Αφηρημένο

Το γονίδιο σύντηξης EML4-ALK ταυτοποιήθηκε πρόσφατα σε ένα μικρό υποσύνολο του μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (NSCLC) ασθενείς που ανταποκρίνονται θετικά σε αναστολείς ALK. Τα χαρακτηριστικά του γονιδίου σύντηξης EML4-ALK σε Κινέζους ασθενείς με NSCLC είναι ελάχιστα κατανοητές. Εδώ, θα υποβάλει έκθεση σχετικά με την επικράτηση της EML4-ALK, η κατάσταση EGFR και μεταλλάξεις KRAS σε 208 Κινέζους ασθενείς με NSCLC. μεταλλάξεις του EGFR βρέθηκε σε 24,5% (51/208) των ασθενών. Σε συμφωνία με προηγούμενες εκθέσεις, αυτές οι μεταλλάξεις εντοπίστηκαν σε υψηλές συχνότητες στις γυναίκες (47,5% έναντι 15,0% στους άνδρες?

P

Οι EGFR /KRAS μεταλλάξεις και η μετατόπιση EML4-ALK ονομάζονται μεταλλάξεις του οδηγού, επειδή είναι υπεύθυνοι τόσο για την έναρξη και συντήρηση του καρκίνου του πνεύμονα. Τα αδενοκαρκινώματα εμφανίζουν διακριτή γονιδιωματική αλλαγές που μπορούν να ταξινομηθούν σε κλινικά σχετικές μοριακές υποσύνολα σύμφωνα με KRAS, EGFR, και το καθεστώς EML4-ALK. Συγκεκριμένες μεταλλάξεις σε αυτά τα γονίδια επάγουν απόκλιση ευαισθησίες όγκου σε στοχευμένους θεραπευτικούς παράγοντες. Για παράδειγμα, οι όγκοι που μεταφέρουν κυρίαρχη σωματικές μεταλλάξεις στα εξόνια EGFR είναι συνήθως ευαίσθητα σε EGFR-TKIs. Οι όγκοι που φιλοξενούν σωματικές μεταλλάξεις στο γονίδιο KRAS, το οποίο κωδικοποιεί ένα ΟΤΡάσης κατάντη του EGFR, εμφανίζουν μεγαλύτερη αντίσταση σε αυτά τα φάρμακα. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να κατανοήσουμε τις συσχετίσεις μεταξύ EML4-ALK και EGFR /KRAS μεταλλάξεις σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα.

Εδώ, θα υποβάλει έκθεση σχετικά με τις μεγάλης κλίμακας κλινικές και παθολογικές χαρακτηριστικά αυτής της σύντηξης σε 208 ασθενείς Κινέζοι NSCLC , και θα το συσχετίζεται με την παρουσία του EGFR και KRAS μεταλλάξεις στους ίδιους ασθενείς. Θα βρείτε επίσης μια μετα-ανάλυση του γονιδίου σύντηξης EML4-ALK.

Αποτελέσματα

Κλινικά χαρακτηριστικά του γονιδίου σύντηξης EML4-ALK στην κινεζική NSCLC ασθενείς

Το 2007, Martelli et al. αξιολόγησε ασθενείς οι οποίοι εξέφρασαν EML4-ALK μεταγραφές, με τη χρήση φθορισμού

in situ υβριδισμού

, και διαπίστωσε ότι μόνο το 1,8% περίπου των κυττάρων που έτρεφε η γονιδιακή σύντηξη EML4-ALK [17]. Αυτοί οι ερευνητές δεν ήταν σε θέση να ανιχνεύσουν την πρωτεΐνη EML4-ALK με ανοσοϊστοχημεία, κηλίδωση Western ή ανοσοκαταβύθιση. RT-PCR είναι η μέθοδος ανίχνευσης πιο ευαίσθητη και πιο δημοφιλή σήμερα διαθέσιμα. Πραγματοποιήσαμε ένθετη RT-PCR για την ενίσχυση της περιοχής σύντηξης της μετατόπισης. Εκτιμήσαμε την ευαισθησία των ένθετων πρωτοκόλλου RT-PCR μας με ενίσχυση σειριακά αραιωμένο cDNA από H2228 κύτταρα. Η ένθετη RT-PCR ανιχνεύεται το γονίδιο σύντηξης EML4-ALK σε χαμηλότερο όριο του 7,8 × 10

-4 ng cDNA εισόδου (Σχήμα 1Α).

Nested RT-PCR εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας σειριακά αραιωμένο cDNA από κύτταρα H2228. Τόσο λίγο όσο 7,8 × 10

-4 ng cDNA θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για τη συνεπή ανίχνευση της μεταγραφής σύντηξης παραλλαγής 3 με αυτό το πρωτόκολλο (άνω πάνελ). Αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα ηλεκτροφόρηση γέλης για την ένθετη RT-PCR (κάτω πίνακας). δείκτη Lane: 200-bp σκάλα? θετικός έλεγχος: H2228? αρνητικός μάρτυρας: Α549. Άλλες λωρίδες αντιστοιχούν σε δείγματα που εμφανίζουν τη μετατόπιση EML4-ALK, επισημαίνονται με αριθμό υπόθεσης.

