Αφηρημένο

Σε αντίθεση με τη δυτική ιατρική που χρησιμοποιεί γενικά καθαρισμένες ενώσεις και τους στόχους να στοχεύσουν ένα μόνο μόριο ή μονοπάτι, παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) συνθέσεις συνήθως περιλαμβάνουν πολλαπλές βότανα και τα συστατικά που είναι απαραίτητα για την αποτελεσματικότητα. Παρά το πολύ μεγάλο χρόνο και ευρεία χρήση της TCM, υπάρχουν πολύ λίγες άμεσες συγκρίσεις των TCM και τυπική κυτταροτοξική χημειοθεραπεία. Στην παρούσα έκθεση, συνέκρινε την αποτελεσματικότητα του TCM φυτικό μίγμα LQ κατά του καρκίνου του πνεύμονα σε μοντέλα ποντικών με δοξορουβικίνη (ϋΟΧ) και κυκλοφωσφαμίδη (CTX). LQ ανέστειλε το μέγεθος και το βάρος μετράται απευθείας καθώς και με απεικόνιση φθορισμού-πρωτεΐνης σε υποδόρια, ορθοτοπική, αυθόρμητη πειραματική μετάσταση και την αγγειογένεση ποντίκι μοντέλα καρκίνου του πνεύμονα όγκου. LQ ήταν αποτελεσματικό έναντι πρωτογενούς και μεταστατικού καρκίνου του πνεύμονα χωρίς απώλεια βάρους και τοξικότητα στα όργανα. Σε αντίθεση, CTX και DOX, αν και αποτελεσματικές στα μοντέλα καρκίνου του πνεύμονα προκαλείται σημαντική απώλεια βάρους, και τοξικότητα στα όργανα. LQ είχε επίσης αντι-αγγειογενετική δραστικότητα όπως παρατηρήθηκε σε όγκους του πνεύμονα αυξάνεται σε νεστίνη γνώμονα πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (ND-GFP) διαγονιδιακών γυμνά ποντίκια, τα οποία εκφράζουν επιλεκτικά GFP σε εν τω γεννάσθαι αιμοφόρα αγγεία. Η επιβίωση των ποντικών που φέρουν όγκο παρατάθηκε επίσης από την ΛΛ, συγκρίσιμη με DOX.

In vitro

, καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα σκοτώθηκαν από την ΛΛ όπως παρατηρείται από time-lapse απεικόνιση, συγκρίσιμη με σισπλατίνη. LQ ήταν πιο ισχυρή για την επαγωγή κυτταρικού θανάτου σε καρκινικές κυτταρικές γραμμές από φυσιολογικές κυτταρικές σειρές σε αντίθεση με κυτταροτοξική χημειοθεραπεία. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι LQ έχει μη-τοξικά αποτελεσματικότητα έναντι μεταστατικό καρκίνο του πνεύμονα

Παράθεση:. Zhang L, Wu C, Zhang Υ, Liu F, Wang Χ, Zhao Μ, et al. (2014) Σύγκριση της αποτελεσματικότητας και της τοξικότητας της Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής (TCM) Φυτικά LQ μείγματος και συμβατική χημειοθεραπεία για καρκίνο του πνεύμονα μετάσταση και επιβίωση σε μοντέλα ποντικών. PLoS ONE 9 (10): e109814. doi: 10.1371 /journal.pone.0109814

Επιμέλεια: Beicheng Sun, το πρώτο Affiliated Νοσοκομείο Ιατρικό Πανεπιστήμιο Nanjing, Κίνα

Ελήφθη: 7, Φλεβάρη του 2014? Αποδεκτές: 13 Σεπτεμβρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 6 Οκτ, 2014

Copyright: © 2014 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου CA132971 επιχορήγησης και χορηγεί BA2011019 από την Jiangsu Επιστήμης και Τεχνολογίας Επιτεύγματα Μετασχηματισμού Θεματικό Ειδικά ταμεία, Κίνα. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Lei Zhang, Yong Zhang, Xiaoen Wang Ming και Zhao είναι θυγατρικές των αντικαρκινικών Inc. Fang Liu ήταν ένας πρώην συνεργάτης των αντικαρκινικών Inc. Robert M. Hoffman είναι ένας μη μισθωτών θυγατρική αντικαρκινικών Inc. AntiCancer Inc. εμπορεύεται ζωικά μοντέλα καρκίνου. Δεν υπάρχουν άλλα ανταγωνιστικά συμφέροντα. Δεν υπάρχουν διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως περιγράφεται λεπτομερώς σε απευθείας σύνδεση στον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

καρκίνου

πνεύμονα είναι η κύρια αιτία του καρκίνου θανάτου από καρκίνο μη-μικρών κυττάρων του πνεύμονα (NSCLC) που αντιπροσωπεύουν περίπου το 80% της θωρακικής κακοηθειών. Η συνολική πέντε χρόνια επιβίωσης για NSCLC παραμένει χαμηλή, περίπου 16%. Ο καρκίνος του πνεύμονα έχει δείξει μικρή βελτίωση στην επιβίωση για τα τελευταία 30 χρόνια [1]. Novel προσεγγίσεις για τη θεραπεία του καρκίνου του πνεύμονα απαιτούνται επειγόντως. προϊόντα της φύσης είναι σημαντικά τους πόρους για την ανάπτυξη φαρμάκων. Για τη νόσο του καρκίνου, το 60% των νέων φαρμάκων, προέρχεται από φυσικές πηγές. Επί του παρόντος υπάρχει αυξανόμενο ενδιαφέρον για την παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) φυτικά μείγματα που έχουν χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία του καρκίνου εδώ και χιλιάδες χρόνια στην Κίνα. Σε αντίθεση με τη δυτική ιατρική που χρησιμοποιεί γενικά καθαρισμένες ενώσεις και έχει ως στόχο να στοχεύσουν ένα μόνο μόριο ή μονοπάτι, συνθέσεις TCM συνήθως περιλαμβάνει πολλαπλές βότανα και τα συστατικά. Υπάρχουν πολλά ανεπίσημα στοιχεία για την αποτελεσματικότητα της TCM, με τη μορφή των φυτικών μειγμάτων σε ασθενείς με καρκίνο [2] – [9].

