Αφηρημένο

Διπλή χρωμοσώματα λεπτό (DMS) έχουν σημαντικές συνέπειες για την εξέλιξη του καρκίνου, επειδή ογκογονίδια ενισχύονται συχνά σε αυτά. Έχουμε ήδη εντοπιστεί ένα λειτουργικά απροσδιόριστο γονίδιο ενισχύθηκε για DMS, Ριβοσωματιακής L22-like1 (

RPL22L1

). Η σχέση μεταξύ του

RPL22L1

και εξέλιξη του καρκίνου είναι άγνωστη. Εδώ,

RPL22L1

χαρακτηρίστηκε για το ρόλο της στον καρκίνο των ωοθηκών (OC) μετάσταση και υποκείμενο μηχανισμό της εξετάστηκε. αριθμό αντιγράφων του DNA και η έκφραση του mRNA της

RPL22L1

στα κύτταρα OC αναλύθηκε χρησιμοποιώντας δεδομένα που λαμβάνονται από τον καρκίνο Genome Atlas και έκφραση του γονιδίου της βάσης δεδομένων Omnibus. Μία ανοσοϊστοχημική ανάλυση δειγμάτων κλινικής OC εκτελέστηκε και οι σχέσεις μεταξύ του επιπέδου έκφρασης και κλινικοπαθολογικών παράγοντες αξιολογήθηκαν. Επιπλέον,

in vivo

και

in vitro

δοκιμασίες διεξήχθησαν για να κατανοήσουν το ρόλο του

RPL22L1

σε OC. έκφραση RPL22L1 ήταν υψηλότερη στα δείγματα OC σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς, και το επίπεδο έκφρασης της ήταν ιδιαίτερα θετικά με μετάσταση εισβολή και λεμφαδένα (

P

& lt? 0,05).

RPL22L1

υπερ-έκφραση ενισχύεται σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου ενδοπεριτοναϊκή ξενομοσχεύματος σε γυμνά ποντίκια και προώθησε την εισβολή και τη μετανάστευση

in vitro

. Επιπλέον,

RPL22L1

νοκ ντάουν αξιοσημείωτα ανέστειλε UACC-1598 κύτταρα εισβολής και της μετανάστευσης. Περαιτέρω,

RPL22L1

υπερέκφραση πάνω ρυθμισμένα ο δείκτες μεσεγχυματικά βιμεντίνη, ινωδονεκτίνη, και α-SMA, μειωμένη έκφραση των επιθηλιακών δεικτών Ε-καδερίνης, α-κατενίνης, και β-κατενίνης.

RPL22L1

αναστολή μειωμένη έκφραση της βιμεντίνης και N-cadherin. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι

RPL22L1

προκαλεί επιθηλιακών-to-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT). Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι οι DMS ενισχυμένο γονίδιο

RPL22L1

είναι κρίσιμη για τη διατήρηση της επιθετικής φαινότυπο του οργανωμένου εγκλήματος και στην ενεργοποίηση μετάσταση των κυττάρων από επαγωγή EMT. Θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως ένα νέο προγνωστικό δείκτη ή /και αποτελεσματικό θεραπευτικό στόχο για OC

Παράθεση:. Wu Ν, Wei J, Wang Υ, Yan J, Τσιν Υ, Tong D, et al. (2015) Ριβοσωματιακής L22-like1 (

RPL22L1

) Προωθεί καρκίνου των ωοθηκών Μετάσταση επάγοντας Τα επιθηλιακά-to-μεσεγχυματικά μετάβαση. PLoS ONE 10 (11): e0143659. doi: 10.1371 /journal.pone.0143659

Επιμέλεια: Xin Yuan-Γκουάν, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, την Κίνα

Ελήφθη: 5 Αυγούστου 2015? Αποδεκτές: 6 Νοεμ 2015? Δημοσιεύθηκε: 30 του Νοεμ 2015

Copyright: © 2015 Wu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: αριθμός αντιγράφων του DNA δεδομένα ανάλυσης μπορούν να ληφθούν από oncomine.org (https://www.oncomine.org/resource/main.html) και όλα τα λεπτομερή βήματα βρίσκονται εντός του χαρτιού. Όλα τα άλλα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το πρόγραμμα για Changjiang μελετητές και τα καινοτόμα ερευνητική ομάδα του Πανεπιστημίου (Grant Νο IRT1230 να YJ), το Εθνικό Φυσικό Ίδρυμα Επιστημών της Κίνας (Grant Νο 81371617 έως YJ), το θεμέλιο Εξαιρετική Νεολαίας της επαρχίας Heilongjiang της Κίνας (Grant Νο JC201215 να YJ)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών (OC) είναι η δεύτερη πιο συχνή γυναικολογική κακοήθεια και η πρώτη αιτία θανάτου [1]. μετάστασης του καρκίνου, αντί πρωτογενών όγκων, είναι υπεύθυνες για το μεγαλύτερο μέρος των θανάτων από καρκίνο [2]. Λόγω της έλλειψης των οριστικών πρώιμα συμπτώματα και τα κατάλληλα δείκτες για διάγνωση OC σε ένα πρώιμο στάδιο, η πλειονότητα των ασθενών έχουν διαγνωσθεί με τελικού σταδίου OC συνοδεύεται με μετάσταση, η οποία τυπικά έχει ποσοστό επιβίωσης 5 ετών & lt? 30% [3]. Είναι κρίσιμο να κατανοήσουμε τους μοριακούς μηχανισμούς που εμπλέκονται στη μετάσταση OC, και να καθορίσει αποτελεσματικές, συγκεκριμένες και ευαίσθητα μοριακούς στόχους που μπορούν να εφαρμοστούν για τη διάγνωση μετάστασης, πρόγνωση, και ατομική μεταχείριση.

