Αφηρημένο

Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι μια ιδιαίτερα θανατηφόρος νόσος με κακή πρόγνωση και ιδιαίτερα σε υψηλής ποιότητας όγκου. Αναδυόμενες αποδείξεις ανέφερε ότι παρεκκλίνουσα ρύθμιση προς τα πάνω και την ενεργοποίηση των GRB7, ΕΚΚ καθώς και FOXM1 συνδέονται στενά με aggresivenesss των ανθρώπινων καρκίνων. Ωστόσο, η αλληλεπίδραση μεταξύ αυτών των παραγόντων στην παθογένεση ανθρώπινων καρκίνων παραμένει ασαφής. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι GRB7 (

P

& lt? 0.0001), η φωσφορυλίωση της ERK (

P

& lt? 0.0001) και FOXM1 (

P

= 0.001) ήταν συχνά αυξηθεί και σχετίζεται με όγκους υψηλού βαθμού, καθώς και μια υψηλή τάση σε συνδυασμό με προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών στάδιο με ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Περιέργως, οι εκφράσεις του GRB7 (

P

& lt? 0.0001), η φωσφορυλίωση της ERK (

P

& lt? 0.001) και FOXM1 (

P

& lt? 0.001) παρουσίασαν σημαντική κλιμακωτή μοτίβο αύξηση κατά μήκος Grade 1 έως καρκίνους βαθμού 3 ωοθηκών. Βιοχημικές μελέτες χρησιμοποιώντας ανάλυση κηλίδος Western κατέδειξε ότι επιβάλλεται η έκφραση ή εξουδετέρωση των GRB7 έδειξε GRB7 θα μπορούσε να ανυψώσει τα επίπεδα της φωσφορυλίωσης της ERK και FOXM1, ενώ εκτελείται η έκφραση της FOXM1 δεν μπορεί να μεταβάλει τα επίπεδα φωσφορυλίωσης GRB7 και ERK. Αλλά η αναστολή της σηματοδότησης ERK με U0126 ή PD98059 θα μπορούσε να μειώσει το επίπεδο των FOXM1 σε GRB7 υπερεκφράζουν ωοθηκών καρκινικά κύτταρα, γεγονός που υποδηλώνει ότι GRB7, ERK και FOXM1 ρυθμίζονται ομαλή. Επιπλέον, η αναστολή της δραστικότητας ERK με U0126 ή PD98059, ή μειωμένη έκφραση FOXM1 με θειοστρεπτόνη /εισβολή, την ανάπτυξη όγκου ανέστειλε σημαντικά την κυτταρική μετανάστευση

in vitro

και

in vivo

. Συλλογικά, τα ευρήματά μας παρέχουν ότι η στόχευση GRB7 /ERK /FOXM1 καταρράκτη σηματοδότησης μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη μοριακή θεραπευτική επιλογή για την καταπολέμηση του καρκίνου των ωοθηκών

Παράθεση:. Chan DW, Hui WWY, Cai PCH, Liu MX, Yung MMH, Mak CSL, et al. (2012) Στόχευση GRB7 /ERK /FOXM1 μονοπάτι σηματοδότησης μειώνει επιθετικότητα κύτταρα καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 7 (12): e52578. doi: 10.1371 /journal.pone.0052578

Επιμέλεια: Muy-Teck Teh, Barts & amp? Το London School of Ιατρικής και Οδοντιατρικής, Πανεπιστήμιο Queen Mary του Λονδίνου, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 30, Αυγ 2012? Αποδεκτές: 20 Νοεμ 2012? Δημοσιεύθηκε: 20 του Δεκεμβρίου 2012

Copyright: © 2012 Chan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Φιλανθρωπικό Ίδρυμα Wong Ελέγξτε Εκείνη. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η πιο θανατηφόρα ασθένεια μεταξύ όλων των γυναικολογικών κακοηθειών [1], [2]. Το υψηλό ποσοστό θνησιμότητας του καρκίνου των ωοθηκών είναι λόγω της κακής πρόγνωσης και οι περισσότερες περιπτώσεις ανιχνεύονται σε προχωρημένο στάδιο. Ο καρκίνος των ωοθηκών είναι μια ετερογενής όγκος που παρουσιάζει ένα ευρύ φάσμα των κυτταρολογικές, κλινικών και μεταβάλλεται γενετικά χαρακτηριστικά [3], [4]. Οι καρκίνοι των ωοθηκών υψηλής ποιότητας που χαρακτηρίζονται από πυρήνες υψηλής ποιότητας, ένα υψηλό μιτωτικό δείκτη, περισσότερο επιθετικότητα, πενιχρά διαφοροποιημένο, λιγότερο δεκτικές σε χημειοθεραπεία, καθώς και χαμηλό ποσοστό επιβίωσης [4], [5], [6]. Οι σχετικά χειρότερα παθογένεση και κλινικο-παθολογική χαρακτηριστικά των καρκίνων των ωοθηκών υψηλής ποιότητας προκαλέσει κακή κλινική διαχείριση αυτού του τύπου της ασθένειας. Ως εκ τούτου, η κατανόηση των υποκείμενων μοριακών μηχανισμών μπορεί να βοηθήσει στην ανάπτυξη καλύτερων θεραπευτική αγωγή σε επιθετικών καρκίνων των ωοθηκών.

