, 10 περιπτώσεις (34)? και σταδίου III, 6 περιπτώσεις (11).

Ο οριζόντιος άξονας δείχνει τα στάδια της λεμφοίδημα. Ο κάθετος άξονας δείχνει το ποσοστό του κάθε τύπου στα δείγματα του δείγματος σε κάθε στάδιο της νόσου.

Η

συλλογή δειγμάτων

Οι δοκιμές διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τη συλλογή λεμφαγγείων που δεν χρειάζεστε να αναστομώθηκαν και κόπηκαν κατά τη διάρκεια του λεμφικού φλεβική χειρουργική αναστόμωση. Τα δείγματα συλλέχθηκαν από το άρρωστο άκρο, δηλαδή από το μεσαίο πλευρές του μηρού, το γόνατο, ή τον αστράγαλο. Επιπλέον, στην κανονική ομάδα ελέγχου, συλλογή λεμφαγγείων ελήφθησαν δείγματα από εντερικές μεμβράνες κομμένα κατά την ελεύθερη μεταμόσχευση νήστιδας.

Στο κανονικό τύπο, μικροαγγειακή δίκτυα βρέθηκαν να θρέψει τους σε μεγάλο βαθμό αναπτύχθηκε τοίχους των οργανισμών συλλογικής λεμφαγγείων. Οι μικροαγγειακές δίκτυα σταδιακά χάνεται με την πρόοδο των σταδίων της νόσου. Επιπλέον, οι λεμφικού αγγειακού αυλού βρέθηκε να διασταλεί στον τύπο ectasis, η οποία σχετίζεται με μια αύξηση στην πίεση ενδολεμφικού. Επειδή αυξήσεις στα κύτταρα των λείων μυών και ίνες κολλαγόνου είναι οι κύριες αιτίες της θολότητας και πάχυνση του λεμφικού αγγειακού τοιχώματος, αυτά βρέθηκαν να είναι εξέχοντα στον τύπο συστολή και τη σκλήρυνση τύπου. LE:. Λεμφοίδημα

Η

Η κατάταξη των τύπων των οργανισμών συλλογικής λεμφαγγείων Βασισμένο σε διεγχειρητικές μακροσκοπικά ευρήματα

Σε αυτή τη μελέτη, θα κατατάσσονται τα μακροσκοπικά ευρήματα που παρατηρήθηκαν κάτω από ένα λειτουργικό μικροσκόπιο σε 4 τύπους: οι κανονικές, ectasis, συρρίκνωση, και τα είδη κατά πλάκας (NECST). Οι λεπτομέρειες της ταξινόμησης με βάση τα μακροσκοπικά ευρήματα παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Ταξινομήσαμε τους τύπους συλλογής λεμφαγγείων που βρέθηκαν σε κάθε στάδιο της λεμφοίδημα και στη συνέχεια εξέτασαν τις συσχετίσεις μεταξύ των τύπων και σταδίων διαιρώντας κάθε τύπο από τον συνολικό αριθμό των δειγμάτων συλλέγονται σε κάθε στάδιο της νόσου

Η πρώτη σειρά:. Ευρήματα από αλφα χρώση ακτίνη των λείων μυών (αSMA). Στο κανονικό τύπο, αρκετά στρώματα κυττάρων λείου μυός ήταν παρόντα. Στον τύπο ectasis, το στρώμα λείων μυϊκών κυττάρων ήταν μετρίως λεπτή. Στον τύπο συστολή, ένα πολύ παχύ στρώμα λείων μυϊκών ήταν παρόν απευθείας κάτω από το ενδοθήλιο, και ο αυλός περιορίστηκε σε ορισμένο βαθμό. Στην σκλήρυνση τύπου, οι αυλοί έχουν στενέψει. Η δεύτερη σειρά: Ευρήματα από χρώση podoplanin. Η κανονική τύπος ήταν θετικό για χρώση podoplanin στο ενδοθήλιο? ο τύπος ectasis ήταν έντονα θετική? το είδος συστολής, ελαφρώς θετική? η σκλήρυνση τύπου, αρνητική.

Η

Η ιστολογική εξέταση

Οι λεμφαγγείων βάφτηκαν με αιματοξυλίνη-ηωσίνη και εξετάστηκαν κάτω από το μικροσκόπιο. Επιπλέον, ανοσοχρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού podoplanin (Nichirei Biosciences, 413451, Tokyo, Japan) και α-SMA μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (DakoCytomation, M0851), προκειμένου να προσδιοριστεί η έκφραση των αντίστοιχων αγγειακών ιστολογικές δείκτες. Podoplanin, ένα σπειραματικής μεμβράνης ποδοκυττάρου mucoprotein, έχει δειχθεί ότι εντοπίζεται στο ενδοθήλιο των λεμφαγγείων [17].