χρωμοσώματα διπλό λεπτό (DMS) είναι κυτταρογενετική χαρακτηριστικά της γονιδιακής ενίσχυσης [4]. DMS εμφανίζονται σε διάφορα είδη ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων, αλλά όχι σε φυσιολογικά κύτταρα [5]. Όπως εξωχρωμοσωμικά στοιχεία που μεταφέρουν επιμηκύνσεις των γονιδιωματικών αλληλουχιών DNA, DMS συμβάλουν στο σχηματισμό και την εξέλιξη του καρκίνου, ογκογονίδια είναι συχνά παρούσα στις ενισχυμένες αλληλουχίες και οι πρωτεΐνες που κωδικοποιούν είναι συχνά υπερεκφράζεται [6]. Τα παραδείγματα των γονιδίων που ενισχύονται σε DMS περιλαμβάνουν

MYC

στον καρκίνο του παχέος εντέρου [7],

MYCN

στο νευροβλάστωμα [8],

EGFR

στα γλοιώματα [9], και

EIF5A2

[10, 11], στον καρκίνο των ωοθηκών [12]. Όπως DMS είναι οχήματα ενισχυμένα γονίδια συμπεριλαμβανομένων πολλών ογκογονιδίων, λειτουργικές μελέτες γονιδίων που ενισχύονται σε DMS είναι ένας καλός τρόπος για να εξερευνήσετε υποψήφιο ογκογονίδια.

Η ομάδα προηγουμένως εντοπιστεί 3q26.2 μας ως προέλευση του DMS στο ανθρώπινο καρκίνο ωοθηκών κυτταρική σειρά UACC-1598, και μια σειρά από γονίδια συν-ενισχύθηκαν με τους ίδιους DMS ωοθηκών, συμπεριλαμβανομένων των

MYCN

,

EIF5A2

, και

RPL22L1

[13 ]. Τόσο

MYCN

και

EIF5A2

παίζουν σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου. Ωστόσο, η σχέση μεταξύ του

RPL22L1

και ο καρκίνος δεν είναι γνωστή.

Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι

RPL22L1

είναι συνήθως υπερεκφράζεται σε άτομα κλινική OC και η έκφρασή του επίπεδο συνδέεται στενά με την εισβολή και μετάσταση όγκου. Ένα

in vivo

πείραμα έδειξε ότι η αναγκαστική έκφραση του

RPL22L1

προωθεί ενδοπεριτοναϊκή ανάπτυξη ξενομοσχεύματος όγκου σε γυμνούς ποντικούς, και ενισχύει την κυτταρική μετανάστευση και εισβολή

in vitro

. Επιπλέον, να χτυπήσει κάτω με μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) αναστέλλει τη μετανάστευση και την εισβολή

in vitro

. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας,

RPL22L1

υπερέκφραση οδήγησε σε αυξημένη έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών όπως βιμεντίνη και α-SMA, και μειωμένη έκφραση των επιθηλιακών δεικτών, όπως Ε-καδερίνης, α-κατενίνης, και β-κατενίνη , υποδεικνύοντας ότι η επαγωγή της επιθηλιακής προς μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) μπορεί να εξηγήσει τις παρατηρούμενες αυξήσεις στην κινητικότητα και την εισβολή ικανότητα για μετάσταση. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι το

RPL22L1

παίζει σημαντικό ρόλο στη διαδικασία της μετάστασης OC.

Υλικά και Μέθοδοι

ηθική δήλωση

Αυτή η μελέτη έχει εγκριθεί από η Επιτροπή Δεοντολογίας της Harbin Ιατρικό Πανεπιστήμιο με τον ακόλουθο αριθμό αναφοράς, HMUIRB20150023. Οι μικροσυστοιχίες ωοθηκών ιστού (TMAs) για ανοσοϊστοχημεία αγοράστηκαν από ΗΠΑ ΒΙΟΜΑΧ (ov951, ov1912, ov6161? Rockville, MD, USA) και Xin Chao (Hova-Can90PT-01? Σαγκάη, Κίνα). Και οι δύο εταιρείες παρείχαν ηθική δηλώσεις για να επιβεβαιώσουν ότι οι τοπικές επιτροπές δεοντολογίας εγκεκριμένες διαδικασίες συγκατάθεσή τους, όλοι οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή πληροφορημένες συγκαταθέσεις τους και όλες οι προσπάθειες είχαν γίνει για την προστασία της ιδιωτικής ζωής και της ανωνυμίας του ασθενούς. Οι ηθικές δηλώσεις που παρέχονται από τις επιχειρήσεις και το πρωτόκολλο του πειράματος είχαν ελεγχθεί προσεκτικά και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Harbin Ιατρικό Πανεπιστήμιο (HMUIRB20150023). Τέσσερις-εβδομάδων θηλυκά BALB /c ποντίκια (ειδικό-άνευ παθογόνων) αγοράστηκαν από SLAC (Σαγκάη, Κίνα) και στεγάζεται στο Εργαστήριο Ζώων Harbin Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Οι ποντικοί στεγάστηκαν κάτω από τυποποιημένες συνθήκες φωτός ελέγχονται σε θερμοκρασία δωματίου (24 ° C) και 50% υγρασία, με ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό. πειράματα σε ζώα έγιναν αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις στις κατευθυντήριες γραμμές του Εργαστηρίου ζώων Χρήση του Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Harbin Ιατρικό Πανεπιστήμιο (HMUIRB20150023) και όλες τις προσπάθειες που έγιναν για να ελαχιστοποιήσουν την ταλαιπωρία.

Οι κυτταρικές σειρές και κυτταρική καλλιέργεια

Ανθρώπινο καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών γραμμή UACC-1598, SKOV3, HO-8910, και HO-8910PM αγοράστηκαν από το Type Culture Collection της κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα). Όλα τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σύμφωνα με τις μεθόδους που περιγράφονται από την ATCC (Manassas, VA, USA), και δεν κυρώθηκαν το 2012 το Micro-διαβάσει Genetics Company (Πεκίνο, Κίνα) χρησιμοποιώντας μια σύντομη ανάλυση διαδοχικών επαναλήψεων.