υποδοχέα-δεσμευμένη πρωτεΐνη παράγοντα ανάπτυξης 7 (GRB7) είναι ένα τροφοδοτικό σηματοδότησης που λειτουργεί με σήματα ζευγάρι από υποδοχείς στην επιφάνεια των κυττάρων σε συγκεκριμένες μονοπάτια σηματοδότησης [7]. Οι αναδυόμενες αποδείξεις έχουν αναφέρει ότι GRB7 υπερεκφράζεται και συνήθως συνοδεύονται με υπερέκφραση του ErbB2 σε ανθρώπινους καρκίνους [8], [9]. Κλινικοπαθολογοανατομικές αναλύσεις έχουν δείξει ότι το προς τα πάνω ρυθμισμένη GRB7 συνδέεται με μεταστατική συμπεριφορά [8], [10], [11], [12]. Εκτός αυτού, συστατική ενεργοποίηση της ERK έχει ενοχοποιηθεί σε μια ποικιλία ογκογόνων συμπεριφορές όπως τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη διαφοροποίηση, τη μετάσταση, η αγγειογένεση, και χημειοαντίσταση σε ανθρώπινους καρκίνους [13], [14], [15], [16]. Επιπλέον, Forkhead Box Μ1 (FOXM1) έχει αναγνωριστεί ως ένα ογκογόνο παράγοντα μεταγραφής η οποία συχνά ρυθμίζεται αυξητικά σε πολυάριθμες ανθρώπινους καρκίνους [17], [18], [19]. Εμείς και άλλοι έχουν βρει πρόσφατα ότι η ρύθμιση προς τα πάνω του FOXM1 ενισχύει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, μετανάστευση /εισβολή και ιδιαίτερα η έκφραση του εμπλέκεται σε εξέλιξη του καρκίνου [17], [20], [21], [22]. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι παραπάνω τρεις παράγοντες φαίνεται να συγκλίνουν προς τις επιθετικές ιδιότητες του καρκίνου, όπως η υψηλής ποιότητας και προχωρημένους όγκους στάδιο, αλλά η σχέση του κανονιστικού μηχανισμού τους δεν έχει πλήρως διευκρινιστεί. Ως εκ τούτου, η οριοθέτηση της αλληλεπίδρασης των ρυθμιστικών μηχανισμών τους, θα βοηθήσει στην εξερεύνηση ένα δυνητικό θεραπευτικό στόχο για τον καρκίνο των ωοθηκών.

Σε αυτή τη μελέτη, δείχνουμε ότι οι εκφράσεις του GRB7, ERK και FOXM1 συσχετίζονταν σημαντικά με την πρόοδο του καρκίνου των ωοθηκών. Περιγράφουμε επίσης το ρυθμιστικό μηχανισμό του GRB7 /ΕΚΚ /FOXM1 καταρράκτη σηματοδότησης και την αναστολή αυτής της σηματοδότησης χρησιμοποιώντας είτε το U0126 χημικό αναστολέα ή αναστολέα FOXM1 θειοστρεπτόνη θα μπορούσε αξιοσημείωτα να καταργήσει την μετανάστευση καρκινικών κυττάρων /εισβολή των ωοθηκών, και

in vitro

και

in vivo

την ανάπτυξη του όγκου. Τα αποτελέσματά μας υπογραμμίζουν τη σημασία της GRB7 /ERK /FOXM1 οδού σε ογκογόνα ιδιότητες και υποστηρίζουν αυτή την οδό για ένα πολλά υποσχόμενο θεραπευτικό στόχο για τον καρκίνο των ωοθηκών υψηλής ποιότητας.

Υλικά και Μέθοδοι

Γραμμές κυττάρων και ναρκωτικά

Δύο κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών: A2780cp (δώρα από τον καθηγητή BK Tsang, Τμήμα Μαιευτικής & amp? Γυναικολογίας του Πανεπιστημίου της Οτάβα) [23], και OVCA433 (που λαμβάνονται από την American Type Culture Collection, Rockville, MD), καθώς και δύο GRB7 εκφράζουν σταθερά κλώνους? C19 σε OVCA433 και C15 σε A2780cp που παρήχθησαν προηγουμένως [12] συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Όλα αναπτύχθηκαν στους 37 ° C σε 5% CO

2 σε ελάχιστο βασικό μέσο ή μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό. ΜΑΡΚ /ΕΚΚ κινάσης 1/2 (ΜΕΚ1 /2) αναστολείς ΡΟ98059 και U0126, και αναστολέα FOXM1 θειοστρεπτόνη λήφθηκαν από την Calbiochem (La Jolla, CA, USA).

Πλασμίδια και διαμόλυνσης κυττάρων

Το pEGFP /GRB7 εκφράζουν πλασμίδια χρησιμοποιήθηκαν ως προηγουμένως [12]. Τέσσερις shRNA Hush 29mer shRNA κατασκευάζει κατά GRB7 στο φορέα pGFP-V-RS αγοράστηκαν από ΟηΟεηε Τεχνολογίες για τη δημιουργία σταθερών GRB7 νοκ ντάουν κυττάρων (Cat. No. TG312621, ΟηΟεηε Technologies, Inc, Rockville, MD, USA). Το μη αποτελεσματικό 29-μερές κωδικοποιημένο shRNA (TR30013) (ΟηΟεηε Technologies) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Για knockdown ανθρώπινη FOXM1, το κιτ TriFECTa® RNAi το οποίο περιέχει τρία siRNAs που στοχεύουν ανθρώπινη FOXM1 αγοράστηκε από IDT (Integrated DNA Technologies, Inc., Iowa, USA). διαμόλυνση κυττάρων διεξήχθη χρησιμοποιώντας LipofectAMINE ™ 2000 (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα πρότυπα έκφρασης αναλύθηκαν με κηλίδωση Western. Το πατρικό φορέα pEGFP-C1 χρησιμοποιήθηκε ως κενός φορέας μάρτυρας.

Ανοσοϊστοχημική και Western Blot Αναλύσεις

Ανοσοϊστοχημική (IHC) χρώση για GRB7, φωσφορυλίωση ERK και FOXM1 πραγματοποιήθηκε σε μία συστοιχία καρκινικού ιστού των ωοθηκών (OVC1021) (Pantomics Inc, San Francisco, CA) χρησιμοποιώντας πρωτογενή πολυκλωνικά αντι-GRB7 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA), αντι-φωσφο-ΕΚΚ (Chemicon International, Inc., Temecula, USA), και αντι-FOXM1 (Abcam, Inc., Cambridge, ΜΑ, USA). Το ποσοστό των ανοσο-θετικών κυττάρων σε όγκους και φυσιολογικό επιθήλιο εκτιμήθηκε με τις αναλογίες των ανοσο-θετικών κυττάρων κυμαινόταν από 10 έως 100%, και η ένταση της χρώσης βαθμολογήθηκαν ως 0 (αρνητική), 1 (εξασθενημένο), 2 (μέτρια) , 3 (ισχυρή) και 4 (με σήμανση). Η ανοσοαντιδραστικότητα για κάθε περίπτωση βαθμολογήθηκε ως ποσοστό των αναλογιών των ανοσο-θετικών κυττάρων πολλαπλασιάζεται με την ένταση της χρώσης. Το φορές μεταβολής κάθε χρώσης λήφθηκε με διαίρεση του επιπέδου έκφρασης του κάθε δείγματος καρκίνου με τη μέση τιμή ανοσοαντιδραστική χρώση των φυσιολογικών ωοθηκών και οριακά μικτά κυσταδένωμα. Η ποσοτικοποίηση των ανοσοϊστοχημική χρώση βαθμολογήθηκε τυφλά τουλάχιστον από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές.