Επεξεργασία δείγματος για Μικροσκοπία Ηλεκτρονικής Σάρωσης (SEM)

Τα λεμφικά αγγεία μονιμοποιήθηκαν σε 2,5% γλουταραλδεϋδη σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό στους 4 ° C για 1 εβδομάδα, και στη συνέχεια πλένονται σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα για να απομακρυνθεί το στερεωτικό διάλυμα. Στη συνέχεια, τα δείγματα μονιμοποιήθηκαν σε 1% ΟΣΟ

4 και πλύθηκαν σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα. Στη συνέχεια, τα δείγματα αφυδατώθηκαν σε σειριακά αυξανόμενες συγκεντρώσεις αιθανόλης (50-100%). Η αιθανόλη στη συνέχεια υποκαθίσταται με μικτά διαλύματα 100% αιθανόλης και οξικού 3-μεθυλβουτυλ. Κρίσιμο σημείο ξήρανση των δειγμάτων στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα JCPD-5 (JEOL, Tokyo, Japan). Τα δείγματα τοποθετήθηκαν σε δείγμα μπλοκ και υποβλήθηκε σε αγώγιμη επίστρωση (Pt) με ένα σύστημα επικάλυψης Precision-χάραξης (Model 682? Gatan, CA, USA). Τα δείγματα εξετάστηκαν με JSM-7001F ηλεκτρονικό μικροσκόπιο (JEOL, Tokyo, Japan).

μικροσκόπιο σάρωσης ηλεκτρονίων (SEM) ευρήματα. (Α) τα ενδοθηλιακά σκάφος Λεμφικό κύτταρα που προεξέχουν μέσα στον αυλό του λεμφικού στην κανονική τύπο. Bar = 10 μm. (Β) Λεμφαγγειεκτασία στα πρώτα της στάδια. Τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος ελαφρώς πεπλατυσμένο. Bar = 5 μm. (Γ) Medium-στάδιο Λεμφαγγειεκτασία. Τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος πλατύνει. Bar = 10 μm. Lu? Lumen, ΕΚ? κύτταρα του ενδοθηλίου, SSM? συνθετικά κύτταρα των λείων μυών, CSM? συσταλτικές λεία μυϊκά κύτταρα, CF? ίνες κολλαγόνου.

Η

(α) δεσμοσώματα στο κανονικό τύπο. Σε μια τρισδιάστατη δομή, θα συμμορφώνονται με τις παρακείμενες λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος. Bar = 2 μm. (Α ‘) μεγεθυσμένη εικόνα. Bar = 2 μm. (Β) δεσμοσωμάτων του λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφους στον τύπο ectasis. Οι κυττάρου-προς-κύτταρο συμφύσεις έχουν σταδιακά χαλαρώσει και αποσυναρμολογείται, έτσι ώστε τα κύτταρα προσκολλώνται μόνο στα σημεία. Bar = 10 μm. (Β ‘) μεγεθυσμένη εικόνα. Bar = 2 μm. ενδοθηλιακά κύτταρα (γ) Λεμφικού στις συλλεκτήριες λεμφαγγείων στον τύπο σκλήρυνσης. Οι δεσμοσώματα αποσυναρμολογηθεί, και οι ίνες κολλαγόνου κάτω από το λεμφικό ενδοθήλιο σκάφος εκτίθεται στο λεμφικό αυλό αγγείου (κίτρινο βέλος). Bar = 5 μm. (Γ ‘) Το κολλαγόνο ίνες που εκτίθενται στο λεμφικό αυλό αγγείου (με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, SEM). Τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος που λείπουν, και οι δέσμες των ινών κολλαγόνου που εκτίθενται στο λεμφικό αυλό του αγγείου. Bar = 1 μm. ΕΚ? κύτταρα του ενδοθηλίου, SSM? συνθετικά κύτταρα των λείων μυών, CSM? συσταλτικές λεία μυϊκά κύτταρα, CF? ίνες κολλαγόνου.