Προετοιμασία επαλείψεων μετάφασης και του φθορισμού

in situ

υβριδισμός (FISH) ανάλυση

τα κύτταρα συλλέχθηκαν για παρασκευή μετάφαση εξάπλωση σύμφωνα με τις μεθόδους που περιγράφονται σε προηγούμενες μελέτες [14, 15] και βάφτηκαν με Giemsa. Δύο BAC κλώνοι, GFP-RP11-355H10, η οποία καλύπτει ειδικά το

MYCN

(ενισχυμένο σε UACC-1598 και βρίσκεται στην DMS [13]), και Cy3-RP11-726H11 για

RPL22L1

, επελέγησαν ως ανιχνευτές DNA και υβριδοποιήθηκε σε μετάφαση επάλειψη των κυττάρων όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. Τα χρωμοσώματα βάφτηκαν αντίθετα με DAPI (4, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη). Εικόνες συλλήφθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Leica DM5000 B φθορισμού μικροσκόπιο (Wetzlar, Γερμανία), και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το σύστημα MetaMorph Imaging (Universal Imaging Corporation, West Chester, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ).

αριθμό αντιγράφων του DNA και ανάλυση γονιδιακής έκφρασης

Οι Oncomine DNA Αριθμός Αντιγραφή Σύνολα (https://www.oncomine.org/resource/main.html) περιλαμβάνει στοιχεία που κατατέθηκαν στον Καρκίνο Γονιδιώματος Atlas (TCGA ωοθηκών 2 Σύνολο δεδομένων, http: //TCGA-δεδομένων. nci.nih.gov/tcga/) χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό των διαφορών σε αριθμό αντιγράφων του DNA μεταξύ OC και φυσιολογικούς ιστούς αίματος /ωοθηκών. 607 ωοθηκών ορώδες κυσταδενοκαρκίνωμα, 431 φυσιολογικό αίμα, και 130 δείγματα φυσιολογικού ιστού ωοθηκών αναλύθηκαν. Τα δεδομένα ελήφθησαν με τα ακόλουθα βήματα: όνομα του γονιδίου τύπου:

RPL22L1

στο πλαίσιο αναζήτησης και στο δέντρο περιήγησης, επιλέξτε Δημοτικό Φίλτρα & gt? Σύνολα δεδομένων τύπου & gt? Αντιγραφή του DNA Αριθμός σύνολα δεδομένων. Το αποτέλεσμα της TCGA ωοθηκών 2 είναι κατευθείαν στο πρώτο, και το γράφημα ήταν στα αριστερά. Κάντε κλικ στο κουμπί ιστόγραμμα στην επάνω αριστερή γωνία του τίτλου γραφήματος για να πάρετε ένα γράφημα ιστόγραμμα. Σχετικά με τα φίλτρα ομάδα πάνω από τον τίτλο γραφήματος, κάντε κλικ στο σύμβολο τρίγωνο, στο μενού επιλεγεί «Καρκίνος και Κανονική Τύπος» για να κάνει την ανάλυση ομαδοποιημένες κατά του καρκίνου και φυσιολογικά δείγματα. πρόσβαση σε δεδομένα απαιτεί μια ακαδημαϊκή λογαριασμό email. Οι συγγραφείς θα πρέπει να επικοινωνήσετε για πληροφορίες σύνδεσης, εάν είναι απαραίτητο.

Χρησιμοποιήθηκαν δύο ανεξάρτητα σύνολα δεδομένων γονιδιακής έκφρασης μικροσυστοιχιών. Και τα δύο σύνολα δεδομένων δημιουργήθηκαν με τη χρήση του Affymetrix Human Genome U133 Plus πλατφόρμα 2,0 Array (Santa Clara, CA, USA). Τα αρχεία raw.CEL για τα δύο σύνολα δεδομένων είχαν κατεβάσει από το Gene Expression Omnibus (GEO) ιστοσελίδα (GSE27651 και GSE28450) [17, 18], και κανονικοποιούνται χρησιμοποιώντας το RMA (ισχυρή μέση multi-array) αλγόριθμο [19].

qRT-PCR

Ολικό RNA για κάθε κυτταρική σειρά εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας το υψηλής καθαρότητας Απομόνωση RNA Kit (Roche, Βασιλεία-Stadt, Ελβετία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. PrimeScript

® RT ΚΙΤ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Perfect Real Time (Takara, Dalian, Κίνα) χρησιμοποιήθηκε για την αντίστροφη μεταγραφή του συνολικού RNA. Το cDNA προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας LightCycler

® 480 SYBR Green Ι Μάστερ (Roche) σε LightCycler

™ 480 II σύστημα πραγματικού χρόνου (Roche). Οι ειδικοί εκκινητές για την ανθρώπινη

RPL22L1

και

GAPDH

είχαν ως εξής:

RPL22L1

εμπρόσθιος εκκινητής, 5′-AGAAGGTTAAAGTCAATGG-3 ‘και αντίστροφος εκκινητής, 5’-ATCACGAAGATTGTTCTTC- 3 ‘?

GAPDH

εμπρόσθιος εκκινητής, 5′-ATCACTGCCACCCAGAAGAC-3 ‘και αντίστροφος πριμοδότης, 5′-TTTCTAGACGGCAGGTCAGG-3’. Έκφραση του

RPL22L1

σε δείγματα ομαλοποιήθηκε με εκείνη του

GAPDH

και η πολλαπλή μεταβολή στην έκφραση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την 2

-ΔΔCt μέθοδο.