Για την ανάλυση στυπώματος Western, τα κύτταρα λύθηκαν με Ρυθμιστικό Διάλυμα Κυτταρικής Λύσης (Cell Signaling Technology, Beverly, ΜΑ) που περιέχει Κοκτέιλ Αναστολέα Πρωτεάσης (Roche, Indianapolis , ΙΝ) και PMSF (φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο) (Sigma Chemical Co. St Louise, ΜΟ). Τα δείγματα αναλύθηκαν με SDS-PAGE και ηλεκτροστυπώθηκαν σε Immobilon-P Transfer Membrane (Millipore Corporation, Bedford, ΜΑ). Τα στυπώματα φράχθηκαν με 5% αποβουτυρωμένο γάλα, που ακολουθείται από επώαση με αντι-GRB7, FOXM1 (Santa Cruz), GFP (Abcam), φωσφο-ΕΚΚ, ERK (Cell Signaling) και

β-

ακτίνης (Sigma Chemical Co., St Louis, ΜΟ). Τα στυπώματα στη συνέχεια επωάστηκαν με αντίσωμα κατσίκας αντι-κουνελιού ή συζυγές αντι-ποντικού δευτερογενές αντίσωμα με υπεροξειδάση αρμορακίας (Amersham Pharmacia Biotech, Cleveland, ΟΗ) και οπτικοποιήθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια (ECL) (Amersham).

Βιωσιμότητας Κυττάρων Ανάλυση

η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με κιτ κυτταρικού πολλαπλασιασμού II (ΧΤΤ) για 5 ημέρες σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Roche). Τα δεδομένα που συλλέχθηκαν από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα.

μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή Αναλύσεις

Για την ποσοτικοποίηση των κυττάρων μεταναστευτικών και επεμβατικές δυνατότητες των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών, οι μετανάστευση των κυττάρων και κυττάρων εισβολής κιτ δοκιμασίας Transwell (Chemicon International, Inc., Temecula, CA) χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, 1.5 χ 10

5 κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε ορό μέσο καλλιέργειας (θειοστρεπτόνη, PD98059 ή U0126 προστέθηκε όταν χρειάζεται) και σπάρθηκαν στο άνω θάλαμο, ενώ η πλήρης μέσον τοποθετήθηκε στον κάτω θάλαμο ως χημειο-προσελκυστικό . Η πλάκα επωάστηκε στους 37 ° C και 5% CO

2 για 12 ώρες για την δοκιμασία κυτταρική μετανάστευση, και 48 ώρες για προσδιορισμό κυττάρων εισβολής επιτρέπουν στα κύτταρα να περάσει μέσα από τους πόρους της μεμβράνης. Το κύτταρο μετανάστευσε και εισέβαλαν ποσοστά υπολογίστηκαν μετά από χρώση των κυττάρων και καταμέτρηση με χρήση τουλάχιστον τρία διαφορετικά πεδία για κάθε φίλτρο Transwell. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

In Vivo

Ογκογονικότητα Δοκιμασία

Για να εξεταστεί η

in vivo

επιπτώσεις της U0126 και θειοστρεπτόνη για την ανάπτυξη των όγκων, 5 × 10

6 A2780cp κύτταρα εμβολιάστηκαν sc σε

BALB /c ηυ /ηυ θηλυκών ποντικών

3-4 εβδομάδων ηλικίας και σε ομάδες των πέντε. Ο σχηματισμός όγκου σε γυμνούς ποντικούς παρακολουθήθηκε για κάθε 3 ημέρες. 25 έως 50 μmol /kg U0126 ή 200 έως 300 μmol /kg θειοστρεπτόνη (Calbiochem, La Jolla, CA, USA) χορηγήθηκε ί.ρ. μια φορά για κάθε 3 ημέρες με συνολικά 4 ενέσεις σε πέντε γυμνούς ποντικούς όταν κάθε μέγεθος του όγκου έγινε ~ 3 mm σε διάμετρο. Ως ομάδα ελέγχου, μόνο DMSO χορηγήθηκε ε.π. για το ίδιο χρονικό διάστημα της θεραπείας. Τα μεγέθη του όγκου μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας καλίμπρες ολίσθησης και υπολογίστηκαν με τον ακόλουθο τύπο: όγκος = (πλάτος)

2 * μήκος * π /6. Οι καμπύλες ανάπτυξης όγκου χαράχθηκαν από τον μέσο όγκο ± SEM των όγκων από 5 ποντικούς. Οι παρενέργειες, όπως μεταβολές του σωματικού βάρους παρακολουθήθηκαν στενά. Όλα τα πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από το Πανεπιστήμιο της επιτροπής του Χονγκ Κονγκ για τη χρήση ζώντων ζώων στη διδασκαλία και την έρευνα (CULATR No.2560-11).

Στατιστική Ανάλυση

Οι κλινικές παράμετροι ήταν αναλύονται με SPSS 13.0 (SPSS, Chicago, IL). ακριβής δοκιμασία Fisher (για παραμετρικά δεδομένα) και Mann-Whitney test (για μη-παραμετρικά δεδομένα) χρησιμοποιήθηκαν για σύγκριση των τιμών μεταξύ των υποομάδων. Του σπουδαστή

t-test

χρησιμοποιήθηκε για να αναλυθεί η κυτταρική βιωσιμότητα, η μετανάστευση /εισβολή και

in vivo

αποτελέσματα ανάπτυξης όγκου. Ένα

σ

-τιμή θεωρήθηκε σημαντική όταν λιγότερο από 0,05.