Σε μια προηγούμενη μελέτη, προσδιορίσαμε την ανασταλτική αποτελεσματικότητα του TCM βότανο Celastrus orbiculatus Thunb . (COT) στην ανάπτυξη του όγκου, μετάσταση και antiogenesis κυττάρων ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) Hep-G2 σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο γυμνού ποντικού χρησιμοποιώντας τεχνολογία απεικόνισης φθορισμού. απεικόνιση φθορισμού σε ολόκληρο το σώμα διεξήχθη για να μετρηθεί η ανάπτυξη του όγκου και την παρακολούθηση της ανάπτυξης της μετάστασης. Υψηλή δόση, η έγκαιρη θεραπεία με COT αποδειχθεί σημαντική αποτελεσματικότητα στον έλεγχο του όγκου του όγκου και του βάρους όγκου στο ορθοτοπικό μοντέλο όγκου ανθρώπινου HCC Hep-G2 [4].

Η αποτελεσματικότητα του tubeimu TCM βότανο, που εξάγεται από τον κόνδυλο του φυτού

Bolbostemma paniculatum

δοκιμάστηκε σε MDA-MB-231 ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του μαστού

in vitro

. Η κυτταρική σειρά MDA-MB-231 σχεδιάστηκε για να εκφράσει RFP στο κυτταρόπλασμα και GFP που συνδέεται με ιστόνης Η2Β στον πυρήνα, η οποία επιτρέπει σε πραγματικό χρόνο απεικόνιση της πυρηνικής-κυτταροπλασματική δυναμική. Η απόπτωση οπτικοποιήθηκε εύκολα σε αυτά τα κύτταρα από τις αλλαγές πυρηνική σχήμα και τον κατακερματισμό. Τα κύτταρα RFP-GFP MDA-MB-231 καλλιεργήθηκαν είτε σε δύο διαστάσεις επί πλαστικού ή σε τρεις διαστάσεις σε Gelfoam. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ένα εκχύλισμα διχλωρομεθανίου φρέσκου tubeimu. Tubeimu επαγόμενη απόπτωση των κυττάρων MDA-MB-231, όπως παρατηρείται με μικροσκοπία φθορισμού, ήδη από 24 ώρες θεραπείας in vitro σε δισδιάστατη καλλιέργεια. Με κατεργασία 48 ωρών, θα μπορούσε να παρατηρηθεί κατάτμηση του DNA. Tubeimu επίσης επαγόμενη απόπτωση των κυττάρων MDA-MB-231 κυττάρων σε τρισδιάστατη καλλιέργεια επί Gelfoam, αλλά σε μικρότερο βαθμό από ό, τι σε 2D καλλιέργεια [5].

Παρά την πολύ μεγάλη ιστορία και ευρεία χρήση του TCM, υπάρχουν πολύ λίγες άμεσες συγκρίσεις των TCM και τυπική κυτταροτοξική χημειοθεραπεία. Έχουμε αναπτύξει προηγουμένως ένα σκεύασμα TCM βοτάνων, LQ, που έχει αποδειχθεί ότι έχει ισχυρή μη τοξικά θεραπευτικές ιδιότητες σε κλινικά και σε ορθοτοπική μοντέλα ποντικών του καρκίνου του παγκρέατος [6]. Συγκρίναμε LQ να gemcitabine, η οποία είναι η θεραπεία πρώτης γραμμής για τον καρκίνο του παγκρέατος για αντι-μεταστατική και κατά του όγκου καθώς και την ασφάλεια. Η θεραπευτική αποτελεσματικότητα της LQ ήταν συγκρίσιμη με γεμσιταβίνη, αλλά με λιγότερη τοξικότητα [6].

Στην παρούσα έκθεση, που χρησιμοποιείται state-of-art τεχνολογία και ζωικά μοντέλα απεικόνισης φθορισμού για να συγκρίνουν την αποτελεσματικότητα και την τοξικότητα του LQ με δοξορουβικίνη (DOX) και κυκλοφωσφαμίδη (CTX) για τον καρκίνο του πνεύμονα. Με τη χρήση της GFP και /ή RFP σταθερώς εκφράζεται σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα ή ποντίκια, η αποτελεσματικότητα του LQ συγκρίθηκε με συνήθη χημειοθεραπεία επί του όγκου και τη μεταστατική ανάπτυξη, καθώς και την αγγειογένεση.

Έχουμε αποδείξει εδώ ότι έχει αντικαρκινική LQ , αντι-μεταστατική και αντι-αγγειογενετική δραστικότητα σε κλινικά σχετικά μοντέλα ποντικού καρκίνου του πνεύμονα συγκρίσιμη με δοξορουβικίνη και κυκλοφωσφαμίδη, χωρίς τοξικότητα τους.

Υλικά και Μέθοδοι

δήλωση Ηθική

Όλες οι μελέτες σε ζώα διεξήχθησαν με φροντίδα των ζώων και τη χρήση επιτροπής AntiCancer Θεσμικών (IACUC) -Πρωτόκολλο ειδικά εγκεκριμένο για αυτή τη μελέτη και σύμφωνα με τις αρχές και τις διαδικασίες που περιγράφονται στο Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας Οδηγός για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων υπό Διασφάλισης αριθμός A3873-1. Προκειμένου να ελαχιστοποιηθεί οποιαδήποτε ταλαιπωρία των ζώων, η χρήση της αναισθησίας και αναλγητικά χρησιμοποιήθηκαν για όλες τις χειρουργικές πειράματα. Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με ένα μίγμα 20 μι κεταμίνης (22-44 mg /kg), Ακεπρομαζίνη (0,75 mg /kg), και ξυλαζίνης (2-5 mg /kg) με ενδομυϊκή ένεση 10 λεπτά πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Η απόκριση των ζώων κατά τη διάρκεια χειρουργείου παρακολουθήθηκε για την εξασφάλιση επαρκούς βάθους της αναισθησίας. Ibuprofen (7,5 mg /kg από το στόμα στο πόσιμο νερό κάθε 24 ώρες για 7 ημέρες μετά το χειρουργείο) χρησιμοποιήθηκε για να παρέχει αναλγησία μετεγχειρητικά στα ζώα χειρουργικά φάρμακο. Τα ζώα παρατηρήθηκαν σε ημερήσια βάση και ανώδυνα θυσιάζονται με CO

2 εισπνοή όταν συναντήθηκαν τα ακόλουθα ανθρώπινη κριτήρια καταληκτικό σημείο: κατάπτωση, δερματικές βλάβες, σημαντική απώλεια βάρους του σώματος, δυσκολία στην αναπνοή, επίσταξη, περιστροφική κίνηση και πτώση της θερμοκρασίας του σώματος. Η χρήση ζώων ήταν απαραίτητο να κατανοήσουμε την in vivo αποτελεσματικότητα, ειδικότερα, αντι-μεταστατική αποτελεσματικότητα των παραγόντων που δοκιμάστηκαν. Τα ζώα στεγάστηκαν με όχι περισσότερο από 5 ανά κλουβί. Τα ζώα στεγάστηκαν σε μια εγκατάσταση φράγματος σε αέρα σωματιδίων υψηλής απόδοσης (ΗΕΡΑ) διηθημένο ράφι κάτω από πρότυπες συνθήκες 12 ωρών φωτός σκότους /. Τα ζώα τράφηκαν ένα αυτόκλειστο δίαιτα εργαστηριακών τρωκτικών.