κηλίδας Western ανάλυση

τα κύτταρα λύθηκαν στους 4 ° C σε RIPA (8990, Thermo Fisher Scientific, Waltham, ΜΑ, USA). Τα κυτταρολύματα που περιέχουν 40μg συνολικής πρωτεΐνης από κάθε δείγμα φορτώθηκαν σε πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου δωδεκυλ νάτριο 12% και μεταφέρθηκαν σε μία μεμβράνη φθοριούχου πολυβινυλιδενίου (Millipore, Billerica, ΜΑ, USA). Μετά τον αποκλεισμό εντός διαλύματος αποκλεισμού 10% (Roche), οι μεμβράνες επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με πρωτεύοντα αντισώματα που ακολουθείται από 1-h επώαση με αντι-ποντικού /δευτερογενές αντίσωμα αντι-κουνελιού (200-332-263 /610-132-007 , Rockland Immunochemicals, Limerick, PA, USA) σε θερμοκρασία δωματίου. Εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας το Infrared System Οδύσσεια απεικόνισης (LI-COR Βιοεπιστημών, Lincoln, NE, USA) και κομμένα χρησιμοποιώντας το Adobe Photoshop CS5 (Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA), εκπρόσωπος της πέντε ανεξάρτητα πειράματα. GAPDH χρησιμοποιήθηκε σαν ένας έλεγχος. Οι λεπτομέρειες των πρωτογενών αντισωμάτων που παρέχονται στο συμπληρωματικό υλικό S1 Κείμενο

Ιστός μικροσυστοιχιών

Το OC μικροσυστοιχίες ιστού (TMAs) αγοράστηκαν από τις ΗΠΑ ΒΙΟΜΑΧ (ov951, ov1912, ov6161?. Rockville, MD, USA) και Xin Chao (Hova-Can90PT-01? Σαγκάη, Κίνα). Έγκριση για τη μελέτη αυτή ελήφθη πριν ξεκίνησε από την τοπική επιτροπή περιφερειακής δεοντολογίας. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες.

Η ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC) έγιναν μελέτες με PowerVision

™ Δύο Βήμα Αντιδραστήριο Histostaining (Zhongshan Χρυσή Γέφυρα, Πεκίνο, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, τα τμήματα TMA αποπαραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν. Για ανάκτηση αντιγόνου, TMA διαφάνειες ήταν μικροκύματα επεξεργασμένο σε ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού 10 mM (ρΗ 6,0) για 8 λεπτά. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% επί 10 λεπτά. Οι πλάκες TMA επωάστηκαν με μια αραίωση 1:50 μονοκλωνικών κατά της ανθρώπινης RPL22L1 (1:50) για μία νύχτα σε 4 ° C σε ένα υγρό θάλαμο. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν με διαδοχικά συζυγή υπεροξειδάσης κρένου αντίσωμα αιγός αντι-κουνελιού IgG για 30 λεπτά στους 37 ° C, και 3′-3 ‘διαμινοβενζιδίνη χρησιμοποιήθηκε ως το υπόστρωμα χρωμογόνου. Τέλος, όλες οι διαφάνειες επιχρωματίστηκαν για πυρήνες με αιματοξυλίνη, αφυδατώθηκαν, και τοποθετημένα. Για τον αρνητικό έλεγχο, το πρωτογενές αντίσωμα αντικαταστάθηκε με φυσιολογική IgG κουνελιού. RPL22L1 ανοσολογική αντίδραση σε δείγματα TMA αξιολογήθηκε από τρεις παθολόγους. Η ένταση της ανοσοδραστικότητας για TMAs βαθμολογήθηκε σε μια κλίμακα 0-3 με βάση τη συναίνεση των τριών ερευνητών.

Φορείς

RPL22L1

-ORF ενισχύθηκε με PCR και κλωνοποιήθηκε εντός του φορέα έκφρασης pcDNA3.1 (+) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Το siRNA (h) και siRNA ελέγχου αγοράστηκαν από RiboBio (Q000200916-1-Β, Guangzhou, Κίνα). Το πλασμίδιο αναφοράς λουσιφεράσης pGL4.17 παρασχέθηκε ευγενώς από τον Dr. ZH Zhong (Τμήμα Μικροβιολογίας, Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Harbin, Κίνα).

Η επιμόλυνση

Όλα τα πλασμίδια και τα siRNA επιμολύνθηκαν σε κύτταρα χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

Γυμνό όγκου μοντέλο ποντικού ξενομοσχεύματος

Τα πειράματα σε ζώα εγκρίθηκαν από την επιτροπή δεοντολογίας του Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο (HMUIRB20150023) και εκτελείται σύμφωνα με το Κατευθυντήριες γραμμές του Εργαστηρίου ζώων Χρήση του Χαρμπίν Ιατρικό Πανεπιστήμιο. Τέσσερις-εβδομάδων BALB /c γυμνούς θηλυκά ποντίκια είχαν τυχαιοποίηση εκχωρηθεί σε κάθε ομάδα, πέντε ποντικοί ανά ομάδα. Κάθε ποντικός εγχύθηκε με 1 × 10

6 κύτταρα (σε 200 μΐ ορού ρυθμισμένου με φωσφορικά [PBS]). Η ανάπτυξη του όγκου μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα μέσω απεικόνισης βιοφωταύγεια. Ποντικοί εγχύθηκαν ενδοπεριτοναϊκώς με 150 μg /g D-λουσιφερίνη (Biosynth, Naperville, IL) σε PBS και αναισθητοποιούνται με 2.5% ισοφλουράνιο. Φωτονίων που εκπέμπονται από τα ποντίκια που καταγράφονται από IVIS Lumina (Advanced Μοριακής Vision, Lincolnshire, UK) και παρουσιάζονται ως ψευδο-έγχρωμες εικόνες επικαλύπτονται σε ένα σώμα γκρι κλίμακας εικόνα. Όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με CO

2 εισπνοή 30 ημέρες μετά την ένεση. Για να εξασφαλιστεί θάνατο μετά CO

2 ασφυξία, αυχενική εξάρθρωση εκτελέστηκε.

Δοκιμασίες

μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή

Transwell κυτταρική μετανάστευση και εισβολή δοκιμασίες διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας ένθετα Corning 8,0-mm Transwell (8 μέγεθος -μm πόρων, πλάκα 24 φρεατίων) και BD BIOCOAT

™ Matrigel

™ εισβολή Επιμελητήρια (Corning Incorporated Life Sciences, Tewksbury, MA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

η επούλωση των τραυμάτων δοκιμασία

Η μονοστιβάδα κυττάρων γδαρμένο με μια 10-μΙ ρύγχος πιπέτας (σε ένα 6-φρεατίων). Φωτογραφίες (μεγέθυνση, χ 40) ελήφθησαν αμέσως και σε κάθε 24-h μετά τον τραυματισμό μέχρι τα τραύματα ήταν προφανώς επουλωθεί. Για κάθε δοκιμασία, τα πειράματα διεξήχθησαν σε εννέα διαφορετικές θέσεις και το σύνολο δοκιμασία επαναλήφθηκε τρεις φορές.

