Αφηρημένο

Ιστορικό

Παράγοντες που επηρεάζουν την απόκλιση απαντήσεις των όγκων του προστάτη σε υποδοχέα ανδρογόνων (AR) axis- κατευθυνόμενη θεραπευτικά είναι ελάχιστα κατανοητές, και οι προάγγελοι αποτελεσματικότητας θεραπείας. Υποθέσαμε ότι η αποτελεσματικότητα της αναστολής της σύνθεσης συνδέτη DHT θα συνδέσει με ενδονεοπλαστική ανδρογόνων αναλογίες ενδεικτική της σχετικής εξάρτησης από τα DHT μεσολάβηση ανάπτυξης.

Μέθοδοι

χαρακτηριζόμενη από δυο ευαίσθητο σε ανδρογόνο ξενομόσχευμα καρκίνου του προστάτη μοντέλα μετά ανδρογόνων καταστολή από ευνουχισμό σε συνδυασμό με τον αναστολέα SRD5A, dutasteride, καθώς και ένα πάνελ ανθεκτικών ευνουχισμού μεταστάσεις που λαμβάνονται μέσω της ταχείας αυτοψίας.

Αποτελέσματα

σε LuCaP35 όγκους (ενδονεοπλαστική Τ : DHT αναλογία 2:01) dutasteride κατασταλεί DHT σε 0,02 ng /gm και παρατεταμένη επιβίωση έναντι μόνο ευνουχισμό (337 vs.152 ημέρες, HR 2,8, p = 0,0015). Σε LuCaP96 όγκων (Τ: DHT 10:01), η επιβίωση δεν βελτιώθηκε παρά την παρόμοια μείωση της DHT (0,02 ng /gm). LuCaP35 αποδειχθεί υψηλότερη έκφραση του στεροειδούς βιοσυνθετικών ενζύμων διατήρηση των επιπέδων DHT (5 φορές υψηλότερη SRD5A1, 41 φορές υψηλότερες, 99 φορές υψηλότερη RL-HSD, ρ & lt? 0.0001 για τα δύο), την ανασύσταση του ενδονεοπλαστική DHT (σε ~ 30% των μη επεξεργασμένων όγκοι), και περίπου 2 φορές αυξημένη έκφραση της πλήρους μήκους AR. Σε αντίθεση, LuCaP96 απέδειξε υψηλότερα επίπεδα των στεροειδών ενζύμων καταβολισμού (6,9 φορές υψηλότερη AKR1C2, 3000 φορές μεγαλύτερη UGT2B15, p = 0,002 και p & lt? 0,0001 αντίστοιχα), επίμονη καταστολή της ενδονεοπλαστική DHT, και 6-8 φορές την επαγωγή της πλήρους μήκος AR και ο συνδετήρας ανεξάρτητη παραλλαγή ματίσματος V7 AR. Ανθρώπινα μεταστάσεις κατέδειξαν βιο-ενεργά επίπεδα ανδρογόνων και AR μήκος και AR ματίσματος-παραλλαγή έκφραση πλήρους σύμφωνες με την κλίμακα που παρατηρείται σε ξενομοσχεύματα.

Συμπεράσματα

ενδογενείς διαφορές στην βασική στεροειδογένεση, καθώς και μεταβλητή έκφραση πλήρους μήκους και μάτισμα παραλλαγή AR, συνεργάτης με την απάντηση και η αντίσταση καταστολής συνδέτη AR να προ-υποδοχέα. Έκφραση στεροειδογόνων ενζύμων και ισομορφές AR μπορεί να χρησιμεύσει ως πιθανοί βιοδείκτες της ευαισθησίας σε ισχυρή αναστολή AR-άξονα και πρέπει να επικυρώνονται επιπλέον μοντέλα

Παράθεση:. Mostaghel EA, Morgan Α, Zhang Χ, Marck BT, Xia J , Hunter-Merrill R, et al. Χαρακτηριστικά του Καρκίνου (2014) του προστάτη συσχετίζεται με μια απόκριση σε προ-υποδοχέων στόχευση του Άξονα ανδρογόνων. PLoS ONE 9 (10): e111545. doi: 10.1371 /journal.pone.0111545

Επιμέλεια: Allen Gao, UC Davis Περιεκτική Κέντρο Καρκίνου, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 19 Φεβ 2014? Αποδεκτές: 1η Απριλίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 30 του Οκτωβρίου, 2014

Copyright: © 2014 Mostaghel et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Καρκίνος του προστάτη Βραβείο του Ιδρύματος Career Development (ΕΑΜ) και Challenge Award (ΕΑΜ, SP, RLV, ΑΠΑ, ΔΒΔ, PSN), Damon Runyon Genentech-κλινικός ερευνητής Βραβείο C-40-08 (ΕΑΜ), ΝΙΗ χορηγήσει 1K23 CA122820-01 (ΕΑΜ), DOD Νέα Ερευνητής Βραβείο W81XWH-10-1-0228 (ΕΑΜ)? GlaxoSmithKline (Α.Μ. και P.S.N.)? 1RC1 CA146849 (P.S.N.)? PC093509 (P.S.N.)? PO1 CA 85859 (J.X., Κ.Ο., R.V., P.S.N.)? το ΝΙΗ /NCI Pacific Northwest Καρκίνος του προστάτη SPORE P50CA97186 (J.X., Κ.Η., Κ.Ο., P.S.N., R.V.)? και το Τμήμα Υποθέσεων Βετεράνων (B.T.M., S.P. και A.M.M.). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν διαβάσει την πολιτική του περιοδικού και έχουν τα ακόλουθα συγκρούσεις: A.M.M., R.B.M. και P.S.N. Οι διαβουλεύσεις και έλαβε την υποστήριξη της έρευνας από την GlaxoSmithKline. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Αν και αρχικά άκρως αποτελεσματική, θεραπεία αποστέρησης ανδρογόνων για τον καρκίνο του προστάτη είναι ομοιόμορφα χαρακτηρίζεται από την εξέλιξη σε ευνουχισμός καρκίνος ανθεκτικός προστάτη (CRPC) σε περίοδο 18-36 μηνών, με μια επακόλουθη διάμεση επιβίωση 1-2 ετών. [1] Ενώ υποδοχέα ανδρογόνου (AR) έκφραση -regulated γονίδιο αρχικά καταστέλλεται, [2], [3] η μεταγραφική πρόγραμμα ρυθμίζεται από την AR επανενεργοποιείται σε CRPC μέσω μηχανισμών που διατηρούν τόσο συνδέτη και του υποδοχέα συνεισφορές μεσολάβηση για σηματοδότηση AR. [4] – [6] Αυτά περιλαμβάνουν υπολειμματική ενδοογκική ανδρογόνα σε επίπεδα επαρκή για την ενεργοποίηση του προγράμματος AR, [7] – [9] και την αυξημένη δραστηριότητα AR, είτε μέσω ενίσχυσης ή υπερέκφραση (με αποτέλεσμα αυξημένη ευαισθησία σε χαμηλά επίπεδα συνδέτη) [10 ], [11] ή μέσω του περιγράφηκε πρόσφατα έκφραση των παραλλαγών ματίσματος AR κόλουρου ανεξάρτητη συνδεσμικού (AR

