Αφηρημένο

Σκοπός

Η παρούσα μελέτη εξετάζει την επίδραση του πυρετού εμβέλειας υπερθερμία και ήπια υποθερμία σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα με έμφαση στη βιωσιμότητα των κυττάρων, τον πολλαπλασιασμό και την έκφραση της HSP90.

Υλικά και Μέθοδοι

Α549 και Η1299 καρκινώματος πνεύμονα, αδενοκαρκινώματος μαστού MCF7, U87MG και T98G γλοιοβλαστώματος, DU145 και PC3 προστάτη καρκίνωμα και MRC5 κανονικό εμβρυϊκό ινοβλάστες πνεύμονα κυτταρικές σειρές που μελετήθηκαν. Μετά από 3-ημερών έκθεση σε 34 ° C, 37 ° C και 40 ° C, η βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκε. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων (δείκτης Ki67), απόπτωση (κασπάση 9) και η έκφραση της HSP90 μελετήθηκε με συνεστιακή μικροσκόπηση.

Αποτελέσματα

πειράματα βιωσιμότητας /πολλαπλασιασμού έδειξαν ότι MRC5 ινοβλάστες ήταν εξαιρετικά ευαίσθητο σε υπερθερμία, ενώ ήταν το πιο ανθεκτικό στην υποθερμία. T98G και Α549 ήταν θερμο-ανεκτικές, το υπόλοιπο είναι θερμο-ευαίσθητη σε διαφορετικό βαθμό. Παρ ‘όλα αυτά, ως μια καθολική επίδραση, υποθερμία μειωμένη βιωσιμότητα /πολλαπλασιασμό σε όλες τις κυτταρικές σειρές. Υπερθερμία απότομα προκαλείται από κασπάση 9 στην U87MG πιο θερμο-ευαίσθητη κυτταρική γραμμή. Σε T98G και Α549 θερμο-ανεκτικές κυτταρικές γραμμές, τα επίπεδα της κασπάσης 9 μειώθηκε. Επιπλέον, υπερθερμία που προκαλείται σε μεγάλο βαθμό τα επίπεδα HSP90 στην T98G, ενώ μια απότομη μείωση καταγράφηκε στην θερμο-ευαίσθητο PC3 και κυτταρικές σειρές U87MG. Υπερθερμία ευαισθητοποιημένα θερμο-ευαίσθητο καρκίνο κυτταρικές σειρές με σισπλατίνη και τεμοζολομίδη, ενώ η επίδραση ευαισθητοποίησης της ελαττώθηκε σε θερμο-ανεκτικές κυτταρικές σειρές.

Συμπεράσματα

Η ύπαρξη καρκίνου του θερμο-ανεκτική και θερμο-ευαίσθητη κυτταρικές σειρές επιβεβαιώθηκε, το οποίο ενθαρρύνει την περαιτέρω έρευνα για να χαρακτηρίσει την ανθρώπινη θερμική όγκου προτίμηση για τη διαστρωμάτωση των ασθενών σε κλινικές δοκιμές. Ενδιαφέροντος, ήπια υποθερμία είχε καθολική επίδραση κατασταλτική επί του πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων, υποστηρίζοντας περαιτέρω την υπόθεση ράδιο-ευαισθητοποίηση μέσω της μείωσης του οξυγόνου και μεταβολικών απαιτήσεων

Παράθεση:. Καλαμίδα D, Καραγκούνης IV, Μήτρακας Α, Καλαμίδα S, Γιατρομανωλάκη Α, Κουκουράκης MI (2015) Πυρετός-Range Υπερθερμία εναντίον Υποθερμία επίδραση στη βιωσιμότητα Cancer Cell, διάδοσης και HSP90 Έκφραση. PLoS ONE 10 (1): e0116021. doi: 10.1371 /journal.pone.0116021

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Olivier Gires, Πανεπιστήμιο Ludwig-Maximilians, Γερμανία

Ελήφθη: 12 Αυγούστου, 2014? Αποδεκτές: 2 του Δεκέμβρη 2014? Δημοσιεύθηκε: 30 του Ιαν, 2015

Copyright: © 2015 Καλαμίδα et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από την εκπαίδευση και δια βίου μάθηση – έργο αριστεία, κωδικός καμία 520, ΕΣΠΑ 2007-2013, ΓΓΕΤ αριθμό απόφασης 12605 /09.26.2012. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Τα καρκινικά κύτταρα, όπως και σε οποιοδήποτε άλλο σύστημα κυττάρων και διαβίωσης, ανταποκρίνονται σε ήπιες μεταβολές της εξωτερικής θερμοκρασίας με την ενεργοποίηση ομοιοστατική βιολογικούς μηχανισμούς, σε μια προσπάθεια να διατηρήσει μια ανεκτική ενδοκυτταρικό περιβάλλον και να αποτρέψει τον θάνατο. Θερμοκρασίες πάνω από 41 ° C είναι τοξικές τόσο για το αγγειακό σύστημα του όγκου και στα καρκινικά κύτταρα οι ίδιοι, και χρησιμοποιούνται για τη θέρμανση όγκους (Oncothermic Υπερθερμία) με σκοπό να καταστείλει την ανάπτυξη τους, επιτυγχάνουν παλινδρόμησης ή προκειμένου να ευαισθητοποιηθούν ραδιοθεραπεία και χημειοθεραπεία [1]. Τυχαιοποιημένες μελέτες έχουν δείξει σημαντική βελτίωση του τοπικού ποσοστών ελέγχου στο σαρκώματα εφαρμογή περιφερειακών υπερθερμία σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία [2].

