Αφηρημένο

Ιστορικό και στόχος

Ναι σχετιζόμενη πρωτεΐνη (YAP) και μεταγραφική συν-ενεργοποιητή με PDZ-μοτίβο σύνδεσης (TAZ) είναι πυρηνικές δράστες της οδού Hippo. Αν και είναι άφθονα εκφράζονται στο κυτταρόπλασμα και πυρήνες ανθρώπινου ορθοκολικού καρκίνου (CRC), και σχετίζονται με την κατάσταση του πολλαπλασιασμού του όγκου, έχουν υπάρξει λίγες μελέτες σχετικά με την προγνωστική ρόλος της έκφρασης YAP και TAZ σχετικά με τη συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC. Η παρούσα μελέτη διερευνήθηκε η έκφραση YAP και TAZ στις δύο CRC ασθενείς και καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές, και να αξιολογηθούν προγνωστική αξία τους.

Μέθοδοι

ενσωματωμένες σε παραφίνη δείγματα από 168 επιλέξιμες ασθενείς χρησιμοποιήθηκαν για τη διερεύνηση YAP και TAZ έκφραση με ανοσοϊστοχημεία, και σε σύγκριση με τα πειραματικά αποτελέσματα σε καρκίνο του παχέος εντέρου HCT116 κυτταρική σειρά για να εξερευνήσετε κλινική σημασία τους σε CRC.

αποτελέσματα

Στατιστικά σημαντικές θετικές συσχετίσεις βρέθηκαν μεταξύ πρωτεΐνης έκφραση YAP και TAZ σε ιστούς CRC. Οι ασθενείς με υψηλότερα YAP ή έκφραση TAZ έδειξε μια τάση μικρότερο χρόνο επιβίωσης? το πιο σημαντικό, η μελέτη κοόρτης μας έδειξε ότι οι ασθενείς με τόσο YAP και TAZ υπερέκφραση παρουσίασε τα χειρότερα αποτελέσματα. Αυτό υποστηρίχθηκε από πολυπαραγοντική ανάλυση. Στα καρκινικά κύτταρα HCT116 του παχέος εντέρου, η ικανότητα για πολλαπλασιασμό, μετάσταση και εισβολή μειώθηκε δραματικά από νοκ ντάουν της YAP και TAZ εκφράσεις με siRNA.

Συμπεράσματα

Συν-υπερέκφραση YAP και TAZ είναι ένα ανεξάρτητος προγνωστικός πρόγνωση για τους ασθενείς με CRC, και μπορεί να ευθύνεται για την υψηλότερη πολλαπλασιασμό, μετάσταση, και την κακή έκβαση της επιβίωσης των ασθενών αυτών

Παράθεση:. Wang L, Shi S, Guo Z, Ζανγκ Χ, Χαν S, Yang A, et al. (2013) Η υπερέκφραση της YAP και TAZ αποτελεί ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα για την πρόγνωση στον καρκίνο του παχέος εντέρου και σχετίζονται με τον πολλαπλασιασμό και τη μετάσταση του καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα. PLoS ONE 8 (6): e65539. doi: 10.1371 /journal.pone.0065539

Επιμέλεια: Wanjin Χονγκ, Ινστιτούτο Μοριακής και Κυτταρικής Βιολογίας, Σιγκαπούρη

Ελήφθη: 4η Φεβρουαρίου του 2013? Αποδεκτές: 25 Απριλίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 10 του Ιούνη, 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81072117). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Το μονοπάτι Hippo είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής της κυτταρικής ανάπτυξης, πολλαπλασιασμού και απόπτωσης. Ανακαλύφθηκε για πρώτη φορά από τις οθόνες της γενετικής ψηφιδωτό στο

Drosophila melanogaster

[1], [2]? Ωστόσο, υπάρχει μια συνεχώς αυξανόμενες ενδείξεις που αποδεικνύουν ότι η οδός ιπποπόταμος περιορίζει επίσης όργανο μέγεθος σε συστήματα θηλαστικών [3], [4] με την παρεμπόδιση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και την προώθηση της απόπτωσης. Συστατικά αυτού του μονοπατιού είναι πολύ συντηρημένες σε θηλαστικά, και περιλαμβάνουν Mst1 /2? WW45? Lats1 /2? Mob1? ΓΆΒΓΙΣΜΑ; TAZ? NF? FRMD6? και Fat4 [2]. Mst1 /2 και Last1 /2 είναι κινάσες, και WW45 και Mob1 δρουν ως προσαρμογείς /ενεργοποιητές στα θηλαστικά, καθώς αυτά αποτελούν τον πυρήνα κασέτα κινάσης της οδού Hippo. Τα ομόλογα YKI: Ναι σχετιζόμενη πρωτεΐνη (YAP) και παραλόγων της, μεταγραφικού συνενεργοποιητή με PDZ μοτίβο σύνδεσης (TAZ), είναι τα κύρια στόχοι του πυρήνα Hippo καταρράκτη κινάσης, και θεωρούνται ότι είναι οι πυρηνικές τελεστές του Hippo οδού [5].

