Αφηρημένο

Ελαττωματικά IFN ως αποτέλεσμα την απώλεια της φυσικής ανοσίας και ευαισθητοποιεί κύτταρα σε ενισχυμένη θανάτωση κυτταρολυτική μετά Vesticular σηματοδότησης Virus στοματίτιδας (VSV) λοίμωξη. Εξέταση της έμφυτης ανοσίας κατάσταση κανονικών ανθρώπινων βρογχικών επιθηλιακών κυττάρων Beas2B και 7 καρκινικά κύτταρα πνεύμονα αποκάλυψε ότι η κατάργηση της σηματοδότησης IFN σε καρκινικά κύτταρα συσχετίζεται με μεγαλύτερη ευαισθησία σε λοιμώξεις VSV. Η διάσπαση του μονοπατιού IFN σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα και των ιστών πρωτογενούς όγκου προκαλείται από επιγενετικές σίγηση των κρίσιμων ιντερφερόνης αποκρίνονται παράγοντες μεταγραφής IRF7 ή /και IRF5. Αν και η θεραπεία 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνης αποτυγχάνει να επανενεργοποιήσει έκφραση IRF7 και IRF5 ή προστατεύουν τα κύτταρα από τη μόλυνση VSV, το χειρισμό σηματοδότησης IFN με μεταβολή έκφρασης IRF αλλάζει την ιική ευαισθησία αυτών των κυττάρων. Lung καρκινικά κύτταρα μπορούν να προστατευθούν μερικώς από ιικά θανάτωση χρησιμοποιώντας IRF5 + IRF7 υπερέκφραση, ενώ IFN διάσπαση μονοπάτι με επιμόλυνση siRNAs να IRF5 + IRF7 αυξάνει την ευπάθεια κυττάρων σε ιική μόλυνση. Ως εκ τούτου, IRF5 και IRF7 αποτελούν βασικούς παράγοντες μεταγραφής στην IFN μονοπάτι που καθορίζουν ιογενή ευαισθησία των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα? η επιγενετικώς μειωμένη μονοπάτι της IFN στον πνεύμονα καρκινικούς ιστούς παρέχει δυναμικό βιοδεικτών για την επιτυχή επιλεκτική θανάτωση των καρκινικών κυττάρων από ογκολυτικού ιική θεραπεία

Παράθεση:. Li Q, Tainsky ΜΑ (2011) Επιγενετική κατασιγάσει του IRF7 ή /και IRF5 σε πνεύμονα Τα καρκινικά κύτταρα οδηγεί σε αυξημένη ευαισθησία σε Oncolytic ιούς. PLoS ONE 6 (12): e28683. doi: 10.1371 /journal.pone.0028683

Επιμέλεια: Masaru Katoh, Εθνικό Κέντρο Καρκίνου, Ιαπωνία

Ελήφθη: 15 Αύγ 2011? Αποδεκτές: 13, Νοεμβρίου του 2011? Δημοσιεύθηκε: 14 Δεκεμβρίου, 2011

Copyright: © 2011 Li, Tainsky. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από την Barbara και ο Φρεντ Erb Προικισμένο προέδρου στην γενετική του καρκίνου με τον Δρ Tainsky, κεφάλαια από το Ινστιτούτο Karmanos Καρκίνο, το Μοριακής Ιατρικής και Γενετικής Εφαρμοσμένης Γονιδιωματική Technology Center στο Wayne State University, και τα Γονιδιωματική και Βιοστατιστικής Πυρήνες του Ινστιτούτου Καρκίνου Karmanos , P30CA022453. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καθώς η κύρια αιτία θνησιμότητας σχετίζονται με τον καρκίνο σε άνδρες και γυναίκες, ο καρκίνος του πνεύμονα ευθύνεται για πάνω από 1 εκατομμύριο θανάτους παγκοσμίως κάθε χρόνο. Παρά το γεγονός ότι η διάγνωση και η θεραπεία έχει βελτιωθεί, το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης είναι μόνο 14%, κυρίως λόγω της αποτυχίας της χειρουργικής επέμβασης όγκου debulking και συστηματική χημειοθεραπεία. Η βελτίωση της θεραπείας του καρκίνου του πνεύμονα είναι ένας σημαντικός στόχος για τη δημόσια υγεία. Πρόσφατα, φυσικά ή γενετικά ογκολυτικούς ιών, συμπεριλαμβανομένου του ιού της ιλαράς, ιός ασθένειας Newcastle (NDV), VSV, αδενοϊούς, ρεοϊός και ιός του απλού έρπητα προσφέρουν ένα αποτελεσματικό και ελπιδοφόρο εναλλακτική θεραπευτική προσέγγιση για την καταπολέμηση αυτής της νόσου. [1] Χρησιμοποιηθεί μόνο του ή σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία, ογκολυτικοί ιοί καταστρέφουν επιλεκτικά τα καρκινικά κύτταρα με τη στόχευση του καρκίνου ελαττώματα σε μεγάλες οδούς, όπως καταστολέα όγκου ρ53, ras μεταγωγή σήματος και IFN μονοπατιών σηματοδότησης [1], [2]. Επί του παρόντος, η αποτελεσματικότητα και η ασφάλεια των διαφόρων ογκολυτικοί ιοί σε θεραπεία διαφόρων καρκίνων αξιολογείται σε προκλινικά μοντέλα ζώων και φάσης Ι-ΙΙΙ κλινικών δοκιμών [3]. Μεταξύ αυτών, ένας αρνητικός ιός κλώνου RNA VSV, η οποία μπορεί να προκαλέσει έμφυτη μηχανισμών ανοσίας, έχει δειχθεί ότι είναι αποτελεσματικό έναντι κακόηθες γλοίωμα, μελάνωμα, λευχαιμίες, ηπατοκυτταρικό, του μαστού, της ουροδόχου κύστεως και του προστάτη που έχουν ελαττωματικό αντιιική αποκρίσεις. μονοπάτι [4], [5], [6], [7].