Αποτελέσματα

GRB7, ΕΚΚ φωσφορυλίωση και FOXM1 είναι συχνά αυξημένα σε καρκίνο των ωοθηκών

έχουν αναφερθεί στο παρελθόν ότι GRB7 [12], η φωσφορυλίωση ERK και FOXM1 [21] υπερεκφράζονται σε δείγματα καρκίνου των ωοθηκών ιδιαίτερα σε όγκους υψηλής ποιότητας. Ωστόσο, η αλληλεπίδραση μεταξύ αυτών των παραγόντων σε καρκίνους των ωοθηκών δεν έχει ακόμη διευκρινιστεί. Με ανοσοϊστοχημική ανάλυση (IHC) σε μια σειρά καρκίνου των ωοθηκών ιστού (OVC1021), βρήκαμε ότι όλοι αυτοί οι παράγοντες έχουν congruently ρυθμίζεται αυξητικά σε δείγματα καρκίνου των ωοθηκών η οποία ήταν σύμφωνη με προηγούμενα ευρήματα μας [12], [21]. Όπως ήταν αναμενόμενο, υπερεκφρασμένης GRB7 (& gt? 4 πτυχώσεις) συσχετίστηκε με την αυξημένη φωσφορυλίωση ERK (& gt? 2 πτυχώσεις) (

P

& lt? 0,0001, του Fisher exact test) και FOXM1 (& gt? 3 πτυχώσεις) (

P

& lt? 0.0001, ακριβές τεστ του Fisher) (Πίνακας 1). Επιπλέον, GRB7 (

P

& lt? 0,0001, ακριβής δοκιμασία του Fisher), η φωσφορυλίωση της ERK (

P

& lt? 0,0001, του Fisher exact test), και FOXM1 (

P

= 0,001, ακριβής δοκιμασία του Fisher) συσχετίζονταν σημαντικά με υψηλής ποιότητας όγκου και είχε μια υψηλή τάση σε σχέση με τον καρκίνο των ωοθηκών σε προχωρημένο στάδιο (GRB7,

P

= 0,021? φωσφο-ΕΚΚ,

P

= 0.065? και FOXM1,

P

= 0,065, ακριβής δοκιμασία του Fisher) (Πίνακας 1). Ήταν αξιοσημείωτο ότι μια σημαντική προοδευτική αύξηση των GRB7 (

P

& lt? 0,001, Mann-Whitney για δοκιμή), η φωσφορυλίωση της ERK (

P

& lt? 0,001, Mann-Whitney για δοκιμή), και FOXM1 (

P

& lt? 0.001, δοκιμασία Mann-Whitney του) πρότυπο έκφρασης παρατηρήθηκε από βαθμό 1 σε βαθμό 3 όγκους (Εικ. 1Α και 1Β) και λιγότερο προφανείς μοτίβο από νωρίς για καρκίνους των ωοθηκών προχωρημένο στάδιο (Εικόνα S1 ), υποδεικνύοντας ότι αυτοί οι παράγοντες παίζουν σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών. Στο σύνολό τους, τα στοιχεία αυτά δείχνουν ότι υπάρχει μια στενή αλληλεπίδραση μεταξύ GRB7, δραστηριότητα ΕΚΚ και FOXM1 στη ρύθμιση του καρκίνου των ωοθηκών ογκογένεση ιδιαίτερα σε υψηλής ποιότητας όγκου.

(Α) αξιολογήθηκαν Οι εκφράσεις του GRB7, φωσφορυλίωσης ERK και FOXM1 με ανοσοϊστοχημική ανάλυση χρησιμοποιώντας ειδικά αντισώματα σε μια σειρά καρκίνου των ωοθηκών ιστού (OVC1021, Pantomics). (Β) Εκπρόσωπος εικόνες δείχνουν τη σταδιακή αύξηση του GRB7, φωσφορυλίωσης της ERK και εκφράσεις FOXM1 από βαθμό 1 σε βαθμό 3 καρκίνου των ωοθηκών (ορώδες υπότυπος) (200 × μεγεθύνσεις).

Η

Μοριακή κανονισμού GRB7 /ΕΚΚ /FOXM1 Σηματοδότηση σε κύτταρα των ωοθηκών καρκίνο

Δεδομένου ότι η αυξημένη GRB7, φωσφορυλίωση ERK και FOXM1 συσχετίζονται σημαντικά με υψηλής ποιότητας όγκου ωοθηκών, μπορούν να ρυθμίζονται συντονισμένα ώστε να μεσολαβήσει ογκογόνο λειτουργίες σε εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών . Είχαμε έτσι ενδιαφέρει να διερευνηθεί η ρυθμιστικού μηχανισμού μεταξύ αυτών των παραγόντων σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Για το σκοπό αυτό, τόσο τα A2780cp και OVCA433 κύτταρα κατ ‘αρχάς σε επεξεργασία με U0126 αναστολέα ΜΕΚ1 /2. Κηλίδωση Western έδειξε ότι η φωσφορυλίωση ERK και FOXM1 παρουσίασαν σημαντική μείωση, αλλά καμία αλλαγή στην έκφραση GRB7 παρατηρήθηκε (Εικ. 2Α). Εκτός αυτού, η θεραπεία της θειοστρεπτόνη μείωσε επιτυχώς το επίπεδο της FOXM1, ενώ τα επίπεδα της φωσφορυλίωσης GRB7 και ERK ήταν ακόμη αμετάβλητες (Εικ. 2Β). Για να αποκλειστεί η μη ειδική λειτουργία του θειοστρεπτόνη σε θεραπεία υψηλής δόσης, siRNA προσέγγιση μεσολάβηση knockdown FOXM1 διεξήχθη σε A2780cp κύτταρα. Παρόμοια με την αγωγή της θειοστρεπτόνη, εξάντληση FOXM1 δεν μετέβαλε την έκφραση των GRB7 και φωσφορυλίωσης ERK (Εικ. 2Β). Αυτό δείχνει ότι η καταστολή της δραστηριότητας ΕΚΚ θα μπορούσε να μειώσει το επίπεδο FOXM1, ενώ η μείωση της έκφρασης FOXM1 δεν επηρεάζει ούτε την έκφραση GRB7 ή δραστηριότητα ΕΚΚ. Για να αποδείξει την περαιτέρω αυτή την παρατήρηση, σταθερά νοκ ντάουν της ενδογενούς GRB7 σε GRB7 υψηλή κυτταρική γραμμή που εκφράζει, OVCA433, χρησιμοποιώντας την προσέγγιση shRNA έδειξε σαφώς ότι όχι μόνο GRB7 αλλά και ΕΚΚ φωσφορυλίωση και FOXM1 μειώθηκαν (Σχ. 2C). Αντίθετα, επιβάλλεται η έκφραση της GRB7 αυξημένη φωσφορυλίωση της ERK και FOXM1 στην A2780cp και OVCA433 κύτταρα (Εικ. 2D). Από την άλλη πλευρά, η θεραπεία της είτε U0126 ή PD98059 ΜΕΚ1 /2 αναστολείς θα μπορούσαν να μειώσουν όχι μόνο ERK φωσφορυλίωση αλλά επίσης FOXM1 σε GRB7 κύτταρα που εκφράζουν έκτοπη (Σχ. 2D). Συλλογικά, αυτά τα ευρήματα προσδίδουν ότι GRB7 απορυθμίζει θετικά δραστηριότητα ΕΚΚ οποία με τη σειρά ανυψώνει FOXM1 σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών.