Κυτταρικές γραμμές και κυτταροκαλλιέργεια

καρκινικές κυτταρικές σειρές ανθρώπινου πνεύμονα Η460 [12], Α549 [13], καρκίνωμα πνεύμονος ποντικού Lewis (LLC) [ ,,,0],14], και πιθήκου φυσιολογικό νεφρό ενδοθηλιακή κυτταρική γραμμή (VERO) [15] διατηρήθηκαν σε RPMI-1640 (HyClone, Νότια Logan, UT) με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (Gemini Bio-Products, Calabasas, CA). Ανθρώπινα ενδοθηλιακά κύτταρα ομφάλιας φλέβας (HUVEC) [16] διατηρήθηκε σε EGM-2 μέσο Bulletkit (Lonza, Anaheim, CA). Κύτταρα

LLC εκφράζονται σταθερά κόκκινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (RFP), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [10] , [11]. κύτταρα Η460 εκφράζεται σταθερά πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (GFP), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12], [17] – [19]. Η460 dual-χρώμα κύτταρα εξέφρασαν GFP που συνδέεται με ιστόνης Η2Β στον πυρήνα, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [20] – [22].

Ποντίκια

αθυμικά γυμνά ποντίκια (

ηυ /ηυ

) και C57BL /6 ποντίκια (AntiCancer Inc., San Diego, CA), ηλικίας 6-8 εβδομάδων, χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Νεστίνη οδηγείται-GFP (ND-GFP) διαγονιδιακά C57 /Β6 γυμνά ποντίκια (AntiCancer, Inc.) που εκφράζουν GFP υπό τον έλεγχο του υποκινητή νεστίνης χρησιμοποιήθηκαν επίσης [23] – [26]. Μη διαγονιδιακά C57 Β /6 ποντίκια (AntiCancer, Inc.) χρησιμοποιήθηκαν επίσης.

Υποδόρια

ανάπτυξης όγκου

Α549, Η460, LLC, και Η460-GFP κύτταρα συλλέχθηκαν με trypzinization και πλύθηκαν δύο φορές με ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο (PBS) (HyClone, Νότια Logan, UT). Κύτταρα (5 × 10

6) εγχύθηκαν υποδορίως στην δεξιά πλευρά των ποντικών σε έναν συνολικό όγκο 100 μΙ PBS εντός 30 λεπτών από τη συγκομιδή. Οι υποδόριοι όγκοι χρησιμοποιήθηκαν επίσης ως πηγή ιστού για ορθοτοπική εμφύτευση εντός του πνεύμονα.

Χειρουργική ορθοτοπική εμφύτευση (SOI)

τεμαχίων όγκου (1 mm

3) που προέρχεται από H460- GFP υποδόριοι όγκοι αναπτύσσονται σε γυμνό ποντίκι εμφυτεύτηκαν με χειρουργική ορθοτοπική εμφύτευση (SOI) [27] στο αριστερό σπλαχνικό υπεζωκότα σε ομάδες των πρόσθετων γυμνών ποντικών [12], [28] – [30]. Οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με εισπνοή Isofluran. Μια μικρή cm εγκάρσια τομή 1 έγινε με αριστερή πλευρική στήθος των γυμνών ποντικών μέσω της τέταρτης μεσοπλεύριο χώρο. Μια μικρή τομή (0,4-0,5 cm) μεταξύ του τρίτου και τέταρτου πλευρού στο θωρακικό τοίχωμα παρέχεται πρόσβαση στην υπεζωκοτική κοιλότητα και είχε ως αποτέλεσμα συνολική κατάρρευση του πνεύμονα. θραύσματα όγκου (1 mm

3) έχουν ραμμένα μαζί με ένα 8-0 χειρουργικό ράμμα και σταθερά κάνοντας ένα κόμπο. Ο πνεύμονας παρελήφθη από λαβίδα και το θραύσμα όγκου ραφή στο κάτω μέρος του πνεύμονα με ένα ράμμα. Ο πνεύμονας ιστός στη συνέχεια επέστρεψε στην θωρακική κοιλότητα. Οι μύες του στήθους και του δέρματος έκλεισαν με ένα χειρουργικό ράμμα 6-0. Η κλειστή κατάσταση του θωρακικού τοιχώματος εξετάστηκε αμέσως και, αν υπήρχε μια διαρροή, που έκλεισε με επιπλέον ράμματα. Μετά το κλείσιμο της θωρακικό τοίχωμα, ο πνεύμονας ήταν un-φουσκωμένα με την απόσυρση αέρα από την θωρακική κοιλότητα με ένα 25-gauge ½ βελόνας. Μετά την αποχώρηση του αέρα, ένα εντελώς φουσκωμένο πνεύμονα μπορεί να δει μέσα από το λεπτό θωρακικού τοιχώματος του ποντικιού. Στη συνέχεια, το δέρμα και το θωρακικό μυ έκλεισαν με 6-0 χειρουργικό ράμμα σε μία στρώση. Όλες οι διαδικασίες της επιχείρησης που περιγράφεται παραπάνω έγιναν με 7 × μικροσκόπιο [12].

