Αφηρημένο

Ιστορικό

Παρατηρήσαμε ανώμαλη έκφραση HOXB7 σε οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (ESCC) προηγουμένως. Αυτή η μελέτη ήταν να αξιολογήσει την προγνωστική σημασία της HOXB7 και αποκαλύπτουν το δυναμικό μηχανισμό.

Μέθοδοι

Η ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιήθηκε για να επιβεβαιώσει την ανώμαλη έκφραση HOXB7 σε ESCC. Η προγνωστική σημασία της έκφρασης HOXB7 αναλύθηκε σε δύο ανεξάρτητες ομάδες. RNAi χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία δύο σταθερών κυτταρικών στελεχών HOXB7-νοκ ντάουν. δοκιμασία CCK8, δοκιμασία καμπύλη ανάπτυξης των κυττάρων, δοκιμασία σχηματισμού αποικίας, η ανάλυση του κύκλου ροής και δοκιμασία ογκογονικότητα σε γυμνούς ποντικούς χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνηθεί η επίδραση της HOXB7 επί του πολλαπλασιασμού in vitro και in vivo.

Αποτελέσματα

ανοσοϊστοχημεία επιβεβαίωσε την ανώμαλη έκφραση HOXB7 σε ESCC σε σύγκριση με paracancerous βλεννογόνο (18/23 έναντι 23/09, p = 0,039). έκφραση HOXB7 συσχετίστηκε θετικά με το στάδιο Τ, λεμφικό μετάσταση στους λεμφαδένες και το στάδιο TNM. Η διάμεση επιβίωση των ασθενών με υψηλή έκφραση HOXB7 ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη με χαμηλή έκφραση (45 μήνες έναντι 137 μηνών, p = 0,007 για κοόρτη 1? 19 μήνες έναντι 34 μηνών, p = 0,001 για κοόρτη 2). πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι η έκφραση HOXB7 ήταν άλλο ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα (HR [95% CI] = 0,573 [0,341 – 0,963], p = 0,036 για την ομάδα 1? HR [95% CI] = 0,543 [0,350 – 0,844], p = 0,024 για την ομάδα 2). Πειράματα in vitro και in vivo έδειξαν ότι μετά από knockdown του HOXB7, ο ρυθμός πολλαπλασιασμού μειώθηκε, ο ρυθμός ανάπτυξης κατέβηκε, ικανότητα αποικίας σχηματισμός μειωθεί, εμφανίστηκαν σύλληψη G1-φάση και η ογκογονικότητα μειωθεί εντυπωσιακά.

Συμπεράσματα

HOXB7 θα μπορούσε να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και μπορεί να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για ασθενείς με ESCC

Παράθεση:. Li H, Shen LY, Yan WP, Dong Β, Kang XZ, Dai L, et al. (2015) η απορρύθμιση της έκφρασής HOXB7 Προβλέπει Κακή πρόγνωση των ασθενών με οισοφάγου πλακώδες καρκίνωμα και ρυθμίζει τον καρκίνο του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε Vitro και in vivo. PLoS ONE 10 (6): e0130551. doi: 10.1371 /journal.pone.0130551

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Nikki Pui-Yue Lee, Το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 27 του Ιανουαρίου 2015? Αποδεκτές: 21 του Μάη, 2015? Δημοσιεύθηκε: 15 Ιουνίου του 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έλαβαν καμία ειδική χρηματοδότηση για το έργο αυτό

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

Επί του παρόντος, ο καρκίνος του οισοφάγου είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθειες σε όλο τον κόσμο, και οισοφαγικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων (ESCC) είναι η πιο κοινή παθολογική τύπου στο κινεζικού πληθυσμού [1, 2]. Αν και η χειρουργική επέμβαση που κυριαρχείται από διεπιστημονική θεραπεία έχει προχωρήσει σημαντικά τις τελευταίες δύο δεκαετίες σε σχέση με τη διάγνωση και τη θεραπεία των ESCC, και το αποτέλεσμα της θεραπείας έχει βελτιωθεί, η μακροπρόθεσμη επιβίωση είναι ακόμα ικανοποιητική [3]. Ένα από τα αποτελεσματικά μέτρα για τη βελτίωση της συνολικής επιβίωσης περιλαμβάνει τον εντοπισμό των κλινικών βιοδεικτών με προγνωστική σημασία για την καθοδήγηση της θεραπείας. γονίδια ΗΟΧ είναι μια ομάδα γονιδίων που ρυθμίζουν την εμβρυϊκή ανάπτυξη. Η οικογένεια, με 39 μέλη, χωρίζεται σε τέσσερις ομάδες, δηλαδή, Α, Β, C, και D, τα οποία βρίσκονται σε τέσσερα διαφορετικά χρωμοσώματα [4, 5]. γονίδια ΗΟΧ κωδικοποιούν μία οικογένεια μεταγραφικών παραγόντων, και ανώμαλη έκφραση τους συχνά συνδέεται με ασθένειες, προσελκύοντας έτσι αυξανόμενη προσοχή στην έρευνα του καρκίνου [6, 7]. Προηγούμενες μελέτες στην αναπτυξιακή βιολογία έχουν δείξει ότι HOXB7 εκφράζεται κανονικά στην ανάπτυξη του ανθρώπινου οισοφάγου [8]. Μεταξύ των 39 γονιδίων ΗΟΧ εξετάζονται σε προηγούμενη μελέτη μας, οκτώ εκφράστηκαν μόνο στον κακοήθη ιστό από ασθενείς ESCC, αλλά όχι στα ζεύγη γειτονικών φυσιολογικούς ιστούς, συμπεριλαμβανομένων HOXB7 με θετικό ρυθμό έκφρασης 58,3% [9]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι HOXB7 έπαιξαν συγκεκριμένο ρόλο στην εμφάνιση και ανάπτυξη της ESCC και θα μπορούσε να είναι ένα χρήσιμο μοριακό δείκτη για την πρόβλεψη της πρόγνωσης και ακόμη και την καθοδήγηση της θεραπείας. Στο καλύτερο της γνώσης μας, υπάρχουν σπάνιες μελέτες για την έκφραση και την πρόγνωση HOXB7 σε ESCC αφορούν μεγάλο μέγεθος του δείγματος, και όχι in vivo και in vitro μελέτες συζητούν τον υποκείμενο μηχανισμό. Ως εκ τούτου, η παρούσα μελέτη στοχεύει να διερευνήσει την προγνωστική σημασία και λειτουργικό μηχανισμό HOXB7 στους ιστούς ESCC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλες οι έρευνες που αφορούν τα ανθρώπινα συμμετέχοντες εγκρίθηκε από τις επιτροπές Δεοντολογίας του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, την Κίνα, και ασκείται σύμφωνα με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Γραπτές ενημέρωσε συναινέσεις έχουν ληφθεί από όλους τους συμμετέχοντες.