(Α) Θεραπεία με U0126 (5 μΜ) έδειξαν σημαντική μείωση στην έκφραση της φωσφορυλίωσης ERK συνοδεύεται με FOXM1 σε ωοθηκών χρόνο καρκινικά κύτταρα εξαρτημένα, ενώ καμία αλλαγή στην έκφραση GRB7 βρέθηκε σε A2780cp κύτταρα. (Β) Θεραπεία της θειοστρεπτόνη (20 μΜ) μείωσε σημαντικά την έκφραση της FOXM1 μόνο, αλλά καμία αλλαγή στις εκφράσεις του GRB7 και φωσφορυλίωσης ERK σε A2780cp κύτταρα (

αριστερά

). Εξάντληση των FOXM1 από siRNA νοκ ντάουν δεν μετέβαλε την έκφραση των GRB7 και ERK φωσφορυλίωση (

δεξιά

). C, siRNA κωδικοποιημένα ελέγχου. SI1, SI2 και Si3 siRNAs που στοχεύουν τρεις διαφορετικές περιοχές της ανθρώπινης FOXM1 και νοκ ντάουν την έκφραση των FOXM1 κατά 60%, 45% και 70% αντίστοιχα. (Γ) Δύο από τους τέσσερις GRB7 shRNA κατασκευάζει (SH1 και SH2) έδειξε ~ 70% νοκ ντάουν της GRB7 συνοδεύεται με μείωση του ΕΚΚ φωσφορυλίωση και FOXM1 εκφράσεις OVCA433 κύτταρα. Το κωδικοποιημένο ελέγχου (NC) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. (D) Αναγκαστική έκφραση GRB7 αυξημένη φωσφορυλίωση της ERK και FOXM1. Ωστόσο, η θεραπεία με είτε U0126 (10 μΜ) ή ΡΟ98059 (20 μΜ) θα μπορούσε να καταστέλλουν την επαγόμενη φωσφορυλίωση ERK και FOXM1 σε A2780cp και OVCA433 καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών.

Η

Καταστολή της ERK Δραστηριότητας ή έκφραση FOXM1 Μειώνει ωοθηκών του καρκίνου μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή

έχει τεκμηριωθεί ότι η υψηλής ποιότητας εκθέματα του όγκου των ωοθηκών υψηλής χωρητικότητας στην κυτταρική μετανάστευση /την εισβολή [4], [24]. Έτσι, αναρωτηθήκαμε εάν η αναστολή της δραστικότητας ERK ή έκφραση FOXM1 με ειδικούς αναστολείς τους θα μπορούσε να επηρεάσει την κυτταρική μετανάστευση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών. Για να επαληθευτεί αυτή η υπόθεση, ένα καρκινικό κύτταρο ωοθηκών γραμμή υψηλής ποιότητας, OVCA433, εμφανίζοντας υψηλό μεταναστευτικό και επεμβατική ικανότητες ήταν εκτοπικά εκφράζεται με GFP /GRB7 και θεραπεία με αναστολείς. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αγωγή των θειοστρεπτόνη, PD98059 και U0126 μειωθεί εντυπωσιακά ρυθμό μετανάστευσης των κυττάρων του OVCA433-GRB7 κύτταρα με 3,5 φορές, 2,2 φορές και 2,5 φορές αντιστοίχως σε σύγκριση με τον έλεγχο (Εικ. 3Α). Ομοίως, η κατεργασία του θειοστρεπτόνη, PD98059 και U0126 επίσης μείωσε σημαντικά συντελεστή εισβολή κυττάρων του OVCA433-GRB7 κύτταρα με 3,5 φορές, 2,6 φορές και 2,9 φορές αντιστοίχως σε σύγκριση με τον μάρτυρα (Σχ. 3Β). Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η αναστολή της σηματοδότησης GRB7 /ΕΚΚ /FOXM1 είναι ικανή να επηρεάζεται η κυτταρική μετανάστευση και εισβολή των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών.