Η

Υπήρχαν 208 ασθενείς με NSCLC στη μελέτη μας και τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά τους αναλύονται στον πίνακα 1. Τα αποτελέσματα των ένθετων οι RT-PCR ενισχύσεις του γονιδίου σύντηξης EML4-ALK φαίνεται στο Σχήμα 1Β. Ταυτοποιήσαμε 7 ασθενείς που έφερε το γονίδιο EML4-ALK σύντηξης (3,37%, 7/208), γεγονός που επιβεβαιώθηκε με ανάλυση αλληλουχίας DNA (Εικόνα 2). Από αυτούς τους 7 ασθενείς, 2 περιπτώσεις εμφανίζεται η παραλλαγή EML4-ALK 1 (28,6%, 2/7), 1 περίπτωση εμφάνισε παραλλαγή 2 (14,3%, 1/7) και 4 περιπτώσεις πραγματοποιείται παραλλαγή 3 (57,1%, 4/7) . Ως εκ τούτου, παραλλαγή 3 μπορεί να είναι η επικρατέστερη παραλλαγή σε ασθενείς με ΜΜΚΠ Κινέζοι με περισσότερο από το ήμισυ των μετατοπίσεων EML4-ALK παρουσιάζουν συγχωνεύσεις μεταξύ εξόνιο 6 του EML4 και εξόνιο 20 του ALK.

(Α) παραλλαγή 1, (Β ) παραλλαγή 2, (C) παραλλαγή 3.

Η

Τα κλινικά χαρακτηριστικά αυτών των 7 ασθενών περιγράφονται στον πίνακα 2. Έξι περιπτώσεις που εμπλέκονται αδενοκαρκίνωμα και μία περίπτωση που εμπλέκονται αδενοχοληδωτό καρκίνωμα. Δοκιμές για άλλους τύπους καρκινώματος ήταν αρνητικές (0/106). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, ο επιπολασμός του γονιδίου σύντηξης EML4-ALK ήταν 6,32% (6/95) στις περιπτώσεις αδενοκαρκινώματος και 14,2% (1/7) στους περιπτώσεις αδενοχοληδωτό καρκίνωμα. Όλα τα θετικά περιπτώσεις αντιστοιχούσαν σε γυναίκες ασθενείς, με αποτέλεσμα ένα θετικό ποσοστό μεταξύ των γυναικών 11,5% (7/61?

σ

= 0.000). Έξι από τις θετικές περιπτώσεις ήταν μη-καπνιστές (7,69%, 6/78). Η συχνότητα της μετατόπισης EML4-ALK μεταξύ των ασθενών θηλυκό κάπνισμα σε αδενοκαρκίνωμα ήταν 15,2% (5/33). Η διάμεση ηλικία των EML4-ALK-θετικές περιπτώσεις (55 ± 10,38) ήταν πολύ χαμηλότερη από εκείνη των EML4-ALK-αρνητικούς ασθενείς (61,78 ± 8,71?

σ

= 0.045). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές ενώσεις ανιχνεύθηκαν μεταξύ της σύντηξης γονιδίου και το στάδιο ή μεταστατική κατάσταση.

Η

Η ιστολογική ανάλυση των EML4-ALK-θετικό καρκίνο του πνεύμονα

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, όλα τα 7 από τα ALK-θετικούς όγκους τουλάχιστον έτρεφε ένα συστατικό αδενοκαρκίνωμα. Μόνο σε μία περίπτωση (Περίπτωση 4) είχε εστιακό πλακώδους διαφοροποίησης (που αντιπροσωπεύουν το 20% του όγκου του όγκου). Η συνιστώσα του αδενοκαρκινώματος έδειξε ένα ποικίλο histomorphology, και το κυρίαρχο μοντέλο ανάπτυξης ήταν θηλώδες (ή μικροθηλωματώδης) σε 1 περίπτωση (Περίπτωση 1), κυψελωτά σε 3 περιπτώσεις (περιπτώσεις 2, 6 και 7), και σταθερή σε 3 περιπτώσεις (υποθέσεις 3, 4 και 5). Ωστόσο, οι περισσότερες περιπτώσεις (5/7) είχε στην πραγματικότητα ένα μικτό συστατικό αδενοκαρκίνωμα συμπεριλαμβανομένων θηλώδες ή μικροθηλωματώδης, τα κύτταρα σφραγίδα δακτύλιο, και τους βλεννογόνους κύτταρα. Με βάση την προηγουμένως αναφερθείσα παθολογική πρότυπο για ALK-θετικών καρκινωμάτων [18], 57,14% (4/7, περιπτώσεις 1, 3, 4 και 5) του ALK-θετικών περιπτώσεων έδειξε ότι το στερεό πρότυπο σφραγιστικά δακτύλιος κυττάρων και 42,86% (3/7, περιπτώσεις 2, 6 και 7) των υποθέσεων που έδειξε το βλεννώδες μοτίβο ηθμοειδή. Ένα σώμα psammoma επίσης εντοπιστεί στην υπόθεση 6, η οποία ήταν μια μικτή αδενοκαρκινώματος με κύτταρα σφραγιστικό δαχτυλίδι, βλεννογόνους κύτταρα και συστατικό μικροθηλωματώδης. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε ένα καθαρά μη επεμβατική βλεννώδες BAC (καρκίνωμα βρογχιολοκυψελιδικό) στην υπόθεση 7, στην οποία λαγηνοειδή κύτταρα παρουσίασαν lepidic μοντέλο ανάπτυξης. Οι ιστοί από μεταστατικούς λεμφαδένες ήταν διαθέσιμα σε 6 από τα ALK-θετικών περιπτώσεων. Θηλώδες ή μικροθηλωματώδης, τα κύτταρα σφραγίδα-δαχτυλίδι με εξωκυττάρια βλέννα, και ηθμοειδή δομή εντοπίστηκαν σε 2 (περιπτώσεις 1 και 2), 1 (υπόθεση 6), και 3 (υποθέσεις 3, 4 και 5) περιπτώσεις, αντιστοίχως. Πέντε περιπτώσεις έδειξε το μοτίβο στερεά σφραγίδα δακτύλιο των κυττάρων, και 1 υποθέσεως (6) έδειξε το βλεννώδες μοτίβο ηθμοειδή.

