Αφηρημένο

Ιστορικό

υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) κατάσταση μετάλλαξης είναι ο πιο πολύτιμος δείκτης στην διαλογή του καρκίνου του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου (NSCLC) ασθενείς για αναστολέας της τυροσινικής κινάσης (ΤΚΙ) θεραπεία. Ακριβή, ταχεία και οικονομικές μεθόδους για την ανίχνευση μεταλλάξεων EGFR έχουν καταστεί σημαντικά. Η χρήση των δύο μετάλλαξη ειδικά αντισώματα που στοχεύουν τη μετάλλαξη delE746-A750 στο εξόνιο 19 και μετάλλαξης L858R στο εξόνιο 21 καθιστά δυνατό αυτό το έργο, αλλά η έλλειψη συναινετικά αποδεκτά κριτήρια για θετικά αποτελέσματα περιορίζει την εφαρμογή της παρούσας ανίχνευση μετάλλαξης που βασίζονται αντισώματος.

Μέθοδοι

Συλλέξαμε 399 δείγματα από ασθενείς με ΜΜΚΠ (δείγματα 145 εκτομή, 220 δείγματα βιοψίας, και 34 δείγματα κυτταρολογίας) των οποίων η κατάσταση μετάλλαξης του EGFR είχαν εντοπιστεί από την δοκιμασία TaqMan PCR. Ανοσοϊστοχημική (IHC) αναλύσεις χρησιμοποιώντας EGFR μετάλλαξη ειδικά αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν για όλα τα δείγματα. Μετά από χρώση και βαθμολόγησης, η ευαισθησία, η ειδικότητα, η θετική προγνωστική αξία (PPV) και αρνητική προγνωστική αξία (NPV) υπολογίστηκαν σύμφωνα με διαφορετικά επίπεδα των θετικών βαθμών σε σύγκριση με τα αποτελέσματα της ανάλυσης που βασίζεται στην PCR.

αποτελέσματα

Στις αναλύσεις IHC-βάση, 144 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 0, 104 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 1+, 103 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 2+, και 48 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 3+. Με τα μοριακά με βάση τα αποτελέσματα τέθηκαν ως το «χρυσό πρότυπο», ο επιπολασμός της μετάλλαξης ήταν 6,94% (10/144), 23,08% (24/104), 67,96% (70/103) και 100% (48/48 ), αντίστοιχα, για τα δείγματα με βαθμολογία 0, 1+, 2+ και 3+. Όταν αποτέλεσμα 3+ θεωρήθηκε θετική, η εξειδίκευση και η PPV ήταν 100%? αν σκοράρει μόνο 0 θεωρήθηκε αρνητικό, λήφθηκε 93.06% ΚΠΑ.

Συμπέρασμα

Οι ασθενείς με βαθμολογία 3+ έχουν μια τέλεια PPV (100%), και μπορεί να δεχθεί τη θεραπεία ΤΚΙ άμεσα χωρίς μοριακή -με βάση αναλύσεις. Ασθενείς με σκορ 0 είχαν υψηλές NPV (93.06%), το οποίο θα μπορούσε να φθάσει 97,22% όταν εφαρμόστηκε η ανίχνευση του συνολικού EGFR. Ωστόσο, τα δείγματα με βαθμολογία 1+ ή 2+ αναξιόπιστα και χρειάζονται περαιτέρω επαλήθευση της κατάστασης μετάλλαξης του EGFR από προσδιορισμούς μοριακού βάση

Παράθεση:. Jiang G, Fan C, Ζανγκ Χ, Dong Q, Γουάνγκ L, Liu Y, et al. (2013) Εξακρίβωση κατάλληλη διαγνωστική Αλγόριθμος Χρησιμοποιώντας EGFR Mutation ειδικά αντισώματα για την ανίχνευση Κατάσταση EGFR σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 8 (3): e59183. doi: 10.1371 /journal.pone.0059183

Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, την Ιαπωνία

Ελήφθη: 18 Δεκεμβρίου 2012? Αποδεκτές: 12 Φλεβάρη 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 Μαρτίου 2013

Copyright: © 2013 Jiang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (επιχορηγήσεις 81071905 και 81272606 έως ΕΜΕ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

από την αρχή της χρήσης των αναστολέων κινάσης του επιδερμικού αυξητικού τυροσίνης υποδοχέα παράγοντα (EGFR-ΤΚΙδ) gefitinib και erlotinib για τη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου (NSCLC) [1], μελέτες έχουν δείξει ότι NSCLC ασθενείς με μεταλλάξεις του EGFR ενεργοποίησης μπορούν να επωφεληθούν από τη θεραπεία ΤΚΙ [2], [3]. Η κατάσταση των μεταλλάξεων του EGFR έχει γίνει ο καλύτερος προγνωστικός δείκτης της ανταπόκρισης σε TKIs [4] – [9]. Η άμεση ανάλυση αλληλουχίας είναι η μέθοδος «χρυσό πρότυπο» για την ανίχνευση μεταλλάξεων EGFR. Ωστόσο, η ευαισθησία του είναι σχετικά χαμηλό? εάν το ποσοστό των κυττάρων του όγκου είναι & lt? 25%, η πιθανότητα μιας ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα είναι πολύ αυξημένες. Λόγω της έλλειψης επαρκούς αριθμού των καρκινικών κυττάρων που διατίθενται για εξαγωγή υψηλής ποιότητας DNA, η πιθανότητα απόκτησης ενός ψευδώς αρνητικών αυξάνεται ενώ δοκιμάζει ένα μικρό βιοψία ή κυτταρολογική εξέταση δείγματος. Ωστόσο, περίπου το 70% των καρκίνων του πνεύμονα διαγιγνώσκονται σε προχωρημένα στάδια σύμφωνα με την οποία μικρές βιοψίες και κυτταρολογικών δειγμάτων είναι η μόνη πηγή του υλικού για τη δοκιμή και διάγνωση μετάλλαξη. Πρόσφατες πρόοδοι στη μοριακή μέθοδοι επέτρεψαν ανάπτυξη των πιο ευαίσθητων μεθόδων για την ανίχνευση μεταλλάξεων. Τέτοιες μέθοδοι περιλαμβάνουν πραγματικό χρόνο αλύσου ποσοτική αντίδραση πολυμεράσης (qRT-PCR) χρησιμοποιώντας ειδικούς ανιχνευτές (PCR δοκιμασία TaqMan), ενισχυμένο σύστημα πυρίμαχα μετάλλαξη (ARMS) και ανάλυση υψηλής ανάλυσης τήξεως (HRMA) [10] – [14]. Ωστόσο, αυτά είναι ακριβά και απαιτούν σταθερά καλή πειραματικές συνθήκες και εξελιγμένα εργαλεία. Ως εκ τούτου, σπανίως εφαρμόζονται σε μη πανεπιστημιακά νοσοκομεία.

