Αφηρημένο

Ιστορικό

σφιγγοσίνης κινάσης-1 (SphK1) είναι ένα ογκογόνο λιπιδίων κινάσης εμπλέκονται κυρίως σε απάντηση αντικαρκινικών θεραπειών για τον καρκίνο του προστάτη. Τα ανδρογόνα ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του προστάτη, και η θεραπεία στέρησης ανδρογόνων είναι το πρότυπο της περίθαλψης στην αντιμετώπιση των ασθενών με προχωρημένη νόσο. Εδώ, ερευνήσαμε το ρόλο του SphK1 στη ρύθμιση της ανδρογόνο-εξαρτώμενη ανάπτυξη των κυττάρων καρκίνου του προστάτη και την επιβίωση.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

επάγεται Βραχυπρόθεσμες αφαίρεση ανδρογόνων μια ταχεία και παροδική αναστολή SphK1 σχετίζεται με μειωμένο κυτταρικής ανάπτυξης in vitro και in vivo, ένα γεγονός που δεν παρατηρήθηκε σε ορμονο-ευαίσθητος κύτταρα PC-3. Υποστηρίζοντας τον κρίσιμο ρόλο της αναστολής SphK1 στην ταχεία επίδραση των ανδρογόνων εξάντληση, η υπερέκφραση του θα μπορούσε να βλάψει την μείωση της κυτταρικής ανάπτυξης. Παρομοίως, η προσθήκη του διυδροτεστοστερόνη (DHT) σε κύτταρα LNCaP ανδρογόνα στερούνται αποκατασταθεί πολλαπλασιασμό των κυττάρων, μέσω ενός ανδρογόνου υποδοχέα /ΡΙ3Κ /Akt εξαρτώμενη διέγερση του SphK1, και η αναστολή της SphK1 μπορούσε αξιοσημείωτα παρεμποδίζουν τις επιδράσεις της DHT. Αντίθετα, η μακροχρόνια κατάργηση της υποστήριξης των ανδρογόνων στα κύτταρα LNCaP και C4-2B οδήγησε σε μια προοδευτική αύξηση στην έκφραση και τη δραστηριότητα SphK1 όλη την εξέλιξη σε ανδρογόνο ανεξαρτησία κατάσταση, η οποία χαρακτηρίζεται από την απόκτηση ενός νευροενδοκρινείς (ΝΕ) -όπως κυττάρων φαινότυπο. Είναι σημαντικό ότι, η αναστολή της ΡΙ3Κ /Akt μονοπάτι-by επηρεάζει αρνητικά SphK1 δραστηριότητα θα μπορούσε να αποτρέψει τη διαφοροποίηση ΝΕ και στα δύο μοντέλα κύτταρο, ένα γεγονός που θα μπορούσε να μιμηθεί από αναστολείς SphK1. Συναρπαστικά, η αναστρεψιμότητα του φαινοτύπου ΒΑ από την έκθεση στο φυσιολογικό μέσο συνδέθηκε με μια έντονη αναστολή της δραστηριότητας SphK1.

Συμπεράσματα /Σημασία

Αναφέρουμε την πρώτη απόδειξη ότι η στέρηση ανδρογόνων προκαλεί μια διαφορική επίδραση σχετικά με τη δραστηριότητα SphK1 σε μοντέλα κυττάρων καρκίνου του προστάτη ορμόνη ευαίσθητη. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν επίσης ότι η ενεργοποίηση SphK1 κατόπιν χρόνιας στέρησης ανδρογόνων μπορεί να χρησιμεύσει ως αντισταθμιστικό μηχανισμό που θα επιτρέπει καρκίνου του προστάτη κύτταρα να επιβιώσουν σε ανδρογόνα εξαντλημένο περιβάλλον, δίνοντας στήριξη στην αναστολή της ως πιθανή θεραπευτική στρατηγική για την καθυστέρηση /αποτρέψει τη μετάβαση σε ανεξάρτητο από ανδρογόνο προστάτη καρκίνο

Παράθεση:. Dayon Α, Brizuela L, Martin C, Mazerolles C, Pirot Ν, Doumerc Ν, et al. (2009) σφιγγοσίνης κινάσης-1 είναι κεντρικής σημασίας για ανδρογόνων-Ρυθμιζόμενη προστάτη ανάπτυξη του καρκίνου και την επιβίωση. PLoS ONE 4 (11): e8048. doi: 10.1371 /journal.pone.0008048

Επιμέλεια: Ιωσήφ Alan Bauer, Ίδρυμα Bauer Έρευνας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 23 Ιούλ 2009? Αποδεκτές: 2 Νοεμ του 2009? Δημοσιεύθηκε: 26 Νοεμβρίου του 2009

Copyright: © 2009 Dayon et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από Inserm, CNRS, Fondation pour la Recherche Médicale, Σύλλογος pour la Recherche sur les Tumeurs de la προστάτη, και Institut National du Cancer (σε OC). AD είναι αποδέκτης της Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche και La Ligue Nationale Contre Καρκίνου le. CM είναι αποδέκτης της Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη είναι η πιο συχνή κακοήθεια που αντιπροσωπεύουν το 25% του συνόλου των νεοδιαγνωσθέντων καρκίνων στους άνδρες και είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο [1]. Πρωτογενής θεραπεία με χειρουργική επέμβαση ή ακτινοθεραπεία σε ασθενείς με όργανο-περιορισμένο καρκίνο του προστάτη καταδεικνύει τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης 10 ετών πάνω από 75% [2], [3]. Παρ ‘όλα αυτά, εκτιμάται ότι Κατά προσέγγιση 15% των ασθενών παρουσιάζει τοπικά προχωρημένο ή μεταστατική νόσο, και περίπου 40% των ασθενών θα υποτροπιάσουν μετά την τοπική θεραπεία [4].