Προηγούμενες μελέτες έχουν αναφέρει ότι παρεκκλίνουσα τροποποίηση των βασικών στοιχείων της οδού Hippo οδηγεί σε ανεξέλεγκτη κυτταρική ανάπτυξη, και σχετίζεται με την ανάπτυξη του καρκίνου [6], [7]. Αυτό σημαίνει ότι η οδός Hippo διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην καταστολή της ανάπτυξης του όγκου [8]. Η ανώμαλη ενεργοποίηση του YAP έχει συσχετιστεί με φτωχή πρόγνωση σε πολλαπλάσιο των ανθρώπινων καρκίνων [5], [9] – [11], περιλαμβανομένης της ηπατοκυτταρικής, των ωοθηκών, και κακόηθες μεσοθηλίωμα, και μπορούν να ενεργούν ως ένα ογκογονίδιο στον καρκίνο του μαστού [15]. Ως εκ τούτου, YAP έχει προταθεί ως υποψήφια ογκογονίδιο. Επιπλέον, η υπερέκφραση του YAP βρέθηκε να ενισχύει το μέγεθος του ήπατος και τελικά να οδηγήσει σε ανάπτυξη όγκου σε υπό όρους διαγονιδιακά μοντέλα ποντικών [5], [12], [13]. Πρόσθετες μελέτες έχουν δείξει ότι TAZ, και TAZ-εξαρτώμενη έκκριση αμφιρεγουλίνη (AREG), παίζει επίσης σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση μαστού και μετάσταση: όταν υπερεκφράζεται TAZ καταρριφθεί σε μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC), τον πολλαπλασιασμό και οι ογκογόνες ιδιότητες καταστέλλονται [16].

Αν και τόσο YAP και TAZ έχουν δειχθεί να εμπλέκονται στην εξέλιξη των καρκίνων που προέρχονται από διάφορους ιστούς, είναι αναγκαίο να διερευνηθεί η ιστο-ειδικό ρόλο της έκφρασης YAP και TAZ προκειμένου να διερευνηθεί ο ρόλος του YAP και TAZ σε ανθρώπινο καρκίνο του παχέως εντέρου (CRC) και την περαιτέρω κατανόηση της λειτουργίας του Hippo οδού. Πρόσφατα δημοσιευμένα στοιχεία δείχνουν ότι υπερεκφράζεται YAP μπορεί αλληλεπιδράσουν με β-κατενίνης για να οδηγήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων καρκίνου του παχέος εντέρου, υπονοώντας ότι YAP θα μπορούσε να παίξει ένα ρόλο στη θεραπεία του καρκίνου [17]? Ωστόσο, με τις γνώσεις μας, την έρευνα για την κλινική σημασία των YAP και TAZ, και η προγνωστική αξία της YAP και TAZ, έχει περιοριστεί, και η σημασία της YAP και TAZ συν-υπερέκφραση σε CRC, παραμένει άπιαστο.

σε αυτή τη μελέτη, ερευνήσαμε την προγνωστική αξία των δύο YAP και TAZ σε μια αναδρομική μελέτη κοόρτης με πέντε χρόνια παρακολούθησης, για να προσδιοριστεί η ανεξάρτητη προγνωστική ρόλο της YAP και TAZ σε ασθενείς με CRC. Εντοπίσαμε μια συνέργεια μεταξύ των δύο αυτών πρωτεϊνών και ένα πιθανό μηχανισμό μέσω του οποίου η οδός ιπποπόταμος διαμορφώνει την ανθρώπινη εξέλιξη CRC.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και Παρακολούθηση

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της τέταρτης Στρατιωτικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο (FMMU? Xi’an, Κίνα), και όλοι οι συμμετέχοντες ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση τους. Η αναδρομική ομάδα περιελάμβανε 168 ασθενείς που διαγιγνώσκονται με δυνητικά χειρουργήσιμο CRC μεταξύ Φεβρουαρίου 2006 και Δεκεμβρίου 2007 το χειρουργείο Τμήμα του γαστρεντερικού της Xijing Νοσοκομείο, FMMU. Οι ασθενείς με τα ακόλουθα κριτήρια αποκλείστηκαν από τη συμμετοχή: είχε λάβει επικουρική χημειοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση? είχαν διαγνωστεί με στρωματικών όγκων του γαστρεντερικού ή λέμφωμα? είχε επιπλέον καρκίνους διαγνώσεις? ή θα απορριφθεί η συγκατάθεση. Όλα τα κλινικά δείγματα ανασύρθηκαν από το αρχείο του ιστού του Τμήματος Παθολογίας, Xijing Νοσοκομείο, FMMU. Συνέχεια πληροφορίες ενημερώνονται κάθε τρεις μήνες, από όλους τους συμμετέχοντες, μέσω τηλεφώνου. Η συνολική επιβίωση ορίστηκε ως ο χρόνος που έχει παρέλθει από χειρουργική επέμβαση για να τον χρόνο του θανάτου του ασθενούς. ο θάνατος του ασθενούς ιδρύθηκε από την οικογένεια τους

Η ανοσοϊστοχημεία και Scoring

παραφίνη-ενσωματωμένες τμήματα των φυσιολογικών και καρκινικών ιστών χρωματίστηκαν για YAP (H-125:. SC-15407? Santa Cruz Biotechnology, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής ) και TAZ (NP_056287: ab118373? Abcam, UK) έκφρασης. Καθώς το αντίσωμα έναντι YAP χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη αυτή είναι ένα πολυκλωνικό αντίσωμα, χρησιμοποιήσαμε κηλίδωση Western για τον προσδιορισμό της ειδικότητας των αντισωμάτων του YAP (Σχήμα S1). Ανοσοϊστοχημεία (IHC) για YAP και TAZ διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [7] με μικρές τροποποιήσεις. Εν συντομία, πλάκες αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο, επανυδατώθηκαν και μέσω διαβαθμισμένης σειράς αλκοόλη, προτού ενδογενής δράση υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με 3% Η

2O

2 σε μεθανόλη. Μετά από αποκλεισμό έναντι μη ειδική δέσμευση πρωτεϊνών, τα δείγματα επωάστηκαν όλη τη νύκτα με YAP ή TAZ πρωτογενή αντισώματα, αραιωμένα στις συνιστώμενες συγκεντρώσεις (1:500), σε θάλαμο υγρασίας στους 4 ° C. Τα δείγματα πλύθηκαν τρεις φορές με αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS), πριν από βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα εφαρμόστηκε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Οπτικοποίηση διεξήχθη χρησιμοποιώντας 3,3 ‘διαμινοβενζιδίνη (DAB) χρωμογόνο για 2-3 λεπτά. Οι αρνητικοί έλεγχοι παρασκευάστηκαν με αντικατάσταση του πρωτογενούς αντισώματος με προάνοσο ορό κουνελιού. χρώση YAP και TAZ βαθμολογήθηκαν από δύο ανεξάρτητους παθολόγους, τυφλωμένο τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών. Το σύστημα βαθμολόγησης που χρησιμοποιείται στον βαθμό την έκφραση της YAP και TAZ περιγράφεται στον Πίνακα 1.

