Αφηρημένο

ανδρογόνων υποδοχέων (AR) μονοπατιού σηματοδότησης παραμένει ο κυριότερος στόχος των νέων θεραπευτικών ευνουχισμού ανθεκτικό καρκίνο του προστάτη (CRPC) . Ωστόσο, η έκφραση μόνιμα ενεργών AR παραλλαγών που στερείται της περιοχής καρβοξυ-τερματικό στην CRPC μπορεί να οδηγήσει σε θεραπεία αναποτελεσματικότητας. Αυτές οι παραλλαγές AR υποτίθεται ότι υποστηρίζουν την ανάπτυξη των κυττάρων PCA σε μια ανδρογόνο εξαντλημένο περιβάλλον, αλλά ο τρόπος δράσης τους παραμένει άλυτο. Επιπλέον, πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι τα συστατικά ενεργές παραλλαγές AR εκφραζόμενη σε πρωτογενείς όγκους του προστάτη και μπορεί να συμβάλει στην εξέλιξη του όγκου. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η επίδραση των μόνιμα ενεργών AR παραλλαγές για την έκφραση των δεικτών εξέλιξης του όγκου. έκφραση Ν-καδερίνης αναλύθηκε σε κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν τον άγριο τύπο AR ή ουσιαστικά δραστική παραλλαγή AR με qRT-PCR, στύπωμα Western και ανοσοφθορισμό. Δείξαμε εδώ για πρώτη φορά ότι η έκφραση Ν-καδερίνης ήταν αυξημένη παρουσία ουσιαστικώς δραστικής AR παραλλαγές. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν σε C4-2B κύτταρα που υπερεκφράζουν αυτές τις παραλλαγές AR. Αν και η έκφραση Ν-καδερίνης συνδέεται συχνά με μια προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης, το φαινόμενο αυτό δεν παρατηρήθηκε στο μοντέλο μας. Παρ ‘όλα αυτά, εκτός από την αυξημένη έκφραση του Ν-καδερίνης, μία προς τα άνω ρύθμιση άλλων δεικτών μεσεγχυματικά έκφραση όπως

βιμεντίνη,

ZEB1

παρατηρήθηκε παρουσία συστατικώς δραστικές παραλλαγές ΣΑΛΙΓΚΑΡΙΟΥ

και. Εν κατακλείδι, τα ευρήματά μας υπογραμμίζουν μυθιστόρημα συνέπειες μόνιμα ενεργών παραλλαγών AR για τη ρύθμιση των δεικτών μεσεγχυματικών στον καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Cottard F, Asmane Ι, Erdmann Ε, Bergerat JP, Kurtz JE, Ceraline J (2013 ) ουσιαστικά δραστική ανδρογόνων υποδοχέων Παραλλαγές διεγείρουν την έκφραση των μεσεγχυματικών Μαρκαδόροι σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 8 (5): e63466. doi: 10.1371 /journal.pone.0063466

Επιμέλεια: Zoran Culig, Innsbruck Medical University, Αυστρία

Ελήφθη: 9, Γενάρη 2013? Αποδεκτές: 2 του Απρίλη 2013? Δημοσιεύθηκε: 2 Μαΐου 2013

Copyright: © 2013 Cottard et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Πανεπιστήμιο του Στρασβούργου? η Ligue Contre le Cancer, η Αλσατία Contre le Καρκίνου? και ο Σύλλογος pour la Recherche sur les Tumeurs Prostatiques (ARTP). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο κοινή μορφή καρκίνου στους άνδρες άνω των 50 ετών και η δεύτερη αιτία της ανδρικής θνησιμότητας λόγω καρκίνου στην Ευρώπη. Τα ανδρογόνα σηματοδότηση διαδραματίζει βασικό ρόλο στη προστάτη κύτταρα πολλαπλασιασμό ή την επιβίωση [1], και την απόσυρση των ανδρογόνων παραμένει η κύρια θεραπεία για τοπική υποτροπή και ανδρογόνων που εξαρτώνται από μεταστατικό ΣΕΣΣ. Ωστόσο, το όφελος αυτής της θεραπείας είναι παροδική και όλοι οι όγκοι τελικά επαναληφθεί ως ευνουχισμός ανθεκτικά προστάτη (CRPC).

Γενετική και μάτισμα γεγονότα που επηρεάζουν τον (AR) του γονιδίου του υποδοχέα ανδρογόνων έχουν συνδεθεί με CRPC. Ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές, που δεν έχει την περιοχή καρβοξυ-τερματικό που περιλαμβάνει την περιοχή δέσμευσης συνδέτη και τη λειτουργία ενεργοποίησης 2, θα μπορούσαν να συμβάλλουν στην εξέλιξη του προστάτη σε αντίσταση ευνουχισμό. Αυτά τα μόνιμα ενεργών AR παραλλαγές προκύπτουν από την πρόωρη κωδικόνια τερματισμού λόγω μεταλλάξεις χωρίς νόημα όπως αναφέρθηκε για τη ARQ640X [2], [3], [4], [5], ή από εναλλακτικό μάτισμα με την διατήρηση ενός κρυπτική εξονικές αλληλουχία όπως περιγράφεται για AR -V7 [4], [6], [7], [8],.

Ο ρόλος των συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR σε CRPC έχει αποδειχθεί σε πολλές μελέτες [7], [8], [11 ], [12]. Η έκφραση αυτών των περικοπεί AR παραλλαγές που είναι αυξημένο κατά 20 φορές σε σύγκριση CRPC με εντοπισμένο προστάτη [9], και συσχετίζεται με την ικανότητα των κυττάρων να αναπτύσσονται προστάτη

in vitro

και

in vivo

απουσία ανδρογόνων [7]. Ωστόσο, οι ακριβείς μοριακοί μηχανισμοί που οδηγούν στην ενεργοποίηση τους και τον τρόπο δράσης τους στον προστάτη και CRPC παραμένουν ασαφείς.

Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι οι μόνιμα ενεργές παραλλαγές AR θα μπορούσε να παίξει ένα ρόλο στην πρόοδο του όγκου. Πράγματι, αν και αυτά τα ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές έχουν ήδη μετατραπεί σε πρωτογενείς όγκους του προστάτη, η έκφραση τους είναι ακόμη πιο εκφρασμένη σε μετάσταση στα οστά [8]. Επιπλέον, η έκφραση τους συσχετίζεται με μία αύξηση του NFAT (πυρηνικού παράγοντα των ενεργοποιημένων Τ-κυττάρων) δραστηριότητα και ΑΡ-1 (Activator Protein-1), δύο παράγοντες μεταγραφής που εμπλέκονται στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη μετανάστευση και την επιβίωση [13].

N-cadherin, η οποία ανήκει στην υπεροικογένεια καντερίνη, βρίσκεται στις ενώσεις προσφύσεως σε νευρικό, ενδοθηλιακά ή μεσεγχυματικά κύτταρα και συμμετέχουν εις την πρόοδον των όγκων [14], [15]. Πράγματι, η έκφραση Ν-καδερίνης είναι αυξημένη σε περισσότερους καρκίνους και προάγει τη μετανάστευση κυττάρων όγκου, εισβολή και την επιβίωση [14]. Αυξημένη έκφραση Ν-καδερίνης συνδέεται επίσης με επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (ΕΜΤ), ένα φαινόμενο που χαρακτηρίζεται από μία μείωση των επιθηλιακών δεικτών όπως Ε-καδερίνης και μια αύξηση των δεικτών μεσεγχυματικών όπως βιμεντίνης ή Ν-cadherin [16], [17 ], [18], [19]. Αυτά τα μοριακά και κυτταρικά τροποποιήσεις παίζουν ένα σημαντικό ρόλο σε κύτταρα όγκου διάδοσης σε δευτερεύουσες θέσεις [20], 21.

Πιο πρόσφατα, μελέτες έχουν δείξει ότι ο ευνουχισμός ανθεκτικά PCA είναι συνδεδεμένη με ένα προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης Ν-καντερίνης κυτταρικά μοντέλα, καθώς και ξενομοσχεύματα προστάτη και κλινικά δείγματα CRPC [22], [23], [24]. Επιπλέον, μονοκλωνικά αντισώματα έναντι Ν-καντερίνης έχουν δείξει να καθυστερήσουν την εμφάνιση αντοχής ευνουχισμού και να μειώσει την αύξηση του CRPC ξενομοσχευμάτων [23]. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι υπάρχει συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης Ν-καντερίνης και αντοχή σε ευνουχισμό. Παρ ‘όλα αυτά, σύμφωνα με την οποία μοριακοί μηχανισμοί έκφραση Ν-καδερίνης είναι αυξημένη σε CRPC παραμένουν άγνωστοι.

Ο σκοπός αυτής της εργασίας ήταν να δείξει μια πιθανή σχέση μεταξύ της παρουσίας του συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR και την έκφραση δεικτών εξέλιξης του όγκου. Πιο συγκεκριμένα, έχουμε επικεντρωθεί στον αντίκτυπο της ουσιαστικά δραστικής παραλλαγές AR στην έκφραση της Ν-cadherin και άλλα μεσεγχυματικά δείκτες. Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι

N-CADHERIN

καθώς και

vimentin

,

ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ

και

ZEB1

ρυθμίζονται προς τα άνω με την παρουσία του μόνιμα ενεργές παραλλαγές AR στον προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

κυτταρική καλλιέργεια

το ανθρώπινο καρκίνωμα του προστάτη LNCaP κυτταρική γραμμή, κλώνος FGC και η κυτταρική σειρά 22Rv1 (ECACC, Salisbury, Ηνωμένο Βασίλειο) διατηρήθηκε σε RPMI-1640 πλήρους μέσου που περιείχε 10% ορό εμβρύου μόσχου (FCS), 10 mM HEPES, 2 mM L-γλουταμίνη, 100 U /mL πενικιλλίνη, 100 μg /mL στρεπτομυκίνη (Sigma-Aldrich, France) και 1 mM πυροσταφυλικό νάτριο (Invitrogen, Fisher Scientific, France).

C4-2B κυτταρική γραμμή (ViroMed Laboratories, Minnetonka, ΜΝ, USA) διατηρήθηκε σε μέσο ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 20% Ham F 12, 10% FCS, 100 U /mL πενικιλλίνη, 100 μg /mL στρεπτομυκίνη, 5 μg /mL ινσουλίνη, 13,65 pg /mL τριϊωδο-θυρονίνης, 4,4 μg /mL απο-τρανσφερίνη άνθρωπο, 0.244 μg /mL d-βιοτίνη και 12,5 μg /ml αδενίνη (Sigma- Aldrich, France).

πλασμίδια και την διαμόλυνση

Για τα πειράματα ανοσοφθορισμού, ο υποδοχέας ανδρογόνου άγριου τύπου (AR) (AR-WT) και η ιδιοσυστατικά ενεργή AR Q640X και AR Q670X [25] παραλλαγών συνδέονταν με EGFP όπως περιγράφηκε προηγουμένως [2], [3]. Για την ανάλυση γονιδιακής έκφρασης και Western-blot, ΡΕ-ARWT, ΡΕ-ARQ640X και ΡΕ-AR-V7 πλασμίδια κατασκευάσθηκαν με εισαγωγή της αντίστοιχης AR cDNA μεταξύ των θέσεων NheI και BamHI σε ρΕΟΡΡ-C3.

Για επιμολύνσεις , η JetPEI

αντιδραστήριο TM επιμόλυνσης (Polyplus επιμόλυνση, Ozyme, Γαλλία) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. LNCaP κύτταρα σπάρθηκαν σε δίσκους των 10 cm σε 1 × 10

6 κύτταρα /τρυβλίο ή σε 6-πηγαδιών πλάκα σε 2 × 10

5 /καλά. Τρεις ημέρες αργότερα, το μέσο αλλάχθηκε και τα κύτταρα επιμολύνθηκαν με 10 μg του υποδεικνυόμενου πλασμιδίου χρησιμοποιώντας 20 μΙ αντιδραστηρίου διαμόλυνσης JetPEI για 10 πιάτα cm ή με 3 μg του πλασμιδίου χρησιμοποιώντας 6 μΐ JetPEI για 6-φρεάτια πλάκας. Το μέσο αλλάχθηκε 48 ώρες μετά και τα κύτταρα επωάστηκαν έως 9 ημέρες σύμφωνα με τα πειράματα. Το μέσο αλλάχθηκε κάθε δύο ημέρες και για επωάσεις πέραν ημέρα 4 μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα επωάστηκαν με την παρουσία 400 μg /mL γενετικίνη (Invitrogen, Γαλλία).