Ωστόσο, θερμοκρασίες κάτω από 41 ° C, στο λεγόμενο πυρετό εμβέλειας υπερθερμία, έχουν επίσης άμεση επίδραση για τον καρκίνο των κυττάρων και της βιολογίας των ιστών, την ευαισθητοποίηση των όγκων στην ακτινοθεραπεία και χημειοθεραπεία. Ολόκληρο υπερθερμία σώμα μεταξύ 38-40 ° C έχει χρησιμοποιηθεί στη θεραπεία της μεγάλης εξάπλωσης των μεταστατικών όγκων σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία [3, 4]. Η αυξημένη ροή του αίματος που επιτρέπει αυξημένη οξυγόνωση του όγκου και της διαθεσιμότητας χημειοθεραπεία είναι πιθανώς ένας από τους κύριους μηχανισμούς της συνεργίας [5, 6]. βλάβη πρωτεΐνη είναι επίσης μια κρίσιμη επίδραση των θερμοκρασίες άνω των 39 ° C, αλλά τα ακριβή μονοπάτια της θανάτωσης κυττάρων παραμένουν ασαφείς [7]. Αναστολή της ομόλογου ανασυνδυασμού έχει επίσης προταθεί ως μηχανισμός χημειοευαισθητοποίηση καρκινικών [8].

Επιπλέον, η ήπια υπερθερμία ως συμπληρωματική θεραπεία για τον καρκίνο του ανοσοποιητικού θεραπεία έχει παρουσιαστεί από αρκετούς προκλινικές και κλινικές μελέτες, με τη βελτίωση της αντικαρκινική ανοσοαποκρίσεις. Η hyperthermia- επαγόμενη βελτιωμένη ανοσολογική απόκριση περιλαμβάνει γενιάς HSPs, που παρουσιάζουν αντιγόνο ενεργοποίησης κυττάρων και λεμφοκυττάρων διακίνησης αλλαγές [9]. Περαιτέρω, επιπλέον στοιχεία δείχνουν ότι φυσιολογικές αντιδράσεις που προκαλούνται από την υπερθερμία επηρεάζει το μικροπεριβάλλον του όγκου πιθανότατα μέσω ενός μηχανισμού που περιλαμβάνει ευαίσθητη στη θερμοκρασία σημείων ελέγχου που ρυθμίζει όγκου αγγειακή αιμάτωση, η διακίνηση των λεμφοκυττάρων, φλεγμονώδεις έκφραση κυτοκίνης, το μεταβολισμό του όγκου, και τελευταίο αλλά όχι λιγότερο σημαντικό, τόσο προσαρμοστικές και έμφυτο ανοσοποιητικό δράση [10]. Η αυξημένη δραστηριότητα των φυσικών φονικών κυττάρων εναντίον των καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου έχει επαληθευτεί σε ποντίκια όταν η θερμοκρασία αυξήθηκε σε 39,5 ° C [11].

Οι θερμικού σοκ Πρωτεΐνες (HSPs) είναι απότομα επάνω-ρυθμίζονται από υπερθερμικής συνθήκες, όπως υψηλότερη συγγένεια τους να συσσωρεύονται ξετυλίγεται πρωτεΐνες απελευθερώνει τον παράγοντα μεταγραφής HSF-1 δεσμεύεται να HSPs που εισέρχεται στους πυρήνες για την έναρξη της μεταγραφής του γονιδίου HSP [11]. HSPs προστατεύουν τα κύτταρα από βλάβες πρωτεΐνη θερμότητα που προκαλείται από συνοδών τους δραστηριότητα. Ωστόσο, η παρατεταμένη θέρμανση μπορεί να οδηγήσει σε HSP επίπεδα παλινδρόμησης σε φυσιολογικά επίπεδα. Αντίθετα, οι υψηλές θερμοκρασίες πάνω από ένα κατώφλι μπορεί να αναστέλλουν τη σύνθεση HSP, η οποία ευνοεί τον κυτταρικό θάνατο [12]. Σε περισσότερες λεπτομέρειες, η μηχανή συνοδού Hsp90 /Hsp70-based έχει αποδειχθεί για να ελέγχουν τη σηματοδότηση της λειτουργίας των πρωτεϊνών, του λαθρεμπορίου και του κύκλου εργασιών. Έχει επίσης προταθεί πρόσφατα, ότι Hsp90 και Hsp70 ρυθμίζουν την επεξεργασία των κατεστραμμένων και μη φυσιολογικών πρωτεϊνών για αποδόμηση μέσω της μονοπάτι ουβικουϊτίνης-πρωτεασώματος. Η μελέτη της HSP90 ειδικότερα, είναι ιδιαίτερα σημαντικό, δεδομένου ότι, μέχρι στιγμής επιστημονικό ενδιαφέρον επικεντρώθηκε στη ρύθμιση των «τυπικών πρωτεϊνών πελατών της, αλλά πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι η HSP90 αλληλεπιδρά δυναμικά με διάφορες πρωτεΐνες, οι οποίες δεν είναι κλασικό πελάτες της HSP90. Ως εκ τούτου, ο ρόλος της HSP90 στη σηματοδότηση και τη ρύθμιση του ελέγχου της ποιότητας και την τύχη των κατεστραμμένων πρωτεϊνών είναι εξαιρετικά σημαντική. [13]

Σε κάθε περίπτωση, καρκινικού κυττάρου απόκριση σε υπερθερμία μπορεί να εξαρτάται από δύο επίπεδα θερμοκρασίας και χρόνους έκθεσης, επιπλέον συνθήκες περιβάλλοντος και, βεβαίως, με τον τύπο κυττάρου υπό διερεύνηση. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε την επίδραση του πυρετού εμβέλειας υπερθερμία σε ένα ευρύ φάσμα των καρκινικών κυττάρων, παρέχοντας ενδείξεις ότι η επίδρασή της στη βιωσιμότητα και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων είναι εξαρτώμενη. Η υποθερμία, οι πολύ λιγότερο μελετημένο κατάσταση στα συστήματα των καρκινικών κυττάρων, διερευνήθηκε επίσης. Επιπλέον, εξετάστηκε η επίδραση της υπερ- και υποθερμία στην έκφραση HSP90. Τέλος, hyperthermic χημειοευαισθητοποίηση εξετάστηκε σε δύο κυτταρικές γραμμές γλοιοβλαστώματος (U87MG T98G και) και δύο κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα (Α549 και Η1299). T98G και Α549, τα μόνα θερμο-ανεκτικές κυτταρικές γραμμές εξετάστηκαν σε σύγκριση με δύο αντιπροσωπευτικές, θερμο-ευαίσθητες κυτταρικές γραμμές του ίδιου τύπου όγκου, U87MG και Η1299, αντίστοιχα, με τα κατάλληλα φάρμακα χημειοθεραπείας για κάθε τύπο του καρκίνου, μαζί με ήπια υπερθερμία, προκειμένου να εξετάσει μια πιθανή ευαισθητοποίηση ή αντίστασης.

