Αφηρημένο

πρωτεΐνης σπέρματος (SP17) είναι ένας ελκυστικός στόχος για τον καρκίνο των ωοθηκών (OC) εμβόλια λόγω της υπερ-έκφραση της στην πρωτοβάθμια όσο και στη μεταστατικών βλαβών, σε όλα τα στάδια της νόσου. Οι μελέτες μας δείχνουν ότι ένα εμβόλιο που βασίζεται SP17 μπορεί να επάγει ένα διαρκές άμυνα έναντι ανάπτυξη OC σε C57BL /6 ποντίκια με κύτταρα ID8, μετά προφυλακτικές και θεραπευτικές αγωγές. Αυτή είναι η πρώτη φορά που ένα ποντίκι ομόλογό του καρκινικού αντιγόνου όρχεων (SP17) δείχθηκε ότι εκφράζεται σε ένα μοντέλο ποντικού OC, και ότι ο εμβολιασμός κατά αυτού του αντιγόνου ελέγχεται σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου. Η μελέτη μας δείχνει ότι η CpG-εμβολίου εκδόχου SP17 ξεπερνά το ζήτημα της ανοσολογικής ανοχής, το μεγαλύτερο εμπόδιο για την ανάπτυξη αποτελεσματικών ανοσοθεραπείας για OC. Επιπλέον, η μελέτη αυτή παρέχει μια καλύτερη κατανόηση της βιολογίας OC δείχνοντας ότι Th-17 κύτταρα ενεργοποίησης και σύγχρονα ανοσοκατασταλτικά Τ-κυττάρων reg αναστολή απαιτείται για την αποτελεσματικότητα του εμβολίου. Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η προφυλακτική και θεραπευτική εμβολιασμοί μπορούν να προκαλέσουν μακροχρόνια προστασία κατά του οργανωμένου εγκλήματος και του όγκου καθυστέρηση της ανάπτυξης, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτή η στρατηγική μπορεί να παρέχει πρόσθετες επεξεργασίες των ανθρώπινων OC και την πρόληψη της εμφάνισης της νόσου σε γυναίκες με οικογενειακό ιστορικό της OC.

Παράθεση: Chiriva-Internati Μ, Yu Υ, Mirandola L, Jenkins MR, Chapman C, Cannon M, et al. (2010) Καρκίνος Όρχεων αντιγόνου Ο εμβολιασμός παρέχει μακροχρόνια προστασία σε ένα μοντέλο ποντικού για καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 5 (5): e10471. doi: 10.1371 /journal.pone.0010471

Επιμέλεια: Sudhansu Kumar Dey, Ίδρυμα Έρευνας Σινσινάτι των παιδιών, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21 Φλεβάρη του 2010? Αποδεκτές: 12 του Απριλίου του 2010? Δημοσιεύθηκε: May 12, 2010

Copyright: © 2010 Chiriva-Internati et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τον Billy και Ruby Ισχύς Endowment for Cancer Research and Laura W. Bush Ινστιτούτο Γυναικών Υγείας και το Κέντρο για την Υγεία των Γυναικών και Ισότητας-Based Medicine. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών (OC) είναι η έκτη πιο κοινή μορφή καρκίνου και η έβδομη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις γυναίκες [1], [2]. Μεταξύ OC, το 90% των περιπτώσεων αντιπροσωπεύονται από επιθηλιακά καρκίνους των ωοθηκών (EOC), που προκύπτουν από την επένδυση επιθήλιο, η επιφάνεια των ωοθηκών ή κύστεις ένταξη [3], [4]. Η θνησιμότητα των OC πηγάζει από την ανικανότητα να ανιχνεύει την ασθένεια σε πρώιμο στάδιο όργανο-περιορισμένο και από την έλλειψη αποτελεσματικών θεραπειών για προχωρημένο στάδιο της νόσου [4]. Η καθυστερημένη διάγνωση και το υψηλό ποσοστό της αντίστασης στη χημειοθεραπεία περιορίζουν τις διαθέσιμες επιλογές θεραπείας. OC ασθενείς με οικογενειακό ιστορικό του λογαριασμού OC για το 10% όλων των περιπτώσεων [5]. Κλινική επιλογές για τους ασθενείς αυτούς είναι η χειρουργική επέμβαση που οδηγεί σε στειρότητα, ή χημειοπροφύλαξη με από του στόματος αντισυλληπτικά, που συχνά συνδέονται με σοβαρές παρενέργειες [6], [7]. Οι ανοσοθεραπεία στρατηγικές συμπεριλαμβανομένων των εμβολίων για τον καρκίνο θεωρείται λιγότερο τοξικά και πιο συγκεκριμένες από τις τρέχουσες θεραπείες [8], και ως εκ τούτου κατέχει τη δυνατότητα να παρέχει οφέλη για τους ασθενείς OC με εμφανή νόσο και για τους ασθενείς OC υψηλού κινδύνου. Λόγω της ειδικότητας δράσης τους, ισχυρός και μακροχρόνιες επιπτώσεις και εφαρμοσιμότητα σε σχεδόν οποιοδήποτε τύπο του όγκου, τα εμβόλια κατά του καρκίνου οδήγηση το ενδιαφέρον των κλινικών ογκολόγους. Ένα βασικό βήμα για την ανάπτυξη των βασικών εμβολίων κατά του καρκίνου είναι η εφαρμογή στρατηγικών εμβολιασμού που επιτρέπει την συνεπή διέγερση ανοσοαποκρίσεων προς αντιγόνα όγκου. Από την άποψη αυτή, η επιλογή των κατάλληλων αντιγόνων, με βάση τόσο τη συχνότητα και την ιδιαιτερότητα της έκφρασης τους σε καρκινικούς ιστούς, είναι ύψιστης σημασίας. Τα καρκινικά αντιγόνα /όρχεις (CTA) [9], [10], [11], [12], τα οποία περιλαμβάνουν το αντιγόνο SP17 [9], [13], [14], [15], [16], οι αναδυόμενες ως ελπιδοφόρα υποψήφιοι για συγκεκριμένες ανοσοθεραπευτικών στόχους. CTA αντιπροσωπεύουν μια υποκατηγορία των αντιγόνων που σχετίζονται με όγκο (ΤΑΑ) που είναι μη μεταλλαγμένα αυτοαντιγόνα που εκφράζονται ή υπερεκφράζονται σε όγκους, και αναγνωρίζεται από CD8 Τ-κύτταρα [12], [14], [17], [18], [19], [20]. Η ανοσογόνος πρωτεΐνη SP17 έχει χαρακτηριστεί εκτενώς [10], [20], [21], [22], [23], [24], [25]. Ανθρώπινη SP17 είναι εντόνως διατηρημένη, που έχει 70% ομολογία με κουνέλι και ποντίκι, και 97% ομολογία με μπαμπουίνου [25]. SP17 έχει ένα μοριακό βάρος από 17,4 KDa, κωδικοποιείται από ένα γονίδιο που βρίσκεται στο χρωμόσωμα 11, και παρεκκλίνοντα εκφράζεται σε καρκίνους των μη συνδεδεμένων ιστολογικής προέλευσης [25] συμπεριλαμβανόμενου του πολλαπλού μυελώματος (ΜΜ) και OC [21], [22]. SP17-ειδικά CTL, που δημιουργούνται από φυσιολογικούς δότες, ΜΜ και OC ασθενείς, έχουν δειχθεί να σκοτώσουν HLA-συμφωνημένα κυτταρικές γραμμές όγκου και φρέσκα κύτταρα όγκου παρουσιάζουν επίτοπα SP17 δεσμεύονται σε HLA τάξης Ι μόρια [13], [14], [21] . Αυτές οι παρατηρήσεις υποστηρίζουν πρόσφατες μελέτες υποδηλώνουν ότι SP17 μπορεί να είναι ένα κατάλληλο αντιγόνο για ανοσοθεραπεία σε OC [13], [25]. Οι ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες που συνήθως χρησιμοποιούνται στην ανάπτυξη αντι-ιικών εμβολίων, και μπορεί να αποτελέσει ελκυστική εμβόλια υποψήφιος αντικαρκινική [11], [26], [27], [28], [29]. Επαγγελματική κύτταρα παρουσίασης αντιγόνου (APC) ανιχνεύουν παθογόνων μέσω μιας ποικιλίας υποδοχέων όπως οι υποδοχείς τύπου ΤοΙΙ (TLR), τα οποία αναγνωρίζουν μοριακή μοτίβα παθογόνο που σχετίζεται, μεταξύ των οποίων CpG ολιγοδεοξυνουκλεοτίδια (CpG ODN) σε καθορισμένες πλευρικές αλληλουχίες [27], [ ,,,0],29], [30], [31]. Τα CpG μοτίβα, τα οποία συχνά εκφράζονται στο βακτηριακό γονιδίωμα, αλλά γονιδιωματικά καταστέλλεται σε σπονδυλωτά, θεωρούνται ξένα από το ανοσοποιητικό σύστημα και, κατά συνέπεια, να διεγείρουν τους μηχανισμούς άμυνας του ξενιστή [11], [27], [29], [32], [33], [34]. CpG-ODN εμφανίζουν μεγάλο δυναμικό στη θεραπευτική αντιμετώπιση του καρκίνου λόγω της ικανότητάς τους να ενεργοποιούν την έμφυτη και προσαρμοστική ανοσία [15], [26], [27], [28]. Η TLR9 CpG-δεσμευτική επάγει έκκριση Th1 κυτοκινών, συμπεριλαμβανομένων των ΙΡΝ-γ και ΤΝΡ-α, και την παραγωγή αντιγονο-ειδικών IgG2a από κύτταρα Β [11], [12], [32], [33], [34]. Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήσαμε την προφυλακτική και θεραπευτική ανοσολογική ανταπόκριση που προκαλείται από επαναλαμβανόμενο εμβολιασμό με SP17 ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη χορηγείται με CpG. Χρησιμοποιήσαμε το OC κυτταρική σειρά ποντικού ID8, που προέρχεται από μια αυθόρμητη