IFN τύπου Ι σηματοδότησης ενεργοποιείται από μόλυνση VSV ως πρώτη γραμμή έμφυτη ανοσοαπόκριση για την προστασία των φυσιολογικών ιστών από ιογενείς θανάτωση, και ως εκ τούτου κύτταρα όγκου που έχουν χάσει αντιική δραστικότητα τους αντιπροσωπεύουν επιλεκτική στόχους για VSV. Η πρωτογενής απόκριση κατά ιική μόλυνση και η πρόσληψη του δίκλωνου RNA που είναι η ενεργοποίηση TLR3 που διαμεσολαβείται από IRF-3, cJun /ATF-2, και ΝΡκΒ, προκαλώντας έτσι την παραγωγή των γονιδίων άμεσης-πρώιμης απόκρισης πρωτίστως ΙΡΝβ. Αυτές οι IFNs πρώιμη απόκριση δεσμεύονται με IFN τύπου Ι υποδοχείς (IFNAR) σε ένα αυτοκρινή ή παρακρινή τρόπο για την ενεργοποίηση STAT1 και επάγουν την έκφραση του δευτερογενούς γονιδίων αντιική απόκριση συμπεριλαμβανομένου του παράγοντα μεταγραφής IRF7 οποία στη συνέχεια προωθεί την έκφραση άλλων IFN διεγείρονται γονίδια (ISGs). Τέλος, ο τριτογενής μεταγραφικό κύμα ΙΡΝα καθιερώνει μια αντιική κατάσταση [8], [9].

Η απομείωση της σηματοδότησης IFN συνδέεται με αυξημένο κίνδυνο ανάπτυξης όγκων [10], [11], [12 ], όπως η οδός IFN παρουσιάζει επίσης αντι-πολλαπλασιαστική και το ανοσοποιητικό δραστηριότητες επιτήρησης κατά του καρκίνου. Κατά συνέπεια, η πλειοψηφία (~ 80%) του NCI 60 πίνακα απεικόνισης καρκινικές κυτταρικές σειρές διαταράσσεται έμφυτη ανοσία αποκρίσεις [9]. Έχουμε δείξει ότι το μονοπάτι σηματοδότησης IFN καταργήθηκε κατά την αυθόρμητη αθανατοποίηση σε ινοβλάστες από Li-Fraumeni ασθενείς Σύνδρομο (LFS), οι οποίοι έχουν προδιάθεση για πρώιμη έναρξη και πολλαπλούς όγκους, λόγω των μεταλλάξεων βλαστικής σειράς σε ρ53. Ως ένα σημαντικό επιγενετική μηχανισμό ελέγχου, DNA υπερμεθυλίωση CpGs σε περιοχές υποκινητή καταστέλλει την έκφραση του γονιδίου, τόσο κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης και της ογκογένεσης. Αρκετές ISGs ήταν κάτω-ρυθμίζονται από επιγενετικές σίγηση κατά την διάρκεια αθανατοποίηση, πρώιμο και απαραίτητο βήμα στην καρκινογένεση, και μερικά από τα ίδια ISGs ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω κατά την αντιγραφική γήρανση [13], [14], [15]. Θεραπεία των αθάνατων κυτταρικών γραμμών LFS με 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνη (5-αζα-dC), ένας αναστολέας της μεθυλτρανσφερασών DNA αποκαταστάθηκε IFN σηματοδότησης και προκάλεσε μια γηρασμό κατάσταση όμοια [13], [15].

ΙΡΝ-επαγώγιμη παράγοντες μεταγραφής, ΔΠΧΑ, είναι απαραίτητα μεσολαβητές της IFN-απόκρισης. Έλλειψη

IRF7

έκφραση αντιστοιχεί στην παρεκκλίνουσα υπερμεθυλίωση υποστηρικτής των νησιών CpG μέσα υποστηρικτής της και επίσης αναγνωριστεί ως ένα από μεθυλίωση σιγήσει γονίδια σε διάφορους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του πνεύμονα, ηπατοκυτταρικό, του στομάχου και του παγκρέατος [16], [ ,,,0],17], [18], [19]. Μειωμένη έκφραση του IRF5, ένα άλλο σημαντικό παράγοντα μεταγραφής της οδού IFN, παρατηρήθηκε επίσης σε αιματολογικές κακοήθειες, η οποία είναι συνεπής με το ρόλο της να επάγει G2-M διακοπή αύξησης και απόπτωση [20]. Επιγενετική αδρανοποίηση του

IRF5

παρομοίως παρατηρήθηκε σε ηπατοκυτταρικό και γαστρικό καρκίνο [21], [22]. Ως άμεση επαγωγείς IFN οδού, IRF7 και IRF5 να προκαλέσει επικάλυψη ISG μεταγραφικό προφίλ, ωστόσο, διαφορική πρότυπα έκφρασης και η κινητική της ISGs κατηγορούνται ότι έχουν μη περιττό και διακριτούς ρόλους στο έμφυτο ανοσοποιητικό απαντήσεις. Σε σύγκριση με IRF7, IRF5 είναι μια πολύ ισχυρότερη ενεργοποιητής των πρώιμων γονιδίων αντιιικά συμπεριλαμβανομένων ΙΡΝβ [23]. Σε μια πρόσφατη έκθεση που έδειξε ότι αυξημένη έκφραση IRF5 ή /και IRF7 θα μπορούσε να επανενεργοποιήσει που σχετίζονται με IFN γονίδια, αναστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων και να προκαλέσουν γήρανση [15]. Αποσιώπηση από αυτές τις βασικές ΔΠΧΑ και την ανάπτυξη καταστολής μονοπάτι IFN μπορεί να είναι ένα απαραίτητο πρώιμο γεγονός στην ανάπτυξη του καρκίνου, ιδιαίτερα που σχετίζονται με την αθανατοποίηση.

Αν και τα καρκινικά κύτταρα, με τους ΙΡΝ-μονοπάτι-καταργηθεί, μπορεί να έχουν αποκτήσει ένα πλεονέκτημα της ανάπτυξης /επιβίωσης πάνω από την κανονική τους ομολόγους τους, ταυτόχρονα θέτουν σε κίνδυνο αντιική προστατευτική τους ικανότητα. Εδώ, νέες θεραπευτικές παραδείγματα περιλαμβάνουν ογκολυτικούς RNA ιών με στόχο την ελαττωματική έμφυτο ανοσοποιητικό σύστημα σε καρκινικά κύτταρα που διερευνώνται. Βρήκαμε ότι η ευαισθησία για ογκολυτική VSV ήταν έντονα και σημαντική συσχέτιση με τη διατάραξη του μονοπατιού σηματοδότησης IFN. Μια αποτυχία να ρυθμίζουν ISG έκφραση κατόπιν dsRNA διέγερση έδειξε μία εξασθενημένη απόκριση αντι-ιική ερεθιστική κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα προς VSV-επαγόμενη ογκολυτική κυτταρικό θάνατο. Ωστόσο, δεν είναι όλα τα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα μπορεί να σκοτωθεί από μόλυνση VSV, καθώς ορισμένα από αυτά έχουν μια σχετικά φυσιολογική οδό έμφυτη ανοσία και ως εκ τούτου είναι ανθεκτικά σε VSV μεσολάβηση ιικών θανάτωση. Bisulfite αλληλουχίας αποκάλυψε υπερμεθυλίωση προαγωγού του είτε