Πειραματική μετάσταση συγγενικό μοντέλο ποντικού

κύτταρα LLC-RFP (2 × 10

6) συλλέχθηκαν με αγωγή με θρυψίνη και πλύθηκαν με ψυχρό PBS, στη συνέχεια με ένεση στη φλέβα της ουράς γυμνών ή C57B /6 ποντίκια σε συνολικό όγκο 100 μΐ με 1 ml 29-gauge, χωρίς latex σύριγγα μέσα σε 30 λεπτά από τη συγκομιδή. Η σπορά και η σύλληψη του ενιαίου καρκινικά κύτταρα στο πνεύμονα, συσσώρευση του καρκινικού κυττάρου εμβολές, η βιωσιμότητα του καρκίνου των κυττάρων, και σχηματισμού αποικίας μεταστατικό απεικονίστηκαν στις 14 ημέρες μετά την ένεση των κυττάρων [31]. Μεμονωμένες εικόνες αποκόπηκε πνεύμονες από τους ποντικούς στο πειραματικό μοντέλο μετάστασης ελήφθησαν με το μικρό σύστημα OV100 Ζώων Imaging (Olympus Corp., Tokyo, Japan). Η συνολική κόκκινη περιοχή φθορισμού και του πνεύμονα βάρος μετρήθηκαν για μεταστατικό φορτίο. Οι εικόνες αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Imaging-Pro Plus 6.0 του λογισμικού (MediaCybernetics Inc., Rockville, MD).

Χρωματικά κωδικοποιημένες αγγειογένεση μοντέλο

ND-GFP διαγονιδιακά γυμνά ποντίκια, ηλικίας 6 έως 8 εβδομάδων , είχαν χρησιμοποιήθει. Οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν και RFP-κύτταρα που εκφράζουν LLC (5 × 10

5 κύτταρα σε 25 μΐ) εγχύθηκαν στο δέρμα του αυτιού και πατούσα του γυμνών ποντικών ND-GFP με σύριγγα χωρίς λάτεξ 1 ml 27G½ [ ,,,0],32]. Το συνολικό μήκος του GFP που εκφράζουν τα αιμοφόρα αγγεία και η ένταση του φθορισμού προσδιορίστηκαν ποσοτικά. Οι εικόνες αναλύθηκαν με Imaging-Pro Plus 6.0 του λογισμικού (MediaCybernetics Inc.).

Αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας

in vivo

Η

Η αποτελεσματικότητα της αγωγής προσδιορίστηκε με πρότυπες μετρήσεις του όγκου όγκος και το βάρος του όγκου σε υποδόρια μοντέλα. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο (μακρά διάμετρος χ μικρή διάμετρος

2) /2. Στα ορθοτοπική μοντέλα, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και διερευνηθούν όταν εμφανίστηκαν προ-νοσηρή. Μετά την ευθανασία, κάθε ποντικός υποβλήθηκε σε λαπαροτομία και μέση στερνοτομή και στη συνέχεια απεικονίζεται προκειμένου να προσδιοριστούν πρωτογενείς και μεταστατικούς όγκους από RFP απεικόνισης ή φθορισμού GFP. Το σύστημα απεικόνισης OV100 Μικρών Ζώων χρησιμοποιήθηκε [33]. Μετά την εκτέλεση πλήρους σώματος, ανοιχτή απεικόνισης, τα στερεά όργανα εξετάστηκαν διεξοδικά για τυχόν ενδείξεις μετάστασης. Το σωματικό βάρος, η παρατήρηση δομή των οργάνων, και τη γενική εμφάνιση του κάθε ποντικού παρακολουθείται και καταγράφεται ως απόδειξη συστηματικής τοξικότητας

αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η & amp? Ε). χρώσης

Η καρδιά, το ήπαρ, σπλήνα , του πνεύμονα, των νεφρών, και το έντερο των ποντικών από κάθε ομάδα συλλέχθηκαν και ενσωματωμένα σε κατεψυγμένα μήτρα ιστού (OCT) και καταψύχθηκαν αμέσως με υγρό άζωτο. Όλες οι ιστοί παρασκευάζονται ως κατεψυγμένες τομές και κόπηκαν σε 5 μm πάχους διαφάνειες για Η &? Χρώση Ε. Οι ιστοπαθολογικές δομές των διαφόρων οργάνων εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας ένα Olympus ΒΗ-2 μικροσκόπιο.

Παρασκευή ακατέργαστων εκχυλισμάτων από κινέζικα βότανα

LQ είναι ένα μίγμα των κινεζικών φαρμακευτικών βοτάνων, η οποία περιλαμβάνει

Sinapis alba , Atractylodes macrocephala, Coix Lacryma-jobi

, και

Polyporus adusta

και παρασκευάζεται στο Τμήμα Φαρμακευτικής, Nanjing Πανεπιστήμιο της Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [6]. Η αναλογία που χρησιμοποιείται (2:3:4:3) είναι από αποξηραμένα φυτά. Τα μέρη του φυτού που χρησιμοποιήθηκαν ήταν

Sinapis Albe:

σπόρους?

Atractylodes macrocephala:

ρίζα?

Coix Lacryma-jobi:

πυρήνα?

Polyporus adusta

: ολόκληρο το μανιτάρι. Ακολουθήσαμε Αμερικανική Φαρμακοποιία UPS231 για τον έλεγχο των βαρέων μετάλλων. Όλα τα βότανα ελέγχθηκαν και τα επίπεδα των βαρέων μετάλλων ήταν κάτω από την ελάχιστη ημερήσια δόση Αμερικανική Φαρμακοποιία. Κάθε βότανο εκχυλίστηκε σε βραστό νερό για 20 λεπτά, το διάλυμα διηθείται. Το υπόλειμμα εκχυλίζεται με 75% αιθανόλη, και το εκχύλισμα διηθήθηκε. Τόσο το εκχύλισμα ύδατος και αιθανολικό εκχύλισμα συνενώθηκαν και συμπυκνώθηκαν με λυοφιλίωση. Για να αποκτήσετε 100 mg LQ απαιτούνται 402 mg αποξηραμένων βοτάνων. Η λυοφιλισμένη σκόνη αιωρήθηκε σε PBS. Το μίγμα στροβιλίστηκε για 1 λεπτό και επωάζεται στους 80 ° C για 30 λεπτά. Το δείγμα ψύχθηκε σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε στις 2000 rpm για 10 λεπτά. Το υπερκείμενο συλλέχθηκε σε μια τελική συγκέντρωση 90 mg /ml. LQ αραιώθηκε έπειτα για πειράματα δόσης που κυμαίνεται στα μοντέλα ποντικού ή διηθείται μέσω μεμβράνης 0,2 μm για

in vitro

χρήση.

In vivo

δοσολογία ήταν με καθετηριασμό.

Ναρκωτικά

Doxorobucin (DOX) (Bedford Laboratories, Bedford, ΟΗ), cyclophosphonate (CTX) (SIGMA, St. Louis, ΜΟ), Pingxiao (PX) (CP Pharmaceutical Co., Ltd., Xian, Κίνα), σισπλατίνη (CDDP) (Dong-A Pharmaceutical Co., Σεούλ, Κορέα), και πακλιταξέλη (Taxol) (Bedford Laboratories, Bedford, ΟΗ ) χρησιμοποιήθηκαν.