Ασθενείς και δείγματα ιστών

Για να επικυρώσετε την υψηλή έκφραση του HOXB7 σε ιστούς ESCC αναφερθεί σε προηγούμενες μελέτες μας [9], 23 ασθενείς ESCC προσλήφθηκαν και η παραφίνη-ενσωματωμένες όγκου και σε συνδυασμό noncancerous τομές ιστού ανακτήθηκαν

Για να διερευνηθεί η συσχέτιση της έκφρασης της πρωτεΐνης HOXB7 με την πρόγνωση των ασθενών με ESCC, δύο ανεξάρτητες ομάδες μελέτης περιλαμβάνονται:.

η ομάδα I.

η ερευνητική μας ομάδα δημιούργησε ένα μελλοντικό βάση δεδομένων για τον καρκίνο του οισοφάγου από το Γενάρη του 2000 και 1249 περιπτώσεις με οισοφαγεκτομή πραγματοποιείται από μια ομάδα μόνο-χειρουργό (Δρ KN Chen) έχουν διαδοχικά συλλεχθεί. Σε αυτή τη μελέτη, τα κριτήρια συμπερίληψης ήταν ως ακολούθως: οι ασθενείς που είχαν διαγνωστεί με παθολογικά ESCC και υποβλήθηκε σε ριζική οισοφαγεκτομή χωρίς επαγωγή θεραπεία πριν την επέμβαση μεταξύ Jan. 2000 και Δεκέμβριο του 2011. Ένα σύνολο 177 περιπτώσεων πληρούσαν τα κριτήρια (Πίνακας 1). Η 7η έκδοση του συστήματος σταδιοποίησης TNM (AJCC και UICC, 2009) χρησιμοποιήθηκε για την ταξινόμηση των ασθενών.

Η

Η ομάδα ΙΙ.

Η ομάδα ΙΙ περιελάμβανε 103 ασθενείς που είχαν διαγνωστεί με παθολογικά ESCC και υποβλήθηκε σε ριζική οισοφαγεκτομή από πολλούς χειρουργούς χωρίς θεραπεία επαγωγής πριν από υποψήφιους βάση δεδομένων μας ιδρύθηκε 1996-2002 (Πίνακας 1). Τα δεδομένα αναδρομικά συλλέγονται σύμφωνα με τα ιατρικά αρχεία των ασθενών χωρίς υποψήφιους δεδομένων. Το σύστημα σταδιοποίησης TNM της UICC, 1987 χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση των ασθενών.

Συνέχεια μεθόδους

Τα δεδομένα παρακολούθησης της κλάσης I συλλέχθηκαν από τους υποψήφιους βάση δεδομένων μας. Μετά τη χειρουργική επέμβαση, επισκέψεις παρακολούθησης στα εξωτερικά ιατρεία διεξήχθησαν μία φορά κάθε 3 μήνες κατά τα πρώτα δύο χρόνια, μία φορά κάθε έξι μήνες 2-5 ετών, και μία φορά κάθε χρόνο μετά από 5 χρόνια. Η συνολική επιβίωση ορίστηκε ως ο χρόνος από την ημερομηνία της επέμβασης στο θάνατο ή την τελευταία παρακολούθηση. Η τελευταία παρακολούθηση σημείο ελέγχου ήταν Αύγουστο του 2013. Το συνολικό ποσοστό παρακολούθησης για τη βάση δεδομένων μας ήταν 96,1%: 80,2% επισκέψεις στα εξωτερικά ιατρεία και 15,9% τηλεφώνου ή e-mail παρακολούθηση. Το τηλέφωνο ή e-mail παρακολούθηση αφορούσε κυρίως τους ασθενείς χωρίς επίσκεψη σε εξωτερικά ιατρεία με το χρονοδιάγραμμα. Εξωτερικά Ιατρεία συνέχειας που εμπλέκονται καταγραφή των συμπτωμάτων και των πολλαπλών εξετάσεων, συμπεριλαμβανομένων CT, ανώτερου γαστρεντερικού απεικόνισης, κοιλιακό και διμερείς υπερκλείδιους υπερήχων, και γαστροσκόπηση, εάν είναι απαραίτητο. Μετά το 2010, μερικοί ασθενείς υποβλήθηκαν σε τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων CT (PET-CT) εξετάσεις.

Τα δεδομένα παρακολούθησης της κλάσης 2 συλλέχθηκαν από την ανασκόπηση των ιατρικών αρχείων ασθενών. Η τελευταία φορά παρακολούθησης ήταν Φεβ, 2008 και παρακολούθησης ποσοστό ήταν 80%.

κυτταροκαλλιέργειες

Οι ανθρώπινες κυτταρικές σειρές ESCC EC109 και KYSE150 ελήφθησαν από την Cell Τράπεζα της Κινεζικής Ακαδημίας ιατρικών Επιστημών, Πεκίνο, Κίνα. EC109 καλλιεργήθηκε σε μέσο DMEM (Gibco) συμπληρωμένο με 10% FBS (Gbico) στους 37 ° C σε ατμόσφαιρα αέρα 5% CO2. KYSE150 καλλιεργήθηκε σε RPMI 1640 (Gibco) με 10% FBS (Gbico) στους 37 ° C σε ατμόσφαιρα αέρα 5% CO2.