Επιπτώσεις των ανδρογόνων επί της έκφρασης Ν-καντερίνης

LNCaP κύτταρα σπάρθηκαν σε 6-πηγαδιών πλάκα σε πλήρες θρεπτικό μέσο και επιμολύνθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Είκοσι τέσσερις ώρες αργότερα, το μέσο αλλάχθηκε σε άνευ ερυθρού φαινόλης RPMI-1640 συμπληρωμένο με 5% επικαλυμμένο με δεξτράνη ξυλάνθρακα-απογυμνωμένο FCS (DCC-FCS) και με την υποδεικνυόμενη συγκέντρωση του διυδροτεστοστερόνη (DHT) (Sigma-Aldrich, France) ή όχημα (αιθανόλη).

Για το πείραμα με MDV3100, επιμολυσμένα κύτταρα LNCaP επωάστηκαν σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 5% DCC-FCS περιέχοντος την υποδεικνυόμενη δόση DHT και 100 ηΜ MDV3100 (Enzalutamide, Σέλεκ Chemicals, Euromedex, Γαλλία) ή όχημα (διμεθυλοσουλφοξείδιο, DMSO). Για την επιβεβαίωση των επιδράσεων των ανδρογόνων επί της έκφρασης Ν-καδερίνης, 22Rv1 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε RPMI-1640 με 100 ηΜ ή 1 μΜ MDV3100, ή DMSO.

ταξινόμηση κυττάρων

LNCaP κύτταρα σπάρθηκαν σε 10 εκατοστά πιάτα στο 1 × 10

6 κύτταρα /τρυβλίο και επιμολύνονται με pEGFP-ARWT ή pEGFP-ARQ640X. Τέσσερις ημέρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν και ταξινομημένο χάρη στην πράσινου φθορισμού (EGFP) με ένα κύτταρο διαλογέα BD FACSAria-ΙΙ (BD Biosciences, Le Pont de Claix, Γαλλία). Ολικό RNA εκχυλίστηκε από EGFP αρνητικό (μη επιμολυσμένα) και θετικούς (επιμολυσμένα) κύτταρα EGFP και χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση γονιδιακής έκφρασης με qRT-PCR.

Ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου

Το συνολικό κυτταρικό RNA εκχυλίστηκε από κυτταρικές γραμμές χρησιμοποιώντας δοκιμασία NucleoSpin® RNA II (Macherey-Nagel, Γαλλία) σύμφωνα με τη διαδικασία του κατασκευαστή. Οι συγκεντρώσεις RNA και η καθαρότητα προσδιορίστηκαν ποσοτικά μετρώντας την απορρόφηση στα 260 nm και 280 nm (GeneQuant pro, GE Healthcare, France). Η αντίστροφη μεταγραφή εκτελέστηκε από 400 ng ή 1 μg RNA με χρήση RT Omniscript δοκιμασίας (Qiagen, Courtaboeuf, France). RNA αραιώθηκαν σε 13 μL και μετουσιώνονται σε 65 ° C κατά τη διάρκεια 5 λεπτών. Ένα μείγμα αντίδρασης 7 μι που περιείχε 1 χ RT πρότυπο, 0.5 mM από κάθε dNTP, 1 μΜ ολίγο dT, αναστολέας 10U RNase και 4U Omniscript αντίστροφης μεταγραφάσης προστέθηκε και η αντίδραση επωάστηκε 1 ώρα στους 37 ° C. Η αντίδραση σταμάτησε με θέρμανση στους 93 ° C για 5 λεπτά.

N-CADHERIN

,

E-CADHERIN

,

vimentin

,

ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ

,

TWIST1

, και

ZEB1

mRNA επίπεδα μετρήθηκαν με πραγματικού χρόνου PCR με LightCycler 480 (Roche Applied Science, Meylan, France). Για τις αντιδράσεις PCR, 5 μΙ LightCycler® 480 SYBR Green Ι Μάστερ (Roche, Molecular Diagnostics, Mannheim, Germany) και 1 μL ειδικούς εκκινητές (Πίνακας 1) (Qiagen, QuantiTect αστάρια, Courtaboeuf, Γαλλία) αναμίχθηκαν με 4 μΐ του 1: 5 αραίωση cDNA. Τα αποτελέσματα ομαλοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας γονιδιακή καθαριότητας

β-ακτίνης

ή

PBGD

(πορφοχοληγενής απαμινάση) (Qiagen, QuantiTect Primer). ειδικότητα της ενίσχυσης επαληθεύτηκε με ανάλυση καμπύλης τήξης και από τη μετανάστευση ηλεκτροφόρηση. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν και επαναλήφθηκαν 3 φορές. Σχετική ποσοτικοποίηση χρησιμοποιήθηκε για τον καθορισμó φορές αλλαγή στο επίπεδο έκφρασης με τη μέθοδο ΔΔCt. Κάθε τιμή εκφράζεται ως η μέση τιμή ± SEM ΔΔCt. Τα αποτελέσματα αναλύθηκαν με Student t test και