IRF7

ή /και

IRF5

σε αρκετές κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα. Ομοίως, όταν ερευνήσαμε DNA από κατεψυγμένα ιστούς του καρκίνου του πνεύμονα, παρατηρήσαμε μεθυλίωση υποστηρικτής του

IRF7

και /ή

IRF5

, γεγονός που υποδηλώνει ότι η IFN αντιική ανταπόκριση τους ήταν επίσης επιγενετικώς σιωπήσει ως λειτουργικά IRF7 και IRF5 απαιτούνται για ένα ανέπαφο οδό IFN. Εντούτοις, η αγωγή 5-αζα-άΟ απέτυχε να επανενεργοποιήσει IRF5 ή IRF7 έκφραση ή τη διάσωση του καρκίνου του πνεύμονα κύτταρα από μόλυνση VSV. Η αλλοίωση της φυσικής ανοσίας με το χειρισμό της έκφρασης IRF αλλάξει την ιική ευαισθησία της κανονικής Beas2B βρογχικών επιθηλιακών κυττάρων ή καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων. Τα κύτταρα χωρίς μια λειτουργική απόκριση IFN προστατεύεται μερικώς από τον ιό μετά από IRF5 και IRF7 υπερέκφραση, ενώ διακοπή της σηματοδότησης IFN στοχεύοντας IRF5 και IRF7 χρησιμοποιώντας τα siRNA αυξημένη ευπάθεια των κυττάρων Beas2B »στις κυτταρολυτικές επιδράσεις του VSV. Ως εκ τούτου, IRF5 και IRF7 είναι κομβικής σημασίας παράγοντες για IFN μονοπάτι που καθορίζουν την ιική ευαισθησία των κυττάρων σε ογκολυτική ιούς. Η εξαιρετικά επιλεκτική VSV θανάτωση κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα με μειωμένη μονοπάτι IFN λόγω επιγενετικώς αρνητική ρύθμιση του ΔΠΧΑ υποδεικνύει ότι αυτά τα γονίδια είναι ιδανικά βιοδείκτες για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας των όγκων να ογκολυτικού ιική θεραπεία.

Αποτελέσματα

ανεπάρκεια σηματοδότησης IFN συσχετίζεται με την ευαισθησία VSV

Η οδός IFN ελέγχει την κυτταρική απόκριση σε ιογενή λοίμωξη και dsRNA. Τα κύτταρα που έχουν ένα πλήρως λειτουργικό έμφυτη αντιιικά σύστημα είναι σε θέση να προστατεύσουν τον εαυτό τους από ιούς, σε μεγάλο βαθμό οφείλεται στην επαγωγή της IFN καταρράκτη σηματοδότησης. Έχουμε δείξει ότι η οδός IFN ήταν επιγενετικώς αδρανοποιείται σε ινοβλάστες από ασθενείς LFS μετά αυθόρμητη αθανατοποίηση [14]. Εξέταση των έμφυτη κατάσταση ανοσίας σε φυσιολογικά βρογχικά επιθηλιακά κυτταρική σειρά Beas2B,

ras της

μετατραπεί παράγωγα κύτταρα και 2 ογκογόνο κλώνων αποκάλυψε ότι η δραστηριότητα σηματοδότησης IFN μείωσε την ευαισθησία στην VSV θανάτωσης αυξήθηκε κατά τη διάρκεια του πνεύμονα ογκογένεσης (Li και Tainsky, αδημοσίευτα δεδομένα). Επειδή λειτουργική αδρανοποίηση της IFN οδού υπήρξε ένα κοινό γνώρισμα πολλών μορφών καρκίνου, χρησιμοποιήσαμε 7 καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικών σειρών μακροπρόθεσμη (4 αδενοκαρκινώματα: CRL5800, CRL5807, CRL5810 και CRL5872, 2 πλακώδες καρκίνωμα: HTB172 και CRL5928 και 1 μικρό καρκίνωμα: CRL5869) να μελετήσει τις αλλαγές στο έμφυτο ανοσοποιητικό τους σύστημα.

Χρησιμοποιώντας ένα αντιπροσωπευτικό σύνολο ISGs σε δοκιμασίες Q-RT-PCR, εξετάσαμε τόσο οι βασικές ISG επίπεδα έκφρασης και την έκφρασή τους μετά τη διέγερση της οδού IFN από συνθετικά dsRNA ροΙγΙ: C, η οποία μιμείται το ιικό RNA [15]. Βρήκαμε χαμηλότερα αρχικά έκφραση των περισσοτέρων ISGs δοκιμαστεί σε όλες τις κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα σε σύγκριση με κύτταρα Beas2B (Πίνακας 1). Η οδός IFN θα μπορούσε να ενεργοποιηθεί σε κύτταρα Beas2B ως 12 από 14 γονίδια ήταν επαγώγιμη από ροΙγΙ: διέγερση C. Σε αντίθεση, ροΙγΙ: C απέτυχε να προκαλέσει mRNAs όλων των 14 γονιδίων που δοκιμάζονται σε CRL5810 κύτταρα, ενώ η μεταβλητή ελλείψεις επαγωγή απαραίτητα γονίδια αντι-ιική ανταπόκριση, όπως

ΙΡΝα

,

ΙΡΝβ

,

IRF7

,

IRF5

και

STAT1

ανιχνεύθηκαν σε κύτταρα CRL5800, CRL5807, CRL5872 και CRL5869. Παραδόξως, Q-RT-PCR κατέδειξαν ροΙγΙ:. C επαγώγιμη έκφραση του 10 από τα 14 ISGs σε HTB182 και CRL5928 κύτταρα σε παρόμοια επίπεδα με Beas2B υποδεικνύοντας μία σχετικά φυσιολογική αντιική απάντηση σε αυτά τα δύο καρκινικά κύτταρα πνεύμονα (Πίνακας 2)

