Αφηρημένο

Παρά την ταχεία πρόοδο στη χημειοθεραπεία και χειρουργική εκτομή στρατηγικές, καρκίνο του παγκρέατος παραμένει η τέταρτη κύρια αιτία του καρκίνου σχετίζονται θανάτων στις Ηνωμένες Πολιτείες με ποσοστό επιβίωσης 5-χρόνια μικρότερη από 5%. Ως εκ τούτου, τα νέα θεραπευτικά μέσα για την πρόληψη και θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος χρειάζονται επειγόντως. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η επίδραση της pristimerin, μία ένωση quinonemethide τριτερπενοειδείς απομονώνεται από Celastraceae και Hippocrateaceae, για αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και επαγωγή απόπτωσης σε τρία παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1, τόσο μονοθεραπεία και σε συνδυασμό με γεμσιταβίνη. Η θεραπεία με pristimerin μείωσε την κυτταρικού πολλαπλασιασμού και των τριών παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα σε μια δόση και το χρόνο-εξαρτώμενο τρόπο. Θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων με pristimerin οδήγησε επίσης σε σύλληψη G1-φάση, η οποία ήταν έντονα σχετίζεται με μια αξιοσημείωτη μείωση στο επίπεδο των κυκλινών (D1 και Ε) και εξαρτώμενων από κυκλίνη κινασών (CDK2, CDK4 και CDK6) με ταυτόχρονη επαγωγή WAF1 /p21 και KIP1 /p27. θεραπεία Pristimerin επίσης οδήγησε σε αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο, η διάσπαση της κασπάσης-3, της διαφοροποίησης στις εκφράσεις του Bcl-2 πρωτεϊνών της οικογένειας, η αναστολή της μετατόπισης και της δραστηριότητας δέσμευσης DNA του ΝΡ-κΒ. Επιπλέον, pristimerin ενίσχυσε την αναστολή της ανάπτυξης και της απόπτωσης επαγωγικές επιδράσεις της γεμσιταβίνης και στις τρεις παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, τουλάχιστον εν μέρει, με αναστολή συστατική καθώς γεμσιταβίνη επαγόμενη ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ σε αμφότερες δραστικότητα δέσμευσης DNA και μεταγραφική δραστικότητα . Στο σύνολό τους, τα στοιχεία αυτά παρέχουν την πρώτη απόδειξη ότι pristimerin έχει μεγάλες δυνατότητες για την ανάπτυξη ως νέου παράγοντα κατά του καρκίνου του παγκρέατος

Παράθεση:. Wang Υ, Ζου Υ, Zhou Η, Jia G, Liu J, Han Β, et al. (2012) Pristimerin Προκαλεί G1 σύλληψης, προκαλεί απόπτωση, και ενισχύει την χημειοευαισθησία να Γεμσιταβίνη σε κύτταρα καρκίνου του παγκρέατος. PLoS ONE 7 (8): e43826. doi: 10.1371 /journal.pone.0043826

Επιμέλεια: Sharmila Shankar, Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 16 του Απρίλη του 2012? Αποδεκτές: 30 Ιουλίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 28 Αυγούστου 2012 |

Copyright: © Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει με επιχορηγήσεις από το Ίδρυμα Στήριξης New Century για ελιτίστικη του κινεζικού υπουργείου Παιδείας (NCET-07-0248), η επιστημονική Ίδρυμα Επιφανείς Νεολαίας της επαρχίας Heilongjiang, Κίνα (JC200717), του Επιστημονικού και Τεχνολογικού Έργου της επαρχίας Heilongjiang , Κίνα (GC09C407-2), η έρευνα ειδικού ταμείου για την βιομηχανία της ευημερίας των πολιτών της υγείας (201.202.007) και το Εθνικό Φυσικό Επιστημονικό Ίδρυμα της Κίνας (81170431, 81101799). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια από τις πιο επιθετική και θανατηφόρα ανθρώπινους καρκίνους, η οποία έχει αυξηθεί σταθερά σε συχνότητα τις τελευταίες δεκαετίες, και είναι σήμερα η τέταρτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες. Η συλλογική 1-ετής επιβίωση από τη στιγμή της διάγνωσης σε οποιοδήποτε στάδιο είναι μόλις 26%, ενώ μια μακροπρόθεσμη συνολική επιβίωση (OS) πέφτει στο & lt? 5% [1]. Το 2010, υπολογίστηκε 43.140 Αμερικανοί είχαν διαγνωστεί με καρκίνο του παγκρέατος και 36.800 έχασαν τη ζωή τους από τη νόσο [2]. Ο κύριος λόγος για μια τέτοια κακή πρόγνωση του καρκίνου του παγκρέατος οφείλεται κυρίως στην έλλειψη έγκαιρης διάγνωσης, ιδιαίτερα επιθετική βιολογική συμπεριφορά του όγκου και της φτωχής απόκρισης στην πιο θεραπείες όπως χημειοθεραπεία, ακτινοθεραπεία, ανοσοθεραπεία και [3]. Επί του παρόντος, γεμσιταβίνη (2′-αποξυ-2 ‘, 2’-διφθοροκυτιδίνης) είναι γνωστό ότι είναι ο στυλοβάτης της θεραπείας για προχωρημένο και μεταστατικό καρκίνο του παγκρέατος. Ωστόσο, η γεμσιταβίνη αποτελέσματα της θεραπείας σε ένα ποσοστό ανταπόκρισης μικρότερο του 20% και σχετίζεται με πολλές ανεπιθύμητες ενέργειες και χημειοαντίσταση [4], [5]. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη εναλλακτικών χημειοπροληπτική και χημειοθεραπευτικών στρατηγικών χρειάζονται επειγόντως για τη θεραπεία αυτής της θανάσιμης ασθένειας.