σ

-τιμή & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Η

Western Blot

Τα κύτταρα λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει 10 mM Tris. -ΗΟΙ ρΗ 7, 140 mM NaCl, 3 mM MgCl2, 0,5 × Igepal, 5 mM DTT, 1 αναστολέα × φωσφατάση και αναστολέα πρωτεάσης 1 ×. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης για κάθε δείγμα ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας BCA Protein Assay (Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL, USA) σύμφωνα με τη διαδικασία του κατασκευαστή. Μία ποσότητα 15 μg έως 100 μg ολικών πρωτεϊνών φορτώθηκαν σε 7,5% SDS-PAGE. Μετά τη μετανάστευση και μεταφορά σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης, οι μεμβράνες κορεσμένο με PBS /0,1% Tween /2% ECL και επωάσθηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα με 0.1 μg /mL μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι Ν-καντερίνης (αρ. Καταλόγου 610920, BD Biosciences, Γαλλία) ή 1 μg /mL μονοκλωνικού αντι AR (αρ. καταλόγου 554225, BD Biosciences, Γαλλία) αντίσωμα. β-ακτίνη (0,2 μg /mL) (αρ. καταλόγου sc-47778, Tebu-bio, Γαλλία) χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Μετά πλύσεις, ανοσοσύμπλοκα ανιχνεύθηκαν με 0.2 μg /mL HRP-συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού (αρ. Καταλόγου sc-2005, Tebu-bio, Γαλλία), ή 0,5 μg IgG2a αντι ποντικού /mL αρουραίου δευτερογενή αντισώματα (αρ. Καταλόγου 553391, BD βιοεπιστήμες, Γαλλία), και τελικά αποκαλύφθηκε από χημειοφωταύγειας (Immobilon

TM Δυτική, Millipore, Molsheim, Γαλλία).

ανοσοφθορισμού χρώσης

Lab-Tek διαφάνειες θάλαμο II (2 πηγάδια) ήταν επικαλυμμένα με μέσο LNCaP για δύο ώρες και 1 × 10

5 LNCaP κύτταρα /φρεάτιο σπάρθηκαν. LNCaP κύτταρα επιμολύνθηκαν με 2 μα pEGFP-WT, ρΕΟΡΡ-ARQ640X ή pEGFP-ARQ670X 3 ημέρες αργότερα και επωάστηκαν για 4 ημέρες. LNCaP κύτταρα ξεπλύθηκαν σε PBS και σταθεροποιήθηκαν με 2% παραφορμαλδεΰδη. Τα κύτταρα είχαν μπλοκαριστεί και διαπερατά κατά 0,1% Triton /1% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) /PBS για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Οι καλλιέργειες επωάστηκαν με /mL anti Ν-καντερίνης μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού 2,5 μg (αρ. Καταλόγου 610920, BD Biosciences, Γαλλία) ή ισοτυπικού αντισώματος (Sigma-Aldrich, Saint-Quentin Fallavier, France) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Μετά την πλύση σε PBS, τα κύτταρα LNCaP επωάστηκαν με 2 μg /mL Alexa Fluor 568-συζευγμένο αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού (Invitrogen, Fisher Scientific, France) για 1 ώρα και οι πυρήνες βάφτηκαν με διάλυμα /mL DAPI 0,1 μg για 20 λεπτά στους 30 ° ΝΤΟ. Εικόνες συλλήφθηκαν με το μικροσκόπιο φθορισμού Leica LAS AF6000 χρήση του λογισμικού LAS AF (Leica).

Αποτελέσματα

Συστατικώς ενεργές παραλλαγές υποδοχέα ανδρογόνων upregulate Ν-cadherin έκφρασης σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη

έχουν ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές έχουν συσχετιστεί με CRPC. Επιπλέον, ορισμένες μελέτες έδειξαν ότι CRPC συνδέεται επίσης με μια προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης Ν-καδερίνης [22], [23]. Ερευνήσαμε κατά πόσο ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές διεγείρουν την έκφραση Ν-καντερίνης στα κύτταρα του προστάτη.

N-καντερίνης

επίπεδο του mRNA προσδιορίστηκε με qRT-PCR σε κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν τον συστατικώς δραστική AR Q640X ή AR-V7, ή το AR-WT ως μάρτυρα (Σχήμα 1).

N-CADHERIN

έκφραση παρέμεινε αμετάβλητη στα κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν AR-WT σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Είναι ενδιαφέρον ότι,

N-καντερίνης

εκφράσεως είναι αυξημένο από ένα 8000-πλάσιο παρουσία ARQ640X και AR-V7 (Σχήμα 1Α-Β). Αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώθηκαν σε C4-2B κύτταρα (Σχήμα S1) και στο επίπεδο της πρωτεΐνης σε κύτταρα LNCaP (Σχήμα 1 C). Επιπλέον, ένα πείραμα χρονικής πορείας έδειξε ότι τα επίπεδα πρωτεΐνης Ν-καντερίνης αυξήθηκαν σταθερά από την ημέρα-3 μετά LNCaP κύτταρα επιμόλυνση με ARQ640X (Σχήμα 1 D).

Α). έκφραση Ν-καδερίνης εκτιμήθηκε με qRT-PCR σε κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν τον συστατικώς δραστική AR Q640X ή AR-V7, ή το AR-WT και σε κύτταρα επιμολυσμένα με τον κενό πλασμίδιο (C3). Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε πλήρες μέσο για 9 ημέρες μετά την επιμόλυνση. Γονικά κύτταρα LNCaP χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχος. Υ-άξονας αντιπροσωπεύει τη σχετική μεταβολή φορές σε σύγκριση με τον έλεγχο (μητρικά κύτταρα LNCaP).

β-ακτίνης

χρησιμοποιήθηκε ως το ενδογενές ελέγχου κανονικοποίηση. Σχετική έκφραση παρουσιάζεται ως η μέση τιμή ± SEM από τρία ανεξάρτητα πειράματα. Κάθε δείγμα συγκρίνεται ένα προς ένα από τα δύο ουρά ζευγαρωμένο t τεστ.

