Αφηρημένο

RABEX-5, ένας παράγοντας ανταλλαγή γουανίνης-νουκλεοτιδίου (GEF) για RAB-5 , εμπλέκεται στην ογκογένεση και στην ανάπτυξη ορισμένων ανθρώπινων καρκίνων. Εδώ, αναφέρουμε ότι RABEX-5 προωθεί την ανάπτυξη του όγκου και την μεταστατική ικανότητα των γαστρικών καρκινικών κυττάρων και

in vitro

και

in vivo

. Έκφραση RABEX-5 είναι σημαντικά υψηλότερη σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και σχετίζεται με το μέγεθος του όγκου και τη μετάσταση λεμφαδένα. Επιπλέον, στοχευμένη αποσιώπηση RABEX-5 μειωμένο γαστρικό τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και του σχηματισμού αποικιών

in vitro

μέσω της επαγωγής μιας σύλληψης φάση G0 /G1, και διεγείρονται γαστρικού απόπτωση των καρκινικών κυττάρων. Εξόντωση RABEX-5 επίσης ανέστειλε την επούλωση τραυμάτων, τη μετανάστευση και τις επεμβατικές ικανότητες των γαστρικών καρκινικών κυττάρων. Τα αποτελέσματα του

in vivo

πειράματα σε ζώα ήταν επίσης συνεπής με αυτά τα

in vitro

ευρήματα. Αποσιώπηση του RABEX-5 οδήγησε σε μειωμένη έκφραση του VEGF. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι RABEX-5 ρυθμίζεται αυξητικά και διαδραματίζει ογκογόνο ρόλο στη γαστρική την ανάπτυξη του καρκίνου με την ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης VEGF

Παράθεση:. Wang S, Lu A, Chen Χ, Wei L, Ding J (2014) RABEX-5 ρυθμίζεται προς τα πάνω και παίζει ογκογόνο ρόλο στη γαστρική την ανάπτυξη του καρκίνου με την ενεργοποίηση του VEGF μονοπάτι σηματοδότησης. PLoS ONE 9 (11): e113891. doi: 10.1371 /journal.pone.0113891

Επιμέλεια: Xin Yuan-Γκουάν, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Κίνα

Ελήφθη: 3 Σεπτεμβρίου, 2014? Αποδεκτές: 31 του Οκτώβρη του 2014? Δημοσιεύθηκε: 26 Νοεμβρίου, 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Αυτοί οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

Παρά τη μείωση της παγκόσμιας συχνότητα σε ορισμένες περιοχές του κόσμου, γαστρικού καρκίνου εξακολουθεί να είναι η τέταρτη υψηλότερη στην συχνότητα και τη δεύτερη σε θνησιμότητα μεταξύ όλων των καρκίνων σε όλο τον κόσμο [1]. Οι μελέτες δείχνουν ότι οι περιβαλλοντικοί παράγοντες, όπως

Helicobacter pylori

μόλυνση, το κάπνισμα και η διατροφή, μπορεί να παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου του γαστρικού [2]. Πρώιμου σταδίου καρκίνο του στομάχου είναι συνήθως ασυμπτωματική ή σχετίζονται με μη ειδικά συμπτώματα, όπως η δυσπεψία, και από τη στιγμή που εμφανιστούν συμπτώματα, έχει συχνά φτάσει σε προχωρημένο στάδιο. Παρά την κοινή χρήση των πολυτροπικών θεραπείας (χημειοθεραπεία, ακτινοβολία και χειρουργική επέμβαση), η 5-ετής επιβίωση των ασθενών παραμένει σε χαμηλά επίπεδα, σε 20-40% [3]. Αν και η έρευνα στον καρκίνο του στομάχου έχει σημειώσει μεγάλη πρόοδο, οι μοριακοί μηχανισμοί που διέπουν την ανάπτυξη του καρκίνου του στομάχου παραμένουν ατελώς κατανοητά.

Εξωκύττωση και ενδοκύττωση είναι βασικές διαδικασίες που χρησιμοποιούνται από τα κύτταρα για να διατηρηθεί η κανονική φυσιολογική λειτουργία, και κυστιδίων μεταφοράς αποτελεί βασική μέρος αυτής της διαδικασίας. Μικρές GTPases παίζουν λειτουργία διακόπτη σε ενδοκυτταρικά μόρια και ένα πολύ σημαντικό ρόλο στην ενδοκύτωση και μεταφορά κυστιδίων, συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης της κυτταρικής ανάπτυξης, μεταγωγή σήματος, τη διαφοροποίηση και κυτταροσκελετού της ακτίνης κτίριο και πολλές πτυχές των άλλων κυτταρικών διεργασιών [4]. Στην υπεροικογένειας Ras, υπάρχουν περισσότερα από 50 είδη των GTPases, συμπεριλαμβανομένων Rab, το οποίο ανήκει στην υποοικογένεια μεγαλύτερο [5]. Μελέτες έχουν δείξει ότι η πλειοψηφία των πρωτεϊνών Rab ρυθμίζουν τη στόχευση των μεταφορών, φαγοκυττάρωση, και κυστιδίων σύνδεσης σε ειδικές μεμβράνες, ενώ ένα μικρό αριθμό πρωτεϊνών Rab ρυθμίζουν κυστιδίων εκβλάστηση [6], [7]. Το μικρό ΘΤΡάσης RAB-5, το οποίο διανέμεται στην πλασματική μεμβράνη και στις αρχές του endosomes, είναι ένας κύριος ρυθμιστής της πρώιμης ενδοκυτταρικής διακίνησης [8]. Όπως και άλλα μικρά GTPases, RAB-5 ενεργοποιείται με την ανταλλαγή των δεσμευμένων ΑΕΠ με GTP, καταλύεται από μια οικογένεια παραγόντων ανταλλαγής γουανίνης-νουκλεοτιδίου [9]. RABEX-5 ταυτοποιήθηκε ως αλληλεπίδρασης των Rabaptin-5 και διαθέτει δραστηριότητα GEF προς RAB-5 και σχετικές GTPases. Ομοίως, τόσο RABEX-5 και Rabaptin-5 είναι απαραίτητες για την RAB-5-οδηγείται ενδόσωμα σύντηξης

in vitro

[10].

Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι RABEX-5 έκφραση είναι σημαντικά υψηλότερη σε διάφορες μορφές καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού [11], του καρκίνου του προστάτη [12] και του παχέος εντέρου [13]. Ανώμαλη RABEX-5 έκφρασης σε όγκους δείχνει ότι RABEX-5 είναι σημαντική στην παθογένεση και την εξέλιξη του καρκίνου, και μπορεί να επηρεάσει όγκου βιολογική συμπεριφορά. Ωστόσο, ο ρόλος και ο μηχανισμός δράσης του RABEX-5 σε γαστρικό καρκινογένεση και της εξέλιξης του καρκίνου δεν έχουν ακόμη προσδιοριστεί. Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε πρώτη έκφραση RABEX-5 στο γαστρικό καρκινικούς ιστούς χρησιμοποιώντας ποσοτική αλυσίδα μεταγραφής-αντίδρασης πολυμεράσης αντίστροφης (qRT-PCR) και ανοσοϊστοχημεία. Στη συνέχεια, εξετάσαμε τις επιδράσεις της RABEX-5 σε όγκο βιολογική λειτουργία

in vitro

και

in vivo

. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι RABEX-5 υπερεκφράζεται και διαδραματίζει ογκογόνο ρόλο στον καρκίνο του στομάχου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλα τα ζωικά πειράματα που περιγράφονται σε αυτή τη μελέτη, εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Θεσμικών Animal Care and Use (IACUC) σε Taishan Ιατρικό Πανεπιστήμιο και όλα τα ζώα συντηρούνται σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές IACUC. Η συλλογή και η χρήση ανθρώπινων δειγμάτων εγκρίθηκαν από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review της Taishan Ιατρικό Πανεπιστήμιο και το συνδεδεμένων Ιατρικό Κέντρο Taian Κεντρικό Νοσοκομείο, μετά από ενημέρωσε γραπτή συγκατάθεση από όλους τους ασθενείς.

Ασθενείς και ιστών δείγματα

Ένα σύνολο από 110 σύνολα των γαστρικών όγκων και ιστούς παρακείμενα, μη-όγκου (τουλάχιστον 5 cm από το περιθώριο όγκου) ελήφθησαν από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε θεραπευτική χειρουργική επέμβαση στο Taian Κεντρικό Νοσοκομείο μεταξύ Ιανουαρίου 2010 και Δεκεμβρίου 2013. Αυτά περιλαμβάνονται 27 γυναίκες και 83 άνδρες, με μέση ηλικία 59,3 έτη (εύρος: 32-80 έτη). Κανένας ασθενής δεν είχε λάβει ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση. Κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένα συλλέχθηκαν και παθολογική σταδιοποίηση όγκου προσδιορίστηκε σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC) γαστρικό σύστημα σταδιοποίησης του καρκίνου του TNM. Η ιστολογική πληκτρολόγηση πραγματοποιήθηκε από τουλάχιστον δύο παθολόγους εμπειρογνωμόνων, που εργάζονται ανεξάρτητα σε ένα διπλό τυφλό τρόπο. Η μελέτη εγκρίθηκε από την Institutional Review Boards του Taishan Ιατρικό Πανεπιστήμιο και το συνδεδεμένων Taian Κεντρικό Νοσοκομείο Ιατρικό Κέντρο. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή πριν από την εγγραφή στη μελέτη.

Οι κυτταρικές σειρές και συνθήκες καλλιέργειας

Ανθρώπινο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου και το απαθανάτισε του στομάχου, του βλεννογόνου επιθηλιακά κυτταρική γραμμή, GES-1 , αγοράστηκαν από τα Ινστιτούτα Σαγκάη Βιολογικών Επιστημών, κινεζική Ακαδημία Επιστημών. Οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν με συνήθη τρόπο σε RPMI-1640 που περιέχει 10% ορό μόσχου, πενικιλλίνη (100 IU /ml) και στρεπτομυκίνη (100 IU /ml) σε ένα 5% CO

2 ατμόσφαιρα στους 37 ° C.

Σύνολο απομόνωση RNA και qRT-PCR

Ολικό RNA εξήχθη από δείγματα ιστού ή κυτταρικές γραμμές χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, USA), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Αντίστροφη μεταγραφή πραγματοποιήθηκε με τη χρήση 1 μ§ ολικού RNA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (Promega, Madison, WI, USA). PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας SYBR Green αντιδραστήριο (Applied Biosystems, CA, USA) και τους ακόλουθους εκκινητές PCR?

RABEX-5

(προς τα εμπρός) 5′-TTGGACAGATGGAATTGCAA-3 ‘και (ανάστροφη) 5′-GTTGCAGTGGTGGAGGAAGT-3’?