Επειδή κίνδυνο έμφυτο ανοσοποιητικό σηματοδότηση συχνά οδηγεί σε αυξημένη ευαισθησία σε ιογενείς δολοφονία, ευαισθησία VSV ερευνήθηκε για να καθοριστεί αν η έλλειψη ISG ενεργοποίησης αντιστοιχεί σε αυξημένη ευπάθεια σε ογκολυτικού ιογενή δολοφονία στα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα. Όπως ήταν αναμενόμενο, τα κύτταρα Beas2B με ακέραια απόκριση IFN αντιστάθηκαν μόλυνση VSV που εμφανίζουν μικρή μεταβολή στην βιωσιμότητα των κυττάρων. Επιπλέον, HTB182 και CRL5928 ήταν σχετικά ανθεκτικά σε σύγκριση με άλλα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα καθώς περισσότερο από το 60% των κυττάρων ήταν ακόμα ζωντανοί σε υψηλή δόση VSV (MOI5) ακόμη και χωρίς εξωγενές προεπεξεργασία ΙΡΝα (Σχήμα 1Α). Αντιθέτως, το υπόλοιπο των καρκίνου του πνεύμονα κυτταρικές σειρές χάσει μεταβλητά ικανότητά τους να προστατεύουν τους εαυτούς τους από VSV. Ένας αυξανόμενος αριθμός των IFN-σηματοδότηση με ανεπάρκεια καρκινικά κύτταρα πνεύμονα (από -30% έως -70%) θανατώθηκαν με την αύξηση της δόσης της έκθεσης VSV και προσθέτοντας ΙΡΝα στο μέσο απέτυχε να αναστείλει κυτταροτοξικότητα υψηλών δόσεων VSV (MOI5) σε CRL5800, CRL5810 και CRL5869 κύτταρα (Σχήμα 1Α). Είναι ενδιαφέρον ότι, οι μειωμένοι βασικά επίπεδα των περισσοτέρων ISGs σε όλες τις κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα προτεινόμενες καμία συσχέτιση μεταξύ VSV ευαισθησία και βασικά ISG επίπεδα (Πίνακας 1). Η μεταβλητή ευαισθησία σε ιογενείς θανάτωσης αντιστοιχεί στην απόκλιση κατάργηση της απόκρισης IFN σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα. Οι εκλεκτικοί virolytic επιδράσεις της VSV ήταν πιο σημαντικές σε CRL5810 κύτταρα συνεπής με τις πιο σοβαρές ατέλειες στο έμφυτη αντι-ιικό σύστημα τους (Πίνακας 2 και Σχήμα 1Α). Εντοπίσαμε επίσης 5 ISGs (

IRF5

,

IRF7

,

STAT1

,

IRF3

και

IFI16

), των οποίων η έκφραση ήταν ευδιακρίτως αυξημένα & gt? 3-φορές σε απόκριση προς πολυ I: C θεραπεία μόνο σε VSV-ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές (Πίνακας 2 και Σχήμα 1Α). Η ανάλυση στυπώματος Western επιβεβαίωσε ότι η αυξημένη έκφραση του mRNA ISG κατόπιν ροΙγΙ: επαγωγή C οδήγησε σε ρυθμίζεται αυξητικά τα επίπεδα πρωτεΐνης σε VSV-ανθεκτικά κύτταρα. φωσφορυλίωση Ser727 του STAT1 μπορεί να προκληθεί μόνο από την ΙΡΝβ, αλλά όχι από ΙΡΝα [24], και χρησιμοποιήθηκε ως ειδικός δείκτης για την ενεργοποίηση πρώιμη απόκριση γονιδιακής ΙΡΝ οδού. Μια ισχυρή ροΙγΙ: C-επαγωγή του φωσφορυλιωμένου-STAT1 (ρ-STAT1, Ser727), τα επίπεδα της πρωτεΐνης STAT1, IRF5 και IRF7 ήταν σύμφωνο με την αντίσταση των φυσιολογικών κυττάρων Beas2B και των δύο καρκινικών κυττάρων, HTB182 και CRL5928, στη μόλυνση VSV και vice αντίστροφα για την ιική ευαίσθητη κυτταρική γραμμή καρκίνου του πνεύμονα. Ήπια Ser727 φωσφορυλίωση STAT1 μπορεί να ανιχνευθεί σε κύτταρα CRL5807 υποδεικνύοντας σχετικά φυσιολογική σηματοδότηση νωρίς IFN σε αυτή την κυτταρική γραμμή σε σύγκριση με άλλες κυτταρικές VSV-ευαίσθητες γραμμές. IRF5 και τα επίπεδα πρωτεΐνης IRF7 δεν ήταν ομοιόμορφα επαγώγιμη κατά ροΙγΙ: επεξεργασίας C σε όλες τις καρκίνο του πνεύμονα κυτταρικές σειρές ιού ευαίσθητα (Εικόνα 1Β). Καμία σημαντική αλλαγή της IRF3 πρωτεΐνη παρατηρήθηκε από ροΙγΙ: επεξεργασίας C μεταξύ όλων των κυττάρων καρκίνου του πνεύμονα ίσως επειδή η δραστικότητά της είναι κυρίως ρυθμιζόμενη μετα-μεταφραστικά από τις αλλαγές στην φωσφορυλίωση (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ως εκ τούτου, οι παρατηρήσεις μας υποστήριξε την αντίστροφη σχέση μεταξύ της ογκολυτικού ευαισθησία στην VSV και τη δυνατότητα επαγωγής της σηματοδότησης IFN σε φυσιολογικά βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα Beas2B και τον καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων.

Α. Εκλεκτική κυτταροτοξικότητα των VSV σε κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα με ελαττωματική οδός IFN. Beas2B και 7 κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα αξιολογήθηκαν για την ικανότητά τους να επάγουν αντιική απόκριση μετά από μόλυνση VSV με ή χωρίς προεπεξεργασία με ΙΡΝα κυτταροπαθογονικότητας που προκαλούνται από ιούς, χρησιμοποιώντας ΜΤΤ δοκιμασία. Οι τιμές ομαλοποιήθηκαν με την αξία των μη μολυσμένα κύτταρα ελέγχου, η οποία ιδρύθηκε το 100% από τουλάχιστον δύο ανεξάρτητα πειράματα (

n

= 3) με SD σε & lt? 10%. (-): Όχι ελέγχου μόλυνσης VSV. MOI0.05: πολλαπλότητα μόλυνσης 0.05, χαμηλή δόση μόλυνσης VSV. MOI5: πολλαπλότητα μολύνσεως 5, υψηλή δόση μόλυνσης VSV. επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης Β αρκετών ISGs σε ροΙγΙ: C κατεργάζεται Beas2B και καρκινικά κύτταρα πνεύμονα συγκρίθηκαν με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα χρησιμοποιώντας κηλίδες Western. Διπλώστε αλλαγές IRF5 και της έκφρασης IRF7 μετά ροΙγΙ: επεξεργασίας C υποδείχθηκαν. Τουμπουλίνης χρησιμοποιήθηκε ως ομαλοποίηση ελέγχου.

