Αφηρημένο

Ιστορικό

Σε αυτή την πρωτοποριακή μελέτη για να η βιολογική δράση της οργανομεταλλικής ενώσεως σιδήρου (III) -salophene (Fe-SP) τα συγκεκριμένα αποτελέσματα του Fe-SP για την βιωσιμότητα, τη μορφολογία, τον πολλαπλασιασμό, και την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου σε πλατίνα ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου ωοθηκών διερευνήθηκαν.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

Fe-SP εμφανίζεται εκλεκτική κυτταροτοξικότητα έναντι SKOV-3 και κυτταρικές σειρές σε συγκεντρώσεις μεταξύ 100 ηΜ και 1 μΜ OVCAR-3 (επιθηλιακό αδενοκαρκίνωμα των ωοθηκών), ενώ η βιωσιμότητα των κυττάρων HeLa ( επιθηλιακά τραχήλου αδενοκαρκίνωμα) ή πρωτοπαθή πνευμονική ή δέρμα ινοβλάστες δεν επηρεάστηκε. SKOV-3 κύτταρα σε αντίθεση με ινοβλάστες μετά από θεραπεία με Fe-SP αποκάλυψε εμφανή χαρακτηριστικά της απόπτωσης συμπεριλαμβανομένης πυκνά χρωματισμένη πυρηνικής κοκκώδη σώματα εντός κατακερματισμένη πυρήνες, ιδιαίτερα συμπυκνωμένη χρωματίνη και τον κατακερματισμό της χρωματίνης. θεραπεία Fe-SP οδήγησαν στην ενεργοποίηση των δεικτών της εξωγενούς

(κασπάση-8) και

ενδογενή

(κασπάση-9) μονοπατιού της απόπτωσης καθώς και executioner κασπάση-3, ενώ PARP -1 είχε απενεργοποιηθεί. Fe-SP που ασκείται επιδράσεις ως αντι-πολλαπλασιαστικός παράγοντας με IC

50 αξία των 300 nm και προκάλεσε καθυστερημένη εξέλιξη των κυττάρων διαμέσου φάσης S-φάση του κυτταρικού κύκλου με αποτέλεσμα την πλήρη διακοπή φάσης S. Όταν ενδοπεριτονικά εφαρμόζεται σε αρουραίους Fe-SP δεν έδειξε καμία συστηματική τοξικότητα σε συγκεντρώσεις που σε προκαταρκτικές δοκιμές ήταν αποφασισμένοι να χημειοθεραπευτικών σχετικές δόσεις σε ένα μοντέλο ωοθηκών καρκινικά κύτταρα αρουραίου.

Συμπέρασμα /Σημασία

Η παρούσα έκθεση προτείνει ότι Fe-SP είναι ένας ισχυρός παράγοντας αύξησης καταστολή

in vitro

για κυτταρικές σειρές που προέρχονται από τον καρκίνο των ωοθηκών και ένα δυνητικό θεραπευτικό φάρμακο για τη θεραπεία τέτοιων όγκων

in vivo

.

Παράθεση: Lange TS, Kim ΚΚ, Singh RK, Strongin RM, McCourt CK, Brard L (2008) σιδήρου (ΙΙΙ) -Salophene: μια οργανομεταλλική ένωση με εκλεκτική κυτταροτοξική και αντι-πολλαπλασιαστικές ιδιότητες σε Platinum-Resistant Καρκίνος των ωοθηκών κύτταρα. PLoS ONE 3 (5): e2303. doi: 10.1371 /journal.pone.0002303

Επιμέλεια: Anja-Katrin Bielinsky, Πανεπιστήμιο της Μινεσότα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 25 Φεβ του 2008? Αποδεκτές: 11 Απρίλη του 2008? Δημοσιεύθηκε: May 28, 2008

Copyright: © 2008 Lange et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από ένα Σπόρων επιχορήγησης Πανεπιστήμιο Brown και NICHD, Κ12 HD043447 BIRCWH Scholar Grant με τον Δρ Brard

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ορυκτά και μέταλλα έχουν χρησιμοποιηθεί σε διάφορες μορφές ιατρικής θεραπείας για αρκετές χιλιάδες χρόνια. Στην αρχαία Αίγυπτο και την Ελλάδα, στην Ayurvedic ιατρική, ασιατική ιατρική, ή από μέταλλα Αζτέκοι σε στοιχειώδη μορφή, ως άλατα ή ως φαρμακευτικά δραστικών ενώσεων από τα φυτά που χρησιμοποιούνται κυρίως λόγω της αντι-φλεγμονώδη επιπτώσεις που συνδέονται με την εφαρμογή [1], [2 ]. Μέταλλα βρέθηκαν αναβίωσή τους το φαρμακολογικές προσπάθειες κατά τη διάρκεια της αναγέννησης [2], ωστόσο, συχνά με τοξικές παρενέργειες λόγω της χρήσης βαρέων μετάλλων. Η πρώτη έκθεση σχετικά με τη θεραπευτική χρήση των μετάλλων ή μεταλλικών ενώσεων που περιέχουν όχι μόνο όπως και πριν σε ελκώδης συνθήκες, αλλά στον καρκίνο και λευχαιμία χρονολογούνται από τον δέκατο έκτο αιώνα [3], [4]. Πολλές πρόσφατες μελέτες περιγράφονται τα χαρακτηριστικά των διαφορετικών μεταλλικών ενώσεων και τη χρήση τους ή /και την υποτιθέμενη τρόπος δράσης στη σύγχρονη θεραπεία του καρκίνου σε προ-κλινικές και κλινικές μελέτες [4], [5], [6].

Η τρέχουσα θεραπεία μιας ποικιλίας όγκων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου των ωοθηκών, στηρίζεται σε οργανομεταλλικές ενώσεις λευκόχρυσου. Στις Ηνωμένες Πολιτείες, επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC) είναι η κύρια αιτία θανάτου από γυναικολογικών κακοηθειών και την τέταρτη πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο μεταξύ των γυναικών [7]. Υπολογίζεται ότι περίπου είκοσι δύο χιλιάδες νέες περιπτώσεις και κατ ‘εκτίμηση δεκαπέντε χιλιάδες θανάτους δευτεροβάθμια με τον καρκίνο των ωοθηκών σημειώθηκαν κατά το έτος 2007 [8]. Αν και οι περισσότεροι ασθενείς ανταποκρίνονται αρχικά σε κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση και επικουρική πακλιταξέλη και με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία, η πλειοψηφία θα βιώσουν υποτροπή της νόσου. Ενώ επανάληψη της θεραπείας με ένα φάρμακο με βάση την πλατίνα είναι δυνατόν για μερικές γυναίκες το ποσοστό ανταπόκρισης στις τρέχουσες δεύτερη γραμμή χημειοθεραπεία είναι 15-30% λόγω της αύξησης της αντίστασης σε τέτοια φάρμακα που απαιτούν την ανάπτυξη νέων φαρμάκων για τη θεραπεία τέτοιων όγκων [6] , [9].