Η

Πολιτισμός τηλέφωνα

Οι ακόλουθες ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του παχέος εντέρου: HCT116, LS174T, LOVO, SW480 , και SW480 χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Όλες οι κυτταρικές γραμμές ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC). HCT116 και LOVO κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο κατά Dulbecco (ϋΜΕΜ? Invitrogen, CA, USA) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS? HyClone)? SW480 και LS174T κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI1640 (Invitrogen, CA, USA) συμπληρωμένο με 10% FBS? SW620 κυττάρων καλλιεργήθηκαν σε μέσο Leibovitz του L-15 (Invitrogen, CA, USA) με 10% FBS. Όλα τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2.

Επιμόλυνση και γονιδιακή σίγηση

Για μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) επιμόλυνση, τα ακόλουθα siRNA δίπολα συντέθηκαν (Genepharma, Σαγκάη, Κίνα): (5′-GGUGAUACUAUCAACCAAATT-3 ‘), στοχεύοντας το γονίδιο YAP? (5’-GGAUACAGGAGAAAACGCATT-3 ‘), στοχεύοντας το γονίδιο TAZ? και ο αρνητικός duplex ελέγχου, (5’-CCUACGCCACCAAUUUCGU-3 ‘). Αυτά τα siRNA δίπολα (100 nmol /L) διαμολύνθηκαν σε κύτταρα HCT116 με χρήση Lipofectamine 2000 (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. κύτταρα HCT116 συλλέχθηκαν 48 ώρες μετά την επιμόλυνση για ανάλυση γονιδίου ή μιας πρωτεΐνης.

ποσοτική πραγματικού χρόνου αντίστροφης μεταγραφάσης Polymerase Chain

Αντίδραση

Ολικό RNA εκχυλίσθηκε από κυτταρικές σειρές χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen) , και την επακόλουθη σύνθεση του κυκλικού DNA (cDNA? TaKaRa, Japan), διεξήχθησαν σύμφωνα με τα πρωτόκολλα των κατασκευαστών. Πραγματικού χρόνου ποσοτική ανάστροφης μεταγραφής αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qRT-PCR) πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του συστήματος CFX96TM PCR Πραγματικού χρόνου (BioRad, CA, USA) με το κιτ SYBR Green II (# DRR041A? TaKaRa, Japan) σύμφωνα με τους κατασκευαστές «οδηγίες. ανάλυση QRT-PCR διεξήχθη σε ένα συνολικό όγκο 20 μΐ με τα ακόλουθα βήματα ενίσχυσης: ένα αρχικό στάδιο αποδιάταξης στους 95 ° C για 10 λεπτά? που ακολουθείται από 40 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 15 s? και στη συνέχεια επιμήκυνση στους 55 ° C για 30 s. Οι εκφράσεις κανονικοποιήθηκαν προς το ανθρώπινο γονίδιο β-ακτίνης. Οι ακόλουθες αλληλουχίες εκκινητών χρησιμοποιήθηκαν: 5′-ACCCACAGCTCAGCATCTTCG-3 ‘(νοηματικό) και 5′-TGGCTTGTTCCCATCCATCAG-3′ (antisense) για YAP? 5’-GTCACCAACAGTAGCTCAGATC-3 ‘(νοηματικό) και 5′-AGTGATTACAGCCAGGTTAGAAAG-3′ (antisense) για TAZ? 5’-CGTCTTCCCCTCCATCGT-3 ‘(νοηματικό) και 5′-GAAGGTGTGGTGCCAGATTT-3’ (antisense) για β-ακτίνη.

Ανάλυση Western Blot

Τα κύτταρα συλλέχθηκαν σε ρυθμιστικό δοκιμασίας ραδιοανοσοκαταβύθισης (Santa Cruz Biotechnology). Οι πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης (Millipore, ΜΑ, USA). Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο γάλα σε PBS ρυθμιστικό για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, πριν από την στοχευμένη ith τα ακόλουθα αντισώματα σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή: anti-Yap (1:500)? αντι-TAZ (1:500)? και αντι-ακτίνης (1:5,000? AC40: A4700? Sigma-Aldrich, USA). Οι μεμβράνες επωάστηκαν με τα αντίστοιχα (HPC) δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση αρμορακίας τους, και οι πρωτεΐνες αντισώματος-δεσμευμένο έγιναν ορατά με χημειοφωταύγεια (New England Nuclear, ΜΑ, USA).

Δοκιμασία Ανάπτυξης Κυττάρων (ΜΤΤ)

ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων

in vitro

αναλύθηκε χρησιμοποιώντας τετραζολίου 3- (4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2, βρωμιούχο 5-διφαινυλτετραζόλιο (ΜΤΤ)? επειδή κίτρινη χρωστική ουσία ΜΤΤ ανάγεται σε ένα μπλε προϊόν φορμαζάνης από αναπνευστική ένζυμα που είναι ενεργά μόνο σε ζωντανά κύτταρα, ο βαθμός αλλαγής χρώματος είναι ενδεικτική του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. κύτταρα HCT116 διαμολύνθηκαν για 48 ώρες χωρίς siRNA (γονική)? συγκεκριμένες siRNAs (si-Con, si-YAP, ή si-TAZ)? ή συν-επιμολυσμένα με si-YAP και si-TAZ (SI-YAP-TAZ), και αιωρούνται σε DMEM με 10% FBS. Εν συντομία, κύτταρα από κάθε κλώνο 2000 (γονική, si-Con, si-YAP, si-TAZ, και si-YAP-TAZ) τοποθετήθηκαν σε πέντε πλάκες 96 φρεατίων σε 200 μΐ μέσου DMEM. Για την ανάλυση: 20 μΙ υποστρώματος ΜΤΤ (από ένα διάλυμα 2,5 mg /ml απόθεμα σε PBS) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο? οι πλάκες επέστρεψαν στον επωαστή για επιπλέον 4 ώρες στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2? το μέσο απομακρύνθηκε? τα κύτταρα διαλυτοποιήθηκαν σε 150 μΙ διμεθυλοσουλφοξείδιο? και χρωματομετρική ανάλυση διεξήχθη (μήκος κύματος, 490 nm). Μία πλάκα αναλύθηκε αμέσως μετά τα κύτταρα προσκολλώνται (περίπου 4 ώρες μετά την επίστρωση), και οι υπόλοιπες πλάκες αναλύθηκαν κατά τις επόμενες τέσσερις διαδοχικές ημέρες.

Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των αποπτωτικών κυττάρων

HCT116 κύτταρα επιμολύνθηκαν για 48 ώρες χωρίς siRNA (γονική)? ειδικά siRNA (si-Con, si-YAP, ή si-TAZ)? ή συν-επιμολυσμένα με si-YAP και si-TAZ (SI-YAP-TAZ), προτού ανασταλεί σε PBS σε πυκνότητα 1 × 10

6 κύτταρα /ml. Τα αποπτωτικά κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας ένα Cytomics FC 500 κυτταρόμετρο ροής (Beckman Coulter), μετά την επώαση των κυττάρων με ένα αντιδραστήριο που περιέχει αννεξίνης V-FITC και ιωδιούχου προπιδίου (BD Bioscience, CA, USA) για 15 λεπτά στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου .

Ανάλυση εξάπλωσης και την κινητικότητα (μετανάστευση και την εισβολή αναλύσεις)

μετρήθηκαν

κυττάρων εισβολής και της μετανάστευσης δυνατότητες

in vitro από

δοκιμασίες φρεατίων (Millipore, Billerica, ΜΑ) όπως εξής: κύτταρα HCT116 διαμολύνθηκαν για 48 ώρες χωρίς siRNA (γονική)? ειδικά siRNA (si-Con, si-YAP, ή si-TAZ)? ή συν-επιμολυσμένα με si-YAP και si-TAZ (SI-YAP-TAZ)? τα κύτταρα εναιωρήθηκαν σε ϋΜΕΜ με 10 g /l BSA σε πυκνότητα 50 κυττάρων /μl? 200 μΙ κυτταρικά εναιωρήματα ενοφθαλμίσθηκαν εντός των άνω θαλάμους των Transwells, στην οποία η πορώδης μεμβράνη ήταν είτε επικαλυμμένη με Matrigel (BD Bioscience) για τις δοκιμασίες εισβολή, ή αριστερά μη επικαλυμμένα για τους προσδιορισμούς μετανάστευσης. ΫΜΕΜ με 10% ορό (500 μΐ) προστέθηκε στον κάτω θάλαμο ως χημειοελκτικό. Μετά τη μετανάστευση για 24 ώρες, ή εισβολή για 48 ώρες, τα κύτταρα που είχαν διεισδύσει τα φίλτρα σταθεροποιήθηκαν σε μεθανόλη, και χρωματίστηκαν σε 4g /l κρυσταλλικό ιώδες. Οι αριθμοί των μετανάστευσαν και μεταστατικών κυττάρων προσδιορίστηκαν από πέντε τυχαία πεδία κάτω από ένα μικροσκόπιο Olympus (Όλυμπος) σε 10 × μεγέθυνση.

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του IBM SPSS στατιστικού λογισμικού (έκδοση 20.0). τεστ κατάταξης Spearman χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η συσχέτιση μεταξύ YAP και TAZ εκφράσεις? Καμπύλες επιβίωσης υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kalplan-Meier? και διανομές αξιολογήθηκαν από τη δοκιμή μακράς-rank. Cox, αναλογικών κινδύνων μοντελοποίηση των παραγόντων που πιθανώς σχετίζονται με την επιβίωση διεξήχθησαν για τον υπολογισμό των λόγων κινδύνου (HR), και να εντοπίσει τους παράγοντες που θα μπορούσαν να έχουν σημαντική επίδραση στην επιβίωση. Οι διαφορές στα χαρακτηριστικά μεταξύ των δύο ομάδων εξετάστηκαν από chi-square του Pearson του (χ

2) δοκιμής και ακριβή δοκιμασία του Fisher. Όλα

P

τιμές προσδιορίστηκαν από 2-tailed δοκιμές και διαφορές με ένα

P

-τιμή & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

κλινική σημασία της YAP και TAZ υπερέκφραση στον καρκίνο του παχέος εντέρου ιστού

Για να προσδιοριστεί η συχνότητα και η κλινική σημασία της YAP και TAZ στην CRC, εκτιμήσαμε την έκφραση της YAP και TAZ πρωτεΐνης με ανοσοϊστοχημεία σε δείγματα καρκινικού ιστού από μας αναδρομική ομάδα των 168 από την CRC ασθενών μετά από εκτομή του όγκου. Μεταξύ των 168 ασθενών, 122 (72,6%) ήταν θετικά για έκφραση YAP, είτε πυρηνική ενέργεια ή κυτταροπλασματικό (Σχήμα 1Α)? ενώ 46 (27,4%) ήταν αρνητικά για έκφραση YAP (Σχήμα 1Β)? 97 (57,8%) δείγματα ήταν θετικά για έκφραση TAZ? και 71 (42,2%) ήταν αρνητικά για έκφραση TAZ (Σχήματα 1Ε και F, αντιστοίχως). Αντιθέτως, μόνο το 3 (18,75%) και 2 (12.5%) από τα γειτονικά φυσιολογικά δείγματα ιστού 16 βρέθηκαν θετικά για YAP και TAZ έκφραση, αντίστοιχα (Σχήματα 1 C, D, G, και Η). Επιπλέον, υπήρχε μια σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ YAP και TAZ (r = 0.630,