Υλικά και Μέθοδοι

κυτταροκαλλιέργειες

Α549 (πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα του ανθρώπου, CLS GmbH, Γερμανία), Η1299 (ανθρώπινα μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα, ATCC), MCF7 (αδενοκαρκίνωμα ανθρώπινου μαστού, CLS GmbH, Γερμανία), U87MG (γλοιοβλαστώματος ανθρώπου-αστροκύτωμα, CLS GmbH, Γερμανία), DU145 (καρκίνωμα ανθρώπινου προστάτη, CLS GmbH, Γερμανία), PC3 (ανθρώπινη αδενοκαρκίνωμα του προστάτη, CLS GmbH, Germany) και MRC5 (ανθρώπινες ινοβλάστες εμβρυϊκού πνεύμονος, CLS GmbH, Germany) κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν χρησιμοποιώντας ϋΜΕΜ βασικό μέσο (31885-023, Gibco) και T98G (ανθρώπινη πολύμορφο γλοιοβλάστωμα, ATCC) κυτταρική γραμμή αναπτύχθηκε σε ΜΕΜ βασικό μέσο (10370-047, Gibco). Και τα δύο βασικά μέσα καλλιέργειας συμπληρωμένο με 10% FBS (FB-1000/500, Biosera), 100 μονάδες /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη (15140-122, Gibco) και 2 mM L-γλουταμίνη (25030, Gibco). Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε πρότυπες συνθήκες, 37 ° C, 5% CO2 σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα και χρησιμοποιήθηκαν φτάνοντας 70-90% συρροή.

Δοκιμασία Πολλαπλασιασμού

Η ικανότητα πολλαπλασιασμού των κυττάρων κάτω από διαφορετικές επώαση θερμοκρασίες ελέγχθηκε με μια δοκιμασία πολλαπλασιασμού. Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων σε πυκνότητα 1000 κύτταρα /φρεάτιο, οι πλάκες επωάστηκαν στους 37 ° C για 3 ώρες για να διευκολύνει πρόσφυση και τη φυσιολογική ανάπτυξη και στη συνέχεια τοποθετήθηκαν στους 34 ° C, 37 ° C και 40 ° C, αντίστοιχα, για τρεις διαδοχικές ημέρες. Πολλαπλασιασμοί δοκιμασίες για όλες τις εξεταζόμενες κυτταρικές γραμμές και θερμοκρασίες ανάπτυξης διεξήχθησαν ταυτόχρονα. Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν σε ένα διάστημα 24 ωρών με τη χρήση του αντιδραστηρίου Alamarblue την Κυτταρική Βιωσιμότητα (DAL1100, Invitrogen) που μετράται στα 540nm διέγερσης και εκπομπής 590 nm μήκη κύματος, σε μία συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας Fluostar Omega (BMG LABTECH). Η δοκιμασία alamarBlue (DAL1100, Invitrogen) είναι μια αξιόπιστη μέθοδος για τη βιωσιμότητα των κυττάρων [14]. Αυτή η δοκιμασία, χρησιμοποιώντας την μεταβολική δραστηριότητα των κυττάρων να ανάγουν ρεζαζουρίνης (οξειδωμένη μορφή? 7-υδροξυ-3Η-φαινοξαζιν-3.1.10-οξείδιο) προς ρεζορουφίνη, ποσοτικοποιεί τον αριθμό των κυττάρων με ενεργή μιτοχόνδρια, αφού ρεσαζουρίνη αναγωγή εκτελείται από μιτοχονδριακά ένζυμα [15]. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν τρεις φορές προκειμένου να επιβεβαιωθεί η σημασία των αποτελεσμάτων.

Western Blot ανάλυση

κυτταρικές γραμμές γλοιοβλάστωμα (U87MG και T98G) καλλιεργήθηκαν κάτω από πρότυπες συνθήκες, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως. Αυτές οι κυτταρικές γραμμές παρομοίως επωάστηκαν στους 34 ° C και 40 ° C για 72 ώρες. Τα κύτταρα λύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης σακχαρόζη συμπληρωμένο με ένα κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης και φωσφατάσης (Cell Signaling). Οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης μετρήθηκαν με έδρα το κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης BCA (Thermo Scientific Pierce, USA). πολυκλωνικά πρωτογενή αντισώματα ειδικά κουνελιού χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση κηλίδος western, αντι-HSP90 (1: 1000? ab13495, Abcam) και αντι-Caspase9 (1: 1000? ab47537, Abcam).

δείγματα ολόκληρου κλάσμα διαχωρίζονται σε ασυνεχή πηκτώματα SDS χρησιμοποιώντας 10% διαχωρισμού και 5% γέλες στοίβαξης. Σαράντα μικρογραμμάρια των κυτταρικών εκχυλισμάτων φορτώθηκαν στη γέλη. Ανοσοκηλίδωση διεξήχθη χρησιμοποιώντας μεμβράνες PVDF-PSQ (Millipore Corp.). Μετά από ένα στάδιο δέσμευσης με 5% άπαχο ξηρό γάλα σε 150 mM NaCl, 10 mM Tris, ρΗ 7.5 που περιέχει 0.1% (ν /ν) Tween 20 (TBS-T) σε θερμοκρασία δωματίου (RT) για 2 ώρες, οι μεμβράνες υβριδοποιήθηκαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C με τα πρωτογενή αντισώματα. Οι μεμβράνες κατόπιν υβριδοποιήθηκαν για 2 ώρες στους 37 ° C με το δευτερεύον αντίσωμα, κατσίκα πολυκλωνικό σε IgG κουνελιού (Η + L) -HRP (1: 3.000, Biorad, 1,706,515, USA) και τελικά αναπτύσσονται σε Amersham ECL Western blotting αντιδραστήρια ανίχνευσης και σύστημα ανάλυσης (RPN2209, GE Healthcare) χρησιμοποιώντας Chemidoc MP σύστημα απεικόνισης (Biorad, USA).