Ανοσοϊστοχημική (IHC) αναλύσεις μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν για τη διαλογή μεταλλάξεων EGFR. Υυ et al. ανεπτυγμένες μονοκλωνικά αντισώματα κουνελιού μετάλλαξη ειδικά EGFR έναντι EGFR με την Ε746-A750 διαγραφή στο εξώνιο 19 ή στο σημείο μετάλλαξης L858R οποία έδειξε καλή συνοχή σε σύγκριση με το μοριακό βασίζονται σε δοκιμασίες [15] – [26]. Ωστόσο, η πρακτική εφαρμογή αυτής της μεθόδου ήταν σοβαρά περιορισμένη λόγω της αισθητή διαφορά στα κριτήρια που χρησιμοποιούνται για τα θετικά αποτελέσματα μεταξύ των διαφόρων ερευνητικών ομάδων. Μερικοί ερευνητές σκόραρε δεδομένων σύμφωνα με την ένταση χρώσης, και χωρίζεται δείγματα σε τέσσερις κατηγορίες: 0, 1+, 2+ και 3+. Ωστόσο, ορισμένοι συγγραφείς υποστήριξε ένα σκορ πάνω από 1+ να θεωρηθεί θετική, και άλλοι ακόμη και υποστήριξαν ότι ένας βαθμός πάνω από 2+ πρέπει να αντιδρά θετικά. Οι ιδιαιτερότητες αυτών των δύο προσεγγίσεων ήταν σχετικά κοντά (96-100%), αλλά και τις ευαισθησίες τους ποικίλλουν ευρέως (47 έως 92%) [15] – [19]. Μερικοί ερευνητές που λαμβάνονται, επίσης, τη βαθμολογία για την έκφραση πολλαπλασιάζοντας την ένταση χρώσης κατά το ποσοστό της περιοχής χρώσης (0-300 ή 400), και, αντίστοιχα, υποστήριξε ένα σκορ & gt? 10 ή & gt? 20 να χαρακτηριστούν ως θετικά, αλλά αισθητή διαφορά σε ευαισθησίες (42,2 – 100%) και εξειδικεύσεις (77-100%) παρατηρήθηκε [20] – [22]. Πρόσφατα, Kawahara et al. Προτείνεται η ανοσοχρώση πρέπει να χαρακτηριστεί ως θετική (βαθμολογία 2+), αρνητική (βαθμολογία 0) ή αμφίβολα (βαθμολογία 1+), υποδεικνύοντας αμφισβητήσιμη, αρνητικά ή ασθενή έκφραση, αντίστοιχα, τα οποία μπορούν να λάβουν μία ευαισθησία 81.4%, ειδικότητα 97,5%, θετική προγνωστική αξία (PPV) του 94,6% και αρνητική προγνωστική αξία (NPV) των 90,6% [23]. Συναίνεση των διεθνώς αποδεκτό κριτήριο για την «θετική» είναι ανύπαρκτη, η οποία δυσχεραίνει σημαντικά την κλινική χρήση του EGFR αντισώματα μετάλλαξη ειδικά για την ανίχνευση μεταλλάξεων του EGFR.

Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε τα αποτελέσματα IHC 399 δείγματα NSCLC ασθενείς που βαθμολογήθηκαν με μια μέθοδο τεσσάρων ταξινόμησης λαμβάνοντας υπόψη την ένταση και την περιοχή της χρώσης. Στη συνέχεια συνέκριναν τα αποτελέσματα με μια δοκιμασία μοριακής που βασίζεται να διερευνήσει τη δυνατότητα του προσυμπτωματικού ελέγχου για μεταλλάξεις του EGFR σε δείγματα NSCLC από αναλύσεις IHC.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Όλες οι ανθρώπινοι ιστοί και τα κύτταρα ελήφθησαν σύμφωνα με το ανθρώπινο υποκείμενο ερευνητικά πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από το Διοικητικό κριτική Ιατρικό Πανεπιστήμιο της Κίνας. ιστούς και τα κύτταρα του όγκου ελήφθησαν με τη γραπτή συγκατάθεση από ενήλικες ασθενείς με ΜΜΚΠ.

επιλογή του δείγματος και η μοριακή βάση

δοκιμασία

Συλλέξαμε 399 δείγματα (145 δείγματα εκτομή, 220 δείγματα βιοψίας, και 34 δείγματα κυτταρολογίας) από ασθενείς με NSCLC οι οποίοι είχαν υποβάλει αίτηση για την μοριακή βάση προσδιορισμού των μεταλλάξεων του EGFR στο Τμήμα Παθολογίας της Κίνας Ιατρικού Πανεπιστημίου (Shenyang, Κίνα) από τον Αύγουστο του 2008 έως τον Αύγουστο του 2012. το εύρος ηλικίας των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα ήταν 26 -89 χρόνια (διάμεση τιμή, 62 έτη)? υπήρχαν 214 άνδρες και 185 γυναίκες. Οι ιστολογικές τύποι ήταν 341 αδενοκαρκινώματα, 47 ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα, και 11 άλλους τύπους (Πίνακας 1). Η κατάσταση μετάλλαξης του EGFR από κάθε δείγμα ανιχνεύθηκε με την δοκιμασία TaqMan PCR. Εκτομή και βιοψία ιστοί σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Τα υπερκείμενα των δειγμάτων υπεζωκοτικής-συλλογή απομακρύνθηκαν με φυγοκέντρηση, και τα υπόλοιπα κυτταρικά συστατικά στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλίνη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Τα μπλοκ παραφίνης κόπηκαν σε πάχος 8 μm για την έρευνα του PCR-based γονιδιακές μεταλλάξεις του EGFR. Μεταλλάξεις του γονιδίου EGFR εξετάστηκαν στα εξώνια 19 και 21 χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία TaqMan PCR. Γονιδιωματικό DNA από δείγματα ιστού ή κυτταρολογία εγκλεισμένα σε παραφίνη εκχυλίστηκε και καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ QIAamp DNA Micro (Qiagen, Valencia, CA, USA). Οι εκκινητές για ανιχνευτές ανίχνευση μετάλλαξης και TaqMan στόχευση Ε746-A750 και μεταλλάξεις διαγραφής L747-P753insS στο εξόνιο 19, και L858R και το σημείο L861Q μεταλλάξεις στο εξόνιο 21 αγοράστηκαν από GP Medical Technologies (Πεκίνο, Κίνα). Η δοκιμασία TaqMan PCR διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα πραγματικό χρόνο σύστημα 7900HT PCR (Applied Biosystems, Foster, CA, USA).