P

& lt? 0.001? Πίνακας S1)., Υποδεικνύοντας μια πιθανή συσχέτιση μεταξύ αυτών των πρωτεϊνών στο CRC

( Α) YAP-θετικά καρκινικά? (Β) YAP αρνητικά όγκου? (C) YAP-θετικά φυσιολογικό ιστό? (D) YAP αρνητικά φυσιολογικό ιστό? (Ε) TAZ-θετικών όγκων? (F) TAZ αρνητικά όγκου? (G) TAZ-θετικά φυσιολογικό ιστό? (H) TAZ αρνητικά φυσιολογικό ιστό. Εκπρόσωπος εικόνες ελήφθησαν κάτω από ένα μικροσκόπιο (x10). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν την κλινική σημασία των YAP και TAZ υπερέκφραση σε CRC ιστό.

Η

Ως αποτέλεσμα αυτών των παρατηρήσεων, αξιολογήσαμε τη σχέση μεταξύ YAP και της έκφρασης TAZ και τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών CRC από chi κατά Pearson -πλατεία δοκιμή ή την ακριβή δοκιμασία του Fisher. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η έκφραση της YAP και TAZ συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με την κατάσταση των λεμφαδένων σε όγκους παχέος εντέρου (

P

= 0.001 και

P

= 0,013, αντίστοιχα), αλλά δεν συσχετίστηκαν σημαντικά στην το φύλο, την τοποθεσία του όγκου, το μέγεθος του όγκου, κυτταρική διαφοροποίηση, ή στάδιο ΤΝΜ (Πίνακας 2). Η υψηλή προγνωστική επίπτωση των μεταστάσεων λεμφαδένα, και ο συνολικός αριθμός των λεμφαδένων να εκτομή, είναι καλά εδραιωμένη. Μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι οι τιμές cut-off του λόγου λεμφαδένα (ο λόγος των κόμβων όγκο διείσδυσαν σε εκτομή λεμφαδένες) είναι ισχυροί ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για τους ασθενείς CRC, με βάση τις αναλύσεις των κλινικών και ιστοπαθολογικών δεδομένα από 3.026 ασθενείς σε ένα μόνο χειρουργικό κέντρο για μια περίοδο 25 ετών [18]. Τα ευρήματα αυτά μας οδήγησαν να διερευνήσει το ρόλο της YAP και TAZ στην πρόγνωση των ασθενών με CRC.

Η

YAP και TAZ Co-υπερέκφραση ήταν σχετίζονται με την κακή συνολική επιβίωση

Για να προσδιοριστεί η προγνωστική σημασία της έκφρασης YAP και TAZ σε CRC ασθενείς, επιχειρήσαμε να αφορούν έκφραση YAP και TAZ στα κλινικά αποτελέσματα. Ο συνολικός μέσος χρόνος επιβίωσης των ασθενών με αναδρομική ομάδα μας ήταν 43 μήνες (εύρος: 1-56 μήνες), και στο τέλος της περιόδου παρακολούθησης (60 μήνες), 70 από τους 168 ασθενείς που ήταν ζωντανοί, και 98 ασθενείς ήταν νεκρός. Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης YAP και TAZ και τη συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier και δοκιμασία log-rank για τις εκτιμήσεις σημασία. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε δύο ομάδες: εκείνοι με θετική έκφραση της YAP ή TAZ, και εκείνων με αρνητική έκφραση της YAP ή TAZ. Μια στατιστικά σημαντική διαφορά βρέθηκε μεταξύ της συνολικής επιβίωσης των δύο ομάδων (δοκιμή μακράς-rank:

P

& lt? 0,02 και

P

& lt? 0.001, αντίστοιχα). Ασθενείς με υψηλότερες εκφράσεις του YAP ή TAZ έτειναν να έχουν υψηλότερο κίνδυνο θανάτου σε σύγκριση με ασθενείς με χαμηλότερα εκφράσεις YAP ή TAZ, με το μη προσαρμοσμένο HR είναι 1.617 και 1.643, αντίστοιχα. Επιπλέον, η διαφοροποίηση των κυττάρων, μετάσταση λεμφαδένα, και το στάδιο ΤΝΜ βρέθηκε να σχετίζεται με την πρόγνωση για τους ασθενείς CRC (Πίνακας 3). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι η υψηλότερη έκφραση της YAP ή TAZ συσχετίστηκε με μείωση της συνολικής επιβίωσης, με το προσαρμοσμένο HR είναι 2.168 (95% CI: 1,125 – 4,179?

P

& lt? 0.001) και 1.544 (95% CI:. 0,999 έως 2,451?

P

= 0,05), αντίστοιχα, υποδεικνύοντας ότι η έκφραση της YAP ή TAZ θα μπορούσε να είναι ένας προγνωστικός παράγοντας ανεξάρτητος από αυτά προσαρμόζονται κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά (Πίνακας 3)

η

επόμενο διερευνηθεί κατά πόσο συν-υπερέκφραση YAP και TAZ θα μπορούσαν να έχουν προγνωστική ρόλο στην CRC. ασθενείς ομάδα μας χωρίστηκαν σε τέσσερις ομάδες ανάλογα με το συνδυασμό των επιπέδων έκφρασης τους YAP και TAZ. Μια στατιστικά σημαντική διαφορά παρατηρήθηκε στην έκβαση της συνολικής επιβίωσης μεταξύ αυτών των τεσσάρων υποομάδων των ασθενών? εκείνοι με θετικό συν-υπερέκφραση YAP και TAZ είχε τη χειρότερη συνολική επιβίωση (Σχήμα 2). αναλογικών κινδύνων του Cox μοντέλο, προσαρμοσμένο για το φύλο, την ηλικία, το μέγεθος του όγκου, εντόπιση όγκου, την κατάσταση διαφοροποίησης, και το στάδιο TNM, σε σύγκριση με YAP ή έκφραση TAZ, έδειξε ότι η αρνητική έκφραση τόσο YAP και TAZ συσχετίστηκαν με σημαντικά βελτιωμένη συνολική επιβίωση? λαμβάνοντας υπόψη ότι η έκφραση των δύο YAP και TAZ συσχετίστηκαν με σημαντικά κακή συνολική επιβίωση (Πίνακας 3), με το προσαρμοσμένο HR είναι 3.118 (95% CI: 1,017 – 9,559?