Φορείς κατασκευή και λεντοϊού μόλυνση

Προς τα κάτω ρύθμιση της HOXB7, τέσσερις σύντομες φουρκέτα (shRNA) ακολουθίες (GCCGAGTTCCTTCAACATGCA/CGAGAGTAACTTCCGGATCTA/GCCTCACGGAAAGACAGATCA/CGAGAGTAACTTCCGGATCTA/GCCTCACGGAAAGACAGATCA/ACCTGTTCTGTAGCTTTCTGG) κλωνοποιήθηκαν σε pGLV-H1-GFP-puro. Κωδικοποιημένα ακολουθία (ACTACCGTTGTTATAGGTG) χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Λεντοϊού κατασκευή φορέα και συσκευασίας έγινε από GenePharma Εταιρείας (Σαγκάη, Κίνα). Τα κύτταρα μολύνθηκαν με 50 μλ διηθήθηκαν φακοϊό υπερκείμενο (1 × 10

9 TU /ml) σε κάθε φρεάτιο πλάκας 24 φρεατίων με την παρουσία 8 μg /ml polybrene (Millipore). Σταθερά στελέχη επιμολυσμένο κύτταρο που εκφράζει shHOXB7 επιλέχθηκαν με 2 μg /ml πουρομυκίνη.

εκχύλιση RNA, RT-PCR και PCR πραγματικού χρόνου

Το ολικό RNA των κυττάρων εκχυλίζεται με ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad , California). Το RNA αντίστροφης σε μεταγραφή να cDNAs με RT-PCR (Fermentas Life Science). Ποσοτική Realtime PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας SYBR Green Realtime PCR Maser Mix (Applied Biosystems) για την ανίχνευση των επιπέδων έκφρασης του mRNA των γονιδίων στόχων. GAPDH (αφυδρογονάση 3-φωσφορικής) χρησιμοποιήθηκε σαν ενδογενής έλεγχος. Η αλληλουχία των εκκινητών που χρησιμοποιήθηκαν έχουν ως εξής: για HOXB7, προς τα εμπρός 5′-TATGGGCTCGAGCCGAGTT- 3 ‘, αντίστροφη 5′-GGCCTCGTTTGCGGTCAGT -3′? για GAPDH, μπροστά 5’-TGCACCACCAACTGCTTAGC -3 ‘, 5′-αντίστροφη GGCATGGACTGTGGTCATGAG -3’. Όλες οι δοκιμασίες διεξήχθησαν εις τριπλούν κάτω από 7500 πραγματικού χρόνου σύστημα PCR (Applied Biosystems) και επαναλαμβάνεται τρεις φορές σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Αξιολόγηση της σχετικής έκφρασης υπολογίστηκε με τη μέθοδο συγκριτικής CT (κύκλος κατωφλίου). 2

-ΔΔCt αναφέρθηκε στην πτυχή της έκφρασης mRNA του γονιδίου στόχου σε σύγκριση με την έκφραση GAPDH στο ίδιο δείγμα.

κηλίδωση Western

Σύνολο κυτταρικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν σε 1 × SDS ρυθμιστικού φόρτωσης, διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE, κηλιδώθηκαν σε μεμβράνες PVDF, στη συνέχεια ανοσοαντέδρασαν με αντι-HOXB7 μονοκλωνικού αντισώματος ποντικού (Abnova) ως πρώτο αντίσωμα. Goat χρένο αντι-ποντικού συζευγμένο με υπεροξειδάση IgG χρησιμοποιήθηκε ως δευτερεύον αντίσωμα. Ανοσοαντιδραστικότητα ανιχνεύτηκε με ένα ενισχυμένο σετ αντίδραση χημειοφωταύγειας (GE Healthcare). Ως μάρτυρας φόρτωσης, glyceraldehyde- 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH) ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (Abcam).

Ανοσοϊστοχημεία

Μετά την ρουτίνα αποπαραφινώσεως και ενυδάτωση, τομές ιστού υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 3 % υπεροξείδιο του υδρογόνου και στη συνέχεια θερμαίνεται σε κιτρικό διάλυμα (ρΗ = 6,0) για ανάκτηση αντιγόνου. Η αντίδραση HOXB7 αντιγόνου-αντισώματος πραγματοποιήθηκε όλη τη νύκτα στους 4 ° C μετά το κλείδωμα ορό κατσίκας. Το αντι-HOXB7 μονοκλωνικού αντισώματος ποντικού (Abnova) χρησιμοποιήθηκε σε 1 μg /ml (1: 1000), και αντι-ποντικού κατσίκας συζευγμένο με βιοτίνη IgG χρησιμοποιήθηκε ως δευτερεύον αντίσωμα. Οι ανοσοϊστοχημικές σήματα βαθμολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές. Οι βαθμολογίες υπολογίστηκαν ως ο αριθμός των βαμμένων κυττάρων διαιρείται με το συνολικό αριθμό των καρκινικών κυττάρων. Πέντε αντιπροσωπευτικά πεδία υψηλής ισχύος (X400) ανά πλακίδιο υπολογίστηκαν και τα αποτελέσματα τέθηκαν στον μέσο όρο. Ανεπιφύλακτο χρώση του πυρήνα σε & gt? 25% των καρκινικών κυττάρων θεωρήθηκε υψηλή έκφραση

δοκιμασίας CCK8 και την ανάπτυξη των κυττάρων καμπύλη

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε με χρώση των κυττάρων Μετρώντας Kit-8 (Dojinodo. , Σαγκάη, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε αρχική πυκνότητα 5 χ 10

3 κύτταρα /φρεάτιο. Σε κάθε χρονικό σημείο, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με 10 μΙ χρωστικής CCK8 σε 90 μΙ μέσου καλλιέργειας επί 2 ώρες στους 37 ° C. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm, με 650 nm ως μήκος κύματος αναφοράς. Τα αποτελέσματα επιβεβαιώνονται από χειροκίνητη μετρήσεις κυττάρων. Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 24-πηγαδιών σε αρχική πυκνότητα 5 χ 10

3 κύτταρα /φρεάτιο και συλλέχθηκαν σε διαφορετικές χρονικές και μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Αιματοκυτταρόμετρο. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν.

Colony δοκιμασία σχηματισμού

Τα κύτταρα τρυψινοποιήθηκαν και καλλιεργήθηκαν σε τρυβλία 6 φρεατίων (300-500 κύτταρα /φρεάτιο) και καλλιεργήθηκαν για 3 εβδομάδες. Οι αποικίες βάφτηκαν με χρώση Giemsa για 30 λεπτά μετά τη σταθεροποίηση με παραφορμαλδεΰδη 4% για 15 λεπτά. Τρία ανεξάρτητα πειράματα.