πολλαπλασιασμό κυττάρων καρκίνου του προστάτη ρυθμίζεται από ανδρογόνων και στέρησης ανδρογόνων θεραπεία (ADT) είναι το πρότυπο της περίθαλψης στην αντιμετώπιση των ασθενών με προχωρημένη νόσο. ADT είναι αρχικά αποτελεσματική, μειώνοντας τόσο το μέγεθος του προστάτη και τα επίπεδα (PSA) ειδικού προστατικού αντιγόνου, αλλά τελικά όλοι οι ασθενείς καθίστανται ανθεκτικοί σε ορμονικό χειρισμό [4]. ADT προκαλεί αλλαγές στη βιολογία του καρκίνου του προστάτη προωθώντας την εξέλιξη της προς το κράτος ή ορμόνες πυρίμαχα καρκίνο του προστάτη (HRPC) φαινότυπο ανδρογόνων-πυρίμαχα, με ένα αντίστοιχο προσδόκιμο ζωής μόλις 15 με 20 μήνες. Δεν είναι σαφές πώς τα καρκινικά κύτταρα του προστάτη κάνουν τη μετάβαση από ανδρογόνο-εξαρτώμενη σε ανδρογόνα ανεξάρτητο καθεστώς μετά ADT. Μεταξύ των πολλών μηχανισμών που εμπλέκονται στην παράκαμψη των επιδράσεων του ανδρογόνων, η ενεργοποίηση του /Akt σηματοδότησης (ΡΙ3Κ /Akt) φωσφατιδυλινοσιτόλη-3-κινάση έχει περιγραφεί ως μια κεντρική οδό [5], [6], [7], [ ,,,0],8], [9]. Είναι σημαντικό, οι κλινικές μελέτες έχουν επιβεβαιώσει τη σημασία της ενεργοποίησης της Akt στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη σε ανδρογόνα ανεξαρτησία και η κακή κλινική έκβαση [10], [11], [12], [13], [14].

Πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι, μετά από μακροχρόνια ADT, κύτταρα καρκίνου του προστάτη αποκτήσουν νευροενδοκρινικά (ΝΕ) -όπως φαινότυπο οδηγεί σε πληθυσμούς καρκινικών εμπλουτισμένο σε κύτταρα ΝΕ. NE κύτταρα αποτελούν ένα δευτερεύον συστατικό της κανονικής αδένα του προστάτη και εκκρίνουν αρκετές νευροπεπτίδια που μπορεί να επάγει μιτογονικά αποτελέσματα επί γειτονικών καρκινικών κυττάρων σε συνθήκες ανδρογόνα εξαντλημένο [15]. Παρά το γεγονός ότι NE κύτταρα ήταν πριν περιγράφεται δεκαετίες, λειτουργικούς ρόλους τους στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη έχουν λάβει μόλις πρόσφατα σημαντική προσοχή. Νευροενδοκρινούς όγκου και ορό βιοδείκτες είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω εξής ADT σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη ενδεικτική μιας κακής πρόγνωσης [16], [17], [18], [19]. Συνεπής προς κλινικές παρατηρήσεις, ανδρογόνου απόσυρση επαγόμενη διαφοροποίηση ΝΕ παρατηρείται επίσης σε κυτταρική καλλιέργεια και ζωικά μοντέλα [20], [21], [22], [23], [24], και η διαγονιδιακή αδενοκαρκίνωμα του μοντέλου προστάτη ποντικού προστάτη (TRAMP) καρκίνος δείχνει μια αξιοσημείωτη αύξηση στον προστάτη πληθυσμό νευροενδοκρινούς κυττάρου με την εξέλιξη της νόσου [25].

1-φωσφορικής σφιγγοσίνης (S1P) είναι ένα λιπίδιο μεσολαβητής που παίζει σημαντικό ρυθμιστικό ρόλο στην κυτταρική ανάπτυξη του όγκου, την επιβίωση , εισβολή, και την αγγειογένεση [26]. Η ισορροπία μεταξύ των κυτταρικών επιπέδων S1P και μεταβολικών προδρόμων κεραμίδιο και σφιγγοσίνης της θεωρείται ως ένας διακόπτης που θα μπορούσε να προσδιοριστεί εάν ένα κύτταρο πολλαπλασιάζεται ή υφίσταται απόπτωση ή διακοπή της ανάπτυξης [27]. Ένα βασικό ρυθμιστή αυτής της ισορροπίας είναι η σφιγγοσίνης κινάσης-1 (SphK1), το ένζυμο μετατροπή σφιγγοσίνης σε S1P. SphK1 εξυπηρετεί την διπλή λειτουργία της παραγωγής του υπέρ της ανάπτυξης, αντι-αποπτωτική S1P, και μειώνοντας ενδοκυτταρικά επίπεδα προ-αποπτωτικών κεραμίδιο. Περαιτέρω υποστήριξη ενός ρόλου για SphK1 στην προώθηση του καρκίνου, SphK1 έχει βρεθεί ότι δρα ως ένα ογκογονίδιο [28], το mRNA του υπερεκφράζεται και θετική ανοσοχρώση για SphK1 βρέθηκε σε διάφορους όγκους [29], [30], [31], [ ,,,0],32], [33], και η αύξηση στην έκφραση SphK1 σε βιοψίες όγκων συσχετίστηκε με μικρή ποσοστό επιβίωσης σε ασθενείς με γλοιοβλάστωμα και του μαστού [30], [34]. Επιπλέον, SphK1 ενζυματική δραστηριότητα και η έκφραση είναι σημαντικά αυξημένη σε δείγματα όγκων από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη (σε σύγκριση με τα κανονικά αντίστοιχά) συσχέτιση με άλλους δείκτες όπως το επίπεδο PSA, βαθμός όγκου, καθώς επίσης με την κλινική έκβαση μετά προστατεκτομή (Malavaud και Cuvillier, υποβληθεί). Ενώ δραστηριότητα SphK1 μπορεί να διεγερθεί από ένα ευρύ φάσμα αυξητικών παραγόντων [26], δείξαμε προηγουμένως στον καρκίνο του προστάτη κυτταρικά και ζωικά μοντέλα που αντικαρκινικές θεραπείες (χημειοθεραπευτικά μέσα ή ιονίζουσες ακτινοβολίες) οδηγούν σε αναστολή του γεγονός που υποδηλώνει ότι SphK1 θα μπορούσε να δράσει έναν αισθητήρα για να αντικαρκινικών θεραπειών [35], [36], [37], [38].

σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε τον πιθανό ρόλο των SphK1 στη ρύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης εξαρτώμενων από ανδρογόνα και επιβίωση στην ορμόνες ευαίσθητο μοντέλο των καρκινικών κυττάρων LNCaP του προστάτη. Για πρώτη φορά, έχουμε δείξει ότι η στέρηση ανδρογόνων ασκεί μια αντίθεση επίδραση στην SphK1. Ενώ οι βραχυπρόθεσμες απόσυρση των ανδρογόνων που προκαλείται από μια προσωρινή αναστολή της SphK1, χρόνια ανδρογόνων εξάντληση πυροδότησε μια up-ρύθμιση του SphK1 συσχετίζεται με τη διαφοροποίηση ΒΑ των κυττάρων LNCaP και C4-2B υποστήριξη της συμμετοχής των SphK1 στην πρόοδο προς την κατεύθυνση των ανδρογόνων-ανεξαρτησία.

Αποτελέσματα

Short-Term στέρησης ανδρογόνων μειώνει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε LNCaP – αλλά όχι σε κύτταρα PC-3 – και σχετίζεται με μειωμένο SphK1 Δραστηριότητα

ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων ήταν σημαντικά μειωμένη υπερωρίες στο CSS (ανδρογόνο μέσο ελεύθερο) κύτταρα κατεργασμένα LNCaP σε σύγκριση με FBS (που περιέχει χαμηλά επίπεδα των ανδρογόνων) κατεργασμένων κυττάρων (Εικ. 1Α, αριστερό πάνελ). Για να υποστηρίξει τα αποτελέσματα ΜΤΤ, καταμέτρηση κυττάρων (Εικ. 1Α, μεσαίο πλαίσιο) και [

3Η] θυμιδίνης (Εικ. 1Α, δεξί πάνελ) μετρήσεις επιβεβαίωσαν ότι οι συνθήκες CSS είχε δραματικές συνέπειες για τον αριθμό των κυττάρων και τη σύνθεση του DNA που καθορίζει τον ΜΤΤ θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως υποκατάστατο δείκτη για τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό στο μοντέλο των κυττάρων μας. Αυτό επίσης συσχετίστηκε με την έκκριση του PSA των οποίων το επίπεδο ήταν έντονα μειωμένη στα δύο κύτταρα CSS-αγωγή σε σύγκριση με FBS-επεξεργασμένα κύτταρα (Εικ. 1Β). Αντιθέτως, στέρηση ανδρογόνου δεν μετέβαλε την ανάπτυξη των κυττάρων PC-3 ορμονο-πυρίμαχα (HR) των οποίων η ανάπτυξη μεταβλήθηκε μόνο από ασιτία ορού (Εικ. 1C) .Όταν σύγκριση με τις συνθήκες FBS, ανδρογόνων εξάντληση σε LNCaP προκάλεσε μία αξιοσημείωτη μείωση σε δραστηριότητα SphK1 εντός των πρώτων 24 ωρών (Σχ. 1 D, αριστερό πάνελ). Αργότερα, μια ανάκαμψη της δραστηριότητας SphK1 παρατηρήθηκε, η οποία έγινε σημαντική πέραν 4 ημέρες θεραπείας (Εικ. 1 D, αριστερό πάνελ). Σε κύτταρα PC-3, μια σημαντική και διαρκή μείωση της δραστηριότητας SphK1 παρατηρήθηκε μόνο υπό συνθήκες χωρίς ορό στέρηση (Εικ. 1 D, δεξί πάνελ). αντανακλώντας την επίδραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Εικ. 1Γ). Όπως ήταν αναμενόμενο σε PC-3 κύτταρα που δεν επηρεάζονται από τις συνθήκες CSS, θα μπορούσε να αποδειχθεί καμία σημαντική αλλαγή SphK1 (Εικ. 1C, D).

Διανυκτέρευση ορού στέρησε LNCaP (

Μια

,

D

) και PC-3 (

C

,

D

) τα κύτταρα επωάστηκαν σε παρουσία 5% FBS, 5% CSS ή χωρίς ορό (SFM) για τους υποδεικνυόμενους χρόνους . Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων σε LNCaP (

A

,

αριστερό πάνελ

) και PC-3 κύτταρα (

C

) προσδιορίστηκε με δοκιμασία ΜΤΤ και εκφράστηκαν ως επί τοις εκατό του ελέγχου κατά την έναρξη του πειράματος (ημέρα 0). Ο αριθμός των κυττάρων (

Μια

,

μεσαίο πλαίσιο

) και τη σύνθεση του DNA (

Μια

,

δεξί πάνελ

) μετρήθηκαν όπως περιγράφεται στα Υλικά και Μέθοδοι.

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον είκοσι τεσσάρων ανεξάρτητων πειραμάτων για τον προσδιορισμό ΜΤΤ και έξι πειράματα για την καταμέτρηση των κυττάρων και τη σύνθεση του DNA?

μπαρ

, SD. Οι

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001. Εκκρίνεται επίπεδο PSA μετρήθηκε στο μέσο καλλιέργειας από τα κύτταρα LNCaP (

Β

).

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον έξι ανεξάρτητων πειραμάτων?

μπαρ

, SD. Οι

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001.

D

, δραστικότητα SphK1 προσδιορίστηκε σε αμφότερα LNCaP και PC-3 κύτταρα και εκφράστηκε ως ποσοστό του FBS-κατεργασμένων κυττάρων.

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον δώδεκα και έξι ανεξάρτητα πειράματα για LNCaP και PC-3 κύτταρα, αντίστοιχα?

μπαρ

, SD. Η

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001? **

P

& lt? 0,01? *,

P

& lt? 0,05? ns, μη σημαντική.