Η

Επιγενετική αποσιώπηση των κρίσιμων παραγόντων μεταγραφής

IRF7

και

IRF5

αποτελέσματα στην κατάργηση της IFN οδού

υποστηρικτής υπερμεθυλίωση είναι μια επιγενετική μηχανισμό της γονιδιακής ρύθμισης είναι γνωστό για να φιμώσουν γονιδιακής έκφρασης στους μηχανισμούς καθορισμού των κυττάρων τύχη και καρκινογένεση. Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι η οδός IFN έχει καταργηθεί από την επιγενετική αποσιώπηση ενός κλειδιού αντιιικά άμυνας μεσολαβητής IRF7 στο αθάνατο ινοβλάστες ΕΕΔ [14], [15]. Είναι ενδιαφέρον ότι, μια άλλη μελέτη διαπίστωσε την έκθεση σε καπνό τσιγάρου οδήγησε σε καταστολή της σηματοδότησης IFN λόγω

IRF7

υπερμεθυλίωση προαγωγού, η οποία οδήγησε σε μειωμένη αντι-ιική άμυνα του αναπνευστικού επιθηλίου [25]. Συνεπώς, διερευνήσαμε αν μεθυλίωση προαγωγού του

IRF7

μπορούσε επίσης να είναι η αιτία της διαταραχής ΙΡΝ οδού σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου του πνεύμονα. αλληλουχίας του DNA του νατρίου κατεργασμένου με όξινο θειώδες γονιδιακού DNA αποκάλυψε

IRF7

υπερμεθυλίωση προαγωγού σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα 2 (CRL5810 και CRL5869), γεγονός που υποδηλώνει ότι η επιγενετική αποσιώπηση του

IRF7

έχει παίξει σημαντικό ρόλο στην διατάραξη της IFN σηματοδότησης σε αυτές τις κυτταρικές σειρές (Σχήμα 2Α). Από IRF5 που προκαλείται από ένα ισχυρότερο προφίλ μεταγραφής των πρώιμων αντι-ιικά γονίδια [23] και έχει πρόσφατα αναγνωριστεί ως ένα νέο δείκτη μεθυλίωσης για τον καρκίνο [21], [22], εξετάσαμε περαιτέρω την κατάσταση μεθυλίωσης του

IRF5

υποστηρικτής περιοχές στον καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα. Αύξηση της

IRF5

υπερμεθυλίωση βρέθηκε σε CRL5800, CRL5807, CRL5872 και CRL5810 κυτταρικές σειρές (Σχήμα 2Β), έτσι το παρόμοιο ιό ευαισθησία του

IRF7

-unmethylated CRL5800, CRL5807, CRL5872 κύτταρα ήταν η συνέπεια επιγενετικών

IRF5

αδρανοποίηση. Επιπλέον, υπερμεθυλίωση υποστηρικτής των δύο

IRF7

και

IRF5

εξήγησε την υψηλότερη ευαισθησία στην VSV εκδηλώνεται με CRL5810 κύτταρα. Αντίθετα, οι περιοχές υποκινητή της ούτε

IRF7

ούτε

IRF5

βρέθηκαν να είναι μεθυλιωμένο σε Beas2B, CRL5928 και HTB182 κυτταρικές γραμμές συνεπής με ανέπαφη την έμφυτη ανοσία και την αντοχή τους σε ογκολυτικό ιογενή δολοφονία. Συνολικά η επιλεκτική απώλεια της ιικής προστασίας σε καρκινικά κύτταρα πνεύμονα σχετίζεται με επιγενετική αδρανοποίηση του τουλάχιστον ενός από τα ΔΠΧΑ που εμπλέκουν την αναγκαιότητα τόσο IRF7 και IRF5 να είναι ενεργό για μια λειτουργική οδό IFN.

Η κατάσταση μεθυλίωσης του CpG νησίδες στο

IRF7

και

IRF5

περιοχές προαγωγού σε Beas2B, ανθρώπινες κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα και πρωτογενείς ιστούς εξετάστηκε με ανάλυση αλληλουχίας του κατεργασμένο με όξινο θειώδες ϋΝΑ γονιδιώματος. Α IRF7. Β IRF5. Κλειστούς κύκλους, μετουσιωμένες C σε CpG δινουκλεοτίδια? ανοικτοί κύκλοι, μη μεθυλιωμένες C σε CpG δινουκλεοτίδια. TSS, θέση έναρξης της μεταγραφής.

Η

Επειδή επιγενετικές γεγονότα μπορεί να συμβούν κατά τη διάρκεια μακροχρόνιας καλλιέργειας, οι οποίες δεν υπήρχαν στο αρχικό καρκίνο, εξετάσαμε μοτίβα μεθυλίωσης IRF-υποκινητή σε νωπά-κατεψυγμένα πρωτοβάθμια πνεύμονα καρκινικούς ιστούς . Η

IRF7

υποστηρικτής ήταν πλήρως μεθυλιωμένη σε 6 από 20 NSCLCs, ενώ άλλα 5 όγκοι είχαν 5′-μερική μεθυλίωση (Εικόνα 2Β) ως αρχικό γεγονός που μπορεί να εξαπλωθεί και σε γειτονικές θέσεις CpG [26]. Παράλληλα, βρήκαμε βαριά μεθυλίωση σε 4 από τα 20 δείγματα NSCLC και 11 άλλοι είχαν μερική μεθυλίωση των

IRF5

περιοχές υποκινητή. Συνολικά, 15 από 20 δείγματα ασθενών είχαν μεθυλίωση προαγωγού της μιας ή αμφοτέρων των ΔΠΧΑ, εκδηλώσεις επαρκής για να μετριάσει την απάντησή τους IFN. Αριθ παρεκκλίνουσα

IRF7

ή

IRF5

υπερμεθυλίωση ανιχνεύθηκε στα αντιστοίχιση φλεγμονώδη DNAs παλτό από αυτούς τους ίδιους ασθενείς που δείχνει ότι η υπερμεθυλίωση προαγωγού IRF δεν είχε προκύψει από βλαστικής γραμμής επιγενετικές μεταβολές. Ως εκ τούτου, η μεθυλίωση

IRF7

ή

IRF5

υποστηρικτές που βρέθηκαν στα καρκίνο του πνεύμονα κυτταρικές σειρές πιθανώς είχε την προέλευσή της στον όγκο αντί να είναι ένα γεγονός που επιλέγονται κατά τη διάρκεια της σε καλλιέργεια κυττάρων. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η αυξημένη ευαισθησία σε ιογενή λοίμωξη διαμεσολαβείται από επιγενετικών μηχανισμών κάτω ρύθμιση κλειδί ρυθμιστές αντιιικά άμυνας οδού IRF5 και IRF7. Η επικράτηση των επιγενετικών αποσιώπηση των ΔΠΧΑ και σφιχτό σύνδεσή της με ευαισθησία VSV τα καθιστούν ιδανικά theranostic βιοδείκτες για τον έλεγχο ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα για πιθανή ογκολυτική ιική θεραπεία.