VEGF

(προς τα εμπρός) 5′-CTGTACCTCCACCATGCCAAGT-3 ‘και (ανάστροφη) 5’-CTTCGCTGGTAGACATCCATGA-3 »και

GAPDH

(προς τα εμπρός) 5′-GGACCTGACCTGCCGTCTAG-3′ και (ανάστροφη) 5′-GTAGCCCAGGATGCCCTTGA-3 ‘. Οι αντιδράσεις PCR εκτελέστηκαν με αρχική μετουσίωση στους 95 ° C για 2 λεπτά, ακολουθούμενη από 30 κύκλους των 94 ° C για 30 s, 55 ° C για 30 s και 72 ° C για 30 s, με μια τελική επέκταση στους 72 ° C για 10 λεπτά.

GAPDH

χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος και όλες οι αντιδράσεις διεξήχθησαν εις τριπλούν. Οι αναλογίες σε σχέση με την έκφραση του

RABEX-5

σε κάθε συνδεδεμένο όγκου σε δείγμα ιστού μη-όγκου υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας την 2

-ΔΔCt μέθοδο.

Η ανοσοϊστοχημεία

Παραφίνη -embedded τομές ιστών από ασθενείς ή γυμνοί ποντικοί θερμική κατεργασία στους 60 ° C για 1 ώρα, αποκηρωμένα σε ξυλόλιο, επανα-ενυδατωμένο σε μια σειρά αιθανόλης (100-50%) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία σε 0,01 mol /L ρυθμιστικού διαλύματος κιτρικού (ρΗ 6.0 ) για την ανάκτηση του αντιγόνου. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης ανεστάλη μετά από επώαση με μεθανόλη που περιέχει 0,3% Η

2O

2 για 30 λεπτά. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν με αντισώματα ανίχνευσης RABEX-5 (1:50, την Santa Cruz Biotechnology, USA) ή VEGF (1:150? Ab46154, Abcam, USA) στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Η ακόλουθη πειραματική διαδικασία επωάστηκε με το δευτερογενές αντίσωμα. Τομές ιστού βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη Mayer του. Διαφάνειες ήταν ανεξάρτητα αξιολογήθηκαν από δύο παθολόγους, τυφλωμένοι με όλα τα δεδομένα των ασθενών. Η ένταση χρώσης για RABEX-5 βαθμολογήθηκε ως 0 (καμία χρώση), 1 (ήπια χρώση), 2 (μέτρια χρώση) ή 3 (έντονη χρώση). Χρώση περιοχή βαθμολογήθηκε ως 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) ή 4 (76-100%), επί τη βάσει του ποσοστού των θετικά χρωματισμένα κύτταρα. Το τελικό σκορ χρώση, υπολογίζεται ως το άθροισμα των βαθμολογιών έντασης και επέκταση, διαιρέθηκε σε τρεις ομάδες ως εξής: 0-2, αρνητική έκφραση? 3-4, ασθενής έκφραση? και 5-6, ισχυρή έκφραση.

Στοχευμένες αποσιώπηση των RABEX-5

Ο φορέας παρεμβολές λεντοϊού RABEX-5 αγοράστηκε από τη Σαγκάη GenePharma Co., Ltd. την αλληλουχία του RABEX-5 παρεμβολή ολίγο στόχευσης ήταν 5′-GGATGCAAACTCGTGGGAA-3 ‘, ενώ το μη-ομόλογη ακολουθία ελέγχου ήταν 5′-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3’. SGC-7901 και ΝΟΙ-Ν87 κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων (5 χ 10

4 κύτταρα /φρεάτιο), που καλλιεργούνται σε 40% συρροή και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με τιτλοδοτήθηκαν ιικό υπερκείμενο σε μια πολλαπλότητα μόλυνσης (moi) 10.

Western blot ανάλυση

ολόκληρου κυτταρικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από κύτταρα χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα ΚΙΡΑ που περιέχει κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης (Pierce, Rockford, IL, USA). Η πρωτεΐνη προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας ένα BCA Protein Assay Kit (Pierce). Κυτταρικά εκχυλίσματα (100 ug) διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου δωδεκύλ θειικού νατρίου 10%, και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες πολυβινυλιδενο φθορίδιο. Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% άπαχο γάλα σε αλατόνερο ρυθμισμένο με Tris (TBS) και επωάζονται με πρωτεύοντα αντισώματα σε 4 ° C όλη τη νύκτα. Τα πρωτογενή αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αντι-RABEX-5 (1:200? Santa Cruz Biotechnology), αντι-GAPDH (1:5000? Ab9485, Abcam) και αντι-VEGF (1:300? Ab46154, Abcam). Οι μεμβράνες στη συνέχεια πλύθηκαν τρεις φορές σε διάλυμα TBS-Tween για 15 λεπτά, και επωάστηκαν με δευτερεύοντα αντισώματα. Σήματα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ανίχνευσης ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή.

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων δοκιμασία

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα κύτταρο Μετρώντας Kit -8 (CCK-8? Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan). SGC-7901 ή ΝΟΙ-Ν87 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων (1,5 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο) και επωάστηκαν για διάφορα χρονικά σημεία (24, 48, 72, 96 και 120 ώρες). Το μέσο ανάπτυξης στη συνέχεια απομακρύνθηκε και αντικαταστάθηκε με 200 μΙ RPMI-1640 που περιέχει 10% FBS και 20 μl του CCK-8 και οι πλάκες επωάστηκαν στους 37 ° C για 3 ώρες. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm χρησιμοποιώντας αναγνώστη μικροπλάκας Safire2. RPMI-1640 που περιέχει 10% FBS και CCK-8 χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος.