Ο σχεδιασμός των νέων φαρμάκων με βάση μέταλλα συχνά αμφισβητήθηκε από φυσιο-χημικές ιδιότητες, όπως η ανεπαρκής διαλυτότητα ή υδρολυτική αστάθεια καθιστά προβληματική για τον έλεγχο της παράδοσης, η σταθερότητά τους και τελικά συγκεκριμένες επιδράσεις τους

in vivo

. Μία προσέγγιση για τον έλεγχο των κυτταροτοξικών αποκρίσεων των νέων ενώσεων με βάση μέταλλα είναι να συμμετάσχει βιολογικά ουσιώδη μέταλλα μετάπτωσης, όπως σίδηρος (Fe), μαγγάνιο (Μη), ψευδαργύρου (Ζη), χαλκός (Cu), ή κοβάλτιο (Co) διαφορετικών οξειδωτικές καταστάσεις και αντιδραστικά ενδιάμεσα προϊόντα τους [4], [5]. Η παρούσα έκθεση περιγράφει τις επιλεκτικές κυτταροτοξικά αποτελέσματα ενός νέου οργανομεταλλικό σύμπλοκο (σίδηρος (III) -salophene? Εικ. 1Α). Σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών πλατίνα ανθεκτικά

(Α) Σύνθεση του υποκαταστάτη salophene (SP? από 1,2-φαινυλενοδιαμίνη και ο-βανιλλίνη) και του σιδήρου (III) -salophene σύμπλοκο (Fe-SP) (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι). (Β) Δομικός χαρακτηρισμός Fe-SP με κρυσταλλογραφία ακτίνων-Χ (βλέπε Πίνακα 1.)

Η

Salophenes αντιπροσωπεύουν μια κατηγορία οργανικών ενώσεων που ορίζονται από δύο βάσεις του Schiff που συνδέει τρία αρωματικά τμήματα. Τα δύο εξωτερικά αρωματικά τμήματα διαθέτουν συνήθως salisaldehydes και την κεντρική αρωματικό ήμισυ ένα

o

φαινυλενο-διαμίνη ή αναλογική. Salophenes εμφανίζουν ισχυρή δέσμευσης με στοιχεία μεταβατικού μετάλλου και είναι στενά συνδεδεμένα με SALENs περιέχει τις βάσεις του Schiff που αποτελούνται από αλειφατικές διαμίνες. Metallosalens εμπίπτουν σε ένα αριθμό μεταλλικών ενώσεων μη-λευκοχρύσου όπως θειοημικαρβαζόνη ή υδραζόνη φαρμακοφόρα με υποτιθέμενο αντικαρκινικά δραστηριότητες [4], [10]. Metallosalophenes δεν έχουν μελετηθεί εκτενώς σε σχέση με εφαρμογές σε βιολογικά συστήματα: προηγουμένως salophene-λανθανιδίου σύμπλοκα περιγράφονται να δεσμεύονται επιλεκτικά με ουδέτερα σάκχαρα και λιπίδια συμπεριλαμβανομένων λυσοφωσφατιδικό οξύ, το οποίο χρησιμεύει ως δείκτης για διάφορες παθολογικές καταστάσεις συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου των ωοθηκών [11] και Mn -salophene (EUK178) καθώς και διάφορες οθόνη Mn-SALENs CYTO-προστατευτικά χαρακτηριστικά σε καλλιέργειες ινοβλαστών μέσω υπεροξειδίου του υδρογόνου σαρώσεως [12]. Μία σχετική ένωση (κοβάλτιο-3,4-diarylsalen), έχει αποδειχθεί ότι μειώνει τη βιωσιμότητα των διαφόρων καρκινικών κυτταρικών σειρών σε μάλλον υψηλές συγκεντρώσεις (≥20 μΜ) και προτάθηκε ότι ο τρόπος δράσης δεν συνδεόταν με την οξειδωτική βλάβη του DNA [ ,,,0],13]. Με βάση την παρούσα έκθεση και περαιτέρω μελέτες σχετικά με τις επιλεκτική κυτταροτοξική δράση των salophenes όταν συμπλέκονται με μέταλλα μετάπτωσης, κατατέθηκε ένα δίπλωμα ευρεσιτεχνίας. Αυτή η εφεύρεση περιλαμβάνει τη σύνθεση, βιολογικές αξιολογήσεις, εφαρμογές και φαρμακευτικές συνθέσεις από μέταλλο-salophenes (MSPs). Περαιτέρω, η εφεύρεση περιλαμβάνει τη χρήση των MSPs ως φάρμακα με δραστηριότητες θεραπευτική αντι-νεοπλασματικές, αντι-αγγειογενετική και αντι-καρκίνου και με άλλες ιδιότητες, όπως η ελεύθερη ρίζα καθαρισμού. Επιπλέον, αυτή η εφεύρεση παρέχει μεθόδους πρέπει να εφαρμόζονται σε χημειοπροφύλαξη της χημικής καρκινογένεσης και αλλοιώσεις του μεταβολισμού του φαρμάκου με τη συμμετοχή των εποξειδίων ή ελεύθερες ρίζες οξυγόνου ή ενδιάμεσα.

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνηθεί το δυναμικό των Fe- SP ως ένα βιολογικά ενεργό φάρμακο σε ένα μοντέλο καρκίνου των ωοθηκών κυττάρου σε σχέση με δοσοεξαρτώμενη και ειδικές επιδράσεις στη βιωσιμότητα, τη μορφολογία, τον πολλαπλασιασμό, και την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου. Εκτός από την περιγραφή της εκλεκτική κυτταροτοξικότητα των Fe-SP για την πλατίνα ανθεκτικά κύτταρα καρκίνου των ωοθηκών πραγματοποιήσαμε μια μελέτη σχετικά με την συστημική τοξικότητα της Fe-SP όταν εφαρμόζεται σε αρουραίους ως πρότυπο σύστημα. Η παρούσα έκθεση προτείνει ότι αυτή η νέα οργανομεταλλική ένωση εμφανίζει ιδιότητες ως δυνητικό θεραπευτικό φάρμακο και μια εναλλακτική σε αντιδραστήρια πλατίνα στην αγωγή του καρκίνου των ωοθηκών.