SV) που δεν έχει την περιοχή δέσμευσης συνδέτη (LBD). [12] – [17] Αξίζει να σημειωθεί ότι οι μελέτες της μέγιστης ή συνδυασμένο αποκλεισμός ανδρογόνων χρησιμοποιούν στεροειδή ή μη στεροειδή AR ανταγωνιστές που στοχεύουν το AR LBD έδειξαν μόνο μία μικρή, αν και στατιστικά σημαντική, βελτίωση στα ποσοστά επιβίωσης 5 ετών (27.6 έναντι 24.7 %? p = 0.005). [18] Η πιο απλή εξήγηση για την έλλειψη μεγαλύτερης αποτελεσματικότητας είναι η αδυναμία αυτών των ανταγωνιστών AR να outcompete υπολειμματικό τεστοστερόνης (Τ) και διϋδροτεστοστερόνης (DHT) (τα οποία έχουν AR συνάφειες που υπερβαίνουν κατά πολύ εκείνες των συνθετικών αντι-ανδρογόνα δέσμευσης), [ ,,,0],19] ή μια αποτυχία να στοχεύσετε αποτελεσματικά AR

sv λείπει το LBD.

Οι κλινικές αποκρίσεις σε νέους ανταγωνιστές ισχυρή AR και νέους αναστολείς στεροειδούς σύνθεση, σε συνδυασμό με την απόδειξη της intracrine ανδρογόνων βιοσύνθεσης στον καρκίνο του προστάτη δείχνουν ότι έννοιες της μέγιστης αποκλεισμός ανδρογόνων θα πρέπει να επανεξεταστεί και να τελειοποιηθεί. Μια πρόσφατη μελέτη που σχεδιάστηκε για να στοχεύσουν πολλαπλά στάδια στη βιοσύνθεση των ανδρογόνων στους άνδρες παραλείποντας ADT (με υδροκορτιζόνη, η κετοκοναζόλη αναστολέα CYP17A1, και ο αναστολέας στεροειδούς 5-α-αναγωγάσης (SRD5A) Dutasteride) προκάλεσαν σημαντική μείωση του PSA στους περισσότερους ασθενείς και η διάμεση διάρκεια ανταπόκρισης των 20 μηνών. [20] Έτσι, η κλινική αποτελεσματικότητα μπορεί να μην απαιτεί έναν ανταγωνιστή AR στον καθορισμό των πιο αποτελεσματική καταστολή της «προ-υποδοχέα» σηματοδότηση μέσω της μείωσης των υποκαταστατών AR. Είναι σημαντικό ότι η αποτελεσματικότητα της αναστολής της ενεργοποίησης AR σε καρκίνους του προστάτη, είτε μέσω της ενισχυμένης προσεγγίσεις προ-υποδοχέα ή εκείνα AR άμεσα στόχευσης, διαφέρει σημαντικά μεταξύ των ασθενών, και οι παράγοντες που συμβάλλουν στις εν λόγω απόκλιση των αποτελεσμάτων είναι άγνωστες. Για παράδειγμα, μελέτες πρόληψης χρησιμοποιούν αναστολείς SRD5A μείωσε σημαντικά το ποσοστό ανίχνευσης εντοπισμένο καρκίνων του προστάτη, αλλά η παρέμβαση αυτή δεν ήταν σαφώς αποτελεσματικό στην πρόληψη της εξέλιξης ή ανίχνευση του καρκίνου σε όλους τους ανθρώπους. [21], [22] Παρομοίως, πρόσφατες κλινικές δοκιμές νέων αναστολέων της CYP17A1 και AR σε άνδρες με CRPC έχουν αναφερθεί σημαντικές διαφορές μεταξύ των ασθενών σε αντικειμενικές ανταποκρίσεις [23], [24].

Σε αυτή τη μελέτη , επιδιώξαμε να προσδιορίσει τα χαρακτηριστικά όγκου-ειδικά που επηρεάζουν απόκριση του καρκίνων του προστάτη με την αναστολή της σηματοδότησης AR προ-υποδοχέα, χρησιμοποιώντας στέρηση ανδρογόνου σε συνδυασμό με τη διπλή dutasteride αναστολέα SRD5A. Τ και DHT είναι βιολογικά ενεργές υψηλής συγγένειας συνδέτες AR. Ωστόσο, οι μεταξύ 3-10 φορές υψηλότερες συγκεντρώσεις των Τ που απαιτείται για να ασκήσει τις ίδιες AR-μεσολάβηση μεταγραφικό επιδράσεις της DHT. [25], [26] Έτσι, η μείωση των επιπέδων DHT με αναστολή μετατροπή του Τ σε DHT μπορεί να αντιπροσωπεύει μια αποτελεσματική μέθοδο προ-υποδοχέα να καταστέλλει τη συνολική μέγεθος των βιοδραστικών σηματοδότηση AR. Υποθέσαμε ότι η επίδραση της αναστολής SRD5A στην αύξηση του όγκου θα συνδέσει με ενδονεοπλαστική επίπεδα ανδρογόνων ή /και την έκφραση του στεροειδούς βιοσυνθετικών ενζύμων που υποδηλώνουν μια σχετική εξάρτηση από την DHT μεσολάβηση ανάπτυξης. Παράγοντες που καθορίζουν τη σχετική απόκριση των όγκων του προστάτη να προ-υποδοχέα ανδρογόνων καταστολή με παράγοντες όπως αναστολείς SRD5A είναι άγνωστα, αλλά θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως προγνωστικοί δείκτες της αποτελεσματικότητας για αυτούς τους παράγοντες στην πρόληψη του καρκίνου του προστάτη, ή ως ένα συστατικό ADT σε προχωρημένη νόσο.