Η

Επεξεργασία δειγμάτων για Ηλεκτρονική Μικροσκοπία Διέλευσης (TEM)

Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τον ίδιο τρόπο όπως εκείνες για SEM από το στάδιο της στερέωσης μέσα από τα βήματα της αφυδάτωσης περιλαμβάνουν αιθανόλη. Αφού η αιθανόλη αντικαταστάθηκε με οξείδιο του προπυλενίου (ΡΟ), τα δείγματα διεισδύσει με εποξική ρητίνη [ένα μίγμα Epon812, δωδεκενυλο ηλεκτρικό ανυδρίτη, μεθυλο ναδικό ανυδρίτη, και 2,4,6-τρι (διμεθυλαμινομεθυλ) φαινόλη] χρησιμοποιώντας μία σειρά από μικτή λύσεις των ΟΠ και εποξική ρητίνη και στη συνέχεια μόνοι εποξική ρητίνη. Τα δείγματα πολυμερίζεται επί 3 ημέρες (35 ° C έως 60 ° C). Τα δείγματα κόπηκαν σε τομές των 80 nm, και τα προκύπτοντα τμήματα υπέρλεπτων παρασκευάσθηκαν με τη χρήση συμβατικών χρώση με οξικό ουρανύλιο και κιτρικό μόλυβδο. Οι τομές στη συνέχεια εξετάζονται με JEM-1011 ηλεκτρονικό μικροσκόπιο (JEOL, Tokyo, Japan).

(α) Κανονικός τύπος. Θα είναι παρόντες στο μέσο στρώμα των λεμφαγγείων συλλογής, καθώς συσταλτικές λείων μυϊκών κυττάρων. Συνθετικό λεία μυϊκά κύτταρα είναι μόνο μερικώς παρόντες. Bar = 10 μm. (Β) αλλαγές που επηρεάζουν τα κύτταρα των λείων μυών στο είδος συστολής. Συνθετικό λεία μυϊκά κύτταρα μετανάστευσαν άμεσα κάτω από τα ενδοθηλιακά κύτταρα και πολλαπλασιάστηκαν. Bar = 5 μm. (Γ) Συνθετικό λείων μυϊκών κυττάρων που διεγείρεται υπερπλασία ινών κολλαγόνου άμεσα κάτω από τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος. Bar = 2 μm. (D) Συνθετικά λείων μυϊκών κυττάρων. Μια αύξηση σε κόκκους γλυκογόνο μέσα στα κύτταρα είναι εμφανής. (Ε) Η περιφέρεια του συνθετικού λείων μυϊκών κυττάρων. Εκκριτικά κοκκία είναι παρόντα σε μεγάλους αριθμούς. Bar = 500 nm. ΕΚ? κύτταρα του ενδοθηλίου, SSM? συνθετικά κύτταρα των λείων μυών, CSM? συσταλτικές λεία μυϊκά κύτταρα, CF? ίνες κολλαγόνου, GG? κόκκοι γλυκογόνου (πράσινα βέλη), SG? εκκριτικά κοκκία.

Η

Αποτελέσματα

Μια ισχυρή συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ προτεινόμενη κατάταξη μας για τους τύπους της συλλογής λεμφαγγείων σε κάθε στάδιο της λεμφοίδημα (NECST) και την ταξινόμηση σταδιοποίηση της λεμφοίδημα ( Φιγούρα 1). Με την προώθηση στάδια λεμφοίδημα, ένας μικρότερος αριθμός κανονικούς τύπους βρέθηκαν μεταξύ των συλλεγέντων δειγμάτων. Δεν κανονική τύπος δειγματοληψίας στο στάδιο ΙΙΙ, το πιο σοβαρό στάδιο της νόσου. Σε αντίθεση, η σκλήρυνση τύπος σταδιακά αυξήθηκε σε αριθμό με την εξέλιξη της νόσου και ήταν εκείνος που συλλέγονται κατά κύριο λόγο στη φάση III. Ο τύπος ectasis ήταν συνήθως σε ήπιες περιπτώσεις, όπως σε στάδια Ι και II της νόσου, ενώ ο τύπος συστολή διαπιστώθηκε ότι ήταν κοινή σε σοβαρές περιπτώσεις, όπως σε στάδια II και III. Έτσι, η συλλογή λεμφαγγείων σταδιακά μετατρέπεται από το ένα είδος στο άλλο.