Colony δοκιμασία σχηματισμού

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων (1 χ 10

3 κύτταρα /φρεάτιο) και καλλιέργεια μέσο αντικαταστάθηκε κάθε 3-4 ημέρες. Μετά από καλλιέργεια 14 ημερών, οι αποικίες των κυττάρων μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη για 10 λεπτά, χρωματίστηκαν με 0.1% κρυσταλλικό ιώδες επί 20 λεπτά, και φωτογραφήθηκαν. Αποικίες με περισσότερα από 50 κύτταρα μετρήθηκαν σε κάθε εξόρμηση.

Ανάλυση του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης

SGC-7901 /KD, κύτταρα NCI-Ν87 /KD και τα κύτταρα ελέγχου συλλέχθηκαν και του κυτταρικού κύκλου και η απόπτωση εκτιμήθηκε με κυτταρομετρία ροής. Για την ανάλυση του κυτταρικού κύκλου, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 75% αιθανόλη και αποθηκεύονται στους 4 ° C όλη τη νύκτα. Την επόμενη ημέρα, στερεωμένα κύτταρα πλύθηκαν με PBS, επεξεργασμένο με RNase Α (50 μg /ml) και χρωματίστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) (50 μg /ml) για 30 λεπτά στο σκοτάδι. Τα βαμμένα κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (FACSCalibur, Becton-Dickinson).

Για την ανάλυση απόπτωσης, μια αννεξίνη V-APC Apoptosis Detection Kit Ι (BD Pharmingen, USA) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. ΡΙ και αννεξίνης διπλή χρώση V-APC διεξήχθη και τα κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (FACSCalibur, Becton-Dickinson), χρησιμοποιώντας το λογισμικό Cell Quest (Becton-Dickinson). Annexin V-APC-θετικών και ΡΙ-αρνητικά κύτταρα ορίστηκαν ως υφίστανται απόπτωση. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν και υπολογίστηκαν οι μέσες τιμές των ομάδων αυτών.

Transwell μετανάστευση και εισβολή

δοκιμασία

Για τις δοκιμασίες μετανάστευσης, 1 × 10

5 κύτταρα εναιωρήθηκαν σε ελεύθερο ορού ελεύθερο RPMI-1640 και απλώθηκε σε θαλάμους που δεν είχαν επικαλυφθεί με Matrigel (Corning Costar, ΝΥ, USA). Για τη δοκιμασία εισβολή, ο άνω θάλαμος προεπικαλυμμένα με Matrigel (BD Bioscience, CA, USA) σύμφωνα με τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή, και 1 × 10

5 κύτταρα σε RPMI-1640 χωρίς ορό προστέθηκαν στο θάλαμο. Για αμφότερους τους προσδιορισμούς, μέσο που περιέχει 10% FBS προστέθηκε στο κατώτερο θάλαμο ως χημειοελκτικό. Μετά από 24 ώρες καλλιέργειας, θάλαμοι βάφτηκαν με 0.5% κρυσταλλικό ιώδες διάλυμα για 15 λεπτά, και βυθίζεται σε ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο (PBS) για 10 λεπτά. Κυττάρων στον κατώτερο θάλαμο στη συνέχεια μετρήθηκαν υπό ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο. Οι τιμές εκφράζονται ως μέση τιμή αριθμού κυττάρων σε πέντε τυχαία πεδία του άποψη (200 Χ).

επούλωση πληγών δοκιμασία

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων και καλλιεργήθηκαν έως ότου έφθασαν συρροή. Πληγές ήταν γδαρμένο από την μονοστιβάδα κυττάρων με τη χρήση 20-μί ρύγχη πιπέτας. Οι πλάκες πλύθηκαν μία φορά με φρέσκο ​​θρεπτικό μέσο για να απομακρυνθεί μη προσκολλημένα κύτταρα μετά από καλλιέργεια των κυττάρων για 0 ​​ή 48 ώρες (μέσο χωρίς ορό μόσχου), και φωτογραφήθηκαν.

μοντέλο ξενομοσχεύματος

Four-εβδομάδα- παλιά αρσενικά BALB /C γυμνά ποντίκια είχαν αγοραστεί από το Ινστιτούτο Ζωολογίας, κινεζική Ακαδημία Επιστημών της Σαγκάης. Τα ζώα στεγάστηκαν σε κλουβιά με κλινοσκεπάσματα τσιπ ξύλο σε ένα ελεγχόμενης θερμοκρασίας δωματίου (68-72 ° F) με μια 12-h κύκλο φωτός-σκότους και 45-55% σχετική υγρασία, και επιτράπηκε ελεύθερη πρόσβαση σε δίαιτα και το πόσιμο νερό. Εν συντομία, SGC-7901 /KD ή SGC-7901 κύτταρα /NC τρυψινοποιήθηκαν και επανεναιωρήθηκαν σε PBS (ρΗ 7.4) για ένεση σε ένα ποντίκι, σε έναν συνολικό όγκο 100 ul. Το εναιώρημα των κυττάρων (1 χ 10

6 κύτταρα) εγχύθηκε στο δεξί πλευρό των ποντικών. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε εξωτερικά κάθε 3 ημέρες χρησιμοποιώντας ένα παχύμετρο, και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την εξίσωση: μήκος (mm) χ πλάτος

2 (mm) χ 0,52. Για τη βελτίωση κάθε ταλαιπωρίας των ποντικών που παρατηρήθηκε κατά τη διάρκεια αυτών των πειραματικών μελετών, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με CO

2 εισπνοή για την 28η ημέρα μετά από ενδοπεριτοναϊκή ένεση, και οι όγκοι ζυγίστηκαν μετά την ανατομή. Τα δείγματα αποθηκεύτηκαν σε υγρό άζωτο για qRT-PCR ή μονιμοποιήθηκαν σε 4% φορμαλίνη για να ληφθεί τομών εγκλεισμένων σε παραφίνη. Όλες οι διαδικασίες διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές Χρήση των Ζώων Φροντίδα και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Φροντίδας Ζώων Taishan Ιατρικό Πανεπιστήμιο.

Η στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD). Στατιστικές διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων εξετάστηκαν από Φοιτητών

t-test

. Συσχετίσεις μεταξύ RABEX-5 έκφρασης σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και κλινικοπαθολογοανατομικές παράμετροι αναλύθηκαν από chi-τετράγωνο ή ακριβές εξετάσεις του Fisher.

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική, και

P

& lt? 0,01 θεωρήθηκε ιδιαίτερα σημαντική

Αποτελέσματα

έκφραση RABEX-5 ρυθμίζεται αυξητικά μέσα. γαστρικό καρκινικούς ιστούς

Η έκφραση του

RABEX-5

εξετάστηκε σε καρκίνο του στομάχου και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου από qRT-PCR. Παρατηρήσαμε σημαντικά υψηλότερη έκφραση του

RABEX-5

mRNA σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με το αντίστοιχο μη καρκινικούς ιστούς (

P

& lt?. 0.01, Σχήμα 1Α). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν σε επίπεδο πρωτεΐνης με ανοσοϊστοχημική χρώση (Εικ. 1 Β, C, D, E). RABEX-5 έκφρασης ήταν κυρίως εντοπισμένη στο κυτταρόπλασμα των καρκινικών κυττάρων. RABEX-5 ρυθμίζεται αυξητικά σε 61,8% (68/110) των ασθενών με γαστρικό καρκίνο. Στη συνέχεια ερευνήσαμε τη σχέση μεταξύ RABEX-5 έκφρασης και κλινικοπαθολογική χαρακτηριστικά του γαστρικού καρκίνου. Προς τα πάνω ρύθμιση του RABEX-5 συνδέθηκε με το μέγεθος του όγκου (

P

= 0.035) και λεμφαδένα μετάσταση (

P

= 0.006), αλλά όχι με άλλους παράγοντες που περιλαμβάνουν κλινικοπαθολογοανατομικές φύλο, την ηλικία ή την τοποθεσία του όγκου (Πίνακας 1).

(Α)

έκφραση mRNA RABEX-5

σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς και αντιστοιχισμένο παρακείμενες μη καρκινικούς ιστούς εξετάστηκε με αλυσίδα μεταγραφής-αντίδρασης πολυμεράσης αντίστροφης ποσοτική (qRT-PCR ) και ομαλοποιήθηκε ως προς

GAPDH

. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν το μέσο

RABEX-5

σχετική έκφραση σε ιστούς καρκίνου και μη καρκινικούς ιστούς, αντίστοιχα. (Β-Ε) Χαρακτηρισμός RABEX-5 έκφρασης πρωτεΐνης σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικούς ιστούς και αντιστοιχισμένο παρακείμενες μη καρκινικούς ιστούς με ανοσοϊστοχημική χρώση. (Β) Ισχυρή θετική RABEX-5 έκφρασης σε καρκίνο του στομάχου. (C) Ασθενής θετικός RABEX-5 έκφρασης σε καρκίνο του στομάχου. (D) Αρνητική RABEX-5 έκφρασης σε καρκίνο του στομάχου. (Ε) Αρνητική RABEX-5 έκφρασης σε μη-όγκου γαστρικού βλεννογόνου.

Η

Η ελαττωμένη RABEX-5 αναστέλλει γαστρική πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων και του σχηματισμού αποικιών

επόμενο διερευνηθεί η έκφραση RABEX-5 σε γαστρικό κυτταρικές σειρές και η κυτταρική σειρά μη καρκινικών, GES-1, με ανάλυση κηλίδος Western. RABEX-5 εκφράστηκε σε όλες τις κυτταρικές σειρές που εξετάστηκαν, και ήταν ιδιαίτερα υψηλή σε ΓΓΕ-7901 και τα κύτταρα NCI-Ν87 (Εικ. 2Α). Να διερευνήσει τις λειτουργίες του RABEX-5 σε κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, εκτελέσαμε στοχευμένη εξουδετέρωση των RABEX-5 στις κυτταρικές γραμμές υψηλής εκφράζουν, ΓΓΕ-7901 και NCI-Ν87. RABEX-5 έκφραση ήταν σημαντικά μειωμένη σε κύτταρα SGC-7901 /KD και ΝΟΙ-Ν87 /KD σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχ. 2Β). Πρώτον, εξετάσαμε την επίδραση της απώλειας του RABEX-5 επί της ανάπτυξης γαστρικών καρκινικών κυττάρων. Μετά από 5 ημέρες καλλιέργειας, ο ρυθμός αύξησης της ΓΓΕ-7901 /KD και τα κύτταρα NCI-Ν87 /KD ήταν σημαντικά πιο αργή από τις ομάδες ελέγχου (Σχ. 2C). Επιβεβαιώσαμε επίσης αυτές τις παρατηρήσεις σε δοκιμασίες σχηματισμού αποικίας. Οι αριθμοί των αποικιών ήταν σημαντικά μειωμένες σε SGC-7901 κύτταρα /KD και τα κύτταρα NCI-Ν87 /KD σύγκριση με κύτταρα ελέγχου (Εικ. 2D), και παρατηρήσαμε ότι το μέγεθος αποικίας ήταν επίσης μικρότερη σε πειραματικές ομάδες σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Αυτά τα δεδομένα προτείνουν ότι προς τα κάτω ρύθμιση του RABEX-5 καταστέλλει γαστρικού πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων.

(Α) ανάλυση κηλίδας Western των RABEX-5 έκφρασης πρωτεΐνης σε επτά κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου και GES-1. (Β) επίπεδα RABEX-5 πρωτεΐνης σε SGC-7901 /KD, SGC-7901 /NC, NCI-Ν87 /KD και τα κύτταρα NCI-Ν87 /NC αναλύθηκαν με western blot. (C) CCK-8 δοκιμασία πολλαπλασιασμού των κυττάρων για SGC-7901 /KD, NCI-Ν87 /KD και των ομάδων ελέγχου. Οι καμπύλες δείχνουν ένα σημαντικό επίπεδο του πολλαπλασιασμού σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (

P

& lt? 0,05). (D) Αντιπροσωπευτικές εικόνες και ποσοτικοποίηση των προσδιορισμών σχηματισμού αποικίας σε κάθε κυτταρική σειρά. *

P

& lt? 0,05? **

P

& lt?. 0.01

Η

Η ελαττωμένη RABEX-5 προάγει την απόπτωση των γαστρικών καρκινικών κυττάρων και προκαλεί G0 /G1 διακοπή του κυτταρικού κύκλου

Οι παρατηρούμενες επιδράσεις του RABEX-5 knockdown στην κυτταρική ανάπτυξη μπορεί να οφείλεται σε αλλαγές στην πρόοδο του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης. Ως εκ τούτου, εξέτασαν τις επιδράσεις της RABEX-5 σίγηση σε κυτταρικό κύκλο και την απόπτωση

in vitro

, χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι το ποσοστό των κυττάρων στη φάση G0 /G1 σε SGC-7901 /KD ή ΝΟΙ-Ν87 κύτταρα /KD ήταν υψηλότερη από ό, τι σε SGC-7901 /NC ή ομάδων ελέγχου /NC NCI-Ν87, ενώ το ποσοστό των κυττάρων στην G2 /M φάση ήταν σημαντικά μειωμένη σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Σχ. 3Α, Β). Παρατηρήσαμε επίσης σημαντικές επιπτώσεις απόπτωση στα διαφορετικά αγωγή ομάδες (Σχ. 3C, D), με ρύθμιση προς τα κάτω του RABEX-5 έκφρασης που οδηγούν σε αύξηση του γαστρικού καρκίνου κυτταρική απόπτωση.

(Α) Ποσοστό κυττάρων σε διάφορες φάσεις του κυτταρικού κύκλου. (Β) Εκπρόσωπος ιστογράμματα που απεικονίζουν τα προφίλ του κυτταρικού κύκλου της ΓΓΕ-7901 /KD, SGC-7901 /NC, NCI-Ν87 /KD και τα κύτταρα NCI-Ν87 /NC. (Γ) Κύτταρα θετικά για χρώση Annexin V-APC και αρνητικό για ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ) θεωρήθηκαν ότι έχουν υποστεί απόπτωση. (D) Αντιπροσωπευτική ιστογράμματα που απεικονίζουν την απόπτωση κάθε ομάδας γαστρικού καρκίνου κύτταρα. *

P

& lt? 0,05? **

P

& lt?. 0.01

Η

Η ελαττωμένη RABEX-5 αναστέλλει τη μετανάστευση, την εισβολή και την ικανότητα επούλωσης πληγών των γαστρικών καρκινικών κυττάρων

Για να διερευνηθεί η επίδραση της RABEX-5 για τη μετανάστευση και την εισβολή, είμαστε δίπλα εκτελούνται μεταξύ φρεατίων δοκιμασίες μετανάστευσης και της εισβολής. Προς τα κάτω ρύθμιση RABEX-5 κατέστειλε την κυτταρική μετανάστευση (SGC-7901 /ομάδα KD, 121,3 ± 6,1 κύτταρα /τομέα? SGC-7901 /ομάδα NC, 261,0 ± 10,5 κύτταρα /τομέα? NCI-Ν87 /ομάδα KD, 108,7 ± 6,1 κύτταρα /πεδίο ? NCI-Ν87 /ομάδα NC, 241,7 ± 10,6 κύτταρα /τομέα?

P

& lt?. 0,05) (Σχήμα 4Α, C). Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν σε επικοινωνούντα δοκιμασίες εισβολής (SGC-7901 /ομάδα KD, 76,3 ± 6,1 κύτταρα /τομέα? SGC-7901 /ομάδα NC, 108,7 ± 6,0 κύτταρα /τομέα? NCI-Ν87 /ομάδα KD, 60,7 ± 6,0 κύτταρα /πεδίο ? ομάδας NCI-Ν87 /NC, 119,0 ± 8,5 κύτταρα /τομέα?

P

& lt?.. 0,05) (Σχήμα 4Β, D)

(Α, Β) transwell δοκιμασίες. Φωτογραφίες που δείχνουν κυττάρων μετά από τη μετανάστευση μέσω μεμβρανών μικροσκοπικούς πόρους, με ή χωρίς Matrigel. (C, D) Ιστογράμματα που απεικονίζουν τον αριθμό των μεταναστεύουν και εισβάλλουν κύτταρα. (Ε) την επούλωση των πληγών δοκιμασία με καρκίνο του στομάχου κύτταρα. Εικόνες ελήφθησαν 0 και 48 ώρες μετά το ξύσιμο της επιφάνειας του κυττάρου. Μια αντιπροσωπευτική εικόνα από τρία ανεξάρτητα πειράματα. (F)

VEGF

έκφραση του mRNA εκτιμήθηκε με qRT-PCR. (G) έκφρασης πρωτεΐνης VEGF αξιολογήθηκε με western blot. *

P

& lt? 0,05? **

P

& lt?. 0.01

Η

Για να διερευνηθεί η επίδραση της RABEX-5 στην κινητικότητα και την επούλωση των πληγών, μπορούμε επίσης να εκτελούνται αναλύσεις επούλωση της πληγής. Παρατηρήσαμε ότι η απόσταση μεταξύ των πληγών ακμών του SGC-7901 /KD και τα κύτταρα NCI-Ν87 /KD ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνα της SGC-7901 /NC ή κύτταρα NCI-Ν87 /NC (Εικ. 4Ε). Σύμφωνα με αυτές τις παρατηρήσεις, τα επίπεδα του VEGF ρυθμίστηκαν προς τα κάτω στα δύο επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης σε SGC-7901 /κυττάρων KD (Σχ. 4F, G).

Η σίγαση του RABEX-5 αναστέλλει την ανάπτυξη γαστρικού καρκίνου

in vivo

η

με βάση το

in vitro

ευρήματα που περιγράφονται παραπάνω, είμαστε δίπλα εξέτασε την επίδραση της RABEX-5 αποσιώπηση στην ανάπτυξη του όγκου

in vivo

με την έγχυση SGC7901 /KD ή SGC7901 /NC κύτταρα υποδορίως στην δεξιά πλευρά περιοχές των άτριχων ποντικών. Το μέγεθος του όγκου παρακολουθήθηκε κάθε 3 ημέρες με ένα παχύμετρο. Ο όγκος του όγκου ήταν σημαντικά μειωμένη σε ποντίκια 2 εβδομάδες μετά την έγχυση του SGC-7901 κύτταρα /KD σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (

P

& lt? 0,05? Εικ. 5Α). Ο όγκος του όγκου ξενομοσχευμάτων που προέρχεται από την SGC-7901 /ομάδα KD ήταν συγκρίσιμη με εκείνη του SGC-7901 /ομάδα NC, εμφανίζουν αξιοσημείωτη μείωση στον όγκο του όγκου 4 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό των καρκινικών κυττάρων (

P

& lt? 0.05, Σχ. 5Β, C). Επιπλέον, το βάρος των όγκων που προέρχονται από SGC-7901 κύτταρα /KD ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη των ελέγχων (

P

& lt? 0,05? Σχ. 5D). Στη συνέχεια εξετάσαμε την έκφραση του VEGF σε δείγματα μεταμόσχευση του όγκου με qRT-PCR και ανοσοϊστοχημεία. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5Ε και 5F, τα επίπεδα του VEGF mRNA και της πρωτεΐνης μειώθηκαν στο SGC-7901 /ομάδα KD σύγκριση με SGC-7901 τον έλεγχο /NC. Αυτά

in vivo

δεδομένα είναι συνεπή με το

in vitro

παρατηρήσεις μας και επιβεβαιώνουν ότι σίγηση του RABEX-5 αναστέλλει την ανάπτυξη του καρκίνου του γαστρικού και εξέλιξη με ρύθμιση VEGF μεταγραφική δραστικότητα. Συνοπτικά, RABEX-5 παίζει ένα ογκογόνο ρόλο στον καρκίνο του στομάχου.

(Α) Οι όγκοι των όγκων μετρήθηκαν σε διαφορετικά χρονικά σημεία σε ποντικούς που εμβολιάστηκαν με SGC-7901 κύτταρα μολυσμένα με RABEX-5 knockdown βραδέος ιού φορέα (ΓΓΕ- 7901 κύτταρα /KD). (Β) Οι όγκοι συλλέχθηκαν από ποντικούς 4 εβδομάδες μετά την ένεση με SGC-7901 /κυττάρων KD (Γ) Ατομική όγκοι του όγκου για κάθε ποντικό μετά την ανατομή. (Δ) Το τελικό βάρος του όγκου μετρήθηκε στο τέλος του πειράματος. (Ε) Έκφραση

VEGF

mRNA σε όγκους που προέρχονται από γυμνούς ποντικούς. (F) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της έκφρασης του VEGF σε όγκους που προέρχονται από SGC-7901 /NC και ομάδες KD SGC-7901 /. *

P

& lt? 0,05? **

P

& lt?. 0.01

Η

Συζήτηση

Αν και προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι RABEX-5 παίζει ένα ρόλο στην ογκογένεση σε διάφορους τύπους καρκίνου [11 ] – [14], ο ρόλος του στην γαστρικό καρκίνο δεν είχε διερευνηθεί. Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι RABEX-5 έκφραση είναι σημαντικά αυξητικά σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με το παρακείμενο φυσιολογικό ιστό, υποδεικνύοντας ότι RABEX-5 μπορεί να συνεισφέρει στην ογκογένεση γαστρικό καρκίνο. Επιπλέον, η έκφραση του RABEX-5 συσχετίστηκε σημαντικά με το μέγεθος του όγκου και τη μετάσταση λεμφαδένα. Σε αντίθεση, δεν υπήρξαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ μη φυσιολογική RABEX-5 έκφρασης και το φύλο, την ηλικία ή την τοποθεσία του όγκου. Αυτή είναι η πρώτη μελέτη για τη διαλεύκανση της κλινικοπαθολογοανατομικών σημασία της RABEX-5 έκφρασης σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου.

Για να διερευνήσουν το ρόλο της RABEX-5 στην προώθηση του όγκου, είμαστε δίπλα πραγματοποιήθηκε εκτεταμένη απώλεια της ανάλυσης λειτουργίας σε RABEX- 5 υψηλής έκφρασης κυτταρικές σειρές, SGC-7901 και ΝΟΙ-Ν87. Η επιτυχής αναστολή της RABEX-5 έκφραση επιτεύχθηκε με την τεχνολογία RNAi, και knockdown επιβεβαιώθηκε με κηλίδα western. Οι αναλύσεις μας αποκάλυψαν ότι ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μειώθηκε σημαντικά σε κύτταρα και παρόμοια αποτελέσματα SGC-7901 /KD και ΝΟΙ-Ν87 /KD λήφθηκαν σε αναλύσεις σχηματισμού αποικιών. Είναι σημαντικό ότι,

in vivo

μοντέλα ξένου μοσχεύματος υποστήριξε αυτές τις

in vitro

παρατηρήσεις. Αυτός ο φαινότυπος μπορεί να προκληθεί από RABEX-5 ρύθμιση συγκεκριμένων γονιδίων και μονοπατιών σηματοδότησης, επηρεάζοντας έτσι τον κυτταρικό κύκλο και την απόπτωση. Σε επικοινωνούντα προσδιορισμούς, λιγότερα κύτταρα SGC-7901 /KD και ΝΟΙ-Ν87 /KD μετανάστευσαν στον κατώτερο θάλαμο από κύτταρα ελέγχου, γεγονός που υποδηλώνει ότι RABEX-5 βελτιώνει τη μετανάστευση και την εισβολή στο γαστρικό καρκινικά κύτταρα. Επούλωση τραυμάτων ήταν επίσης μειώθηκε σημαντικά μετά αποσιώπηση των RABEX-5. Αυτά τα αποτελέσματα επαληθεύουν τον σημαντικό ρόλο των RABEX-5 στο γαστρικό ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και τη μεταστατική συμπεριφορά. Ωστόσο, ο ακριβής μοριακός μηχανισμός με τον οποίο RABEX-5 ασκεί αυτές τις επιδράσεις παραμένει άγνωστη, δεδομένου ότι οι μελέτες που περιλαμβάνουν RABEX-5 είναι περιορισμένες.

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι RABEX-5 μπορεί να δεσμεύεται ειδικά με τη δραστική μορφή του RAB- 5, ρυθμίζοντας έτσι την βάση σύνδεσης και σύντηξη των μεμβρανών ενδοσωμικής, την κινητικότητα του ενδοσώματα και ενδοκυτταρικής μεταγωγής σήματος [15]. Η έκφραση του RAB-5 πρωτεϊνών έχει συσχετιστεί με την ανάπτυξη των διαφόρων κακοήθων όγκων [16] – [18] και είναι ικανός να προωθήσει τη μετανάστευση των κυττάρων του όγκου [19], [20]. Η αγγειογένεση παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση [21], και ρυθμίζεται από διάφορους παράγοντες, όπως το παράγοντα ανάπτυξης που προέρχεται από αιμοπετάλια (PDGF) και του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) [22]. Η οδός σηματοδότησης ΡΙ3Κ /Akt μπορεί να ρυθμίζεται τόσο από VEGF και PDGF. Για παράδειγμα, ο VEGF ενισχύει τον πολλαπλασιασμό νευροβλαστώματος με ενεργοποίηση ΡΙ3Κ /Akt σηματοδότηση [23]. Παρομοίως, μελέτες έχουν δείξει ότι PDGF μπορεί να επηρεάσει την ικανότητα μετανάστευση κυττάρων μέσω της οδού ΡΙ3Κ /ΑΚΤ [24]. Η ενεργοποίηση της ΡΙ3Κ /Akt σηματοδότηση μπορεί να αναστέλλει την απόπτωση κυττάρων που προκαλείται από διάφορα ερεθίσματα [25] – [29], και την προώθηση της προόδου του κυτταρικού κύκλου [30], [31], προωθώντας έτσι την κυτταρική επιβίωση και πολλαπλασιασμό. Αυτή η οδός επίσης συμμετέχει στην αγγειογένεση [32], [33], και παίζει σημαντικό ρόλο στο σχηματισμό όγκου, εισβολή και μετάσταση [34], [35]. Η μελέτη μας δείχνει ότι RABEX-5 αποσιώπηση πυροδοτεί μια μείωση της έκφρασης του VEGF. Ως εκ τούτου, υποθέτουμε ότι RABEX-5 προωθεί την ανάπτυξη και την μεταστατική ικανότητα των γαστρικών καρκινικών κυττάρων μέσω της ενεργοποίησης του VEGF και κατάντη μονοπάτια σηματοδότησης του.

Εν κατακλείδι, έχουμε αποδείξει ότι RABEX-5 προάγει τον πολλαπλασιασμό, σχηματισμό αποικιών, τη μετανάστευση και εισβολή, υποδηλώνοντας ότι RABEX-5 μπορεί να είναι ένα ογκογονίδιο σε γαστρικό καρκίνο, και τα αποτελέσματά της μπορεί να προκαλείται μερικώς από τη διαφοροποίηση της ενεργοποίησης VEGF. RABEX-5 μπορεί να αντιπροσωπεύουν ένα νέο διαγνωστικό και προγνωστικό δείκτη και ένα νέο θεραπευτικό στόχο στον καρκίνο του στομάχου. θα πρέπει να καταβληθούν περισσότερες προσπάθειες για την αποσαφήνιση των οδών σηματοδότησης που διέπουν αυτά τα βιολογικά φαινόμενα.