Χειραγώγηση της IFN μονοπατιού σηματοδότησης που στοχεύουν ΔΠΧΑ αλλάζει VSV ιογενή ευαισθησία

Είμαστε στο παρελθόν έδειξαν ότι 5-αζα-dC θεραπεία απομεθυλίωση μπορούσε να αποκαταστήσει τη γονιδιακή έκφραση επιγενετικώς σιγήσει

IRF7

και άλλα ISGs επανενεργοποίηση έτσι το μονοπάτι της IFN σηματοδότησης σε αθάνατες κυτταρικές σειρές ινοβλαστών ΕΕΔ [14], [15] . Προς έκπληξή μας, τα επίπεδα IRF7 και έκφραση IRF5 παρέμεινε απών (Εικόνα 3Α, λιγότερο από 1,5 φορές αύξηση τόσο για IRF5 και IRF7) στον καρκίνο του πνεύμονα κυτταρική γραμμή CRL5810 μετά από 5-αζα-dC θεραπεία για όσο χρονικό διάστημα 4 εβδομάδων. Αξίζει να σημειωθεί ότι, αλληλούχιση του κατεργασμένου με όξινο θειώδες DNA στο

IRF5

και

IRF7

περιοχές προαγωγού αποκάλυψε ότι η παρατεταμένη εφαρμογή 5-αζα-DC δεν ήταν σε θέση να αντιστρέψει υπερμεθυλίωση υποστηρικτής των ΔΠΧΑ στην CRL5810 κύτταρα (τα δεδομένα δεν φαίνεται). Παρόμοια αντίσταση σε 5-αζα-άΟ θεραπεία βρέθηκε για την άλλη IRF7-μεθυλιωμένου καρκίνου του πνεύμονα κυτταρική γραμμή CRL5869 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ως αποτέλεσμα, παρατεταμένη θεραπεία απομεθυλίωση με 5aza-dC δεν ήταν σε θέση να επηρεάσουν την ευαισθησία VSV της CRL5810 κυττάρων (Σχήμα 3Β) και επιπλέον δείχνουν ότι IRF5 και IRF7 είναι δύο από τους βασικούς παράγοντες στη σηματοδότηση IFN που μπορεί να ρυθμίσει ογκολυτικό ιογενή ευαισθησία.

Α. Western blots απεκάλυψε καμία αύξηση της πρωτεϊνικής έκφρασης IRF7 ή IRF5 μετά από θεραπεία 5-αζα-DC του CRL5810 κυττάρων. Fold αλλαγές IRF5 και έκφρασης IRF7 υποδείχθηκαν στην κορυφή της στήλης 5-αζα-dC θεραπεία. κύτταρα Β CRL5810 ήταν ακόμη ευαίσθητη σε VSV cytolyic αποτελέσματα μετά από 5-αζα-dC θεραπεία.

Η

Καμία από αυτές τις δύο παραγόντων μεταγραφής IRF ήταν σε θέση να επάγονται σε VSV-ευαίσθητα κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα (Πίνακας 2 και Σχήμα 1Β), ενώ η υπερέκφραση του IRF5 ή /και IRF7 σε αθάνατη ινοβλάστες LFS ρυθμίζεται προς τα πάνω άλλων ISGs, εκδηλώνεται μια γρηγορότερη και ισχυρότερη έμφυτου ανοσοποιητικού σηματοδότηση κατά dsRNA διέγερση, η οποία είναι επαρκής για να προκαλέσει γήρανση [15]. Για να αναβιώσει την αναπηρία απόκριση IFN στα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα, IRF5 και μόνα τους ή σε συνδυασμό IRF7 διαμολύνθηκαν σταθερά σε CRL5810 κύτταρα, στα οποία υπέστησαν 5-αζα-dC θεραπεία δεν είχε καμία επίδραση στη απομεθυλίωση του IRF υποκινητή. Η ανάλυση στυπώματος Western επιβεβαίωσε την αυξημένη έκφραση πρωτεΐνης βασική του ΔΠΧΑ σε IRF5 και IRF7 υπερεκφράζουν κύτταρα (Σχήμα 4Α). Μεμονωμένα αποκατάσταση της έκφρασης IRF μερικώς προστατευμένο CRL5810 κύτταρα από VSV κυτταρόλυση με τη μεγαλύτερη αύξηση της βιωσιμότητας των κυττάρων από -50% σε περισσότερο από το 85% στο MOI0.05, και από -30% έως -50% κατά MOI5 μόλυνσης VSV σε κύτταρα που υπερεκφράζουν τόσο IRF5 και IRF7 σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου φορέα (Σχήμα 4Β). Εξηγήσαμε την μέτρια αύξηση της ιικής προστασίας, ακόμη και μετά IRF5 και IRF7 συνδυασμό επιμόλυνση από σοβαρή απώλεια άλλων σημαντικών ISGs σε CRL5810 κύτταρα όπως υποδεικνύεται από την έλλειψη αποτελέσματος κατά εξωγενών IFN.