(α) ίνες κολλαγόνου στην κανονική τύπο. Συσταλτικές κυττάρων λείων μυών και ίνες κολλαγόνου αναμίχθηκαν μαζί στο μεσαίο στρώμα. Bar = 10 μm. ίνες (β) Το κολλαγόνο στον τύπο ectasis. Η διαστολή του λεμφικού αγγείου συνοδεύτηκε από μια επιμήκυνση των ινών κολλαγόνου, προκαλώντας την ελαφρά παχύτερο πτυχή. Bar = 10 μm. ίνες (γ) Το κολλαγόνο στον τύπο συστολή. Μόλις είχαν επίμηκες οι ίνες κολλαγόνου, που έγινε πολυεπίπεδο και βασανιστικό (διακεκομμένη γραμμή), σε συνεργασία με την υπερτροφία των τοιχωμάτων των οργανισμών συλλογικής λεμφαγγείων. Bar = 5 μm. ΕΚ? κύτταρα του ενδοθηλίου, seSM? συνθετικά κύτταρα των λείων μυών, ΣΥΣΜ? συνθετικά κύτταρα των λείων μυών, CSM? συσταλτικές λεία μυϊκά κύτταρα, CF? ίνες κολλαγόνου.

Η

(α) Κανονικός τύπος. Bar = 100 μm. (Α) τον τύπο Ectasis. Οι λεμφικού αγγειακού αυλού ήταν διεσταλμένες και καλύπτεται εξ ολοκλήρου με λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος. Bar = 10 μm. τύπου (β) κατά πλάκας. Bar = 100 μm. (B ‘) Το λεμφικό τοίχωμα του αγγείου υφίσταται πάχυνση, λόγω της υπερπλασίας των λείων μυών και των ινών κολλαγόνου. Οι λεμφικού αγγειακού αυλού στένεψαν και ως σχήμα pinhole. Bar = 10 μm.

Η

Η εμφάνιση των λεμφαγγείων που σχετίζονται με κάθε στάδιο του λεμφοίδημα παρουσιάζεται στο Σχήμα 2. Στον κανονικό τύπο, μικροαγγειακή δίκτυα συσπείρωση γύρω από τα λεμφικά τοιχώματα βρέθηκαν να θρέψει τη συλλογή λεμφαγγείων. Οι μικροαγγειακές δίκτυα σταδιακά χάνεται με την πρόοδο των σταδίων της νόσου. Επιπλέον, οι λεμφικού αγγειακού αυλού βρέθηκε να διασταλεί στον τύπο ectasis, η οποία σχετίζεται με μια αύξηση στην πίεση ενδολεμφικού. Αυξήσεις στα λεία μυϊκά κύτταρα και ίνες κολλαγόνου έχουν βρεθεί να είναι οι κύριες αιτίες της θολότητας και πάχυνση του λεμφικού αγγειακού τοιχώματος και παρατηρήθηκαν να είναι εξέχοντα στον τύπο συστολή και τη σκλήρυνση τύπου. Καθώς το λεμφοίδημα προχωρούσε, οι λεμφαγγεία έγινε πιο δύσκολο, έχασε την ελαστικότητα, και φάνηκε να χάνει την ικανότητα να κινείται περισταλτικά για τη μεταφορά λεμφικό υγρό.

Φως μικροσκοπικά ευρήματα

Για να εξετάσει τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα, που χρωματισμένο για την ενδοθηλιακή podoplanin πρωτεΐνη (Σχήμα 3). Η κανονική τύπος βρέθηκε να είναι θετικό για χρώση podoplanin σε ένα στρώμα του ενδοθηλίου των λεμφαγγείων συλλογής. Ο τύπος ectasis βρέθηκε να είναι έντονα θετικές? το είδος συστολής, ελαφρώς θετική? η σκλήρυνση τύπου, αρνητική. Χρησιμοποιήσαμε επίσης χρώση α-SMA για να εξετάσει τα λεία μυϊκά κύτταρα. Στο κανονικό τύπο, πολλές στρώσεις λείου μυός κύτταρα ήταν παρόντα σε ένα κυκλικό διάθεση στα μεσαία στρώματα της συλλογής λεμφαγγείων. Στον τύπο ectasis, ως προσαρμογή στη διαστολή των λεμφαγγείων, το στρώμα λείων μυϊκών κυττάρων στον έσω στρώμα ήταν μετρίως λεπτό σε ορισμένες περιπτώσεις. Όπως και το κανονικό τύπο, αρκετά στρώματα κυττάρων λείου μυός ήταν παρόντα. Στον τύπο συστολή, ένα πολύ παχύ στρώμα λείων μυών ήταν παρόν απευθείας κάτω από το ενδοθήλιο των λεμφαγγείων, και μια αύξηση στο μέγεθος του λείου μυός στρώμα συνοδεύτηκε από στένωση του αυλού των λεμφαγγείων. Στην σκλήρυνση τύπου, οι αυλοί περιορίστηκαν κατά τέτοιο τρόπο που είχαν σχήμα σαν μικροσκοπικές οπές. Σε ορισμένες περιπτώσεις, ήταν εντελώς αποφραγμένη.