Time-lapse απεικόνιση του Η460 dual-χρώμα κύτταρα

Ένα FluoView FV1000 ομοεστιακό μικροσκόπιο λέιζερ (Olympus Corp., Tokyo, Japan) χρησιμοποιήθηκε για την εικόνα Η460 dual-χρώμα κύτταρα αντιμετωπίζονται με LQ και CDDP για την απεικόνιση time-lapse. εικόνες υψηλής ανάλυσης συλλήφθηκαν άμεσα για μία περίοδο 72 ωρών με διαστήματα 30 λεπτά στους 37 ° C.

MTS δοκιμασία

Τα κύτταρα εκτέθηκαν σε διάφορες συγκεντρώσεις LQ και χημειοθεραπευτικών παραγόντων για 72 ώρες. Ο αριθμός των βιώσιμων κυττάρων ακολούθως προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τον τίτλο Κυττάρου 96 Aqueous δοκιμασία κυτταρικού πολλαπλασιασμού One Solution (Promega, Madison, WI) όπως περιγράφεται στις οδηγίες.

Στατιστική ανάλυση

αξιολογήθηκαν

Δεδομένα χρησιμοποιώντας του μαθητή

t-test

. Η ανάλυση Kaplan-Meier με ένα τεστ log-rank χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί η επιβίωση και διαφορές μεταξύ των ομάδων ελέγχου και θεραπείας. Ένα

σ

αξία των ≤0.05 ορίστηκε ως στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα και Συζήτηση

Σύγκριση της αποτελεσματικότητας της LQ και CTX για υποδόρια μοντέλα ποντικών από καρκίνο του πνεύμονα

Θα δοκιμαστεί η αποτελεσματικότητα των διαφόρων δόσεων της LQ και CTX σε διαφορετικά ο καρκίνος του πνεύμονα κυτταρικών σειρών

in vivo

. Η460, Α549, και LLC κύτταρα αναπτυσσόμενα υποδορίως για 7 ημέρες σε γυμνούς ποντικούς υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με LQ (150, 300, και 600 mg /kg) για 10 ημέρες, το TCM βότανα μίγμα PX [34] (600 mg /kg, ημερησίως καθετηριασμό) για 10 ημέρες, ή CTX (30 mg /kg /δόση ημερησίως ΙΡ) για 7 ημέρες. Στην ομάδα ελέγχου, οι ποντικοί έλαβαν PBS από του στόματος χορήγηση. Η ανάπτυξη του όγκου μετρήθηκε με μέγεθος ανεστάλη σημαντικά από την ΛΛ σε δόσεις των 150 mg /kg, 300 mg /kg, και 600 mg /kg σε ένα δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Σχήμα 1Α-F) (όλα ρ & lt? 0,01). Τελικό βάρος του όγκου ήταν επίσης σημαντικά μειωμένη μετά τη θεραπεία LQ σε όλες τις δόσεις (κάθε p & lt? 0,01) (Σχήμα 1G). CTX και PX επίσης ανέστειλε το μέγεθος του όγκου και το βάρος του όγκου σημαντικά, σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου (όλα ρ & lt? 0,01) (Εικ. 1Α-G). LQ (600 mg /kg) ήταν πιο αποτελεσματική από PX (600 mg /kg) με βάση το μέγεθος και το βάρος (όλα ρ & lt? 0,01) του όγκου. (Εικ. 1 D, Ε, F και G)

Για την Η460 και κυτταρικές γραμμές Α549, κάθε ομάδα θεραπείας περιείχε 6 ποντικούς και 10 ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν για τα μη επεξεργασμένα ομάδες ελέγχου. Για το LLC κυτταρική σειρά, κάθε ομάδα θεραπείας περιείχε 8 ποντίκια και 16 ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν για την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. Αφού οι όγκοι αναπτύχθηκαν υποδόρια, δόθηκαν οι γυμνοί ποντικοί είτε CTX (30 mg /kg /ημέρα ί.ρ.) για 7 ημέρες ή PX (600 mg /kg /ημέρα από του στόματος) για 10 ημέρες. PBS (ρο) χρησιμοποιήθηκε στην ομάδα ελέγχου. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με 150, 300, και 600 mg /kg /ημέρα του LQ (ΡΟ) για 10 ημέρες. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα. Το βάρος του όγκου μετρήθηκε στο τελικό σημείο. Η στατιστική σημαντικότητα μεταξύ των ομάδων προσδιορίστηκε με το Μαθητή

t-test

. Η460 (amp A &? D), Α549 (Β & amp? Ε), και LLC (C & amp? F) είχαν την αναστολή της ανάπτυξης και της αναστολής του μεγέθους του όγκου μετά από αγωγή με όλους τους παράγοντες. Το βάρος του όγκου ανεστάλη επίσης σημαντικά από όλους τους παράγοντες (G) (

p & lt?

0.01). Μετά τη θεραπεία LQ, ανάπτυξη όγκου πνεύμονα και το βάρος του όγκου αναστέλλεται σημαντικά, σε σύγκριση με την χωρίς θεραπεία ομάδα ελέγχου σε όλα τα μοντέλα (

ρ & lt?

0,01). CTX και θεραπεία PX οδήγησε σε σημαντική αναστολή του βάρους του όγκου (

P & lt?

0,01) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου για όλες τις κυτταρικές σειρές. LQ είχε περισσότερο αποτελεσματικότητα από PX (

ρ & lt?

0,05) σε όλες τις κυτταρικές σειρές (G). CTX που προκαλείται από την απώλεια σωματικού βάρους (

p & lt?

0.05)., Αλλά όχι LQ ή PX (H)

Η

Το σωματικό βάρος και τη γενική εμφάνιση του κάθε ποντίκι παρατηρήθηκε κατά τη διάρκεια των πειραμάτων και στο τελικό σημείο. Το βάρος του σώματος σε ποντίκια CTX-θεραπεία μειώθηκε σημαντικά μετά τη θεραπεία (

p & lt?