Η

Η αποτελεσματικότητα του ευνουχισμού στην ορθοτοπικώς ξενομεταμοσχευμένων SCID ποντίκια συνδέεται με SphK1 Αναστολή

Η επίδραση της στέρησης ανδρογόνων ήταν επόμενο εξετάστηκε

in vivo

χρησιμοποιώντας ένα χειρουργικό ορθοτοπική εμφύτευση (SOI) του LNCaP και PC-3 κύτταρα που υπερεκφράζουν GFP [36]. Εννέα και τρεις εβδομάδες μετά την SOI του LNCaP /GFP και PC-3 κύτταρα /GFP αντίστοιχα, τα ποντίκια SCID τυχαιοποιήθηκαν σε δύο ομάδες και υποβλήθηκαν σε ευνουχισμό ή εικονική θεραπεία. Όπως φαίνεται από τα υψηλά-μεγέθυνση μικροσκόπιο ενός αντιπροσωπευτικού πρωτογενούς όγκου LNCaP /GFP, ο ευνουχισμός προκάλεσε μία δραματική μείωση στον όγκο του όγκου και της μάζας (Σχ. 2Α και Β) εντός 7 ημέρες θεραπείας σε σύγκριση με ζώα που έλαβαν placebo. Η αποτελεσματικότητα του ευνουχισμού συσχετίστηκε με σημαντική μείωση της δραστηριότητας SphK1 σε εκχυλίσματα ιστού (Σχ. 2Β, δεξί πάνελ). Επιπλέον, η επίδραση σε πρωτογενή όγκου παράλληλα με μια σημαντική μείωση της διάδοσης μετάσταση στον ευνουχισμό αγωγή ομάδα (Πίνακας S1). Όπως αναμενόταν, ο ευνουχισμός δεν επηρέασε την ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς SCID ξενομεταμοσχευμένων με κύτταρα PC-3 /GFP (Σχ. 2C). μάζες και οι όγκοι των όγκων ήταν παρόμοιες και στις δύο ψευδοκατεργασμένη και ευνουχισμένα ζώα (Σχ. 2D), και δραστικότητα SphK1 (Σχ. 2D, δεξί πάνελ) καθώς και τη διάδοση της μετάστασης (Πίνακας S1) ήταν συγκρίσιμα και στις δύο ομάδες.

Εννέα και τρεις εβδομάδες μετά την SOI του LNCaP /GFP και τα κύτταρα PC-3 /GFP αντίστοιχα, τα ποντίκια SCID χωρίστηκαν τυχαία σε δύο ομάδες. Αυτά τα ζώα στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε ευνουχισμό ή εικονική θεραπεία. Εκπρόσωπος φθορισμού πρωτογενή LNCaP (

Α

) και PC-3 (

C

) όγκοι από εγχειρισμένα και ο ευνουχισμός αγωγή ζώων κατά τη στιγμή της αυτοψίας (7 ημέρες μετά την αγωγή). Όγκου μάζα αποκοπεί πρωτογενούς LNCaP (

Β

,

αριστερό πλαίσιο

) και PC-3 (

D

,

αριστερό πάνελ

) GFP-επισημασμένο όγκου .

Στήλες

, δηλαδή από 8 ζώα?

μπαρ

, SE. δραστηριότητα SphK1 μετρήθηκε σε εκχυλίσματα ιστών που λαμβάνονται από εγχειρισμένα, και ο ευνουχισμός επεξεργασμένο LNCaP (

Β

,

δεξί πάνελ

) και PC-3 (

D

,

δεξί πάνελ

) ζώων με όγκους.

Στήλες

, δηλαδή από 8 ζώα?

μπαρ

, SE. Η δίπλευρη

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001? ή ns, δεν είναι σημαντική.

Η

SphK1 υπερέκφραση Αποδίδει LNCaP κύτταρα λιγότερο ευαίσθητα στην ανδρογόνων εξάντληση

Επειδή παρατηρήθηκε αναστολή της SphK1 κατά τη διάρκεια βραχυπρόθεσμης στέρησης ανδρογόνων

in vitro

(Εικ. 1D) και

in vivo

(Εικ. 2Β), θα επαληθευθεί αν επιμόλυνση των κυττάρων LNCaP με SphK1 θα μπορούσε να καταστήσει αυτά τα κύτταρα πιο ανθεκτικά στην εξάντληση των ανδρογόνων. Η αποτελεσματικότητα της επιμόλυνσης επαληθεύθηκε με ανοσοστύπωση (Σχ. 3Α, αριστερός πίνακας). Η δραστηριότητα SphK1 του SphK1 υπερεκφράζουν LNCaP (Σχ. 3Α, δεξί πάνελ) αυξήθηκε σε ~ 1100 pmol /mn /mg πρωτεΐνης (δηλαδή, ~ 30 φορές υψηλότερη σε σύγκριση με εκείνη των κενών-φορέα επιμολυσμένα κύτταρα). Το αποφασιστικό ρόλο της αναστολής SphK1 σε μειωμένη κυτταρική ανάπτυξη επιβεβαιώθηκε με προσδιορισμούς κυτταρικής βιωσιμότητας, η οποία έδειξε ότι LNCaP που υπερεκφράζουν SphK1 ήταν σημαντικά λιγότερο ευαίσθητα στις επιδράσεις της εξάντλησης των ανδρογόνων (Σχ. 3Β). Ταυτόχρονα, SphK1 εκτελεστεί έκφραση συσχετίστηκε με υψηλότερη έκκριση του PSA σε κύτταρα LNCaP CSS-αγωγή αντανακλώντας τις επιπτώσεις της επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων (Σχ. 3C).

SphK1 έκφραση σε κύτταρα LNCaP αναλύθηκε με κηλίδωση Western χρησιμοποιώντας αντι- αντισωμάτων FLAG (

Μια

,

αριστερό πάνελ

). Ανάπαυση δραστηριότητα SphK1 μετρήθηκε σε LNCaP /neo και LNCaP κύτταρα /SphK1 (

Μια

,

δεξί πάνελ

).

B

, όλη τη νύκτα τα κύτταρα LNCaP στερούνται ορού επωάστηκαν σε παρουσία 5% FBS ή 5% CSS για 6 ημέρες. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε στη συνέχεια και εκφράζονται ως ποσοστό του 5% των κυττάρων FBS επεξεργασμένο.

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον δώδεκα ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Οι

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001.

C

, εκκρίνεται επίπεδο PSA μετρήθηκε σε μέσα καλλιέργειας από LNCaP /Neo και LNCaP κύτταρα /SphK1 μετά από 24 ώρες επώασης σε 5% μέσον CSS.

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον έξι ανεξάρτητων πειραμάτων?