Η

IHC αναλύσεις

μπλοκ παραφίνης κόπηκαν σε πάχος του 4 μm για ανοσοχρώση. Συμβατικά de-αποτρίχωση και θεραπεία ενυδάτωσης έγιναν χρησιμοποιώντας ξυλόλιο και διαβαθμισμένη σειρά αιθανόλης, αντίστοιχα. Δείγματα βράστηκαν σε ένα λουτρό ύδατος στους 100 ° C για 20 λεπτά σε 1 mmol /L αιθυλενοδιαμινο τετρα-οξικό οξύ (EDTA) σε ρΗ 9,0 και διάλυμα ανάκτησης στόχου (Dako, Glostrup, Denmark) για να ανακτήσει αντιγόνα. Εγγενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με κατεργασία με αντιδραστήριο αποκλεισμού υπεροξειδάση (Dako) επί 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα μη ειδικά σημεία πρόσδεσης μπλοκαρίστηκαν με επώαση με φυσιολογικό ορό κατσίκας μη άνοσο για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από έκπλυση σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris (TBS? Dako) επί 15 λεπτά, τρία πρωτογενή αντισώματα (δηλαδή, EGFR μονοκλωνικό αντίσωμα (D38B1), delE746-A750 μονοκλωνικό αντίσωμα μετάλλαξη-ειδική (6B6) και L858R μονοκλωνικό αντίσωμα μετάλλαξη-ειδική (43B2) ? Cell Signaling Technology, Danvers, ΜΑ, USA) αραιώθηκαν χωριστά σε 1:400 και προστίθεται στα δείγματα. Τα δείγματα επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα, πλύθηκαν σε TBS για 15 λεπτά, και επωάζονται με σημασμένο με υπεροξειδάση αρμορακίας πολυμερές-δευτερεύον αντίσωμα (kit ChemMate Envision? ΫΑΚΟ) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από έκπλυση σε TBS για 15 λεπτά, τα πλακίδια έγιναν ορατά χρησιμοποιώντας 3,3′-διαμινοβενζιδίνη.

IHC βαθμολόγησης

Ο όρος χρώση IHC βασίστηκε στην ένταση χρώσης και το ποσοστό της χρώσης περιοχή στην η μεμβράνη και /ή κυτταρόπλασμα του κυττάρου όγκου. Τέσσερις βαθμούς χρησιμοποιήθηκαν: 0, 1+, 2+, 3+. Μηδέν υποδηλώνεται καμία χρώση? 1+ συμβολίζεται ανοικτό κίτρινο χρώση χωρίς εμφανείς σωματίδια ή κίτρινο χρώση με προφανή σωματίδια σε & lt? 10% των κυττάρων του όγκου? 2+ συμβολίζεται η κίτρινη χρώση με προφανή σωματίδια σε & gt? 10% καρκινικά κύτταρα ή καφέ χρώση με προφανή σωματίδια σε & lt? 10% των κυττάρων του όγκου? και 3+ συμβολίζεται καφέ χρώση με προφανή σωματίδια σε & gt? 10% των κυττάρων του όγκου. αξιολόγηση χρώση πραγματοποιείται μόνον αν & gt? 5 καρκινικά κύτταρα ήταν παρόντα σε βιοψία με βελόνα ή κυτταρολογικών δειγμάτων. Όλες οι ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις αξιολογήθηκαν από τρεις έμπειρους ερευνητές (YL, JHY και YZ), οι οποίοι δεν γνώριζαν κλινικών καταστάσεων ασθενών ή παθολογική διάγνωση.

Στατιστικές αναλύσεις

Η ευαισθησία, η ειδικότητα, PPV και NPV της δοκιμασίας IHC που βασίζεται υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό μοριακών που βασίζεται ως αναφορά. Η συμφωνία μεταξύ των δύο τεχνικών υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας Cohen κ. Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση του SPSS 13.0 για Windows.

Αποτελέσματα

Μοριακή με βάση EGFR κατάστασης μεταλλάξεων των 399 δειγμάτων NSCLC

Ένα σύνολο 399 δειγμάτων NSCLC ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας το TaqMan δοκιμασία PCR. Μια μετάλλαξη του EGFR ανιχνεύθηκε σε 162 περιπτώσεις (40,6%, 162/399). Αυτό περιλάμβανε Ε19 (Ε746-A750) διαγραφή μετάλλαξη σε 86 περιπτώσεις (21,55%, 86/399), Ε21 (L858R) σημειακές μεταλλάξεις σε 70 περιπτώσεις (17,54%, 70/399), τόσο Ε746-A750 και μεταλλάξεις L858R σε 4 περιπτώσεις, Ε19 απαλοιφή (L747-P753insS) μεταλλάξεις σε 4 περιπτώσεις (1,03%, 4/399), E21 (L861Q) σημειακές μεταλλάξεις σε 6 περιπτώσεις (1,5%, 6/399), και καμία μετάλλαξη στο 237 περιπτώσεις (59,4%, 237/399). Το ποσοστό των μεταλλάξεων σε δείγματα εκτομής ήταν 40,69% (59/145), σε δείγματα βιοψίας ήταν 36.82% (81/220), καθώς και σε δείγματα κυτταρολογίας ήταν 35,29% (12/34).