πυρηνικού παράγοντα-κΒ (NF-κΒ), η οποία παίζει έναν κρίσιμο ρυθμιστικό ρόλο στην έκφραση των γονιδίων που εμπλέκονται σε φλεγμονή, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, εισβολή, αγγειογένεση, μετάσταση, η καταστολή της απόπτωσης, είναι συστατικώς ενεργοποιημένο σε μια ποικιλία καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα [6], [7], [8]. Επιπλέον, πολλαπλές γραμμές απόδειξης προτείνουν ότι ΝΡ-κΒ παίζει έναν κεντρικό ρόλο στην ανάπτυξη και χημειοαντίσταση του καρκίνου του παγκρέατος. Πρώτον, ο ΝΡ-κΒ ενεργοποιείται ιδιοσυστατικά σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, αλλά όχι σε φυσιολογικά παγκρεατικών ιστών ή μη καρκινογενής κυτταρικές γραμμές [7], [9]. Δεύτερον, NF-κΒ θα μπορούσε να προωθήσει παγκρεατικό την ανάπτυξη του καρκίνου λόγω της ικανότητάς της να αναστέλλει απόπτωση κυττάρων, επάγουν προϊόντα μιτογόνου γονιδίου (c-Myc και κυκλίνη D1), αυξάνουν την έκφραση των προ-αγγειογόνος παράγοντας συμπεριλαμβανομένου αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), και την προώθηση της μετανάστευσης και εισβολή των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων [10], [11], [12], [13], [14]. Τέλος, ο ΝΡ-κΒ παίζει κεντρικό ρόλο στη διαμεσολάβηση χημειοαντίσταση σε παγκρεατικού καρκίνου [15]. Μαζί, αυτό αποδείξεις εμπλέκουν το ρόλο του ΝΡ-κΒ σε καρκίνο του παγκρέατος και προτείνει παράγοντες που μπορούν να μπλοκάρουν την ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ έχουν δυνατότητες για την καταπολέμηση της ανάπτυξης του καρκίνου του παγκρέατος.

Pristimerin (Εικ. 1), ένα φυσικό quinonemethide τριτερπενοειδείς ένωση που απομονώνεται από Celastraceae και Hippocrateaceae, έχει προσελκύσει πρόσφατα ιδιαίτερο ενδιαφέρον λόγω των πιθανών χημειοπροληπτικές του ή χημειοθεραπευτικό ιδιότητες. Έχει αντιφλεγμονώδεις, αντιοξειδωτικές, ανθελονοσιακά, και εντομοκτόνες δραστηριότητες και έχει δειχθεί ότι διαθέτουν ανασταλτική δράση ανάπτυξης σε μια σειρά ανθρώπινων καρκινικών κυτταρικών σειρών, όπως του μαστού και τον καρκίνο του πνεύμονα, καρκίνο του προστάτη, τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και πολλαπλούς όγκους μυελώματος [16], [17], [18], [19], [20]. Ωστόσο, η πιθανή αποτελεσματικότητα pristimerin έναντι καρκίνου του παγκρέατος παραμένει άγνωστη.

Η

Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιήσαμε τρία ανθρώπινα παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1, για την αξιολόγηση το δυναμικό των pristimerin ως αποτελεσματικό χημειοπροληπτικός και χημειοθεραπευτικό παράγοντα κατά του καρκίνου του παγκρέατος. Έχουμε αποδείξει ότι pristimerin έντονα καταστέλλει την ανάπτυξη των τριών παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές επάγοντας G1 φάσης διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης, και να τους ευαισθητοποιεί σε γεμσιταβίνη-επαγόμενο κυτταρικό θάνατο. Επιπλέον, τα αποτελέσματα μας δείχνουν ότι οι επιδράσεις και μοριακών μηχανισμών δράσης των pristimerin σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που σχετίζονται με την αναστολή της ενεργοποίησης του ΝΡ-κΒ.

Αποτελέσματα

Pristimerin Προκαλεί αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης στο Cancer Pancratic κύτταρα

για να προσδιοριστεί η επίδραση της pristimerin στην κυτταρική ανάπτυξη, τα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τις διάφορες συγκεντρώσεις (0-1000 ηΜ) για 24 pristimerin h, 48 h και 72 h, και η επιβίωση των κυττάρων αξιολογήθηκε με CCK-8 δοκιμασίας. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2, pristimerin θεραπεία είχε ως αποτέλεσμα μια δόση και το χρόνο-εξαρτώμενη αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης και στις τρεις παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν. Ανασταλτική συγκέντρωση (IC) 50 τιμές ήταν περίπου 652,71 ηΜ, 283,78 ηΜ και 190,54 ηΜ (κατά BxPC-3) και 969,86 ηΜ, 343,62 ηΜ και 261,05 ηΜ (κατά PANC-1), και 1261,6 ηΜ, 378,46 ηΜ και 304,57 ηΜ (κατά AsPC-1) για 24 ώρες, 48 ώρες και 72 ώρες θεραπείας, αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι pristimerin έχει ισχυρή αντιπολλαπλασιαστική δράση σε καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος.

BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε απουσία ή παρουσία αυξανόμενης συγκέντρωσης του pristimerin για 24 ώρες, 48 ώρες και 72 ώρες και στη συνέχεια η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με CCK-8 δοκιμασία όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. * P & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο. ** P & lt?. 0.01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Pristimerin Προκαλεί G1 φάσης διακοπή του κυτταρικού κύκλου και τροποποιήσεις πρωτεϊνών του κυττάρου συνδέονται με τον κύκλο G1 φάσης σε παγκρεατικά κύτταρα καρκίνου

Με βάση την επελέγησαν τα προκαταρκτικά δοκιμασίες στις οποίες αξιολογήσαμε την επίδραση της pristimerin επί της ανάπτυξης καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος, οι δόσεις των 200, 400, και 600 ηΜ pristimerin για περαιτέρω in vitro μελέτες μηχανισμού. Για τη διερεύνηση του υποκείμενου μηχανισμού του pristimerin επαγόμενη αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων, η επίδραση της pristimerin στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου μελετήθηκε με Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής του περιεχομένου του κυτταρικού DNA. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3Α, η θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων με pristimerin για 48 ώρες είχε ως αποτέλεσμα σημαντική δοσοεξαρτώμενη σύλληψη κυττάρων στην G1 φάση του κυτταρικού κύκλου. Η κατανομή κυτταρικού κύκλου G1-φάση ήταν 48,73, 54,75, 63,29 και 73,62% (σε BxPC-3) και 67,23, 75,32, 79,41 και 84,29% (σε PANC-1) και 70.79, 72.46, 74.95 και 82.97% (σε AsPC- 1) σε 0, 200, 400 και 600 ηΜ συγκεντρώσεις pristimerin, αντίστοιχα. Αυτή η αύξηση της συμβολής των κυττάρων σε Ο0-G1 φάση συνοδεύτηκε με ταυτόχρονη μείωση των συνεισφορών των κυττάρων στη φάση S και τη φάση G2-M του κυτταρικού κύκλου και στις τρεις κυτταρικές σειρές που δοκιμάστηκαν. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η επαγωγή της G1 σύλληψης σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα με pristimerin μπορεί να ευθύνονται για pristimerin επαγόμενη αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης.

(Α) Επίδραση της pristimerin για τη διανομή του κυτταρικού κύκλου σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πλήρες μέσο και αγωγή είτε με pristimerin (200, 400 ή 600 nm) ή DMSO (έλεγχος) επί 48 ώρες. Μετά την αγωγή, τα κύτταρα συλλέχθηκαν με θρυψινοποίηση, πλύθηκαν με παγωμένο PBS, και υπέστη πέψη με RNase. Cellular DNA χρωματίστηκε με ιωδιούχο προπίδιο και ανάλυση κυτταρομετρίας ροής πραγματοποιήθηκε για την ανίχνευση του ποσοστού των κυττάρων στα διάφορα στάδια του κυτταρικού κύκλου, όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι. * P & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο. ** P & lt? 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο. (Β) Επίδραση των pristimerin στο επίπεδο πρωτεΐνης της κυκλίνης D1, κυκλίνη Ε, cdk 2, cdk 4, cdk 6, WAF1 /ρ21 και KIP1 /ρ27 σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στο Υλικά και Μέθοδοι, παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με pristimerin (200, 400 ή 600 nm) ή DMSO (έλεγχος) επί 48 ώρες και στη συνέχεια συλλέχθηκαν. Σύνολο κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE ακολουθούμενη από ανάλυση Western blot για ρυθμιστικές πρωτεΐνες G1 του κυτταρικού κύκλου (κυκλίνη D1, κυκλίνη Ε, cdk2, cdk4, CDK6, WAF1 /ρ21 και KIP1 /ρ27). β-ακτίνη ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης πρωτεΐνης. Τα ανοσοαποτυπώματα που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων με παρόμοια αποτελέσματα.

Η

Για να κατανοήσουμε τον μηχανισμό που διέπουν τη σύλληψη G1 φάσης σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα pristimerin-θεραπεία, είμαστε δίπλα διερευνήθηκε η επίδραση της pristimerin για τα επίπεδα των πρωτεϊνών που ρυθμίζουν την πρόοδο των κυττάρων στη φάση G1, συμπεριλαμβανομένων WAF1 /p21, KIP1 /ρ27, κυκλίνη D1, κυκλίνη Ε, cdk2, cdk4, και cdk6. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3Β, η θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων με pristimerin προκάλεσε σημαντική μείωση μείωση των επιπέδων της πρωτεΐνης των κυκλινών D1 και Ε σε ένα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο σε όλες τις τρεις παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν. Παρομοίως, μία εξαρτώμενη από τη δόση μείωση στην έκφραση του cdk2, cdk4, και cdk6 παρατηρήθηκε (Σχ. 3Β). Επιπλέον, η έκθεση σε pristimerin καταλήγει σε μία επαγωγή δοσο-εξαρτώμενη από ρ21 και ρ27 στις τρεις παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν (Εικ. 3Β). Προτείνουμε ότι η διαμόρφωση των ρυθμιστικών πρωτεϊνών του κυτταρικού κύκλου με pristimerin μπορεί να συνεισφέρει στην pristimerin μεσολάβηση σύλληψη G1 φάσης σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα.