μπαρ

, SD. Η

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001

Η

διυδροτεστοστερόνη ταχέως και παροδικά Διεγείρει SphK1 Δραστηριότητα σε μια ανδρογόνων. υποδοχέα /κινάσης ΡΙ3-εξαρτώμενο τρόπο

Ως προς τα κάτω ρύθμιση της δραστηριότητας SphK1 συσχετίστηκε με την απομάκρυνση των ανδρογόνων στα κύτταρα LNCaP (Εικ. 1D), ήταν ενδιαφέρον να διαπιστωθεί αν αυτό θα μπορούσε να αναστραφεί με το Επιπλέον των ανδρογόνων. Υπό συνθήκες CSS, η προσθήκη του διυδροτεστοστερόνη (DHT) θα μπορούσε να προκαλέσει μια πρώιμη και παροδική διέγερση της SphK1 (νωρίς, σε 15 λεπτά) μετά την οποία η δραστηριότητα SphK1 επέστρεψαν στα βασικά επίπεδα (Σχ. 4Α). Η ταχεία διέγερση των SphK1 ήταν εξαρτάται από την ενεργοποίηση της ΡΙ3Κ /Akt σηματοδότηση, η οποία έχει αποδειχθεί ότι μεσολαβεί την ταχεία επιδράσεις των ανδρογόνων [39], [40]. Πράγματι, ενώ wortmannin (WT) ανέστειλε τόσο την ενεργοποίηση της Akt (Σχ. 4Β, άνω μέρος) και SphK1 (Σχ. 4Β, κάτω) που προκαλείται από DHT, ο αναστολέας SphK1 SKI-2 δεν έχουν επίδραση Akt φωσφορυλίωση (Σχ. 4Β, κορυφή ). Η διέγερση της ΡΙ3Κ /Akt /SphK1 μονοπάτι ήταν κρίσιμη για τη μετάδοση των πολλαπλασιαστικών επιδράσεων του DHT υπό συνθήκες CSS. Στην πραγματικότητα, παρόμοια με τους αναστολείς ΡΙ3Κ WT και LY294002 (Εικ. 4C), οι αναστολείς SphK1 SKI-2 και F-12509a θα μπορούσε να εμποδίσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων DHT που προκαλείται από, τη σύνθεση του DNA καθώς και PSA έκκριση (εικ. 4D).

A

, όλη τη νύκτα τα κύτταρα LNCaP στερούνται ορού επωάζονται κάτω από συνθήκες CSS 5% και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 10 ηΜ DHT για τους υποδεικνυόμενους χρόνους. δραστηριότητα SphK1 ποσοτικοποιήθηκε και εκφράστηκε ως ποσοστό των μη επεξεργασμένων κυττάρων.

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον έξι ανεξάρτητων πειραμάτων?

μπαρ

, SD. Η

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001? **

P

& lt? 0,01? ns, μη σημαντική.

B

, όλη τη νύκτα τα κύτταρα LNCaP στερούνται ορού επωάστηκαν με 10 ηΜ DHT για 45 λεπτά σε παρουσία ή όχι του 2,5 μΜ SKI-2 ή 200 ηΜ wortmannin (WT). Τα κυτταρολύματα αναλύθηκαν για την έκφραση φωσφο-Ακί και Akt με ανάλυση κηλίδος Western. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν σε τρία ανεξάρτητα πειράματα (

κορυφή

). Μίας ημέρας LNCaP κύτταρα στερούνται ορού επωάζονται κάτω από συνθήκες CSS 5% και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ή χωρίς 10 ηΜ DHT και 200 ​​ηΜ wortmannin (WT) για 45 λεπτά, και essayed για δραστικότητα SphK1 (

κάτω

).

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον πέντε ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Η

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: **,

P

& lt? 0,01? ns, μη σημαντική.

C

, όλη τη νύκτα τα κύτταρα LNCaP στερούνται ορού επωάστηκαν σε FBS ή σε συνθήκες CSS για 6 ημέρες με ή χωρίς 200 ηΜ wortmannin (WT) ή 1 μΜ LY294002 στην παρουσία ή όχι του 10 ηΜ DHT όπως υποδεικνύεται. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων προσδιορίστηκε με δοκιμασία ΜΤΤ και εκφράστηκαν ως επί τοις εκατό του ελέγχου κατά την έναρξη του πειράματος (ημέρα 0).

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον οκτώ ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Η

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001? ns, μη σημαντική.

D

, όλη τη νύκτα τα κύτταρα LNCaP στερούνται ορού επωάστηκαν σε FBS ή σε συνθήκες CSS με ή χωρίς 2,5 μΜ SKI-2 ή F-12509a σε παρουσία ή όχι του 10 ηΜ DHT για 24 ώρες (

κορυφή

), 48 ώρες (

μεσαία

) ή 6 ημέρες (

κάτω

). Εκκρίνεται επίπεδο PSA προσδιορίστηκε ποσοτικά 24 ώρες μετά την ενδεικνυόμενη θεραπεία (

πάνω

). σύνθεση του DNA και ΜΤΤ με βάση μέτρηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων εκφράστηκαν ως επί τοις εκατό του ελέγχου κατά την έναρξη της θεραπείας, 2 και 6 ημέρες, αντίστοιχα.

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον πέντε ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Η

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001? **

P

& lt? 0,01? ή ns, μη σημαντική.

Η

Η επίδραση του ανταγωνιστή των υποδοχέων των ανδρογόνων ήταν επόμενο εξετάστηκε με βικαλουταμίδη. Όπως αναμενόταν, LNCaP απόκριση πολλαπλασιασμού των κυττάρων στα 10 ηΜ DHT αμβλύνθηκε πλήρως από 10 μΜ βικαλουταμίδη (Εικ. 5Α). Η DHT-προκάλεσε διέγερση της δραστηριότητας SphK1 ήταν επίσης παρεμπόδισε πλήρως σε παρουσία ανδρογόνων ανταγωνιστή υποδοχέα (Εικ. 5Β).

ολονύκτια κύτταρα LNCaP στερούνται ορού επωάζονται κάτω από συνθήκες CSS 5% και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ή χωρίς 10 μΜ βικαλουταμίδη παρουσία ή όχι των 10 ηΜ DHT για 2 (

Μια

,

πάνω

) ή 6 ημέρες (

Μια

,

κάτω

). σύνθεση του DNA και την καταμέτρηση των κυττάρων μετρήσεις εκφράζονται ως επί τοις εκατό του ελέγχου κατά την έναρξη της θεραπείας.