Συγκριτική ανάλυση των IHC με βάση και μοριακή βάση EGFR κατάστασης μεταλλάξεων

Τα μοτίβα χρώσης του EGFR αντίσωμα μετάλλαξη ειδικό φαίνεται στο Σχήμα 1. από 399 δειγμάτων NSCLC, 144 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 0 (στην οποία 10 περιπτώσεις harbored μεταλλάξεις του EGFR και ο ρυθμός των μεταλλάξεων σε αυτή την κατηγορία ήταν 6,94%, 10/144)? 104 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 1+ (υπήρξαν 24 περιπτώσεις μεταλλάξεων του EGFR και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 23,08%, 24/104)? 103 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 2+ (μεταλλάξεις του EGFR ήταν παρόντες σε 70 περιπτώσεις και το ποσοστό των μεταλλάξεων ήταν 67,96%, 70/103)? 48 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 3+ (48 περιπτώσεις έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR, και το ποσοστό της μετάλλαξης ήταν 100%, 48/48). Τα λεπτομερή αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 2. Τα δείγματα σκοράρει 3+ έχουν μια τέλεια PPV (100%), και εκείνων που σημείωσε 0 έχουν μια καλή NPV (93.06%).

Εκπρόσωπος ανοσοχρώση των δύο δειγμάτων ιστολογίας και κυτταρολογίας στην NSCLC ασθενείς (Α, D, G και J, δείγματα εκτομή, 200 ×? Β, Ε, Η και Κ, δείγματα βιοψίας, 200 ×? C, F, Ι και L, τα δείγματα κυτταρολογίας, 400 Χ). Τέσσερις βαθμούς χρησιμοποιήθηκαν: 0, 1+, 2+ και 3+. 3+ συμβολίζεται καφέ χρώση με προφανή σωματίδια σε & gt? 10% καρκινικών κυττάρων (Α, Β και C)? 2+ συμβολίζεται η κίτρινη χρώση με προφανή σωματίδια σε & gt? 10% καρκινικά κύτταρα ή καφέ χρώση με προφανή σωματίδια σε & lt? 10% των καρκινικών κυττάρων (D, Ε και F)? 1+ συμβολίζεται ανοικτό κίτρινο χρώση χωρίς εμφανείς σωματίδια ή κίτρινο χρώση με προφανή σωματίδια σε & lt? 10% των καρκινικών κυττάρων (G, H και Ι)? Μηδέν υποδηλώνεται καμία χρώση (J, K και L).

Η

Η συμφωνία μεταξύ των προσδιορισμούς IHC-based και μοριακή βάση, σύμφωνα με τα διαφορετικά επίπεδα των θετικών βαθμών υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας Cohen κ. Όταν οι ομάδες με σκορ 0 ή 1+ θεωρήθηκαν ως αρνητικά, και τα άτομα με σκορ 2+ ή 3+ θεωρήθηκαν ως θετικό, η συμφωνία μεταξύ των δύο διαφορετικών μεθόδων ανίχνευσης ήταν υψηλότερο (κ = 0.644). Ωστόσο, θα υπάρχουν 24 ψευδώς αρνητικά περιπτώσεις (23,08%, 24/104) στην ομάδα της βαθμολογίας 1+ και 33 ψευδώς θετικές περιπτώσεις (32,04%, 33/103) σε αυτό της βαθμολογίας 2+, με αποτέλεσμα την ευαισθησία από 77,63%, η ειδικότητα του 86,64%, PPV του 78,14%, και NPV του 86,4% για την ανίχνευση με ανοσοϊστοχημεία. Καμία από αυτές τις τιμές ήταν ιδανικός (όπως φαίνεται στον πίνακα 3).

Η

Με μοριακών δοκιμών ως πρότυπο, το αντίσωμα μετάλλαξη ειδικό delE746-A750 (6B6) θα μπορούσε να ανιχνεύσει 69 από τις 86 περιπτώσεις με Ε746 -A750 διαγραφή μετάλλαξη (40 με σκορ 2+ και 29 με αποτέλεσμα 3+), ενώ ήταν αρνητικός στις υπόλοιπες 17 περιπτώσεις (4 με σκορ 0 και 14 με βαθμολογία 1+) (κ = 0,584, ευαισθησία: 80,23%, ειδικότητα: 85,3%, PPV: 60%, NPV: 94.01%)? η L858R αντίσωμα μετάλλαξη-ειδική (43B2) μπόρεσε να εντοπίσει 53 από 70 περιπτώσεις με σημείο L858R μετάλλαξη (31 με σκορ 2+ και 22 με 3+), ενώ ήταν αρνητικός στις υπόλοιπες 17 περιπτώσεις (7 με σκορ 0 και 10 με βαθμολογία 1+) (κ = 0,639, ευαισθησία: 75,71%, ειδικότητα: 91,79%, PPV: 66,25%, ΚΠΑ:. 94,67%)

Επιπλέον, εντοπίστηκε, επίσης, συνολικού EGFR σε όλες τις 399 περιπτώσεις με τη χρήση μονοκλωνικού αντισώματος κατά EGFR. Τα αποτελέσματα έδειξαν 27 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 0, 38 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 1+, 193 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 2+, και 141 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 3+. μονοκλωνικό αντίσωμα EGFR (D38B1) είναι διαφορετικό από τα δύο αντισώματα μετάλλαξη ειδικών. DelE746-A750 αντίσωμα μετάλλαξη-ειδικό (6B6) μπορεί να αναγνωρίσει ειδικά τις πρωτεΐνες EGFR με μια Ε746-A750 διαγραφή μετάλλαξη στο εξώνιο 19, και L858R αντίσωμα μετάλλαξη-ειδικό (43B2) είναι σε θέση να προσδιορίσει ειδικά την πρωτεΐνη EGFR με ένα σημείο L858R μετάλλαξη στο εξόνιο 21? Αντίθετα, το μονοκλωνικό αντίσωμα EGFR (D38B1), η οποία δεν είναι μια μετάλλαξη-ειδικό αντίσωμα, προσδιορίζει την ολική πρωτεΐνη EGFR ανεξάρτητα από την κατάσταση μετάλλαξης. Παρόλο που οι συνολικές EGFR ήταν άκρως εκφράζεται στις περισσότερες περιπτώσεις, υπήρχαν ακόμη 38 υποθέσεις με βαθμολογία 1+ και 27 περιπτώσεις με βαθμολογία 0, στην οποία 12 περιπτώσεις εξετάστηκαν θετικά για γονιδιακές μεταλλάξεις του EGFR με μοριακή μέθοδο. Αυτό μπορεί να εξηγηθεί από το γεγονός ότι τα επίπεδα των συνολικών EGFR σε κύτταρα όγκου είναι τόσο χαμηλά, ώστε η κηλίδωση των δύο αντισωμάτων μετάλλαξη ειδικών μπορεί να είναι αρνητικό σε ορισμένες περιπτώσεις, ακόμα και αν έχουν γονίδιο EGFR μεταλλάξεις ανιχνεύονται (όπως φαίνεται στην Εικόνα S1). Ως εκ τούτου, την ανίχνευση του επιπέδου του συνολικού EGFR χρησιμοποιώντας τον EGFR μονοκλωνικό αντίσωμα (D38B1) θα μπορούσε να αποτρέψει την εμφάνιση παρόμοιων ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα πάνω, ενώ οι ευαισθησίες των delE746-A750 και αντισώματα μετάλλαξη ειδικά L858R θα μπορούσε να αυξηθεί σε 82,56% και 90% αντίστοιχα.