in vitro

κακοήθη μετασχηματισμό των κυττάρων των ωοθηκών επιφάνεια επιθηλιακών C57BL /6 ποντίκι για να επάγει την ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς [34]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν για πρώτη φορά ότι το αστάρωμα με SP17 πρωτεΐνη και CpG είναι μια αποτελεσματική στρατηγική για να προκαλέσει διαρκή θεραπεία OC.

Αποτελέσματα Χαρακτηρισμός της SP17 και της έκφρασης MHC-Ι σε κύτταρα ID8

mRNA SP17 (Σχήμα 1α) και πρωτεΐνη SP17 (Σχήμα 1β) ανιχνεύτηκαν στην κυτταρική γραμμή ID8. Περαιτέρω χαρακτηρισμός με ανοσοκυτταροχημεία (ICC) και ανοσοφθορισμού (IF) αποκάλυψε κυτταροπλασματική και επιφάνεια χρώση αυτών των κυττάρων (Σχήμα 1γ). Η κυτταροφυγοκέντρησης των ID8 διαπερατών κυττάρων (Ρ) παρουσιάζει μια θετική κυτταροπλασματική χρώση για SP17, η οποία επιβεβαιώθηκε από IF. Επιπλέον, οι μη διαπερατά (NP) κύτταρα δείχνουν επίσης σαφή έκφραση μέσω IF (Σχήμα 1γ, χαμηλότερα τεταρτημόρια) αν και λιγότερο από το ΔΠΔ (Σχήμα 1γ, πάνω τεταρτημόρια). Εμείς αναλύθηκαν περαιτέρω έκφραση επιφάνειας SP17 μέσω της ανάλυσης κυτταρομετρίας ροής που έδειξαν υψηλή συχνότητα SP17 θετικά κύτταρα (Σχήμα 1δ). Παρομοίως, η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι το 60% των κυττάρων χρωματίστηκαν ID8 θετικά για MHC-I υπό βασικές συνθήκες καλλιέργειας, ενώ προσθήκη 100 IU /mL IFN-γ για 72 ώρες είχε ως αποτέλεσμα 98% θετικά κύτταρα MHC-I.