NS: Όχι σημαντικό * P & lt? 0.05, ** P & lt? 0,01 και *** P & lt? 0.001

. ΣΙ). Western Blot δείχνει έκφραση AR σε επιμολυσμένα και μη επιμολυσμένα κύτταρα LNCaP. ΝΤΟ). ανάλυση ανοσοκηλίδας της έκφρασης Ν-καδερίνης σε επιμολυσμένα κύτταρα LNCaP 4 και 9 ημέρες μετά την επιμόλυνση. ΡΕ). Κινητική ανάλυση της έκφρασης Ν-καντερίνης με Western Blot σε κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν AR Q640X από 2 έως 9 ημέρες μετά την επιμόλυνση. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Για την επιβεβαίωση αυτών των δεδομένων από παροδική επιμόλυνση, μία ανάλυση κυττάρων διαλογής διεξήχθη μετά την επιμόλυνση LNCaP να αποδείξουν ότι η έκφραση Ν-καντερίνης περιορίστηκε σε κύτταρα που εκφράζουν ιδιοσυστατικά ενεργό AR.

N-καντερίνης

έκφραση αναλύθηκε σε EGFP αρνητικό (μη επιμολυσμένα κύτταρα) ή EGFP θετικών (επιμολυσμένα κύτταρα) τα κλάσματα με qRT-PCR. Σε συμφωνία με παραπάνω αποτελέσματα,

N-καντερίνης

έκφραση ήταν ανιχνεύσιμη στις δύο EGFP- αρνητικών και θετικών κλασμάτων μετά LNCaP επιμόλυνση με pEGFP-ARWT. Ωστόσο, μετά από επιμόλυνση με pEGFP-ARQ640X,

N-καντερίνης

εκφράσεως είναι αυξημένο σε EGFP θετικά κύτταρα που υπερεκφράζουν τον συστατικώς δραστική AR, αλλά όχι στο αρνητικό κλάσμα EGFP (Σχήματα 2Α-Β). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω με ανάλυση ανοσοφθορισμού δείχνει μία επισήμανση Ν-καδερίνης αποκλειστικά σε EGFP θετικά κύτταρα που εκφράζουν ένα ουσιαστικά δραστική παραλλαγή AR (Σχήμα 2C).

LNCaP κύτταρα επιμολύνθηκαν παροδικά με pEGFP-ARWT ή pEGFP-ARQ640X πλασμίδιο και ταξινομήθηκαν 4 ημέρες μετά. ΈΝΑ).

N-καντερίνης

έκφραση αναλύθηκε με qRT-PCR σε EGFP θετικών (επιμολυσμένα) και EGFP αρνητικό (μη επιμολυσμένα) κλάσματα. ΣΙ). υποδοχέα ανδρογόνων (AR) επίπεδο αναλύθηκε με Western Blot για την επαλήθευση της καθαρότητας του κάθε κλάσματος μετά ταξινόμηση κυττάρων. ΝΤΟ). ανάλυση ανοσοφθορισμού της Ν-καδερίνης (ερυθρός φθορισμός) έκφραση σε κύτταρα LNCaP επιμολυσμένα με EGFP-tagged (πράσινος φθορισμός) AR-WT, AR Q640X ή πλασμίδιο έκφρασης AR Q670X. Μεγέθυνση:. × 20

Η

Στο σύνολό τους, τα δεδομένα αυτά υποδεικνύουν έντονα ότι ουσιαστικά δραστική παραλλαγές AR διεγείρουν την έκφραση Ν-καντερίνης στα κύτταρα του προστάτη

Τα ανδρογόνα αρνητικά ρυθμίζουν την έκφραση Ν-cadherin που προκαλείται από. μόνιμα ενεργό υποδοχέα ανδρογόνων παραλλαγές

μια πρόσφατη μελέτη ανέφερε ότι ουσιαστικά δραστική παραλλαγές AR μπορεί να απαιτήσει ένα πλήρους μήκους AR (AR-FL) για την ενεργοποίηση ενδογενών γονιδίων στόχων. Για να διερευνηθεί η επίδραση του ενδογενούς AR-FL που υπάρχει στα κύτταρα LNCaP από την ικανότητα των συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR για να επάγει την έκφραση Ν-καδερίνης, LNCaP κύτταρα που υπερεκφράζουν AR-WT ή ένα ιδιοσυστατικά ανδρογόνων παραλλαγή επωάστηκαν με την παρουσία 100 ηΜ DHT ή όχημα, και Ν-καδερίνης έκφραση αναλύθηκε με qRT-PCR. Σύμφωνα με τα προηγούμενα αποτελέσματα μας, καμία έκφραση Ν-καδερίνης παρατηρήθηκε σε κύτταρα που υπερεκφράζουν AR-WT. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια 1.4-πλάσια μείωση στο επίπεδο έκφρασης Ν-καδερίνης παρατηρήθηκε όταν κύτταρα που υπερεκφράζουν AR Q640X ή AR-V7 καλλιεργήθηκαν σε παρουσία 100 ηΜ DHT σε σύγκριση με όχημα (Εικόνα 3Α). Επιπλέον, αυτό το ανδρογόνο μεσολάβηση Ν-cadherin καταστολή ήταν δοσο-εξαρτώμενο (Σχήμα 3Β). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι ιδιοσυστατικά ενεργές παραλλαγές υποδοχέα ανδρογόνων δεν απαιτούν AR-FL να ρυθμίζουν την έκφραση Ν-καδερίνης. Ωστόσο, DHT-ενεργοποιημένα AR-FL φαίνεται να ανταγωνίζονται επιδράσεις των συστατικώς δραστικές παραλλαγές υποδοχέα ανδρογόνων στην έκφραση Ν-καδερίνης (Εικόνα 3C). Για να επαληθευτεί αυτή η υπόθεση, η νέα αντι-ανδρογόνο MDV3100 χρησιμοποιήθηκε για να αναστείλει DHT-ενεργοποιημένα AR-FL σε επιμολυσμένα κύτταρα LNCaP. Όπως αναμενόταν, παρατηρήθηκε περαιτέρω σημαντική αύξηση της έκφρασης Ν-καντερίνης στα κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν παραλλαγές AR παρουσία 100 ηΜ MDV3100 (Σχήμα 3D). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν επίσης σε 22Rv1 κύτταρα ευνουχισμός-ανθεκτικό, είναι γνωστό ότι εκφράζουν τόσο AR-FL και συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR. Μια 2-πλάσια αύξηση στο επίπεδο του mRNA Ν-καντερίνης παρατηρήθηκε όταν τα κύτταρα 22Rv1 καλλιεργήθηκαν για 4 ημέρες παρουσία 100 ηΜ και 1 μΜ του αντι-ανδρογόνο MDV3100 (Εικόνα S2).