OVCA433 κυττάρων με σταθερή έκφραση του GFP /GRB7 (OVCA433-GRB7) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DMSO ως έλεγχος, θειοστρεπτόνη (20 μΜ), ΡΟ98059 (20 μΜ) και U0126 (10 μΜ) για 6 ώρες και αναλύθηκαν με (Α) δοκιμασία μετανάστευσης κυττάρων Transwell. Ο εκπρόσωπος εικόνες και μπαρ διάγραμμα έδειξαν σημαντική μείωση στον αριθμό των μεταναστευτικών κυττάρων μέσω της Matrigel επικαλυμμένο με μεμβράνη στην OVCA433-GRB7 κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με θειοστρεπτόνη, PD98059 και U0126 από τον έλεγχο DMSO (*

P

& lt? 0,02, Student

t-test

) σε 8 ωρών? προσδιορισμό κυτταρικής εισβολής (Β) Transwell. Ο εκπρόσωπος εικόνες και μπαρ γράφημα έδειξε σημαντική μείωση του ρυθμού εισβολής στην OVCA433-GRB7 κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με θειοστρεπτόνη, PD98059 και U0126, σε σύγκριση με τον έλεγχο DMSO (*

P

& lt? 0,05, Student

t

-test) σε 15-ωρη.

Η

Στόχευση GRB7 /ERK /FOXM1 Αναστέλλει καρκίνου των ωοθηκών καρκινικά Ανάπτυξης

in vitro

και

in vivo

Η

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η συστατική ενεργοποίηση της δραστικότητας ERK ή αυξημένη έκφραση του GRB7 και FOXM1 συνδέονται στενά με ογκογονικότητα διαφόρων ανθρώπινων καρκίνων [12], [16], [21], [25], [26]. Αυτό υποδηλώνει ότι η στόχευση Τυχόν συστατικά του καταρράκτη σηματοδότησης πρέπει θεωρητικά καταργεί τις ογκογονικές ιδιότητες σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Πράγματι, προηγούμενες δημοσιεύσεις ανέφεραν ότι knockdown του FOXM1 και ERK θα μπορούσε να μειώσει την ανάπτυξη των κυττάρων και την διεισδυτικότητα των ανθρώπινων καρκίνων [27], [28], [29]. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε ως στόχο να διερευνήσει τις ογκογόνο αλλοιώσεις με τη χρήση φαρμακευτικών αναστολέων που στοχεύουν ειδικά καταρράκτη GRB7 /ERK /FOXM1 σηματοδότησης. έτσι Αξιολογήσαμε πρώτον την κατασταλτική επίδραση επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων δύο υψηλής ποιότητας ορώδες κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών? A2780cp και OVCA433 χρησιμοποιώντας U0126 (10 μΜ). Με τη δοκιμασία κυτταρικού πολλαπλασιασμού ΧΤΤ, τόσο A2780cp (

P

= 0,02, Student

t-test

) και OVCA433 (

P

= 0,03, Student

t

-τεστ) εμφάνισαν σημαντική μείωση στο ρυθμό πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε σύγκριση με τους ελέγχους τους (Σχ. 4Α). Ομοίως, κατά την επεξεργασία των θειοστρεπτόνη (20 μΜ), A2780cp (

P

= 0.015, Student

t-test

) και OVCA433 (

P

= 0.025, Student

t-τεστ

) έδειξε επίσης μια βαθιά μείωση στο ρυθμό πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε σύγκριση με τους ελέγχους τους (Σχ. 4Β).

(Α) ΧΤΤ προσδιορισμούς πολλαπλασιασμού των κυττάρων έδειξαν ότι η αναστολή της φωσφορυλίωσης ERK με U0126 (10 μΜ), καταργείται σημαντικά το ρυθμό πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε GRB7 που εκφράζει σταθερά OVCA433 κύτταρα (

P

= 0.020, Student

t-test

) και A2780cp κύτταρα (

P

= 0.030, Student

t-test

) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου φορέα τους. (Β) ΧΤΤ δοκιμασίες πολλαπλασιασμού των κυττάρων έδειξαν ότι η καταστολή της έκφρασης FOXM1 από θειοστρεπτόνη (20 μΜ) μείωσε σημαντικά το ποσοστό του πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε GRB7 που εκφράζει σταθερά OVCA433 κύτταρα (

P

= 0.015, Student

t

-test) και A2780cp κύτταρα (

P

= 0.025, Student

t-test

) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου φορέα τους.

η

Στη συνέχεια εξετάσαμε το

in vivo

ογκογόνο δράση του GRB7 σε A2780cp από υποδόρια εμβολιασμό GRB7 και τον έλεγχο των φορέων που εκφράζουν A2780cp κύτταρα σε μία πλευρά γυμνών ποντικών. Όπως ήταν αναμενόμενο, GRB7 που εκφράζουν σταθερά A2780cp κύτταρα παρουσίασαν 30% ταχύτερη ανάπτυξη του όγκου σε σύγκριση με τον φορέα ελέγχου (

P

= 0.020, Student

t-test

) (Εικόνα S2). Στη συνέχεια ερευνήσαμε την κατασταλτική δράση στην ανάπτυξη του όγκου του GRB7 εκφράζουν σταθερά A2780cp κατά την επεξεργασία του U0126 ή θειοστρεπτόνη. Όταν το μέγεθος του όγκου έφτασε ~ 3 mm σε διάμετρο σε γυμνά ποντίκια με όγκους κατά την Ημέρα 6, U0126 στα 25 και 50 μΜ /kg ήταν i.p. εγχέεται περιτοναϊκή κοιλότητα γυμνών ποντικών για κάθε 3-ημερών. Μετά από 4 ώρες της ένεσης U0126, βρήκαμε ότι υπήρχαν 35% και 72% μείωση στο μέγεθος των όγκων σε σχέση με τον έλεγχο DMSO την Ημέρα 18, όταν εγχέεται με U0126 σε 25 μΜ /kg (

P

= 0,032, Φοιτητής

t-test

) και 50 μΜ /kg (

P

= 0.005, Student

t-test

), αντίστοιχα (Σχήμα 5Α και 5Β). Εκτός αυτού, κατά την επεξεργασία των θειοστρεπτόνη για 200 μΜ /kg και 300 μΜ /kg την Ημέρα 9, υπήρξαν 47% και μείωση κατά 52% της ανάπτυξης του όγκου σε σύγκριση με τον έλεγχο DMSO την Ημέρα 18 αντίστοιχα (

P

& lt? 0.01, Student

t

-τεστ) (Σχήμα 5Α και 5Β). Τα ευρήματα αυτά υπογραμμίζουν ότι η ρύθμιση προς τα πάνω του GRB7 θα μπορούσε να ενισχύσει την ανάπτυξη του όγκου, ενώ χρησιμοποιώντας είτε U0126 ή θειοστρεπτόνη θα μπορούσε να μειώσει αποτελεσματικά την ανάπτυξη του όγκου των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών και

in vitro

και

in vivo

.