κυτταρικού κύκλου ανάλυσης

Η κατανομή κυτταρικού κύκλου εξετάστηκε με κυτταρομετρία ροής. 1×10

6 κύτταρα συλλέχθηκαν και σταθεροποιήθηκαν με 70% ψυχρή αιθανόλη. Μετά τη σταθεροποίηση, προστέθηκε το διάλυμα χρώσης ΡΙ-με RNase Α (BD Biosciences). Μετά από 30 λεπτά επώασης, χρωματισμένο δείγματα εκτελούνται στο κυτταρομετρία FACScan (BD Biosciences), και τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό FlowJo (Tree Star).

Ογκογένεση σε γυμνούς ποντικούς

Τα πειράματα σε ζώα ήταν εγκριθεί από τις επιτροπές Δεοντολογίας του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, την Κίνα, και ασκείται σύμφωνα με τον οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση των ζώων Εργαστηρίου. Τα ποντίκια διατηρήθηκαν κάτω από τη φροντίδα της Μονάδας Εργαστήριο Ζώων του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο, Κίνα. Σταθερό shRNA επιμολυσμένα κύτταρα (1 χ 10

6) σε 100 μL DMEM χωρίς ορό /RPMI 1640 ενέθηκαν s.c. στο δεξί πλευρό του 4 έως 6 εβδομάδων θηλυκών Balb /C αθυμικά γυμνά ποντίκια. Όλοι οι ποντικοί στεγάστηκαν και διατηρήθηκαν κάτω από ειδικές συνθήκες ελεύθερες παθογόνων. Ξενομοσχεύματος όγκοι δημιουργήθηκαν και οι ποντικοί θυσιάστηκαν με αυχενική εξάρθρωση μέσα σε 4 εβδομάδες. Οι όγκοι αποκόπηκαν, μετρήθηκαν με παχύμετρο με βερνιέρο και σταθμίζονται από έναν ηλεκτρονικό αναλυτικό ζυγό. Οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο:. όγκος του όγκου = [(μήκος) × (πλάτος) x (πλάτος)] /2 Όλα τα πειράματα έγιναν σύμφωνα με το θεσμικό πρότυπο κατευθυντήριες γραμμές Πανεπιστήμιο του Πεκίνου Σχολή Ογκολογίας για τα πειράματα σε ζώα

η στατιστική ανάλυση

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου λογισμικού SPSS 19.0. Όλες τις in vitro πειράματα εκτελέστηκαν τουλάχιστον τρεις φορές εις τριπλούν. Συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων για στατιστική σημασία διεξήχθησαν με t τεστ 2-tailed unpaired Student. Μπαρ και μπάρες σφάλματος στα γραφήματα καθώς και τα δεδομένα στο κείμενο αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SD. Συγκρίσεις μεταξύ του καρκίνου και ζευγαρωμένα φυσιολογικούς ιστούς δοκιμάστηκαν χρησιμοποιώντας Wilcoxon rank test υπεγράφη. Οι σχέσεις μεταξύ της έκφρασης HOXB7 και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας Chi-square test. Οι καμπύλες επιβίωσης σχεδιάζονται με τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν με δοκιμασία log rank. Το αναλογικών κινδύνων κατά Cox μοντέλο με μια σταδιακή διαδικασία που χρησιμοποιήθηκε για την πολυπαραγοντική ανάλυση. P & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Η έκφραση της HOXB7 ρυθμίζεται αυξητικά σε ESCC σε σύγκριση με ζεύγη noncancerous ιστούς

Είχαμε αναφερθεί στο παρελθόν 8 από 39 γονίδια ΗΟΧ, συμπεριλαμβανομένων HOXB7 , αφύσικα εκφράζεται σε ιστούς ESCC αλλά όχι σε μη καρκινικούς ιστούς χρησιμοποιώντας αντίστροφη μεταγραφή-ΡΟΚ [9]. Για να διευκρινιστεί περαιτέρω η έκφραση της πρωτεΐνης HOXB7 σε ESCC, ανοσοϊστοχημεία (IHC) χρώση πραγματοποιήθηκε σε όγκους και αντιστοιχισμένο noncancerous ιστών από ασθενείς ESCC. Σημειώθηκε ότι πρωτεΐνη HOXB7 ήταν εντοπισμένη κυρίως στον πυρήνα των κανονικών οισοφάγου επιθηλιακά κύτταρα στα βασικά και υπερβασικά στρώματα, ενώ στους όγκους, HOXB7-θετικά κύτταρα κατανέμονται ευρέως. Συγκριτική ανάλυση έδειξε ότι HOXB7 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε 23 δείγματα που εξετάστηκαν όγκου (18/23) σε σύγκριση με παρακείμενες μη καρκινικούς ιστούς (9/23) (Σχήμα 1Α, P = 0,039).

(Α) Αντιπροσωπευτικό δείγμα ζευγών φυσιολογικούς ιστούς (a, b) και ESCC (c, d). Στο φυσιολογικό οισοφαγικό επιθηλιακά, η έκφραση HOXB7 ήταν περιορισμένη κυρίως στον πυρήνα των επιθηλιακών κυττάρων που βρίσκονται στα βασικά και υπερβασικά στρώματα, ενώ στο ESCC, HOXB7-θετικά κύτταρα σε γενικές γραμμές παρατηρήθηκαν στον όγκο (υπόθεση αρ. 53865). (Β) Σχήμα Α και Β, αρνητικός έλεγχος, με πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε από PBS (υπόθεση αριθ. 40146). Σχήμα γ και δ, χαμηλή έκφραση του HOXB7 σε ESCC (υπόθεση αριθ. 42873). Εικόνα ε και στ, υψηλή έκφραση του HOXB7 σε ESCC (υπόθεση αριθ. 36840). (Γ) καμπύλη επιβίωσης Kaplan-Meier για 177 ασθενείς στην ομάδα Ι Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης ήταν 45 μήνες για τους ασθενείς υψηλής έκφρασης, η οποία ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη των 137 μήνες για τους ασθενείς χαμηλή έκφραση (P = 0,007). (D) Καμπύλη επιβίωσης Kaplan-Meier για 103 ασθενείς στην ομάδα ΙΙ. Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης ήταν 19 μήνες για τους ασθενείς υψηλής έκφρασης, η οποία ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη των 34 μήνες για τους ασθενείς χαμηλή έκφραση (P = 0,001).