Α). LNCaP κύτταρα αναπτύχθηκαν σε RPMI-1640 που περιέχει 5% DCC-FCS και 100 ηΜ DHT ή φορέα (EtOH). έκφραση Ν-καδερίνης αναλύθηκε με qRT-PCR σε κύτταρα LNCaP 4 ημέρες μετά την επιμόλυνση με AR-WT ή το ουσιαστικά δραστική AR Q640X ή πλασμίδιο έκφρασης AR-V7. ΣΙ). επίπεδο έκφρασης Ν-καντερίνης στα κύτταρα LNCaP διερευνήθηκε με qRT-PCR 4 ημέρες μετά την επιμόλυνση με πλασμίδιο AR Q640X έκφρασης υπό την παρουσία διαφορετικών συγκεντρώσεων DHT (10 ηΜ, 25 ηΜ και 50 ηΜ) ή όχημα. ΝΤΟ). έκφραση Ν-καντερίνης που επάγεται από συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR (παραλλαγές AR) ήταν αρνητικά ρυθμιστεί όταν τα κύτταρα LNCaP αναπτύχθηκαν σε παρουσία DHT. Υποθέτουμε ότι η ενδογενής AR-FL παρούσα σε κύτταρα LNCaP και παραλλαγές AR θα μπορούσε να δράσει διαφορετικά. Σε αυτό το μοντέλο, DHT-διεγερμένα ενδογενούς AR-FL καταστέλλει έκφραση Ν-καδερίνης, ενώ AR παραλλαγές ρυθμίζουν προς τα πάνω την έκφραση του. ΡΕ). LNCaP κύτταρα που υπερεκφράζουν AR-WT, AR Q640X και AR-V7 καλλιεργήθηκαν σε μέσο DCC-FCS συμπληρωμένο με 100 ηΜ DHT και με την παρουσία 100 ηΜ MDV3100 ή DMSO ως έλεγχος κατά τη διάρκεια 3 ημερών. έκφραση Ν-καδερίνης αναλύθηκε με qRT-PCR 4 ημέρες μετά την επιμόλυνση, και ομαλοποιήθηκε έως

β-ακτίνης

. Η μέθοδος ΔΔCt χρησιμοποιήθηκε για να υπολογιστεί σχετική έκφραση και κάθε τιμή αναφέρθηκε ως ο μέσος όρος των ΔΔCt ± SEM.

NS: μη σημαντική * P & lt? 0.05, ** P & lt? 0,01 και *** P & lt? 0.001

Η

Όλοι μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η DHT-ενεργοποιημένα AR-FL. θα μπορούσε να ανταγωνιστεί με ιδιοσυστατικά ενεργή υποδοχέα ανδρογόνων για τη ρύθμιση της έκφρασης Ν-καδερίνης.

τα συστατικά ενεργός παραλλαγές υποδοχέα ανδρογόνων συνδέονται με την έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών

είναι ευρέως γνωστό ότι σε κύτταρα όγκου, η έκφραση μεσεγχυματικών δεικτών συνδέεται με μια ρύθμιση προς τα κάτω των επιθηλιακών δεικτών. Υποθέσαμε ότι η προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης Ν-καντερίνης παρατηρείται παρουσία μόνιμα ενεργών AR παραλλαγές συνοδεύεται από μειωμένη έκφραση της Ε-καδερίνης. Για να ελεγχθεί αυτή η υπόθεση, αναλύσαμε την έκφραση Ε-καδερίνης σε LNCaP επιμολυσμένα με ARQ640X, AR-V7 ή το πλασμίδιο έκφρασης AR άγριου τύπου, ή το κενό πλασμίδιο ως μάρτυρα.

Ε-καδερίνης

επίπεδα mRNA σε κύτταρα LNCaP μετά από διαμόλυνση με ARQ640X ή πλασμίδιο έκφρασης AR-V7 δεν έδειξε κάποια σημαντική διαφορά σε σχέση με τους ελέγχους (Σχήμα 4Α). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν περαιτέρω με ανάλυση στυπώματος Western (τα δεδομένα δεν δείχνονται), υποδηλώνοντας ότι η έκφραση μόνιμα ενεργών AR παραλλαγές σε PCA είναι σχετίζεται με μια αξιοσημείωτη αύξηση στην έκφραση Ν-καδερίνης, αλλά δεν συσχετίζεται με μία ρύθμιση προς τα κάτω του Ε- cadherin.

LNCaP κύτταρα επιμολύνθηκαν με την ARWT, ARQ640X ή πλασμίδιο έκφρασης AR-V7 ή το κενό πλασμίδιο (C3). ΈΝΑ).

E-CADHERIN

, Β).

vimentin

, C).

TWIST1

, D).

ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ

και Ε).

ZEB1

επίπεδα έκφρασης αναλύθηκαν από qRT-PCR κατά την ημέρα-9 μετά την επιμόλυνση. Για κάθε δείγμα, τα επίπεδα έκφρασης κανονικοποιήθηκαν σε

PBGD

ή

β-ακτίνης

και αναφέρεται ως σχετική τιμή προς LNCaP γονική κυτταρική γραμμή. Οι τιμές παρουσιάζονται ως μέσος όρος της ΔΔCt ± SEM.

NS: μη σημαντική * P & lt? 0.05, ** P & lt? 0,01 και *** P & lt? 0.001

. ΦΆ). Western Blot δείχνει εξέλιξη της έκφρασης ZEB1 σε κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν ιδιοσυστατικά δραστικές παραλλαγές AR. Ανοσοστύπωμα από 100 μα ολικής πρωτεΐνης εκχυλισμάτων. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

Επίσης, διερευνήθηκε κατά πόσον συστατικά ενεργός έκφραση AR σε κύτταρα του προστάτη συνδέεται με άλλα μεσεγχυματικά δείκτες. τα επίπεδα έκφρασης των

vimentin

και παράγοντες μεταγραφής

TWIST1, ZEB1

και

ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ

προσδιορίστηκαν από qRT-PCR κατά την ημέρα-9 μετά LNCaP κύτταρα επιμόλυνση με ARQ640X ή AR-V7 πλασμίδιο έκφρασης, το άγριου τύπου AR πλασμίδιο ή ο κενός φορέας ως έλεγχοι (Σχήμα 4Β-Ε).