(Α) Η GRB7 που εκφράζει σταθερά A2780cp κύτταρα (ΑΚΕ-GRB7) υποδόρια ένεση στο δεξί πλευρό των άτριχων ποντικών. Τα ποντίκια χωρίστηκαν σε 5 ομάδες (5 ποντικοί ανά ομάδα) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με είτε DMSO ως μάρτυρας, ή U0126 (25 ή 50 μΜ /kg) ή θειοστρεπτόνη (200 ή 300 μΜ /kg) για κάθε 3-ημερών αφού την ημέρα 6 (βέλη αντιπροσωπεύουν τις ενέσεις). Το σχετικό μέγεθος του όγκου υπολογίστηκε σε σχέση με εκείνα της πρώτης ημέρας της αγωγής (ημέρα 0) και εκπροσωπούνται ως σχετική μέσο μέγεθος (%) ± SE για κάθε ομάδα (*

P

= 0. 032, **

P

& lt? 0,01 και ***

P

= 0. 005, είναι σημαντικά διαφορετική από την ομάδα ελέγχου DMSO, Φοιτητής

t

-τεστ). (Β) Οι αντιπροσωπευτικές εικόνες και ιστογράμματα δείχνουν το μέσο βάρος του όγκου της κάθε ομάδας που λαμβάνονται κατά την ημέρα 18. (*

P

= 0. 043, **

P

= 0. 001, και ***

P

& lt? 0,02, είναι σημαντικά διαφορετική από την ομάδα ελέγχου DMSO, Φοιτητής

t-test

)

η

Συζήτηση

σε αυτή τη μελέτη, παρουσιάζουμε αποδείξεις που GRB7, φωσφορυλίωση ERK και FOXM1 είναι αυξημένη στον καρκίνο των ωοθηκών. Είναι ενδιαφέρον ότι η ταυτόχρονη αύξηση των GRB7, φωσφορυλίωσης της ERK και FOXM1 συνδέεται με καρκίνους των ωοθηκών υψηλής ποιότητας. Είναι σημαντικό ότι, δείχνουμε ότι οι παράγοντες αυτοί συντονισμένα ρυθμίζονται GRB7 /ΕΚΚ /FOXM1 άξονα σηματοδότηση σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών. Λειτουργικά, αναστολή της δραστηριότητας ΕΚΚ από U0126 ή PD98059 και την έκφραση FOXM1 από θειοστρεπτόνη αναστέλλουν σημαντικά την ανάπτυξη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων /εισβολής και του όγκου των ωοθηκών

in vitro

και

in vivo

. Αυτά τα ευρήματα ξεκάθαρα στοιχεία που αποδεικνύουν ότι η ενεργοποιημένη GRB7 /ΕΚΚ /FOXM1 καταρράκτη σηματοδότησης παίζει σημαντικό ρόλο στην παθογένεση του καρκίνου των ωοθηκών υψηλής ποιότητας.

Συστατική ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης ERK έχει εμπλακεί στην ανάπτυξη ανθρώπινου καρκίνου του [30] , [31], [32]. Πράγματι, η στόχευση αυτού του μονοπατιού για την καταπολέμηση ανθρώπινων καρκίνων έχει προσελκύσει αρκετό προσπάθεια για την ανάπτυξη αποτελεσματικών φαρμάκων για την τελευταία δεκαετία [15], [33], [34], [35]. Εμείς και άλλοι έχουν βρει πρόσφατα ότι GRB7 και παραλλαγής της, GRB7v, συχνά ρυθμίζεται αυξητικά σε καρκίνους των ωοθηκών και είναι σε θέση να ενισχύσει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, μετανάστευση /εισβολή μέσω ενεργοποίησης μονοπάτι σηματοδότησης ERK [12], [36], [37]. Από την άλλη πλευρά, οι αναδυόμενες αποδείξεις έχουν βρει ότι η παρεκκλίνουσα ρύθμιση προς τα πάνω του μεταγραφικού παράγοντα FOXM1 εμπλέκεται στην παθογένεση διαφόρων ανθρώπινων καρκίνων [17], [21], [22], [38], [39]. Αν και όλες αυτές ενεργοποιούνται ανωμάλως παράγοντες δεσπόζει σχετίζονται με παθογένεση του καρκίνου, δεν υπάρχει καμία αναφορά μέχρι σήμερα να αναφέρουμε το σύνδεσμο σηματοδότηση μεταξύ GRB7, δραστηριότητα ΕΚΚ και FOXM1 σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα. Σε αυτή τη μελέτη, με τη χρήση IHC ανάλυση συστοιχίας καρκινικού ιστού των ωοθηκών, δείχνουμε ότι η φωσφορυλίωση GRB7, ERK και FOXM1 είναι ταυτόχρονα αυξήθηκε σε δείγματα καρκίνου των ωοθηκών. Περιέργως, οι εκφράσεις τους, παρουσιάζουν μια σταδιακή αύξηση κατά μήκος του βαθμού του όγκου των καρκίνων των ωοθηκών. Στην πραγματικότητα, κλινικοπαθολογοανατομικές ανάλυση συσχέτισης μας παρέχει περαιτέρω αποδείξεις ότι αυξορυθμίζονται εκφράσεις τους που συνδέονται σημαντικά με υψηλής ποιότητας όγκου. Όπως γνωρίζουμε, αυτή είναι η πρώτη έκθεση που δείχνει την κατάσταση έκφρασης αυτών των παραγόντων που εμπλέκονται στην εξέλιξη των καρκίνων των ωοθηκών μέχρι στιγμής. Συνολικά, αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η φωσφορυλίωση GRB7, ERK και FOXM1 σχηματίζουν ένα ογκογόνο σύγκλιση σε υψηλής ποιότητας παθογένεση του καρκίνου των ωοθηκών. Ως εκ τούτου, η στόχευση αυτού του καταρράκτη σηματοδότησης μπορεί να επιτύχει ένα καλό αποτέλεσμα κατά τη θεραπεία αυτού του τύπου της ασθένειας.