0.05) και ανακτάται αργά μετά τον τερματισμό της θεραπείας. Ωστόσο, δεν υπήρξε καμία μείωση στο σωματικό βάρος σε ομάδες LQ με όλες τις δοσολογίες. (Εικ. 1). Η καρδιά, ήπαρ, σπλήνα, πνεύμονα, νεφρού, και το έντερο ενός ποντικού από κάθε ομάδα (μάρτυρας χωρίς θεραπεία, LQ και CTX) βάφτηκαν με Η &? Ε για να απεικονίσει την τοξικότητα μετά τη θεραπεία. Η ιστολογική δομή του κάθε οργάνου παρατηρήθηκε και συγκρίθηκε με μικροσκόπιο. Το Σχήμα 2 δείχνει μορφολογικές αλλαγές στο νεφρικό ιστό μετά τη χορήγηση CTX. Μετά την επεξεργασία CTX, τα κύτταρα εγγύς σωληναρίου τραυματίστηκαν, συμπεριλαμβανομένου πρηξίματος, εκφυλισμό και νέκρωση και αποφολίδωση του σωληνοειδούς επιθηλιακά κύτταρα (Σχ. 2Β). Ωστόσο, οι αλλαγές στο νεφρικό ιστό δεν παρατηρήθηκαν σε ποντίκια που έλαβαν αγωγή LQ (Σχ. 2C). Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η νεφρική τοξικότητα που προκαλείται από CTX, αλλά δεν LQ.

(Α) Νεφρική φλοιό των ανεπεξέργαστων ποντικιού. (Β) Το νεφρικό φλοιό ποντικών που έλαβαν θεραπεία με CTX αποδειχθεί νεφρική τοξικότητα. Η τοξικότητα ήταν κυρίως στα εγγύς σωληνοειδή κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων εκφυλισμό, απόφραξη, νέκρωση και οίδημα. (Γ) Το νεφρικό φλοιό ποντικών που έλαβαν θεραπεία με LQ είχε καμία τοξικότητα.

Η

Ο σκοπός αυτού του πειράματος ήταν να συγκριθεί LQ στην συμβατική χημειοθεραπεία κατά δημοσιεύθηκε θεραπευτικές αποτελεσματικές δόσεις (ED) [35]. Μια χαμηλή δόση της doxorubicin ελέγχθηκε επίσης η οποία δεν έχει εμφανή τοξικότητα αλλά είχε μικρότερη αποτελεσματικότητα σε σύγκριση με LQ (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

σύγκριση LQ και DOX στον ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα μοντέλο υποδόριας ποντικού Η460-GFP

Από τα δεδομένα τελευταίο τμήμα? χρησιμοποιήσαμε 600 mg /kg του LQ (καθημερινά καθετηριασμό) στο ανθρώπινο πνεύμονα καρκινική κυτταρική γραμμή Η460. Δοκιμάσαμε τα Η460-GFP κύτταρα που αναπτύσσονται υποδορίως σε σύγκριση με την γονική κυτταρική γραμμή Η460 σε γυμνά ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με LQ. Χρησιμοποιήσαμε DOX (7,5 mg /kg ενδοφλεβίως, δύο φορές την εβδομάδα για τρεις φορές) ως θετικός έλεγχος για σύγκριση με LQ. Στην ομάδα ελέγχου, οι ποντικοί έλαβαν PBS για χορήγηση από το στόμα. απεικόνιση όγκου (Σχήμα 3D, Ε & amp? F) και μέτρηση της δαγκάνας (Εικ. 3Α) έδειξε ότι η ανάπτυξη του όγκου ανεστάλη μετά LQ και θεραπεία DOX (η τιμή Ρ = 0,029, Ρ τιμή = 0.005, αντίστοιχα), σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου . Τελικό βάρος του όγκου ανεστάλη επίσης σημαντικά μετά από θεραπεία LQ και θεραπεία DOX σύγκριση με τον μάρτυρα PBS (

σ

= 0.037,

σ

= 0,01 αντίστοιχα.) (Σχ. 3Β). Ωστόσο, DOX οδήγησε σε σημαντική απώλεια σωματικού βάρους σε σύγκριση με τα LQ-αγωγή ζώα (

σ

= 0,002) και με τα δείγματα αναφοράς άνευ αγωγής (ρ = 0,001) (Σχ. 3C). Αντιθέτως, καμία σημαντική απώλεια σωματικού βάρους βρέθηκε στην ομάδα LQ σύγκριση με τον μάρτυρα (Σχ. 3C). Τα δεδομένα επίσης πρότεινε ότι Η460-GFP και η γονική κυτταρική γραμμή Η460 έδειξε καμία διαφορά στην ανάπτυξη σε ποντίκια και απόκριση σε LQ.

Πέντε ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε ομάδα. Αφού οι όγκοι αναπτύχθηκαν υποδόρια σε 100 mm

2, δόθηκαν οι γυμνοί ποντικοί είτε DOX (7,5 mg /kg ενδοφλέβια) (δύο φορές την εβδομάδα για 3 φορές). PBS (po), LQ (600 mg /kg ημερησίως από το στόμα). Το μέγεθος του όγκου και το σωματικό βάρος μετρήθηκαν καθημερινά. Το βάρος του όγκου μετρήθηκε στο τελικό σημείο. Η στατιστική σημαντικότητα μεταξύ των ομάδων προσδιορίστηκε με το Μαθητή

t-test

. Μετά τη θεραπεία LQ, ανάπτυξη όγκου πνεύμονα και το βάρος του όγκου αναστέλλεται σημαντικά (

P & lt?

0,01), σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου χωρίς θεραπεία. θεραπεία DOX επίσης είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική αύξηση του όγκου και του βάρους αναστολή σε σύγκριση με τους μη επεξεργασμένους μάρτυρες (

P & lt?

0,01). Το DOX αγωγή ποντίκια είχαν σημαντική απώλεια σωματικού βάρους σε σύγκριση με τα LQ-επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα ελέγχους (

P & lt?

0.01). *

p & lt?

0,05? **

p & lt?

0.01. Οι εικόνες του Η460-GFP όγκων σε ζωντανά ποντίκια από το υποδόριο μοντέλο γυμνού ποντικού δείχνεται για τις διαφορετικές ομάδες θεραπείας, και χωρίς θεραπεία ελέγχου (D)? LQ (Ε)? και DOX (F).