Συγκριτική ανάλυση των IHC με βάση τα αποτελέσματα της εκτομής, βιοψία και κυτταρολογία δείγματα

τα πρότυπα χρώσης των δειγμάτων εκτομή χρησιμοποιώντας EGFR μετάλλαξη ειδικά αντισώματα που φαίνεται στο Σχήμα 2. Σύμφωνα με μας βαθμολόγησης των κριτηρίων, των δειγμάτων 145 εκτομή, 52 βαθμολογήθηκαν 0, στην οποία 2 περιπτώσεις έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν μόνο 3,85% (2/52)? 40 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 1+, στο οποίο υπήρχαν 10 περιπτώσεις μεταλλάξεων του EGFR και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 25% (10/40)? 35 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 2+, κατά την οποία οι μεταλλάξεις του EGFR ήταν παρόντες σε 29 περιπτώσεις, και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 82,56% (29/35)? 18 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 3+, στην οποία 18 περιπτώσεις έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR, και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 100% (18/18). Τα αναλυτικά αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 2.

Η συνολική πρωτεΐνη EGFR σε δείγματα εκτομής μπορεί να βάφονται με EGFR (D38B1) αντίσωμα (Α, D και G, 200 ×). Δείγματα χωρίς μεταλλάξεις του EGFR δεν βάφτηκαν με δύο αντισωμάτων μετάλλαξη-ειδική (Β και C, 200 Χ). Δείγματα με μετάλλαξη διαγραφής Ε746-A750 βάφτηκαν με Ε746-A750 διαγραφή (6B6) ειδικό αντίσωμα (Ε, 200 ×) και τα δείγματα με μετάλλαξη L858R βάφτηκαν με L858R μεταλλαγμένο (43B2) ειδικό αντίσωμα (Ι, 200 ×).

τα χαρακτηριστικά χρώση των δειγμάτων βιοψίας με τη χρήση EGFR μετάλλαξη ειδικά αντισώματα φαίνεται στο Σχήμα 3. Σύμφωνα με τα κριτήρια βαθμολόγησης μας, των δειγμάτων 220 εκτομή, 77 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 0, στην οποία 6 έτρεφε μεταλλάξεις EGFR και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 7,79% (6/77)? 55 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 1+, στην οποία 10 περιπτώσεις έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 18,18% (10/55)? 60 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 2+, κατά την οποία 37 έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR, και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 61.67% (37/60)? 28 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 3+, στην οποία 28 περιπτώσεις έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR, και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 100% (28/28). Τα αναλυτικά αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 2.

Η συνολική πρωτεΐνη EGFR σε δείγματα βιοψίας μπορεί να βάφονται με EGFR (D38B1) αντίσωμα (Α, D και G, 40 × και η επάνω αριστερή γωνία 200 ×). Δείγματα χωρίς μεταλλάξεις του EGFR δεν βάφτηκαν με δύο αντισωμάτων μετάλλαξη-ειδική (Β και C, 40 × και στην επάνω αριστερή γωνία 200 ×). Δείγματα με μετάλλαξη διαγραφής Ε746-A750 βάφτηκαν με Ε746-A750 διαγραφή (6B6) ειδικό αντίσωμα (Ε, 40 × και η επάνω αριστερή γωνία 200 ×) και τα δείγματα με μετάλλαξη L858R βάφτηκαν με L858R μεταλλαγμένο (43B2) ειδικό αντίσωμα (Ι, 40 × και η επάνω αριστερή γωνία 200 ×).

η

τα χαρακτηριστικά χρώση δειγμάτων κυτταρολογίας χρησιμοποιώντας EGFR μετάλλαξη ειδικά αντισώματα φαίνεται στο Σχήμα 4. Σύμφωνα με τα κριτήρια βαθμολόγησης μας, από τις 34 δειγμάτων κυτταρολογία, 15 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 0, στην οποία 2 περιπτώσεις έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 13,33% (2/15)? 9 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 1+, στο οποίο 4 περιπτώσεις είχαν μεταλλάξεις του EGFR και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 44,44% (4/9)? 8 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 2+, στην οποία 4 περιείχε μεταλλάξεις του EGFR, και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 50% (4/8)? 2 περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν 3+, στο οποίο 2 περιπτώσεις έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR, και ο ρυθμός μετάλλαξης ήταν 100% (2/2). Τα λεπτομερή αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 2.

Η συνολική πρωτεΐνη EGFR σε κυτταρολογικά δείγματα θα μπορούσαν να βάφονται με EGFR (D38B1) αντίσωμα (Α, D και G, 400 Χ). Δείγματα χωρίς μεταλλάξεις του EGFR δεν βάφτηκαν με δύο αντισωμάτων μετάλλαξη-ειδική (Β και C, 400 Χ). Δείγμα με μετάλλαξη εξάλειψης Ε746-A750 βάφτηκαν με Ε746-A750 διαγραφή (6B6) ειδικό αντίσωμα (Ε, 400 Χ) και τα δείγματα με μετάλλαξη L858R βάφτηκαν με L858R μεταλλαγμένο (43B2) ειδικό αντίσωμα (Ι, 400 Χ).