Οι πρωτογενείς όγκους των υποθέσεων 1, 3, 4 και 5 παρουσίασαν το πρότυπο στερεά σφραγίδα δακτύλιο κυττάρων αποτελείται από σταθερή ανάπτυξη με θηλώδες (ή μικροθηλωματώδης) ή ένα συστατικό των κυττάρων σφραγίδα δακτύλιο, και άλλες πρωτογενείς περιοχές των υποθέσεων 2, 6 και 7 έδειξε το βλεννώδες μοτίβο ηθμοειδή αποτελείται από άφθονα εξωκυττάρια βλέννα και δομές ηθμοειδή. Στις περιοχές μεταστατικό λεμφαδένα, στερεά μορφή κυττάρων σφραγίδα δακτύλιο εντοπίστηκε στις υποθέσεις 1-5, και το σχέδιο βλεννώδες ηθμοειδή παρατηρήθηκε μόνο στην υπόθεση 6.

Η

Επιπλέον, ένα σύστημα ταξινόμησης 3-tier του πνεύμονα αδενοκαρκινώματα με βάση την ιστολογική μοτίβο αναφέρθηκε από Σίκα et al [19], συμπεριλαμβανομένων βαθμός Ι: ένα μοτίβο με χαμηλής ποιότητας (BAC), Grade II:. μοτίβο με ενδιάμεσο βαθμό (κυψελωτά και θηλώδες)? και Grade III: μοτίβο με υψηλού βαθμού (σταθερή και μικροθηλωματώδης). Χρησιμοποιώντας αυτό το σύστημα ταξινόμησης, μόνο υπόθεση 7 ανήκαν στην κατηγορία Ι, και όλα τα υπόλοιπα ανήκαν στην Grade III δεδομένου ότι οι περισσότεροι από αυτούς αναμείχθηκαν αδενοκαρκινώματα με μετάσταση στους λεμφαδένες.

Στη συνέχεια, θα πραγματοποιηθεί ALK χρώση ανοσοϊστοχημείας (ALK-IHC ) των πρωτογενών και μεταστατικών όγκων όλων των περιπτώσεων ALK-θετική. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, ALK-IHC ήταν θετική σε όλες τις πρωτογενείς όγκους, και η έκφραση πρωτεΐνης ALK βρισκόταν στο κυτταρόπλασμα. Επιπλέον, το ALK-θετική χρώση δεν παρατηρήθηκε σε κάθε πρωτογενές κύτταρο όγκου. Ήταν πολύ εμφανής στην υπόθεση 4 με την αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, όπου το ALK ανοσοχρώση συνέβη στο συστατικό αδενοκαρκίνωμα αλλά όχι στο συστατικό πλακώδες καρκίνωμα. Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ένα φαινόμενο ενδονεοπλασματική ετερογένειας των ΑΙΚ αναδιάταξης στις πρωτογενείς θέσεις όγκου. Επιπλέον, υπήρχαν μόνο 3 περιπτώσεις (περιπτώσεις 2, 5 και 6) με ALK-θετική χρώση στα μεταστατικούς όγκους. Το υπόλοιπο 50% των μεταστατικών όγκων ήταν πλήρως ALK-αρνητική χρώση, συμπεριλαμβανομένων των περιπτώσεων 1, 3 και 4. Για Περίπτωση 4, αν και οι μεταστατικοί όγκοι αποτελούνται πλέον του συστατικού αδενοκαρκινώματος, ALK ανοσοχρώση ήταν ακόμη εντελώς αρνητική.

ALK-θετική ανοσοχρώση δείχθηκε σε πρωτογενείς όγκους όλων των 7 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα ALK-αναδιατάσσονται με διάχυτη χρώση στο κυτταρόπλασμα. ALK-θετική χρώση δεν ήταν εμφανής σε κάθε πρωτογενές κύτταρο όγκου, ειδικά στην περίπτωση 4, το οποίο είναι ένα αδενοχοληδωτό καρκίνωμα με ALK θετική χρώση μόνο στο τμήμα αδενοκαρκίνωμα, όχι στο συστατικό πλακώδες καρκίνωμα (αναφέρεται στο κόκκινο κείμενο: αδενο και πλακωδών). Για τις περιοχές λεμφαδένα μεταστατικής, περιπτώσεις 2, 5 και 6 έδειξαν ALK-θετική χρώση και περιπτώσεις 1, 3 και 4 έδειξαν ALK-αρνητική χρώση.