SP17 mRNA στα κύτταρα όγκου ποντικού ID8 και στους όρχεις ποντικού (θετικός έλεγχος). Τα επίπεδα mRNA αναλύθηκαν με RT-PCR για την έκφραση SP17. Ένα κυτταρικό γονίδιο housekeeping, Β-ακτίνη, συμπεριλήφθηκε ως μάρτυρας. Ένας έλεγχος PCR-μόνο (χωρίς βαθμίδα RT) απέτυχαν να παράγουν ένα προϊόν, που δείχνει ότι δεν υπήρχε μόλυνση DNA στα δείγματα. Εκτός από την RT-PCR (βλέπε σχήμα 1α), κηλίδα Western εκτελέστηκε και το σχήμα 1b δείχνει την έκφραση SP17 στο πρωτεϊνικό επίπεδο. Η κυτταρική γραμμή ID8 χαρακτηρίστηκε περαιτέρω από μια ανοσοκυτταροχημεία (ICC) και ανοσοφθορισμού (IF). Αυτό το σχήμα δείχνει μία cytospin κυττάρων ID8 διαπερατά (Ρ) και ένα θετικό χρώση για SP17 σε επίπεδο κυτταρόπλασμα. Επιπλέον, SP17 επιβεβαιώθηκε από IF στο κυτταρόπλασμα. Επιπλέον, στο σχήμα 1γ, τα κύτταρα τα μη διαπερατά (NP) δείχνουν σαφή έκφραση μέσω IF και λιγότερο από το ΔΠΔ. Πάνελ d δείχνει ID8 χαρακτηρισμός για επιφανειακή έκφραση του SP17 και MHC-I? Isot. ctrl, ισοτυπικό αντίσωμα ελέγχου? ποσοστό δείχνουν θετική χρώση κυττάρων. έκφραση MHC-Ι αξιολογήθηκε με ή χωρίς IFN-g διέγερση.

Η

In vivo

ανάπτυξη των κυττάρων ID8 μετά από ενδοπεριτοναϊκή ένεση

Τέσσερις διαφορετικές δόσεις των κυττάρων ID8 (10

5, 5 × 10

5, 10

6 και 2 × 10

6) ενέθηκαν σε τέσσερις ομάδες ποντικών (πέντε ανά ομάδα) για να προσδιοριστεί η βέλτιστη δόση για επαγωγή όγκων /σχηματισμό ασκίτη. Κάθε σύνολο πειραματικών εμβολιασμών με διαφορετικές δόσεις των κυττάρων ID8 διεξήχθη τουλάχιστον τρεις φορές. Τα ζώα από κάθε ομάδα τιτλοδότηση όγκου υποβλήθηκαν σε ευθανασία σε διαφορετικά χρονικά σημεία, στο οποίο μια μεταθανάτια εξέταση πραγματοποιήθηκε σε ολόκληρα ζώα και τεμαχίστηκαν όργανα (δεν φαίνεται). ανάπτυξη βέλτιστη όγκου (με βάση το χρόνο και διάσταση) παρατηρήθηκε με 1 από τα 4 συνθηκών (2 × 10

6 ID8 κύτταρα) δοκιμάστηκαν. Σχήμα 2α δείχνει ότι μια ε.π. ένεση 10

5 κύτταρα ID8 δημιουργείται μία ανάπτυξη του όγκου μετά από 120 ημέρες, ενώ το 5 × 10

5 ID8 κύτταρα δημιούργησαν μια μάζα όγκου /ασκίτη σε 90 ημέρες (Σχήμα 2β). Μια δόση 106 κύτταρα παρουσίασαν /ανάπτυξη ασκίτη μάζα σημαντική όγκου από περίπου 60 ημέρες (Σχήμα 2c) και όταν εγχύθηκαν 2 χ 106 κύτταρα ID8, οι βέλτιστες μάζα όγκου /ασκίτη επιτεύχθηκε σε 40 έως 45 ημέρες (Σχήμα 2d), και οι περισσότεροι θάνατοι σημειώθηκαν μεταξύ 50-65 ημερών, είτε λόγω της μάζας του όγκου ή θυσία να αποφευχθεί η υπερβολική ταλαιπωρία για τα ποντίκια. Το σχήμα 3α απεικονίζει ένα ποντίκι ενίεται με τη βέλτιστη δόση (2 × 10

6) των κυττάρων ID8 να παράγουν μάζα του όγκου /ασκίτη (44 mm σε πλάτος) σε λιγότερο από 45 ημέρες, και ένα ποντίκι ελέγχου (20 mm σε πλάτος) ότι δεν εγχύθηκε με κύτταρα ID8. Το σχήμα 3b δείχνει την παραγωγή ασκιτών από ενδοπεριτοναϊκή ένεση 2 χ 10

6 κύτταρα ID8 σε λιγότερο από 40 ημέρες, και δείχνει επίσης μια λεπτομερή εικόνα της περιτοναϊκής κοιλότητας ενός ποντικού μετά την αναρρόφηση 22 ml του ασκίτη, αποκαλύπτοντας αρκετές μεταστατικό κόμβοι και οι μάζες του όγκου. Επιπλέον, το Σχήμα 3 επιβεβαιώνει ότι τα κύτταρα στο περιτόναιο των ποντικών που ενέθηκαν με κύτταρα ID8 εκφράζουν SP17 με ανοσοϊστοχημεία (IHC), ενώ τα κύτταρα από έναν ποντικό χωρίς την ένεση του όγκου ήταν αρνητικά για SP17 (σχήματα 3e, f και g). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι SP17 εκφράζεται στην κυτταρική σειρά ID8,

in vivo

. Για να επιβεβαιωθεί η μάζα του όγκου /ασκίτη προέρχονταν από τα κύτταρα ID8, δείγματα περιτοναϊκού, του όγκου μάζας /κόμβους, πνεύμονα, ήπατος, ασκίτης, σπλήνα και ωοθήκες ερευνήθηκαν με RT-PCR. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται στο σχήμα 3d, (αντιπροσωπευτική εικόνα 5 ποντικών ανά πείραμα, επαναλήφθηκε εις τριπλούν) για ID8 ένεση ποντικούς (σχήμα 3d-1) και ποντικούς ελέγχου (σχήμα 3d-2). Περαιτέρω, μια δοκιμασία εντοπισμού φθορισμού με βάση διεξήχθη για την ανίχνευση GFP-θετικά κύτταρα ID8

in vivo

, και επιβεβαίωσε την περιτοναϊκή εντοπισμό των ID8 κύτταρα (σχήμα 3 ώρες).