Pristimerin επάγει απόπτωση σε παγκρεατικά κύτταρα καρκίνου

Εκτός από κύτταρο διακοπή κύκλου, παρατήρηση μορφολογική παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα pristimerin επεξεργασμένα έδειξε ότι pristimerin επαγόμενη αναστολή της ανάπτυξης θα μπορούσε επίσης να συνδέεται με την επαγωγή της απόπτωσης. Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε την απόπτωση επαγωγική δράση του pristimerin σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με διάφορες συγκεντρώσεις του pristimerin (0-600 ηΜ), χρωματίστηκαν με αννεξίνη V /PI, υποβάλλεται σε κυτταρομετρία ροής για να προσδιοριστεί ο ρυθμός της απόπτωσης. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Α, η θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων με pristimerin για 48 ώρες είχε ως αποτέλεσμα σημαντική δοσοεξαρτώμενη βελτίωση τόσο στα πρώιμα και όψιμα στάδια της απόπτωσης. Τα αποπτωτικά δείκτες ήταν 6,3, 17,5, 38,6 και 74,1% (σε BxPC-3) και 8.1, 18.7, 29.3 και 49.8% (σε PANC-1) και 11.2, 24.5, 34.7 και 52.9% (σε AsPC-1) σε 0 , 200, 400 και 600 ηΜ συγκεντρώσεις pristimerin, αντίστοιχα. σάρωσης με λέιζερ συνεστιακή μικροσκοπία επιβεβαίωσε την δοσοεξαρτώμενη αποπτωτική δράση όπως φαίνεται στις αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες (Σχ. 4C). Για να διερευνήσουν περαιτέρω το αποτέλεσμα της pristimerin στην κυτταρική απόπτωση, αξιολογήθηκαν επίσης κασπάσης-3 δραστηριότητες και των τριών κυτταρικών σειρών. θεραπεία pristimerin απέδωσε μια δοσοεξαρτώμενη αύξηση στην κασπάσης-3 σε όλες τις τρεις κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν σε σχέση με τον έλεγχο μετά από 72 ώρες θεραπείας (Εικ. 4D). Στη συνέχεια, εξετάσαμε την έκφραση των προ-κασπάσης-3 και στις τρεις κυτταρικές γραμμές που εξετάστηκαν με κηλίδωση Western. θεραπεία Pristimerin επίσης κάτω ρυθμισμένη την έκφραση της προ-κασπάσης-3 με έναν δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 4Ε). Συνολικά, τα αποτελέσματα μας υποδεικνύουν ότι pristimerin επαγόμενη αναστολή της ανάπτυξης οφείλεται εν μέρει στην επαγωγή του μηχανισμού απόπτωσης.

(Α) Επίδραση της pristimerin επί της διέγερσης απόπτωσης αξιολογήθηκε με τη μέθοδο αννεξίνης V /ΡΙ χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1 κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε πλήρες μέσο και αγωγή είτε με pristimerin (200, 400 ή 600 nm) ή DMSO (έλεγχος) επί 48 ώρες. ρυθμός απόπτωση προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής σε αννεξίνη V-FITC. (Β) Αντιπροσωπευτική dot-οικόπεδα από cytometrically που απεικονίζει αποπτωτικό κατάστασης στην BxPC-3 (άνω πάνελ), PANC-1 (μεσαίο πλαίσιο) και AsPC-1 κύτταρα (κάτω πίνακας). (C) Επίδραση της pristimerin στην επαγωγή της απόπτωσης αξιολογήθηκε με μικροσκοπία φθορισμού. Κύτταρα, είδαν επίσης κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού. Αντιπροσωπευτικές φωτογραφίες ελήφθησαν από αννεξίνη V /PI-βάφονται καρκίνο του παγκρέατος κύτταρα υπό ορισμένες θεραπείας. (D) Επίδραση pristimerin επί της διέγερσης απόπτωσης αξιολογήθηκε με προσδιορισμό δραστικότητας κασπάσης-3. Τα κυτταρολύματα αναλύθηκαν για την δραστηριότητα της κασπάσης-3, όπως περιγράφεται στο «Υλικά και μέθοδοι». (Ε) Επίδραση της pristimerin για διάσπαση της κασπάσης-3. Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στο Υλικά και Μέθοδοι, παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με pristimerin (200, 400 ή 600 nm) ή DMSO (έλεγχος) επί 48 ώρες και στη συνέχεια συλλέχθηκαν. Σύνολο κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE ακολουθούμενη από ανάλυση Western blot. β-ακτίνη ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης πρωτεΐνης. Τα ανοσοαποτυπώματα που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων με παρόμοια αποτελέσματα. * P & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο. ** P & lt?. 0.01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Pristimerin Διαμορφώνει τα επίπεδα των Bcl-2 πρωτεϊνών της οικογένειας σε παγκρεατικά κύτταρα καρκίνου

Από οικογένειας Bcl-2 πρωτεϊνών παίζουν σημαντικό ρόλο στην απόπτωση λειτουργώντας ως υποκινητές (π.χ., Bax) ή αναστολείς (π.χ., Bcl-2 ή Bcl-xL) του διαδικασία κυτταρικού θανάτου, μελετήσαμε την επόμενη τις αλλαγές στα επίπεδα του Bax, Bcl-2 και Bcl-xL σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα . Η ανάλυση στυπώματος Western έδειξε ότι η θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων για 48 ώρες με αυξανόμενες συγκεντρώσεις pristimerin οδήγησε σε εξαρτώμενη από τη δόση μείωση στα επίπεδα των αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών Bcl-XL και Bcl-2 (Εικ. 5). Σε έντονη αντίθεση, το επίπεδο της προ-αποπτωτική πρωτεΐνη Bax αυξήθηκε σημαντικά κατά την επεξεργασία με pristimerin με δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 5). Έτσι, pristimerin θεραπεία μπορεί να διαφοροποιούν τα επίπεδα Bcl-2 πρωτεϊνών της οικογένειας κατά τρόπο που θα ευνοούσε τις αυξήσεις στις αναλογίες του Βαχ /Bcl-2 και Bax /Bcl-XL, η οποία μπορεί να συμβάλλει στην παρατηρούμενη αποπτωτικό αποτέλεσμα pristimerin.

Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στο Υλικά και Μέθοδοι, παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με pristimerin (200, 400 ή 600 nm) ή DMSO (έλεγχος) για 48 ώρες και στη συνέχεια συγκομιδή. Σύνολο κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE ακολουθούμενη από ανάλυση Western blot. β-ακτίνη ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης πρωτεΐνης. Τα ανοσοαποτυπώματα που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων με παρόμοια αποτελέσματα.