Η

Τέλος, χρώση ανοσοφθορισμού ALK (ALK-IF) χρησιμοποιήθηκε επίσης σε ALK-IHC των πρωτογενών και μεταστατικών όγκων σε όλες τις περιπτώσεις ALK-θετικό, η οποία επιβεβαίωσε περαιτέρω τα ευρήματα ALK-IHC. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, ALK-IF ήταν επίσης θετικό σε όλους τους πρωτοπαθείς όγκους, με την πρωτεΐνη εντοπισμού ALK στο κυτταρόπλασμα. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με ALK-IHC, όπου το 50% των μεταστατικών τόπων έδειξε πλήρη χρώση ALK-αρνητικό σε περίπτωση 1, 3 και 4. Πραγματοποιήσαμε επίσης RT-PCR για το γονίδιο EML4-ALK με cDNA από όλα τα μεταστατικών όγκων και λαμβάνεται τα ίδια αποτελέσματα, δηλαδή, αρνητική έκφραση του γονιδίου EML4-ALK στις υποθέσεις 1, 3 και 4 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όλα αυτά τα στοιχεία επιβεβαίωσαν την εντός του όγκου ετερογένεια της ALK αναδιάταξη στα πρωτογενή καρκινώματα του πνεύμονα.

ALK-θετική ανοσοχρώση παρουσιάστηκε στην πρωτογενή όγκο όλων των 7 ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα ALK-ανακατατάξεις κονδυλίων. Για τις περιοχές λεμφαδένα μεταστατικής, περιπτώσεις 2, 5 και 6 έδειξαν ALK-θετική χρώση και περιπτώσεις 1, 3 και 4 έδειξαν ALK-αρνητική χρώση. Αυτά τα αποτελέσματα ήταν παρόμοια με εκείνα για ΑΙΚ ανοσοϊστοχημεία. ALK: πράσινο? Ki-67: κόκκινο? DAPI:. Μπλε

Η

EGFR και KRAS μεταλλάξεις και τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών

Από τους 208 ασθενείς που μελετήθηκαν, εντοπίσαμε 51 περιπτώσεις μεταλλάξεων του EGFR στα εξόνια 18, 19, 20, ή 21 (24,5%, 51/208? Πίνακας S1). Μεταλλάξεις στο εξόνιο 18 του EGFR ταυτοποιήθηκαν σε 3 περιπτώσεις? ένα εξόνιο 19 διαγραφή ταυτοποιήθηκε σε 21 περιπτώσεις, και μεταλλάξεις στα εξώνια 20 και 21 μεταλλάξεις ανιχνεύθηκαν σε 6 και 26 περιπτώσεις, αντίστοιχα. Πέντε περιπτώσεις εκτίθενται διπλές μεταλλάξεις σε αυτά τα εξώνια EGFR. Μεταξύ εξώνια 18-21, EGFR μεταλλάξεις συνέβησαν κυρίως στα εξώνια 19 και 21 (90,19%, 46/51). Σε συμφωνία με προηγούμενες εκθέσεις, ο ρυθμός μετάλλαξης του EGFR σε ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα (44,2%, 42/95) ήταν πολύ υψηλότερη από ότι σε ασθενείς με μη-αδενοκαρκινώματος (8,0%, 9/113?

P

= 0.000). Επιπλέον, ο ρυθμός μετάλλαξης EGFR ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε άνδρες ασθενείς (15,0%, 22/147) από ότι σε γυναίκες ασθενείς (47,5%, 29/61?

P

= 0,000). Μεταξύ των μη-καπνιστών, ο ρυθμός μετάλλαξης του EGFR ήταν 42,3% (33/78), πολύ υψηλότερη από ότι στους καπνιστές (13,9%, 18/130?

P

= 0.000). Δεν ενώσεις εντοπίστηκαν μεταξύ γονιδιακές μεταλλάξεις του EGFR και την ηλικία, το κλινικό στάδιο, το μέγεθος του όγκου ή την κατάσταση μετάσταση των ασθενών (Πίνακας 3).

Μεταξύ των 208 ασθενών, 6 περιπτώσεις πραγματοποιείται μεταλλάξεις KRAS (2,88%, 6/208 ). Δεν ενώσεις ανιχνεύθηκαν μεταξύ των μεταλλάξεων KRAS και την ηλικία, το κλινικό στάδιο, το φύλο, την παθολογία, κατάσταση καπνίσματος, το μέγεθος του όγκου, ή τη μετάσταση κατάσταση των ασθενών (Πίνακας 3). Δεν EGFR /μεταλλάξεις KRAS εντοπίστηκαν μεταξύ EML4-ALK-θετικούς ασθενείς στη μελέτη μας.

Επιβίωση ανάλυση

Από τον Μάρτιο του 2011, 181 ασθενείς είχαν πλήρη στοιχεία πρόγνωση, συμπεριλαμβανομένων 49 θανάτων και 132 περιπτώσεις επιβίωσης. Διάμεση παρακολούθηση για όλη τη σειρά ήταν 591 ημέρες (εύρος από 0 ημέρες έως 1329 ημέρες). Πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση επιβίωσης αυτών των 181 ασθενών σε σχέση με την παρουσία γονιδίων σύντηξης EML4-ALK και μεταλλάξεις του EGFR /KRAS. Εντοπίσαμε 45 ασθενείς με μεταλλάξεις του EGFR, για τους οποίους η διάμεσος χρόνος επιβίωσης ήταν 19,3 μήνες (578 ημέρες? 124 έως 1281). Από τους 136 ασθενείς με φυσιολογική EGFR, ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης ήταν 19,8 μήνες (594,5 ημέρες? 0-1329). Η διαφορά στη διάμεση συνολική χρόνους επιβίωσης μεταξύ αυτών των ομάδων δεν ήταν στατιστικά σημαντική (

P

= 0,467). Εντοπίσαμε 4 ασθενείς με μεταλλάξεις KRAS, για τους οποίους ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης ήταν 16,3 μήνες (489 ημέρες? 233 έως 818). Από τους 177 ασθενείς με φυσιολογική KRAS, ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης ήταν 19,7 μήνες (592 ημέρες? 0-1329). Μεταξύ των 181 υποθέσεων, 7 ασθενείς έφεραν το γονίδιο σύντηξης μετατόπιση EML4-ALK. Η διάμεση παρακολούθηση αυτών των ασθενών ήταν 16,8 μήνες (504 ημέρες? 360 – 661), η οποία δεν ήταν σημαντικά διαφορετική σε σχέση με την ομάδα αρνητικού EML4-ALK με 33,4 μήνες (594,5 ημέρες? 0 – 1329) (

P

= 0,655).