βιμεντίνη

έκφραση αυξήθηκε κατά 2,5 και 1,5 φορές σε κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν ARQ640X και AR-V7 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου αντίστοιχα (Εικόνα 4Β).

Αν και Twist1 είναι γνωστό ότι επάγει

Ν-CADHERIN

έκφρασης σε προστάτη, καμία σημαντική διαφορά στα επίπεδα mRNA της

TWIST1

παρατηρήθηκε (Σχήμα 4C). Ωστόσο, συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR οδήγησε σε στατιστικά σημαντική αύξηση του

ΣΑΛΙΓΚΑΡΙΟΥ

και

ZEB1

επίπεδα του mRNA (Σχήμα 4D, E). ZEB1 προς τα πάνω ρύθμιση αυτή επιβεβαιώθηκε και στο επίπεδο της πρωτεΐνης (Σχήμα 4F).

Συζήτηση

Η σηματοδότηση AR είναι πολύ σημαντική για τον πολλαπλασιασμό και την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων του προστάτη. Η οδός AR παραμένει ενεργοποιημένη κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του προστάτη προς μια ευνουχισμό ανθεκτική νόσο και την εμφάνιση μόνιμα ενεργών AR παραλλαγές που στερούνται το πεδίο σύνδεσης συνδετήρα θεωρείται πλέον ως ένα σημαντικό γεγονός στην CRPC. Παρά τις κάποιες μελέτες δείχνουν ότι ουσιαστικά δραστική παραλλαγές AR έχει αντίκτυπο στην εξέλιξη του όγκου, η λειτουργία τους παραμένει μέχρι σήμερα άλυτο.

Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι N-cadherin υπερεκφράζεται στα κύτταρα LNCaP που εκφράζουν μόνιμα ενεργό AR παραλλαγές, αλλά όχι σε κύτταρα LNCaP που υπερεκφράζουν μια πλήρους μήκους AR. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν για πρώτη φορά ότι ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές μπορεί να επάγει την έκφραση Ν-καδερίνης. Το εύρημα αυτό θα πρέπει να συνδέεται με τις πρόσφατες μελέτες αναφέρουν μια συσχέτιση μεταξύ CRPC και Ν-καδερίνης αυξητική ρύθμιση [22], [23], [24]. Σύμφωνα με αυτές τις μελέτες, τα δεδομένα μας δείχνουν ότι ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές σηματοδότησης θα μπορούσε να είναι ένας μηχανισμός που οδηγεί στην έκφραση Ν-καντερίνης CRPC.

Τα ευρήματα αυτά υπογραμμίζουν και πάλι τη σχέση μεταξύ της οδού σηματοδότησης AR και της έκφρασης Ν-cadherin. Πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η AR ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση Ν-cadherin [22], [23]. Πράγματι, Ν-cadherin αυξητική ρύθμιση συνδέεται με μια μειωμένη έκφραση του AR σε ευνουχισμό ανθεκτικά ξενομοσχεύματα προστάτη [23]. Επιπλέον, η ρύθμιση προς τα άνω του Ν-καντερίνης παρατηρήθηκε στις ευνουχισμός ανθεκτικά LNCaP-19 κύτταρα μπορεί να αντιστραφεί με την παρουσία των ανδρογόνων [22], [26], [27]. Σύμφωνα με αυτά τα δεδομένα, έχουμε δείξει ότι τα ανδρογόνα συσχετίστηκαν με μειωμένη έκφραση Ν-καδερίνης στο μοντέλο μας υπερεκφράζουν μία ουσιαστικά δραστική παραλλαγή υποδοχέα ανδρογόνων. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι AR-FL και μόνιμα ενεργές παραλλαγές AR θα μπορούσε να ενεργήσει με διαφορετικό τρόπο (Σχήμα 3C). Για παράδειγμα, DHT-διεγερμένα AR-FL μπορούσε πρόσληψη συν-καταστολείς και, με τη σειρά του, καταστέλλει

N-καντερίνης

έκφρασης. Εκτός αυτού, συστατικώς δραστική AR παραλλαγές που στερούνται του καρβοξυ-τερματική περιοχή θα μπορούσε να συμπεριφέρονται διαφορετικά και επάγουν

N-καντερίνης

έκφρασης. Επιπλέον, AR-FL και συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR θα μπορούσε να ανταγωνιστεί με το άλλο για τη ρύθμιση της έκφρασης Ν-καδερίνης. Συνεπής με αυτή την υπόθεση,

N-CADHERIN

γονίδιο περιέχει ένα σύμπλεγμα στοιχείων ανδρογόνων απόκρισης (ARE) επαναλαμβάνει στο ιντρόνιο 1 [28].

Ωστόσο, ουσιαστικά δραστική παραλλαγές AR θα μπορούσε επίσης να ελέγχει έμμεσα

N-CADHERIN

έκφρασης. Για παράδειγμα, σε καρκίνο του προστάτη,

N-καντερίνης

έκφραση συνδέθηκε με μια πυρηνική μετατόπιση του Twist1 [29]. Παρά το γεγονός ότι τα δεδομένα μας δεν έδειξαν σημαντική διαφορά στο

TWIST1

επίπεδα mRNA, ουσιαστικά δραστική παραλλαγές AR θα μπορούσε να ενισχύσει την πυρηνική μετατόπιση της Twist1, το οποίο θα μπορούσε με τη σειρά του να προκαλέσει

N-CADHERIN

έκφραση μετά από σύνδεση με το E- κουτί εντός του πρώτου ιντρονίου του

N-CADHERIN

.