Η

έκφραση πρωτεΐνης HOXB7 συσχετίστηκε με κλινικά χαρακτηριστικά και τη συνολική επιβίωση

στην ομάδα Ι, υψηλή έκφραση της πρωτεΐνης HOXB7 παρατηρήθηκε σε 124 από 177 δείγματα όγκων (70,1%) (Σχήμα 1Β). Chi-square τεστ έδειξαν ότι τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης HOXB7 συσχετίζεται σημαντικά με το στάδιο ΤΝΜ (Ρ = 0,034), το στάδιο Τ (Ρ = 0.036) και λεμφαδένα μετάσταση (Πίνακας 1, Ρ = 0,042). Η μονοπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι οι ασθενείς που είχαν επίπεδα έκφρασης χαμηλά HOXB7 έζησαν πολύ περισσότερο (Σχήμα 1C, P = 0,007). Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης ήταν 45 μήνες για τους ασθενείς με υψηλή έκφραση, η οποία ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη των 137 μήνες για τους ασθενείς με χαμηλή έκφραση (Πίνακας 2). πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης επιβεβαίωσε ότι η έκφραση HOXB7 και το στάδιο TNM ήταν δύο ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με ESCC (Πίνακας 3, HR [95% CI] = 0,573 [0,341 – 0,963], p = 0,036 για HOXB7 χαμηλή έκφραση).

η

στην ομάδα II, η υψηλή έκφραση της πρωτεΐνης HOXB7 ανιχνεύθηκε σε 61 από 103 (59,2%) περιπτώσεις των δειγμάτων ιστού του όγκου (Σχήμα 1Β). Chi-square τεστ έδειξαν ότι τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης HOXB7 συσχετίζεται σημαντικά με το στάδιο ΤΝΜ (Ρ = 0,001), το στάδιο Τ (Ρ = 0,000) και λεμφαδένα μετάσταση (Πίνακας 1, Ρ = 0,006). Μονοπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας το τεστ log rank έδειξε ότι οι ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης HOXB7 είχε μεγαλύτερο διάμεσο χρόνου επιβίωσης από εκείνο με υψηλή έκφραση HOXB7 (34 εφηβαίου vs. 19 mons, Ρ = 0,001) (Σχήμα 1D, Πίνακας 2). πολυπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι το επίπεδο έκφρασης HOXB7 και το στάδιο TNM ήταν δύο ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με ESCC (Πίνακας 3, HR [95% CI] = 0,543 [0,350 – 0,844], p = 0,024 για HOXB7 χαμηλή έκφραση) .

κάτω ρύθμιση των πρωτεϊνών HOXB7 μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων in vitro

Για να αξιολογεί τον πιθανό ρόλο της HOXB7 στον πολλαπλασιασμό των ανθρώπινων κυττάρων ESCC, έχουμε κατ ‘αρχάς ανιχνεύεται η έκφραση της HOXB7 σε διάφορες κυτταρικές ESCC γραμμές. Real-time PCR και κηλίδωση Western ανάλυση έδειξε ότι EC109 και KYSE150 παρουσίασε υψηλή σχετικά ενδογενή έκφραση του HOXB7. Ως εκ τούτου, επιλέξαμε κυτταρικές σειρές EC109 και KYSE150 για τη μελέτη και γκρέμισε την έκφραση HOXB7 χρησιμοποιώντας παρεμβολή RNA. Από τις τέσσερις φακοϊού με μικρή φουρκέτα RNA, το καλύτερο επιλέχτηκε για να καθοριστεί στέλεχος κυψέλες με σταθερά νοκ ντάουν της πρωτεΐνης HOXB7. Εν τω μεταξύ, ένα φακοϊό με σκαρφάλωμα shRNA χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Τέλος, EC109 /Scramble, EC109 /shHOXB7 και KYSE150 /Scramble, KYSE150 /shHOXB7 ιδρύθηκαν. Η αποτελεσματικότητα του knockdown εξετάστηκε με PCR πραγματικού χρόνου και κηλίδωση Western. HOXB7 mRNA και η έκφραση πρωτεΐνης αποτελεσματικά μειώνεται κατά 80% έως 85% σε EC109 και κυτταρικές γραμμές KYSE150 (Σχήμα 2Α). δοκιμασία CCK8 έδειξε ότι HOXB7 knockdown μείωσε τον πολλαπλασιασμό του EC109 και KYSE150 σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 2Β? Ρ & lt? 0,05). Εγχειρίδιο μετρήσεις κυττάρων των κυττάρων επιβεβαίωσαν τη μείωση του πολλαπλασιασμού παρατηρείται στη δοκιμασία CCK8. (Σχήμα 2C? Ρ & lt? 0,05). δοκιμασία σχηματισμού αποικίας έδειξε ότι EC109 /shHOXB7 και KYSE150 κύτταρα /shHOXB7 σχηματίζεται πολύ λιγότερο και μικρότερες αποικίες από εκείνη των κυττάρων ελέγχου (Σχ 2D? Ρ & lt? 0,05).