Εμφανίζει το προοδευτικό σχηματισμό ασκίτη /όγκους όταν ip ένεση με κύτταρα ID8. ID8 εγχέεται Τα ποντίκια παρουσιάζονται ως m1-m5. Τα ποντίκια ελέγχου ενέθηκαν μόνο με PBS. 1α δείχνει ποντικούς που έχουν εγχυθεί με 10

5 κύτταρα ID8. Οι όγκοι δεν κατέληξε σε σημαντικό μέγεθος έως ότου μετά από 150 ημέρες. 2b δείχνει την προοδευτική σχηματισμό ασκίτη /όγκους όταν ε.π. ένεση με 5 × 10

κύτταρα 5 ID8. Οι όγκοι δεν κατέληξε σε σημαντικό μέγεθος έως ότου μετά από 120 ημέρες. 2c δείχνει την προοδευτική σχηματισμό ασκίτη /όγκους όταν ε.π. ένεση με 10

6 κύτταρα ID8. Οι όγκοι φτάσει σε ένα σημαντικό μέγεθος σε 90-120 ημέρες. 2d δείχνει την προοδευτική σχηματισμό ασκίτη /όγκους όταν ε.π. ένεση με 2 × 10

κύτταρα 6 ID8. Οι όγκοι φτάσει σε ένα σημαντικό μέγεθος σε 35-60 ημέρες (ρ & lt? 0,0001)? μια ορατή διεύρυνση των ποντικών παρατηρήθηκε στις 30 ημέρες.

Η

Α δείχνει στην αριστερή πλευρά ένα ποντίκι ελέγχου (πλάτος του ποντικού 20 mm) δεν εγχέονται με κύτταρα ID8 και στη δεξιά πλευρά εγχύθηκε ένα ποντίκι με 2 × 106 κύτταρα ID8 μετά από 40 ημέρες (εύρος ποντίκι 44 mm). Αυτά τα ποντίκια αντιπροσωπεύουν πειράματα με παρόμοια αποτελέσματα. b δείχνει την πλήρη περιτοναϊκή κοιλότητα του ασκίτη που προκαλείται από ενδοπεριτοναϊκή ένεση 2 χ 106 ID8 σε 40 ημέρες (αριστερά) και ένα ανοικτό όψη της κοιλότητας με διάφορα μεταστατικό κόμβους και μάζες όγκου (κέντρο και δεξιά, μετά την αναρρόφηση 22 mL του ασκίτη) . c δείχνει μια περιτόναιο αρνητική για SP17 από ένα ποντίκι ελέγχου δεν εγχέονται με κύτταρα ID8. f δείχνει μια θετική έκφραση του SP17 στο περιτόναιο ενός ποντικού εγχύθηκε με 2 χ 106 κυττάρων ID8 μετά από 40 ημέρες. Όρχεις είναι ο θετικός έλεγχος για SP17 από ICH (g). Το Σχήμα d δείχνει PCR για SP17 DNA (και έλεγχος Β-ακτίνη): ένα πάνελ ιστών που προέρχεται από (1) τα όργανα ενός 2 × 106 ID8 εγχέεται ποντικού ήταν θετικός για SP17 και ένα πάνελ των ιστών που προέρχονται από όργανα ενός υγιούς ποντικού απεκάλυψε δεν έκφραση του SP17. Οι θετικοί μάρτυρες (ID8 και όρχεις) για SP17 δείχνονται επίσης. Πίνακας h παρουσιάζει σε εικόνες vivo φθορισμού ενός ελέγχου (αριστερά) και ID8-ένεση (δεξιά) ποντίκι για τον εντοπισμό των κυττάρων ID8 GFP-θετικά.

Η

σχήματα ανοσοποίησης και μέτρηση της ανάπτυξης του όγκου

Τα ποντίκια εμβολιάστηκαν με διαφορετικές συνθέσεις: SP17 μόνο? CpG μόνο? και SP17 + CpG, συν-χορηγείται. Ένα σύνολο 22 ποντικών ανοσοποιήθηκαν με κάθε σκεύασμα εμβολίου. Τα ποντίκια ανοσοποιήθηκαν ενδομυϊκά (ενδομυϊκή) με 50 μα πρωτείνης SP17 και 20 μg CpG σε διαφορετικά χρονικά σημεία, όπως περιγράφεται παραπάνω. Αξιολόγηση της ανάπτυξης του όγκου ή /και ασκίτη παρακολουθήθηκε κάθε τρεις εβδομάδες, χρησιμοποιώντας δαγκάνες μηχανικός. Επιβίωση ακολούθησε έως ότου οι όγκοι έφθασαν όγκους πάνω από 1.000 mm

3, σύμφωνα με τις Οδηγίες Επιτροπής Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση.

Η αξιολόγηση των ποσοστών επιβίωσης μετά προφυλακτικά και θεραπευτικά εμβόλια SP17 /CPG

τα κύτταρα του όγκου εγχύθηκαν 30 ημέρες μετά την 3

rd εμβολιασμός του προφυλακτική αγωγή, ή 21 ημέρες πριν από την πρώτη θεραπευτικού εμβολιασμού. Όλα SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια (100%) ήταν χωρίς όγκο 91 ημέρες μετά την ένεση του όγκου με κύτταρα ID8 (2 × 10

6), ενώ κανένα από τα μη εμβολιασμένα ζώα (ID8 μόνο) ήταν εν ζωή. Εικόνα 4α επιδεικνύει τα ποσοστά επιβίωσης των ποντικών που έλαβαν προφυλακτική ανοσοποιήσεις: 12,5% του SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια ανέπτυξαν μικρές μάζες όγκου και ασκίτη μετά 91 ημέρες και πέθανε 180 ημέρες μετά με όγκους βαρύ φορτίο. Επιπλέον, το 8% των εμβολιασμένων ποντικών ανέπτυξαν όγκους και ασκίτη, και πέθανε μετά από 200 ημέρες. Ωστόσο, οι όγκοι ήταν σημαντικά μικρότερες από τις ωοθηκών όγκων των ποντικών ελέγχου που εμβολιάστηκαν με μόνο PBS. Η συνολική επιβίωση των SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια ήταν 79% για πάνω από 300 ημέρες. Ανάλυση που πραγματοποιήθηκε από Log-rank (Mantel-Cox) Test έδειξε ότι οι συνολικές καμπύλες επιβίωσης ήταν στατιστικά σημαντική (p & lt? 0,0001) για την ομάδα που εμβολιάστηκε με SP17 + CpG σε σύγκριση με τις άλλες ογκομετρήσεις εμβόλιο. Το Σχήμα 4β δείχνει τα ποσοστά επιβίωσης των ποντικών που έλαβαν θεραπευτική ανοσοποιήσεις. Λιγότερο από το 11% των SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια ανέπτυξαν μικρές μάζες του όγκου και ασκίτη μετά από 150 ημέρες και πέθανε μετά από 210 ημέρες από όγκους βαρύ φορτίο. Επιπλέον, λιγότερο από το 10% των εμβολιασμένων ποντικών ανέπτυξαν όγκους και ασκίτη, και πέθανε μετά 280 ημέρες. Η συνολική επιβίωση των SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια ήταν 80% για πάνω από 300 ημέρες. Η ανάλυση διεξήχθη με Log-rank (Mantel-Cox) Δοκιμή και έδειξε ότι οι συνολικές καμπύλες επιβίωσης ήταν στατιστικά σημαντική (p & lt? 0,0001) για την ομάδα που εμβολιάστηκε με SP17 + CpG σε σύγκριση με τις άλλες ογκομετρήσεις εμβόλιο. Τέλος, οι ομάδες ελέγχου εμβολιάστηκαν με SP17 μόνο και το CpG μόνο έδειξε μερικούς για καμία προστασία, ότι δεν ήταν στατιστικά σημαντική (σχήμα 4α και 4β).