ανοσοφθορισμού χρώση

Τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν σε μεθανόλη και αποκλείστηκαν για 1-h με 10% φυσιολογικό ορό κατσίκας, 0,3% αλβουμίνη βόειου ορού, 0,05% σαπωνίνη και 0,3% Triton Χ-100 σε PBS. Τα πρωτογενή αντισώματα προστέθηκαν και επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Τα κύτταρα στη συνέχεια πλύθηκαν με PBS και επωάστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα φθορισμού επισημασμένο. Ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Leica) χρησιμοποιήθηκε για να συλλάβει τις εικόνες.

Στατιστικά

Τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης RPL22L1 της TMAs αναλύθηκαν από δοκιμές signed-rank Wilcoxon του. Το χ

δοκιμή 2 χρησιμοποιήθηκε για την εξέταση των ενώσεων μεταξύ γονιδιακή έκφραση και κλινικές παραμέτρους. Άλλα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέσο ± SD, και η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών μεταξύ δύο ομάδων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας δύο ουρών ανεξάρτητος του Student

t

-ΜΕΛΕΤΕΣ. Η στατιστική σημαντικότητα ανακηρύχθηκε εάν

P

& lt? 0.05. Οι υπολογισμοί έγιναν με τη χρήση του SPSS 13.0. (IBM? Armonk, NY, USA)

Αποτελέσματα

RPL22L1

ενισχύθηκε μέσω της DMS και υπερεκφράζεται σε UACC-1598 κύτταρα

το OC κυτταρική σειρά UACC-1598 περιείχαν ενισχυμένα γονίδια σε μορφή DMS. Oncogene ενισχύσεως επί DMS είναι αντιπροσωπευτική της ογκογένεσης, αλλά δεν παρουσιάζεται σε φυσιολογικά κύτταρα (Σχήμα 1Α). Χρησιμοποιώντας μια ανάλυση FISH, εντοπίσαμε ενισχυμένες περιοχές του

RPL22L1

εν λόγω συν-εντοπίζεται με

MYCN

σε DMS (Σχήμα 1Β). Επιπλέον, ανιχνεύσαμε την ενίσχυση της

RPL22L1

στην κανονική ωοθηκών ιστούς, ανθρώπινα λεμφοκύτταρα, και UACC-1598 κύτταρα χρησιμοποιώντας PCR (σχήμα 1Γ). Εξετάσαμε επίσης την ενίσχυση του

RPL22L1

σε άλλες τρεις κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών (S1 Εικ). RT-PCR επιβεβαίωσε την έκφραση του

RPL22L1

σε διαφορετικά δείγματα (Σχήμα 1 D). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι

RPL22L1

ενισχύθηκε μέσω της DMS σε UACC-1598 κύτταρα.

(Α) Εκπρόσωπος εικόνες των χρωμοσωμάτων μετάφασης της UACC-1598 και φυσιολογικά ανθρώπινα λεμφοκύτταρα. Τα βέλη δείχνουν DMS σε UACC-1598 κυττάρων (μεγέθυνση, × 1.000). (Β) Εκπρόσωπος εικόνες της ανάλυσης FISH. Μεταφάσης χρωμοσώματα του UACC-1598 και ανθρώπινα λεμφοκύτταρα ανιχνεύθηκαν με ανιχνευτές DNA. (Α) Κόκκινο ανιχνευτή υποδεικνύει

RPL22L1

και (β) το πράσινο ανιχνευτή υποδεικνύει

MYCN

? (Γ) και οι δύο ανιχνευτές που βρίσκεται στο ίδιο τόπο επί DMS όπως υποδεικνύεται από τα βέλη, (δ) το κόκκινο ανιχνευτής δεικνύει

RPL22L1

σε φυσιολογικά ανθρώπινα λεμφοκύτταρα (μεγέθυνση, χ 1000). (C) επίπεδα ενίσχυση του DNA των

RPL22L1

ανιχνεύεται με PCR, (Δ) RT-PCR αποτέλεσμα των επιπέδων έκφρασης του mRNA της

RPL22L1

σε διαφορετικά δείγματα.

Η

αριθμό αντιγράφων του DNA και το επίπεδο έκφρασης του

RPL22L1

σε κλινικά δείγματα OC

Για τον προσδιορισμό της ενίσχυσης του

RPL22L1

σε κλινικές, χρησιμοποιήσαμε το Oncomine βάση δεδομένων (https: //www .oncomine.org) για την ανάλυση των αριθμό αντιγράφων του DNA προφίλ του

RPL22L1

σε ένα σύνολο δεδομένων των ωοθηκών TCGA (TCGA ωοθηκών 2, https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/) [20 , 21]. Αυτό το σύνολο δεδομένων έδειξε σαφώς μια σημαντική αύξηση στον αριθμό των αντιγράφων του DNA των

RPL22L1

στο OC σε σύγκριση με το κανονικό αίμα και ωοθηκών ιστούς, όριο από

P

& lt? 10

-4 (Σχήμα 2Α).

(Α) αντίγραφο DNA προφίλ αριθμό

RPL22L1

σε ένα ωοθηκών ορώδες σύνολο δεδομένων κυσταδενοκαρκινώματος εγγεγραμμένοι στο Oncomine βάση δεδομένων (TCGA ωοθηκών 2 συνόλου δεδομένων) . Δύο ανεξάρτητα σύνολα δεδομένων γονιδιακής έκφρασης μικροσυστοιχιών (Β) GSE29405 και (Γ) GSE27651 από την ιστοσελίδα GEO χρησιμοποιήθηκαν για να εξεταστεί το επίπεδο έκφρασης του

RPL22L1

σε OC. Τα αρχεία raw.CEL για τις δύο βάσεις δεδομένων είχαν κατεβάσει και να ομαλοποιηθεί από RMA.