Electron μικροσκοπικά ευρήματα

Από την άποψη των ενδοθηλιακών κυττάρων στα λεμφικά αγγεία, εκείνοι με τον κανονικό τύπο βρέθηκαν να προεξέχουν προς τα λεμφικά αυλό αγγείου ( Εικόνα 4α). Σε αντίθεση, τα ενδοθηλιακά κύτταρα στον τύπο ectasis βρέθηκαν να είναι ομαλή και δεν προεξέχουν μέσα στον αυλό (Σχήμα 4 b, c). Αυτή η κατάσταση είναι γνωστή ως «lymphangiectasis». Οι εστιακές συμφύσεις (δεσμοσώματα) μεταξύ των ενδοθηλιακών κυττάρων προσκολλάται ισχυρά και ευρέως στην κανονική τύπου αλλά έχουν αποδυναμωθεί και προσκολλάται μόνο εν μέρει στον τύπο ectasis (Σχήμα 5 a, b). Στην σκλήρυνση τύπου, η συγκόλληση μεταξύ των ενδοθηλιακών κυττάρων λεμφικού αγγείου ήταν εντελώς αποσυναρμολογηθεί, και οι ίνες κολλαγόνου κάτω από τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα αιμοφόρων εκτέθηκαν στο λεμφικό αυλό αγγείου (Εικόνα 5c).

Όσον αφορά την ομαλή μυϊκά κύτταρα, εκείνοι με τον κανονικό τύπο ήταν παρούσες στο μεσαίο στρώμα της συλλογής λεμφαγγείων ως συσταλτικές λεία μυϊκά κύτταρα, τα οποία είναι ένας συνηθισμένος τύπος διαφοροποιημένων κυττάρων λείων μυών (Σχήμα 6α). Συνθετικό λεία μυϊκά κύτταρα, τα οποία έχουν αυξημένα ποσοστά πολλαπλασιασμού, μετανάστευσης, και την παραγωγή εξωκυτταρικής μήτρας [18], ήταν επίσης παρόντες σε μικρούς αριθμούς στην έσω στρώμα του κανονικού τύπου. Επιπλέον, τα συνθετικά κύτταρα λείου μυός είχε θυλάκια που υπάρχουν στο κυτταρόπλασμα. Στον τύπο συστολή, τα συνθετικά κύτταρα λείου μυός μετανάστευσαν άμεσα κάτω από τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος και είχαν πολλαπλασιαστεί (Σχήμα 6β). Επιπλέον, αυτά τα μυϊκά κύτταρα είχαν επίσης προώθησε την υπερπλασία των ινών κολλαγόνου άμεσα κάτω από τα λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος (Σχήμα 6c, d, e). Επιπλέον, οι συνθετικές λείου μυός κύτταρα είχαν πολλαπλασιαστεί στην έσω στρώμα, ήταν παρόντες μεταξύ των συσταλτικών λείων μυϊκών κυττάρων, και είχαν προήγαγαν τον πολλαπλασιασμό των ινών κολλαγόνου. κόκκοι γλυκογόνου και εκκριτικά κοκκία αυξήθηκαν σε αφθονία μέσα στα συνθετικά λείων μυϊκών κυττάρων.

Όσον αφορά τις ίνες κολλαγόνου, αυτές της κανονικής τύπου ήταν παρόντα στο διάμεσο στρώμα (Σχήμα 7α). Εν τω μεταξύ, στο είδος συστολής, τα συνθετικά λείου μυός κύτταρα είχαν μεταναστεύσει κατευθείαν μέσα στον αυλό κάτω από τα λεμφικά ενδοθηλιακά σκάφος κύτταρα (Σχήμα 7b). Αυτό οδήγησε στο σχηματισμό ενός παχύ στρώμα από ίνες κολλαγόνου στον αυλό. Το παχύ στρώμα από ίνες κολλαγόνου έγινε περίπλοκη και στρωματοποιημένη σε συνδυασμό με τις αλλαγές στις συλλογή λεμφαγγείων, η οποία είχε μετατοπιστεί από τη φάση επέκτασης στη φάση συστολής και, τέλος, στο στάδιο ίνωσης (Σχήμα 7c). Στην σκλήρυνση τύπο, το λεμφικό τοίχωμα του αγγείου υφίσταται πάχυνση, λόγω της υπερπλασίας των λείων μυών και των ινών κολλαγόνου. Περαιτέρω, οι λεμφικού αγγειακού αυλού στένεψαν και διαμορφώνεται όπως μια pinhole (Σχήμα 8).