Αποτελέσματα

Ειδικά κυτταροτοξική δράση του Fe-SP για την ανθρώπινο πλατίνα-ανθεκτικές κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών

σε μια πρώτη προσέγγιση για την ανάλυση των επιπτώσεων του σιδήρου (III) -salophene (Fe-SP) για ωοθηκών καρκινικά κύτταρα πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση βιωσιμότητας που απασχολούν SKOV-3 και OVCAR- 3 (ανθρώπινο πλατίνα ανθεκτικών ωοθηκών επιθηλιακών αδενοκαρκίνωμα) κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με HeLa (επιθηλιακό τραχήλου αδενοκαρκίνωμα) ή πρωτογενή πνεύμονα (LF) ή ινοβλάστες δέρματος (BJ) (διόδους 10-13). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για 24 ώρες με διάφορες συγκεντρώσεις (0.1-3 μΜ) είτε Fe-SP ή μη συμπλεγμένου salophene (SP) σαν πρόσθετος έλεγχος με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα. Η θεραπεία με SP δεν επηρέασε τη βιωσιμότητα οποιασδήποτε από αυτές τις κυτταρικές σειρές στην περιοχή από 100 ηΜ έως 3 μΜ (Σχήμα 2), ούτε σε συγκεντρώσεις τόσο υψηλές όσο 60 μΜ (μη δημοσιευμένα δεδομένα). Fe-SP, σε συγκεντρώσεις ≥3 μΜ, που ασκείται ιδιαίτερα κυτταροτοξικά αποτελέσματα σε όλες τις κυτταρικές σειρές. όχι αξιοσημείωτο ότι η απόκριση αυτών των κυττάρων σε Fe-SP ήταν μόνο δοσοεξαρτώμενη αλλά σε συγκεντρώσεις κάτω από 3 μΜ κυτταρικό τύπο ειδική (Εικ. 2). Ενώ Fe-SP σε συγκεντρώσεις μεταξύ 300 nm και 1 μΜ αποδείχθηκε ότι είναι εξαιρετικά κυτταροτοξική σε SKOV-3 και κύτταρα OVCAR-3, η κατεργασία των κυττάρων HeLa ή πρωτογενείς ινοβλάστες με 1 μΜ Fe-SP δεν οδήγησε σε καμία αλλαγή της βιωσιμότητας. Έτσι, Fe-SP, ανάλογα με την κυτταρική σειρά αγωγή, εμφανίζει εκλεκτική κυτταροτοξικότητα, με έναν δοσο-εξαρτώμενο απόκρισης δείχνεται εδώ για δύο πλατίνα ανθεκτικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου των ωοθηκών.

Η κυτταροτοξικότητα του Fe-SP για τον καρκίνο των ωοθηκών του ανθρώπου κύτταρα (SKOV-3, OVCAR-3), σε σύγκριση με την επίδραση σε κύτταρα HeLa ή πρωτογενείς ινοβλάστες σε περάσματα 11 έως 13 (LF1, ανθρώπινου πνεύμονα? BJ, ανθρώπινης ακροποσθίας). Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για συνολικά 24 ώρες με διάφορες συγκεντρώσεις (0.1-3 μΜ) του Fe-SP ή μη συμπλοκοποιημένης SP (CTR). Η δοκιμασία βιωσιμότητας MTS διεξήχθη όπως περιγράφεται (Υλικά και Μέθοδοι). Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν? Τα δεδομένα εκφράζονται ως ο μέσος όρος των τριπλών προσδιορισμών (Χ ± SD) ενός αντιπροσωπευτικού πειράματος σε% βιωσιμότητα κυττάρου των μη επεξεργασμένων κυττάρων [= 100%].

Η

Επιλεκτική μορφολογικές αλλαγές και η επαγωγή της απόπτωσης σε SKOV -3 ωοθηκών καρκινικά κύτταρα μετά τη θεραπεία Fe-SP

Για να αναλύσουν μορφολογικές αλλαγές του SKOV-3 ωοθηκών καρκινικά κύτταρα και πρωτογενείς ινοβλάστες (BJ) κατά την αγωγή Fe-SP θα διεξαχθεί φωτός και μικροσκοπία φθορισμού μετά τη σταθεροποίηση της κυττάρων και χρώση του πυρηνικού χρωματίνης με DAPI. Ο πληθυσμός των μη επεξεργασμένων SKOV-3 ή των κυττάρων σε επεξεργασία με 2 μΜ μη-συμπλοκοποιημένου SP για 24 ώρες εμφανίζεται ένα ομοιογενές μορφολογία με πυρήνες ελαφρά και ομοιόμορφα χρωματίζονται με DAPI (Εικ. 3Α) και περιστασιακές εμφανίσεις των διαιρούμενων κυττάρων σε μίτωση (φωτεινό μπλε χρώση των χρωμοσωμάτων παρατάσσονται κατά μήκος του μετάφασης πλάκα? δεν φαίνεται εδώ). Αντίθετα, μετά από αγωγή με 2 μΜ Fe-SP η πλειοψηφία των κυττάρων SKOV-3 εμφανίζεται συρρίκνωση, ιδιαίτερα συμπυκνωμένη χρωματίνη, και συχνά πυκνά χρωματισμένη πυρηνικό κοκκώδη σώματα ( «αποπτωτικών σωμάτων») εντός κατακερματισμένη πυρήνες, (Εικ. 3Α). Πρωτογενείς ινοβλάστες που έλαβαν θεραπεία με Fe-SP ή SP στην ίδια συγκέντρωση δεν αποκάλυψε σημαντικές αλλαγές στη μορφολογία ούτε προφανή χαρακτηριστικά της απόπτωσης που δείχνει την επιλεκτική ανταπόκριση του καρκίνου του ωοθηκική κυτταρική γραμμή που μελετήθηκαν σε Fe-SP.