Συνολική επιβίωση των ποντικών από τις τέσσερις προφύλαξη (α) ή θεραπευτικά (β ) ομάδες, που περιγράφονται στο κείμενο (χωρίς όγκο, SP17 + CpG εμβολιαστεί, μη εμβολιασμένα, SP17 ή CpG εμβολιαστεί). Ποντικοί που φέρουν όγκο ήταν ε.π. ένεση με 10

6 κύτταρα ID8 τόσο για την προφυλακτική και θεραπευτικές αγωγές. Τα κύτταρα του όγκου εγχύθηκαν 30 ημέρες μετά την 3

rd εμβολιασμός του προφυλακτική αγωγή, ή 21 ημέρες πριν από την πρώτη θεραπευτικού εμβολιασμού. Στην θεραπευτική ομάδα, η μέση διαφορά βάρους μεταξύ του όγκου-αμφισβητηθεί και χωρίς-όγκο ζώα ήταν 10 γραμμάρια κατά την έναρξη της αγωγής εμβολιασμού. Οριζόντια χρόνος άξονας εμφανίζει εκφράζονται ως ημέρα από την έναρξη της θεραπείας. δοκιμασία log-rank έδειξε στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των μη εμβολιασμένων και SP17 + CpG εμβολιαστεί έναντι μη εμβολιασμένα ή CpG ομάδα αγωγής (p & lt? 0,0001). για τα δύο σχήματα

Η

Μέτρηση SP17-ειδικών αποκρίσεων αντισώματος και έκφραση κυτοκινών από ELISA δοκιμασία

Ανάλυση του SP17-ειδική απόκριση αντισώματος που παράγεται στο εμβολιασμένο ποντίκια φαίνεται στο Σχήμα 5. Η αντιπροσωπευτική δοκιμασία ELISA διεξήχθη για να αναλυθεί η ανοσολογική απόκριση από 3 διαφορετικά σκευάσματα εμβολίων: SP17 + CpG? CpG μόνο? και μόνο SP17. Μεταγενέστερες εμβολιασμοί αυξημένη ειδική αντι-SP17 αποκρίσεις αντισώματος σε σύγκριση με τον πρώτο εμβολιασμό. Στο σχήμα 5β, δείξαμε ένα υψηλό ποσό των ειδικών αντι-SP17 αντισωμάτων από τα δύο σκευάσματα SP17 σε 3

ο εμβολιασμός rd. Ερευνήσαμε την επαναλαμβανόμενη πρόγραμμα εμβολιασμού, διότι, σε ένα κλινικό περιβάλλον, οι ασθενείς που είναι σε ύφεση είναι συχνά συνεχίζουν να εμβολιαστεί έτσι ότι δεν υπάρχει υποτροπή του όγκου. Ωστόσο, υπήρξε μια μικρή μείωση του ποσού της ανοσολογικής απόκρισης σε σύγκριση με την 3

εμβολιασμός rd αναλύσεις σε όλα τα τρία σκευάσματα εις την 9

ου εμβολιασμό (Σχήμα 5C), αλλά αντι-SP17 επίπεδα IgG σε SP17 + CpG εμβολιαστεί ομάδα ήταν ακόμη στατιστικώς υψηλότερο σε σύγκριση με τις άλλες συνθέσεις του εμβολίου (ρ & lt? 0.001). Στην θεραπευτική ομάδα αγωγή, SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερη (ρ & lt? 0,01) παραγωγή IgG αντι-SP17 μετά 270 ημέρες, σε σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με τα άλλα σκευάσματα (σχήμα 5d). Στο σχήμα 6 δείξαμε την έκφραση των κυτοκινών σε ημέρες 270 (στο 9

ου εμβολιασμός) σε αμφότερα προφυλακτική (6α) και θεραπευτική (6β) σχήματα. Ορός συλλέχθηκε και αναλύθηκε με ELISA δοκιμασία (IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, ΙΡΝ-γ, TNF-α, GM-CSF) από ποντίκια εμβολιασμένα με SP17 + CpG και σε σύγκριση με ορό από ποντίκια εμβολιασμένα με SP17 μόνο, CpG μόνο του ή μόνο PBS. Είναι ενδιαφέρον ότι, ΙΡΝ-γ από το SP17 + CpG εμβολιασμένων ποντικών αυξήθηκε κατά σχεδόν δύο πτυχές σε σύγκριση με τις SP17 εμβολιασμένα ζώα ή γύρω από τρεις πτυχώσεις σε σύγκριση με CpG εμβολιασμένα ζώα (Σχήμα 6Α και Β). Σε προφυλακτικά εμβολιασμένα ποντίκια, TNF-α από σκεύασμα SP17 + CpG αυξήθηκε περισσότερο από τρεις πτυχές, σε σύγκριση με το CpG εμβολιασμένα ποντίκια και μόνο δύο πτυχώσεις σε σύγκριση με SP17 εμβολιασμένα ποντίκια (Σχήμα 6Α). προσαυξήσεις GM-CSF ήταν τρεις πτυχώσεις υψηλότερο από το CpG εμβολιασμένα ποντίκια και λιγότερο από δύο πτυχώσεις υψηλότερη έναντι SP17 εμβολιασμένα ποντίκια (Σχήμα 6Α). Σε θεραπευτικά εμβολιασμένα ζώα, ΤΝΡ-α από σκεύασμα SP17 + CpG αυξήθηκε δύο πτυχές σε σύγκριση με τον CpG και με SP17 μόνος σκευάσματα (Σχήμα 6Β). GM-CSF εμφανίζεται δύο φορές και περισσότερες από μία φορές αύξηση σε σύγκριση με το CpG και σκευάσματα SP17 μόνο, αντίστοιχα (Σχήμα 6Β). Όσον αφορά τις άλλες κυτοκίνες, δεν υπήρχε σημαντική έκφραση της IL-2, IL-4, IL-5 ή IL-10 (Σχήμα 6Α και Β).