P

& lt? 0.001). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι YAP και TAZ συν-υπερέκφραση μπορεί να έχει ένα ειδικό και ανεξάρτητο προγνωστικό αντίκτυπο μεταξύ CRC ασθενείς

(Α) Συσχέτιση της έκφρασης YAP με συνολική επιβίωση.? (Β) συσχέτιση της έκφρασης TAZ με συνολική επιβίωση? (Γ) τη σχέση της συνδυασμένης έκφρασης YAP και TAZ με τη συνολική επιβίωση. Μια στατιστικά σημαντική διαφορά παρουσιάζεται στην έκβαση της συνολικής επιβίωσης μεταξύ των διαφόρων ομάδων ασθενών, με εκείνους που έχουν θετική συν-υπερέκφραση YAP και TAZ έχοντας τη χειρότερη συνολική επιβίωση.

Η

Η υπερέκφραση της YAP και TAZ στην HCT116 Colon Cancer Cell γραμμή

για να διερευνήσει περαιτέρω την επίδραση της YAP και TAZ στην εξέλιξη της CRC, ελέγξαμε τα προκαταρκτικά συμπεράσματα της μελέτης κοόρτης μας σε πειράματα κυτταρικής σειράς. Εξετάσαμε πρώτα τα επίπεδα του γονιδίου και την έκφραση της πρωτεΐνης του YAP και TAZ σε HCT116, LS174T, LOVO, SW620, και καρκινικές κυτταρικές σειρές SW480 του παχέος εντέρου. κύτταρα HCT116 έδειξε τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης και των δύο YAP και TAZ (Σχήματα 3Α και Β)? Ως εκ τούτου, η HCT116 κυτταρική σειρά επελέγη για μετέπειτα πειράματα για τη διερεύνηση YAP και TAZ στην εξέλιξη της CRC

(Α) ανάλυση QRT-PCR των YAP και TAZ εκφράσεις.? (Β) ανάλυση κηλίδας Western των YAP και TAZ εκφράσεις. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος φόρτωσης. κύτταρα HCT116 παρουσιάζουν τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης των δύο YAP και TAZ.

Η

Επίδραση της YAP ή TAZ siRNA σε YAP ή TAZ επίπεδα στον άνθρωπο HCT116 του καρκίνου του παχέος εντέρου τηλέφωνα Γραμμές

Στη συνέχεια εξετάσαμε το επίδραση της YAP και TAZ στην HCT116 κυτταρική σειρά με νοκ ντάουν της έκφρασης YAP ή TAZ χρησιμοποιώντας στοχευμένες siRNAs. Η ειδικότητα του siRNA που στοχεύει για YAP και TAZ επιβεβαιώθηκε με ανάλυση στυπώματος Western. Σε σύγκριση με τα κύτταρα που είχαν επιμολυνθεί με τον έλεγχο siRNA, η έκφραση του YAP και TAZ έντονα καταστέλλεται σε κύτταρα HCT116 επιμολυσμένα με 10 μg στοχοθετημένων siRNAs (Σχήμα 4Α και το Σχήμα S2).

(Α) ανάλυση κηλίδας Western κυτταρικών γραμμών με μειωμένα επίπεδα YAP και TAZ μετά την επιμόλυνση με τα siRNA: γονικά κύτταρα HCT116 που φέρουν καμία siRNA (γονική)? ελέγχου siRNA (si-Con)? siRNA να YAP (si-YAP)? siRNA να TAZ (si-TAZ)? και συν-επιμολυσμένα με siRNA να YAP και siRNA να TAZ (si-YAP-TAZ). (Β) δοκιμασίες ανάπτυξης ΜΤΤ κυττάρων των κυττάρων ελέγχου (γονική, si-Con)? κύτταρα με μειωμένη YAP ή έκφραση TAZ (si-YAP, si-TAZ)? ή κύτταρα με μειωμένη YAP και έκφραση TAZ (si-YAP-TAZ). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD, η = 3, *

P

& lt? 0.05. (Γ) κυτταρομετρίας ροής αναλύσεις των κυττάρων βάφονται με Annexin-V-FITC και ΡΙ: κύτταρα που φέρουν καμία siRNA (γονική)? ελέγχου siRNA (si-Con)? siRNA να YAP (si-YAP)? siRNA να TAZ (si-TAZ)? και τα κύτταρα με μειωμένη YAP και έκφραση TAZ (si-YAP-TAZ). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η έκφραση YAP έχει μεγαλύτερη επίδραση επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της καταστολής της απόπτωσης σε σύγκριση με την έκφραση TAZ? Ωστόσο, μια συνεργική ρόλο μεταξύ YAP και TAZ αυξάνει συνδυασμένη επιμέρους αποτελεσμάτων τους.