(Α) εξόντωση ενδογενούς HOXB7 σε συγκεκριμένες shRNA -transduced σταθερή EC109 και KYSE150 κύτταρα, αναλύθηκε με πραγματικού χρόνου PCR και κηλίδωση western. (Β) εξόντωση HOXB7 αναστέλλει την κυτταρική ανάπτυξη, όπως προσδιορίζεται με δοκιμασία CCK8. (Γ) εξόντωση HOXB7 αναστέλλει την κυτταρική ανάπτυξη, όπως επιβεβαιώνεται από το εγχειρίδιο μετρήσεις κυττάρων. (D) εξόντωση HOXB7 αναστέλλει την κυτταρική ανάπτυξη, όπως έδειξε η δοκιμασία σχηματισμού αποικίας. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. *, P & lt?. 0.05

Η

κάτω ρύθμιση των πρωτεϊνών HOXB7 μειωμένη ανάπτυξη του όγκου in vivo

Για να επιβεβαιωθεί το αποτέλεσμα της HOXB7 για την ογκογόνο δράση των κυττάρων ESCC in vivo, πραγματοποιήσαμε δοκιμασίες ογκογένεση σε γυμνούς ποντικούς. στελέχη κυττάρων με EC109 /Scramble, EC109 /shHOXB7 και KYSE150 /Scramble, KYSE150 κύτταρα /shHOXB7 ενέθηκαν σε γυμνά ποντίκια. Οι ξενομοσχεύματος όγκοι αφαιρέθηκαν 4 εβδομάδες μετά την έγχυση και μετρήθηκαν και σταθμίζονται. Όπως φαίνεται στο σχήμα 3Α και 3Β, οι όγκοι που σχηματίζεται από το EC109 /shHOXB7 και κύτταρα /shHOXB7 KYSE150 ήταν σημαντικά μικρότερα από εκείνα του ελέγχου όγκων κυττάρων-σχηματισμένο. Το μέσο βάρος και ο όγκος των όγκων στην ομάδα EC109 /shHOXB7 ήταν 869 ± 295 mg και 870 ± 370 χιλιοστά

3, αντίστοιχα, σε σύγκριση με το 1292 ± 453 mg και 1416 ± 472 χιλιοστά

3 στην ομάδα EC109 /Scramble (P & lt? 0,05). Το μέσο βάρος και ο όγκος των όγκων σε ομάδα /shHOXB7 KYSE150 ήταν 415 ± 254 mg και 603 ± 362 χιλιοστά

3, αντίστοιχα, σε σύγκριση με 697 ± 253 mg και 1069 ± 377 χιλιοστά

3 στην ομάδα KYSE150 /Scramble (P & lt? 0,05).

(Α) Οι όγκοι που δημιουργούνται από την ένεση του EC109 /KYSE150 με σταθερά νοκ ντάουν πρωτεΐνη HOXB7 και τον έλεγχο των κυττάρων. (Β) Το βάρος και ο όγκος των όγκων από τις HOXB7-knockdown κυττάρων ήταν σχετικά χαμηλότερες από εκείνες από τα κύτταρα ελέγχου. (C) Εκπρόσωπος ιστογράμματα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής έδειξαν τα προφίλ του κυτταρικού κύκλου των κυττάρων ESCC. Στα κύτταρα με σταθερό knockdown πρωτεΐνη HOXB7, ο αριθμός των κυττάρων σε φάσεις S και G2 μειώθηκε σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. (Δ) αναλογία των κυττάρων σε διαφορετικές φάσεις του κυτταρικού κύκλου. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. *, P & lt?. 0.05

Η

HOXB7 επιτάχυνση του κυτταρικού κύκλου εξέλιξη

Για να διερευνηθεί η πιθανή μηχανισμό HOXB7 στην προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων ESCC, ελέγξαμε την κατανομή του κυτταρικού κύκλου με κυτταρομετρία ροής. Όπως φαίνεται στο Σχ 3C, knockdown πρωτεΐνης HOXB7 οδήγησε σε G1 σύλληψη, με μια αύξηση στην αναλογία G1 και μία μείωση στην S και G2 αναλογία. Το ποσοστό των κυττάρων σε S και G2 φάσεις στην ομάδα EC109 /shHOXB7 ήταν 30,18% ± 1,16% και 9,51% ± 0,23%, αντίστοιχα, η οποία ήταν χαμηλότερη από ότι στα κύτταρα ελέγχου (31,75% ± 0,55% και 14,36% ± 0,94%, το Σχ 3D, P & lt? 0,05). Το μέσο ποσοστό των κυττάρων σε S και G2 φάσεων στην ομάδα /shHOXB7 KYSE150 ήταν 37,31% ± 1,09% και 28,70% ± 1,22%, αντίστοιχα, σε σύγκριση με το 41,00% ± 1,32% και 30,92% ± 2,21% στην ομάδα KYSE150 /Scramble (Εικ 3D, P & lt? 0,05). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι HOXB7 μπορεί να επιταχύνει την G1 στην S μετάβαση φάσης σε κυτταρικές σειρές ESCC, η οποία συμβάλλει στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ESCC.