μετα-ανάλυση των κλινικών χαρακτηριστικών που σχετίζονται με EML4-ALK μετατόπιση

Όπως φαίνεται στον πίνακα 4, η συστηματική ανάλυση της βιβλιογραφίας αποκάλυψε 14 δημοσιεύσεις ανάλυση της συχνότητας και κλινικά χαρακτηριστικά που συνδέονται με EML4-ALK μετατόπιση, συμπεριλαμβανομένων 2580 ασθενών με NSCLC. Από αυτούς, 125 ασθενείς (4,84%, 125/2580) έτρεφε την αναδιάταξη EML4-ALK. Η μετα-ανάλυση έδειξε ότι EML4-ALK μετατόπιση ήταν κυρίαρχη σε γυναίκες ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα. μελέτες Έντεκα (1825 περιπτώσεις) εξέτασαν μια συσχέτιση μεταξύ του καπνίσματος και της μετατόπισης EML4-ALK. Διαπιστώσαμε σημαντική προκατάληψη μεταξύ του καπνίσματος και το κάπνισμα σε ομάδες (

P

= 0,49), έτσι ώστε τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο τυχαίων επιδράσεων. Μια σημαντική διαφορά εντοπίστηκε στην κατάσταση θετικότητα EML4-ALK μεταξύ καπνιστών και μη καπνιστών (OR [95% CI] = 0,26 [0,16, 0,43], Ζ = 5,26?

P & lt? 0,05

) (Σχήμα 6Α) . Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το κάπνισμα συσχετίστηκε σημαντικά με την μετατόπιση EML4-ALK. Εννέα εκθέσεις (1413 περιπτώσεις) αξιολόγησε τη μετατόπιση EML4-ALK σε αδενοκαρκίνωμα και μη-αδενοκαρκινώματος ομάδες. Διαπιστώσαμε σημαντική προκατάληψη μεταξύ των δύο ομάδων (

P

= 0,50), έτσι χρησιμοποιήθηκε ένα σταθερό μοντέλο επιπτώσεις. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η συχνότητα μετατόπισης EML4-ALK διέφεραν στην ομάδα αδενοκαρκίνωμα σε σύγκριση με την ομάδα μη-αδενοκαρκινώματος (OR [95% CI] = 2,07 [1,11, 3,84], Ζ = 2,30?

P & lt? 0,05

) (Σχήμα 6Β). μελέτες Έντεκα (1777 περιπτώσεις) αξιολόγησε τη μετατόπιση EML4-ALK σε αρσενικά και θηλυκά ομάδες. Εμείς δεν βρήκε καμία σημαντική προκατάληψη μεταξύ των δύο ομάδων (

P

= 0,95) και αναλύονται τα δεδομένα χρησιμοποιώντας ένα σταθερό μοντέλο εφέ. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των αρσενικών και θηλυκών ομάδες. (OR (95% CI) = 0,64 [0.40,1.04] Ζ = 1,80,

P

& gt? 0,05). (Σχήμα 6C)

(Α) Μετα-ανάλυση χρησιμοποιώντας ένα τυχαίο εφέ μοντέλο έδειξε ότι το κάπνισμα συσχετίστηκε σημαντικά με EML4-ALK μετατόπιση? (Β) Μετα-ανάλυση των δεδομένων χρησιμοποιώντας ένα σταθερό μοντέλο αποτελέσματα έδειξαν ότι το αδενοκαρκίνωμα (AD) συσχετίζεται σημαντικά με την μετατόπιση EML4-ALK. Η μετατόπιση ήταν σημαντικά συχνότερη στην ομάδα διαφημίσεων σε σχέση με την ομάδα που δεν AD? (Γ) Μετα-ανάλυση χρησιμοποιώντας ένα σταθερό μοντέλο αποτελέσματα πρότειναν ότι το φύλο δεν συσχετίστηκε σημαντικά με EML4-ALK συχνότητα μετατόπισης.

Η

Συζήτηση

Ο καρκίνος του πνεύμονα είναι μια καταστροφική ασθένεια συνδέεται με ένα ποσοστό επιβίωσης 5 ετών περίπου 10-15%. Παρά το γεγονός ότι νέα χημειοθεραπευτικά φάρμακα έχουν αναπτυχθεί κατά τη διάρκεια των δύο τελευταίων δεκαετιών, εξακολουθεί να υπάρχει επείγουσα ανάγκη για περισσότερο αποτελεσματικές θεραπείες. Μοριακά στοχευμένες θεραπείες παρουσιάσει μια νέα στρατηγική που απέδειξε πρόσφατα τη σημασία των ασθενών υπο-ταξινόμηση σύμφωνα με βιολογικό χαρακτηριστικά όγκου-ειδικό.