Ορός από ποντίκια που υποβλήθηκαν διαφορετικές θεραπείες συλλέχθηκε και αναλύθηκε με ELISA για τα επίπεδα των κυκλοφορούντων αντι-SP17 IgG. Ο άξονας Χ δείχνει σειριακές αραιώσεις ορού. α, β και γ δείχνουν τα αποτελέσματα που λαμβάνονται στα σχήματα προφυλακτικό εμβολιασμό, ενώ d εμφανίζει την απόκριση των ποντικών από τη θεραπευτική αγωγή. Την ημέρα 7 (α) η ανοσολογική απόκριση ήταν χαμηλή για SP17. Την ημέρα 97 (β), η ανοσολογική απόκριση ήταν υψηλότερη από ό, τι την ημέρα 7. Την ημέρα 270 (c), η απόκριση για SP17 ήταν λίγο μικρότερη από ό, τι την ημέρα 97.

Η

Την ημέρα 300, ορός συλλέχθηκε και αναλύθηκε με ELISA για τη μέτρηση των επιπέδων κυτοκίνης υποδεικνυόμενες σε προφυλακτικά (α) ή θεραπευτικά (β) εμβολιασμένα ποντίκια. Και για τα δύο σχήματα, ΙΡΝ-γ, TNF-α και GM-CSF στατιστικά σημαντικές αυξήσεις ανιχνεύθηκαν μόνο σε SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (PBS). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές αποδεικνύεται για IL-2, IL-4, IL-5 ή IL-10 επίπεδα.

Η

Αξιολόγηση των CTL κατά του όγκου αποκρίσεις

Στο σχήμα 7α, ο ELISPOT ΙΡΝ -γ δοκιμασία εκτελέστηκε την ημέρα 270 (9

ου εμβολιασμός) με τη χρήση κυττάρων σπληνός από SP17 + CpG προφυλακτικώς ανοσοποιημένους ποντικούς. Η στρατηγική των επαναλαμβανόμενων εμβολιασμών σε αυτό το ζωικό μοντέλο είναι να αντανακλούν τις τρέχουσες ανθρώπινες κλινικές δοκιμές. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η συχνότητα του SP17-ειδικών CTL αυξήθηκε στην βέλτιστη ομάδα (SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια) και έδειξε 220 ± 30 θετικές κηλίδες στα κύτταρα σπλήνα έναντι του SP17 εμβολιαστεί (184 ± 18) και έναντι των ΟρΟ-εμβολιασμένα ποντίκια ότι ήταν τόσο χαμηλά όσο 9 ± 2. Στο σχήμα 7b, η δοκιμασία ΤΝΡ-α ELISPOT εκτελέστηκε την ημέρα 270 (9

ου εμβολιασμός προφυλακτικής χρονοδιαγράμματος) με τη χρήση κυττάρων σπληνός από SP17 + CpG ανοσοποιημένους ποντικούς (ότι ήταν η καλύτερη τυποποίηση για μια ισχυρή ανοσολογική απόκριση). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η συχνότητα του SP17-ειδικών CTL αυξήθηκε στην βέλτιστη ομάδα (SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια), που δείχνει 240 ± 35 θετικές κηλίδες στα κύτταρα σπλήνα έναντι ο SP17 εμβολιάζονται μόνο (200 ± 31) και έναντι της CpG εμβολιασμένα ποντίκια ότι ήταν τόσο χαμηλά όσο 12 ± 2. Αναλόγως, στο σχήμα θεραπευτικό εμβολιασμό, η συχνότητα του SP17-ειδικών CTL αυξήθηκε στην ομάδα SP17 + CpG με 259 ± 20 ΙΡΝ-γ και 159 ± 30 του TNF-α θετικό κηλίδες, έναντι 100 ± 20 ΙΡΝ-γ και 70 ± 10 ΤΝΡ-α θετικό σημεία στο SP17 και CpG μόνο συνθέσεις, αντίστοιχα (Σχήμα 6C και d). Αυτά τα αποτελέσματα συνολικά υποδηλώνουν μια υψηλή και ειδική ανοσολογική αντίδραση που επάγεται από SP17 όταν συγχορηγείται με CpG, ανεξάρτητα από την ενέκρινε πρόγραμμα εμβολιασμού Για την δοκιμασία κυτταροτοξικότητας με

μέτρηση 51Cr-απελευθέρωσης, σπληνοκύτταρα συλλέχθηκαν κατά τη στιγμή της 1

ου, 3

ου και 9

ου εμβολιασμούς από SP17 εμβολιασμένα ποντίκια, CpG εμβολιασμένα ποντίκια, και SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια. Η δοκιμασία CTL έδειξε ισχυρότερες αποκρίσεις CTL σε SP17 + CpG εμβολιασμένα ποντίκια σε σύγκριση με τα ποντίκια που ανοσοποιήθηκαν με SP17 ή CpG μόνο, τόσο στην προφυλακτική (Σχήμα 8) και θεραπευτικά (σχήμα 9) σχήματα. Επειδή σε κανονικές συνθήκες καλλιέργειας ID8

in vitro

, υπάρχει μια χαμηλή έκφραση των κυττάρων MHC Τάξης Ι μόρια ID8 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία

in vitro

με ΙΡΝγ (100 IU /mL για 72 ώρες) για να προκληθεί υψηλότερα επίπεδα έκφρασης, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως (Σχήμα 1 D, κάτω πίνακας). κύτταρα ID8 ενεργοποιημένα με IFN-γ χρησιμοποιήθηκαν ως καλύτερους στόχους για τη δοκιμασία κυτοτοξικότητας.

Την ημέρα 270 (9

ου εμβολίου) σπληνοκύτταρα από διαφορετικά σκευάσματα των εμβολιασμένων ποντικών και ελέγχων συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν με ELISPOT χημική δοκιμή. α, β) τη συχνότητα της IFN-γ και TNF-άλφα θετικά κύτταρα σε προφυλακτικές εμβολιασμούς? c, d) συχνότητα της IFN-γ και TNF-άλφα θετικά κύτταρα σε θεραπευτικές εμβολιασμούς. Αυτά τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως κύτταρα που σχηματίζουν κηλίδες ανά 10

6 σπλήνας. αριθμούς Spot αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή των δέκα ποντικών σε κάθε εμβολιασμένη ομάδα? μπαρ, SE.