Συζήτηση

Ιδανικό βιοδείκτες όγκων έχουν καλή προγνωστική αξία και μπορεί να καθοδηγήσει την κλινική πρακτική, και, ως εκ τούτου, η αναζήτηση για ένα πολύτιμο προγνωστικό βιοδείκτη έχει αποκτήσει πρωταρχική έμφαση στην έρευνα ογκολογία. Μεταξύ αυτών, ανώμαλη έκφραση των γονιδίων που σχετίζονται με την εμβρυογένεση σε κακοήθεια έχει λάβει πάντοτε σημαντική προσοχή [10]. Για παράδειγμα, η σχέση μεταξύ καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο (CEA) και του παχέος εντέρου, και ότι μεταξύ α-φετοπρωτεΐνης (AFP) και καρκίνο του ήπατος, που έχουν εφαρμοστεί επιτυχώς σε κλινικό περιβάλλον. Ωστόσο, μέχρι τώρα, καλή καρκινικών δεικτών για ESCC δεν έχουν εντοπιστεί για χρήση στην κλινική πράξη. προηγούμενες μελέτες μας έχουν αποκαλύψει ανώμαλη έκφραση 39 μέλη των γονιδίων ΗΟΧ στο επίπεδο του mRNA σε κακοήθη οισοφαγικού ιστού. Μεταξύ αυτών, οκτώ εκφράστηκαν μόνο στον κακοήθη ιστό από ασθενείς ESCC, αλλά όχι στα ζεύγη γειτονικών φυσιολογικούς ιστούς, συμπεριλαμβανομένων HOXB7 [9]. Άλλες μελέτη έδειξε επίσης ότι HOXB7 δεν εκφράζεται στην κανονική οισοφάγο αλλά εκφράζεται σε υψηλότερα επίπεδα στο επίπεδο του mRNA σε ESCC [11]. Η παρούσα μελέτη επιβεβαίωσε αυτά τα προκαταρκτικά συμπεράσματα. Ήταν έδειξε ότι η έκφραση του HOXB7 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε 23 δείγματα κακοήθους ιστού οισοφάγου σε σχέση με το γειτονικό φυσιολογικό ζεύγη βλεννογόνου, η οποία προσφέρει μια καλή βάση για να εξετάσει HOXB7 ως πιθανή μοριακό δείκτη για ESCC. Από το Γενάρη του 2000, έχουμε τη δημιουργία ενιαίου-χειρουργό (Δρ Chen) υποψήφιους οισοφάγου βάση δεδομένων του καρκίνου και διαδοχικά προσληφθούν 1.249 ασθενείς με καρκίνο του οισοφάγου που υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή. Οι επισκέψεις παρακολούθησης είχαν προγραμματιστεί για όλους τους ασθενείς που περιλαμβάνονται στη βάση δεδομένων μέχρι το θάνατό τους. έκφραση HOXB7 στις εξάγεται 177 υποθέσεις που πληρούσαν τα κριτήρια εξετάστηκε, και τη σχέση του με την πρόγνωση αναλύθηκε. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση HOXB7 συσχετίστηκε θετικά με το στάδιο ΤΝΜ (Ρ = 0,034), το στάδιο Τ (Ρ = 0,036), λεμφαδένα μετάσταση (Ρ = 0,042). Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης των ασθενών με υψηλή έκφραση HOXB7 ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη των ασθενών με χαμηλή έκφραση HOXB7 (45 μήνες έναντι 137 μηνών, p = 0,007). Για την περαιτέρω επιβεβαίωση του αποτελέσματος αυτού, πραγματοποιήσαμε μια αναδρομική μελέτη σε μια άλλη προηγούμενη ομάδα των ασθενών χωρίς υποψήφιους δεδομένων. Μια παρόμοια τάση παρατηρήθηκε στα αποτελέσματα μας: HOXB7 έκφραση στην ομάδα αυτή παρουσίασαν επίσης θετική συσχέτιση με το στάδιο ΤΝΜ (Ρ = 0,001), το στάδιο Τ (Ρ = 0,000) και λεμφαδένα μετάσταση (Ρ = 0,006). Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης των ασθενών με υψηλή έκφραση HOXB7 ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη των ασθενών με χαμηλή έκφραση HOXB7 (19 μήνες έναντι 34 μηνών, p = 0,001). Επιπλέον, πολυπαραγοντική ανάλυση με μεταβλητές όπως η ηλικία, το φύλο, τη θέση του όγκου, το στάδιο TNM, το στάδιο Τ, Ν στάδιο, και την έκφραση HOXB7 έδειξαν ότι η έκφραση HOXB7 και το στάδιο TNM ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες σε 177 ασθενείς που έχουν προσληφθεί στον υποψήφιο βάση δεδομένων (HR [95% CI] = 0,573, [0,341 – 0,963], p = 0.036) και 103 ασθενείς προσληφθεί σε άλλη ομάδα χωρίς υποψήφιους δεδομένων (HR [95% CI] = 0,543, [0,350 – 0,844], p = 0,024), υποδεικνύοντας ότι HOXB7 είχε προγνωστική αξία για τους ασθενείς με ESCC.

για να διερευνήσουν περαιτέρω το λειτουργικό μηχανισμό της HOXB7 στην εμφάνιση και ανάπτυξη της ESCC, εξετάσαμε την έκφραση HOXB7 σε διάφορες κυτταρικές σειρές ESCC και προκρίθηκαν δύο κυτταρικές σειρές που δείχνουν υψηλή έκφραση του HOXB7 (EC109 και KYSE150) για in vitro και in vivo μελέτες.

Κατ ‘αρχάς, η τεχνική παρεμβολής RNA χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία σταθερών κυτταρικών στελεχών HOXB7-knockdown, τα οποία στη συνέχεια χρησιμοποιούνται για την εκτέλεση δοκιμασίας CCK8, δοκιμασία ρυθμού σχηματισμού αποικιών, και ανάλυση του κυτταρικού κύκλου με κυτταρομετρία ροής για να παρατηρηθεί το αποτέλεσμα των HOXB7 επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε ESCC. Τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι ο ρυθμός πολλαπλασιασμού των κυττάρων ήταν βραδύτερη σε κυτταρικά στελέχη HOXB7-knockdown, αποικία ταχύτητα σχηματισμού μειώθηκε, σύλληψη G1 φάσης εμφανίστηκε στα κακοήθη κύτταρα, και η αναλογία των κυττάρων σε φάσεις G1 αυξηθεί σημαντικά. Για την περαιτέρω επαλήθευση των επιπτώσεων των HOXB7 στις in vivo πολλαπλασιασμό των κυττάρων, χρησιμοποιήσαμε στελέχη knockdown κυττάρου να δημιουργεί ογκογονικότητα σε ένα γυμνό μοντέλο ποντικών και διαπίστωσε ότι η ογκογόνο ικανότητα των στελεχών knockdown κυττάρων ήταν σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη των κυττάρων ελέγχου.

στην πραγματικότητα, η απορύθμιση της έκφρασης HOXB7 έχει αναφερθεί σε μία ποικιλία όγκων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού [12-14], τον καρκίνο των ωοθηκών [15], ο καρκίνος του στόματος [16], ορθοκολικό καρκίνο [17], ο καρκίνος του πνεύμονα [18] , μελάνωμα [19-21] και τον καρκίνο του παγκρέατος [22-24]. Η υπερέκφραση του HOXB7 ήταν έδειξε ότι σχετίζεται με κακή πρόγνωση στον καρκίνο του μαστού [14], ο καρκίνος του στόματος [16], ορθοκολικό καρκίνο [17], ο καρκίνος του πνεύμονα [18] και παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα [22, 23]. Αλλά η κλινική σημασία των HOXB7 σε ESCC σπανίως αναφερθεί. Υπήρχαν δύο άρθρα εξερεύνηση προγνωστική σημασία της έκφρασης HOXB7 σε επίπεδο mRNA και πρωτεΐνης σε ESCC πρόσφατα, αλλά τα μεγέθη των δειγμάτων ήταν πολύ περιορισμένος και δεν μπόρεσε να επιβεβαιώσει τα ευρήματά τους σε μια ανεξάρτητη ομάδα [25, 26]. Σε σύγκριση με τις μελέτες αυτές, όχι μόνο επαλήθευσε την αξιοπιστία των ευρημάτων μας σε δύο ανεξάρτητες ομάδες, συμπεριλαμβανομένων 280 περιπτώσεις, αλλά και περαιτέρω μελέτη για να διερευνήσει την πιθανή λειτουργία των HOXB7 σε ESCC. Έχει βρεθεί ότι HOXB7 θα μπορούσε να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου σε άλλους συμπαγείς όγκους [13-19, 27]. Αλλά μέχρι τώρα δεν υπήρχαν μελέτες για τον πιθανό ρόλο των HOXB7 και των υποκείμενων μηχανισμών της στην ESCC. Με βάση τα παραπάνω συζητήθηκαν τα προκαταρκτικά συμπεράσματα, πιστεύουμε ότι HOXB7 είναι πιθανό να χαρακτηριστεί ως προγνωστικό βιοδείκτη για τους ασθενείς ESCC και ανώμαλη έκφραση HOXB7 θα μπορούσαν να επηρεάσουν την ικανότητα πολλαπλασιασμού των κυττάρων.