Η

Επίδραση της YAP και TAZ Έκφραση επί του κυτταρικού πολλαπλασιασμού

προσδιορισμοί ΜΤΤ χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό των επιπτώσεων της μειωμένης YAP και έκφραση TAZ σε HCT116 του κόλου ρυθμούς ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων. Η ομάδα επιμολυσμένα με YAP siRNA έδειξαν μια σημαντική μείωση στο ρυθμό πολλαπλασιασμού σε σχέση με την ομάδα επιμολυσμένα με γονικό έλεγχο ή siRNAs. Μια παρόμοια τάση παρατηρήθηκε με TAZ siRNA? Ωστόσο, το αποτέλεσμα δεν ήταν τόσο ισχυρή. Η ομάδα που συν-επιμολύνθηκαν με YAP και TAZ siRNAs έδειξε το πιο δραματικό, και άκρως σημαντική (

P

& lt? 0,05), μείωση στον ρυθμό πολλαπλασιασμού σε σχέση με τα πατρικά ή τον έλεγχο των ομάδων siRNA (Σχήμα 4Β)? Ως εκ τούτου, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι YAP και TAZ διέθετε μια συνεργιστική ρόλο του στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων καρκίνου του παχέος εντέρου.

Επίδραση YAP και TAZ Έκφραση σε HCT116 κύτταρα απόπτωση Ratio

Στη συνέχεια ερευνήσαμε την διαφορά σε αναλογία απόπτωσης μεταξύ του YAP και /ή ομάδες νοκ ντάουν TAZ και της ομάδας ελέγχου για να επιβεβαιώσετε την αναδρομική αποτελέσματα της μελέτης κοόρτης μας. Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι η αναλογία της απόπτωσης ήταν μειωμένη σε κύτταρα HCT116 επιμολυσμένα με YAP siRNA σε σύγκριση με κύτταρα HCT116 επιμολυσμένα με πατρικά ή si-Con siRNA (17,48% έναντι 1,62%,

P

& lt? 0,05? 17,48% έναντι 2,28%,

P

& lt? 0,05, αντίστοιχα? Σχήμα 4C)? το αποτέλεσμα ήταν ελαφρώς ασθενέστερη σε κύτταρα HCT116 επιμολυσμένα με TAZ siRNA σε σχέση με εκείνους επιμολυσμένα με γονική ή si-Con siRNA (6,48% vs.1.62%,

P

& lt? 0,05? 6,48% έναντι 2,28%,

P

& lt? 0,05, αντίστοιχα? Σχήμα 4C)? Ωστόσο, η αναλογία απόπτωση μειώθηκαν δραστικά οι σε κύτταρα HCT116 συν-επιμολύνθηκαν με YAP και TAZ siRNAs σε σύγκριση με εκείνους που μορφομετατρέπονται με γονική και si-Con (33,60% έναντι 1,62%,

P

& lt? 0,01? 33,60 % έναντι 2,28%,

P

& lt? 0,05, αντίστοιχα? Σχήμα 4C). Συλλογικά, αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση YAP είχε σημαντικό ρόλο στην προώθηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και την καταστολή κυτταρικής απόπτωσης? TAZ διαδραματίσει σημαντικό, αν και λιγότερο σημαντικό ρόλο, σε αυτή την εξέλιξη? και συνεργική δράση μεταξύ YAP και TAZ αυξηθεί ο αντίκτυπός τους στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την απόπτωση περαιτέρω.

Επίδραση της YAP και TAZ για τη Μετανάστευση και την εισβολή

YAP και δραστηριότητα TAZ έχει προηγουμένως αποδειχθεί ότι μεσολαβούν όγκου κύτταρο μετανάστευση και εισβολή. Η παρατήρησή μας ότι μια μείωση της έκφρασης YAP και TAZ έπαιξε συνεργιστική ρόλο στην αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και αύξηση στην απόπτωση των κυττάρων HCT116 μας οδήγησε να εκτιμηθεί η επίδραση της YAP και TAZ siRNA συν-επιμόλυνσης για τη μετανάστευση και την εισβολή των δυνατοτήτων του καρκίνου του παχέος εντέρου κύτταρα. Βασική, και επικαλυμμένα με Matrigel δοκιμασίες Transwell χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της μετανάστευσης και της εισβολής, αντίστοιχα. Τόσο YAP και TAZ siRNA επιμολυσμένα κύτταρα εμφάνισαν στατιστικώς σημαντικά μειωμένη μετανάστευσης σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου? η μείωση ήταν πιο σημαντική στην ομάδα επιμολυσμένα με TAZ siRNA? Ωστόσο, η ομάδα επιμολυσμένα με τόσο YAP και TAZ έδειξε την πιο σημαντική επίδραση στη μείωση της μετανάστευσης (Εικόνες 5Α και Β). Οι τάσεις ήταν παρόμοιες στις δοκιμασίες εισβολή Matrigel: κλώνους με μειωμένα επίπεδα YAP ή TAZ έδειξε στατιστικά σημαντική μείωση της διηθητικότητας σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου? η επίδραση ήταν πιο σημαντική στην ομάδα νοκ ντάουν TAZ? Ωστόσο, η πιο σημαντική μείωση της εισβολής παρατηρήθηκε όταν τα δύο YAP και TAZ χτυπήθηκαν κάτω (Σχήμα 5C και D).