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη έδειξε ότι η εξέλιξη της νόσου σε λεμφοίδημα άκρων συνοδεύεται από 1) την ανάπτυξη μιας εξομάλυνσης των ενδοθηλιακών κυττάρων στο συλλογή λεμφαγγείων, 2) μια αποσυναρμολόγηση του συμφύσεων (δεσμοσώματα), 3) μία αύξηση και μετασχηματισμός των λείων μυϊκών κυττάρων, 4) ένα πάχυνση της βασικής μεμβράνης, και 5) ο πολλαπλασιασμός του ίνες κολλαγόνου. Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που αναφέρουν τις αλλαγές στα ενδοθηλιακά κύτταρα και βασικής μεμβράνης των λεμφαγγείων συλλογής, μετασχηματισμός των λείων μυϊκών κυττάρων, και τον πολλαπλασιασμό των ινών κολλαγόνου κατά την διάρκεια λεμφοίδημα.

Μέχρι σήμερα, μόνο ένας μικρός αριθμός εκθέσεις έχουν εξετάσει τις αλλαγές που επηρεάζουν τους φυσιολογικούς ιστούς και τη συλλογή των λεμφικών αγγείων στο λεμφοίδημα άκρων, έτσι ώστε οι παθολογικές αλλαγές σε λεμφοίδημα παραμένουν άγνωστοι. Το 1999, σε μια μελέτη με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, Koshima

et al.

Δήλωσαν ότι έχουν βρεθεί ατροφία των λείων μυϊκών κυττάρων στην συλλογή λεμφαγγείων των ασθενών με λεμφοίδημα τερματικού [19]. Σε μια μελέτη χρησιμοποιώντας ανοσοχρώση ανάλυση, Ogata

et al.

Ανέφεραν την δυνατότητα του μετασχηματισμού των λείων μυϊκών κυττάρων στη συλλογή λεμφαγγεία [20]. Η έκθεσή μας είναι η πρώτη που αφορά τις προοδευτικές αλλαγές που συμβαίνουν κατά τη συλλογή λεμφαγγείων σε ήπια ή μέτρια λεμφοίδημα μετά από λεμφαδενεκτομή.

Ο αυλός της συλλογής λεμφικού κανάλι κανονικά καλύπτεται από ένα στρώμα των ενδοθηλιακών κυττάρων. Τα ενδοθηλιακά κύτταρα είναι πλήρως τυλιγμένο από την βασική μεμβράνη, η οποία περιβάλλεται από λεία μυϊκά κύτταρα και ινώδη στοιχεία. Ένας μεγάλος αριθμός σκαφών θρεπτικών συστατικών και unmyelinated νεύρα διαπερνούν το λεμφικό αγγείο από την πλευρά του χιτώνα και μέχρι λείων μυών ακριβώς κάτω από το ενδοθήλιο. Επιπλέον, ένας αριθμός τριγλώχινας βαλβίδες είναι παρόντες και σχηματίζουν ένα μονόδρομης ροής κατευθύνεται προς το φλεβικό γωνία [21], [22].

Πρόσφατα, αργή αυθόρμητες συσπάσεις έχουν βρεθεί να εμφανιστούν σε λεμφαγγεία στο μια συχνότητα 2-4 φορές ανά λεπτό? και έχουν αυτές οι δραστικές συσπάσεις έχουν βρεθεί να χρησιμεύσει ως κινητήρια δύναμη για λεμφικό μεταφορών [23] – [25]. Οι συνθήκες που διευκολύνουν την εμφάνιση των ενεργών συσπάσεις περιλαμβάνουν ένα πολύ υψηλό περιεχόμενο των λείων μυών στο λεμφικό τοίχωμα του αγγείου, η παρουσία μεγάλων ποσοτήτων των μιτοχονδρίων και το γλυκογόνο κόκκοι γύρω από τον πυρήνα, και τη διείσδυση των σκαφών σίτισης στο λείο στρώμα μυός απευθείας κάτω από το ενδοθήλιο. Οι λειτουργίες των οργανισμών συλλογικής λεμφαγγείων που σχετίζονται με τη μεταφορά τους και την επικέντρωση ικανότητες. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε κατατάξει τις αλλαγές στη συγκέντρωση των λεμφαγγείων σε 4 διαφορετικούς τύπους.

Η κανονική τύπος αποτελείται από υγιείς συλλογή λεμφαγγείων. Οι συλλογής λεμφαγγείων χωρίζονται σε 3 στρώσεις, και λεμφικά ενδοθηλιακά κύτταρα περιβάλλουν ολόκληρη την περιφέρεια των λεμφικών αυλό του αγγείου. ίνες κολλαγόνου και λείους μυς είναι παρόντες στο διάμεσο στρώμα.