Ο καρκίνος των ωοθηκών κύτταρα (SKOV-3) ή πρωτογενείς ινοβλάστες (BJ) υποβλήθηκαν σε αγωγή για 24 ώρες με Fe-SP ή μη συμπλοκοποιημένης SP (Ctr.) σε μία συγκέντρωση 2 μΜ πριν από τη μικροσκοπική ανάλυση με αντίθεσης φάσης (PC) ή ανάλυση φθορισμού μετά από χρώση χρωματίνη (DAPI) όπως περιγράφεται (Υλικά και Μέθοδοι). Οι εικόνες που λαμβάνονται από ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα που φαίνεται. Bar = 10 μm. (Β) Ανάλυση του DNA κατακερματισμός σε δοκιμασία TUNEL. SKOV-3 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Fe-SP (0, 0,7, 2 μΜ) για 24 ώρες. Μια δοκιμασία TUNEL διεξήχθη με συν-χρώση με φλουορεσκεΐνη-12-dUTP (επισήμανση εγκοπές DNA σε αποπτωτικά κύτταρα) και της χρωματίνης με ιωδιούχο προπίδιο (Υλικά και Μέθοδοι). Συν-χρώση των μη επεξεργασμένων κυττάρων SKOV-3 πριν από καθήλωση και διαπερατοποίηση χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος (τοποθετήστε πάνω πίνακα). Κατά τη διάρκεια μικροσκοπία φθορισμού, ελήφθησαν αντιπροσωπευτικά εικόνες, αποπτωτικών λεκέ (πράσινο) και πυρηνική χρώση (κόκκινο) επικαλύπτονται. TUNEL θετικών πυρήνων λόγω του κατακερματισμού του DNA εμφανίζονται ως κίτρινες περιοχές. Bar = 10 μΜ. Ανάλυση (Γ) Western Blot της ενεργοποίησης κασπάσης. SKOV-3 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Fe-SP (0, 1,25 μΜ, 2,5 μΜ) για 24 ώρες. PAGE και ανάλυση στυπώματος Western των προϊόντων λύσης κυττάρου διεξήχθη. Η ενεργοποιημένη κασπάση-3, -8, -9, και αδρανοποιημένο PARP-1 έγινε ορατή με ανοσοστύπωμα χρησιμοποιώντας πρωτογενή αντισώματα μόνο αναγνωρίζουν διασπασμένων θραυσμάτων, δεν πλήρους μήκους προ-μορφές, αυτών των πρωτεϊνών σε συνδυασμό με ένα σύστημα ανίχνευσης χημιφωταύγειας όπως περιγράφεται στο (Υλικά και Μέθοδοι). Ένα αντιπροσωπευτικό πείραμα δείχνεται. Ως εσωτερικό πρότυπο για ίση φόρτωση (50 μg ολικής κυτταρικής πρωτεΐνης /λωρίδα) στυπώματα ανιχνεύθηκαν με ένα αντίσωμα αντι-β-ακτίνης.

Η

Μια κοινή μέθοδος για την ανίχνευση κατάτμηση του DNA υπό το φως της κυτταρικής αποπτωτικών εκδηλώσεις είναι μια δοκιμασία TUNEL, το οποίο χρησιμοποιείται μετά την αγωγή του SKOV-3 με Fe-SP. Η δοκιμασία βασίζεται στην παρουσία των εγκοπών στο DNA των αποπτωτικών και νεκρωτικών μερικά κύτταρα, τα οποία μπορούν να ταυτοποιηθούν με τερματική τρανσφεράση που θα καταλύουν την προσθήκη του επισημασμένου dUTP (εδώ: φλουορεσκεΐνη). SKOV-3 κύτταρα επεξεργάστηκαν είτε με 0,7 ή 2 μΜ Fe-SP για 24 ώρες. Για την ταυτοποίηση κυτταρικών πυρήνων, αντικηλίδωση με ιωδιούχο προπίδιο (Pi), που παρενθέτει στο DNA, εκτελέστηκε. TUNEL θετικά πυρήνες ταυτοποιήθηκαν με κίτρινες κηλίδες που προκύπτουν από την επικάλυψη της εικόνας με αποπτωτικό κηλίδα (FL-dUTP) και πυρηνική χρώση (Pi). Όπως φαίνεται (Σχ. 3Β) δεν υπάρχουν κύτταρα πριν από τη θεραπεία (άνω πάνελ), 60% του πληθυσμού των κυττάρων σε επεξεργασία με 0,7 μΜ (μεσαίο πλαίσιο) και όλα τα κύτταρα σε 2 μΜ Fe-SP (κάτω πίνακας) ήταν TUNEL-θετικά κύτταρα υποδεικνύοντας κατακερματισμένο DNA.

για τον καθορισμό της κυτταρικής απόκρισης του SKOV-3 κύτταρα κατά την κατεργασία Fe-SP αναλύσαμε την ενεργοποίηση των κασπασών χαρακτηριστικό για επαγωγή απόπτωσης όπως επίσης και την απενεργοποίηση της PARP-1 με ανοσοστύπωμα. Θεραπεία της SKOV-3 κύτταρα με 2.5 μΜ Fe-SP για 24 ώρες οδήγησε σε ισχυρή ενεργοποίηση /διάσπαση της κασπάσης-9, -8, και -3, ενώ PARP-1 ήταν αδρανοποιημένο /διασπάται μετά τη θεραπεία φαρμάκου (Σχ. 3C). Η θεραπεία με 1.25 μΜ Fe-SP αποκάλυψε ένα παρόμοιο αποτέλεσμα, με κάποια ενεργοποίηση της κασπάσης-9, και -3, και αδρανοποίηση της PARP-1, ενώ η ενεργοποίηση της κασπάσης-8 ήταν τόσο ισχυρή όσο παρατηρείται για 2,5 μΜ Fe-SP. Προφανώς, η έναρξη της ενεργοποίησης κασπάσης και PARP-1 αδρανοποίηση σε SKOV-3 καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών από Fe-SP σαν αποτέλεσμα τα μορφολογικά χαρακτηριστικά της απόπτωσης που παρατηρείται (Εικ. 3Α).

Αντι-πολλαπλασιαστική επίδραση του κύκλου και κυτταρικό σύλληψη μετά την επεξεργασία του SKOV-3 ωοθηκών καρκινικά κύτταρα με Fe-SP

Όπως περιγράφεται στις προηγούμενες ενότητες Fe-SP είναι ένας εκλεκτικός κυτταροτοξικό φάρμακο (Εικ. 2) το οποίο ενεργοποιεί αποπτωτικά διεργασίες (Εικ. 3) σε SKOV -3 ωοθηκών καρκινικά κύτταρα. Για να διερευνηθεί εάν Fe-SP ασκεί αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα και διαταραχές της προόδου του κυτταρικού κύκλου πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία ενσωμάτωσης BrdU. θεραπεία Fe-SP για 24 ώρες με δοσοεξαρτώμενο μειωμένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Εικ. 4) με ένα IC

50 τιμή 300 ηΜ. Σε αντίθεση, μη συμπλοκοποιημένο SP δεν μειώνουν SKOV-3 πολλαπλασιασμό σημαντικά ακόμη και σε συγκεντρώσεις 3 μΜ. Στο υπο-κυτταροτοξική συγκέντρωση φαρμάκου 100 ηΜ Fe-SP (βλέπε βιωσιμότητα, Σχήμα 2) ενσωμάτωση BrdU εντός του ϋΝΑ μειώθηκε κατά 40% (Εικ. 4).