πειράματα χημειοευαισθητοποίηση υπερθερμικής

σε πειράματα χημειοευαισθητοποίηση, 1000 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκα 96 φρεατίων στο κατάλληλο μέσο καλλιέργειας. Τα κύτταρα επωάστηκαν με κλινικώς καθιερωμένων φαρμάκων? πνεύμονα καρκινικές κυτταρικές σειρές: Α549 και Η1299 με 100 μΜ σισπλατίνης και κυτταρικές σειρές γλοιοβλαστώματος: T98G και U87MG με 500 μΜ της τεμοζολομίδη. Τα κύτταρα, ταυτόχρονα με την φαρμακευτική αγωγή, επωάστηκαν για 24 ώρες στους 37 ° C και 40 ° C, αντίστοιχα, ενώ η βιωσιμότητα των κυττάρων εκτιμήθηκε μετά από περίοδο επώασης 24 ωρών με alamarBlue δοκιμασίας και τα ποσοστά επιβίωσης των κυττάρων (%) υπολογίστηκαν. Η στατιστική ανάλυση με τη δοκιμασία 2way ANOVA (n≥ 10 μετρήσεις για κάθε ομάδα, ** p = 0,0037 για 5α p = 0.0097 για 5β, η οποία είναι στατιστικά σημαντική και στις δύο περιπτώσεις) και η παρουσίαση γράφημα έχει γίνει με τη χρήση του GraphPad Prism έκδοση 5.01 στατιστική πακέτο (GraphPad Software Inc., USA). Τα πειράματα εκτελέστηκαν τρεις φορές, προκειμένου να επιβεβαιώσει τη σημασία των αποτελεσμάτων.

Ομοεστιακή ανοσοφθορισμό και ανάλυση εικόνας

Για χρώση ανοσοφθορισμού, τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε Νο 1,5 γυάλινες καλυπτρίδες, καθορίζεται στο 3,7 % παραφορμαλδεϋδη /PBS ρΗ 7.4 για 20 λεπτά στους 37 ° C και στη συνέχεια κατέστησαν διαπερατά σε PBS /0.1% ν /ν Triton Χ-100 ρΗ 7.4 για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Επιπλέον, τα κύτταρα μπλοκαρίστηκαν σε PBS /5% w /v BSA ρΗ 7,4 για 20 λεπτά και χρωματίστηκαν με διάφορα πρωτογενή αντισώματα: αντι-Κί67 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (1: 150? DAKO) αντι-Caspase9 κουνελιού πολυκλωνικό (1: 100? Abcam ), αντι-HSP90 πολυκλωνικό κουνελιού (1: 100? Abcam), για 1 ώρα σε RT. Τα κύτταρα πλύθηκαν σε PBS ρΗ 7,4, επωάστηκαν με τα κατάλληλα CF 488 και 564 δευτερογενή αντισώματα σε RT και το DNA αντίθετα με Hoechst 33342 (1 μg /ml? Sigma-Aldrich). Μετά την τελική πλύσεις καλυπτρίδες τοποθετήθηκαν στο σπιτικό μέσο στερέωσης Mowiol. Απεικόνιση διεξήχθη σε μια προσαρμοσμένη Andor Επανάσταση Spinning Disk System Ομοεστιακή χτισμένο γύρω από ένα περίπτερο (IX81? Όλυμπος) με φακό 60x και μια ψηφιακή φωτογραφική μηχανή (Andor ixon + 885) (CIBIT διευκόλυνση, MBG-ΔΠΘ). απόκτησης εικόνας έγινε σε Andor λογισμικό IQ 2. Οπτική τομές καταγράφονται κάθε 0,3 μm. Όλα συνεστιακή εικόνες μικροσκοπίου που παρουσιάζονται σε αυτό το έργο είναι 2D μέγιστη προβολές ένταση των εικόνων z-stack (ImageJ 1.47v Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας των ΗΠΑ).

ανάλυση της έντασης εικόνα για το που λαμβάνονται σύνολα δεδομένων έχει εκτελεστεί χρησιμοποιώντας ImageJ 1,47 v (Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας των ΗΠΑ) λογισμικό. Οι μακροεντολές επεξεργασίας εικόνας έχουν έθιμο αναπτυχθεί προκειμένου να ποσοτικοποιηθούν τα επίπεδα των εξεταζόμενων πρωτεϊνών (% ένταση φθορισμού) για κασπάση 9 και HSP90 στην περιοχή ενδιαφέροντος.

Η ανάλυση εικόνας και ποσοτικοποίηση της έκφρασης Κί67 στον πυρήνα έχουν έχουν διεξαχθεί χρησιμοποιώντας προσαρμοσμένες αναπτύχθηκε μακροεντολές σε 1.47v λογισμικό ImageJ (Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας των ΗΠΑ). Ένας πληθυσμός n κυττάρων (n≥ 20) έχει αναλυθεί, για Ki67 ποσοτικοποίηση. Τα κύτταρα κατηγοριοποιούνται σε τρεις κατηγορίες, ανάλογα με τις μονάδες pixel τους, που εκπροσωπούν Ki67 επίπεδα έκφρασης. Κατηγορίας Ι ήταν η κατώτερη τάξη συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων με το 1000-5000 pixels στο πράσινο κανάλι (Ki67 απεικόνισης) και κατηγορίας ΙΙΙ ήταν η ανώτερη τάξη συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων με περισσότερους από 7501 pixels, ενώ Class II περιλαμβάνονται 5.001 έως 7500 αξιών, αντίστοιχα.