Όταν βαθμολογίας 3+ θεωρήθηκε να είναι θετική, η εξειδίκευση και PPV στον προσδιορισμό IHC-βάση ήταν 100% για όλους τους τρεις τύπους των δειγμάτων. Όταν σκορ 0 θεωρήθηκε ότι είναι αρνητική, τα δείγματα εκτομή είχε ως αποτέλεσμα την υψηλότερη NPV (96,15%), ακολουθούμενη από δείγματα βιοψίας (92,21%), και τα δείγματα κυτταρολογία είχε το χαμηλότερο NPV (88,24%). Όταν σκορ 0 και 1+ θεωρήθηκαν ότι είναι αρνητικό και να σκοράρει 2+ και 3+ θεωρείται θετική, η ιδιαιτερότητα των δειγμάτων εκτομή είχε το υψηλότερο NPV (93.02%), ακολουθούμενη από δείγματα βιοψίας (83,45%), και δείγματα κυτταρολογίας είχε το χαμηλότερο NPV (81,82%) (Πίνακας 3).

Υπήρχαν 12 ασθενείς με δύο εκτομή και κυτταρολογική εξέταση δειγμάτων σε δείγματα μας, και 6 από αυτούς έτρεφε μεταλλάξεις του EGFR (3 περιπτώσεις Ε746-A750 μετάλλαξη διαγραφής και 3 περιπτώσεις L858R σημείο μετάλλαξης) με δοκιμασία μοριακής που βασίζεται. Με IHC με βάση δοκιμασία πάνω στα δείγματα εκτομή, 4 από τα 6 δείγματα με μεταλλάξεις του EGFR ταυτοποιήθηκαν ως έχοντες βαθμολογία 3+, και τα άλλα 2 ταυτοποιήθηκαν ως έχοντες ένα σκορ 2+. Αντίθετα, στα δείγματα κυτταρολογίας, μόνο 1 περιστατικό είχε ένα σκορ 3+ και 1 υπόθεση είχε ένα σκορ 2+, και οι άλλες 4 περιπτώσεις ήταν όλοι βαθμολογία 1+. Στις 6 δείγματα χωρίς μετάλλαξη EGFR, μόνο 1 περίπτωση είχε ένα σκορ 1+ με δοκιμασία IHC που βασίζεται πάνω στα δείγματα εκτομής, και τα άλλα πέντε δείγματα είχαν μία βαθμολογία 0. Σε αντίθεση, τα αποτελέσματα των αντίστοιχων δειγμάτων κυτταρολογία περιλαμβάνονται ένα σκορ της 2+ σε 1 περίπτωση, η βαθμολογία 1+ σε 1 περίπτωση, και το σκορ 0 στις υπόλοιπες 4 περιπτώσεις (Πίνακας 4).

η

Συζήτηση

μεταλλάξεις του EGFR μπορεί να ανιχνευθεί σε NSCLC με μεθόδους IHC χρησιμοποιώντας αντισώματα μεταλλαγμένο ειδικά EGFR. Ωστόσο, λόγω των αισθητών διαφορών μεταξύ των κριτηρίων για την θετικότητα που ορίζεται από διαφορετικές ερευνητικές ομάδες, οι αναγνώστες ή τους τεχνικούς μπορεί να συγχέεται με ή ακόμα και παραπλάνηση από σε σχέση με μια πρακτική εφαρμογή της μεθόδου αυτής. Ως εκ τούτου, μια πιο εκτεταμένη έρευνα απαιτείται για την επίτευξη συναίνεσης. Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης και άλλες εκθέσεις [15] – [19], [23] προτείνουν ότι τα κριτήρια βαθμολόγησης με βάση την ένταση χρώσης της μεμβράνης ή /και κυτταρόπλασμα των κυττάρων του όγκου και το ποσοστό της περιοχής χρώσης (η οποία διαιρέθηκε σε τέσσερις κατηγορίες: 0, 1+, 2+ και 3+) μπορεί να είναι η καλύτερη όλων των διαθέσιμων συστημάτων βαθμολόγησης. Η συμφωνία μεταξύ προσδιορισμούς IHC-based και μοριακή βάση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας Cohen κ σύμφωνα με διαφορετικά επίπεδα ανοσοϊστοχημική ταξινόμησης. Παρά το γεγονός ότι η συμφωνία μεταξύ των μεθόδων 2 δοκιμών ήταν υψηλότερο (κ = 0.644), όταν το σκορ 2+ και 3+ θεωρήθηκαν ως θετικές, υπήρχαν ακόμη 33 ψευδώς θετικές περιπτώσεις (32,04%, 33/103) στη βαθμολογία περιπτώσεις 2+ και 24 ψευδώς αρνητικά περιπτώσεις (23,08%, 24/104) στη βαθμολογία 1+ περιπτώσεις, με αποτέλεσμα την ευαισθησία του 77,63%, η ειδικότητα του 86,64%, PPV του 78,14%, και NPV του 86,4%, κανένα από τα οποία ήταν ιδανική. Ως εκ τούτου, με μοριακό τεστ ως πρότυπο, ακόμη και αν ένα δείγμα βαθμολογείται ως θετική με τη μέθοδο IHC, μπορεί να εξακολουθεί να απαιτείται ο προσδιορισμός μοριακού βάση για να επαληθεύσετε την κατάσταση μετάλλαξης του EGFR, και έτσι η διαλογή των μεταλλάξεων του EGFR με IHC να μην φαίνεται εφαρμόσιμος. Ακόμη και αν ο αριθμός των ψευδώς θετικών περιπτώσεων ήταν πολύ λίγες και σε άλλες μελέτες [15] – [19], περαιτέρω μοριακή ανίχνευση δεν μπορεί να εγκαταλειφθεί εντελώς. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι τα δείγματα με σκορ 3+ είχε μια τέλεια PPV (100%), και το σκορ 0 δείγματα είχαν μια καλή NPV (93.06%). Εάν ένα σκορ 3+ θεωρείται να είναι ένα θετικό κριτήριο, οι ασθενείς με θετικά δείγματα με προσδιορισμό IHC με βάση θα μπορούσαν να λάβουν άμεσα ΤΚΙ θεραπεία χωρίς ανάγκη για την επαλήθευση από ένα μοριακό τεστ. Η εφαρμοσιμότητα της θεραπείας με ΤΚΙ μπορούσε να αξιολογηθεί ταχέως με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας EGFR μετάλλαξη ειδικών αντισωμάτων σε σχεδόν το 50% όλων των ασθενών (οι βαθμολογήθηκαν ως 0 ή 3+). Η πιθανότητα των μεταλλάξεων στα δείγματα με βαθμολογία 1+ ήταν περίπου 23,08%, και μια πιθανότητα καμία μετάλλαξη σε αυτά ήταν 76,92%, ανά ανάλυσή μας. Ο ρυθμός μετάλλαξης στα δείγματα με βαθμολογία 2+ ήταν 67,96%, υποδηλώνοντας έντονα την δυνατότητα μιας μετάλλαξης EGFR σε αυτή την ομάδα. Στη συνέχεια, αν χρησιμοποιηθεί σωστά, διαλογή κατάσταση μετάλλαξης του EGFR με ανοσοϊστοχημεία μπορεί να έχει διαγνωστική αξία για τη θεραπευτική διαδικασία λήψης αποφάσεων, ειδικά σε ένα ιατρικό κέντρο που δεν έχουν την ικανότητα των μοριακών δοκιμών.

Όπως συνιστάται Wu et al. [22], η έκφραση του συνολικού EGFR δοκιμάστηκε επίσης σε όλες τις περιπτώσεις 399 στη μελέτη μας. Σε αντίθεση με τα δύο αντισώματα μετάλλαξη-ειδικό, το μονοκλωνικό αντίσωμα EGFR (D38B1) προσδιορίζει την συνολική πρωτεΐνη EGFR ανεξάρτητα από την κατάσταση μετάλλαξης. Επειδή τα επίπεδα της ολικής EGFR, σε ορισμένες περιπτώσεις είναι πολύ χαμηλές, οι μεταλλαγμένες πρωτεΐνες μπορεί να μην είναι ανιχνεύσιμη με τη χρήση δύο αντισωμάτων μετάλλαξη ειδικών, αν και οι περιπτώσεις Harbor μεταλλαγμένο γονίδιο EGFR (όπως φαίνεται στην Εικόνα S1). Παρ ‘όλα αυτά, χρησιμοποιώντας το μονοκλωνικό αντίσωμα EGFR (D38B1) σε συνδυασμό με αντισώματα ειδικά για μετάλλαξη πιθανόν μειωμένη ψευδώς αρνητικών αποτελεσμάτων ανά ανάλυσή μας. Με την προσέγγιση αυτή, οι ευαισθησίες των μετάλλαξη ειδικών αντισωμάτων delE746-A750 και L858R μπορούσε να αυξηθεί σε 82,56% και 90% αντίστοιχα. Η ευαισθησία της L858R αντισώματος μετάλλαξη συγκεκριμένο (43B2) φαίνεται μεγαλύτερη από delE746-A750 αντισώματος μετάλλαξη-ειδική (6B6), το οποίο είναι σύμφωνο με ό, τι έχει αναφερθεί από Ambrosini-Spaltro A et al [16].

Επιπλέον, έχουμε διεξάγει μια συγκριτική ανάλυση των IHC με βάση τα αποτελέσματα σε εκτομή, βιοψία και κυτταρολογική εξέταση δειγμάτων. Όταν ένα σκορ 2+ θεωρήθηκε να είναι θετική, το ποσοστό των ψευδώς θετικών τιμών για τα δείγματα εκτομή ήταν μόνο 17,14% (6/35), ενώ τα ποσοστά ψευδώς θετικών τιμών για βιοψίες και δείγματα κυτταρολογίας ήταν 38,33% (23 /60) και 50% (4/8), αντίστοιχα. Αυτό το εύρημα πρότεινε ότι, λόγω της μικρότερης ποσότητας των ιστών και των κυττάρων του όγκου από ό, τι τα δείγματα εκτομής, η ετερογένεια των κυττάρων του όγκου σε βιοψία ή κυτταρολογία δείγματα μπορεί να γίνουν πιο εμφανή, και έτσι να προκαλέσει αυξημένη μεταβλητότητα των αποτελεσμάτων των δοκιμών. Εκτός από τον περιορισμένο αριθμό των κυττάρων του όγκου στο πλευριτικό υγρό (κυτταρολογία δείγμα), η σύνθεση των κυτταρικών συστατικών ήταν πιο περίπλοκη, η οποία συχνά περιλαμβάνει μεγάλο αριθμό ερυθρών αιμοσφαιρίων, φλεγμονώδη κύτταρα και μεσοθηλιακών κυττάρων, και έτσι αραιώνει τα κύτταρα του όγκου. Παρά το γεγονός ότι τα δείγματα κυτταρολογίας μπορεί να χρησιμοποιηθεί και για τις δύο μοριακές βάσης και IHC με βάση προσδιορισμούς, η τελευταία δοκιμασία τείνει να δείξει περισσότερο ψευδώς αρνητικές τιμές σε σύγκριση με τα δείγματα ιστών (ιδίως σε σύγκριση με τα δείγματα εκτομή). Αυτό μπορεί να εξηγήσει μια σημαντικά μειωμένη ευαισθησία των μεταλλαγμένων ανίχνευσης σε δείγματα κυτταρολογίας (Πίνακας 3). Επιπλέον, έχουμε εξετάσει 12 περιπτώσεις και με τα δύο εκτομή και κυτταρολογική εξέταση δειγμάτων που συλλέχθηκαν. Από αυτούς, 6 harbored μεταλλάξεις του EGFR με δοκιμασία μοριακής βάσης και το άλλο 6 δεν το έκανε. Όταν αποτέλεσμα 3+ χρησιμοποιήθηκε ως όριο, προσδιορισμός IHC-βάση θα μπορούσε να εντοπίσει 4 από τα 6 δείγματα με μεταλλάξεις του EGFR σε δείγματα εκτομής, αλλά ανιχνεύει μόνο το 1 περίπτωση σε δείγματα κυτταρολογίας. Αν εφαρμοζόταν βαθμολογία ≥2 +, η δοκιμασία θα μπορούσε να προσδιορίσει όλες τις 6 περιπτώσεις με μεταλλάξεις του EGFR σε δείγματα εκτομής, αλλά ανιχνεύει μόνο 2 από τις 6 περιπτώσεις σε δείγματα κυτταρολογίας. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι, σε σχέση με IHC με βάση την ανίχνευση μεταλλάξεων EGFR, δείγματα εκτομή ήταν πολύ καλύτερα από ό, δειγμάτων βιοψίας, και δείγματα βιοψίας ήταν σημαντικά καλύτερα από τα δείγματα κυτταρολογία.