Η

Σπληνοκύτταρα από τις τρεις διαφορετικές συνθέσεις του προφυλακτικώς εμβολιασμένα ποντίκια και χειριστήρια συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν με

δοκιμασία 51Chromium απελευθέρωσης τις ημέρες 7 (πρώτο εμβόλιο), 97 (τρίτη εμβολίου) και 270 (ένατη εμβόλιο), χρησιμοποιώντας σπληνοκύτταρα ως κύτταρα τελεστές και ID8 ως κύτταρα-στόχοι. Αυτά τα αποτελέσματα ελήφθησαν από τρία ανεξάρτητα πειράματα. άξονα Χ δείχνουν αναλογίες τελεστή: στόχου

Η

Σπληνοκύτταρα από τις τρεις διαφορετικές συνθέσεις του θεραπευτικώς εμβολιασμένα ποντίκια και χειριστήρια συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν με

δοκιμασία 51Chromium αποδέσμευσης.. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν τρία ανεξάρτητα πειράματα μετά την τρίτη εμβολίου (ημέρα 97) και ένατο εμβολίου (ημέρα 270), χρησιμοποιώντας σπληνοκύτταρα ως κύτταρα τελεστές και ID8 ως κύτταρα-στόχοι. άξονα Χ δείχνουν τελεστή:. αναλογιών στόχου

Η

Αξιολόγηση του Θ-17 και Τ-reg συχνότητα των κυττάρων

Το σχήμα 10 δείχνει τη συχνότητα του Θ-17 ή Τ-reg κύτταρα SP17 + CpG εμβολιαστεί ή ελέγχουν σπληνοκύτταρα ποντικών, συλλέγεται σε διάφορα χρονικά σημεία (όχι όγκου: ημέρα 0? ID8 μόνο: ημέρα 45? προφυλακτική και θεραπευτική ημέρα 270).

σπληνοκύτταρα από ποντικούς που έλαβαν προφυλακτική ή θεραπευτική εμβολιασμούς ή ελέγχων (ποντικοί χωρίς όγκο ή ποντίκια που φέρουν όγκο χωρίς εμβολιασμοί) συλλέχθηκαν σε διαφορετικά χρονικά σημεία (χωρίς όγκου: ημέρα 0? ID8 μόνο: ημέρα 45? προφυλακτικών και θεραπευτικών εμβολίων: ημέρα 270) αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής για τη μέτρηση του α ) Th-17 πληθυσμό (CD4 /IL-17-διπλό θετικό) ή β) του πληθυσμού Τ-reg (/Foxp3-διπλό θετικό) συχνότητα CD4.

Η

Τόσο προφυλακτική και θεραπευτική εμβολιασμούς επέφερε μία σημαντική αύξηση σε Th-17 και μία μείωση σε Τ-reg κυττάρων μέσες συχνότητες (3-και 1,5-πτυχώσεις αντίστοιχα, εικ. 10) σε σύγκριση με τα μη εμβολιασμένα ζώα με όγκους προσβληθεί (μη ζευγαρωμένο t-test ρ & lt? 0.001, για εμβολιασθεί έναντι του ελέγχου χωρίς θεραπεία ποντικοί) . Θεραπευτικές και προφυλακτικές εμβόλια που συνίσταται στην SP17 ή CpG μόνο του προκάλεσε επίσης μια αύξηση στη συχνότητα Th17? Ωστόσο, τέτοια επίδραση δεν ήταν σημαντική (μη ζευγαρωμένο t-test ρ & gt? 0,05, για SP17- ή CpG- εμβολιασθεί μόνο έναντι του ελέγχου χωρίς θεραπεία ποντικοί). SP17 ή CpG χορηγηθεί μόνη μειωμένες συχνότητες πληθυσμός Τ-reg σε υψηλότερο βαθμό σε σύγκριση με συνδυασμένα σκευάσματα SP17 + CpG και στις δύο θεραπευτικές και προφυλακτικές αγωγές? Αυτή η μείωση ήταν σημαντική σε σύγκριση με του όγκου προκλήθηκαν μη εμβολιασμένα ποντίκια (μη ζευγαρωμένο t-test ρ & lt? 0,01), αλλά όχι σε σύγκριση με SP17 + CpG εμβολιασμοί (μη ζευγαρωμένο t-test ρ & gt? 0,05).

Συζήτηση

Η θνησιμότητα των ωοθηκών καρκίνωμα προέρχεται κυρίως από την ανικανότητα των γιατρών για την ανίχνευση της νόσου σε πρώιμο στάδιο όργανο-περιορισμένο και συνήθως ασυμπτωματική, σε συνδυασμό με την έλλειψη αποτελεσματικών θεραπειών για προχωρημένο στάδιο της νόσου [14], [33], [35], [36]. Η καθυστερημένη διάγνωση και το υψηλό ποσοστό της χημειο-αντίστασης αυτής της μορφής καρκίνου αποδεικνύει την ανάγκη για νέους θεραπευτικούς στόχους και την καλύτερη κατανόηση των μηχανισμών που εμπλέκονται στην εξάπλωση του οργανωμένου εγκλήματος.

Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε η αποτελεσματικότητα του SP17 ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης συν CpG σε προφυλακτικές και θεραπευτικές ρυθμίσεις στο μοντέλο ποντικού ID8. SP17 έχει αποδειχθεί εδώ ότι εκφράζεται έντονα στο κυτταρόπλασμα και στην επιφάνεια μεμβρανών των κυττάρων ID8 (με ICC, ΕΑΝ και κυτταρομετρία ροής). Είχαμε τη δυνατότητα να ακολουθήσουν την ανάπτυξη του όγκου χρησιμοποιώντας SP17 ως βιολογικός δείκτης (σχήματα 1 και 3). Αυτό το μοντέλο ποντικού δημιουργεί ασκίτη όπως φαίνεται στα σχήματα 3α και 3β, και έτσι φαίνεται να αντικατοπτρίζει την παθολογία του πιο επιθετική και συχνή μορφή της νόσου ανθρώπινων ωοθηκών στα στάδια III και IV. Η παραγωγή των κόμβων του όγκου και τη σύντηξη του περιτοναίου μοιάζουν επίσης την ανθρώπινη διαδικασία (βλέπε σχήμα 3β), καθώς και το τυπικό περιτοναϊκή εντοπισμός αποδεικνύεται

in vivo

με απεικόνιση φθορισμού (Εικόνα 3Η). Η χρήση αυτού του ζωικού μοντέλου έχει αναφερθεί για διάφορες μελέτες που σχετίζονται με τη στόχευση του όγκου και αγγειακού αυξητικού παράγοντα [23], [37], αλλά αυτή είναι η πρώτη φορά που μια ομόλογό ποντίκι ενός ανθρώπινου όγκου αντιγόνο που σχετίζεται, SP17, έχει αποδειχθεί να εκφράζονται σε ένα μοντέλο ποντικού OC.