Οι δύο διαστάσεων (2D) μέσο προβολής εικόνων z-stack μετρήθηκαν με ένα τετράγωνο χώρο τυπικό μέγεθος όπου έχουν μετρηθεί ολοκληρωμένες τιμές έντασης. Η στατιστική ανάλυση με τη δοκιμασία 2way ANOVA (n≥ 20 κύτταρα για κάθε ομάδα, * ρ & lt? 0,0001) και παρουσίαση γράφημα έχει εκτελεστεί χρησιμοποιώντας το GraphPad Prism Version 5.01a στατιστικό πακέτο (GraphPad Software Inc., USA)

Αποτελέσματα

Επίδραση των υπερ- και υποθερμία για την ανάπτυξη των κυττάρων

Μετά από μια περίοδο επώασης 3 ημερών σύμφωνα με πυρετό φάσμα υπερθερμία, οι αλλαγές του κυτταρικού πολλαπλασιασμού /βιωσιμότητας εξαρτώνται σε μεγάλο βαθμό από κάθε κυτταρική σειρά ( Εικ. 1). Η κανονική κυτταρική σειρά ινοβλαστών, MRC5, ήταν εξαιρετικά ευαίσθητη σε υπερθερμία, που δείχνει ένα διαδεδομένο φαινόμενο κυτταρικό θάνατο. U87MG γλοιοβλαστώματος κυτταρική γραμμή ήταν επίσης πολύ ευαίσθητες σε υπερθερμία, η οποία προκάλεσε μία 10 φορές μείωση της κυτταρικής ανάπτυξης. Η DU147 του προστάτη και PC3, καθώς και οι κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα Η1299 και MCF7 μαστού επίσης θερμο-ευαίσθητα. Αντίθετα, T98G γλοιοβλαστώματος και του καρκίνου του πνεύμονα Α549 κυτταρικές σειρές ήταν θερμο-ανεκτικές, παρουσιάζοντας αύξηση ρυθμού ανάπτυξης κατά 1,87 και 1,18 φορές αντίστοιχα.

% μεταβολή της σχετικής φθορισμού μονάδες (RFUs) όπως καταγράφεται με την Alamarblue δοκιμασίας, μετά από 3 ημέρες έκθεσης των κυττάρων σε υποθερμία (34 ° C) ή υπερθερμία (40 ° C) σε σύγκριση με νορμοθερμία (37 ° C).

η

η υποθερμία στους 34 ° C, από την άλλη χέρι, είχε μια μάλλον ομοιογενής επίδραση, με αποτέλεσμα την μείωση τόσο των φυσιολογικών ινοβλαστών MRC5 και όλων των κυτταρικών σειρών καρκίνου βιωσιμότητας (Σχ. 1). Αυτή η μείωση κυμάνθηκε μεταξύ 1,23 και 7,40 φορές, σε κυτταρικές σειρές DU145 και U87MG, αντίστοιχα, σε σύγκριση με τον έλεγχο (37 ° C) κύτταρα, όπως υπολογίζεται από την τρίτη ημέρα της επώασης.

Επίδραση των υπερ- και υποθερμία σε δείκτης πολλαπλασιασμού Κί67

Δεδομένου ότι ο κυτταρικός πολλαπλασιασμός /βιωσιμότητα αξιολογήθηκε με την δοκιμασία alamarBlue είναι ένα αποτέλεσμα των συνδυασμένων πολλαπλασιασμού και θανάτου εκδηλώσεις, εξετάσαμε περαιτέρω τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων με τη χρήση του δείκτη πολλαπλασιασμού Κί67. Μετά από 3 ημέρες επώασης των κυττάρων, υπερθερμία οδήγησε σε αυξημένο κλάσμα των κυττάρων στην κατηγορία III, inT98G και Α549 (1.3 και 1.4 φορές αντίστοιχα) κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με νορμοθερμία. Αυτό μειώθηκε κατά 1,1 έως περισσότερο από 45 φορές στην υπόλοιπη κυτταρικές σειρές (Σχ. 2α). Χαρακτηριστικές και αντιπροσωπευτικές εικόνες συνεστιακή του Κί67 πυρηνική χρώση και μεταβολές μετά από έκθεση σε υπερθερμία που φαίνεται στο Σχ. 2b

2α:. Μεταβολές του Κί67 τάξη δείκτης πολλαπλασιασμού μετά από 3-ημερών έκθεση των κυττάρων σε υποθερμία (34 ° C) ή υπερθερμία (40 ° C) σε σύγκριση με νορμοθερμία (37 ° C). 2β:. Εκπρόσωπος εικόνες συνεστιακή μικροσκοπία δείχνει πυρηνική Ki67 ανοσοχρώση αλλαγή της έντασης μετά από έκθεση σε υπερθερμία (40 ° C)

Η

Η υποθερμία οδήγησε σε μείωση της συσσώρευσης των κυττάρων στην ομάδα της κατηγορίας III κατά 1,2 έως και πάνω από 45 φορές σε όλες τις κυτταρικές σειρές με την εξαίρεση του καρκίνου του προστάτη κυτταρική γραμμή DU145, όπου αυτό αυξήθηκε κατά 1,6 φορές.

Επίδραση των υπερ- και υποθερμία σε κασπάση 9 επίπεδα

Ομοεστιακή εικόνες ανοσοφθορισμού της κασπάσης 9 έκφραση σε κυτταρικές γραμμές μετά από έκθεση σε υπερθερμία και υποθερμία παρουσιάζονται στο Σχ. 3α. Τα διαγράμματα της αλλαγές έντασης φθορισμού μετά από έκθεση σε υπερθερμία και υποθερμία που παρουσιάζονται στο Σχ. . 3β και 3γ, αντιστοίχως

3α: Αντιπροσωπευτικές εικόνες συνεστιακού μικροσκοπία δείχνει κυτταροπλασματική κασπάση 9 έκφραση αλλάζοντας την ένταση μετά την έκθεση σε υποθερμία (34 ° C) ή υπερθερμία (40 ° C) σε σύγκριση με νορμοθερμία (37 ° C) ( μεγέθυνση x60). 3b, c:. Πυκνότητας εκτελείται σε συνεστιακή μικροσκοπία εικόνες της κασπάσης 9 ανοσοχρώση μετά την έκθεση σε υποθερμία (34 ° C) ή υπερθερμία (40 ° C) σε σύγκριση με νορμοθερμία (37 ° C)

Η

Υπερθερμία απότομα επαγόμενη από κασπάση 9 στην κυτταρική σειρά θερμο-ευαίσθητη U87MG, που επέδειξε επίσης την πιο βαθιά μείωση της κυτταρικής βιωσιμότητας σε πειράματα Alamarblue. Ενδιαφέροντος, τόσο Α549 θερμο-ανεκτικές κυτταρικές σειρές T98G και τα επίπεδα της κασπάσης 9 μειώθηκαν από υπερθερμία, γεγονός που υποδηλώνει την απόπτωση αποτέλεσμα καταστολής της υπερθερμίας σε αυτές τις κυτταρικές σειρές. Η πιο θερμο-ευαίσθητη απ ‘όλα, MRC5 κυτταρική γραμμή, ωστόσο, δεν δείχνουν αυξημένη κασπάση 9 επίπεδα γεγονός που υποδηλώνει θάνατο από ανεξάρτητους της κασπάσης 9 μονοπάτια.