Η

Σύγκριση της αποτελεσματικότητας LQ και DOX για την Η460-GFP ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα ορθοτοπικό μοντέλο

Για να καθοριστεί η αντι-μεταστατική αποτελεσματικότητα του LQ, ένα ορθοτοπικό nude -mouse μοντέλο του ανθρώπινου καρκίνου του πνεύμονα, Η460-GFP χρησιμοποιήθηκαν [12]. Οι ανοιχτές εικόνες των όγκων στον πνεύμονα από επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα ποντίκια φαίνεται στο Σχ. 4C-E. Το μέγεθος του όγκου αναστάλθηκε από την ΛΛ και DOX (όλα ρ & lt? 0,01) (Εικ. 4Α). Το βάρος του όγκου ήταν σημαντικά μειωμένη στα LQ-αγωγή ποντίκια (600 mg /kg ημερησίως καθετηριασμό) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου PBS (

σ

= 0.0041) (Σχ. 4Α). DOX (7,5 mg /kg ενδοφλεβίως, δύο φορές την εβδομάδα για τρεις φορές) επίσης ανέστειλε το βάρος του όγκου (

ρ & lt?

0,0001) (Εικ. 4Α). DOX οδήγησε σε σημαντική απώλεια σωματικού βάρους σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο έλεγχο (

p & lt?

0.001) (Εικ. 4Β). Αντιθέτως, καμία σημαντική απώλεια σωματικού βάρους βρέθηκε στα LQ-αγωγή ζώα σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο μάρτυρα (Σχ. 4Β). Δεν υπήρχε μετάσταση βρέθηκαν στην ομάδα ελέγχου.

Δέκα ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε ομάδα. Η460-GFP θραυσμάτων από όγκους αναπτύχθηκαν υποδορίως (1 mm σε διάμετρο) συλλέχθηκαν και εμφυτεύθηκαν με χειρουργική ορθοτοπική εμφύτευση (SOI) στα αριστερά πνεύμονες των γυμνών ποντικών. Οι γυμνοί ποντικοί έλαβαν είτε PBS (po)? DOX (7,5 mg /kg ενδοφλεβίως δύο φορές την εβδομάδα για 3 φορές από την ημέρα 7) ή LQ (600 mg /kg /ημέρα στόματος ημερησίως. Από την ημέρα 7). Τα σωματικά βάρη μετρήθηκαν καθημερινά. Τα βάρη των όγκων μετρήθηκαν σε τελικό σημείο. Η στατιστική σημαντικότητα μεταξύ των ομάδων προσδιορίσθηκε με τον μαθητή του

t-t

est. ανάπτυξη του όγκου πνεύμονα ανεστάλη σημαντικά από την ΛΛ (

p & lt?

0.01), χωρίς απώλεια σωματικού βάρους. DOX ανέστειλε την ανάπτυξη των πνευμόνων του όγκου (

p & lt?

0.001), αλλά προκαλείται από την απώλεια βάρους σημαντική σώματος σε σύγκριση με τα ποντίκια ελέγχου (

p & lt?

0.001). Οι ανοιχτές εικόνες των όγκων Η460-GFP στον ορθοτοπικό μοντέλο γυμνού ποντικού δείχνεται για τις διάφορες ομάδες αγωγής και χωρίς θεραπεία ελέγχου (C)? LQ (D)? και DOX (Ε).

Η

Τα παραπάνω αποτελέσματα υποδεικνύονται LQ μπορεί να αναστέλλει σημαντικά ορθοτοπική ανάπτυξη των πνευμόνων του όγκου χωρίς τοξικότητα σε αντίθεση με DOX που προκάλεσε την απώλεια βάρους σημαντική σώμα.

Η αποτελεσματικότητα της LQ για την πειραματική του πνεύμονα καρκίνο μετάστασης σε γυμνά ποντίκια και σε ανοσο-ικανά ποντίκια C57BL /6

Δοκιμάσαμε την αντι-μεταστατική αποτελεσματικότητα του LQ σε πειραματικά μοντέλα ποντικού. κύτταρα που εκφράζουν RFP Lewis καρκίνωμα του πνεύμονα (LLC-RFP) κύτταρα εγχύθηκαν ί.ν. και σε γυμνά και C57BL /6 ανοσο-ικανά ποντίκια για την απόκτηση πειραματική μετάσταση. Ελήφθησαν μεμονωμένες εικόνες από εκτομή των πνευμόνων από τους ποντικούς. Οι πνεύμονες της ομάδας ελέγχου χωρίς θεραπεία ήταν διευρυμένη, και το χρώμα ήταν σκούρο κόκκινο, λόγω του μεγέθους του όγκου. Οι LQ-αγωγή ζώα είχαν ροζ πνεύμονες με σημαντικά μειωμένη μέγεθος σε σύγκριση με μη κατεργασμένους ελέγχους. Το κόκκινο ένταση φθορισμού και περιοχή λόγω της παρουσίας του όγκου LLC-RFP μειώθηκε στα ποντίκια που LQ-σε σύγκριση με τα μη κατεργασμένα ποντίκια ελέγχου (

ρ & lt?

0,01) (Εικ. 5Α-Β). LQ παρομοίως παρεμπόδισε τον αποικισμό των όγκων στον πνεύμονα και σε γυμνά και ποντίκια C57BL /6 (Σχ. 5Α-Β). Μειωμένο συνολικό βάρος του πνεύμονα στην ομάδα LQ, σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο μάρτυρα, που υποδεικνύεται επίσης μειωμένη αποικισμό του όγκου σε δύο LQ-αγωγή γυμνοί και C57BL /6 ποντίκια (

σ

= 0.001 και

p =

0.01, αντίστοιχα) (Σχ. 5C-D). Η συνολική έκταση του κόκκινου φθορισμού του πνεύμονα υπολογίσθηκε. Η φθορίζουσα περιοχή συσχετίζεται με το βάρος του πνεύμονα. Η συνολική έκταση RFP όγκου σε LQ-αγωγή ποντικούς ήταν 4% και 20%, σε σύγκριση με το γυμνό ή C57BL /6 έλεγχό τους, αντίστοιχα (όλα

σ

αξία & lt? 0.001) (Εικ. 5Ε). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι LQ μπορεί να αναστείλει σημαντικά τον αποικισμό του όγκου στον πνεύμονα υποδεικνύοντας έτσι αντι-μεταστατική αποτελεσματικότητα.

Έξι ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε ομάδα. Ελήφθησαν μεμονωμένες εικόνες από εκτομή των πνευμόνων από τους ποντικούς στο πειραματικό μοντέλο μετάστασης. LLC-RFP καρκινικά κύτταρα (2 χ 10

6) ενέθηκαν στην φλέβα ουράς γυμνών ποντικών ή C57BL /6 ποντίκια. Από την ημέρα 2, οι ποντικοί έλαβαν PBS (ρο) κάθε μέρα ως το μη επεξεργασμένο μάρτυρα. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με LQ (600 mg /kg /ημέρα ρο) για 10 ημέρες. Οι LQ-ποντικούς που υπέστησαν αγωγή είχαν μειωθεί σημαντικά το βάρος του πνεύμονα (

ρ & lt?