GRB7 είναι ένας γνωστός προσαρμογέας που αναμεταδίδει σήματα από υποδοχείς της κυτταρικής επιφάνειας σε συγκεκριμένες κατάντη καταρράκτες σηματοδότησης μέσω της πρωτεΐνης-πρωτεΐνης αλληλεπίδραση των Src του -homology 2 (SH2) περιοχή σε μια ποικιλία κινασών τυροσίνης [7], [40], [41]. Εμείς και άλλοι έχουν αναφερθεί στο παρελθόν ότι GRB7 συχνά υπερεκφράζεται και προάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, μετανάστευση κυττάρου και κυττάρου εισβολή ανθρώπινων καρκίνων [10], [12], [42]. Δεδομένης να σημαντικούς ρόλους της ως μόρια μεταγωγής σήματος στην ενεργοποίηση ογκογόνο μονοπάτια σηματοδότησης, πολυάριθμες μελέτες έχουν προσπαθήσει να αναπτύξουν αναστολείς που στοχεύουν στην περιοχή SH2 του GRB7 προκειμένου να αναστέλλουν ανώμαλη ενεργοποίηση των σχετικών δραστηριοτήτων σηματοδότησης και την εξάλειψη των καρκινικών κυττάρων [43], [44] , [45], [46]. Για τα παραδείγματα, ο συνδυασμός Grb7 κυκλικού πεπτιδίου, G7-18NATE, με χημειο-φάρμακα ήταν ικανά να αναστέλλουν τον καρκίνο του μαστού κυττάρου ανάπτυξη [47], [48], ή με το ειδικό πεπτίδιο συνδέτη για να καταστείλει GRB7 μεσολάβηση μετάσταση σε παγκρεατικό καρκίνωμα κλπ [11], [49]. Ωστόσο, η εξειδίκευση και συγγένεια είναι τα κύρια εμπόδια που αντιμετωπίζονται κατά την ανάπτυξη αυτών των αναστολέων ως GRB7 στοχευμένη μοριακή θεραπευτικά [26], [49], [50]. Εδώ, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι GRB7 ρυθμίζει τη δραστηριότητα των ΕΚΚ και την έκφραση FOXM1 ομαλή και είναι σε συμφωνία με προηγούμενες εκθέσεις μας [12], [21], υποδεικνύοντας ότι η υπερεκφράζεται GRB7 ενισχύει την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών και της μετανάστευσης των κυττάρων /εισβολής μέσω αύξησης των ERK και δραστηριότητες FOXM1. Ως εκ τούτου, προτείναμε ότι η καταστολή της ανώμαλης ενεργοποιημένη ERK και FOXM1 πρέπει να ασκήσει παρόμοια αποτελέσματα από τη χρήση αναστολέα GRB7 στην αναστολή των ανωτέρω ογκογόνο ιδιότητες των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών. Πράγματι, μας

in vitro

και

in vivo

ογκογόνο μελέτες δείχνουν σαφώς ότι η ανάπτυξη των ωοθηκών των καρκινικών κυττάρων και η κυτταρική μετανάστευση /εισβολή μειώνονται σημαντικά μετά από θεραπείες PD98059 ή U01260, και θειοστρεπτόνη μέσω στόχευσης ΜΕΚ /ERK και δραστηριοτήτων FOXM1 αντίστοιχα. Το πιο σημαντικό, τα καρκινικά κατασταλτικά αποτελέσματα που προέρχονται από είτε U0126 /PD98059 ή θειοστρεπτόνη είναι ισοδύναμες. Αυτά τα ευρήματα φαίνεται να προσφέρει μια εναλλακτική προσέγγιση κατά την ανάπτυξη GRB7 στοχευμένη θεραπευτική στον καρκίνο των ωοθηκών.

Εν κατακλείδι, η μελέτη αυτή δείχνει ότι η ανώμαλη ενεργοποίηση της GRB7 /ERK /FOXM1 καταρράκτη σηματοδότησης συσχετίστηκε σημαντικά με την ανάπτυξη του καρκίνου των ωοθηκών . Στόχευση αυτό άξονα σηματοδότησης από MEK /ERK ή αναστολείς FOXM1 μπορούσε να αποκτήσει πολλά υποσχόμενη επίδραση στην μεταγωγή σήματος που βασίζεται θεραπεία για την ασθένεια αυτή.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1. ανάλυση

Ανοσοϊστοχημική έδειξαν αυξημένη έκφραση του GRB7, ΕΚΚ φωσφορυλίωση και FOXM1 συσχετίστηκαν με καρκίνους των ωοθηκών σε προχωρημένο στάδιο.

doi: 10.1371 /journal.pone.0052578.s001

(ΔΕΘ)

Εικόνα S2.

Αναγκαστική έκφραση GRB7 αυξάνει την ανάπτυξη όγκων στο μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού. Η GRB7 που εκφράζουν σταθερά A2780cp κύτταρα (ΑΚΕ-GRB7) και άδειο φορέα ελέγχου A2780cp κύτταρα (ΑΚΕ-V) υποδόρια ένεση στο δεξί πλευρό των άτριχων ποντικών (5 ποντίκια ανά ομάδα). Το μέγεθος του όγκου παρακολουθήθηκε για κάθε 3-ημερών. Οι αντιπροσωπευτικές εικόνες και ιστογράμματα δείχνουν το μέσο βάρος του όγκου της κάθε ομάδας που λαμβάνονται κατά την ημέρα 18. (*

P

= 0,02, Student

t-test

)

doi:. 10.1371 /journal.pone.0052578.s002

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Καθηγητής Guan Jun-Lin, Τμήματα Βιολογίας Κυττάρου και Ανάπτυξης, Πανεπιστήμιο του Μίσιγκαν, για την παροχή της GRB7 πλήρους μήκους cDNA.