Η

Pristimerin Αναστέλλει μετατόπιση και DNA-συνδετική δραστικότητα του ΝΡ-κΒ σε παγκρεατικά κύτταρα καρκίνου

ΝΡ-κΒ έχει δειχθεί ότι ενεργοποιείται ιδιοσυστατικά σε μία ποικιλία καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα και συνδέονται με τόσο τον πολλαπλασιασμό και αποπτωτικά αντίσταση. Συνεπώς, διερευνήσαμε αν pristimerin διαμεσολαβεί επιδράσεις της μέσω διαμόρφωσης της δραστηριότητας του ΝΡ-κΒ. Χρησιμοποιεί ανάλυση κηλίδος western, εξετάσαμε την επίδραση της pristimerin στην συστατική έκφραση του ΝΡ-κΒ /p65 και ΙκΒ-α σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι pristimerin θεραπεία είχε ως αποτέλεσμα μια εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση μείωση στην ΝΡ-κΒ /p65 τα επίπεδα της πρωτεΐνης στο πυρηνικό κλάσμα, αλλά δεν υπήρξε καμία αλλαγή του ότι στη συνολική πρωτεΐνη (Εικ. 6Α). Συνεπής με αυτά τα ευρήματα, μια μείωση στο επίπεδο πρωτεΐνης ΝΡ-κΒ συνδέθηκε με μια εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση μείωση στην φωσφο-ΙκΒ-α με ταυτόχρονη συγκέντρωση εξαρτώμενη αύξηση των κυτοσολικό επίπεδα της πρωτεΐνης ΙκΒ-α (Σχ. 6Α). Για την περαιτέρω στήριξη αυτής της παρατήρησης, εξετάσαμε την επίδραση της pristimerin στην δραστικότητα δέσμευσης DNA του ΝΡ-κΒ /p65 χρησιμοποιώντας ένα ειδικό ΝΡ-κΒ /p65 ELISA και βρέθηκε pristimerin θεραπεία οδήγησε σε σημαντική δοσοεξαρτώμενη μείωση της δραστηριότητας δέσμευσης DNA του ΝΡ-κΒ /p65 και στις τρεις παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (Σχ. 6Β). Λαμβανόμενα μαζί, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η θεραπεία με pristimerin αποτέλεσμα σημαντική καταστολή της συστατική ενεργοποίηση ΝΡ-κΒ σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα.

(Α) Επίδραση της pristimerin σχετικά επίπεδα πρωτεΐνης του ΝΡ-κΒ /p65 σε πυρηνικά προϊόντα λύσης και συνολικά κυτταρολύματα παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων. Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στο Υλικά και Μέθοδοι, παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με pristimerin (200, 400 ή 600 nm) ή DMSO (έλεγχος) επί 48 ώρες και στη συνέχεια συλλέχθηκαν. Πυρηνική λύματα και συνολική κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE ακολουθούμενη από ανάλυση στυπώματος Western για πρωτεϊνικό επίπεδο του ΝΡ-κΒ /p65, ρ-ΙκΒ-α (S32 /36) και ΙκΒ-α. β-ακτίνη ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης πρωτεΐνης. Τα ανοσοαποτυπώματα που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων με παρόμοια αποτελέσματα. (Β) Επίδραση pristimerin στη δραστικότητα δέσμευσης του DNA /p65 ΝΡ-κΒ σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στο Υλικά και Μέθοδοι, παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με pristimerin (200, 400 ή 600 nm) ή DMSO (έλεγχος) επί 48 ώρες και στη συνέχεια συλλέχθηκαν. Πυρηνική προϊόντα λύσης παρασκευάστηκαν και η δραστικότητα του ΝΡ-κΒ δέσμευσης DNA προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το Trans-Am ΝΡ-κΒ ELISA Kit. * P & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο. ** Ρ & lt?. 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Pristimerin ενισχύει την κυτταροτοξική δράση του γεμσιταβίνη με μείωση της βιωσιμότητας των κυττάρων και την προώθηση απόπτωση

Γεμσιταβίνη, το καλύτερο χημειοθεραπευτικό παράγοντα που διατίθενται για τη θεραπεία της προχωρημένο καρκίνο του παγκρέατος, από μόνη της δεν είναι πολύ αποτελεσματική και συνδέεται με συστημική τοξικότητα και χημειοαντίσταση. Επειδή η ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ έχει δειχθεί ότι προάγει αντοχή gemcitabine σε καρκίνο του παγκρέατος, αξιολογήσαμε κατά πόσο pristimerin μπορεί να ενισχύσει την επίδραση της gemcitabine σε αυτές τις κυτταρικές γραμμές.

CCK-8 δοκιμασίας έδειξαν ότι η θεραπεία με είτε pristimerin ( 200 ηΜ) ή γεμσιταβίνη (500 ηΜ) μόνο για 48 ώρες είχε ως αποτέλεσμα μόνο 31,5% ή 46,7% απώλεια βιωσιμότητας του BXPC-3, και 27,2% ή 25,9% απώλεια βιωσιμότητας του PANC-1, και 26,3% ή% απώλεια 23,6 της βιωσιμότητας του AsPC-1, αντίστοιχα. Ωστόσο, ο συνδυασμός του pristimerin και gemcitabine ως αποτέλεσμα την απώλεια του 68,1%, 61,7% ή 57,8% των βιώσιμων κυττάρων σε κάθε κυτταρικό τύπο που ερευνήθηκαν, αντίστοιχα (Εικ. 7Α). Η φύση της αλληλεπίδρασης μεταξύ pristimerin και gemcitabine ποσοτικοποιήθηκε με χρήση της μεθόδου εξίσωση μέσου-αποτελέσματος Chou /Talalay για την εξαγωγή ενός δείκτη συνδυασμού. Μία CI & lt? 1 δηλώνει μια συνεργική επίδραση, και οι τιμές του εύρους CI για τον συνδυασμό pristimerin και gemcitabine σε όλες τις τρεις ανθρώπινες παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές ήταν 0,5 έως 0,9 για την κλασματική επίδραση που αντιστοιχεί σε 0,3 έως 0,9 (Σχήμα 7Α), υποδεικνύοντας ότι η συνδυασμός pristimerin και gemcitabine έχουν συνεργιστικές επιδράσεις επί της αναστολής της κυτταρικής ανάπτυξης σε όλες τις κυτταρικές σειρές που δοκιμάστηκαν.

(Α) Ενίσχυση της γεμσιταβίνης επαγόμενη αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης με pristimerin. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε απουσία ή παρουσία του pristimerin (200 ηΜ), γεμσιταβίνη (500 ηΜ) ή συνδυασμός τους για 48 ώρες. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με CCK-8 δοκιμασία όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. δείκτη συνδυασμού (CI) έναντι κλάσματος που επηρεάζεται (Fa) οικόπεδα λαμβάνονται από την ανάλυση διάμεσης τιμής-δράσης των Chou-Talalay. τιμές CI: & gt? 1, ο ανταγωνισμός? 1, προσθετικότητα? & Lt? 1, συνέργεια. (Β) Ενίσχυση της γεμσιταβίνης-επαγόμενη απόπτωση από pristimerin. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε απουσία ή παρουσία του pristimerin (200 ηΜ), γεμσιταβίνη (500 ηΜ) ή συνδυασμός τους για 48 ώρες. ρυθμός απόπτωση προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής σε αννεξίνη V-FITC. * P & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο. ** P & lt? 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο.

# P & lt?. 0.05, σε σύγκριση με μόνο ομάδα γεμσιταμπίνη

## P & lt?. 0.01, σε σύγκριση με μόνο ομάδα γεμσιταμπίνη

Η

προσδιορισμού αννεξίνης V έδειξε ότι μόνο γεμσιταμπίνη (500 nM) αυξήθηκε ο ρυθμός της απόπτωσης από 6,3% σε 26,9% σε BxPC-3 κύτταρα και από 8,1% έως 17,9% σε PANC-1 κύτταρα και από 11,2% έως 20,8% σε AsPC-1 κύτταρα, ενώ ενιαία pristimerin (200 ηΜ) αύξησε το ποσοστό της απόπτωσης από από 6,3% έως 17,5% στο BxPC-3 κύτταρα και από 8,1% έως 18,7% στα κύτταρα PANC-1 και από 11,2% έως 24,5% στα κύτταρα AsPC-1. Επιπλέον, γεμσιταβίνη σε συνδυασμό με pristimerin οδήγησε σε αυξημένη απόπτωση σε σύγκριση με τη θεραπεία μονοθεραπεία σε αντίστοιχες κυψέλες (46,8%, 40,5% και 46,7%, αντίστοιχα) (Σχ. 7Β). Αυτά τα αποτελέσματα μαζί δείχνουν ότι pristimerin αυξάνει την κυτταροτοξική δράση της γεμσιταβίνης σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα.

Στη συνέχεια, θα αξιολογηθεί η επίδραση των pristimerin και γκεμσιταμπίνης σχετικά με τη δραστηριότητα του NF-κΒ να διαπιστωθεί αν αυτή η επωφελής δράση του pristimerin και γκεμσιταμπίνης συνδέεται με την αναστολή της ενεργοποίησης του ΝΡ-κΒ. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1 κύτταρα εξέφρασαν ουσιαστικώς δραστικής δραστικότητα ΝΡ-κΒ δέσμευσης DNA και gemcitabine μόνη περαιτέρω επαγόμενη δραστικότητα ΝΡ-κΒ δέσμευσης DNA σύγκριση με τον έλεγχο (σχ. 8Α και Β). Είναι ενδιαφέρον ότι, και στις τρεις κύτταρα, pristimerin ήταν σε θέση να μειώσει ΝΡ-κΒ δραστικότητα δέσμευσης DNA δεν έχει σημασία με, ή χωρίς γεμκιταβίνη (Σχ. 8Α και Β). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι pristimerin όχι μόνο μειώνει ουσιαστικώς δραστικής ΝΡ-κΒ δέσμευσης DNA δραστικότητα σε μη διεγερμένα συνθήκες αλλά επίσης αναστέλλει gemcitabine επαγόμενη ενεργοποίηση του ΝΡ-κΒ, η οποία θα μπορούσε να είναι υπεύθυνη για την ενισχυτική επίδραση pristimerin επί γεμσιταβίνης κατά καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος.

(Α) Επίδραση της pristimerin και gemcitabine στα επίπεδα πρωτεΐνης του ΝΡ-κΒ /p65 σε πυρηνικά προϊόντα λύσης και συνολικά κυτταρολύματα παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων. Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στο Υλικά και Μέθοδοι, παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) αναπτύχθηκαν σε απουσία ή παρουσία του pristimerin (200 ηΜ), γεμσιταβίνη (500 ηΜ) ή συνδυασμός τους για 48 ώρες και στη συνέχεια συγκομιδή. Πυρηνική λύματα και συνολική κυτταρολύματα παρασκευάστηκαν και υποβλήθηκαν σε SDS-PAGE ακολουθούμενη από ανάλυση στυπώματος Western για πρωτεϊνικό επίπεδο του ΝΡ-κΒ /p65. β-ακτίνη ανιχνεύθηκε ως έλεγχος φόρτωσης πρωτεΐνης. Τα ανοσοαποτυπώματα που παρουσιάζονται εδώ είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων με παρόμοια αποτελέσματα. (Β) Επίδραση pristimerin και gemcitabine στη δραστικότητα δέσμευσης του DNA /p65 ΝΡ-κΒ σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Όπως αναφέρεται λεπτομερώς στο Υλικά και Μέθοδοι, παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) αναπτύχθηκαν σε απουσία ή παρουσία του pristimerin (200 ηΜ), γεμσιταβίνη (500 ηΜ) ή συνδυασμός τους για 48 ώρες και στη συνέχεια συγκομιδή. Πυρηνική προϊόντα λύσης παρασκευάστηκαν και η δραστικότητα του ΝΡ-κΒ δέσμευσης DNA προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το Trans-Am ΝΡ-κΒ ELISA Kit. * P & lt? 0,05, σε σύγκριση με τον έλεγχο. ** P & lt? 0,01, σε σύγκριση με τον έλεγχο.

# P & lt? 0,05, σε σύγκριση με μόνο ομάδα γεμσιταβίνη.

## P & lt?. 0.01, σε σύγκριση με μόνο ομάδα γεμσιταμπίνη

Η

Συζήτηση

Η αξιολόγηση των φυσικών διατροφικών ενώσεων μπορεί να υποδεικνύει νέες προσεγγίσεις για τη θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος, η οποία παραμένει μια από τις πιο θανατηφόρες καρκίνους, παρά την τεράστια επιστημονικές προσπάθειες [2]. Στην παρούσα εργασία μας, βρήκαμε ότι pristimerin εξασκείται ανασταλτικά αποτελέσματα σημαντική ανάπτυξη σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα (BxPC-3, PANC-1 και AsPC-1) μέσω επαγωγής G1 σύλληψης και αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο. Επιπλέον, pristimerin ενισχυμένη χημειοευαισθησία να gemcitabine σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η αντι-πολλαπλασιαστική και Χημειοευαισθητοποίηση επίδραση του pristimerin επί παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα μπορεί να διαμεσολαβείται μέσω της αναστολής της δραστικότητας του ΝΡ-κΒ και τις μεταβολές του κυτταρικού κύκλου περίπου και πρωτεϊνών που σχετίζονται με την απόπτωση.

Διαμόρφωση του κυτταρικού κύκλου εξέλιξης σε καρκινικά κύτταρα θεωρείται ως αποδεκτός στόχος για τη θεραπεία των ανθρώπινων κακοηθειών καθώς διάφορες μελέτες έχουν δείξει ότι η εκτροπή των ρυθμιστικών του κυτταρικού κύκλου είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό των ανθρώπινων καρκινικών [23], [24], [25]. Μας in vitro αποτελέσματα έδειξαν ότι η θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων με pristimerin οδήγησε σε δοσοεξαρτώμενη σύλληψη των κυττάρων στη φάση G1. Το πέρασμα διαμέσου του κυτταρικού κύκλου, σε ευκαρυωτικά διέπεται από σύμπλοκα που περιέχουν κυκλίνες, τις ρυθμιστικές μονάδες, με εξαρτώμενες από κυκλίνη κινάσες (CDKs), οι μονάδες καταλυτικής [26]. Οι κυκλίνες D και Ε, μαζί με cdk2, cdk4, ή παίζουν CDK6 σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη των κυττάρων μέσω της φάσης G1 του κυτταρικού κύκλου [27]. Η απελευθέρωση των ρυθμιστικών του κυτταρικού κύκλου G1 φάση πιστεύεται ότι προάγει την ανώμαλο πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων. Η υπερέκφραση των κυκλινών και cdks μπορεί να παρέχει τα καρκινικά κύτταρα με ένα επιλεκτικό πλεονέκτημα ανάπτυξης [28]. Ως εκ τούτου, τα σύμπλοκα στόχευσης κυκλίνης /cdk θεωρείται μια πολλά υποσχόμενη αποτελεσματική στρατηγική για τη θεραπεία του καρκίνου. Κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου, τα σύμπλοκα cdk-κυκλίνης ανέστειλε μέσω σύνδεσης προς Cdks αναστολείς (CKIs) όπως CIP οικογένειες /ελέγχου και μέτρησης ΙΝΚ4 των πρωτεϊνών [29]. WAF1 /p21 και KIP1 /ρ27, πρωτεΐνες της οικογένειας CIP /Kip, μπλοκ κύκλου κυττάρου εξέλιξη με αναστολή της δραστικότητας της κυκλίνης E-Cdk2 συμπλοκών που προωθούν κανονικά εξέλιξη φάση G1-S. Οι παρατηρούμενες ανασταλτικά αποτελέσματα της pristimerin επί κυκλίνης D1, κυκλίνη Ε, CDK2, CDK4 και CDK6, μαζί με προς τα πάνω ρύθμιση επιπτώσεις του στην WAF1 /p21 και KIP1 /ρ27 σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα υποδηλώνουν δυναμικό της σε διάσπαση της ανεξέλεγκτης προόδου του κυτταρικού κύκλου. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι pristimerin συλλήψεις παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα σε G1 φάση του κυτταρικού κύκλου μέσω ρύθμισης ρυθμιστές του κυτταρικού κύκλου που υποδηλώνει έναν από τους μηχανισμούς με τους οποίους μπορεί να δράσει pristimerin να καταστέλλει την ανάπτυξη καρκινικών κυττάρων και να επάγει αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο.

G1 -φάση διακοπή του κυτταρικού κύκλου δημιουργεί μια ευκαιρία για τα κύτταρα να υποστούν είτε επισκευή ή εισάγετε το αποπτωτικό μονοπάτι για τη διατήρηση της ομοιόστασης των ιστών και να εξαλείψει την μεταλλαγμένη νεοπλασματικών και νεοπλασματικών κυττάρων υπερπολλαπλασιαζόμενα από το σύστημα. Τα τελευταία χρόνια, η έννοια της ρύθμισης του κυτταρικού κύκλου απόπτωση που διαμεσολαβείται έχει αποκτήσει ιδιαίτερη προσοχή, και έχει αναδειχθεί ως ο ιδανικός τρόπος αναστολής της κυτταρικής ανάπτυξης [30], [31]. Σε αυτή την άποψη, pristimerin φαίνεται να είναι ένας ισχυρός χημειοθεραπευτικός παράγοντας, όπως θα μπορούσε επιλεκτικά /προτίμηση την εξάλειψη καρκινικών κυττάρων, προκαλώντας διακοπή του κυτταρικού κύκλου και /ή επαγωγή απόπτωσης [20]. Στην παρούσα μελέτη, κυτταρομετρία ροής δεδομένα έδειξαν ότι η θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων με pristimerin οδήγησε σε signifiant επαγωγή της απόπτωσης, το οποίο περαιτέρω επιβεβαιώθηκε με διάσπαση της κασπάσης-3, μικροσκοπία φθορισμού και δραστικότητα κασπάσης-3. Συλλογικά, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν σαφώς ότι η κυτταροτοξική δράση του pristimerin σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα διαμεσολαβείται μέσω επαγωγής διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης.

Τα μέλη της οικογένειας Bcl-2 πρωτεϊνών έχουν έναν κεντρικό ρόλο στον έλεγχο της αποπτωτικής μονοπάτι. Μερικές πρωτεΐνες εντός αυτής της οικογένειας, συμπεριλαμβανομένων των Bcl-2 και Bcl-XL, καταστέλλουν την απόπτωση, ενώ άλλες, όπως Βαχ και Bak προωθήσει την απόπτωση [32], [33], [34] το προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών και αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών της οικογένεια Bcl-2 θα μπορούσαν να σχηματίσουν ετεροδιμερή, με αποτέλεσμα την αμοιβαία εξουδετέρωση των δεσμευμένων προ-και αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα. Ως εκ τούτου, οι μεταβολές στα επίπεδα των αντι- και προ-αποπτωτικών Bcl-2 οικογένεια πρωτεϊνών είναι κρίσιμες για την επαγωγή της απόπτωσης. Βρήκαμε ότι η θεραπεία του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων με pristimerin είχε ως αποτέλεσμα μία αύξηση στην έκφραση του Bax πρωτεΐνης και μία μείωση στην έκφραση των Bcl-2 και Bcl-xL αυξάνοντας έτσι τις αναλογίες του Βαχ /Bcl-2 και Bax /Bcl-xL υπέρ της απόπτωσης. Ως εκ τούτου, φαίνεται λογικό να υποθέσουμε ότι η ρύθμιση προς τα πάνω του Bax και προς τα κάτω ρύθμιση των Bcl-2 και Bcl-XL μπορεί να είναι υπεύθυνη για την παρατηρούμενη αποπτωτικό αποτέλεσμα pristimerin.

Ορισμένα φυσικά βιοδραστικών ενώσεων με χημειοπροληπτικές ιδιότητες σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα έχουν όπως βενζύλιο ισοθειοκυανικού, Honokiol, κουρκουμίνη, διϋδροαρτεμισινίνης και fisetin έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και επάγει την απόπτωση μέσω NF-κΒ – εξαρτώμενο μηχανισμό [35], [36], [37], [38], [39]. Πυρηνικός παράγοντας-κΒ (NF-κΒ), η οποία παίζει έναν κρίσιμο ρυθμιστικό ρόλο στην έκφραση των γονιδίων που εμπλέκονται σε φλεγμονή, κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την εισβολή, αγγειογένεση, μετάσταση, η καταστολή της απόπτωσης, είναι συστατικώς ενεργοποιημένο σε μια ποικιλία καρκινικών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων [6], [7], [8]. ΝΡ-κΒ είναι ένας ομο- ή ετεροδιμερές που αποτελείται από μέλη της οικογένειας του ΝΡ-κΒ, συμπεριλαμβανομένων των NF-κB1 (ρ50), ΝΡ-κΒ2 (ρ52), ΚεΙΑ (ρ65), RelB και c-Rel [40]. Η πιο κοινή μορφή είναι ένα dimmer της ΚεΙΑ (p65) και NF-κB1 (p50), και διαχωρίζεται στο κυτταρόπλασμα σε μία ανενεργή κατάσταση μέσω της αλληλεπίδρασης με έναν ενδογενή αναστολέα ΙκΒ [41]. Μετά την κυτταρική διέγερση, ΙκΒ υποβάλλεται phosphorylation- και ουβικιτινίωση που εξαρτάται από την υποβάθμιση, επιτρέποντας έτσι ενεργός ΝΡ-κΒ να μετατοπίζεται στον πυρήνα όπου δεσμεύεται με ειδικές στοιχεία απόκρισης στις αλληλουχίες DNA για ενεργοποίηση μεταγραφής γονιδίου, συμπεριλαμβανομένων αντιαποπτωτικών (Σουρβιβίνη, Bcl-xL, Bcl-2), πολλαπλασιαστικών (Κυκλίνη D1), προφλεγμονώδεις (COX-2), εισβολή [μήτρα μεταλλοπρωτεϊνάσης 9 (MMP-9)], και αγγειογόνων [αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF)] γονίδια [7], [12], [14], [42], [43].