B

, όλη τη νύκτα τα κύτταρα LNCaP στερούνται ορού επωάστηκαν με 10 ηΜ DHT για 30 λεπτά σε παρουσία ή όχι του 10 μΜ βικαλουταμίδη, και δραστικότητα SphK1 ποσοτικοποιήθηκε και εκφράστηκε ως ποσοστό του ελέγχου κατά την έναρξη της θεραπείας.

Στήλες

, σημαίνει τουλάχιστον πέντε ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Η

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001? **

P

& lt? 0,01? ή ns, μη σημαντική.

Η

SphK1 εμπλέκεται σε ανδρογόνα εξάντληση-Induced Νευροενδοκρινής δια-των LNCaP και C4-2B κύτταρα

Στη συνέχεια ερευνήσαμε την πιθανή συμμετοχή της SphK1 για τη μετάβαση στην ανδρογόνων πυρίμαχα κατάσταση μετά από χρόνια στέρησης ανδρογόνων. Για το σκοπό αυτό, LNCaP και C4-2B κύτταρα, τα οποία έχουν προηγουμένως αναφερθεί για την απόκτηση νευροενδοκρινικών (ΝΕ) φαινότυπο [20], [21], [23], [41], [42], [43] διατηρήθηκαν κάτω από όροι CSS για μέχρι 42 ημέρες. LNCaP κύτταρα εκτίθενται σε μια ορμόνη ανεπάρκεια μέσον υποβλήθηκε νευροενδοκρινείς (ΝΕ) μορφολογικές αλλαγές (εμφανής μετά Κατά προσέγγιση 7-10 ημέρες), όπως υποδεικνύεται από soma συμπίεση και ανάπτυξη των μακρών και διακλαδισμένης νευριτικές προεκτάσεις (Σχ. 6Α), ενώ ο έλεγχος LNCaP γονικά κύτταρα διατηρούνται μια μορφολογία ατρακτοειδές επιθηλιακά (Σχ. 6Α). Εκτός από μορφολογικά χαρακτηριστικά, transdifferentiated οι NE-σαν καρκινικών κυττάρων του προστάτη ορίζεται από την έκφραση ενός αριθμού νευροεκκριτικών προϊόντων, συμπεριλαμβανομένων χρωμογρανίνης Α (CGA) και νευρώνα-ειδική ενολάση (NSE). CgA θεωρείται ότι είναι ο πλέον αξιόπιστος δείκτης της διαφοροποίησης προστάτη ΝΕ.

A

, εκπρόσωπος εικόνες αντίθεσης φάσης των κυττάρων LNCaP κατά την έναρξη του πειράματος (ημέρα 0) και μετά από 42 ημέρες επώασης σε απογυμνωμένο από ξυλάνθρακα συνθήκες (Ημέρα 42). Ένα περιεχόμενο Χρωμογρανίνης (CGA) αξιολογήθηκε με ανοσοστύπωμα στους χρόνους που υποδεικνύονται (

κάτω

) .Secreted Neuron ενολάση επίπεδο (NSE) μετρήθηκε σε μέσα καλλιέργειας από κύτταρα LNCaP στους υποδεικνυόμενους χρόνους (

δεξί πάνελ

).

Στήλες

, σημαίνει πέντε ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Οι δύο-ουρά

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001. δραστηριότητα SphK1 (

B

,

αριστερό πλαίσιο

) προσδιορίστηκε στους υποδεικνυόμενους χρόνους σε κύτταρα LNCaP επωάστηκαν σε συνθήκες CSS.

σημεία

, σημαίνει πέντε ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Οι

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001.

Ένθετο

, περιεχόμενο S1P, όπως φαίνεται με TLC.

Δεξιό πλαίσιο

, η έκφραση της SphK1, φωσφο-Ακί, Akt και αναλύθηκαν με κηλίδωση Western στους χρόνους που υποδεικνύονται. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν σε πέντε ανεξάρτητα πειράματα.

C

, έκφραση της ΑΧΕ και φωσφο-Akt (

αριστερό πλαίσιο

) και δραστηριότητα SphK1 (

δεξί πάνελ

) αναλύθηκαν 10 ημέρες μετά τη θεραπεία ή όχι με 1 μΜ LY294002 ή 200 nM ουορτμανίνη (WT) κάτω από κάρβουνο απογυμνωμένο συνθήκες.

Στήλες

, σημαίνει πέντε ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Οι δύο-ουρά

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001.

D

, εκκρίνεται επίπεδο NSE μετρήθηκε στο μέσο καλλιέργειας 10 ημέρες μετά από τη θεραπεία ή όχι με 5 μΜ SKI-2 υπό απογυμνωμένο από ξυλάνθρακα συνθήκες (

αριστερό πάνελ

). Έκφραση της ΑΧΕ και φωσφο-Akt αναλύθηκαν με western blot (

δεξί πάνελ

).

Στήλες

, σημαίνει πέντε ανεξάρτητα πειράματα?