Ο τύπος ectasis είναι μια κατάσταση που βρίσκεται λίγο μετά την λεμφαδενεκτομή. Στη συλλογή λεμφαγγείων που έχουν χάσει κατάντι άνοιγμα τους μετά από λεμφαδενεκτομή, η ενδολεμφικού πίεση αυξάνει σημαντικά, και η ροή της λέμφου γίνεται αργή. Ιστολογικά, η αύξηση της πίεσης ενδολεμφικού συνοδεύτηκε από διαστολή στον αυλό των λεμφαγγείων συλλογής και από μια ισοπέδωση των λεμφικών ενδοθηλιακών σκάφος κύτταρα. Οι μεσοκυττάρια συνημμένα (δεσμοσώματα) μεταξύ των ενδοθηλιακών κυττάρων και σταδιακά αλλάζει από ισχυρή στην αδύναμη. Τελικά, αυτά τα μεσοκυττάρια συνημμένα θα χαθούν, και τα ινώδη στοιχεία θα εκτεθούν στον αυλό της συλλογής λεμφικού κανάλι. Περαιτέρω, οι λείοι μύες στο μεσαίο στρώμα υποβλήθηκε σε μετασχηματισμό, με βαθμιαία διαφοροποίηση λείων μυϊκών κυττάρων αλλάζει σε συνθετικά κύτταρα λείου μυός. Όπως το λεμφικό τοίχωμα του αγγείου διεσταλμένες, οι ίνες κολλαγόνου γίνονται λεπτά και επιμήκη.

Στον τύπο συστολή, η συνεχής αύξηση της ενδολεμφικού πίεσης οδηγεί σε αντισταθμιστική ιστολογικές αλλαγές που επηρεάζουν κυρίως τα λεία μυϊκά κύτταρα. Λόγω της παρατεταμένης ανύψωση του ενδολεμφατική πίεση, το λεμφικό ενδοθηλιακά κύτταρα σκάφος παραμένει λεία. Από την άποψη των λείων μυϊκών κυττάρων, μερικά από τα μετασχηματισμένα συνθετικών κυττάρων λείου μυός μετανάστευσαν άμεσα κάτω από τα ενδοθηλιακά κύτταρα, προάγοντας τον πολλαπλασιασμό των ινών κολλαγόνου. Αυτό οδήγησε στο σχηματισμό του πάχους ινών κολλαγόνου που γίνονται αναμιγνύεται με τα λεία μυϊκά κύτταρα του έσω στρώμα. Κατά συνέπεια, συσταλτικές λεία μυϊκά κύτταρα θα έχουν δυσκολία αναθέτουσα λόγω κωλύματος από τις παχιές ίνες κολλαγόνου, με αποτέλεσμα ένα λειτουργικό μείωση των συλλογή λεμφαγγείων. Το ίδιο ισχύει και για τις συνθετικές λείων μυϊκών κυττάρων, δεδομένου ότι τα αυξανόμενα ποσά των λείων μυϊκών κυττάρων και ινών κολλαγόνου συνοδεύονταν από αύξηση στην ποσότητα των ελαστικών ινών μεταξύ των λείων μυϊκών κυττάρων.

Στην σκλήρυνση τύπου, ο διακυτταρικό συνημμένα μεταξύ των λεμφικών ενδοθηλιακών κυττάρων χάθηκαν, προκαλώντας το λεμφικό υγρό που ρέει μέσα συλλογής λεμφαγγείων να διαρρεύσει έξω. Η πίεση στις συλλεκτήριες λεμφαγγείων διατηρείται σε υψηλά επίπεδα σε ορισμένες περιπτώσεις, αλλά είναι χαμηλή σε άλλα, λόγω της διαρροής του λεμφικού υγρού. Αυτός ο τύπος χαρακτηρίζεται από σημαντικά αυξημένη λείων μυϊκών κυττάρων και των ινών κολλαγόνου. Ωστόσο, όπως αναπτύχθηκε κυτταρίτιδα, η ποσότητα των λείων μυϊκών κυττάρων στις συλλογή λεμφαγγείων μειώθηκε, και τα ινώδη στοιχεία γίνονται τα κύρια συστατικά. Κατά συνέπεια, τόσο η ικανότητα μεταφοράς και η συμπύκνωση ικανότητα να χαθεί. Το λεμφικό αυλός δοχείο είτε αξιοσημείωτα στένωση ή εντελώς αποφραγμένη, προκαλώντας περαιτέρω επιδείνωση της λεμφοίδημα.