Α. επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης του STAT1, IRF5 και IRF7 αναλύθηκαν με κηλίδες Western στο IRF σταθερά επιμολυσμένα CRL5810 κύτταρα. αντίσωμα αντι-ΡΕΑΟ εφαρμόστηκε για την ανίχνευση επιμολυσμένα επίπεδα πρωτεΐνης IRF, ενώ IRF5- και IRF7-ειδικά αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν για ολική πρωτεϊνική έκφραση IRF. B. Η υπερέκφραση του IRF5 ή /και IRF7 αυξημένη αντίσταση μερικώς CRL5810 κυττάρων σε μόλυνση VSV με την πιο αύξηση στη συνδυασμένη trasfection. * P & lt? 0,02, ** p & lt?. 0.001

Η

Η επιλεκτική αναπαραγωγή του VSV σε όγκους με κίνδυνο οδός IFN είναι ο ακρογωνιαίος λίθος για την κλινική εφαρμογή της ως ογκολυτικό ιική θεραπεία. Ωστόσο, δεν είναι καρκίνοι όλων των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα »έχουν έλλειψη φυσικής ανοσίας μονοπάτι τους. Για να ξεπεραστεί αυτό το εμπόδιο και να καταστρέψουν αυτές τις VSV-ανθεκτικά κύτταρα, siRNAs να IRF5 (siIRF5) και IRF7 (siIRF7) εφαρμόστηκαν για να καταστείλει απόκριση IFN στα κύτταρα με ενεργή οδό IFN. Σε σύγκριση με κύτταρα επιμολυσμένα με Beas2B ελέγχου περιπλεγμένο siRNA, κύτταρα επιμολυσμένα με siIRF5 ή siIRF7 είχε ως αποτέλεσμα μείωση σε IRF5 και επαγωγή IRF7 μετά ροΙγΙ: επεξεργασίας C ενώ διαμόλυνση και των δύο siIRF5 + siIRF7 εξαλειφθεί εντελώς IRF ενεργοποίησης (Σχήμα 5Α). Η επιμόλυνση του siIRF5 μόνη ανέστειλε σημαντικά ροΙγΙ: C-ενεργοποίηση και των δύο IRF5 και IRF7, η οποία μπορεί να εξηγηθεί από ένα βασικό ρόλο για IRF5 ως ένας ισχυρός επαγωγέας της ΙΡΝβ [23]. Μειωμένη έκφραση IRF5 από siIRF5 οδήγησε σε πολύ μικρότερη παραγωγή ΙΡΝβ που οδηγεί σε μειωμένη διέγερση των δευτερογενών γονιδίων απόκρισης IRF7. Όπως ήταν αναμενόμενο, η καταστολή αυτών των 2 γονιδίων με siRNAs οδήγησε σε σημαντική απώλεια της προστασίας από μόλυνση VSV με την πιο αύξηση κυτταροτοξικότητα σε σχεδόν 40% μετά υψηλότερη έκθεση VSV δόση στα knockdowns συνδυασμό σε σύγκριση με τον έλεγχο siRNA (Σχήμα 5Β). Παρόμοια ευρήματα παρατηρήθηκαν σε παράλληλες μελέτες επιμόλυνση των VSV-ανθεκτικών κυττάρων CRL5928, τα οποία έχουν σχετικά άθικτη σηματοδότηση IFN (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτό αποδεικνύει σαφώς ότι IRF5 και IRF7 είναι λειτουργικά απαραίτητη για την έμφυτη ανοσία που καθορίζει την ιική ευαισθησία των κυττάρων αυτών.

Α. Κατάργηση των IRF5 ή /και επαγωγή IRF7 από τα siRNA κατά ροΙγΙ: treatmentwas C φαίνεται από κηλίδα western. Διπλώστε αλλαγές IRF5 και της έκφρασης IRF7 μετά ροΙγΙ: επεξεργασίας C υποδείχθηκαν. Si (-): έλεγχος siRNA. Β IRF5 και IRF7 είναι σημαντικοί παράγοντες που καθορίζουν την ιογενή ευαισθησία των κυττάρων. Η αναστολή αυτών των 2 γονιδίων οδήγησε σε απώλεια της προστασίας από μόλυνση VSV με την πιο αύξηση κυτταροτοξικότητα στο συνδυασμό knockdown. * P & lt? 0.03, ** p & lt?. 0.001

Η

Εν ολίγοις, η απώλεια της σηματοδότησης IFN είναι αναγκαία και επαρκής για την αυξημένη ευαισθησία σε θανάτωση από ογκολυτικούς ιούς. Η χειραγώγηση της οδού IFN μέσω παραγόντων μεταγραφής IRF5 και IRF7 μεταβληθεί ανταπόκριση των κυττάρων σε μόλυνση VSV. Ανάλυση της οδού IFN χρησιμοποιώντας αυτές βιοδείκτες μεθυλίωση IRF μπορεί να παρέχει νέες theranostic βιοδείκτες για τον προσδιορισμό της ευαισθησίας του ασθενούς να ογκολυτική ιούς.

Συζήτηση

Ένα λειτουργικό έμφυτο ανοσοποιητικό σύστημα αντιική προστατεύει τα κύτταρα έναντι ιικής μόλυνσης, κυρίως λόγω της επαγωγής του αμυντικού καταρράκτη σηματοδότησης IFN, η οποία φαίνεται να είναι η βάση για την αντίσταση του ιού και ανοσοδιεγερτικές ιδιότητες. Εδώ, έχουμε επιδείξει την ισχυρή και πειστική αντίστροφη σχέση μεταξύ της αποτελεσματικής έμφυτη αντιιικά απόκριση και την ευαισθησία ογκολυτική ιικών χρησιμοποιώντας κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα. Επιπλέον, παράγοντες μεταγραφής IRF5 και IRF7 εντοπίστηκαν ως κρίσιμες ρυθμιστές του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος και χρήσιμα βιοδεικτών για ογκολυτική ευαισθησία του ιού στον καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων καθώς και οι δύο από αυτούς πρέπει να είναι επαγόμενο για μια λειτουργική οδό IFN. Αδρανοποίηση είτε IRF5 ή IRF7 αποδυνάμωσε την αντι-ιική ανταπόκριση με την πιο σημαντική απώλεια, όταν και οι δύο ΔΠΧΑ είχαν επιγενετικώς σιγήσει στο CRL5810 κύτταρα. Το διαφορετικό βαθμό της κυτταρολυτικής θανάτου που σχετίζονται με τη διαφορική σοβαρότητα της IFN ελαττώματα οδού. Παρά την παρουσία του εξωγενούς ΙΡΝα, CRL5810 κύτταρα δεν αποκρίνονται και παραμένουν ευάλωτες σε VSV θανάτωση αντιστοιχεί στην πλήρη διακοπή της δραστηριότητας οδού IFN.