Η υποθερμία που προκαλείται κασπάσης 9 στα κύτταρα U87MG, DU145 και MCF7, σε συμφωνία με τη μειωμένη βιωσιμότητα, αποδείχθηκε σε πειράματα Alamarblue. Στην υπόλοιπη κυτταρικές γραμμές, κασπάση 9 έκφραση παρέμεινε σταθερή ή μειώθηκε στην περίπτωση των κυττάρων T98G, υποδηλώνοντας ότι αν οι οδοί απόπτωσης ενεργοποιούνται από υποθερμία αυτά είναι Caspase 9 ανεξάρτητες.

ανάλυση στυπώματος Western εκτελείται η θερμο-ανεκτική οι θερμο-ευαίσθητες κυτταρικές σειρές U87MG γλοιοβλαστώματος T98G και παρουσιάζονται στο Σχ. 3d, υποστηρίζοντας τα προηγούμενα παρουσίασε τα αποτελέσματα. Υπερθερμία που προκαλείται από κασπάση 9 στο θερμο-ευαίσθητη κυτταρική σειρά U87MG, ενώ αυτό μειώθηκε στο θερμο-ανεκτική ένα, T98G. Υποθερμία μειωμένη κασπάσης 9 επίπεδα στην κυτταρική σειρά T98G, ενώ δεν εμφανής αλλαγή σημειώθηκε στην U87MG μία.

Επίδραση των υπερ- και υποθερμία HSP90 επίπεδα

Εκπρόσωπος συνεστιακή μικροσκοπία και ανοσοφθορισμού εικόνες του επίδραση της υπερθερμίας και της υποθερμίας για HSP90 σε κυτταρικές σειρές φαίνονται στο Σχ. 4α. Οι γραφικές παραστάσεις αλλαγών έντασης φθορισμού παρουσιάζεται στο σχήμα. 4β και c

4α:. Αντιπροσωπευτικές εικόνες συνεστιακού μικροσκοπία δείχνει κυτταροπλασματική έκφραση HSP90 αλλαγή της έντασης μετά από έκθεση σε υποθερμία (34 ° C) ή υπερθερμία (40 ° C) σε σύγκριση με νορμοθερμία (37 ° C) (μεγέθυνση x60) . 4b, c: Πυκνομετρία εκτελείται σε συνεστιακή μικροσκοπία εικόνες της HSP90 ανοσοχρώση. 4δ:. Εικόνες Western blot της έκφρασης HSP90 στην θερμο-ανεκτική T98G και τα θερμο-ευαίσθητα U87MG κυτταρικές σειρές

Η

Η υπερθερμία αυξήθηκαν σημαντικά τα επίπεδα HSP90 στην θερμο-ανεκτική κυτταρική γραμμή T98G, ενώ μια απότομη πτώση καταγράφηκε στην θερμο-ευαίσθητο PC3 και κυτταρικές σειρές U87MG. Από την άλλη πλευρά, τα επίπεδα HSP90 ήταν σαφώς μειωμένος σε όλες τις κυτταρικές σειρές που εξετάστηκαν κάτω από υποθερμία. Η ανάλυση στυπώματος Western εκτελείται στο θερμο-ανεκτική T98G και οι θερμο-ευαίσθητες κυτταρικές σειρές U87MG γλοιοβλαστώματος φαίνεται στο Σχ. 4d, επιβεβαιώνοντας τα αποτελέσματα της συνεστιακής μικροσκοπίας.

υπερθερμικής χημειοευαισθητοποίηση

Η έκθεση του θερμο-ανεκτική Α549 και τα θερμο-ευαίσθητα Η1299 καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικές γραμμές στη σισπλατίνη, το κλειδί φάρμακο που χρησιμοποιείται στην κλινική πρακτική για τη θεραπεία του καρκίνου του πνεύμονα, έδειξε ότι σειρά πυρετός υπερθερμία ευαισθητοποιούνται έντονα Η1299 με το φάρμακο αλλά η επίδρασή της επί της Α549 κυτταρικής γραμμής ήταν ελάχιστη

5α (Σχήμα 5α).:. Βιωσιμότητα του καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικών σειρών Α549 και Η1299 μετά από 24ωρη έκθεση σε σισπλατίνη υπό κανονική θερμοκρασία και το εύρος πυρετό υπερθερμικής συνθήκες. 5β: Βιωσιμότητα των κυτταρικές γραμμές γλοιοβλαστώματος T98G και U87MG μετά από 24ωρη έκθεση σε temozolomide υπό φυσιολογική θερμοκρασία και το εύρος πυρετός hyperthermic συνθήκες

Η

Η έκθεση του θερμο-ανεκτική T98G και ο U87MG θερμο-ευαίσθητη κυτταρικές γραμμές γλοιοβλαστώματος να. τεμοζολομίδη, το μόνο εγκεκριμένο φάρμακο για τη θεραπεία της ανθρώπινης γλοιοβλάστωμα, έδειξε ότι η υπερθερμία 40 ° C. ευαισθητοποιημένα έντονα την κυτταρική σειρά U87MG στο φάρμακο, ενώ καμία επίδραση ευαισθητοποίησης σημειώθηκε για την T98G μία (Σχ. 5β).