Αυτές οι υποθέσεις αξίζει να μελετηθεί περαιτέρω μελέτες για να καταλάβουμε πώς μόνιμα ενεργές παραλλαγές AR ρύθμιση

N-CADHERIN

έκφρασης.

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε δείξει, επίσης, ότι ουσιαστικά δραστική παραλλαγές AR συσχετίστηκαν με αυξημένη έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών ως

vimentin

,

ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ

και ZEB1. Αυτά τα αποτελέσματα είναι σύμφωνα με μια πρόσφατη μελέτη, η οποία έδειξε μια αύξηση των δεικτών μεσεγχυματικών σε όγκους από ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με θεραπεία στέρησης ανδρογόνων [24]. Στο σύνολό τους, τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές θα μπορούσαν να συνδέονται με τη διαδικασία EMT. Ωστόσο, αυτοί οι δείκτες δεν συνδέονται σταθερά με EMT. Για παράδειγμα, ΣΑΛΙΓΚΆΡΙ προσδίδει ανθεκτικότητα στην απόπτωση στα καρκινικά κύτταρα που εκτίθενται σε ιοντίζουσες ακτινοβολίες και γονοτοξικές φάρμακα, και επιτρέπει στα κύτταρα του μαστού να γίνουν καρκινικά κύτταρα-κίνηση [30], [31], [32], [33], [34].

Η έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών αναφέρθηκαν εδώ υπό την παρουσία ουσιαστικά δραστικής AR παραλλαγών που δεν συνδέονται με προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης στο μοντέλο μας. Η αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ Ν-cadherin ρύθμιση προς τα άνω και E-cadherin προς τα κάτω ρύθμιση συζητείται ακόμα. Πράγματι, McKeithen και οι συνεργάτες του, και πιο πρόσφατα Tiwari και οι συνεργάτες του αναφέρουν ένα συν-έκφραση και των δύο Ε- και Ν-καντερίνες σε κύτταρα όγκου [35], [36]. Σε αυτές τις μελέτες πρωτεΐνη Ε-καδερίνης εμφανίζει ένα διαφορετικό υποκυτταρικό εντοπισμό. Επιπλέον, η αναφερόμενη Ν-cadherin αυξητική ρύθμιση μετά τον ευνουχισμό σε LNCaP-19 κύτταρα δεν συνοδεύεται από μία μείωση της έκφρασης Ε-καδερίνης σε

vitro

κυτταρικής καλλιέργειας στο [22]. Παρ ‘όλα αυτά, η αναμενόμενη ρύθμιση προς τα κάτω Ε-καδερίνης σε αυτό το μοντέλο παρατηρείται μόνο σε ορθοτοπική όγκους μετά τον ευνουχισμό, αλλά όχι σε υποδόρια LNCaP-19 όγκους, υποδηλώνοντας ένα σημαντικό ρόλο στο γύρω περιβάλλον για προστάτη E-cadherin προς τα κάτω ρύθμιση [22]. Εκτός αυτού, μία αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης ευνουχισμός επαγόμενη Ν-καντερίνης και της Ε-καδερίνης προς τα κάτω ρύθμιση έχει τεκμηριωθεί σε LAPC9 και LuCaP35 υποδόρια μοντέλα ξενομοσχευμάτων [23], [24]. Ωστόσο, αυτό καντερίνες διακόπτης δεν έχει αναφερθεί σε δύο μελέτες επικεντρώνονται σε ανθρώπινους όγκους του προστάτη κλινική, από ασθενείς με ή χωρίς θεραπεία στέρησης ανδρογόνων [22], [24].

Περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται να κατανοήσουν λειτουργικές συνέπειες Ν-καδερίνης και άλλα μεσεγχυματικά δείκτες προς τα πάνω ρύθμιση με την παρουσία ουσιαστικώς δραστικής AR παραλλαγές. έκφραση Ν-καντερίνης είναι ευρέως σχετίζεται με την εξέλιξη του όγκου κυρίως λόγω του ρόλου της στη μετανάστευση και εισβολή. Πράγματι, Ν-cadherin ευνοεί τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων μέσω του κυτταροσκελετού αναδιοργάνωση και σχηματισμός ελασματοπόδια [14]. Προωθεί επίσης τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων για την ίδρυση homophilic αλληλεπιδράσεις με γειτονικούς ιστούς όπως ο ιστός των στρωματικών ή ενδοθήλιο [37], [38]. έκφραση Ν-καδερίνης συνδέεται επίσης με την επιβίωση σε κύτταρα καρκίνου προστάτη και των κυττάρων μελανώματος. Πράγματι, η έκφραση Ν-καδερίνης μπορεί να ενεργοποιήσει το φωσφατιδυλοϊνοσιτόλης 3-κινάσης (ΡΙ3Κ) /ΑΚΤ οδός για την απενεργοποίηση προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών και να επάγουν την αύξηση του αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών ως Bcl-2 [39], [40]. Τέλος, μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι η Ν-καντερίνης θα μπορούσε να μεσολαβήσει την αγγειογένεση με επαγωγή μονοκυττάρων χημειοελκτική πρωτεΐνη-1 έκφρασης (MCP-1) μέσω της οδού ΡΙ3Κ /ΑΚΤ [41].

Υπάρχει σήμερα μεγάλο ενδιαφέρον στη λειτουργία δράσης μόνιμα ενεργών AR παραλλαγές CRPC. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε για πρώτη φορά ότι ουσιαστικά δραστική AR παραλλαγές επάγουν την έκφραση Ν-cadherin και άλλους δείκτες μεσεγχυματικών στη ΣΕΣΣ. Τα ευρήματα αυτά υποστηρίζουν την υπόθεση ότι αυτά τα συστατικά ενεργός AR παραλλαγές θα μπορούσαν να συμβάλουν στην συστηματική διάδοση των κυττάρων του προστάτη, και να ενισχύσει τη σημασία να στοχεύουν αυτές τις παραλλαγές AR στον προστάτη.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

έκφραση Ν-καντερίνης ρυθμίζεται αυξητικά σε C4-2B κύτταρα παρουσία του συστατικώς δραστικές παραλλαγές AR.