RPL22L1

ήταν περισσότερο εντόνως εκφρασμένο σε OC σε σχέση με το φυσιολογικό ιστό των ωοθηκών (*

P

& lt? 0,05, ανεξάρτητη Μαθητή

t

-τεστ). Εκπρόσωπος εικόνες της έκφρασης της πρωτεΐνης RPL22L1 στο (D) OC και (Ε) συνδυάζεται παρακείμενο φυσιολογικό ιστό από την IHC (μεγέθυνση, χ 400).

Η

Επιπλέον, λάβαμε δημοσίως διαθέσιμα σύνολα δεδομένων έκφρασης GEO για την ανάλυση της έκφρασης του

RPL22L1

σε δείγματα OC. Δύο σύνολα δεδομένων GEO με βάση την 2,0 Array Affymetrix Human Genome U133 Plus χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση

RPL22L1

επίπεδα έκφρασης mRNA σε OC και φυσιολογικούς ιστούς των ωοθηκών. Σε κάθε ένα από τα δύο σύνολα δεδομένων,

RPL22L1

έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη σε OC από το κανονικό ωοθηκών ιστούς (Σχήμα 2Β και 2Γ,

P

& lt? 0,05, t-test του Student).

για να εξετάσει περαιτέρω το επίπεδο έκφρασης της πρωτεΐνης του

RPL22L1

σε κλινικά δείγματα, τέσσερις OC TMAs χρησιμοποιήθηκαν για αναλύσεις IHC. Ένταση χρώσης εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας ένα δείκτη 0-3 στον πυρήνα του κυττάρου και στο κυτταρόπλασμα (S2 σχήμα). RPL22L1 εκφράστηκε ξεκάθαρα πιο πολύ στο OC κυτταρόπλασμα σε σύγκριση με εκείνη των γειτονικών φυσιολογικών ιστών (Σχήμα 2D και 2Ε) (

P

= 0,008, signed-rank test Wilcoxon του).

Εξετάσαμε το συσχετίσεις μεταξύ των επιπέδων έκφρασης της πρωτεΐνης RPL22L1 και κλινικοπαθολογική μεταβλητές. έκφραση RPL22L1 στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων OC συνδέθηκε έντονα με το στάδιο, εισβολή και μετάσταση στους λεμφαδένες (

P

& lt? 0,05, χ Pearson ‘s

2 τεστ, Πίνακας 1). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση του

RPL22L1

είναι συνήθως υψηλότερη σε κλινικά δείγματα OC, και το επίπεδο έκφρασης του σχετίζεται με την εξέλιξη του όγκου, ειδικά με εισβολή και μετάσταση λεμφαδένα.

Η

RPL22L1

ενισχυμένη ενδοπεριτοναϊκή ανάπτυξης ξενομόσχευμα όγκου

in vivo

η

Για την ανίχνευση του ρόλου του υψηλού επιπέδου

RPL22L1

στην εξέλιξη του όγκου, επιλέξαμε μια OC κυτταρική σειρά με χαμηλή έκφραση RPL22L1, SKOV3, για περαιτέρω λειτουργικές μελέτες (σχήμα 3Α). κύτταρα SKOV3 ήταν σταθερή επιμόλυνση με λουσιφεράση προηγουμένως και στη συνέχεια σταθερή επιμόλυνση με το

RPL22L1

(Σχ 3Β και 3C). Για να διερευνήσουν το ρόλο του

RPL22L1

στην πρόοδο του όγκου

in vivo

, εμείς ενδοπεριτοναϊκή ένεση κύτταρα ελέγχου SKOV3-RPL22L1 και σε γυμνά ποντίκια. Οι ξενομόσχευμα όγκοι μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας βιοφωτισμός σε 30

ης ημέρας μετά την ένεση, περιοχή του ξενομοσχεύματος όγκου σε ποντικούς με κύτταρα SKOV3-RPL22L1 εγχέεται ήταν μεγαλύτερη από εκείνη των κυττάρων ελέγχου ενέθηκαν (Εικ 3D). Το αποτέλεσμα πρότεινε ότι το υψηλό επίπεδο του

RPL22L1

συμβάλλουν στην ανάπτυξη των όγκων.

(Α) Έκφραση RPL22L1 σε UACC-1598 και τα κύτταρα SKOV3 εξετάστηκε από δυτικές κηλίδες. Η έκφραση του

RPL22L1

σε SKOV3-RPL22L1 και ελέγχου κυττάρων εξετάστηκε με (Β) στυπώματα Western και (C) qRT-PCR. (D) Τέσσερις εβδομάδες ηλικίας γυμνοί ποντικοί ενδοπεριτοναϊκώς ένεση με SKOV3-RPL22L1 ή κύτταρα ελέγχου και οι εικόνες βιοφωταύγεια λήφθηκαν μετά από 30 ημέρες. (Bar: μέση τιμή ± SD? *

P

& lt? 0,05, ανεξάρτητη Μαθητή

t

-τεστ).

Η

RPL22L1

προωθείται OC μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή

Για να επιβεβαιώσετε το ρόλο του

RPL22L1

στα κύτταρα OC, UACC-1598 κύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τρία συγκεκριμένα τα siRNA έναντι

RPL22L1

(siRNA-1, siRNA -2, και siRNA-3). Από siRNA-2 παρουσίασαν την πιο αποτελεσματική νοκ ντάουν της ενδογενούς

RPL22L1

, επιλέχθηκε για τις επόμενες αναλύσεις (S3 Εικ). Εκτός από τα κύτταρα ελέγχου SKOV3-RPL22L1 και, χρησιμοποιήσαμε δύο ακόμη OC κυτταρικές σειρές HO-8910 και HO-8910PM με χαμηλότερο

RPL22L1

έκφραση σε παροδικές επιμολυσμένα με

RPL22L1

για περαιτέρω λειτουργική μελέτη (S3 Σύκο). Η επίδραση του

RPL22L1

επί κυτταρική κινητικότητα χαρακτηρίζεται από την επούλωση πληγών, τη μετανάστευση Transwell, και προσδιορισμούς Matrigel εισβολή. Νοκ ντάουν του

RPL22L1

σε UACC-1598 κύτταρα (1598-siRPL22L1) προκάλεσε σαφή ression των κυττάρων της μετανάστευσης και της εισβολής. Υπερέκφραση του

RPL22L1

σε SKOV3-RPL22L1, HO-8910 (8910-RPL22L1), και HO-8910PM (8910PM-RPL22L1) κύτταρα θα μπορούσε να ενισχύσει σημαντικά κύτταρα της μετανάστευσης και της εισβολής (

P

& lt? 0,05, Σχήμα 4). ρυθμός ανάπτυξης των κυττάρων αναλύθηκε με μια MTA δοκιμασία,

RPL22L1

δεν είχε καμία επίδραση επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το υψηλό επίπεδο του

RPL22L1

ενισχύει OC κύτταρα μετανάστευση και την εισβολή.