μπαρ

, SD. Η δίπλευρη

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής:. **,

P

& lt? 0,01

Η

Σύμφωνα με προηγούμενες παρατηρήσεις [41], [44], ανοσοαποτυπώματα έδειξαν ότι η έκφραση CgA ήταν πολύ χαμηλή και στα δύο γονικών LNCaP (Σχ. 6Α, κάτω πίνακας) και κυττάρων C4-2B (Σχήμα S1), ενώ το επίπεδο της έκφραση ενισχύθηκε σημαντικά με το χρόνο ορμόνη ανεπάρκεια μέσο. Επιπλέον, σε σύγκριση με μη ορμόνες στερούνται LNCaP κύτταρα (D0), ένα 3-πλάσια αύξηση στην έκκριση NSE στο μέσο βρέθηκε μετά από 42 ημέρες κάτω από συνθήκες CSS ενδεικτική ενός ΝΕ φαινότυπο (Σχ. 6Α, δεξί πάνελ). Με βάση τις προηγούμενες παρατηρήσεις μας ότι η δραστηριότητα SphK1 κατόπιν στέρησης ανδρογόνων ήταν μόνο παροδικά αναστέλλεται με σημαντική ανάκαμψη εντός 4 ημέρες επώασης σε μέσο CSS (Σχ. 1D), μπορούμε στη συνέχεια αναλύσαμε την δραστικότητα SphK1 μέχρι 42 ημέρες κατά τη διάρκεια της διαδικασίας δια-ΝΕ. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η δραστηριότητα SphK1 (Εικ. 6Β) αυξήθηκε προοδευτικά μέχρι 4 φορές αύξηση μετά από 42 ημέρες από την εξάντληση των ανδρογόνων. Αυτό απεικονίζεται περαιτέρω από μια αξιοσημείωτη αύξηση της περιεκτικότητας σε S1 Ρ (Σχ. 6Β, ένθετο). Παράλληλα, η έκφραση της πρωτεΐνης SphK1 αυξήθηκε σημαντικά (Σχ. 6Β, δεξί πάνελ). Η ενεργοποίηση του SphK1 συσχετίστηκε με διέγερση του Akt (Σχ. 6Β, δεξί πάνελ), ένα προ-επιβίωσης οδού σηματοδότησης αναφερθεί ότι ρυθμίζεται προς τα πάνω κατά τη διάρκεια της ΝΕ δια-των LNCaP διεγείρεται από ανδρογόνο εξάντληση [6], [7], [23 ], [45]. Συγκρίσιμα ευρήματα παρατηρήθηκαν στο μοντέλο των κυττάρων C4-2B (Σχήμα S1).

Σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες [6], φαρμακολογική αναστολή της PI3K /Akt μονοπατιού θα μπορούσε να παρακωλύσει ΒΑ δια-τόσο LNCaP (Εικ. 6C ) και C4-2B (Σχήμα S1) διατηρήθηκαν για 10 ημέρες υπό συνθήκες CSS. Αξίζει να σημειωθεί ότι ο αποκλεισμός της συσσώρευσης CgA που προκαλείται από τους αναστολείς WT PI3K και LY294002 ήταν σημαντικά σχετίζεται με μείωση τόσο Akt φωσφορυλίωσης και της δραστηριότητας SphK1 (Εικ. 6C, δεξιά του πίνακα και το σχήμα S1).

Για να διερευνηθεί η λειτουργικό ρόλο της SphK1 στη ΒΑ transdifferentiation, εξετάσαμε την επίδραση του αναστολέα φαρμακολογική SKI-2 στα κύτταρα LNCaP και C4-2B. Σε παρουσία SKI-2 (5 μΜ), την ξεχωριστή NE-σαν μορφολογία που παρατηρήθηκε ήταν ουσιαστικά καταργήθηκε με LNCaP εμφανίζουν μια στρογγυλεμένη μορφολογία με σύντομη σπανίως διακλαδισμένα κυτταρικές διεργασίες (δεν φαίνεται). Επιπλέον, τόσο η έκκριση του NSE (Εικ. 6D, αριστερό πάνελ) και CGA συσσώρευση (Σχ. 6D, δεξί πάνελ και το Σχήμα S1) έχουν σημαντικά μειωθεί, ενώ φωσφορυλίωσης Akt παρέμεινε αμετάβλητη ως εκ τούτου υποδηλώνοντας ότι η αναστολή SphK1 μπορεί σε κάποιο βαθμό μπλοκάρουν τη δια-NE .

Φυσιολογικές ή φαρμακολογικών παραγόντων που αυξάνουν τα ενδοκυτταρικά επίπεδα του κυκλικού ΑΜΡ (cAMP) μπορεί να επάγει την ανάπτυξη ενός μορφολογία ΝΕ σε κύτταρα LNCaP ή C4-2 παρουσία των στεροειδών [41], [44], [46 ]. Αξίζει να σημειωθεί ότι αύξηση cAMP έχει αναφερθεί προηγουμένως ότι σχετίζονται με την ενεργοποίηση των SphK1 σε οστεοβλάστες [47]. Ως εκ τούτου, εξετάσαμε το ρόλο του cAMP ως δυνητικό ανάντη ρυθμιστή της SphK1 διάρκεια NED. LNCaP και C4-2B κύτταρα διεγέρθηκαν με την φορσκολίνη ενεργοποιητή της αδενυλικής κυκλάσης (FSK) και τον αναστολέα της φωσφοδιεστεράσης ΙΒΜΧ, ή με επινεφρίνη (ΕΡΙ), ενός αγωνιστή υποδοχέα β-αδρενεργικού. Η θεραπεία με Fsk /ΙΒΜΧ ή Epi διεγείρεται έντονα δραστηριότητα SphK1 (Σχ. 7Α), και συσχετίζεται με αυξημένη περιεκτικότητα σε cAMP (Σχ. 7Β) και την απόκτηση της ΝΕ μορφολογία (τα δεδομένα δεν φαίνονται) που χαρακτηρίζεται βιοχημικά από CgA συσσώρευση (Σχ. 7C). Είναι ενδιαφέρον ότι η pharmacoligical αναστολή της SphK1 δεν είχε καμία επίδραση στα επίπεδα cAMP (Εικ. 7Β) ενώ είχε σημαντικά αναστέλλουν NED (Εικ. 7C). Αξίζει να σημειωθεί ότι, υπό συνθήκες ανδρογόνων στέρηση, παρατηρήθηκε παρόμοια αύξηση στα ενδοκυτταρικά επίπεδα cAMP, η οποία δεν θα μπορούσε να μπλοκαριστεί από φαρμακολογική αναστολή του SphK1 (Σχ. 7D). Τα αποτελέσματα αυτά προκαλούν ένα ρόλο για κατασκήνωση για την τόνωση της δραστηριότητας SphK1 κατά τη διάρκεια της ΔΝΕ.

Μια

, δραστηριότητα SphK1 προσδιορίστηκε στα κύτταρα LNCaP και C4-2B αγωγή για 3 ημέρες σε απουσία ή παρουσία 10 μΜ Fsk /10 mM ΙΒΜΧ ή 10 μΜ Epi.