Ο καρκίνος των ωοθηκών κύτταρα (SKOV-3) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διάφορες συγκεντρώσεις (0.1-10 μΜ) του Fe-SP ή μη συμπλεγμένου SP (Ctr.) για 24 ώρες. Μια χρωματομετρική δοκιμασία (με βάση BrdU ενσωμάτωση ανιχνεύεται από ένα συζυγές υπεροξειδάσης BrdU-αντίσωμα) πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται (Υλικά και Μέθοδοι). Η ένταση του χρώματος στα 450 nm συσχετίζεται άμεσα με την ποσότητα του BrdU ενσωματώνεται στο DNA, το οποίο με τη σειρά του αντιπροσωπεύει πολλαπλασιασμό. Τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν? Τα δεδομένα εκφράζονται ως ο μέσος όρος των τριπλών προσδιορισμών (Χ ± SD) σε% της απορρόφησης από δείγματα εις τριπλούν μη κατεργασμένων κυττάρων [= 100%].

Η

Εκτός από τη δοκιμασία του πολλαπλασιασμού των κυττάρων, σε κύτταρα ανάλυση του κύκλου ιωδιούχου προπιδίου βάφονται SKOV-3 κύτταρα με κυτταρομετρία ροής πραγματοποιήθηκε. Fe-SP, σε αντίθεση με το μη συμπλεγμένο ένωση, αποκάλυψε μια αύξηση στον αριθμό των υπο-diploidal 2n κύτταρα /(υπο-G0 /G1, Σχ. 5Α) σε ένα χρονικό και δοσο-εξαρτώμενο τρόπο (Πίνακας 1) . Όσον αφορά τα κύτταρα του ποδηλάτου, Fe-SP προκαλεί χρόνου και δοσο-εξαρτώμενο σύλληψη του SKOV-3 σε S-φάση και, κατά συνέπεια, μείωση των κυττάρων σε Ο0 /G1 φάση: μη επεξεργασμένα κύτταρα ή SKOV-3 υποβάλλεται σε επεξεργασία με μη -complexed SP σε αυτή τη μη συγχρονισμένη πληθυσμού ενώ καλλιεργημένα

in vitro

είναι ~71-75% σε G0 /G1 και ~21-24% στη φάση S (Σχ. 5Β, Πίνακας 1). Η θεραπεία με Fe-SP σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις (0,4, 0,8, 1,6 μΜ) για 24 ή 48 ώρες προκάλεσε αύξηση κυττάρων σε S-φάση κορυφώθηκε σε 75% (1,6 μΜ /24 h) και 87% (1,6 μΜ /48 h ) του συνολικού πληθυσμού (Εικ. 5Β, Πίνακας 1). Κατά συνέπεια, ο αριθμός των κυττάρων σε G0 /G1 μειώνεται στο 25% (1,6 μΜ /24 h) και 13% (1,6 μΜ /48 h) του συνολικού πληθυσμού, ενώ σε αυτή τη συγκέντρωση Fe-SP όχι περισσότερα κύτταρα σε G2 /M μπορεί να ανιχνευθεί. Σε συγκέντρωση 0,8 μΜ Fe-SP για 24 ώρες και 48 ώρες την αύξηση των κυττάρων σε G2 /M (23% /24 h? 16% /48 h) πάνω από το επίπεδο βάσης (3% /24 h, 9% /48 ώρες) μπορεί να παρατηρηθεί η οποία υποδεικνύει μια καθυστέρηση της φάσης αυτής, μαζί με μια αναπτυσσόμενη σύλληψη κυττάρων σε S-φάση.

Ο καρκίνος των ωοθηκών κύτταρα (SKOV-3) υποβλήθηκαν σε θεραπεία με 0, 0,4, 0,8 και 1,6 μΜ Ρβ-SP ή SP (Ctr.) για 24 ή 48 ώρες. Κυττάρων ανάλυση του κύκλου με FACS με βάση προπίδιο-ιωδίδιο παρεμβολή στο κυτταρικό χρωματίνη πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται (Υλικά και Μέθοδοι). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως (Α) σχετική ένταση φθορισμού σε ένα 2-διαστάσεων προφίλ FACS (λογισμικό ModFit LT? μαύρες γραμμές = γραμμής δεδομένων και το μοντέλο ταιριάζει γραμμή του συνόλου του πληθυσμού? σκιασμένες περιοχές = συστατικά μοντέλο /υποπληθυσμών Ο0 /Ο1, S, G2 /Μ, αποπτωτικά κύτταρα), παράδειγμα που παρουσιάζεται για 48 ώρες θεραπείας με 0.8 μΜ ένωση, είτε ως (Β) ολοκληρωμένο διάγραμμα μπαρ όλων των δεδομένων. Τυποποιημένα πύλης χρησιμοποιήθηκε για όλα τα δείγματα. Δέκα χιλιάδες γεγονότα αναλύθηκαν για κάθε δείγμα.

Η

Η κυτταροτοξικότητα του Fe-SP σε αρουραίους ως ένα πρότυπο σύστημα

Για να διερευνηθεί αν Fe-SP προκαλεί συστηματική τοξικότητα

in vivo

επιλέξαμε αρουραίους σαν ένα σύστημα μοντέλο. Σε προκαταρκτικά οι χημειοθεραπευτικοί σχετικές δόσεις του Fe-SP σε ένα μοντέλο καρκίνου των ωοθηκών κύτταρο ζώο προσδιορίστηκαν να είναι ≤1 mg /kg σωματικού βάρους (Lange et al., Στο παρασκεύασμα). Σε αυτές τις μελέτες δοκιμή αρουραίου καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών (Nuţu-19) ήταν ενδοπεριτοναϊκώς (ΙΡ) ένεση σε αρουραίους και 3 εβδομάδες μετά την ανάπτυξη των όγκων (για να μιμηθεί την κατάσταση μετά από κυτταρομειωτική χειρουργική) ζώα υπέστησαν αγωγή ημερησίως με Fe-SP μέσω ενέσεων IP . Διάρκεια της θεραπείας διήρκησε 12 ημέρες και βασίστηκε σε φορτίο όγκου στα ζώα ελέγχου. Τα ζώα παρακολουθήθηκαν για οποιαδήποτε ενόχληση και πόνο ανά πρωτόκολλα IACUC. Ενώ τα ζώα ελέγχου παρουσίασαν σταθερά αυξημένα ποσό του ασκίτη αιμορραγικού, τα Fe-SP (1 mg /mL) κατεργάστηκε ζώα εμφάνισαν σημαντικά μικρότερη αιμορραγικό όγκο ασκίτη, και λιγότερο επίπλουν βάρος του όγκου. Επιπλέον, σε αυτή την προκαταρκτική μελέτη της θεραπείας, παρατηρήσαμε μια πλήρη απάντηση στο 40% των ζώων που υποβλήθηκαν σε αγωγή (10 αρουραίοι που λαμβάνουν θεραπεία).