Συζήτηση

Η επίδραση του πυρετού εμβέλειας υπερθερμία για φυσιολογικών και καρκινικών κυττάρων βιολογία και ενδεχόμενη ρόλο και την επιρροή της στην ευαισθησία των κυττάρων στην χημειοθεραπεία και την ακτινοθεραπεία παραμένει ελάχιστα κατανοητή, που απαιτούν περαιτέρω διερεύνηση. Ήπια υπερθερμία έχει αναφερθεί ότι έχουν ανασταλτική επίδραση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Σε προηγούμενη μελέτη, ωστόσο, Morrisey

κ.ά.

ανέφεραν επίσης διεγερτική δράση της ήπιας υπερθερμία στους 38 ° C επί U87MG κυτταρική γραμμή που είχε απότομα αντιστράφηκε στους 40 ° C [16]. Το συμπέρασμα που συνάγεται από αυτούς τους ερευνητές σχετικά με τη διαφορική απόκριση μεταξύ των κυτταρικών σειρών σε μικρές αυξήσεις της θερμοκρασίας είναι σίγουρα σημαντικό. Η τρέχουσα μελέτη έχει οδηγήσει ως προς τον εντοπισμό των δύο κυτταρικών σειρών (T98G και Α549), η οποία φαίνεται να είναι ανθεκτικός στην επίδραση της υπερθερμίας στους 40 ° C. Η Α549 κυτταρική σειρά ανθρώπινου έχει προηγουμένως αναφερθεί ότι είναι ανθεκτικό σε θερμική θανάτωση στους 43-45 ° C σε σύγκριση με την κυτταρική σειρά U87MG [17], αλλά μια διαφορική απόκριση που κυμαίνεται από πολλαπλασιασμό σε θανάτωση κυττάρων κατά τη καλά ανεκτό από το ανθρώπινο σώμα 40 ° C είναι νέα. Συνδυασμοί πυρετός εμβέλειας υπερθερμία μπορεί, ως εκ τούτου, καθυστερεί την εξέλιξη της μεταστατικής νόσου σε θερμο-ευαίσθητο όγκων με U87MG-όπως συμπεριφορά, ενώ η φάση G2-M στόχευση φαρμάκων μπορεί να αποδειχθεί κρίσιμη για την θεραπεία της θερμο-ανεκτική T98G-όπως όγκων σε συνδυασμό με το συνολικό σωματικό επαγωγή πυρετού ή τοπικών μη τοξικό θέρμανση.

από την άλλη πλευρά, η θεραπευτική ρόλος της υποθερμίας δεν πρέπει να υποτιμάται και θα πρέπει να εξεταστούν διεξοδικά σε ζωικά μοντέλα, όπως περίπου το ήμισυ των κυτταρικών σειρών που εξετάστηκαν έδειξαν μια 3- 7 φορές μείωση της βιωσιμότητας στους 34 ° C. Η τρέχουσα γνώση σχετικά με την επίδρασή της σε καρκινικό κύτταρο είναι περιορισμένος. Η υποθερμία στους 28 ° C φαίνεται να προστατεύει προτίμηση φυσιολογικούς ινοβλάστες σε σύγκριση με καρκινικά κύτταρα έναντι 5-φθοριοουρακίλη [18]. Στη μελέτη μας, στους 34 ° C, φυσιολογικών ανθρώπινων ινοβλαστών υπέστη μειωμένη πολλαπλασιασμό βαθμό, ωστόσο, αρκετά περιορισμένη σε σύγκριση με την πλειονότητα των καρκινικών κυτταρικών γραμμών. Η μειωμένη κατανάλωση μεταβολισμός και το οξυγόνο των όγκων που εκτίθενται σε υποθερμία μπορεί επίσης να είναι σημαντική σε ραδιοευαισθητοποίηση όγκων [19], μια υπόθεση που έχει επίσης δοκιμαστεί στην κλινική πρακτική [20]. Ο ρόλος της υποθερμίας στην αναστολή προσκόλλησης των καρκινικών κυττάρων σε ενδοθηλιακά κύτταρα και έτσι η μετανάστευση, όπως φαίνεται από τον Zhang

κ.ά.

[21], παρέχει ένα επιπλέον βάση για περαιτέρω μελέτες σχετικά με την χρήση της υποθερμίας ως επιλογή θεραπείας του καρκίνου.

Θα εξεταστεί περαιτέρω αν το αποτέλεσμα του θανάτου που προκαλείται από ήπιες μεταβολές της θερμοκρασίας σε διάφορες κυτταρικές σειρές είναι κασπάσης-9-μεσολάβηση. Το ασπαρτικό οξύ ειδική πρωτεάση κασπάση-9 εμπλέκεται στο μιτοχονδριακό μονοπάτι θανάτου. Απελευθέρωση του κυτοχρώματος c από τα μιτοχόνδρια ενεργοποιεί Apaf-1 (αποπτωσώματος), η οποία με τη σειρά της διασπά της την προ-ένζυμο της κασπάσης-9 σε πιο ενεργή μορφή της. Παρ ‘όλα αυτά, η διάσπαση δεν είναι απαραίτητη για την κασπάση-9 αποπτωτική δραστηριότητα [22]. Στη μελέτη μας, η υποθερμία και υπερθερμία που προκαλείται από κασπάση-9 σε αρκετές ευαίσθητες κυτταρικές γραμμές όπως U87MG, DU145 και MCF7, σύμφωνα με τη μειωμένη βιωσιμότητα σημειώνεται. Στο υπόλοιπο των περιπτώσεων, κασπάση-9 έκφραση παρέμεινε σταθερή, γεγονός που υποδηλώνει ότι αν οι αποπτωτικά μονοπάτια ενεργοποιούνται από υποθερμία αυτά είναι Caspase 9 ανεξάρτητες. Για παράδειγμα, οι ΟΕΕ (απόπτωση παράγοντας επαγωγής) ή κασπάση-8 και 12 είναι εναλλακτικές αποπτωτικά κασπάση-9 ανεξάρτητες αποπτωτικών οδών [23]. Ενδιαφέροντος, τα θερμο-ανεκτικές κυτταρικές σειρές T98G και Α549, κασπάση-9 επίπεδα μειώθηκαν κάτω από πυρετό κυμαίνονταν υπερθερμία, παρέχοντας στοιχεία για ένα μονοπάτι αντικείμενο εκμετάλλευσης από ορισμένες κυτταρικές σειρές για να ξεφύγουν από την απόπτωση που σχετίζονται με μιτοχονδριακές.