ένα από τα σημαντικότερα κριτήρια για να αποφασισθεί η οποία υποψήφιες αυτο-αντιγόνου για στόχευση για στρατηγικές πρόληψης ή θεραπευτικής δημιουργεί μία ανοσολογική απόκριση με ασφαλή τρόπο, και τα στοιχεία δείχνουν ότι εδώ SP17 μπορεί να είναι ένα τέτοιο υποψήφιο. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι θετώς μεταφέρεται SP17-ειδικά Τ κύτταρα έχουν δραστικότητα κατά του όγκου [13], [14], [21], [22], αλλά SP17 στοχευμένες θεραπευτικό ή προφυλακτικό εμβολιασμό δεν έχει δοκιμαστεί σε ένα μοντέλο όγκου. Τα αποτελέσματα αυτά σαφώς δείχνουν ότι η συγχορήγηση SP17 + CpG ενδομυϊκά ενίεται κάθε 30 ημέρες για ένα σύνολο δέκα εμβολιασμών εμπόδισε τον σχηματισμό όγκων μέχρι 300 ημέρες, με ένα ποσοστό επιβίωσης 77% για την προφυλακτική ομάδα και 80% για την ομάδα θεραπευτικό εμβολιασμό. Αξίζει να σημειωθεί ότι τα αποτελέσματα του εμβολιασμού στα προφυλακτικά και θεραπευτικά σχήματα ήταν παρόμοια. Και οι δύο αγωγές προκάλεσε μια ισχυρή ανοσία που εμπόδισε την ανάπτυξη του όγκου σε ποντίκια με όγκο αμφισβητηθεί. Τα ποντίκια που τελικά υπέκυψαν στην ασθένεια παρουσίασαν καθυστερημένη ανάπτυξη της ανάπτυξης του όγκου σε σύγκριση με τα μη εμβολιασμένα ποντίκια. Υποθέτουμε ότι η θεραπευτική αγωγή μας θα είναι αποτελεσματική στην απόρριψη διαφορετικά ανέβασε OC, δεδομένου θεραπευτική εμβολιασμούς μας δεν είχαν ξεκινήσει έως ότου οι όγκοι ID8 παρουσίασαν σημαντική αύξηση, με χαρακτηριστικά που παρατηρούνται συνήθως σε στάδιο ΙΙΙ-IV OC τον άνθρωπο, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου εξαπλωθεί πέρα ​​από τη λεκάνη, στην επένδυση της κοιλιάς ή στους λεμφαδένες (www.ovariancancer.org) [38]. Tumor-εγχυθεί, μη εμβολιασμένα ζώα εμφανίζονται εξάπλωση όγκου στο περιτόναιο, λεμφαδένες, τους πνεύμονες, το ήπαρ και τη σπλήνα. Πράγματι, η μέση διαφορά βάρους μεταξύ του όγκου-αμφισβητηθεί και χωρίς-όγκο ομάδων ήταν 10 γραμμάρια, που αντιστοιχεί σε περίπου 50% του μέσου βάρους των ζώων πριν από τις ενέσεις όγκου (20 γραμμάρια).

Η ενεργοποίηση μιας ισχυρής ανοσολογικής απόκρισης ενάντια SP17 αποδείχθηκε με δοκιμασίες ELISA και ELISPOT, παρουσιάζοντας αύξηση σε αντι-SP17 αντισωμάτων σε ποντικούς ορού, έκφραση Th1 που σχετίζονται κυτοκινών και ογκο-ειδικών κυτταροτοξικών αποκρίσεων. Είναι αξιοσημείωτο ότι καμία σημαντική ορολογική αντιδραστικότητα προς SP17 ήταν ανιχνεύσιμη πριν από τον εμβολιασμό, υποδεικνύοντας την ικανότητα του εμβολίου να προνομιακή ειδική αφελή κύτταρα Β. Συγκρίνοντας τα αποτελέσματα των Sp-17 ειδικό τίτλοι αντισώματος που λαμβάνονται με διαφορετικές συνθέσεις θεραπευτικό εμβόλιο, βρήκαμε μόνο μια μικρή αλλά εμφανή αύξηση της παραγωγής αντισωμάτων αντι-SP17 σε CpG + SP17 εμβολιασμένα ζώα σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες, ιδιαίτερα μετά το 9

ο εμβολιασμός. Ως εκ τούτου, δεν μπορούμε να κρίνουμε κατά πόσον η απόρριψη του όγκου μετά CpG + SP17 εμβολιασμοί μπορεί να αποδοθεί σε χυμική απαντήσεις. Δεδομένου ότι οι διαφορές στους τίτλους αντισωμάτων μεταξύ των ομάδων είναι μικρές, θα συμπεράνουμε ότι ο όγκος αντιγόνου ειδικές κυτταρικές ανοσοαποκρίσεις ανιχνεύσαμε πιθανότατα να αυξηθεί η συμμετοχή στην απόρριψη όγκου σε CpG + SP17 εμβολιασμένα μόνο ζώα. Είναι ενδιαφέρον ότι η συγχορήγηση SP17 + CpG ήταν καλύτερη από ό, τι SP17 μόνες ή CpG μόνο του ως ανοσοενισχυτικό. Έχει καλά τεκμηριωμένο ότι i.m. ενέσεις των πρωτεϊνών γενικά δεν επάγουν σημαντικές ανοσολογικές αποκρίσεις, εκτός εάν αναμειγνύονται με ανοσοενισχυτικά [30], [32], [39]. Αποτελεσματική απεικόνιση ανοσοενισχυτικά τουλάχιστον 2 μηχανισμών δράσης: α επιβραδυμένη δράση που οδηγεί σε παρατεταμένη έκθεση του αντιγόνου στον ξενιστή, και την ικανότητα να ενεργοποιούν το έμφυτο ανοσοποιητικό σύστημα μέσω της ενεργοποίησης των δενδριτικών κυττάρων (DC) μέσω ΤοΙΙ υποδοχέων (TLRs) [35 ]. Κατά την ορθή παρουσίαση του αντιγόνου, ενεργοποιημένα DC διαδραματίζουν βασικό ρόλο στην επαγωγή αποκρίσεων Τ κυττάρου [29], [34], [40], [41], [42].