Υλικά και Μέθοδοι

LuCaP Ανθρωπίνων Καρκίνος του προστάτη Ξενομοσχεύματα

Αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου του Εθνικού Ινστιτούτου Υγείας. Όλα τα πειράματα με ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τα πρωτόκολλα που εγκρίθηκε από την επιτροπή Χρήση Φροντίδα Κέντρο Θεσμικών Ζωικά Fred Hutchinson (αρχείο 1775). Όλες οι χειρουργικές επεμβάσεις πραγματοποιήθηκε υπό ισοφλουορανίου αναισθησία, και όλες οι προσπάθειες έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία. Οι γραμμές LuCaP35 και LuCaP96 είναι ξενομοσχεύματα που προέρχονται ασθενή που καθιερώθηκαν ως μέρος της τράπεζας ιστών του Πανεπιστημίου της Ουάσινγκτον, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27], [28] και επιλέχθηκαν για ανάλυση καθώς και οι δύο γραμμές καταδεικνύουν ευαίσθητες ευνουχισμό ανάπτυξη στην άθικτη αρσενικά ποντίκια. Εν συντομία, LuCaP35 προήλθε από ένα μετάσταση λεμφαδένα που λαμβάνεται από ένα 66-ετών καυκάσιος αρσενικό με CRPC. LuCaP96 προήλθε από διουρηθρική εκτομή του πρωτογενούς Gleason 9 καρκίνωμα του προστάτη που λαμβάνεται σε ένα 61 ετών καυκάσιος αρσενικό ένα μήνα πριν από την τεκμηρίωση του ευνουχισμού ανθεκτική νόσο. Και στις δύο ξενομοσχεύματα ο εξονικές αλληλουχία DNA AR είναι άγριου τύπου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Αρσενικά CB-17 SCID ποντίκια (Charles River Laboratories, Wilmington ΜΑ) εμφυτεύθηκαν υποδόρια με 30 mm

3 τεμαχίων όγκου . Όταν οι όγκοι έφτασαν κατά μέσο όρο 300 mm

3, τα ποντίκια (LuCaP35 n = 62? LuCaP96 n = 65), ευνουχίστηκαν (Cx) και τυχαιοποιήθηκαν σε αγωγή με όχημα ή Dutasteride (Dut) θεραπείας άνω των 8 εβδομάδων. Dutasteride χορηγήθηκε (PEG μονολαυρικό (Sigma 460133) /1% Tween 80 (Sigma P4780)) με από του στόματος καθετηριασμό 5 ημέρες την εβδομάδα σε έναν όγκο 200 μΐ. Ο όγκος του όγκου προσδιορίστηκε με τον ακόλουθο τύπο (μακρά και βραχέα μήκη άξονα σε mm): μακρά × (Short∧2) /2. Όγκοι από ένα υποσύνολο των ποντικών σε κάθε ομάδα συλλέχθηκαν σε πρώιμα χρονικά σημεία της αγωγής (μέγεθος όγκου -500 mm

3? Εύρος 7-21 ημέρες). Όταν οι όγκοι έφθασαν περίπου 750-1000 mg σε μέγεθος, τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία σύμφωνα με το πρωτόκολλο και τις ξενομοσχεύματα συλλέγονται και καταψύχονται για τον προσδιορισμό των ανδρογόνων ιστών και εκχύλιση του ολικού RNA. Ο μέσος αριθμός των ημερών ποντικών στις ομάδες Cx + Dut ήταν εκτός θεραπείας dutasteride στα χρονικά όγκοι αποκόπηκαν ήταν 211 ημέρες για LuCaP35, και 96 ημέρες για LuCaP96. Dutasteride γενναιόδωρα παρέχεται από την GlaxoSmithKline.

Όλες οι διαδικασίες που αφορούν τα ανθρώπινα θέματα εγκρίθηκαν από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review του Πανεπιστημίου της Washington Medical Center, και όλα τα θέματα που υπέγραψε γραπτή συγκατάθεση. Οι ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο του προστάτη υποβλήθηκαν σε ταχεία αυτοψίες υπό την αιγίδα του Πανεπιστημίου της Ουάσιγκτον καρκίνου του προστάτη Δότης αυτοψίας Προγράμματος, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [9], [27]. Αυτοψίες πραγματοποιήθηκαν μέσα σε 4-10 ώρες του θανάτου. Δείγματα όλων των ακαθάριστων μεταστατικές θέσεις όγκου ελήφθησαν κάτω από στείρες συνθήκες και η θέση και ο όγκος του οστίτη και μη οστεώδη μεταστάσεις καταγράφηκαν. Φρέσκο ​​ιστός καταψύχθηκε σε υγρό άζωτο αμέσως μετά τη συγκομιδή και διατηρήθηκε στους -80 ° C.

Στεροειδών Μετρήσεις

επίπεδα ανδρογόνων σε ξενομοσχεύματος ιστοί καθορίστηκαν με φασματομετρία μάζας (MS) χρησιμοποιώντας μεθόδους που έχουμε περιγραφεί. [29] Η διαδικασία αυτή είχε ως αποτέλεσμα ένα χαμηλότερο όριο ποσοτικοποίησης 1 pg ανά δείγμα για την τεστοστερόνη και DHT. συντελεστές ενδο-δοκιμασίας διακύμανσης που παράγεται με τη χρήση ανθρώπινου ορού για την υψηλή, μέση και χαμηλή σειρά δειγμάτων ήταν 3,5, 3,1 και 3,8% για την τεστοστερόνη και 6.3, 4.3 και 15.8% για το DHT αντίστοιχα.

Απομόνωση RNA, ποσοτική RT -PCR και ανοσοϊστοχημεία

δείγματα χρησιμοποιήθηκαν για την απομόνωση RNA, σύνθεση cDNA και ποσοτική RT-PCR χρησιμοποιώντας μεθόδους και εναρκτήρες έχουμε περιγράψει προηγουμένως. [9], [30] Η ανοσοϊστοχημική χρώση και βαθμολόγησης για AR και PSA διεξήχθη όπως έχουμε περιγράψει προηγουμένως, [31] χρησιμοποιώντας ένα πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-PSA (ϋΑΚΟ, Inc.), ένα αντίσωμα αντι-AR που κατευθύνεται στο Ν άκρο (κλώνος F36.4.1, Biogenex), και ένα αντίσωμα αντι-AR κατευθύνεται στο άκρο C (C-19, Santa Cruz). Αρνητικός immunostains ελέγχου, υποκαθιστώντας προάνοσο ανοσοσφαιρίνης του ίδιου είδους όπως εκείνη στην οποία δημιουργήθηκε το αντίσωμα, δεν έδειξε προϊόν αντίδρασης.

Στατιστικές Αναλύσεις

Για να αξιολογηθούν οι διαφορές σε τροχιά τον καρκινικό όγκο, προσδιορίσαμε πρώτα σημεία αλλαγή στις καμπύλες ανάπτυξης όγκου χρησιμοποιώντας t-τεστ για τον διαδοχικό συγκρίνουν όγκοι του όγκου κάθε δύο ημέρες. Μετά την κατάτμηση τις καμπύλες, εφαρμόσαμε ένα γραμμικό μεικτό μοντέλο για την ποσοτικοποίηση της επίδρασης της θεραπείας στην ανάπτυξη του όγκου για κάθε γραμμικό περίοδο με την παλινδρόμηση όγκου του όγκου καταγραφής κατά την ημέρα της μέτρησης, με την ομάδα θεραπείας, και σε μια αλληλεπίδραση μεταξύ της ημέρας και της θεραπείας, ενώ αντιπροσωπεύουν μεταβλητότητα αρχικός όγκος του όγκου σε όλη ποντίκια. Επιβίωση χωρίς εξέλιξη σε ευνουχισμό εναντίον ευνουχισμό + Dutasteride ποντίκια που έλαβαν αγωγή (που ορίζεται ως το μέγεθος του όγκου & lt? 750 χιλιοστά

3) προσδιορίστηκε με ανάλυση Kaplan Meier με τη σύγκριση των καμπυλών χρησιμοποιώντας την Mantel-Haenszel logrank δοκιμή. Για την πρόβλεψη της κατά προσέγγιση μέγεθος του δείγματος σε κάθε ομάδα θεραπείας που μπορεί να είναι αναγκαία για την ανίχνευση στατιστικά σημαντική επίδραση του ευνουχισμού συν dutasteride σε σχέση με τον ευνουχισμό και μόνο, θα χρησιμοποιηθεί πλήρη περίπτωση αναδειγματοληψία για μια σειρά από μεγέθη δείγματος n = 10, 20, …, 200 πάνω από 500 bootstrap επαναλήψεις. Για κάθε μέγεθος του δείγματος και εκκίνησης επανάληψη, μπορούμε να χωρέσει ένα Cox μοντέλο αναλογικού κινδύνου και καταγράφεται η τιμή p εκτιμώμενη αναλογία κινδύνου και.

Για την ανάλυση των δεδομένων qRT-PCR, το κατώφλι μέση του κύκλου (Ct) για κάθε γονίδιο κανονικοποιήθηκε προς την έκφραση του γονιδίου housekeeping RPL13A στο ίδιο δείγμα (δέλτα Ct). Η μέση έκφραση RPL13A ήταν 15,6 +/- 0,5 (μέση τιμή +/- SD) και 14,1 +/- 0,8 σε LuCaP35 και LuCap96 όγκους αντίστοιχα. δύο δειγμάτων t-tests του Welch χρησιμοποιήθηκαν για να συγκριθούν οι διαφορές στην ανδρογόνων επίπεδα και διαφορές στις μέσες τιμές δέλτα Ct για κάθε γονίδιο μεταξύ των ομάδων θεραπείας χωρίς διόρθωση για πολλαπλές δοκιμές. Ρ τιμές & lt? 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές. Η πολλαπλή μεταβολή υπολογίστηκε με τη μέθοδο της δέλτα-δέλτα Ct (fold = 2

ΔΔCt). Η πρώτη DCT, το ddCT και φορές οι αλλαγές που παρουσιάζονται στα συμπληρωματικά στοιχεία.

Αποτελέσματα

καρκίνους του προστάτη αντιμετώπιση των ανδρογόνων καταστολή καταδείξει τις εγγενείς διαφορές στα βασικά επίπεδα εντός του όγκου ανδρογόνων και στερεοειδογόνο γονιδιακή έκφραση

για να αξιολογεί τα χαρακτηριστικά των όγκων που σχετίζονται με την ανταπόκριση και την αντίσταση στην AR μονοπάτι-κατευθυνόμενη θεραπεία, προσδιορίσαμε το πρώτο εντός του όγκου ανδρογόνων και στερεοειδογόνο γονιδιακής έκφρασης σε δύο προστάτη ασθενή με καρκίνο που προέρχεται ξενομοσχευμάτων, LuCaP35 και LuCaP96. Αυτές οι γραμμές εκφράζουν AR και PSA, (Εικόνα 1Α) και να απαντήσετε σε ευνουχισμό με υποχώρηση του όγκου και της παράτασης στην επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS), αλλά τελικά να εξελιχθεί σε ευνουχισμό ανθεκτικά αύξηση (p & lt? 0.0001 και για τα δύο? Σχήμα 1Β, 1C). Αξίζει να σημειωθεί ότι, LuCaP35 και LuCaP96 όγκων εκτομή από ποντίκια με άθικτη λειτουργίας των γονάδων επέδειξαν αξιοσημείωτες διαφορές στα βασικά επίπεδα εντός του όγκου ανδρογόνα (Σχήμα 1D): LuCaP96 όγκοι έχουν υψηλότερα επίπεδα Τ και παρόμοια επίπεδα DHT, και έτσι μια υψηλότερη αναλογία ενδοογκική T: DHT σε σύγκριση με LuCaP35 όγκους, στις 10:01 και 2:01, αντίστοιχα (LuCaP96 Τ = 10.2 ± 6.5 ng /gm? DHT = 0.9 ± 0.4 ng /gm? LuCaP35 Τ = 2.6 ± 2.0 ng /gm? DHT = 1.4 ± 0.8 ng /gm, Πίνακας S1)

(Α) δείγματα Αντιπροσωπευτικά FFPE κάθε ξενομοσχεύματος βάφτηκαν με αιματοξυλίνη και εοσίνη (η &?. Ε) και για την έκφραση του υποδοχέα ανδρογόνων (AR) και PSA όπως υποδεικνύεται. Η γραμμή κλίμακας (που απεικονίζεται στα στοιχεία του PSA για την ευκολία της απεικόνισης) είναι 50 μm. Kaplan-Meier οικόπεδα της επιβίωση χωρίς εξέλιξη (που ορίζεται ως το μέγεθος του όγκου & lt? 750 χιλιοστά

3) σε ποντίκια που φέρουν LuCaP35 (Β) ή LuCaP96 (C) ξενομοσχεύματα. Ακέραια αρσενικά SCID ποντίκια εμφυτεύθηκαν υποδόρια με 30 mm

3 τεμάχια των υποδεικνυόμενων ξενομοσχεύματα. Όταν οι όγκοι έφθασαν ~ 300 mm

3, τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία εντάχθηκαν σε ομάδες που ήταν είτε αριστερά άθικτα (Όχι Cx) ή ευνουχισμένα (Cx). Ρ-τιμές για τις συγκρίσεις καμπύλη παρήχθησαν χρησιμοποιώντας δοκιμή του Mantel-Haenszel logrank. (D) μέση και τυπική απόκλιση της τεστοστερόνης ιστού (Τ, μαύρη μπάρα) και DHT (γκρι μπάρα) επίπεδα μετρήθηκαν με φασματομετρία μάζας σε όγκους της ενδεικνυόμενης ξενομοσχεύματος (περάστηκαν σε άθικτα ποντίκια). (Ε) Η σχετική έκφραση των μεταγραφών για τους υποδεικνύεται στερεοειδογόνο γονίδια υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο dCt δέλτα (πάσο αλλαγή = 2∧ddCt). Τα γονίδια εκφράζονται διαφορικά σε LuCaP35 εναντίον LuCaP96 εντός μία τάξη μεγέθους υποδεικνύονται μέσα στις γκρίζες γραμμές. Σημαντικές διαφορές (με δοκιμή t του Welch? Ρ & lt? 0,05) υποδεικνύονται από τους μαύρους κύκλους? λευκοί κύκλοι υποδεικνύουν γονίδια που δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ LuCaP35 και LuCaP96 (όλες οι τιμές που αναφέρονται στο συμπληρωματικό δεδομένων 2) τρίγωνα .Upward δείχνουν υψηλά διαφορικά εκφραζόμενων γονιδίων ειδικά οδηγώντας σε αυξημένη T (AKR1C3, 40 φορές) ή αυξημένα επίπεδα DHT (SRD5A1, 5,0 φορές ? 17BHSD10 4,8 φορές? RLHSD, 99 φορές). Προς τα κάτω τρίγωνα δείχνουν υψηλά διαφορικά εκφρασμένων γονιδίων ειδικά διαμεσολάβηση DHT καταβολισμό (AKR1C2, 7 φορές? UGT2B15, 3000 φορές).

Η

Για τον προσδιορισμό των μηχανισμών που συμβάλλουν στην βασική διαφορές στην ενδονεοπλαστική Τ και οι συγκεντρώσεις DHT, αξιολογήσαμε ογκοειδικό έκφραση των μεταγραφημάτων που κωδικοποιούν τα κύρια ένζυμα που εμπλέκονται στη σύνθεση στεροειδών και της υποβάθμισης (Σχήμα S1). Ενώ πολλές στερεοειδογόνο γονίδια εκφράστηκαν σε LuCaP35 εντός μιας τάξης μεγέθους της έκφρασης τους σε LuCaP96 (Σχήμα 1 Ε), αρκετές διαφορές σύμφωνα με τις διαφορετικά προφίλ ανδρογόνων όγκου ήταν παρούσες. Ειδικότερα, η έκφραση γονιδίων σε LuCaP35 ήταν σύμφωνο με την παραγωγή ανδρογόνων και διατήρηση των επιπέδων DHT, επιδεικνύοντας υψηλότερα επίπεδα στεροειδών βιοσυνθετικών γονιδίων όπως STAR (10 φορές) και HSD3B1 (10 φορές), υψηλότερη έκφραση των γονιδίων που μεσολαβούν την παραγωγή DHT (SRD5A1 , 5-πλάσια? 17BHSD10 4,8-φορές, RLHSD, 99-πλάσια), και χαμηλότερη έκφραση των γονιδίων που μεσολαβούν DHT καταβολισμό (AKR1C2, 7-φορές μικρότερη? UGT2B17, 3000 φορές μικρότερη). Αντίθετα, η έκφραση γονιδίου σε LuCaP96 ήταν συνεπής με την παραγωγή και τη συντήρηση των Τ, με σημαντικά υψηλότερα επίπεδα AKR1C3 (40-φορές? Συνεπής με την αύξηση της παραγωγής Τ από ανδροστενεδιόνη), σε συνδυασμό με χαμηλότερα επίπεδα SRD5A1 (το κύριο ένζυμο υπεύθυνο για τη μετατροπή του Τ σε DHT σε νεοπλασματικό ιστό του προστάτη) [32] και τα υψηλότερα επίπεδα των ενζύμων καταβολισμού DHT AKR1C2 και UGT2B17. (Τα όρια του κύκλου και διπλώστε τις αλλαγές για όλα τα γονίδια στο Σχήμα 1Ε παρουσιάζονται στον Πίνακα S2). Δεδομένου ότι αυτοί οι όγκοι διαδόθηκαν σε γενετικά πανομοιότυπα ποντικού φιλοξενεί, τα δεδομένα αυτά προσδιορίζουν εγγενή όγκου-ειδικά διακύμανση των ανδρογόνων μεταβολικές προγράμματα με αποκορύφωμα την έντονη εντός του όγκου διαφορές στο AR συγκεντρώσεις συνδετήρα.

Pre-υποδοχέα καταστολή ανδρογόνων μονοπάτι με ευνουχισμό συν SRD5A αναστολή καταδεικνύει αντίκτυπο όγκου-ειδικά στην καθυστέρηση της εξέλιξης σε CRPC

με δεδομένη την 5-10 φορές υψηλότερη δραστικότητα της DHT στην εμπλοκή και την ενεργοποίηση AR σε σύγκριση με το Τ, [25], [26] οι στρατηγικές έχουν στόχο τη μείωση της DHT αναστέλλοντας μεταβολισμός του Τ σε DHT μπορεί να αντιπροσωπεύει μια αποτελεσματική μέθοδο προ-υποδοχέα για την καταστολή της συνολικό μέγεθος σηματοδότηση AR. Για να προσδιορίσετε αν όγκου-ειδικές διαφορές στην βασική αναλογία εντός του όγκου Τ: DHT θα μπορούσε να επηρεάσει την κλινική ανταπόκριση σε παράγοντες που στοχεύουν μετατροπή του Τ σε DHT, που αντιμετωπίζονται ομάδες των ποντικών που φέρουν LuCaP35 και LuCaP96 όγκους με ευνουχισμό μόνη της, ή τον ευνουχισμό συν τον αναστολέα διπλή SRD5A Dutasteride. Άθικτο αρσενικά SCID ποντίκια εμφυτεύτηκαν υποδορίως με 30 mm

3 κομμάτια LuCaP35 ή LuCaP96 όγκους. Μετά από ανάπτυξη για ~ 300 mm

3, τα ποντίκια ευνουχισμένοι και τυχαιοποιήθηκαν σε όχημα ή Dutasteride χορηγείται από του στόματος καθετηριασμό για 8 εβδομάδες.

μέσοι όγκοι του όγκου σε όγκους LuCaP35 ήταν αξιόλογα κατασταλμένα από το συνδυασμό του ευνουχισμού συν dutasteride vs. ευνουχισμός μόνο του (Σχήμα 2Α). Η ανάπτυξη του όγκου συνέβη σε τρία διακριτά στάδια μετά την έναρξη της θεραπείας: μια σύντομη περίοδος συνεχούς αύξησης (ημέρα 0-14), μια παρατεταμένη φάση υποχώρηση του όγκου ή σταθερότητα (ημέρες 14-75), και μια τελική φάση όγκου εκ νέου ανάπτυξη ( ημέρες 75-200). Για να ποσοτικοποιηθεί καλύτερα τον αντίκτυπο των dutasteride, συγκρίναμε όγκου τροχιές όγκο, σε ευνουχισμό εναντίον ευνουχισμό συν Dutasteride ομάδες χρησιμοποιώντας ένα γραμμικό μεικτό μοντέλο εφαρμοστεί σε κάθε φάση μετά τη θεραπεία. Dutasteride συν ευνουχισμός μείωσε σημαντικά την επί τοις εκατό αύξηση σε όγκο του όγκου ανά ημέρα έναντι ευνουχισμό μόνο του στην αρχική «on-θεραπεία» στάδιο (από 3,2% [95% CI 2.7 έως 3.7] σε 0,9% [95% CI 0,2-2,0]? ​​Ρ & lt ? 0,0001), και αύξησε το ποσοστό της υποχώρησης του όγκου ανά ημέρα στην επόμενη φάση (από 1,2% [95% CI 0,5-1,8] σε 3,6% [95% CI 2,0 – 5,3]? ρ & lt? 0,0001). Ωστόσο, μετά τη διακοπή της θεραπείας, dutasteride αγωγή όγκων αποδεικνύεται ταχύτερη τοις εκατό re-growth ανά ημέρα (από 1,1% [95% CI 0.9-1.3] σε 2,3% [95% CI 1.8-2.9]? P & lt? 0,0001), γεγονός που υποδηλώνει τη συνέχιση της θεραπείας θα πρέπει να διατηρηθεί η θεραπευτική αποτελεσματικότητα.

Οι μέσοι όγκοι των όγκων σε ποντίκια που φέρουν LuCaP35 (Α) και LuCaP96 (Β) ξενομοσχεύματα. Ακέραια αρσενικά SCID ποντίκια εμφυτεύτηκαν υποδορίως με 30 mm

3 τεμάχια της ενδεικνυόμενης ξενομοσχεύματος. Όταν οι όγκοι έφθασαν ~300mm

3, τα ποντίκια ευνουχισμένα και τυχαία εντάχθηκαν σε ομάδες αγωγή είτε με φορέα (Cx) ή Dutasteride (Cx + Dut) για 8 εβδομάδες (συμβολίζεται με μαύρη γραμμή πάνω x-άξονα). Μέσοι καρκινικοί όγκοι απεικονίζονται για κάθε ομάδα αγωγής στις υποδεικνυόμενες ημέρες μετά την εγγραφή (Cx, μαύρα τετράγωνα? Cx + Dut, λευκοί κύκλοι).

Η

Αντίθετα, οι όγκοι του όγκου σε όγκους LuCaP96 δεν είχαν κατασταλεί από Εκτός των dutasteride να ευνουχισμού (Σχήμα 2Β), χωρίς καμία αλλαγή στην αναλογία κινδύνου (HR) για την PFS (HR 0,9, p = 0,97? δεν φαίνεται). Για να εξεταστεί κατά πόσο η μη σημαντική διαφορά ήταν λόγω του αριθμού των ζώων που bootstrapped από τα αρχικά δεδομένα 500 φορές και βρέθηκε ότι ακόμη και με n = 170 ποντίκια ανά σκέλος θεραπείας, μια μέτρια (HR 1.4) αλλά στατιστικά σημαντική βελτίωση στην επιβίωση παρατηρήθηκε μόνο στο 50% των επαναλήψεων, γεγονός που υποδηλώνει την πιθανότητα ανίχνευσης ενός κλινικά σημαντική επίδραση της θεραπείας σε μια μεγαλύτερη μελέτη ήταν χαμηλή. Συνολικά, αυτές οι παρατηρήσεις καταδεικνύουν ότι οι προ-υποδοχέα καταστολή ανδρογόνων μονοπάτι με ευνουχισμό συν SRD5A αναστολή μπορεί να καθυστερήσει την εξέλιξη σε ανθεκτικά ευνουχισμό ανάπτυξης. Ωστόσο αυτή η απόκριση δεν είναι καθολική, αλλά μάλλον φαίνεται να είναι τυπο-ειδικά όγκου, και συνδέεται με τα εν λόγω όγκους που εμφανίζουν ένα ανδρογόνο μεταβολικό προφίλ ένζυμο που κατευθύνονται στη διατήρηση ενδοογκική επίπεδα DHT όπως LuCaP35, αντί για ένα T-κυρίαρχο όγκου όπως LuCaP96.

το μέγεθος του όγκου κατά την έναρξη της θεραπείας επηρεάζει την μακροπρόθεσμη αντιμετώπιση των ανδρογόνων καταστολή συν SRD5A αναστολή

για να εξετάσει περαιτέρω τα χαρακτηριστικά του όγκου που σχετίζονται με την απάντηση να προ-υποδοχέα αναστολή AR οδού, προσδιορίσαμε αν η απάντηση στη θεραπεία είχε σχέση με το μέγεθος του όγκου κατά την έναρξη της θεραπείας. Παρόλο που η μελέτη σχεδιάστηκε για να αρχίσει θεραπεία σε έναν όγκο όγκου ~ 300 mm

3, logistics των πειραμάτων σε ζώα, οδήγησε σε μια μετρήσιμη μεταβολή στο μέγεθος του όγκου κατά την έναρξη της μελέτης. Εμείς αυθαίρετα ομαδοποιούνται όγκων σε ομάδες των & lt? 250 χιλιοστά