HSP90, από την άλλη πλευρά, είναι ένα βαρύ μέλος της οικογένειας HSP, με σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του όγκου, είναι επίσης συνδεδεμένη με κακή πρόγνωση στον καρκίνο του μαστού και άλλων κακοηθειών [24]. Η HSPs είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω κάτω από συνθήκες hyperthermic [11], για να προστατεύουν τα κύτταρα από βλάβες πρωτεΐνη θερμότητα που προκαλείται από συνοδών τους δραστηριότητα. Αρκετοί αναστολείς της HSP90 έχουν αναπτυχθεί και έχουν αποδειχθεί σε

vivo

να είναι tumoristatic και να έχουν ένα συνεργιστικό αποτέλεσμα με χημειοθεραπεία και άλλες θεραπείες στόχου [25]. Το εύρημα ότι η υποθερμία μείωσε την έκφραση της HSP90 σε όλες τις κυτταρικές σειρές που εξετάστηκαν είναι ενδιαφέρουσα. Ενεργώντας ως αναστολέας φυσικό παράγοντα της HSP90, υποθερμία μπορεί να έχει συνεργιστική δράση με τη χημειοθεραπεία, παρόμοια με τις χημικές αναστολέων. Ενδιαφέροντος, υπερθερμία αυξημένη έκφραση HSP90 στην κυτταρική σειρά T98G θερμο-ανεκτική, γεγονός που υποδηλώνει έναν προστατευτικό ρόλο της HSP90 σε αυτές τις κυτταρικές σειρές ανθεί κάτω από θερμές συνθήκες.

Η υπερθερμία έχει επίσης μελετηθεί σε συνδυασμό με φάρμακα χημειοθεραπείας. Εχει αναφερθεί στο παρελθόν ότι η ταυτόχρονη υπερθερμία και σισπλατίνη που προκαλείται από τον κυτταρικό θάνατο σε λευχαιμικά κύτταρα Τ από διαφορετικούς μοριακούς μηχανισμούς, με αυτόν τον τρόπο η ενισχυμένη σισπλατίνη επαγόμενη κυτταροτοξικότητα από υπερθερμία μπορεί να εξηγηθεί [26]. Παρόμοια δεδομένα έχουν αναφερθεί σε μία μελέτη Φάσης Ι-ΙΙ για την εκτίμηση της σκοπιμότητας και σοβαρή τοξικότητα του συνδυασμού σισπλατίνη, η ακτινοβολία και υπερθερμία, στη θεραπεία της επιπολής τραχήλου κομβικών μεταστάσεων από καρκίνο κεφαλής και λαιμού, όπου η σκοπιμότητα του συνδυασμού σισπλατίνης, η ακτινοβολία και η τοπική εξωτερική υπερθερμίας μικροκυμάτων με ένα αποδεκτό προφίλ τοξικότητας έχει επιβεβαιωθεί. Ως εκ τούτου, προτάθηκε περαιτέρω ότι η θεραπεία τριτροπική χρήζει περαιτέρω εκτίμηση ως ένας τρόπος για να ενισχυθεί η αποτελεσματικότητα της ακτινοβολίας σε περιπτώσεις κομβικών μεταστάσεων από όγκους κεφαλής και τραχήλου [27]. Στη μελέτη μας, τα πειράματα της ταυτόχρονης έκθεσης του καρκίνου του πνεύμονα και κυττάρων γλοιοβλαστώματος γραμμές για σειρά πυρετό υπερθερμία και κλινικά ιδρύθηκε χημειοθεραπευτικά φάρμακα έδειξαν ότι η ευαισθητοποίηση ανατίθενται από υπερθερμία αφορούσαν κυρίως τα θερμο-ευαίσθητα κυτταρικές σειρές, ενώ η επίδραση ευαισθητοποίησης της ήταν δραστικά κατώτερης θερμο-ανεκτικές κυτταρικές γραμμές. Αυτή η εξεύρεση περαιτέρω υποστηρίζει την ανάγκη για την ανάπτυξη κλινικών μεθόδων σε θέση να εντοπίσει τους όγκους θερμο-ευαίσθητο που θα επωφεληθούν περισσότερο εάν αντιμετωπίζεται με συνδυασμένη πρωτόκολλα υπερθερμία και χημειοθεραπεία. Είτε Θέρμο ανεκτική όγκοι μπορεί να γίνει ευαίσθητο σε υπερθερμικής χημειοθεραπεία μέσω της αναστολής της HSP90 ή σχετικών βιολογικών οδών παραμένει η υπόθεση για περαιτέρω πειραματισμό.

Το συμπέρασμα είναι ότι τα καρκινικά κύτταρα ανταποκρίνονται διαφορετικά σε ήπιες μεταβολές της θερμοκρασίας, είτε πρόκειται για την ήπια υποθερμία ή πυρετό εμβέλειας υπερθερμία. Οι θερμο-ανεκτική και θερμο-ευαίσθητα κύτταρα γραμμές έχουν εντοπιστεί σε υπερθερμία φάσμα πυρετό, η οποία ενθαρρύνει την έρευνα για τον εντοπισμό κατάλληλων μεθόδων για την κλινική ομαδοποίηση των ανθρώπινων όγκων, σύμφωνα με θερμική προτίμηση τους. Αυτός ο χαρακτηρισμός θα επιτρέψει κλινικές δοκιμές με μη τοξικά εντοπισμένη ή ολική υπερθερμία σώμα σε ασθενείς αναμένεται να είναι ευαίσθητα σε τέτοιες θεραπείες. Ενδιαφέρον, ήπια υποθερμία είχε κατασταλτικό αποτέλεσμα επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε όλα τα κύτταρα που εξετάστηκαν, γεγονός που υποδηλώνει ότι η υποθερμία θα καταστείλει την αντιγραφή του όγκου και του μεταβολισμού στους περισσότερους ανθρώπινους όγκους, υποστηρίζοντας περαιτέρω την υπόθεση ραδιοευαισθητοποίησης μέσω αυξημένης οξυγόνωση με τη μείωση του οξυγόνου και μεταβολικών απαιτήσεων.