0.001) και μείωσε κόκκινη περιοχή φθορισμό στον πνεύμονα (

ρ & lt?

0,001) σε σύγκριση με τους χωρίς θεραπεία ελέγχους PBS. Α και Β είναι εικόνες των πνευμόνων. C-D είναι βάρη πνευμόνων. E είναι η συνολική κόκκινη περιοχή φθορισμού.

Η

LQ παρατεταμένη επιβίωση των ζώων που φέρουν όγκο

LQ σημαντικά παρατεταμένη επιβίωση ποντικών με ορθοτοπικά-εμφυτευμένα H460 καρκίνου του πνεύμονα, καθώς και σε ποντίκια με LLC πειραματική μετάσταση στους πνεύμονες. Η διάμεση επιβίωση αυξήθηκε από 26 ημέρες σε μη επεξεργασμένα ζώα ελέγχου σε 30,3 ημέρες σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με LQ (

σ

= 0,005), σε 33,4 ημέρες σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DOX στον ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα (

p = 0,0001

) (Σχ. 6Α, C). Στο πειραματικό μοντέλο μετάστασης, η μέση επιβίωση αυξήθηκε από 14 ημέρες σε μη επεξεργασμένα ζώα ελέγχου σε 20 ημέρες στις LQ-αγωγή ποντικούς (ρ = 0,001) και 22 ημέρες σε ποντικούς που DOX-αγωγή (

ρ & lt?

0.001) (Σχ. 6Β, Γ). LQ παρέτεινε την επιβίωση των ζώων που φέρουν όγκους συγκρίσιμη με DOX.

Δέκα ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε ομάδα. LQ αύξησε σημαντικά την επιβίωση τόσο των ορθοτοπική (

σ

= 0,015) και την πειραματική μετάσταση (

σ

= 0.001) μοντέλα. DOX επίσης αυξηθεί σημαντικά (

p & lt?

0.001). Επιβίωσης και στα δύο μοντέλα

Η

Η καταστροφή των αιμοφόρων αγγείων του όγκου από την ΛΛ

Στο μοντέλο ποντικού ΝΔ-GFP, μόνο νέων αιμοφόρων αγγείων που προκαλείται από τον όγκο ρητή νεστίνη με γνώμονα την GFP. Παρατήρηση με το σύστημα απεικόνισης FV-1000 έδειξαν ότι τα αιμοφόρα αγγεία στον όγκο ήταν πολύ πυκνό και συνυφασμένες για να σχηματίσουν ένα δίκτυο αιμοφόρων αγγείων (Σχ. 7Α). Μετά τη θεραπεία LQ, GFP αιμοφόρα αγγεία σε όγκους LLC-RFP στο αυτί και πατούσα υπέστησαν σοβαρές ζημιές (Εικ. Β). Τα αιμοφόρα αγγεία GFP κατακερματισμένη σε διαφορετικές περιοχές του όγκου, και παρατηρήθηκε νέκρωση του όγκου. Σύνολο φθορισμού περιοχή, ολοκληρωμένη οπτική ένταση και το μήκος και την πυκνότητα των αιμοφόρων αγγείων GFP προσδιορίστηκαν ποσοτικά. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα αιμοφόρα αγγεία του όγκου μειώθηκε σε περίπου 50% του ελέγχου (

ρ & lt?

0.05) μετά από τη χορήγηση LQ (Σχήμα 7C).

κύτταρα LLC-RFP αναπτύχθηκαν σε nestin-. οδηγείται GFP (ND-GFP) διαγονιδιακών γυμνά ποντίκια στα οποία εν τη γενέσει των αιμοφόρων αγγείων που εκφράζεται GFP. Τρεις ποντικοί χρησιμοποιήθηκαν σε κάθε ομάδα. Στα ποντίκια LQ-αγωγή, τα αιμοφόρα αγγεία του όγκου φάνηκε να καταστραφεί. Η GFP άνθηση των αιμοφόρων αγγείων ποσοτικοποιήθηκε για την περιοχή, την πυκνότητα, την ολοκληρωμένη οπτική πυκνότητα (IOD), το μήκος και μετράει. Οι μετρήσεις έδειξαν ότι LQ μειώθηκε αιμοφόρων αγγείων κατά 50%.

Η

LQ που προκαλείται θάνατο των καρκινικών κυττάρων

in vitro

Η

Η460 dual-χρώμα κύτταρα, που εκφράζουν GFP στο πυρήνα και RFP στο κυτταρόπλασμα καλλιεργήθηκαν σε 35mm περι-πιάτο σε επεξεργασία με LQ ή CDDP. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων απεικονίστηκαν κάθε 4 ώρες για 72 ώρες. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων αναστέλλεται πλήρως από την ΛΛ. Μετά τη θεραπεία, δεν υπήρξε καμία μίτωση. Η460 dual-χρώμα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με LQ μειωθεί σε μέγεθος. Το κυτταρόπλασμα συρρικνώθηκε σε πρώιμο χρονικό σημείο και εξαφανίστηκε, αλλά οι πυρήνες παρέμειναν (Εικ. 8Α, Β, D). Στο τέλος του στάδια, πυρήνες κατακερματισμένη. Στα CDDP επεξεργασμένο Η460 dual-χρώμα κύτταρα, αποπτωτικά κύτταρα και μερικά πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα παρατηρήθηκαν (Εικ. 8C). Περίπου το 60% των κυττάρων ήταν αποπτωτικά στο χρονικό σημείο 36 ωρών. Κατακερματισμένη πυρήνες παρατηρήθηκαν αλλά είχε μια διαφορετική εμφάνιση σε σύγκριση με κύτταρα κατεργασμένα με LQ. LQ μπορεί να προκαλέσει έναν διαφορετικό μηχανισμό κυτταρικού θανάτου από απόπτωση που διεγείρεται από CDDP. Περαιτέρω έρευνες θα διεξαχθούν στο μέλλον.

Α και Β) χωρίς θεραπεία κύτταρα ελέγχου σε 0 ώρα και 36 ώρες. C) CDDP-κατεργασμένων κυττάρων στις 36 ώρες.