EGFR και KRAS είναι δύο σχετικά μόρια στον NSCLC και EGFR είναι στοχευμένες με EGFR-TKIs. Αυτά τα φάρμακα παρουσιάζουν μεγάλο δυναμικό στη θεραπεία των ασθενών με προχωρημένο NSCLC. Πολυάριθμες εκθέσεις έχουν επιβεβαιώσει ότι η αποτελεσματικότητα του EGFR-TKIs συσχετίζεται με EGFR εξόνιο μεταλλάξεις [5], [8], και ότι η συχνότητα των μεταλλάξεων του EGFR είναι υψηλότερο μεταξύ Ασιάτες, μη-καπνιστές, γυναίκες, και οι ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα. Soda et al. (2007) πρότεινε ένα πρόσθετο σημαίνουσα ενδεχομένως ογκογόνο συμβάν στον καρκίνο του πνεύμονα: σύντηξη του γονιδίου EML4 (περιοχή που αντιστοιχεί στο Ν-τερματικό τμήμα) με το γονίδιο ALK (περιοχή που αντιστοιχεί στο τμήμα ενδοκυτταρική σηματοδότηση) για να δημιουργήσει ένα γονίδιο σύντηξης EML4-ALK . Η μετατόπιση EML4-ALK αντιπροσωπεύει μια νέα υποομάδα των ασθενών με NSCLC που ανταποκρίνονται θετικά σε αναστολείς ALK [11], [20].

Η δουλειά μας επιβεβαιώνει την συχνότητα (24,5%) των μεταλλάξεων του EGFR σε ένα μη επιλεγμένο κινεζικού πληθυσμού της ασθενείς με NSCLC. Μεταξύ εξώνια 18-21, EGFR μεταλλάξεις συμβαίνουν κατά κύριο λόγο (90,19%) στα εξώνια 19 και 21. Σε συμφωνία με προηγούμενες εκθέσεις, αυτές οι μεταλλάξεις που εντοπίζονται σε υψηλές συχνότητες στις γυναίκες, ποτέ καπνιστές, άτομα Ασιατικής καταγωγής, και οι ασθενείς αδενοκαρκίνωμα. Είναι ενδιαφέρον ότι, η συχνότητα εμφάνισης (6/208, 2,88%) του KRAS μεταλλάξεις στην ομάδα μελέτης μας ήταν πολύ χαμηλά σε σύγκριση με τις δυτικές χώρες (12-25%) [21].

Η δουλειά μας επιβεβαιώνει επίσης τη χαμηλή συχνότητα ( 7/208, 3,37%) της μετατόπισης EML4-ALK σε ασθενείς με ΜΜΚΠ επιλεγμένο, η οποία είναι συνεπής με την μετα-ανάλυση των κλινικών χαρακτηριστικών που σχετίζονται με τη μετατόπιση EML4-ALK στη δημοσιευμένη βιβλιογραφία (4,84%). Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει ότι ο επιπολασμός των μεταλλάξεων EML4-ALK στην κινεζική πληθυσμού είναι παρόμοια με αυτή που προηγουμένως δημοσιευθεί για τους πληθυσμούς άλλων εθνοτήτων. Η μετατόπιση EML4-ALK δεν μπορεί να συνδέεται με μια συγκεκριμένη εθνότητα, σε αντίθεση με μεταλλάξεις του EGFR σε Ασιάτες. Επιπλέον, η ανάλυση των παραλλαγών μετάλλαξης EML4-ALK αποκάλυψε ότι παραλλαγή 3 μπορεί να είναι το κυρίαρχο παραλλαγή μεταξύ των ασθενών κινέζικα NSCLC με περισσότερο από το ήμισυ των μετατοπίσεων EML4-ALK εμφανίζουν συντήξεις μεταξύ εξονίου 6 του EML4 και εξονίου 20 του ALK. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν επίσης ότι ο επιπολασμός της μετάλλαξης EML4-ALK δεν μπορεί να ποικίλουν ανάλογα με την εθνικότητα, αλλά ότι μια συγκεκριμένη παραλλαγή μπορεί να είναι διαδεδομένη σε μια συγκεκριμένη εθνοτική ομάδα.

Τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν περαιτέρω ότι η μετατόπιση EML4-ALK εμφανίζεται κυρίως σε θηλυκά, δεν είχαν καπνίσει ποτέ, και οι ασθενείς αδενοκαρκίνωμα. Αυτά τα αποτελέσματα ήταν διαφορετική από την μετα-ανάλυση των δύο φύλων, στην οποία δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των αρσενικών και θηλυκών ομάδες. Στη μελέτη μας, τα 7 ALK-θετικές περιπτώσεις ήταν γυναίκες, και ο λόγος μπορεί να οφείλεται στο πολύ υψηλότερο ποσοστό του καπνίσματος στους άνδρες από εκείνη στις γυναίκες στην Κίνα. Περαιτέρω ανάλυση απέδειξε ότι η συχνότητα εμφάνισης της EML4-ΑΙΚ μετατόπιση σε γυναίκες, το κάπνισμα, οι ασθενείς αδενοκαρκίνωμα είναι τόσο υψηλό όσο 15,2%. Τα χαρακτηριστικά αυτά έχουν μεγάλη σημασία, διότι θηλυκό, Απαγορεύεται το κάπνισμα, οι ασθενείς αδενοκαρκίνωμα συνήθως επιλέγονται να επωφεληθούν από τη θεραπεία EGFR-ΤΚΙ, που υποδεικνύει ότι η οθόνη μετατόπιση EML4-ALK πρέπει να προηγείται θεραπεία ΤΚΙ. Οι EGFR /μεταλλάξεις KRAS και η μετατόπιση EML4-ALK ονομάζονται μεταλλάξεις του οδηγού, επειδή είναι υπεύθυνοι τόσο για την έναρξη και διατήρηση του καρκίνου του πνεύμονα. Οι ασθενείς που φιλοξενούν τη μετατόπιση EML4-ALK δεν είναι συνήθως ανταποκρίνεται στη θεραπεία EGFR-ΤΚΙ, αλλά μπορεί να είναι ευαίσθητη σε αναστολείς ALK [11], [20].