Κατά συνέπεια, θα πραγματοποιηθεί μελέτες χρόνιας τοξικότητας 28 ημερών (κατευθυντήριες γραμμές του ΟΟΣΑ για τις δοκιμές των χημικών ουσιών (τμήμα-4, Νο-407)) σε αρουραίους albino με συγκεντρώσεις Fe-SP που κυμαίνονται από 0,25 mg /kg έως 4 mg /kg σωματικού βάρους. Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει τις τοξικολογικές επιδράσεις της επαναλαμβανόμενης χορήγησης ΙΡ του Fe-SP (σε DMSO: απεσταγμένο ύδωρ σε αναλογία 1:04 επί 5 ημέρες /εβδομάδα για μια περίοδο 28 ημερών). Ζώα σε μια ομάδα χαμηλής δόσης (0,25 mg /kg σωματικού βάρους), η ομάδα ενδιάμεση δόση (1,0 mg /kg σωματικού βάρους), και η ομάδα υψηλής δόσης (4,0 mg /kg σωματικού βάρους) δεν αποκάλυψε οποιεσδήποτε παθολογικές αλλαγές σε σύγκριση με τον έλεγχο ομάδα ζώων. Δεν θνησιμότητα ή τοξικά συμπτώματα παρατηρήθηκαν σε ομάδες δοκιμής και ελέγχου των ζώων, εκτός από αναστατωμένα γούνας στην ομάδα υψηλής δόσης. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στο μοτίβο του σωματικού βάρους κέρδος /απώλεια, βάρος οργάνου, αιματολογικών ή βιοχημικών παραμέτρων (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι) όλων των ομάδων δοκιμής σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Όλες οι παράμετροι που έπεσε μέσα στα αποδεκτά όρια των φυσιολογικών διακυμάνσεων για λευκούς αρουραίους. Η μικροσκοπική εξέταση του ιστοπαθολογικών διαφάνειες από τις ομάδες χαμηλής, μέσης, και υψηλής δόσης δεν έδειξαν καμία σημαντική αλλαγή εκτός ήπια εκφύλιση των ηπατοκυττάρων σε τρία ζώα (στην υψηλή δόση) και της πνευμονικής μονοπύρηνων κυττάρων διηθήματα σε δύο ζώα (υψηλή δόση).

Συζήτηση

Ένα χαμηλό 5 χρόνια συνολικό ποσοστό επιβίωσης μόνο 53% για τη γυναίκα που πάσχουν από καρκίνο των ωοθηκών σχετίζεται με την ανάπτυξη της αντίστασης των καρκινικών κυττάρων σε πρότυπο χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, κυρίως ανάλογα πλατίνας και επομένως πρέπει να αναπτυχθούν νέα αντικαρκινικά φάρμακα [6], [7], [8]. Για την παρούσα έκθεση επιλέξαμε να μελετήσουμε το δυναμικό ενός νέου οργανομεταλλικό σύμπλοκο, σιδήρου (III) -salophene (Fe-SP) ως έναν υποψήφιο παράγοντα για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών. Για λόγους σαφήνειας, αναφέρεται ότι ο όρος salophene, πριν από περισσότερο από έναν αιώνα, έχει εφαρμοστεί σε 4-ακεταμιδοφαινυλεστέρα σαλικυλικό, ένα αναλγητικό και αντιπυρετικό φάρμακο που κατασκευάζεται από τις αρχές του 1900 από την Bayer Φαρμακευτικά Προϊόντα (Λεβερκούζεν, Γερμανία) [14 ] και δεν σχετίζεται με το «Salophen» ανακαλύφθηκε ως οδοκαθαριστής υπεροξειδίου σε E.coli όταν συμπλέκεται με μαγγάνιο (III) [15], η οποία μοιάζει με την οργανομεταλλική ένωση που μελετήθηκαν στην παρούσα έκθεση.

Μέχρι σήμερα καμία έρευνα σχετικά με οι ειδικές επιπτώσεις της salophenes στη βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων έχει δημοσιευθεί. Σε μια προηγούμενη μελέτη για τις κυτταροτοξικές δράσεις του δικυκλικού αρυλίου θειαζολίνες σε διάφορες κυτταρικές σειρές ανθρώπινου καρκίνου, προσδιορίσαμε την περιοχή της δοκιμασίας χρωματομετρική κύτταρο-βιωσιμότητας που χρησιμοποιείται με την χρησιμοποίηση του σιδήρου (III) -salophene (που δεν σχετίζονται με θειαζολίνες) στους 60 μΜ ως αρνητικού ελέγχου [16]. Μεταγενέστερες συγκριτικές μελέτες για την επίδραση του μετάλλου μεταπτώσεως salophenes (Zn (II) -, Μη (ΙΙ) -, Cu (II) -, Co (III), Fe (III) -δΡ) και μη-συμπλοκοποιημένου salophene (SP) σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις αποκάλυψε ότι κάτω από μια συγκέντρωση 10 μΜ μόνο Fe (III) -δΡ εμφανίζεται σημαντικά κυτταροτοξικά αποτελέσματα σε διάφορες καρκινικές κυτταρικές γραμμές (Lange et al., στο πλαίσιο της προετοιμασίας). Για να ελέγξετε την επιλεκτική κυτταροτοξική δυναμικό των Fe-SP σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών, επιλέξαμε δύο κυτταρικές σειρές που είναι ανθεκτικές, παράλληλα με πρωτοπαθή πνευμονική ή το δέρμα ινοβλάστες κυτταρικές σειρές σε πολλαπλά φάρμακα. OVCAR-3 κύτταρα (επιθηλιακό αδενοκαρκίνωμα ωοθηκών) είναι ανθεκτικά σε κλινικά σχετικές συγκεντρώσεις αδριαμυκίνη, μελφαλάνη και κισπλατίνη. SKOV-3 κύτταρα (αδενοκαρκίνωμα ωοθηκών) είναι ανθεκτικά σε διάφορα κυτταροτοξικά φάρμακα συμπεριλαμβανομένων Cisplatin και αδριαμυκίνη (βλέπε ΑΤΟΟ, Manassas, VA? Www.atcc.org). Παρόμοια με τα εν λόγω δύο κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών, τα κύτταρα ελέγχου που χρησιμοποιούνται στην παρούσα έκθεση, οι πρωτογενείς ινοβλάστες σε πρώιμα περάσματα και τα κύτταρα HeLa, διαθέτουν ένα υψηλό μεταβολισμό και το ρυθμό ανάπτυξης. Δείχνουμε εδώ ότι Fe-SP εμφανίζεται επιλεκτικό και δοσοεξαρτώμενη κυτταροτοξικότητα έναντι SKOV-3 και OVCAR-3 κύτταρα σε συγκεντρώσεις μεταξύ 100 ηΜ και 1 μΜ, ενώ η βιωσιμότητα των κυττάρων HeLa (επιθηλιακό τραχήλου αδενοκαρκίνωμα) ή πρωτογενή πνεύμονα- ή δέρματος- ινοβλάστες (σε περάσματα 10-13) σε αυτές τις συγκεντρώσεις δεν επηρεάστηκε. Η σχετική αντίσταση των κυτταρικών σειρών τρεις ελέγχου Fe-SP υποστήριξε την ιδέα της δοκιμής αυτής της ένωσης μια