(Α-Δ) Εκπρόσωπος εικόνες της δοκιμασίας επούλωση της πληγής των κυττάρων (μεγέθυνση, × 40). (Ε-Η) μετανάστευση των κυττάρων ανιχνεύθηκε με Transwell δοκιμασία μετανάστευσης, και (Ι-ί) κυτταρικές εισβολή αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα θάλαμο εισβολή Matrigel. Παραδείγματα των κυττάρων που μετανάστευσαν μέσω της μεμβράνης (αριστερό πάνελ), στήλες δείχνουν τριπλούν πειραμάτων (μεγέθυνση, χ 100, Bar: μέση τιμή ± SD *

P

& lt? 0,05, ανεξάρτητη Μαθητή

t

– δοκιμή).

Η

το επίπεδο έκφρασης του

RPL22L1

επιρροές OC EMT κυτταρική σειρά

έχει γίνει όλο και πιο σαφές ότι η EMT είναι αναπόσπαστο στοιχείο της εξέλιξης των επιθηλιακών προερχόμενο όγκους [22, 23]. Βρήκαμε ότι τα κύτταρα SKOV3-RPL22L1 επέδειξε μία άτρακτο σχήματος και ινοβλαστική μορφολογία ενώ τα κύτταρα 1598-siRPL22L1 παρουσίασαν σχήματα συρρίκνωση και αυξημένη προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου (S4 Εικ). Ως εκ τούτου, εξετάστηκε κατά πόσον

RPL22L1

που προκαλείται EMT θα μπορούσαν να ευθύνονται για το

RPL22L1

μεσολάβηση αλλαγές στα κύτταρα κινητικότητα και την εισβολή. Βιοχημική χαρακτηριστικά της ΕΜΤ περιλαμβάνουν την απώλεια της έκφρασης των επιθηλιακών πρωτεϊνών δεικτών και ταυτόχρονη αύξηση στην έκφραση μεσεγχυματικών δείκτης [22, 24]. Western blots και οι αναλύσεις ανοσοφθορισμού χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί η έκφραση των δεικτών των επιθηλιακών και μεσεγχυματικών. Μετά έκτοπη υπερέκφραση

RPL22L1

σε κύτταρα SKOV3, η έκφραση των επιθηλιακών κατασκευαστές, όπως Ε-καδερίνης, β-κατενίνης, και α-κατενίνης μειώθηκε, ενώ η έκφραση του βιμεντίνης, α-SMA, και ινωδονεκτίνης αυξημένη (Σχήμα 5Α και 5Β). Το 1598-siRPL22L1 κυττάρων, τα επίπεδα έκφρασης των δεικτών μεσεγχυματικών βιμεντίνη και Ν-καδερίνης αποικοδομήθηκαν (Σχήμα 5C). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι το επίπεδο έκφρασης των Western blots

επιρροές RPL22L1

ΕΜΤ σε κύτταρα OC.

(Α) έδειξε χαμηλότερα επίπεδα των επιθηλιακών δεικτών (Ε-καδερίνης, β-κατενίνης, και α- κατενίνης) και υψηλότερα επίπεδα δεικτών μεσεγχυματικών (βιμεντίνη, α-SMA, και ινωδονεκτίνης) σε SKOV3-RPL22L1 σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. (Β) Αν η ανάλυση έδειξε μειωμένα επίπεδα επιθηλιακών δεικτών (α-κατενίνης και β-κατενίνης) και αυξημένα επίπεδα δεικτών μεσεγχυματικών (ινωδονεκτίνης και βιμεντίνη). (Γ) ανάλυση κηλίδας Western έδειξε ότι knockdown του

RPL22L1 από

siRNA οδήγησε σε μειωμένο επίπεδο δεικτών μεσεγχυματικών (βιμεντίνη και Ν-καδερίνη) σε UACC-1598 κύτταρα.

Η

Συζήτηση

DMS είναι κακοήθεις κυτταρογενετική δείκτες και συσχετίζεται στενά με την εξέλιξη του όγκου [4]. Προηγουμένως, διαπιστώσαμε ότι

RPL22L1

ενισχύθηκε για DMS, αλλά η λειτουργία του είναι ασαφής. Πολλά ογκογονίδια ενισχύονται μέσω DMS σε κακοήθη καρκινικά κύτταρα [34.38.39], όπως

EIF5A2

και

MYCN

, δύο εκ των οποίων βρίσκονται στον ίδιο τόπο ως

RPL22L1

σχετικά με DMS. Εμείς συναχθεί το συμπέρασμα ότι

RPL22L1

μπορεί να εμπλέκονται στην εξέλιξη OC, και επαλήθευσε αυτό σε μια σειρά από

in vitro

και

in vivo

δοκιμασίες.