Στη μελέτη μας, η σύγκριση της κατάστασης σύντηξης EML4-ALK με την παρουσία του EGFR και KRAS μεταλλάξεις στα ίδια δείγματα καρκίνου του αποκάλυψε ότι EML4-ΑΙΚ συντήξεις συνέβη σε απουσία EGFR ή KRAS μεταλλάξεις. Αν και προηγούμενες εκθέσεις έχουν δείξει ότι ALK σύντηξης μπορεί να συμβεί ταυτόχρονα με μεταλλάξεις του EGFR (1/305) και μεταλλάξεις KRAS (1/120), αυτά μπορεί να είναι σπάνια γεγονότα [7], [22]. Περαιτέρω ανάλυση έδειξε στις 32 περιπτώσεις μη καπνιστές, οι γυναίκες, οι ασθενείς αδενοκαρκίνωμα ότι η συχνότητα των μεταλλάξεων εξόνιο EGFR και EML4-ALK μετατόπιση ήταν 62,5 %% (20/32) και 15,63% (5/32) αντίστοιχα, η οποία καλύπτει όλα 78,13% (25/32) των ασθενών αυτών. Επιπλέον, Sasaki et al. πρόσφατα ανέφερε ότι το 6% (3/50) των NSCLC πρωτοθεραπευόμενους ασθενείς με ALK αναδιάταξη είχαν ταυτόχρονη EGFR ενεργοποίηση μεταλλάξεων και ότι η αναδιάταξη ALK ήταν ανενεργό σε αυτούς τους ασθενείς λόγω της μετάλλαξης του EGFR [23]. Δεδομένου ότι οι περισσότεροι ασθενείς με EML4-ALK συντήξεις δεν εμφανίζουν EGFR μεταλλάξεις, ένα συγκεκριμένο μοριακό υποσύνολο αδενοκαρκινώματα χαρακτηρίζεται από EML4-ALK σύντηξης [14]. Σήμερα, ορισμένες ειδικές μοριακές φάρμακα για EML4-ALK σύντηξης που χρησιμοποιείται για τη θεραπεία ασθενών με NSCLC με EML4-ALK μετατόπιση. Ως εκ τούτου, μια κλιμακωτή προσέγγιση για την ανίχνευση γονιδιακών μεταλλάξεων σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα προτείνεται: πρώτα για KRAS, το δεύτερο για EGFR, και στη συνέχεια μετατόπιση EML4-ALK. Εάν ένας όγκος είναι θετικό για μετάλλαξη KRAS, καμία περαιτέρω μοριακή δοκιμή απαιτείται, και οι συστάσεις θεραπεία θα επικεντρωθεί σε χημειοθεραπεία, επειδή οι όγκοι που φέρουν σωματικές μεταλλάξεις στο γονίδιο KRAS, το οποίο κωδικοποιεί ένα ΟΤΡάσης κατάντη του EGFR, εμφανίζουν μεγαλύτερη αντίσταση σε αυτά τα φάρμακα που στοχεύουν. Εάν ο όγκος είναι αρνητική, θα δοκιμαστεί για μεταλλάξεις του EGFR και EML4-ALK μετατόπισης. Ένα θετικό αποτέλεσμα είτε EGFR μετάλλαξη ή EML4-ALK μετατόπιση θα προκαλέσει μια στοχευμένη θεραπεία:. Ένα ΤΚΙ EGFR ή έναν αναστολέα ALK

Για την παθολογική ανάλυση, τη δομή ηθμοειδή, παρουσία βλεννωδών κυττάρων, εξωκυττάρια βλέννα, και η έλλειψη σημαντικών πυρηνικών πλειομορφία, θα μπορούσαν όλα να εξεταστεί υπό το EML4-ALK αναδιατάσσονται καρκίνου, η οποία ήταν παρόμοια με τα ευρήματα σε προηγούμενη έκθεση [18]. «Μοτίβο Στερεά σφραγίδα δακτύλιο κυττάρων» και «βλεννώδες μοτίβο ηθμοειδή» είναι δύο αναγνωρίσιμα cytoarchitecures παρόν τουλάχιστον εστιακά στην πλειοψηφία των ALK-θετικούς όγκους [18]. Όσον αφορά αυτά τα δύο πρότυπα, δεν είδαμε μια σημαντική διαφορά μεταξύ στερεών μοτίβο κυττάρων σφραγίδα δακτύλιο και βλεννώδες μοτίβο ηθμοειδή σε όλες τις θετικές περιπτώσεις ALK στη μελέτη μας (4/7 έναντι 3/7, αντίστοιχα). Είναι ενδιαφέρον, ALK αποτελέσματα ανοσοχρώση μας έδειξαν ότι δεν είναι όλα τα καρκινικά κύτταρα είχαν ALK-θετική χρώση στην πρωτοβάθμια θέσεις, ιδιαίτερα στην αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, σε αντίθεση με άλλες μελέτες αναφέρουν ότι οι πλακώδες καρκίνωμα συστατικό λεκέδες θετική [18], [24]. Ακόμη πιο απροσδόκητα, βρήκαμε ότι το 50% των μεταστατικών όγκων ήταν εντελώς αρνητικά για ALK ανοσοχρώση (IHC και IF). Αυτό το φαινόμενο βρέθηκε επίσης σε άλλες μελέτες με μεταλλάξεις του EGFR, η οποία έδειξε 38.0% των όγκων (30, 79) που έχει ένα ενδονεοπλασματική ετερογένεια του