in vivo

μοντέλο καρκίνου των ωοθηκών ζώων. Μη συμπλοκοποιημένο salophene δεν επηρέασε την βιωσιμότητα του είτε κυτταρικής γραμμής ακόμη και σε συγκεντρώσεις έως και 60 μΜ ούτε 60 μΜ Fe (III) μόνο [προστίθεται χλωριούχος σίδηρος] ή τριχλωριούχου σιδήρου σε συνδυασμό με μη-συμπλοκοποιημένο salophene προστίθεται στην κυτταρική καλλιέργεια μέσα μαζικής ενημέρωσης [Lange et al., στο πλαίσιο της προετοιμασίας] εμμέσως επιβεβαιώνει τη σταθερότητα του συγκροτήματος και, ως εκ τούτου, ειδική κυτταροτοξική δράση υπό συνθήκες καλλιέργειας κυττάρων.

με δεδομένη την παρούσα κατάσταση της έρευνας στον τομέα των οργανομεταλλικών ενώσεων, όπως salophenes ή SALENs (σχετική ένωση, βλέπε εισαγωγή), μπορούμε να υποθέσουμε μόνο από περιορισμένες πηγές σχετικά με την πιθανή μηχανισμό (ες) της κυτταροτοξική δράση του Fe-SP. Ένα αξιοσημείωτο χαρακτηριστικό του SALENs, που δεν έχουν ακόμη εξεταστεί για salophenes, είναι συγγένειά τους σε μια ποικιλία αρωματικών ουδέτερα μόρια όπως πυριδίνη, πυριδίνη Ν-οξείδιο, ισοκινολίνη και βενζυλαμίνη [17], [18]. Sälens όταν συμπλέκονται με μέταλλα μετάπτωσης δρουν ως τεχνητό νουκλεάσες. Η δραστικότητά τους σε προσδιορισμούς διάσπασης DNA πλασμιδίου μπορεί να ελεγχθεί με σύζευξη ή από τον τύπο και το φορτίο του κεντρικού πυρήνα μεταλλικό ιόν [18], [19], [20]. Για παράδειγμα, Ni (II) – ή Μη (ΙΙ) -salens βρέθηκαν να επάγουν αποτελεσματικά DNA σχάση κλώνου αλλά όχι Cr (II) – ή Ου (ΙΙ) – [18], [20] ή Fe (II) -salens εκτός εάν επιπλέον ομάδες υδροξυλίου διευκολύνουν την οξείδωση τους προς Cu (III) ή Fe (III) είδη [21]. Έχει υποτεθεί ότι Fe-Salen σε συνεργασία με το σύστημα κινίνη διευκολύνει το σχηματισμό του σιδήρου (III)

.Ο

2

– είδη για να παράγουν ελεύθερες ρίζες υδροξυλίου υπεύθυνη για διάσπαση του DNA [21]. Ωστόσο, η δραστικότητα διάσπασης DNA του Fe (III) -salen είναι υψηλότερη από του Fe (II) -salen υποδηλώνοντας ότι η αυξημένη διαλυτότητα στο νερό και το φορτίο του Fe (III) ιόν είναι κυρίαρχος του δυναμικού διάσπαση της δομής [22] η οποία πιθανόν να ισχύει σιδήρου (III) -salophene, καθώς και. Επιπλέον, οι συγγραφείς συνέδεσε την δραστικότητα διάσπασης του DNA με Fe (III) -salen

in vitro

στην παρατήρηση ότι αυτή η ένωση προκάλεσε πυρηνική κατακερματισμό και επαγωγή απόπτωσης (μέσω απελευθέρωσης μιτοχονδριακό μονοπάτι /κυτόχρωμα c) σε κύτταρα ΗΕΚ293 σε συγκέντρωση 50 μΜ [22].

Αν και ο μηχανισμός (οι) δράσης του SALENs ή Fe-SP σε κύτταρα σε καλλιέργεια ή

in vivo

παραμένει να διερευνηθεί, επιλεκτική μορφολογική μεταβολές των κυτταρικών σειρών καρκίνου και διέγερση απόπτωσης μετά την αγωγή του φαρμάκου

in vitro

αποτελούν ένα πρώτο δείκτη για την εν δυνάμει επιλεκτική επιδράσεις στην μετάσταση όγκου και κυτταρική φυσιολογία

in vivo

. Η παρούσα μελέτη δείχνει ότι Fe-SP σε συγκεντρώσεις 2 μΜ σε SKOV-3 κύτταρα καρκίνου των ωοθηκών, αλλά όχι σε πρωτογενείς ινοβλάστες που προκαλείται πυρηνική κατάτμηση, συμπύκνωση χρωματίνης, κατακερματισμός DNA οι οποίες είναι όλες κλασικές χαρακτηριστικά της απόπτωσης [23]. Western κηλίδωση επιβεβαίωσε την ενεργοποίηση του τελεστή κασπάσης-3 και απενεργοποίηση της PARP-1 (που εμπλέκονται στην επιδιόρθωση του DNA) [24] κατά την εκτέλεση απόπτωσης σε SKOV-3 κύτταρα μετά από θεραπεία Fe-SP. Επιπλέον, ήταν προφανές ότι Fe-SP που προκαλείται από τα δύο μεγάλα μονοπάτια σηματοδότησης (

ενδογενή, εξωγενή

) που περιγράφεται για τον προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο [25], [26]. Παρατηρήσαμε ισχυρή διάσπαση /ενεργοποίηση του εκκινητή κασπάσης-8, χαρακτηριστική για τη συμμετοχή του

εξωγενή

αποπτωτικό μονοπάτι [27], [28], κατά την αγωγή Fe-SP της SKOV-3 κύτταρα. Η

εγγενή

οδός μεσολαβεί αποπτωτικών αντιδράσεις στο στρες σήματα όπως τα ναρκωτικά, βλάβη του DNA ή παράγοντα στέρησης της ανάπτυξης και κινείται από μιτοχονδριακές βλάβες. Οδηγεί στη μιτοχονδριακή απελευθέρωση του κυτοχρώματος C, το οποίο ενεργοποιεί εκκινητή κασπάσης-9 [28], [29] και δείχθηκε να συνεισφέρει σε κυτταρικό θάνατο των ΗΕΚ293 (ανθρώπινη κυτταρική σειρά νεφρού) κατόπιν Fe (III) -salen θεραπεία [22] και επίσης στην παρούσα μελέτη για SKOV-3 κύτταρα κατόπιν Fe (III) -salophene θεραπεία. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχουν άλλες μελέτες που περιγράφουν τη μορφολογία ή αποπτωτική σηματοδότηση οποιωνδήποτε κυτταρικών γραμμών μετά την αγωγή με ενώσεις που ανήκουν στην κατηγορία του σιδήρου-SALENs ή -salophenes έχουν δημοσιευθεί.