Εν τω μεταξύ, σημειώσαμε ένα θετικό συσχέτιση μεταξύ υψηλότερη έκφραση πρωτεΐνης HOXB7 και περιφερειακή μετάσταση λεμφαδένα. Έτσι πραγματοποιήσαμε Transwell δοκιμασία της μετανάστευσης και δοκιμασία εισβολής Matrigel, η οποία ανέφερε ότι HOXB7 νοκ ντάουν ανέστειλε τη μετανάστευση των κυττάρων και την ικανότητα εισβολής του EC109 και KYSE150 (S1 σχ? P & lt? 0,05). Αλλά η λειτουργία της HOXB7 στο κελί εισβολή και τη μετάσταση σε ESCC χρειάζονται περαιτέρω διερεύνηση.

Οι μηχανισμοί που διέπουν το ρόλο των HOXB7 σε ESCC είναι ασαφής. Η εξερεύνηση του μηχανισμού περιπλέκεται από την ομοιότητα αλληλουχίας μεταξύ των γονιδίων ΗΟΧ και λειτουργικό πλεονασμό αναγνωρίζεται στο σύστημα γονίδιο ΗΟΧ [7]. Ως μεταγραφικός παράγοντας, HOXB7 διαμεσολαβεί αποτελέσματά της με τη ρύθμιση της μεταγραφής των γονιδίων στόχων. Αν και έχουν πολλά γονίδια έχει αποδειχθεί ότι άμεσα ή έμμεσα ρυθμίζονται από HOXB7 σε άλλα καρκινικά κύτταρα, μόνο λίγα από αυτά έχουν ταυτοποιηθεί ως άμεσοι στόχοι, συμπεριλαμβανομένων bFGF [13, 22, 28]. HOXB7 θα μπορούσε να ενεργοποιήσει άμεσα την έκφραση του βασικού αυξητικού παράγοντα ινοβλαστών (bFGF) και την προαγωγή της ανάπτυξης διαφόρων όγκων, όπως του καρκίνου του μαστού και μελάνωμα [13, 19, 29]. Και bFGF είχε εμπλακεί σε διάφορες βιολογικές διεργασίες, όπως ο πολλαπλασιασμός, η διαφοροποίηση, την επιβίωση και τη μετανάστευση [30]. έκφραση HOXB7 θα μπορούσε να προωθήσει την ανάπτυξη των κυττάρων με την ενεργοποίηση τόσο intracrine και αυτοκρινείς διεγερτική οδούς ανάπτυξης bFGF σε καρκινώματα ωοθηκών [15]. Η έκφραση του bFGF θα μπορούσε να ενεργοποιήσει Ras-RAF-ΜΑΡΚ μονοπάτι μέσω αυτοκρινούς καταρρακτών σηματοδότησης στον καρκίνο του μαστού [12]. Ήταν έδειξε ότι ΡΙ3Κ /ΑΚΤ και ΜΑΡΚ μονοπάτια ενεργοποιήθηκαν με HOXB7 σε καρκίνο του παχέος εντέρου, η οποία μπορεί να εξηγήσει την επιτάχυνση της μετάβασης G1-S επάγονται από HOXB7 [17]. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα αυτά ενίσχυσε τα ευρήματά μας και διευκρίνισε τη σημασία της HOXB7 στην ογκογένεση. Περαιτέρω μελέτες για τον εντοπισμό μηχανισμών για HOXB7 ανάντη ενεργοποιητές, κατάντη στόχους και λειτουργική εταίροι θα άξιζε τον κόπο να κατανοήσουν καλύτερα το ρόλο της HOXB7 σε ESCC

Αυτή η μελέτη έχει κάποιους περιορισμούς:. Τα κλινικά δεδομένα ελήφθησαν από το ενιαίο κέντρο, το μέγεθος του δείγματος δεν ήταν αρκετά μεγάλο, και κλινικές μελέτες ήταν αναδρομικές πραγματικότητα. Επομένως, σε μελλοντικές μελέτες, το μέγεθος του δείγματος θα πρέπει να αυξηθεί, και οι ασθενείς από πολλαπλές κέντρο θα πρέπει να συμπεριληφθούν να διευκρινιστεί αν HOXB7 μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα ειδικό προγνωστικό δείκτη μοριακού σε ESCC. Επιπλέον, μια σε βάθος μελέτη των μοριακών μηχανισμών που διέπουν το ρόλο των HOXB7 στην προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων ESCC είναι δικαιολογημένη.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. HOXB7 προάγει τα ανθρώπινα μετανάστευση ESCC κυττάρων και εισβολή.

(Α) εξόντωση HOXB7 αναστέλλει τη μετανάστευση των κυττάρων όπως προσδιορίζεται με δοκιμασία μετανάστευσης Transwell. (Β) Νοκ ντάουν της HOXB7 αναστέλλει την ανάπτυξη των κυττάρων, όπως έδειξε η ανάλυση εισβολή Matrigel. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν μέση τιμή ± SD από 3 ανεξάρτητα πειράματα. *, P & lt? 0,05

doi:. 10.1371 /journal.pone.0130551.s001

(ΔΕΘ)

S1 αρχείου.