3, 250-400 mm

3, και & gt? 400 χιλιοστά

3 κατά την ένταξη και συνέκρινε την επίδραση του ευνουχισμού εναντίον ευνουχισμό συν dutasteride σε κάθε ομάδα . Αξιοσημείωτα, η σημαντική βελτίωση στην μέση επιβίωση προσδίδεται από dutasteride σε ολόκληρη την ομάδα LuCaP35 (από 152 έως 337 ημέρες, HR για εξέλιξη 2.8 [95% CI 01.04 έως 04.06], ρ = 0,0015? Σχήμα 3Α), εμφανίστηκε κυρίως λόγω πρόσκρουσης σε όγκους που ήταν μικρότερο (& lt? 250 χιλιοστά

3) κατά τη στιγμή της εγγραφής (HR για την εξέλιξη 7.3 [95% CI 2,2 – 30], p & lt? 0,0015, έναντι ευνουχισμό μόνο? Σχήμα 3Β). Σε αντίθεση, ο συνδυασμός του ευνουχισμού συν 8 εβδομάδες dutasteride έκανε όχι στατιστικά επιπτώσεις PFS σε όγκους μέτρηση 250-400 mm

3 ή & gt? 400 χιλιοστά

3 κατά την εγγραφή (δεν φαίνεται)? Ωστόσο, αυτό μπορεί να αντανακλά μειωμένη δύναμη που συνδέεται με την post-hoc υπο-κατάταξης των ομάδων

Kaplan-Meier οικόπεδα της επιβίωση χωρίς εξέλιξη. (ορίζεται ως το μέγεθος του όγκου & lt? 750 mm3) σε όλους τους όγκους LuCaP35 αντιμετωπίζονται με και μόνο ο ευνουχισμός (Cx) έναντι ευνουχισμό + Dutasteride (Cx + Dut) (Α), και σε όγκους που εγγράφονται σε θεραπεία όταν οι όγκοι ήταν & lt? 250 χιλιοστά

3 (Β). Ρ-τιμές για τις συγκρίσεις καμπύλη παρήχθησαν χρησιμοποιώντας δοκιμή του Mantel-Haenszel logrank. Η μέση καμπύλες ανάπτυξης όγκου του όγκου στις ενδεικνυόμενες ημέρες μετά την εγγραφή στο LuCaP35 όγκους που εγγράφονται σε θεραπεία όταν οι όγκοι ήταν & lt? 250 χιλιοστά

3 (C), μεταξύ 250-400 mm

3 (D), και & gt? 400 χιλιοστά

3 (Ε). θεραπεία Dutasteride συνεχίστηκε για 8 εβδομάδες (συμβολίζεται με μαύρη γραμμή πάνω από τον άξονα χ) στην ομάδα ευνουχισμό + dutasteride.

Η

Επιθεώρηση των καμπυλών όγκου του όγκου πρότεινε μια κατασταλτική επίδραση των dutasteride διατηρήθηκε ακόμη και μετά τη διακοπή της θεραπεία για όγκους & lt? 250 χιλιοστά

3 κατά την εγγραφή (Σχήμα 3C). Σε αντίθεση, η ανάπτυξη του όγκου κατεστάλη σε σχέση με ευνουχισμό σε όγκους & gt? 250 mm

3 κατά την εγγραφή (Σχήμα 3Δ, 3Ε), αλλά μόνο ενώ όγκοι ήταν υπό θεραπεία. Μετά τη διακοπή, το μέγεθος του όγκου σε αυτές τις κοινωνικές ομάδες που εμπλέκονται σε όγκους που έλαβαν θεραπεία με ευνουχισμό και μόνο, έτσι ώστε παρατηρήθηκε τελικά καμία διαφορά στην επιβίωση. Το εναρκτήριο όγκος του όγκου δεν συσχετίστηκε με την επιβίωση σε LuCaP96 όγκους που έλαβαν θεραπεία με dutasteride (δεν φαίνεται).

Συστημική καταστολή ανδρογόνων συν αναστολή SRD5A μειώνει σημαντικά τα επίπεδα DHT όγκου σε σύγκριση με μόνη

ανδρογόνων καταστολή

Για να προσδιοριστεί εάν η διαφορική επίδραση της αναστολής του SRD5A στην αύξηση του όγκου αντανακλούσε τη διαφορά στην καταστολή της ενδοογκική ανδρογόνα, μετρήσαμε τα επίπεδα Τ και DHT σε όγκους εκτομή μετά τη θεραπεία. Και στους δύο τύπους καρκινικών LuCaP35 και LuCaP96, σημαίνουν όγκου επίπεδα DHT μετράται σε 3-21 ημέρες (υποδεικνύεται με δικέφαλο βέλη στο Σχήμα 4Α και 4Β) ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε ευνουχισμό συν dutasteride έναντι της μονοθεραπείας ομάδες ευνουχισμό, με τιμές σε LuCaP35 καταστέλλεται από 0,40 ± 0,56 ng /gm έως 0,02 ± 0,04, p = 0,007 και LuCaP96 από 0,10 ± 0,08 ng /gm έως 0,02 ± 0,01, p = 0,005 (συνοψίζονται στον πίνακα S1).

Ο ιστός της τεστοστερόνης (Τ , μαύρες μπάρες) και DHT (γκρίζες ράβδοι) επίπεδα μετρήθηκαν με φασματομετρία μάζας σε LuCaP35 (Α) και LuCap96 (Β) όγκους εκτομή από ανέπαφα ποντικούς (αριθ Cx), και από ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ευνουχισμό μόνο (Cx) ή ευνουχισμός + dutasteride (Cx + Dut) σε πρώιμα χρονικά σημεία (d3-21, ενώ ακόμα σε θεραπεία, που υποδεικνύεται από τα βέλη δικέφαλος), ή σε ευνουχισμό ανθεκτικά re-ανάπτυξη (που ορίζεται ως & gt? 750 χιλιοστά

3). Οι τιμές Ρ υπολογίζονται από δύο δείγματα t τεστ του Welch (p & lt? 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές). Ενιαία αστέρια δείχνουν μια στατιστικά σημαντική διαφορά στα επίπεδα DHT μεταξύ Cx έναντι Cx + Dut επεξεργασμένων δειγμάτων σε d3-21 της θεραπείας. Διπλά αστέρια δείχνουν μια σημαντική διαφορά στα επίπεδα DHT μεταξύ των δειγμάτων Cx έναντι Cx + Dut θεραπεία, ακόμη και μετά τον ευνουχισμό επαναλαμβανόμενες εκ νέου ανάπτυξη. Δεν υπάρχουν άλλες συγκρίσεις μεταξύ Cx εναντίον ομάδων αντιμετωπίζονται Cx + Dut ήταν σημαντικές. Η έκφραση του πλήρους μήκους (FL) AR και το AR παραλλαγή 7 (ARV7) παραλλαγή ματίσματος περικομμένο μετρήθηκε σε LuCaP35 (C) και LuCaP96 (D) κατά το χρόνο της όγκου εκ νέου αύξηση έως 750 mm