B

, ενδοκυτταρικές συγκεντρώσεις cAMP προσδιορίστηκαν ποσοτικά σε κύτταρα LNCaP και C4-2B αγωγή για 3 ημέρες με 5% FBS ή 10 μΜ Fsk /10 mM ΙΒΜΧ σε απουσία ή σε παρουσία 5 μΜ SKI-2.

C

, χρωμογρανίνης Α περιεχόμενο (CGA) ήταν evalated με άνοσο σε εκχυλίσματα κυττάρων LNCaP και C4-2B επωάζονται για 3 ημέρες με ή χωρίς 5 μΜ SKI-2 σε παρουσία 5% FBS, 10 μΜ Fsk /10 mM ΙΒΜΧ ή 10 μΜ Epi. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν σε τρία ανεξάρτητα πειράματα.

D

, ενδοκυτταρικές συγκεντρώσεις της cAMP ήταν ποσοτικά στα κύτταρα LNCaP και C4-2B πριν ή 14 ημέρες μετά τη θεραπεία ή όχι με 5 μΜ SKI-2 κάτω από κάρβουνο απογυμνωμένο συνθήκες.

Στήλες

, σημαίνει τριών ανεξάρτητων πειραμάτων?

μπαρ

, SD. Η δίπλευρη

P

τιμές μεταξύ των μέσων έχουν ως εξής: ***,

P

& lt? 0.001? *,

P

& lt? 0,05? ή ns, μη σημαντική.

Η

Για να καθοριστεί αν η

in vitro

ευρήματα των δυνατοτήτων συμμετοχής των SphK1 στη διαφοροποίηση ΒΑ είχε καμία σχέση με την ανθρώπινη ασθένεια, τμήματα από έναν εκπρόσωπο ασθενών που υποβλήθηκαν σε ανακουφιστική εκτομή διουρηθρική για τοπική υποτροπή υπό πλήρη αποκλεισμό των ανδρογόνων ήταν ανοσοβαφή για την CGA και έκφραση SphK1 (Εικ. 8). χρώση SphK1 περιορίστηκε στο κυτταρόπλασμα με μερικά κύτταρα είναι περισσότερο έντονα χρωματισμένο από τους άλλους (Εικ. 8Β, ανοιχτό βέλος). Ινομυώδης στρώμα δεν λεκιάζει θετικά για SphK1. χρώση CgA παρατηρήθηκε σε μια μειοψηφία των καρκινικών κυττάρων, περίπου 10%, με τη μορφή της εκκριτικής granuli (Η, Εικ. 8D). Συν-έκφραση της ΑΧΕ σε μπλε με καφέ SphK1 οδήγησε σε έντονο σκούρο καφέ σήματος (στερεό βέλος). Σημείωση στο Σχ. 8Α (κάτω) και το Σχ. 8C, ο νευρώνας-όπως εμφάνιση του κυττάρου διπλά επισημασμένου καρκίνο (στερεό βέλος).

Διπλή ανοσοχρώση με αντι-SphK1 (καφέ) και αντι-CgA (μπλε) ενός δείγματος εκτομή συγκομίζονται σε 84 yo ο άνθρωπος με T4NxM1 καρκίνο του προστάτη υπό πλήρη αποκλεισμό των ανδρογόνων. Χαμηλή PSA ορού και θετική NSE ορού πρότεινε κακώς διαφοροποιημένο καρκίνο με χαρακτηριστικά νευροενδοκρινείς, όπως επιβεβαιώθηκε από παθολογική εξέταση του δείγματος εκτομή δείχνει υψηλού βαθμού με καρκίνο του προστάτη (Gleason 9) με θετική χρώση για την CGA. Μπλε κόκκους χαρακτηριστικό έκκριση των νευροενδοκρινικών διαφοροποίηση colocalized με καφέ SphK1 ανοσοποιητικό αντιδραστικότητα σε νευρώνες-όπως κύτταρα (στερεό βέλος).

Η

Η μετάβαση στην ανδρογόνων πυρίμαχων κατάσταση κατά τη διάρκεια της χρόνιας ανδρογόνων εξάντληση χαρακτηρίζεται

στο vitro

από την απώλεια απόκρισης ανδρογόνου στερούνται κυττάρων είτε FBS ή DHT [20]. Ήδη από 7 ημέρες και 14 ημέρες από την απόσυρση των ανδρογόνων, LNCaP ήταν εντελώς αδιάφορη αφού μεταφερθούν σε συνθήκες FBS ή όταν υποβάλλεται σε επεξεργασία με DHT σε σχέση με τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Εικ. 9Α, αριστερός πίνακας) ή έκκριση του PSA (Εικ. 9Α, δεξιά πίνακας). Ωστόσο, η NE-φαινότυπο είναι αναστρέψιμη μετά την αναπλήρωση των μέσων μαζικής ενημέρωσης με πλήρη ορό κατά τη διάρκεια αρκετών εβδομάδων [20]. Όταν LNCaP ανδρογόνο εξαντλημένο για 42 ημέρες επανέρχεται στον κανονικό μέσο FBS, κυτταρική ανάπτυξη συνεχίζεται κατά τη διάρκεια της επόμενης εβδομάδας και, εντός των επόμενων 21 ημέρες σε μέσο FBS, το κύτταρο μορφολογία επανήλθε με εκείνη των γονικών κυττάρων LNCaP (τα δεδομένα δεν απεικονίζεται). Όπως καταδεικνύεται στο Σχ. 8Β, αυτά τα κύτταρα ήταν πλέον σε θέση να αναπτυχθούν κανονικά και εκκρίνουν PSA σε παρουσία FBS όπως γονικής LNCaP (Εικ. 1Α), αλλά επίσης και για να ανταποκριθεί και πάλι από την προσθήκη του DHT υπό συνθήκες CSS παρόμοιες με γονικά κύτταρα (Σχ μόνο. ​​4C και ΡΕ). Είναι ενδιαφέρον ότι, η αναστρεψιμότητα που προκαλείται από την αναπλήρωση των μέσων μαζικής ενημέρωσης με πλήρη ορό για 21 ημέρες συνδέθηκε με μια βαθιά κάτω-ρύθμιση της δραστηριότητας SphK1 (Σχ. 9Γ), η οποία πήγε πίσω στα επίπεδα που βρέθηκαν σε γονικά κύτταρα. **

P

& lt? 0,01?