Στη θεωρία, οι πρωτεΐνες EGFR σε κυτταρική μεμβράνη ή στην κυτταρόπλασμα παίζουν διαφορετικούς ρόλους σε κύτταρα όγκου και έχουν διαφορετικές αλληλεπίδραση με TKIs. Ωστόσο, τα αποτελέσματα της θεραπείας της TKIs σε ασθενείς που παρουσιάζουν μια διαφορετική υποκυτταρική διανομή του EGFR σε κύτταρα όγκου δεν έχουν καλά ακόμη ερευνηθεί. Όπως έχει ήδη αναφερθεί, παρατηρήσαμε ότι EGFR θα μπορούσε να εντοπίσει σε μεμβράνη των κυττάρων του όγκου, σε κυτταρόπλασμα ή και τα δύο για την μεμβράνη και κυτόπλασμα με ανοσοϊστοχημική ανάλυση. Προκειμένου να καθορίσει τα λειτουργικά χαρακτηριστικά των διαφόρων υποκυτταρικές κατανομές σε πρωτεΐνες EGFR, προσπαθήσαμε να αναλύσουμε μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ της κατάστασης μετάλλαξης του EGFR και υποκυτταρική κατανομή των πρωτεϊνών, αλλά διαπίστωσε καμία συσχέτιση μεταξύ τους. Αντ ‘αυτού, η ένταση χρώσης δείχνει μια ισχυρή συσχέτιση με την κατάσταση μετάλλαξης του EGFR. Ως εκ τούτου, η χρώση του «της μεμβράνης και /ή κυτταρόπλασμα» ήταν εξίσου και από κοινού θεωρούνται σε σύστημα βαθμολόγησης μας.

Η υψηλή δραστικότητα των πρωτεϊνών EGFR στον καρκίνο του πνεύμονα οφείλεται στις μεταλλάξεις ενεργοποίησης, αλλά οι ενισχύσεις γονίδιο μπορεί επίσης να διαδραματίσουν σημαντικό ρόλο. Σε αυτή τη μελέτη, 334/399 (83,7%) περιπτώσεις NSCLC αποδείχθηκε ότι έχουν αυξημένη έκφραση πρωτεΐνης EGFR (≥2 +) με τη χρήση μονοκλωνικού αντισώματος, το ρυθμό πολύ υψηλότερο από το κανονικό ανίχνευση σε γενετικό επίπεδο (40,6%). Μένει να διερευνηθεί περαιτέρω εάν αυτή η αυξημένη έκφραση του EGFR σε ορισμένες περιπτώσεις χωρίς ανιχνεύσιμες μεταλλάξεις διαμεσολαβείται από ampification του γονιδίου της ή άλλων εναλλακτικών μηχανισμών. Εάν ή όχι το TKIs μπορεί να εφαρμοστεί εμπειρικά σε αυτούς τους ασθενείς πρέπει να ελέγχονται από επιπρόσθετες πειραματικές μελέτες και κλινικές δοκιμές.

Εν ολίγοις, σύμφωνα με τις αναλύσεις μας της κατάστασης μετάλλαξης του EGFR με IHC, οι ασθενείς με σκορ 3 + είχε μια τέλεια PPV (100%), και μπορεί να δεχθεί τη θεραπεία ΤΚΙ ‘ευθείας χωρίς την ανάγκη για μια επιβεβαιωτική δοκιμασία μοριακής που βασίζεται. Ασθενείς με σκορ 0 είχε υψηλό NPV (93.06%). Ωστόσο, τα δείγματα με βαθμολογία 1+ ή 2+ είναι αναξιόπιστα και χρειάζονται περαιτέρω επαλήθευση της κατάστασης μετάλλαξης του EGFR με τη δοκιμασία μοριακού βάση. Ως εκ τούτου, με τη χρήση διαγνωστικών αλγορίθμου μας, σε σχεδόν το ήμισυ όλων των ασθενών (ασθενείς με βαθμολογία 0 ή 3+), ένα εφαρμοσιμότητα του ΤΚΙ θεραπεία θα μπορούσε να προσδιοριστεί με ανοσοϊστοχημεία και πιο πολύπλοκες, δαπανηρές μοριακή δοκιμή πρέπει να αποφεύγεται. Δείγματα με σκορ 0 σε IHC με βάση δοκιμασία με τα αντισώματα μετάλλαξη ειδικών δύο EGFR πρέπει να ελεγχθεί περαιτέρω για την έκφραση του συνολικού EGFR χρησιμοποιώντας EGFR μονοκλωνικό αντίσωμα (D38B1), προκειμένου να μειωθεί περαιτέρω η ψευδώς αρνητικό ποσοστό (Σχήμα 5). Πάρτε μαζί, σε σύγκριση με τη χρήση μόνο του ποσοτικού προσδιορισμού που βασίζεται σε IHC, αυτή η ολοκληρωμένη προσέγγιση συνδυάζει IHC- και προσδιορισμούς μοριακού που βασίζονται επιδεικνύει μία υψηλότερη ευαισθησία (97,37%), η ειδικότητα (100%) και την αξία κ (0.979), και έτσι είναι πιο πρακτικό για οι ασθενείς ελέγχονται για πιθανή θεραπεία ΤΚΙ. διαγνωστικός αλγόριθμος μας μπορεί δυνητικά να βελτιστοποιήσει θεραπευτικές επιλογές, τη μείωση του κόστους και την εξοικονόμηση χρόνου.

«IHC» αναφέρεται σε ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις.

Η

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

Τα ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα μετάλλαξης των IHC λόγω του χαμηλού επιπέδου του συνολικού EGFR. Το επίπεδο της συνολικής EGFR σε κύτταρα όγκου ήταν τόσο χαμηλή (Α και D, 200 Χ) που μεταλλαγμένες πρωτεΐνες ήταν μη ανιχνεύσιμα με μετάλλαξη-ειδικά αντισώματα σε ορισμένες περιπτώσεις (Β, C, Ε και F, 200 ×), ακόμη και αν οι μεταλλάξεις ήταν προσδιορίζονται με δοκιμασία μοριακής που βασίζεται στις περιπτώσεις

doi:. 10.1371 /journal.pone.0059183.s001

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με το κανονισμούς των θεσμικών πίνακες ελέγχου σε Κίνα Ιατρικό Πανεπιστήμιο.