3. έκφραση μεταγραφής μετρήθηκε με qRT-PCR και ομαλοποιήθηκε ως προς την έκφραση του γονιδίου housekeeping RPL13A μέσα σε κάθε δείγμα για να δώσει το κατώφλι κύκλου δέλτα (DCT). Η σχετική διαφορά στην έκφραση μεταξύ των ομάδων θεραπείας ενδεικνυόμενη υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο dCt δέλτα (πάσο αλλαγή = 2∧ddCt). Οι τιμές Ρ υπολογίζονται από δύο δείγματα t τεστ του Welch (p & lt? 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές)

Η

Είναι ενδιαφέρον ότι, ενώ τα επίπεδα Τ σε όγκους LuCaP35 παρέμειναν σε καταστολή και στις δύο ομάδες θεραπείας (Εικόνα 4Α, μαύρες μπάρες), DHT. επίπεδα σε όγκους LuCaP35 επαναλαμβανόμενες μετά συνδυασμένη θεραπεία (μέσος όρος 211 ημέρες μετά τη διακοπή της dutasteride) ήταν παρόμοια με όγκους επαναλαμβανόμενες μετά τον ευνουχισμό μόνο (0,54 ± 0,46 ng /gm και 0,61 ± 0,63 ng /gm, αντίστοιχα? γκρι μπάρες). Σε αντίθεση, τα επίπεδα DHT στο LuCaP 96 όγκους επαναλαμβανόμενες μετά συνδυασμένη θεραπεία (μέσος όρος 96 ημέρες μετά τη διακοπή της dutasteride) παρέμεινε καταστέλλεται μήνες μετά τη διακοπή της dutasteride (Σχήμα 4Β, 0,04 ± 0,04 ng /gm σε σύγκριση με 0,53 ± 0,46 ng /gm μόνο για ευνουχισμό ), ενώ τα επίπεδα Τ έδειξε σημαντική ανασύσταση μετά είτε μόνη της είτε μετά από συνδυασμένη θεραπεία (1,34 ± 0,89 ng /gm και 0,79 ± 0,71 ng /gm, αντίστοιχα ευνουχισμό, και τον πίνακα S1). Αξίζει να σημειωθεί ότι ο χρόνος ημίσειας ζωής της dutasteride σε ποντικούς είναι λιγότερο από 2 ημέρες, [33] απαγορεύει υπολειμματική επίδραση της αναστολής SRD5A για τις συγκεντρώσεις στεροειδών σε 96 έναντι 35 όγκων κατά το χρόνο της εκτομής. επίπεδα όγκου ανδρογόνων σε όγκους LuCaP35 κατά το χρόνο της εκ νέου ανάπτυξης δεν συνδέθηκαν με το μέγεθος του όγκου κατά την εγγραφή (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η τάση προς ανασύσταση των επιπέδων DHT σε LuCaP35 και του Τ σε LuCaP96 είναι συνεπής με η εγγενής διακύμανση των ανδρογόνων μεταβολική προγράμματα που ευνοούν DHT vs. Τ προσδιορίζονται στις χωρίς θεραπεία όγκων (Σχήμα 1 Ε). Περαιτέρω, η σχετική έκφραση γονιδίων σε στερεοειδογόνο LuCaP35 εναντίον LuCaP96 όγκων επαναλαμβανόμενα μετά τον ευνουχισμό εναντίον ευνουχισμό συν dutasteride ήταν πολύ παρόμοια με τα πρότυπα έκφρασης που παρατηρούνται σε χωρίς αγωγή όγκων (Εικόνα S2). Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι dutasteride ανέστειλε αποτελεσματικά την παραγωγή DHT σε αμφότερους τους τύπους όγκου, και ότι η ανάπτυξη του όγκου LuCaP35 είναι ευαίσθητο στην ενισχυμένη καταστολή προ-υποδοχέα της DHT επιτυγχάνονται με το συνδυασμό του ευνουχισμού συν SRD5A αναστολή, ενώ LuCaP96 δεν είναι.

Συστημική καταστολή ανδρογόνων συν αναστολή SRD5A σχετίζεται με όγκο ειδικού τύπου διαφορές στην επαγωγή πλήρους μήκους Ar και Ar παραλλαγές ματίσματος

ανθεκτικά ευνουχισμός όγκους του προστάτη συχνά χαρακτηρίζονται από αυξημένη έκφραση του πλήρους μήκους AR ( AR

FL), και ως αναφέρθηκε πρόσφατα, από την αυξημένη έκφραση του AR

sv που δεν έχουν την LBD και συνεπώς προσδίδουν συστατική ανεξάρτητη συνδεσμικού δραστικότητα AR. Οι διαφορές στο AR

FL και AR

sv επίπεδα μπορεί να συμβάλει στη διαφοροποίηση στις απαντήσεις της ανάπτυξης του όγκου μετά από καταστολή προσδέτη προ-υποδοχέα. Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε την έκφραση του AR

FL και η επικρατούσα AR

SV προσδιορίζονται στο ανθρώπινο CRPC δείγματα, AR

V7 (η οποία κωδικοποιεί την ίδια πρωτεΐνη όπως AR

V3) σε LuCaP35 και LuCaP96 όγκων επαναλαμβανόμενα μετά ADT και Dutasteride [13], [14], [16], [17], [34].

σε σύγκριση με τους όγκους εκτομή από ανέπαφα τα ποντίκια, LuCaP35 όγκους επαναλαμβανόμενες μετά τον ευνουχισμό ή μετά τον ευνουχισμό συν δουταστερίδη αποδειχθεί μια αύξηση 2,0 φορές στην έκφραση του AR

FL, και καμία αύξηση στο AR

V7 (Σχήμα 4C, και τον πίνακα S3). Σε αντίθεση, ενώ οι όγκοι LuCaP96 επαναλαμβανόμενες μετά τον ευνουχισμό αποδεικνύεται μάλλον ένα παρόμοιο 1,9 φορές αυξημένη έκφραση του AR

FL, παρουσίασαν επίσης σημαντική κατά 10 φορές αύξηση στην έκφραση του AR

V7 (Εικόνα 4D).