απώλεια έκφρασης γονιδίου καταστολής όγκου με παρεκκλίνουσα μεθυλίωση προαγωγού είναι ένα πρώιμο και κοινών επιγενετικές γεγονός κατά την έναρξη και εξέλιξη του καρκίνου [27]. Έχουμε δείξει επιγενετική αποσιώπηση του

IRF5

και

IRF7

σε νησίδες CpG περιοχών προαγωγού στον καρκίνο του πνεύμονα. Φαρμακολογική στόχευση της ανώμαλης επιγενετικές αλλαγές από πράκτορες απομεθυλίωση έχει δείξει κλινική αποτελεσματικότητα σε διάφορες αιματολογικές κακοήθειες [28]. Ωστόσο, οι αναστολείς της μεθυλίωσης δεν μπορεί να αποφευχθεί η επανάληψη της υπερμεθυλίωσης και έχουμε παρουσιάσει στοιχεία που αποδεικνύουν ότι επιγενετικές απορρύθμιση δεν μπορεί να επανέλθει πλήρως σε μια σειρά από κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα. Η αποτυχία των παραγόντων απομεθυλίωση να αποκαταστήσει κρίσιμη ISG έκφραση δείχνει ότι οι εν λόγω καρκίνου του πνεύμονα κυττάρων είναι ιδανικοί στόχοι για ογκολυτική ιική θεραπεία.

Παρά το γεγονός ότι τα βασικά επίπεδα των πιο ISGs μειώθηκαν σε όλες τις κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα σε σύγκριση με την κανονική βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα, ογκολυτικού ιογενή ευαισθησία σχετίζεται μόνο με ροΙγΙ: C επαγόμενη από τα επίπεδα έκφρασης ορισμένων βασικών ISGs όπως IRF7 και IRF5. Ωστόσο, IRF5 και IRF7 υπερέκφραση δεν αρκεί για να αποκατασταθεί πλήρως IFN μονοπάτι και μόνο μερικώς διασωθεί κύτταρα από ιογενή λοίμωξη που οφείλεται σε ανεπάρκεια άλλων σημαντικών ISGs. Η αποτυχία να επάγει φωσφορυλίωση Ser727 κατόπιν ροΙγΙ: επεξεργασίας C προτείνει επιπλέον ελαττώματα έμφυτη ανοσία σε αρκετές ευαίσθητες κυτταρικές σειρές VSV (Σχήμα 1Β). Επιπλέον, το mRNA από 3 άλλες ISGs (STAT1, IRF3 και IFI16, Πίνακας 2) επάγεται με συνέπεια σε VSV-ανθεκτικά κύτταρα. Περαιτέρω μελέτες απαιτούνται για να επιβεβαιώσουν το theranostic βιοδείκτες και μπορούν να προσδιορίζουν πρόσθετες ISGs ως βιοδείκτες στον καρκίνο του πνεύμονα του οποίου η ενεργοποίηση θα μπορούσε να διακρίνει τον ιό ανθεκτικό από καρκίνους ιό ευαίσθητα.

Σας παρουσιάζονται αποδείξεις ότι η λειτουργική αδρανοποίηση των IRF5 και IRF7 είναι ο κύριος μηχανισμός για να διαταράξει IFN σηματοδότησης σε καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα. Παρ ‘όλα αυτά, διάφορες κακοήθειες φιλοξενούν ποικίλα μοριακά ελαττώματα αυτής της οδού. Η απορρύθμιση μονοπάτια JAK3 και RNase L σε LNCaP κυττάρων καρκίνου του προστάτη [29], ελαττωματικά STAT1 και ενεργοποίηση STAT2 σε ινοσαρκώματος και κύτταρα μελανώματος [30], [31] και ρυθμισμένα προς τα κάτω IFNAR σε καρκίνο της ουροδόχου κύστης υψηλής ποιότητας [32] έχουν όλες αναφερθεί απενεργοποιήσετε το έμφυτο ανοσοποιητικό σηματοδότησης. Συνολικά, η οδός IFN συχνά ρυθμίζεται προς τα κάτω κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης, ακόμη και αν οι ξεχωριστές δέσμες ISGs καταστέλλεται από διάφορους μηχανισμούς κατά του καρκίνου-τύπου ειδικό τρόπο.

Μια αποτυχία για την ενεργοποίηση έμφυτης απόκρισης ανοσίας κατά ογκολυτική λοίμωξη ιού RNA οδηγεί σε η άκρως επιλεκτική εκκαθάριση των κυττάρων όγκου IFN-αποκρίνονται. Εκτός από VSV, άλλους ιούς RNA όπως NDV [33] και τον ιό της γρίπης [34] έχουν επίσης αποδειχθεί ότι έχουν όγκο εκλεκτική κυτταροτοξικότητα χρησιμοποιώντας τον ίδιο μηχανισμό για στόχευση κυττάρων με μειωμένη δραστηριότητα IFN. Κλινικές δοκιμές της ενδοφλέβιας χορήγησης του NDV (PV701) αποδείχθηκε αρχική ογκολυτική επιπτώσεις της σε διάφορες στερεούς όγκους [35]. Επιπλέον, VSV στελέχη με μεταλλάξεις πρωτεΐνης Μ (AV1 και AV2) ενεργοποιούνται πιο ισχυρή αντι-ιική απόκριση λόγω ελαττωμάτων τους στην ικανότητα να σηματοδότηση κλείσιμο IFN? αυτές οι μεταλλάξεις επιλεκτικά καταστρέφονται IFN-κύτταρα που αποκρίνονται σε χαμηλότερη θεραπευτική δόση, ενώ παραμένουν εξαιρετικά λυτική σε καρκινικά κύτταρα [9]. Η έκφραση του ανοσοποιητικού διέγερσης πρωτεϊνών όπως η ιντερλευκίνη-2 (IL-4) ή ΙΡΝβ σε γενετικά VSV έχει επίσης παραχθεί για την προώθηση της ιικής κυτταρολυτικών αποκρίσεων [5], [6]. Ως εκ τούτου, η ενίσχυση αντι-ιικές αποκρίσεις σε φυσιολογικά κύτταρα θα ενισχύσει ογκολυτική επιλεκτικότητα στην IFN-αποκρίνονται όγκων.

Αν και μια μειωμένη αντι-ιική απόκριση μπορεί να είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό ενός ευρέος φάσματος καρκίνων, η ογκολυτική αποτελεσματικότητα των φυσικών RNA ιών μπορεί να εξακολουθεί να είναι σχετικά χαμηλό, καθώς ορισμένοι όγκοι εκδηλώνουν ισχυρή έμφυτη απαντήσεις ασυλία που αναστέλλουν την αντιγραφή του ιού και την εξάπλωση.