EGFR

μεταλλάξεων και 62,0% (49 από 79) να είναι ομοιογενής, είτε με

EGFR

μετάλλαξη ή χωρίς μετάλλαξη [25]. ανοσοχρώση μας επιβεβαίωσε επίσης εντός του όγκου ετερογένεια της ALK αναδιάταξη σε πρωτογενείς όγκους, και στη γνώση μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση σχετικά με ALK αναδιάταξη στον καρκίνο του πνεύμονα σε θέσεις μεταστατικού έναντι πρωτογενούς sites, τα οποία έδειξαν μοριακές διαφορές. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η έκφραση γονιδίου στο μεταστατικού όγκου δεν είναι εντελώς όμοια με αυτή του πρωτογενούς όγκου. Για τους ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με τα φάρμακα μοριακό στόχο, τα αποτελέσματα αυτά επισημαίνουν επίσης ότι η νέα μοριακή ανίχνευση είναι πολύ απαραίτητο για αυτούς τους ασθενείς με νέες μεταστατικές θέσεις, ειδικά για τους ασθενείς με NSCLC με EML4-ALK μεταθέσεις.

Εν ολίγοις, επιβεβαιώνουμε ότι οι μεταλλάξεις του EGFR εξόνιο είναι συχνή σε ασθενείς με ΜΜΚΠ, ιδίως για τις γυναίκες, τους μη καπνιστές, και οι ασθενείς αδενοκαρκίνωμα. EML4-ALK μετατοπίσεις είναι σπάνιες σε ολόκληρο τον πληθυσμό ασθενών με NSCLC, αλλά είναι συχνές στην υποομάδα των ασθενών με NSCLC των γυναικών, το κάπνισμα, οι ασθενείς αδενοκαρκίνωμα. Η παρουσία ενός μετατόπισης EML4-ALK με ταυτόχρονη μεταλλάξεις του EGFR /KRAS είναι πολύ σπάνια μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η ανίχνευση της μετατόπισης EML4-ALK σε υποομάδες των ασθενών με NSCLC είναι ζωτικής σημασίας για την εφαρμογή στοχευμένης θεραπείας.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα

Δείγματα ελήφθησαν από 208 ασθενείς με ΜΜΚΠ που υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή του πρωτοπαθούς καρκίνου του πνεύμονα στο Τμήμα του καρκίνου του πνεύμονα χειρουργική, Tianjin Ιατρικό Πανεπιστημιακό Γενικό Νοσοκομείο για τη διάγνωση και τη θεραπεία κατά τη διάρκεια του 2006-2010. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε, και η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικών Δεοντολογίας της Tianjin Ιατρικό Πανεπιστήμιο Γενικό Νοσοκομείο. Τα κριτήρια συμπερίληψης ήταν: (1) η χειρουργική θεραπεία χωρίς προηγούμενη χημειοθεραπεία ή θεραπεία με EGFR-TKIs? (2) σαφή διάγνωση NSCLC? και (3) τη διαθεσιμότητα των ιστών για τις μελέτες βιοδεικτών. Κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών που συμπεριλήφθηκαν αναλύονται στον Πίνακα 1. Lung σταδιοποίηση του καρκίνου για κάθε ασθενή πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τα καρκινικά AJCC Σταδιοποίηση Manual, 7η έκδοση. Οι ασθενείς σε αυτή τη μελέτη ήταν δυσανάλογα ταξινομήθηκαν σε στάδιο III, διότι αυτό το στάδιο του καρκίνου του πνεύμονα σχετίζεται με χειρουργική θεραπεία. χρόνος επιβίωσης υπολογίστηκε από την ημέρα της εκτομής μέχρι τις 6 Απριλίου 2011. οι διαχωρισμένοι ιστοί πνεύμονα αμέσως εμβαπτίζεται σε υγρό άζωτο.

H2228, ανθρώπινο πνεύμονα κυτταρική γραμμή αδενοκαρκινώματος με γονίδιο σύντηξης EML4-ALK, ήταν από την American Tissue Culture Collection (ATCC), και διατηρήθηκε σε ϋΜΕΜ που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου (GIBCO) στους 37 ° C με 5% CO

2.

απομόνωση του RNA και την αντίστροφη μεταγραφή

Κατεψυγμένα ιστούς (50-100 mg) αλέσθηκαν σε σκόνη σε υγρό άζωτο και εναιωρήθηκαν σε 1 ml αντιδραστήριο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, USA) για συνολική εκχύλιση RNA, σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Ολικό RNA ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο (Beckman Coulter-, USA), και η ποιότητα του εκτιμήθηκε με ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης. Ολικό RNA (2 μα) μεταγράφηκε αντίστροφα (RT) χρησιμοποιώντας τα M-MLV αντίστροφη μεταγραφάση (Promega, USA), με μικρές τροποποιήσεις με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή.