Αφηρημένο

Ιστορικό

Υπάρχουν καλά στοιχεία στη βιβλιογραφία ότι το σύστημα κανναβινοειδών έχει διαταραχθεί σε καρκίνο του παχέος εντέρου. Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε αν CB

1 υποδοχέα ανοσοδραστικών ένταση (CB

ένταση 1IR) σχετίζεται με τη σοβαρότητα της νόσου και την έκβαση.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

CB

1IR αξιολογήθηκε σε σταθεροποιημένο με φορμαλίνη, εγκλεισμένα σε παραφίνη δείγματα που συλλέχθηκαν με ένα διαδοχικό πρόθεση κατά τη διάρκεια της πρωτογενούς όγκου χειρουργική εκτομή από μια σειρά περιπτώσεων που διαγιγνώσκονται με καρκίνο του παχέος εντέρου. κέντρο του όγκου (n = 483) και επεμβατική μπροστά (n = 486) CB

1IR βαθμολογήθηκε από 0 (απούσα) έως 3 (έντονη χρώση) και τα δεδομένα αναλύθηκαν ως μέση διάσπαση δηλαδή CB

1IR & lt? 2 και ≥2. Σε σταθερή μικροδορυφόρων, αλλά δεν μικροδορυφόρων ασταθή όγκους (όπως κρίνεται με βάση την ανοσοϊστοχημική προσδιορισμό των τεσσάρων πρωτεϊνών επισκευή ασυμφωνία), υπήρχε μια σημαντική θετική συσχέτιση του βαθμού του όγκου με την CB

ένταση 1IR. Η διαφορά μεταξύ των μικροδορυφόρων σταθερές και ασταθείς όγκους γι ‘αυτή την ένωση CB

1IR είχε σχέση με το CpG νησιωτικό χαρακτήρα μεθυλίωσης των περιπτώσεων. αναλύσεις αναλογικών κινδύνων κατά Cox παλινδρόμησης έδειξε μια σημαντική συμβολή της ΚΤ

1IR σε συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης στις μικροδορυφορικού σταθερή όγκους κατά την προσαρμογή για το στάδιο του όγκου. Για τις περιπτώσεις που με τη φάση ΙΙ μικροδορυφόρων σταθερή όγκους, υπήρξε μια σημαντική επίδραση τόσο του κέντρου όγκου και μπροστά CB

1IR κατά της νόσου ειδικά επιβίωσης. Τα πέντε χρόνια πιθανότητες ελεύθερη συμβαμάτων επιβίωση ήταν: 85 ± 5 και 66 ± 8%? εσωτερικό όγκο, 86 ± 4% και 63 ± 8% για το CB

1IR & lt?. 2 και CB

1IR≥2 ομάδες, αντίστοιχα

Συμπεράσματα /Σημασία

Το επίπεδο του CB

1 έκφραση υποδοχέα στον καρκίνο του παχέος εντέρου σχετίζεται με το βαθμό του όγκου με τρόπο που εξαρτάται από το βαθμό του CpG υπερμεθυλίωσης. Ένα υψηλό CB

1IR είναι ενδεικτικό μιας φτωχότερη πρόγνωση σε στάδιο ασθενείς με σταθερό όγκο II μικροδορυφόρων

Παράθεση:. Gustafsson SB, Palmqvist R, Henriksson ML, Dahlin AM, Edin S, Jacobsson SOP, et al. (2011) Υψηλή όγκου κανναβινοειδή CB

1 υποδοχέα Ανοσοαντιδραστικότητα επιδρά αρνητικά συγκεκριμένες ασθένειες Επιβίωση στο Στάδιο ΙΙ Μικροδορυφορικοί Σταθερό του καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 6 (8): e23003. doi: 10.1371 /journal.pone.0023003

Επιμέλεια: Ιωσήφ Alan Bauer, Ίδρυμα Bauer Έρευνας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 29 Δεκέμβρη 2010? Αποδεκτές: 11 του Ιούλη 2011? Δημοσιεύθηκε: 25, Αυγ του 2011

Copyright: © 2011 Gustafsson et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς ευχαριστήσω το σουηδικό Συμβούλιο Επιστήμης (Grant καμία 12158, ιατρική, CJ Fowler.)? η Σουηδική Εταιρεία Καρκίνου (Grant δεν CAN2008 /856, R. Palmqvist?. Grant δεν CAN2010 /437, C. Fowler.)? και οι Κονδυλίων Έρευνας της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου της Umea (C. Fowler) για οικονομική υποστήριξη. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η G-πρωτεΐνη κανναβινοειδών

1 (CB

1) υποδοχείς είναι πιο γνωστή για το ρόλο τους στη διαμεσολάβηση των ψυχοτρόπων αποτελέσματα αναζήτησε μετά από ψυχαγωγικούς χρήστες κάνναβης. Ωστόσο, CB

1 υποδοχείς και τα ενδογενή τους συνδετήρες ανανδαμίδης (arachidonoylethanolamide) και 2-αραχιδονοϋλογλυκερόλη μεσολαβήσει ένα πλήθος επιπτώσεις στο σώμα, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης του πόνου, το σχηματισμό των οστών, την ενεργειακή ομοιόσταση και λειτουργία του γαστρεντερικού [1] – [4]. Στο ανθρώπινο κόλον, CB

1 υποδοχείς βρίσκονται στο επιθήλιο κρύπτης καθώς επίσης και σε υποεπιθηλιακή φλεγμονώδη κύτταρα, λείο μυ των αιμοφόρων αγγείων και υποβλεννογόνια πλέγμα [5], [6], όπου ρυθμίζουν, μεταξύ άλλων λειτουργιών , το ποσοστό της εντερικής διέλευσης και του παχέος πρόωσης [4].

Εκτός από τις λειτουργίες που περιγράφονται παραπάνω, το ενδοκανναβινοειδούς σύστημα λειτουργεί ως «ζημία περιορισμό» σύστημα για να αμβλύνουν τις επιπτώσεις των παθολογικών καταστάσεων. Αυτό φαίνεται να ισχύει ιδιαίτερα για το γαστρεντερικό σύστημα ενδοκανναβινοειδούς. Ετσι, η φλεγμονή που προκαλείται από παράγοντες όπως 2,4-δινιτροβενζόλιο σουλφονικό οξύ, τρινιτροβενζολο σουλφονικό οξύ, έλαιο μουστάρδας ή δεξτράνη θειικό νάτριο είναι πιο έντονη σε CB

1

– /- ποντίκια σε σύγκριση με αγρίου τύπου νεογνά τους, ενώ θεραπεία με έναν αγωνιστή υποδοχέα CB, ή με ενώσεις αποκλεισμό της κυτταρικής απομάκρυνση και το μεταβολισμό των ενδοκανναβινοειδών, ανακουφίζει την φλεγμονή [7] – [11]. Μια CB πολυμορφισμός του υποδοχέα

1 (1359 G /A) συνδέεται με μια μειωμένη ευαισθησία σε ελκώδη κολίτιδα στον άνθρωπο [12], αν και με τις γνώσεις μας, δεν είναι ακόμη γνωστό πώς αυτό το πολυμορφισμό μονού νουκλεοτιδίου επηρεάζει σηματοδότηση κανναβινοειδών. Η παρεκκλίνουσα εστίες κρύπτη στο κόλον, ένα πρώιμο παθολογική αλλαγή στην αλληλουχία αδένωμα-καρκινώματος σε ορθοκολικό καρκίνο ανάπτυξη, σχηματίζονται ως αποτέλεσμα της θεραπείας αζοξυμεθάνιο σε ποντικούς, και η θεραπεία συνδυάζεται με μια αύξηση στα επίπεδα του 2-αραχιδονοϋλογλυκερόλη. Ο αποκλεισμός του μεταβολισμού αυτού του ενδοκανναβινοειδούς μείωσε τη συχνότητα εμφάνισης των μη-φυσιολογικών κρυπτικών εστιών, όπως έκανε θεραπεία με έναν αγωνιστή υποδοχέα CB [13] και, ίσως κατά εκπληκτικό τρόπο, με επεξεργασία με ένα CB

αντίστροφος αγωνιστής υποδοχέα 1 [14].

Τα κανναβινοειδή και ενδοκανναβινοειδή παράγουν δυνητικά χρήσιμα αποτελέσματα στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, την κινητικότητα και την επεμβατική συμπεριφορά (σχόλια, βλέπε [15], [16]). Σε ορθοκολικό καρκίνο κυτταρικές γραμμές, τόσο CB

1-εξαρτώμενη και ανεξάρτητη από επιδράσεις του ενδογενούς και /ή συνθετικά κανναβινοειδή κατά τη βιωσιμότητα των κυττάρων έχουν αναφερθεί [17] – [20]. Σε ένα γενετικό μοντέλο ορθοκολικού εξέλιξης του καρκίνου (APC

Min /+ ποντίκια), τα ζώα που δεν έχει το CB

1 υποδοχέα έδειξε ένα μεγαλύτερο αριθμό μικρών εντερικών και των πολυπόδων του κόλου από την αντίστοιχη CB

1

+ /+ ποντίκια [21]. ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο οι οποίοι είναι είτε ομο- ή ετερόζυγα για το 1359 G /A CB

1 πολυμορφισμός του υποδοχέα δείχνουν μικρότερο χρόνο επιβίωσης από τους ασθενείς αγρίου τύπου G /G [22]. Τέλος, η μειωμένη έκφραση του CB

mRNA 1 υποδοχέα και πρωτεΐνη έχουν αναφερθεί σε καρκίνο του παχέος εντέρου [17], [21], που οφείλεται τουλάχιστον εν μέρει στην αύξηση του ποσοστού της μεθυλίωσης της περιοχής προαγωγού του υποδοχέα [21].

Τα παραπάνω δεδομένα είναι συνεπή με την πρόταση ότι το ενδογενές σύστημα κανναβινοειδών μπορεί να είναι δυσλειτουργική σε καρκίνο του παχέος εντέρου, και ότι μια τέτοια δυσλειτουργία μπορεί να επηρεάσει τη σοβαρότητα της νόσου ή /και της έκβασης. Ένας τρόπος για να διερευνά το ενδεχόμενο είναι να προσδιοριστεί το επίπεδο της έκφρασης CB

1 υποδοχέα σε μια μεγάλη ομάδα από καλά χαρακτηρισμένα περιπτώσεις ορθοκολικού καρκίνου με μεγάλο χρόνο παρακολούθησης. Αυτό έχει αναλάβει στην παρούσα μελέτη. Δεδομένου ότι καρκίνου του παχέος εντέρου είναι εξαιρετικά ετερογενής, ιδιαίτερη έμφαση έχει γίνει από την σχέση του CB

1 ανοσοαντιδραστικό εντάσεις με τους βασικούς παθολογική /μοριακά συστατικά της νόσου [23]: το στάδιο, την κατάσταση της ποιότητας του όγκου, τη διαλογή μικροδορυφόρων αστάθεια, συχνότητα των οφθαλμών στο μπροστινό μέρος του όγκου, και CpG φαινότυπο νησί methylator (CIMP).

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η έρευνα επιτροπή δεοντολογίας σε Umeå πανεπιστημιακό νοσοκομείο (Περιφερειακό ηθικά συμβούλιο Εξέτασης στη Umeå, Σουηδία) ενέκρινε τον χειρισμό των δειγμάτων ιστού και των δεδομένων των ασθενών στην παρούσα μελέτη, συμπεριλαμβανομένης της διαδικασίας σύμφωνα με την οποία οι ασθενείς έδωσαν προφορικά ενημερωμένη συγκατάθεση τους. Η συγκατάθεση αυτή τεκμηριώθηκε σε κάθε εγγραφή του ασθενούς, και αυτό θεωρήθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας να είναι επαρκής. Στη βάση δεδομένων που χρησιμοποιείται για τις αναλύσεις εδώ, τα δείγματα ιστού δόθηκε ένα αριθμό υπόθεσης και το έτος, καθώς και τα ονόματα των ασθενών δεν αναφέρεται στη βάση δεδομένων.

Ασθενείς

Η φορμόλη-σταθερό, παραφίνη -embedded δείγματα που χρησιμοποιήθηκαν στην παρούσα μελέτη ελήφθησαν από ιστό που συλλέγονται κατά πρωτογενή όγκο χειρουργική εκτομή του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRUMS (καρκίνος του παχέος εντέρου σε μελέτη Umeå)). Τα δείγματα συλλέχθηκαν με διαδοχικές πρόθεση στο Τμήμα Χειρουργικής, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Umea, Σουηδία, κατά τη διάρκεια της περιόδου 1995-2003 και, όπου είναι δυνατόν οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν για διάστημα έως 113 μήνες [24]. Εκτός από τα δεδομένα κλινικο-παθολογική αναφερθεί σε [24], τα δεδομένα σχετικά με τη σταθερότητα μικροδορυφόρου /αστάθεια κατάστασης (ανοσοχημική προσδιορισμός της έκφρασης των τεσσάρων αναντιστοιχία πρωτεΐνες επισκευής) και CIMP διαλογής έχουν συλλεχθεί και αναφερθεί προηγουμένως [25]. Επίπτωση των οφθαλμών στο μπροστινό όγκου αξιολογήθηκαν όπως στο [26]. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν ανεπαρκή ή ανύπαρκτα δείγμα ιστού του όγκου και ανεπαρκής κλινική. Συνολικά, 487 υποθέσεις βαθμολογήθηκαν είτε για το κέντρο του όγκου ή μπροστά όγκου CB

1 ανοσολογική αντίδραση του υποδοχέα (βλέπε παρακάτω). Η κλινική πληροφορίες στη βάση δεδομένων για τους ασθενείς αυτούς ήταν ως ακολούθως: διάμεση ηλικία 71 έτη (εύρος 26-96, η = 487, εκ των οποίων 269 ήταν άνδρες και 218 γυναίκες)? τοποθεσία καρκίνου σε δεξιό κόλον 31,1%, αριστερό κόλον 31,1%, του ορθού 37,8% (n = 482)? στάδιο της νόσου Ι 15,5%, 39,3% II, III 21,0%, IV 24,2% (n = 476)? Βαθμός του όγκου και /καλά μετρίως διαφοροποιημένων 48.75%, μέτρια-κακή /χαμηλή διαφοροποίηση 51.25% (n = 480)? μικροδορυφορικού σταθερό 85,0%, μικροδορυφόρων ασταθή 15,0%? (N = 473)? κατάσταση CIMP αρνητική 50,4%, χαμηλό 37,2%, υψηλό 12,4% (n = 484). Επιπλέον, 82,4% (483 περιπτώσεις) δεν έλαβαν προεγχειρητική ακτινοθεραπεία (είτε 5 × 5 Gy ή 25 × 2 Gy)? 75,0% (476 περιπτώσεις) είχαν ριζική χειρουργική επέμβαση? και 13,7% (475 περιπτώσεις) έλαβαν επικουρική χημειοθεραπεία.

Μέτρηση της CB

1 ανοσολογική αντίδραση του υποδοχέα (CB

1IR) στον ιστό του όγκου

Τα τμήματα ιστού σε παραφίνη ενσωματωμένο αποπαραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν πριν από την ανάκτηση του αντιγόνου σε μια χύτρα ταχύτητας (2100 retriever, Biocare Ιατρικής) σε Diva Decloaker (Biocare Ιατρική). Τα δείγματα στη συνέχεια τοποθετήθηκαν σε ένα Ventana ημιαυτόματο μηχάνημα ανοσοχρώση (Ventana Medical Systems Inc., Tucson, AZ). Η ΚΤ υποδοχέα

1 (Abcam αρ. Κατ. 23703, Abcam plc, Cambridge, UK, αραιωμένο 1:50) και τα δευτερεύοντα συστατικά (iVIEW DAB Detection Kit, Ventana Medical Systems Inc.) προστέθηκαν στη συνέχεια. Το αντίσωμα, ένα πολυκλωνικό κουνελιού που εγείρεται σε ένα πεπτίδιο που αντιστοιχεί σε C τελικά αμινοξέα 461-472 της ανθρώπινης CB

1 υποδοχέα και τα οποία αντιδρά εγκάρσια με το CB ανθρώπου, ποντικού και αρουραίου

1 υποδοχέα σύμφωνα με στοιχεία από οι κατασκευαστές, έχει δειχθεί προηγουμένως από τους ερευνητές στην Umeå (συμπεριλαμβανομένων των αντίστοιχων συγγραφέα) για να παραχθεί το κατάλληλο πρότυπο χρώσης στην ανθρώπινη παρεγκεφαλίδα, αλλά όχι για την παραγωγή ανοσοαντιδραστικότητα σε προσθεγκέφαλοι από CB

1

– /- ποντίκια [27 ]. Μια ExPasy Blast (https://expasy.org/tools/blast/) της ακολουθίας πεπτιδίου έδωσε CB

1 και δύο παραλλαγές ματίσματος του ως το μόνο επιτυχίες στον άνθρωπο. Σε διάφορα άλλα είδη, CB

1 υποδοχείς και πάλι ταυτοποιηθεί, το μόνο μη-CB

χτυπήματα 1 είναι από πρωτεΐνες ονομάζονται «μη χαρακτηρισμένα πρωτεΐνη [Gene: CNR1]» (από το χοίρο, το σκύλο και κοτόπουλο) καθώς και » υποθετική μη χαρακτηρισμένα πρωτεΐνη [Gene: PANDA_015085] -.

Ailuropoda melanoleuca

(Giant Panda) »και« χρωμόσωμα 14 SCAF15003, όλο το θραύσμα της αλληλουχίας του γονιδιώματος κυνηγετικό όπλο «στην

Tetraodon nigroviridis

(Πράσινο pufferfish)

CB

1IR εκτιμήθηκε από έναν ερευνητή (SBG), ο οποίος τυφλώθηκε με την κλινική κατάσταση των ασθενών. Τα δείγματα βαθμολογήθηκαν με βάση το κυρίαρχο CB

1 υποδοχέα ανοσοαντιδραστικά ένταση (CB

1IR) στο εσωτερικό του όγκου και στα καρκινικά επεμβατική μέτωπα και σημείωσε από 0 (απούσα) έως 3 (έντονη) για τα κύτταρα . Όταν όλα τα δείγματα είχαν σκόραρε, ο ερευνητής επανέλαβε τη διαδικασία (που δεν έχουν πρόσβαση στις προηγούμενες βαθμολογίες) και στη συνέχεια συνέκριναν τα αποτελέσματα στις δύο πίστες. Περιπτώσεις όπου οι βαθμολογίες ήταν διαφορετικά στη συνέχεια αξιολογήθηκαν για τρίτη φορά, και πάλι χωρίς πρόσβαση με τα προηγούμενα αποτελέσματα. Για τα μπροστινά του όγκου δείγματα σκόραρε, για παράδειγμα, υπήρχαν 53 περιπτώσεις όπου διαφώνησε η πρώτη και η δεύτερη βαθμολογίες, κυρίως λόγω εσφαλμένης αποτελέσματα από το αρχικό στάδιο της πρώτης δοκιμής. Τα τελικά αποτελέσματα στη συνέχεια άρχισε από άλλο ερευνητή (CJF) στη βάση δεδομένων για ανάλυση.

Στατιστική αξιολογήσεις

αναλύει Kaplan-Meier επιβίωσης, το ακριβές τεστ του Fisher και χ

2 έγιναν δοκιμές χρησιμοποιώντας το στατιστικό πακέτο ενσωματωμένη στο πρόγραμμα υπολογιστή GraphPad Prism 5 για Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Cox αναλογικών κινδύνων και δυαδικό αναλύσεις λογιστικής παλινδρόμησης διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας στατιστικές IBM SPSS 19 λογισμικό για Macintosh (IBM Inc., Somers, Νέα Υόρκη, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). Για τις αναλύσεις επιβίωσης, τα γεγονότα που αφορούν συγκεκριμένες νόσους ορίστηκαν ως ο θάνατος με γνωστή διαδίδονται ή υποτροπιάζουσα νόσο ( «†

ca»). Θάνατος από άλλες αιτίες λογοκρίθηκε, όπως ήταν οι περιπτώσεις όπου ο ασθενής ήταν ακόμα ζωντανός κατά την ημερομηνία της τελευταίας παρακολούθησης. Η διάρκεια της εκδήλωσης επιβίωσης χωρίς ορίζεται ως ο χρόνος από τη διάγνωση μέχρι είτε την ημερομηνία του παχέος θανάτου από καρκίνο, ο θάνατος των άλλων αιτιών, ή αν συμβεί κανένας θάνατος, μέχρι την ημερομηνία της τελευταίας παρακολούθησης.

Αποτελέσματα

CB

1IR ανοσοϊστοχημεία

οι αρχικές μελέτες έγιναν χρησιμοποιώντας την ίδια παρτίδα του αντισώματος, όπως σε μια προηγούμενη μελέτη από ερευνητές στο Umeå χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστού από δείγματα καρκίνου του προστάτη [27]. Βρήκαμε ότι σε αραίωση 1:300, CB

1IR βρέθηκε στα επιθηλιακά κύτταρα των κρυπτών, με διάσπαρτα θετικότητα στην subepithelial φλεγμονώδη κύτταρα (Εικ. S1 Α), εύρημα συμβατό με τις σπουδές του CB

1IR στο φυσιολογικό κόλον [5], [6]. Ένα παράδειγμα του ιστού του όγκου χρωματίζονται με αυτή την παρτίδα φαίνεται στο Σχ. 1Β. Λόγω περιορισμένων ποσοτήτων αντισωμάτων που απομένουν, χρησιμοποιήσαμε μια νεότερη παρτίδα του αντισώματος Abcam (παρτίδα 761993) για την κύρια μελέτη και διαπίστωσε ότι ένα χαμηλότερο αραίωση (1:50) ήταν απαραίτητη για την καλή ανοσοχρώση. Ένα παράδειγμα χρώση φαίνεται στο Σχ. 1Α, με αντίστοιχη σειριακή τομή χωρίς πρωτογενές αντίσωμα που φαίνεται στο Σχ. 1Β.

Τμήματα από την ίδια περίπτωση χρησιμοποιούνται υπό την παρουσία (Πλαίσιο Α) και απουσία (Πλαίσιο Β) του πρωτογενούς αντισώματος. Στόχος μεγέθυνση είναι 10 ×.

Η

Το καλύτερο τεστ ειδικότητα για ανοσοχημείας θεωρείται ότι είναι η χρήση των ελέγχων νοκ-άουτ [28]. Βρήκαμε ότι η κατάλληλη ανοσοχημική χρώση παρατηρήθηκε στους εγκεφάλους των ποντικών άγριου τύπου, ενώ αυτή ήταν απούσα από εγκεφάλους CB

1

– /- ποντίκια (Εικ. S2). Ashton [29], έχει πρόσφατα υποστήριξε ότι ιστογράμματα οπτική πυκνότητα είναι χρήσιμα για τη διάκριση ανάμεσα σε μια αλλαγή του τρόπου διεξαγωγής της ανοσοσήμανση (όπως θα πρέπει να θεωρηθεί για μια πραγματική απώλεια σηματοδότησης σε ένα νοκ-άουτ) σε σύγκριση με μια μείωση στην ένταση της σήμανσης (η οποία θα αυξήσει το ερώτημα ως προς το κύρος του αντισώματος). Οπτική ιστογράμματα πυκνότητα του άγριου τύπου μας και CB

1

– /-. Ιστοί είναι σαφώς διαφορετική (. Φαίνεται καλύτερα για τα υψηλότερα διαφάνειες μεγέθυνση, Σχ S2), σύμφωνα με την ορθή ειδικότητα αντισώματος [29]

Ένας κοινός τρόπος δοκιμές για ειδικότητα αντισώματος είναι να διερευνήσει preadsorbtion του αντισώματος με το πεπτίδιο ανοσοποίησης, αν και έχει αμφισβητηθεί η χρησιμότητα αυτού του μέτρου [30]. Παρ ‘όλα αυτά, μία σειρά πειραμάτων με τη χρήση προεπωάσεως του αντισώματος με το πεπτίδιο ανοσοποίησης (Νο Abcam, Cat. 50542) έχουν επίσης πραγματοποιηθεί. Ωστόσο, προεπώαση με το ανοσοποιητικό πεπτίδιο αύξησε σημαντικά την παρατηρούμενη ανοσοαντιδραστικότητα αντί να μπλοκαριστεί, και έδωσε ένα μάλλον τυχαίο σχέδιο των ανοσοαντιδραστικών χρώσης (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Η ανοσοποίηση (αλληλουχία αμινοξέων MSVSTDTSAEAL) πεπτίδιο έχει δύο αρνητικά φορτισμένα αμινοξέα (ασπαρτικό και γλουταμινικό), πέντε πολικά αμινοξέα (τρία σερίνη, θρεονίνη δύο) και όχι θετικά φορτισμένα αμινοξέα. Είναι γνωστό ότι αρνητικά φορτισμένα πεπτίδια δεσμεύονται με το γυαλί, και καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η διαδικασία πλύσης με την τεχνική Ventana, ενώ είναι επαρκής για να παρέχει καλή εξειδίκευση

per se

(όπως φαίνεται στα ποντίκια knockout), δεν είναι επαρκείς για την εξάλειψη θετικός πεπτίδιο μάρτυρα αντίσωμα δεσμευμένο προσκολλημένο μη ειδικά σε γυαλί και /ή να αμφιτεριονικά λιπίδια.

Κατανομή CB

βαθμολογίες 1IR στο κέντρο του όγκου και μέτωπα

Ένα σύνολο 483 (όγκου εσωτερικού) και 486 (μπροστά όγκου) περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν για CB

ένταση 1IR και καταχωρούνται στη βάση δεδομένων. Τόσο η πλασματική μεμβράνη και κυτταροπλασματική CB

1IR ήταν σκόραρε, έτσι ώστε οι τιμές αντιπροσωπεύουν τη συνολική ομάδα των CB

1 υποδοχείς. Πυρηνική χρώση των CB

1IR (που βρίσκεται στο 42 περιπτώσεις) δεν σκόραρε. Οι κατανομές συχνότητας του CB

1IR για το κέντρο του όγκου και τα μέτωπα ήταν παρόμοια, με σκορ 0 επιστρέφεται για 77 και 60 περιπτώσεις? Ο βαθμός 1 για 196 και 185 περιπτώσεις? ένα σκορ 2 για 140 και 156 περιπτώσεις? και ένας βαθμός 3 για 70 και 85 περιπτώσεις (οι αριθμοί είναι κέντρο του όγκου και μέτωπα, αντίστοιχα). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο πρότυπο κατανομής των δύο σειρών των βαθμολογιών (ρ & gt? 0,1, χ

2 τεστ). Σημειώθηκε ότι οι βαθμολογίες για τις δύο περιοχές δεν ήταν πάντα η ίδια για μία δεδομένη περίπτωση. Πράγματι, για τις 482 περιπτώσεις άνοιξε τόσο για το κέντρο του όγκου και εμπρός, οι βαθμολογίες ήταν τα ίδια σε μόνο 319 (66%) των περιπτώσεων, είναι υψηλότερο στο μέτωπο του όγκου σε 110 (23%) περιπτώσεις και υψηλότερη στο κέντρο του όγκου σε 53 (11%) περιπτώσεις. Κατά συνέπεια, σε όλη αυτή τη μελέτη, οι δύο βαθμολογίες κέντρο του όγκου και μπροστά του όγκου έχουν αναλυθεί ξεχωριστά. Μη κακοήθη ιστό δεν σκόραρε, αλλά σε γενικές γραμμές το επίπεδο της ανοσοδραστικότητας φάνηκε να είναι χαμηλότερη και όχι υψηλότερη από ό, τι φαίνεται για τον ιστό του όγκου.

Σύλλογος CB

1IR με τα χαρακτηριστικά του ασθενούς στο χειρουργείο

Κατά την άποψη της κατανομής συχνοτήτων του CB

1IR, οι αναλύσεις διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας μια απλή μέση διάσπαση, δηλαδή CB

1IR & lt? 2 και ≥2. Χρησιμοποιώντας το σύνολο των δεδομένων που να ψάξετε μεταβλητές, μια δυαδική λογιστική παλινδρόμηση με παραμέτρους φύλο, θέση (δηλαδή δεξιά του παχέος εντέρου, αριστερό κόλον, ορθό), ακτινοθεραπεία (πριν από το χειρουργείο), το στάδιο της νόσου, όγκου ιστολογικά βαθμού (δηλαδή διαφοροποίηση), τύπο όγκου (δηλαδή βλεννώδες ή μη βλεννώδες), αστάθεια μικροδορυφόρου διαλογή κατάσταση [σταθερές (MSS) ή ασταθές (MSI)], το ποσό των λεμφοκυττάρων στο μπροστινό του όγκου και της συχνότητας των μπουμπουκιών του όγκου (μικρά συσσωματώματα των καρκινικών κυττάρων στο μπροστινό εισβολή όγκου, [31]) διεξήχθη. Από τις μεταβλητές αυτές, μόνο του όγκου ιστολογικά Βαθμός (ρ & lt? 0.005) και αστάθεια μικροδορυφόρου κατάσταση διαλογής (ρ & lt? 0,05) συσχετίζονταν σημαντικά με την ΚΤ

1IR (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα αποτελέσματα αυτά μπορεί απλά να απεικονιστεί με τη διαίρεση του συνόλου δεδομένων σε τέσσερις ομάδες με βάση τις δύο σημαντικές παραμέτρους (Εικ. 2). Η πλειοψηφία των περιπτώσεων ταξινομήθηκαν ως MSS, καθώς και η λεπτομερής CB

Οι διανομές 1IR για τις περιπτώσεις MSS που δεν έλαβαν ακτινοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Σε τόσο το κέντρο του όγκου και του όγκου μέτωπα, υπάρχουν περισσότερες περιπτώσεις με CB

1IR≥2 για τις περιπτώσεις MSS με μέτρια-κακή /κακή διαφοροποίηση του όγκου από ό, τι με καλά /καλά μετρίως διαφοροποιημένων όγκων. Στις περιπτώσεις MSI, αυτή η επίδραση του όγκου ιστολογική βαθμίδα δεν έχει δει, και οι υποθέσεις έχουν παρόμοια CB

διανομής 1IR στα μέτρια κακή /χαμηλή διαφοροποίηση περιπτώσεις MSS (Εικ. 2). Περαιτέρω ανάλυση των 62 περιπτώσεων με MSI σκόραρε για CB

1IR που δεν έλαβαν ακτινοθεραπεία πριν από τη βιοψία δεν αποκάλυψε καμία σημαντική συσχέτιση του κέντρου όγκου ή μπροστά CB

1IR είτε με το στάδιο της νόσου (εδώ στάδια Ι και ΙΙ συνδυάστηκαν δεδομένου ότι μόνο 4 περιπτώσεις με το στάδιο Ι βαθμολογήθηκαν για το κέντρο του όγκου CB

1IR), το βαθμό του όγκου, αν οι όγκοι ήταν βλεννώδες ή μη βλεννώδες, συχνότητα των λεμφοκυττάρων στο μπροστινό μέρος του όγκου ή την κατάσταση CIMP (p & gt? 0.1, το ακριβές τεστ του Fisher ή χ

2 δοκιμών, ανάλογα με την περίπτωση, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για το φύλο, οι σ τιμές για τα CB

1IR διανομές ήταν 0,069 και 0,18 για το κέντρο του όγκου και μπροστά, αντίστοιχα (ακριβής δοκιμασία του Fisher), καθώς και για τη συχνότητα των οφθαλμών στο μπροστινό μέρος του όγκου, οι τιμές ρ (χ

2 δοκιμή) ήταν 0,086 και 0,073, αντίστοιχα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

Πίνακας Α, το κέντρο του όγκου.? Το πάνελ Β, εμπρός όγκου. Τα δεδομένα ομαδοποιούνται σύμφωνα με όγκο ιστολογική Βαθμός (w-m, καλά /καλά μετρίως διαφοροποιημένων? m-p, μέτρια-κακή /χαμηλή διαφοροποίηση) και η σταθερότητα μικροδορυφορικού (MSS, σταθερή? MSI, ασταθής). Το χ

2 και ως εκ τούτου οι τιμές ρ είναι για τα δεδομένα ομαδοποιούνται ως μια μήτρα 4 × 2 (όπου το 2 είναι το CB

1IR). n αναφέρεται στο συνολικό αριθμό των περιπτώσεων για κάθε γραμμή.

Η

Μια σημαντική διαφορά μεταξύ των MSS και MSI είναι η μεγαλύτερη συχνότητα του υψηλού βαθμού CpG νησί μεθυλίωσης στο τελευταίο [32]. Στο σύνολο δεδομένων μας, από τις 467 περιπτώσεις που σκόραρε για την κατάσταση της διαλογής μικροδορυφορικού αστάθεια, CIMP κατάστασης και του όγκου κέντρο CB

1IR, οι κατανομές CIMP ήταν: MSS (n = 396), αρνητικό 225 (57%), χαμηλή 153 (39 %) και υψηλή 18 (4,5%)? MSI (n = 71), αρνητικό 15 (21%), χαμηλό 17 (24%) και υψηλό 39 (55%) (p & lt? 0,0001, χ

2 τεστ). Όταν η κατάσταση CIMP των δειγμάτων προστέθηκαν στο δυαδικό λογιστική παλινδρόμηση ολόκληρου του συνόλου δεδομένων με τις παραμέτρους που περιγράφονται παραπάνω, η σημαντική επίδραση του όγκου ιστολογικά βαθμού διατηρήθηκε (ρ & lt? 0.005) τόσο για το κέντρο του όγκου και εμπρός CB

1IR , αλλά το αποτέλεσμα της κατάστασης διαλογής αστάθεια μικροδορυφόρου χάθηκε για τα κέντρα του όγκου (ρ & gt? 0,1), αλλά όχι για τα μέτωπα του όγκου (ρ & lt? 0,05) (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Προκειμένου να ερευνηθεί αυτό περαιτέρω, τα δεδομένα για τα δείγματα διαιρέθηκε σε τρεις ομάδες CIMP: αρνητική, χαμηλής και υψηλής, ανεξάρτητα από αστάθεια μικροδορυφόρου διαλογής κατάσταση ή αν οι ασθενείς είχαν λάβει ακτινοθεραπεία πριν από το χειρουργείο. Υπήρξε μια σαφής επίδραση της κατάστασης CIMP σχετικά με τα αποτελέσματα, όπου η επίδραση του όγκου ιστολογικά βαθμού παρατηρήθηκε σε περιπτώσεις με CIMP-αρνητικό αποτέλεσμα, αλλά όχι στις περιπτώσεις με CIMP-υψηλή βαθμολογία, τα CIMP-χαμηλό περιπτώσεις είναι κάπου στη μέση (Εικ. 3). Η ανάλυση αυτή δεν λαμβάνει υπόψη την μικροδορυφορικού καθεστώς ελέγχου της αστάθειας των περιπτώσεων, προκειμένου να επιτευχθεί επαρκής μεγέθη του ομίλου. Ωστόσο, ένα παρόμοιο μοτίβο παρατηρείται όταν το MSS και περιπτώσεις MSI αναλύονται χωριστά, αν και ως προειδοποίηση ότι πρέπει να τονιστεί ότι ορισμένα από τα μεγέθη της ομάδας είναι πολύ μικρή (Εικ. S3).

Πίνακας Α, κέντρο του όγκου? Το πάνελ Β, εμπρός όγκου. Τα δεδομένα ομαδοποιούνται σύμφωνα με όγκο ιστολογική Βαθμός (w-m, καλά /καλά μετρίως διαφοροποιημένων? m-p, μέτρια-κακή /χαμηλή διαφοροποίηση) και η κατάσταση CIMP. Από τις 473 περιπτώσεις σκόραρε για το κέντρο του όγκου CB

1IR, 389 ταξινομήθηκαν ως MSS, 71 όπως MSI και 13 δεν είναι ταξινομημένα στη βάση δεδομένων. Οι αντίστοιχοι αριθμοί για το μέτωπο του όγκου CB

1IR ήταν 392, 71 και 13, αντίστοιχα. Οι τιμές ρ είναι για το ακριβές τεστ του Fisher. Η συνολική (δηλαδή CB

1IR & lt? 2 και ≥2). Αριθμό περιπτώσεων παρουσιάζεται να περικλείεται μέσα σε κάθε γραμμή

Η

Σύλλογος CB

1IR με αποτέλεσμα τη νόσο

οι περιπτώσεις στη βάση δεδομένων είχε ακολουθηθεί έως 113 μήνες [24] που επιτρέπει την επίδραση του CB

σκορ 1IR κατά τη διάγνωση κατά την έκβαση της νόσου που θα καθοριστεί. Χρησιμοποιώντας ολόκληρο το σύνολο δεδομένων (δηλαδή, ακόμη και στις περιπτώσεις στις οποίες CB

1IR δεν σκόραρε, μια μονοπαραγοντική αναλογικών κινδύνων κατά Cox ανάλυση παλινδρόμησης σε ολόκληρο το σύνολο δεδομένων έδειξε ότι η χορήγηση ακτινοθεραπείας πριν από τη χειρουργική επέμβαση, όπως ήταν αναμενόμενο, συνδέονται με την έκβαση της νόσου (Exp ( Β) 0,60 [95% CI 0,40 έως 0,91] p & lt?. 0.05), όπου ο αριθμός των περιπτώσεων που δεν λαμβάνουν /λήψη ακτινοθεραπεία ήταν 441/102 η ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου Cox είναι ένα τεστ που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της συμβολής της παραμέτρου (s) υπό έρευνα μετά από συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωση χωρίς να κάνει υποθέσεις ως προς τη φύση της καμπύλης επιβίωσης. το μέτρο Exp (Β), μερικές φορές ονομάζεται η αναλογία κινδύνους, δείχνει την αλλαγή του κινδύνου, όπως η παράμετρος υπό έρευνα έχει αλλάξει από την προεπιλεγμένη παράμετρο (εδώ όχι ακτινοθεραπεία) προς την παράμετρο της δοκιμής (εδώ ακτινοθεραπεία). στην περίπτωση αυτή, η ακτινοθεραπεία μείωσε τον κίνδυνο θανάτου από την ασθένεια αφού η) τιμή Exp (Β ήταν σημαντικά χαμηλότερη από την ενότητα. για να απομακρυνθεί η επίδραση αυτής της παραμέτρου, η ΚΤ

δεδομένα 1IR αναλύθηκε μόνο για τις περιπτώσεις που δεν έλαβαν ακτινοθεραπεία. Επιπλέον, οι περιπτώσεις MSS και MSI αναλύθηκαν ξεχωριστά.

Για τις περιπτώσεις MSS, μια μονοπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου Cox απέτυχαν να δείξουν σημαντική επίδραση είτε εσωτερικού όγκου ή μπροστά CB

1IR κατά της νόσου ειδική επιβίωση. Ωστόσο, όταν ένας διμεταβλητή ανάλυση διεξήχθη με το στάδιο της νόσου ως τη δεύτερη παράμετρο, μια ιδιαίτερα σημαντική συμβολή του CB

1IR παρατηρήθηκε (Πίνακας 2). Αυτό επιβεβαιώθηκε σε οικόπεδα επιβίωσης Kaplan-Meier: για το σύνολο των διαθέσιμων δεδομένων, δεν υπήρχε σημαντική συμβολή του όγκου εσωτερικού CB

1IR (Εικ. 4Α), ενώ στο στάδιο του όγκου ΙΙ (όπου οι όγκοι έχουν διεισδύσει το propria μυϊκό του παχέος εντέρου ή του ορθού, αλλά δεν έχουν δώσει αφορμή για μετάσταση στους λεμφαδένες), και των όγκων σταδίου IV (όπου οι όγκοι έχουν εξαπλωθεί σε άλλα όργανα), περιπτώσεις με CB

1IR≥2 έχουν χειρότερη συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης από τις περιπτώσεις με ένα CB

1IR & lt? 2 (Τα Σχ. 4Β και D? ορισμούς της στάσης της νόσου δίνεται στο [33]). Δεν παρατηρήθηκε διαφορά για το στάδιο του όγκου ΙΙΙ, αν και θα πρέπει να ληφθεί υπόψη το γεγονός ότι πρόκειται για μια εξαιρετικά ετερογενής ομάδα, ότι ο αριθμός των περιπτώσεων ήταν μικρότερη από ό, τι για τα στάδια της νόσου II και IV και ότι αναλύσεις υποομάδων υποφέρουν από χαμηλή ισχύ. Υπήρχαν μόνο τρεις ασθενείς που διαγιγνώσκονται με σταδίου Ι καρκίνο του παχέος εντέρου (όπου ο όγκος έχει διεισδύσει μόνο το στρώμα υποβλεννογόνιο του παχέος εντέρου ή του ορθού και δεν έχει εξαπλωθεί στους λεμφαδένες ή άλλα όργανα), ο οποίος πέθανε ως αποτέλεσμα του καρκίνου τους κατά τη διάρκεια της ακόλουθες up περίοδο, αποκλείοντας την ανάλυση της επίδρασης του CB

1IR κατά της νόσου συγκεκριμένο αποτέλεσμα σε αυτή την ομάδα ασθενών. Στην περίπτωση του εμπρόσθιου όγκου CB

1IR, η σημαντική επίδραση επί των παραμέτρων του όγκου στους ασθενείς σταδίου II παρατηρήθηκε επίσης, αλλά όχι στο στάδιο IV ασθενείς (Εικ. 4 και τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται, αντίστοιχα). Στις περιπτώσεις που το στάδιο ΙΙ, τα 5 χρόνια πιθανότητες ελεύθερη συμβαμάτων επιβίωση ήταν: 85 ± 5 και 66 ± 8%? όγκου εσωτερικό, 86 ± 4% και 63 ± 8% για το CB

1IR & lt? 2 και CB

1IR≥2 ομάδες, αντίστοιχα. Μπορεί να σημειωθεί ότι ορισμένες από τις περιπτώσεις σταδίου II πέθαναν μέσα σε ένα μήνα από την επέμβαση. Ωστόσο, όταν αποκλείστηκαν οι περιπτώσεις αυτές, η σημαντική συμβολή του CB

1IR με την ασθένεια-ειδικό αποτέλεσμα διατηρήθηκε (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Μετά από περαιτέρω υποδιαίρεση των περιπτώσεων στάδιο II σύμφωνα με την τοποθεσία του καρκίνου, μια σημαντική συμβολή τόσο κέντρο του όγκου και εμπρός CB

1IR κατόπιν συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωση παρατηρήθηκε για τις ορθού καρκίνους, αλλά όχι για τους καρκίνους του παχέος εντέρου, αν και η κατεύθυνση ( δηλαδή φτωχότερες επιβίωση για ένα υψηλό CB

1IR) ήταν το ίδιο. Είναι σημαντικό να σημειωθεί, ωστόσο, ότι η ερμηνεία των αποτελεσμάτων με αυτές τις υποομάδες περιορίζονται από μια χαμηλής ισχύος και δεν υποστηρίζονται από την Cox αναλύσεις (βλέπε παρακάτω).

Kaplan-Meier για την επιβίωση συγκεκριμένες ασθένειες για τις περιφέρειες του όγκου και τα στάδια της νόσου εμφανίζονται. Παρουσιάζεται στα σχήματα είναι ο αριθμός των περιπτώσεων (n), ακολουθούμενο από τον αριθμό που έχασαν τη ζωή τους ως αποτέλεσμα της ορθοκολικού καρκίνου (†

γα). Το χ

2 αξία που δίνεται στα στοιχεία είναι από το log-rank (Mantel- Cox) δοκιμή συγκρίνοντας τις δύο καμπύλες? ** P & lt? 0,01, * ρ & lt? 0,05,

† 0,05 & lt? P & lt? 0.1?

NSP & gt? 0.1. Το αντίστοιχο χ

2 τιμές για τα μπροστινά του όγκου στάδια ΙΙΙ και IV ήταν 0,24

NS και 1,44

NS, αντίστοιχα.

Η

Το γεγονός ότι στους ασθενείς MSS η CB

1IR σχετίζεται με τον όγκο ιστολογικό βαθμό κατά τη χειρουργική επέμβαση μπορεί φυσικά να σημαίνει ότι η ένωση που περιγράφεται παραπάνω είναι απλά μια αντανάκλαση της επιρροής του όγκου ιστολογικά βαθμό κατά την έκβαση της νόσου. Αυτή η δυνατότητα διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας πολυμεταβλητή αναλύσεις αναλογικού κινδύνου παλινδρόμησης Cox (Πίνακας 2), όπου διαπιστώθηκε ότι ο όγκος ιστολογική βαθμολογία παρέχεται πρόσθετο προγνωστικές πληροφορίες με αυτό που παρατηρείται με το κέντρο του όγκου CB

1IR όταν το στάδιο της νόσου επίσης περιλαμβάνεται ως παράμετρος. Σε αντίθεση, το μέτωπο του όγκου CB

1IR παράμετρο χαθεί σημασία. Ωστόσο, όταν η συχνότητα εμφάνισης των οφθαλμών στο μπροστινό όγκου περιελήφθη επίσης (από μόνη της ένα προγνωστικός παράγοντας), η επίδραση του όγκου ιστολογικά βαθμό κατά την έκβαση της νόσου μειώθηκε, ενώ η επίδραση τόσο κέντρο του όγκου και εμπρός CB

1IR ήταν σημαντική (Πίνακας 2). Αυτά τα δεδομένα θα προτείνουν ότι η προγνωστική σημασία του κέντρου όγκου και ενδεχομένως και μπροστά όγκου CB

1IR δεν είναι δευτερεύον σε σχέση της με τον όγκο ιστολογικό βαθμό. Περαιτέρω ανάλυση έδειξε ότι η προγνωστική σημασία της CB

1IR παρέμειναν όταν η περιοχή κατάστασης, του φύλου και του όγκου CIMP συμπεριλήφθηκαν στην πολυπαραγοντική ανάλυση (κέντρο του όγκου, Exp (Β) 1,77 [95% CL 1,16 – 2,72, p & lt? 0,01? μπροστά όγκου Exp (Β) 1,67 [95% CL 1,11 – 2,50] p & lt?. 0.05)

για τις περιπτώσεις MSI, συμπεράσματα θα μπορούσαν να εξαχθούν ως προς το αν CB

1IR επηρέασε κατά της συγκεκριμένης νόσου επιβίωση σε περιπτώσεις στάδιο ΙΙ, απλώς και μόνο επειδή από τις 32 περιπτώσεις που εμπίπτουν σε αυτήν την κατηγορία (μετά τον αποκλεισμό των περιπτώσεων που λαμβάνουν ακτινοθεραπεία πριν τη χειρουργική επέμβαση), μόνο το ένα πέθανε του καρκίνου κατά τη διάρκεια της περιόδου παρακολούθησης.

Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη είχε ως κίνητρο δεδομένα τόσο από καλλιεργημένα κύτταρα και τα δείγματα ασθενούς που υποδεικνύουν ότι ένα δυσλειτουργικό σύστημα ενδοκανναβινοειδούς σηματοδότηση εμπλέκεται είτε στην παθογένεση ή /και ως συνέπεια του ορθοκολικού καρκίνου [13], [14], [17 ], [21], [22]. Κατ ‘αρχάς αξίζει σχολιασμό στο γεγονός ότι τόσο η κυτταρική επιφάνεια και κυτταροπλασματική CB

1 υποδοχείς βαθμολογήθηκαν. Οι CB

1 υποδοχείς συχνά θεωρούνται ως υποδοχείς της κυτταρικής επιφάνειας, αλλά είναι καλά εδραιωμένη σε πολλά κύτταρα και ιστούς που έχουν βρεθεί ενδοκυτταρικά [34] – [37], όπως θα αναμενόταν για υποδοχείς που εσωτερικοποιούν εξής παρατεταμένη διέγερση αγωνιστή [38], [39]. Έχει προταθεί ότι αυτοί οι υποδοχείς είναι ενδοκυτταρική ενεργός και ζευγάρι να εξωκυτταρικό σήμα κινάση ρυθμιζόμενη [35], αν και άλλοι συγγραφείς δεν έχουν δει ενδοκυτταρικό συν-εντοπισμό του CB

1 υποδοχείς με υπομονάδες Οα [39]. Φυσικά απαντώμενες συνδετήρες για CB

1 υποδοχείς είναι εξαιρετικά λιπόφιλη, και έτσι η μεμβράνη του πλάσματος δεν αποτελεί εμπόδιο για την κυτταρική διείσδυση τους. Εξωκυτταρικό σήμα ρυθμίζεται κινάση είναι ένα σημαντικό μόριο σηματοδότησης, και έχει εμπλακεί σε αντιπολλαπλασιαστικές επιδράσεις των κανναβινοειδών σε έναν αριθμό διαφορετικών κυτταρικών γραμμών καρκίνου [40], έτσι δεν είναι παράλογο (και τεχνικώς σημαντικά λιγότερο δύσκολη) και να στείλει τη συνδυασμένη ένταση από πλασματική μεμβράνη και ενδοκυτταρική CB

1 υποδοχείς. Υπάρχουν τρία κύρια αποτελέσματα από τη μελέτη, και αυτά συζητούνται με τη σειρά.

1.