Σε απόκριση σε εξωγενή στρες λόγω της αύξησης της πίεσης ενδολεμφατική, λεία μυϊκά κύτταρα στη συλλογή λεμφαγγεία υποβληθούν σε μεταμόρφωση από «συσταλτικές« κύτταρα λείου μυός που ειδικεύεται στην συσταλτική λειτουργίες να «συνθετικό» λεία μυϊκά κύτταρα, τα οποία διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην αναδιαμόρφωση της τρισδιάστατης δομής των τοιχωμάτων των συλλογής λεμφαγγείων. Τα λεία μυϊκά κύτταρα που υποβάλλονται σε μετασχηματισμό θα πολλαπλασιάζονται και μεταναστεύουν ξανά και θα παράγει παράγοντες ανάπτυξης, καθώς και ένζυμα που θα υποβαθμίσει υποστρώματα στην εξωκυτταρική μήτρα. Τέτοιες λειτουργίες λείου μυός θεωρούνται σημαντικά στο μηχανισμό επούλωσης κατά λεμφικού βλάβη αγγείου. Ωστόσο, εάν η διαδικασία αυτή συνεχίζεται και γίνεται χρόνια, τείνει να οδηγήσει στην παθογένεση των ασθενειών όπως η σκλήρυνση των λεμφαγγείων και σε μείωση της συσταλτικής τους ισχύ.

Οι «συνθετικές» μυϊκά κύτταρα λείου μεταναστεύουν απευθείας κάτω από το λεμφικό ενδοθήλιο σκάφος, όπου πολλαπλασιάζονται και να προωθήσει το σχηματισμό των αλλοιώσεων που χαρακτηρίζεται από την πάχυνση του λεμφικού αγγειακού τοιχώματος. Σε αυτό το σημείο, οι μεταβολές είναι αναστρέψιμες, και ίνωση αναπτύσσεται συχνά όταν η νόσος συνεχίζει και γίνεται χρόνια ή όταν σημαντικές φλεγμονώδεις αποκρίσεις συμβαίνουν λόγω λεμφαγγειίτιδα και κυτταρίτιδα. Αυτές οι αλλαγές στη συγκέντρωση των λεμφαγγείων ονομάζεται lymphosclerosis (Σχήμα 8).

Οι περιορισμοί αυτής της μελέτης αποτελείται από το ενδεχόμενο διαφορές στη διαδικασία της νόσου μεταξύ των άνω άκρων λεμφοίδημα και κάτω άκρων λεμφοίδημα. Θα χρειαστεί περαιτέρω εξέταση του θέματος στο μέλλον. Επιπλέον, η σύνδεση μεταξύ των πορισμάτων της μελέτης αυτής και την αποτελεσματικότητα της θεραπείας θα μπορούσε επίσης να χρησιμοποιηθεί ως ένα θέμα για περαιτέρω μελέτη. Επιπλέον, το σημείο στο οποίο μια αλλαγή είναι αναστρέψιμη ή μη αναστρέψιμη είναι ακόμα ασαφής.

Αυτή η μελέτη έδειξε ότι 1) η αύξηση της ενδολεμφικού πίεσης που αναπτύσσεται μετά από λεμφαδενεκτομή συνοδεύεται από ιστολογικές μεταβολές στη συγκέντρωση λεμφαγγείων και 2 ) αυτές οι αλλαγές συμβαίνουν πριν από την έναρξη της λεμφοίδημα. Είναι σημαντικό να αποφευχθεί η επιδείνωση της λεμφοίδημα καταστέλλοντας τις μη αναστρέψιμες εκφυλιστικές αλλαγές στη συλλογή λεμφαγγείων ξεκινώντας θεραπευτικές παρεμβάσεις σε σχετικά πρώιμο στάδιο, όπως στις διαστολή και συστολή στάδια. Τα ευρήματα της μελέτης αυτής θα μπορούσε να οδηγήσει στη διαλεύκανση της φυσιοπαθολογίας από την έναρξη του λεμφοιδήματος των άκρων μετά τη θεραπεία του καρκίνου και την ανάπτυξη μιας ριζικής θεραπείας.

Ευχαριστίες

Είμαστε ευγνώμονες για την Makiko Haragi για την προετοιμασία της απεικόνισης στην παρούσα έκθεση και να Takashi Takaki της JEOL Co., Makoto Enomoto, Suaki Kobayashi, Masami Hashidume, Τσούγιοσι Oka της Histo Science Laboratory Co., για την υποστήριξή τους στη μικροσκοπική ανάλυση.