Χρήση δημόσια διαθέσιμες TCGA και GEO σύνολα δεδομένων έκφραση βρήκαμε τόσο τον αριθμό αντιγράφων του DNA και η έκφραση του mRNA της

RPL22L1

ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς OC σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς των ωοθηκών. Πρωτεΐνη έκφραση

RPL22L1

εξετάστηκε από την IHC χρησιμοποιώντας τέσσερις OC TMAs. Βρήκαμε ότι η έκφραση RPL22L1 ήταν συχνά υψηλότερα στους ιστούς OC σε σύγκριση με το φυσιολογικό γειτονικό ιστό των ωοθηκών (

P

= 0,008, signed-rank test Wilcoxon του). Περαιτέρω, βρήκαμε το επίπεδο έκφρασης συσχετίστηκε σημαντικά με το στάδιο της νόσου (81,7% το στάδιο 2-4 έναντι 64,5% το στάδιο 1) το βάθος εισβολή (81,9% στην Τ2-Τ4 έναντι 64,5% το Τ1), και μετάσταση στους λεμφαδένες (86,6 % με 70,3% έναντι χωρίς μετάσταση), υποδηλώνοντας ότι το υψηλό επίπεδο των RPL22L1 σε κύτταρα OC μπορούν να διευκολύνουν την επεμβατική /μεταστατικό φαινότυπο. Τα ευρήματα αυτά υπογραμμίζουν ένα δυνητικά σημαντικό ρόλο του

RPL22L1

ως υποκείμενο βιολογικός μηχανισμός για την ανάπτυξη και την εξέλιξη του οργανωμένου εγκλήματος.

Τα αποτελέσματα της ανάλυσης IHC έδειξε ότι

RPL22L1

μπορεί να εμπλέκεται στην παθογένεση της εξέλιξης OC ειδικά σε μετάσταση. Για να επιβεβαιωθεί αυτή η υπόθεση, γυμνό ξενομοσχεύματος όγκου ποντικού, επούλωση πληγών, η μετανάστευση Transwell, και προσδιορισμούς εισβολής Matrigel διεξήχθησαν για να διερευνηθεί ο ρόλος του

RPL22L1

στη ρύθμιση κύτταρα OC κινητικότητα, εισβολή. Υπερ-έκφραση του

RPL22L1

προφανώς προώθησε την ανάπτυξη του όγκου

in vivo

και αύξησε την μετανάστευση και την εισβολή ικανότητα των τριών κυτταρικών γραμμών OC

in vitro

. Επιπλέον, το νοκ ντάουν της ενδογενούς

RPL22L1

από siRNA σε UACC-1598 κύτταρα ανέστειλε τη μετανάστευση και την εισβολή

in vitro

. Μετανάστευση και εισβολή είναι δύο σημαντικά στάδια σε μετάσταση όγκου [25], και αυτές οι λειτουργικές δοκιμασίες υποδηλώνουν έντονα ότι το

RPL22L1

διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην προώθηση της μετάστασης όγκου μέσω ενίσχυσης της μετανάστευσης κυττάρων και εισβολής.

Πολλά οι βιολογικές διαδικασίες που συνδέονται με τη μετανάστευση και την εισβολή, συμπεριλαμβανομένων EMT, ένα σημαντικό γεγονός στην εισβολή και μετάσταση όγκου [26]. Υπερ-έκφραση του

RPL22L1

μείωσε την έκφραση των επιθηλιακών πρωτεϊνών δεικτών (Ε-καδερίνης, β-κατενίνης, και α-κατενίνης) και αύξησαν την έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών (βιμεντίνη, α-SMA, και ινωδονεκτίνης), που είναι βιοχημικά χαρακτηριστικά της EMT [24, 27, 28]. Ωστόσο, μετά από νοκ ντάουν του

RPL22L1

σε UACC-1598 κύτταρα, οι δείκτες των μεσεγχυματικών βιμεντίνη και Ν-cadherin ήταν προφανώς κάτω-ρυθμίζονται. EMT διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην προώθηση της μετάστασης και κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας τα κύτταρα αποκτήσει τη μετανάστευση και την εισβολή των δυνατοτήτων, οι οποίες προωθούν τη μετάσταση [29, 30]. Κατά συνέπεια, προκύπτει ότι η υπερ-έκφραση του

RPL22L1

πιθανό επαγόμενη EMT για την προώθηση της κυτταρικής εισβολής και της μετάστασης.

RPL22L1 είναι παράλογο του RPL22, η οποία είναι μια RNA-δεσμευτικό στοιχείο πρωτεΐνη της 60S υπομονάδας του ριβοσώματος. Ριβοσωμικές πρωτεΐνες αποτελούν κύρια συστατικά των ριβοσωμάτων όπου συντίθενται κυτταρικές πρωτεΐνες. Μέχρι σήμερα, έχουν περίπου 80 ριβοσωμικές πρωτεΐνες έχουν ταυτοποιηθεί. Εκτός από τους βασικούς ρόλους τους στη σύνθεση των πρωτεϊνών, μερικές ριβοσωμικές πρωτεΐνες εμπλέκονται σε εξω-ριβοσωματικών λειτουργιών, όπως η επιδιόρθωση του DNA, απόπτωση, ρύθμιση της μεταγραφής, και ρύθμιση της μετάφρασης [31-36]. Ένας αυξανόμενος αριθμός αναφορών έχουν δείξει ότι ριβοσωμικές πρωτεΐνες έχουν ογκογόνο δυναμικό [37-39]. Πρόσφατα,

RPL22

έχει βρεθεί να μεταλλαχθεί ή προς τα κάτω ρυθμισμένα σε διάφορους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένων των Τ-οξεία λεμφοβλαστική λευχαιμία, επιθετικό καρκίνωμα του μαστού, και το αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Επιπλέον,

RPL22

καταστέλλει άμεσα την έκφραση του

RPL22L1

mRNA, και η έλλειψη RPL22 προκαλεί μια αντισταθμιστική αύξηση στη RPL22L1 [40, 41]. Αυτές οι μελέτες ORT εικασίες μας σχετικά με το ρόλο του

RPL22L1

στην εξέλιξη του καρκίνου.

Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας πρότεινε ότι

RPL22L1

παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του οργανωμένου εγκλήματος με την ενίσχυση των κυττάρων εισβολή και μετάσταση μέσω επαγωγής EMT. Ως

RPL22L1

είναι ένα πραγματοποιηθεί DM ενισχυμένο γονίδιο, τα στοιχεία μας θα μπορούσε να βοηθήσει να εξηγήσει τη λειτουργία της DMS στον καρκίνο.