(Α) Εκπρόσωπος εικόνες (× 10) των δοκιμασιών μετανάστευσης των κυττάρων HCT116 με φυσιολογικά επίπεδα έκφραση YAP και TAZ (γονική και si-Con)? κύτταρα με μειωμένα επίπεδα YAP ή TAZ έκφρασης (si-YAP ή si-TAZ)? και τα κύτταρα με κατασταλεί YAP και έκφραση TAZ (si-YAP-TAZ). (Β) μέσος αριθμός κυττάρων από τις πέντε δοκιμασίες ανεξάρτητη μετανάστευση περιγράφεται στο προηγουμένως. (C) δοκιμασία Εισβολή των γονικών κυττάρων HCT116? κύτταρα si-Con? si-YAP? si-TAZ? και τα κύτταρα si-YAP-TAZ στην τροποποιημένη Boyden θαλάμων με Matrigel επικαλυμμένα με μεμβράνες. Μετά από 24 ώρες, επεμβατική κύτταρα που είχε μετακινηθεί μέσω της μεμβράνης Matrigel χρωματίστηκαν και μετρήθηκαν κάτω από το μικροσκόπιο σε μεγέθυνση × 10. (D) Γραφική αναπαράσταση των μεταστατικών κυττάρων υπολογίζεται ως μέση τιμή ± SD από πέντε πεδία. Αυτά δείχνουν στατιστικά σημαντικά μειωμένη μετανάστευσης και στις δύο YAP και TAZ siRNA επιμολυσμένα κύτταρα σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου? το αποτέλεσμα είναι μεγαλύτερο στην ομάδα που επιμολύνθηκαν με αμφότερα YAP και TAZ. [Αστερίσκοι υποδεικνύουν στατιστικώς σημαντικές διαφορές στο YAP ή TAZ siRNA επιμολυσμένα κύτταρα εναντίον si-Con ή γονικών κυττάρων, (*,

P

& lt? 0,05? **,

P

& lt? 0,01) .].

η

Συζήτηση

YAP και TAZ είναι σημαντική προς τα κάτω τους στόχους του μονοπατιού σηματοδότησης ιπποπόταμος. Μέχρι σήμερα, έχει υπάρξει ένας σημαντικός όγκος αποδείξεων που συνδέει την ογκογονίδιο YAP /TAZ της γενέσεως όγκων σε διάφορα στερεά τύπων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων των ωοθηκών, του μαστού, του προστάτη, του ήπατος και πνεύμονα [7], [9], [12], [15]. Η υπερέκφραση του YAP έχει αναφερθεί ότι ενεργοποιούν παρεκκλίνοντα μια σειρά γονιδίων στόχων υπεύθυνα για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την επιβίωση, αντι-απόπτωση, και τη μετανάστευση [19], [20]. Επιπλέον, προηγούμενες μελέτες έχουν εντοπίσει YAP ως ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης για τη συνολική επιβίωση και την ελεύθερη νόσου καιρούς ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) ασθενείς? και clinicopathologically που σχετίζονται με τη διαφοροποίηση του όγκου [21]. Με βάση τις πάγιες απόψεις ότι YAP μπορεί να αυξήσει το μέγεθος του οργάνου, και λειτουργεί ως ογκογονίδιο [5], [9]? και ότι TAZ μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, επάγουν επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ), και να αυξήσει την κυτταρική μετανάστευση και εισβολή [22]? σε συνδυασμό με την πιθανή ομοιότητα του ιστού-ειδικές λειτουργίες των YAP και TAZ, εξετάσαμε και χαρακτήρισε την κλινική σημασία των YAP και TAZ ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για τον προσδιορισμό των αποτελεσμάτων των ασθενών CRC. Τα αποτελέσματά μας ήταν συνεπή με μια προηγούμενη μελέτη [7], από το ότι τα επίπεδα έκφρασης των δύο YAP και TAZ ήταν σημαντικά αυξημένα στην πλειονότητα των ιστών CRC σε σύγκριση με παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς? Ωστόσο, σε αντίθεση με τις εκθέσεις σχετικά με τον καρκίνο του μαστού και του πνεύμονα καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων, βρήκαμε καμία διαφορά μεταξύ κυτταροπλασματικής και πυρηνική έκφραση του YAP ή TAZ σε ιστούς CRC [15]. Παραλλαγές στην έκφραση του YAP μεταξύ διαφορετικών ιστών καρκίνου είναι πιθανόν να οφείλεται σε περίπλοκες μικροπεριβάλλον του όγκου τους. Χρησιμοποιώντας πολυμεταβλητή παλινδρόμηση Cox αναλύσεις, βρήκαμε ότι η υψηλή συν-έκφραση της YAP και TAZ ήταν ένας προγνωστικός παράγοντας πρόβλεψης για τη συνολική επιβίωση των ασθενών με CRC, ανεξάρτητα από το φύλο, την ηλικία, το μέγεθος του όγκου, την κατάσταση διαφοροποίησης, αγγειακή εισβολή, και το στάδιο TNM. Επιπλέον, τα χαμηλότερα συνολικά ποσοστά επιβίωσης εντοπίστηκαν σε ασθενείς που συν-εκφράζεται YAP και TAZ, και συνδέθηκαν με όγκους που έχουν τις μεγαλύτερες δυνατότητες της μετανάστευσης και της εισβολής.

YAP αναγνωρίζεται ως υποψήφια ογκογονίδιο, και έγινε ο επίκεντρο της έρευνας, αφού αναγνωρίστηκε σε ανθρώπινο χρωμόσωμα 11q22 amplicon το οποίο είναι εμφανές σε αρκετούς ανθρώπινους καρκίνους [14]. TAZ είναι ένα YAP παράλογο, αρχικά αναγνωρίστηκε ως μία πρωτεΐνη 14-3-3 πρόσδεσης [23]? TAZ έχει περίπου 50% ταυτότητα αλληλουχίας με YAP, και μια παρόμοια τοπολογία? TAZ δρα ως μεταγραφικός συν-ενεργοποιητής σε παρόμοιο τρόπο με YAP [23]? της σημείωσης, ήταν η ανακάλυψη ότι YAP και TAZ μοιράζονται το κατάντη μεταγραφικού παράγοντα, ΗΣΑΤΚ, να προωθήσει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση, την αγκύρωση ανεξάρτητη ανάπτυξη και EMT, οι οποίοι συμμετέχουν ενεργά στην έναρξη και την εξέλιξη [24] καρκίνου. Επιπλέον, οι μηχανισμοί TAZ και ρύθμιση YAP από Hippo είναι παρόμοια. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν από κοινού ρύθμιση και λειτουργία μεταξύ TAZ και YAP?