Ομοίως, δεν δημοσιεύσεων που εξετάζει την αλλαγή στο κελί πρόοδο του κύκλου μετά από αγωγή είτε με ένα salen ή salophene μεταλλοσύμπλοκο υπάρχουν. Ενώ μια δημοσίευση που παρατηρήθηκε μια αλλαγή στη βιωσιμότητα και τη μορφολογία των ινοβλαστών δέρματος σε καλλιέργεια μετά από θεραπεία με Cr (III) συμπλόκου -salen σε υψηλές συγκεντρώσεις 50 μΜ, οι παρακάτω μελέτες του κυτταρικού κύκλου διεξήχθησαν μόνο με αιθυλενοδιαμινο-Cr (III) – χλωριούχο υψηλότερων κυτταροτοξικότητας [30]. Δείχνουμε εδώ ότι Fe-SP μείωσε δοσο-εξαρτώμενο τρόπο τον πολλαπλασιασμό των SKOV-3 καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών (IC

50 στα 300 nm). Ακόμη και σε υπο-κυτταροτοξικές συγκεντρώσεις (100 ηΜ Fe-SP) ενσωμάτωσης BrdU εντός του ϋΝΑ μειώθηκε υποδεικνύοντας ότι Fe-SP ασκεί τις δράσεις ως αντι-πολλαπλασιαστική και, ως εκ τούτου, ένα δυνητικό αντικαρκινικό παράγοντα. Επιπρόσθετη ανάλυση του κυτταρικού κύκλου του SKOV-3 μετά την αγωγή Fe-SP, όπως ήδη αναφέρθηκε στη δοκιμασία TUNEL, αποκάλυψε μια αύξηση στον υπο-diploidal πληθυσμού που αντιπροσωπεύει κύτταρα με σημαντικές βλάβες στο DNA, υποδεικνύοντας μία καθυστερημένη αποπτωτικό στάδιο. Σε σχέση με τα κύτταρα ποδηλασία, Fe-SP στο 1,6 μΜ προκάλεσε μια πλήρη σύλληψη του SKOV-3 σε S-φάση, μαζί με μείωση των κυττάρων σε G0 /G1 και συνολική απώλεια των κυττάρων στην G2 /M. Προφανώς, θεραπεία Fe-SP επηρεάζονται σημεία ελέγχου του κυτταρικού κύκλου σε φάση S προκαλώντας μια δόση και χρονο-εξαρτώμενη μείωση της προόδου του κυτταρικού κύκλου. Μέχρι σήμερα, αυτή είναι η πρώτη έκθεση σχετικά με τη ρύθμιση του κύκλου της κάθε κυτταρικής σειράς με επεξεργασία είτε με metallosalen ή metallosalophene ενώσεις. Επιπλέον, μόνο λίγα στοιχεία σχετικά με την επίδραση των συμπλοκών μετάλλων μετάπτωσης, γενικά επί του κυτταρικού κύκλου υπάρχουν, όπως η σύλληψη ενός νευροβλαστώματος κυτταρική γραμμή σε G1-φάση όταν κατεργάζεται με μια βάση ισατίνης-Schiff χαλκού (II) σύμπλοκο [31].

Ακόμα κι αν δεν είναι ο στόχος αυτής της έκθεσης, περαιτέρω μελέτες θα μπορούσαν να αναλύσουν τις επιπτώσεις των Fe-SP σε σημεία ελέγχου του κυτταρικού κύκλου στην συγχρονισμένη SKOV-3 πολιτισμούς και άλλες καρκίνο και μη-μετασχηματισμένες κυτταρικές σειρές. Στόχευση τέτοια σημεία ελέγχου έχει προταθεί ως εναλλακτική προσέγγιση για αντικαρκινικές θεραπείες [32], [33]. Ρυθμιστές της μηχανής του κυτταρικού κύκλου συχνά μεταβάλλεται σε ανθρώπινο καρκίνο και προφανώς μετασχηματισμένα κύτταρα μπορεί να είναι πιο ευαίσθητοι στην αναστολή εξαρτώμενες από κυκλίνη κινάσες (CDK) [34], [35]. Σε σχέση με τα γεγονότα S-φάση και τα δύο μοντέλα ποντικών και μελέτες σχετικά με τον καρκίνο που προέρχεται από τα κύτταρα αποκάλυψε ότι η συσσώρευση της κυκλίνης συμπλοκών D1 /CDK4 ενεργοποιεί DNA εκ νέου αντιγραφή [36] και, ως εκ τούτου, θα μπορούσαν να στοχεύουν ειδικά σε καρκινικά κύτταρα. Ως ένα παράδειγμα, Guggulsterone, ένα φάρμακο φυτικής προέλευσης, που προκαλούνται διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε φάση S από την καταστολή της κυκλίνης D1 και cdc2 και αυξημένη εξαρτώμενη από κυκλίνη ρ21 αναστολέα κινάσης και έκφραση ρ27 σε μια ευρεία ποικιλία τύπων κυττάρων ανθρώπινου όγκου [ ,,,0],37]. Με βάση τη συγκεκριμένη σύλληψη του SKOV-3 κύτταρα με Fe-SP στην S-φάση παρατηρήθηκε στην παρούσα μελέτη, σε μελλοντικές μελέτες θα αναλύσουμε τις συνέπειες αυτής της νέας οργανο-μεταλλική ένωση και το δυναμικό θεραπευτικό του καρκίνου σε ρυθμιστές συγκεκριμένο κυτταρικό κύκλο (CDK του, κυκλίνες) και την αναπαραγωγή εκκίνησης και -progression σήματα της S-φάσης [38], [39] στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών πλατίνα-ανθεκτικά.

για να ρυθμίσετε το στάδιο για περαιτέρω διερεύνηση των Fe-SP ως πιθανή